CN101107022A - 用于渗滤的方法 - Google Patents

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Abstract

在渗滤过程中向收获液流中添加缓冲液会导致浊度增加并且具有其它不理想的效应，包括限制产物回收。提供了与非离子表面活性剂的使用有关的方法和组合物用于改善渗滤。

Description

用于渗滤的方法
技术领域
本申请涉及细胞培养收获微量过滤领域。
相关申请的交互参考
本申请要求在2005年1月25日提交的临时美国申请号60/647,184的优先权，其在本文以其全文引用作为参考。
背景
在生物技术应用中，根据操作模式，渗滤用于缓冲液交换和产物回收。在渗滤中，将缓冲液引入循环池或存留池中，同时从系统中移走滤液。渗滤法可用作洗涤存留物(即产物)，或者用于通过过滤系统洗涤产物用于收集。微量过滤收获方法的目标是，使用渗滤最大程度地从过程液流中回收产物。
概述
本发明涉及这样的发现，即将非离子表面活性剂，例如PluronicF68、聚乙二醇、或其他非离子嵌段共聚物表面活性剂，添加到在渗滤步骤所使用的缓冲液中，能够降低生产流体的浊度，所述渗滤步骤是微量过滤法(例如，切向流过滤；TFF)的一部分。因此，本发明包含渗滤的方法。方法包括提供渗滤的存留物，以及向存留物中添加非离子表面活性剂。非离子表面活性剂可以是，例如PluronicF68或聚乙烯醇(PVA)。在一些实施方案中，非离子表面活性剂在缓冲液中，例如磷酸缓冲盐溶液(PBS)。缓冲液中非离子表面活性剂的浓度可以在0.2和4g/L、0.2和3g/L、0.5和2.5g/L、0.5和2g/L、0.5和1.5g/L之间。在一些情况中，缓冲液中非离子表面活性剂的浓度约为1g/L或2.5g/L。在某些实施方案中，存留物包括细胞和培养基。在本发明的某些方面中，渗滤得到的滤液的浊度低于没有非离子表面活性剂时进行的渗滤。在另一个实施方案中，存在非离子表面活性剂时从存留物中产物的回收多于没有非离子表面活性剂时产物的回收。在另一个实施方案中，存留物包含药品，例如重组蛋白质、重组肽、或天然存在的蛋白质或肽。在某些情况下，存留物包含在存留物中与细胞等渗的缓冲液，例如PBS。在另一个实施方案中，渗滤在温度约为20℃-25℃、2℃到37℃，或2℃-25℃发生。渗滤可以为，例如不连续渗滤或恒容渗滤。在某些情况中，非离子表面活性剂的浓度在渗滤过程中没有显著改变。非离子表面活性剂可以在细胞培养基中。
本发明还涉及使用本文中描述的方法如渗滤产生的产物。
另一方面，本发明涉及渗滤方法，其包括将非离子表面活性剂(例如，PluronicF68或PVA)的浓度维持约为1g/L。
另一方面，本发明涉及渗滤的组合物，组合物包含大约1g/L(例如PluronicF68)或2.5g/L(例如PVA)的非离子表面活性剂。组合物还可以包含等渗缓冲液，例如PBS。
除非另外定义，本文中使用的所有技术术语和科学术语都采用本发明所属领域普通技术人员普遍理解的相同意义。尽管与本文中描述的类似或等同的方法和材料可以用于本发明实践或测试，适当的方法和材料描述如下。本文中提到的所有刊物、专利申请、专利，以及其他文献都以其全文引用作为参考。此外，材料、方法，和实施例都意在说明而非限制。
从详细的描述、图表以及权利要求中，将清晰的了解本发明的其他特点和优点。
详细描述
在蛋白质加工过程中，TFF可以作为回收方法的一部分，用于将进样液流中的完整细胞和细胞碎片与其他成分分离。例如，利用培养的细胞的生产方法可以使用整合了浓缩和渗滤的收获微量过滤步骤。本方法使用例如TFF，将含有诸如重组蛋白质的产物的细胞培养液从生产细胞系中分离。经过最初的收获微量过滤(浓缩)后，将一般含有比最初过滤之前更高密度的细胞的存留物通过过滤系统再循环，并且渗滤以回收在收获微量过滤系统(渗滤)中被阻挡的额外的产物。对于此渗滤步骤，一般向存留物中添加等渗缓冲液(例如PBS)。此渗滤可以使用添加缓冲液的不连续或恒容方法来进行。
通常，术语“过程液流(process stream)”包括进样液流、渗透液流，和存留液流等，即在过程中含有细胞培养物产物的流动液体。滤液指任何通过滤器的物质，即渗透液流。“存留物(retentate)”指不通过滤器而遇到了过滤装置，并重新回流到储池中的物质。“进样液流”指离开储池，通过泵并注入滤器的物质。
上述方法的目标在于使得从细胞培养物或存留物中回收的产品(例如，分泌的蛋白质或肽产物)的量最大化，同时使得细胞培养物和过程液流中不需要的物质的量最小化。细胞培养物或存留物中浊度量的升高一般与渗透物的浊度升高有关。不需要的物质包括例如亚细胞颗粒和碎片。通常，浊度用作过程液流中不需要物质量的量度。在悬浮着细胞的溶液，如培养基、缓冲液或两者的混合物中，浊度过量是不理想的，因为浊度指示了这样的状态，即可以导致滤器阻塞，澄清系统堵塞(例如，通过孔堵塞)，并对产物质量是有害的(包括通过细胞酶的释放)。在收获的培养物中细胞的破裂(例如，由于剪切)会导致过程液流浊度的升高。据本文报道，观察到在渗滤时向存留物中添加缓冲液会增加浊度，即使缓冲液是等渗的。本发明涉及到发现与向存留物中单独添加缓冲液相比，添加包含非离子表面活性剂(例如，非离子嵌段共聚物表面活性剂如PluronicF68或聚乙烯醇(PVA))的缓冲液(例如PBS)，降低了存留液流和渗透液流中的浊度量。通常，在添加到存留物中的缓冲液或其他溶液中存在非离子表面活性剂时，存留物的浊度比没有表面活性剂时降低。另外，滤液的浊度也显著降低。通常，非离子表面活性剂为PluronicF68或PVA。其它可用的非离子表面活性剂包括聚乙二醇(PEG)，例如，分子量至少约为1000的PEG。可以使用具有离子性质但是可以作用为剪切保护剂的某些化合物，例如右旋葡聚糖。本文描述的方法中使用的右旋葡聚糖的示例性浓度为至少10g/L。使用本文描述的方法可以鉴定其它适当的化合物。本文描述的方法中使用的非离子表面活性剂或其它剪切保护剂的浓度一般在0.2g/L和3g/L、0.2g/L和4g/L、0.5g/L和2g/L、0.5g/L和2.5g/L、0.5g/L和1.5g/L之间，或约为1g/L。在一些情况中，非离子表面活性剂或其他剪切保护剂的浓度至少为1g/L或至少为1.5g/L。在一些情况中，最大量不超过2g/L、不超过5g/L，或不超过10g/L。
在一些情况中，在开始TFF之前向存留物中加入缓冲液，例如等渗缓冲液如PBS。该缓冲液一般含有非离子表面活性剂，例如PluronicF68。
在本文描述的方法应用实例中，利用收获微量过滤步骤将含有重组蛋白质的细胞培养液从生产细胞系中分离，来使用商业化重组蛋白质药物的生产方法。收获系统为包括0.65μm微量过滤(MF)膜组件的Prostak切向流过滤(TFF)装置(Millipore，Billerica，MA)。全细胞培养液(包含细胞)再循环通过位于TFF系统存留物侧的一系列Prostak组件，并回流到收获槽中。不含细胞的培养液渗透到0.65μm Prostak滤器组件膜的另一侧，并且被收集用于进一步加工。
通过最初的TFF方法将全细胞培养液浓缩了10倍。在过滤系统(filtration train)存留侧得到的液体就是本文所指的存留物。经过细胞浓缩之后，以微量过滤后最终存留物体积的1.8倍进行缓冲液渗滤步骤，从而增加收获微量过滤和澄清系统中阻截产物的产量。
收获方案中使用的渗滤缓冲液为PBS。其他的等渗溶液，例如缓冲液如Tris缓冲的盐溶液或生长培养基也可以用于本文描述的方法。也可以使用非离子溶液。PBS是等渗的，并且不会对细胞活力具有任何毒害作用。但是，在存留物中添加缓冲液后，观察到不理想的浊度水平。而在收获渗滤缓冲液中添加浓度为1g/L的PluronicF68或2.5g/L的PVA后，导致收获过程液流的浊度量降低。
不受具体理论的束缚，当本文描述的回收方法中使用非离子表面活性剂时观察到的浊度量降低，可能是由于使用的非离子表面活性剂作用为或至少部分作用为剪切保护剂，从而降低了在收获过程中剪切导致的细胞破坏。
在渗滤过程中，添加诸如PluronicF68或PVA的非离子表面活性剂的优势在于：1)增加收获储池中产物的稳定性，例如由于收获过程中从生产细胞系内释放的蛋白酶水平较低；2)降低了在下游加工前过程液流中细胞来源的杂质量；以及3)降低了收获过滤系统所需要的表面积。
鉴定有用的非离子表面活性剂的方法
可以测试非离子表面活性剂对存留物质量的改善能力，例如，通过使用本文描述的方法减少收获液流中不需要的物质(例如，细胞碎片)的量。也可以通过测定滤液中的，例如在使用和不使用非离子表面活性剂时回收的产物纯度，或产物质量，来确定质量。一般而言，非离子表面活性剂包含在渗滤过程中添加的缓冲液中，因此在存留物中存留物包含至少1％、5％、10％、20％、50％、80％(v/v)或更多的缓冲液。测定存留物中不需要物质的量，并且将其与使用相同缓冲液，但不添加非离子表面活性剂的渗滤的存留物中不需要物质的量进行比较。随着缓冲液添加的非离子表面活性剂可以与细胞培养基中的非离子表面活性剂相同或不同。通常，非离子表面活性剂与细胞培养基中的相同，并且表面活性剂在缓冲液中的浓度也与细胞培养基中的浓度相同。可以测定多种浓度的非离子表面活性剂来确定优化浓度，即其有利于最小化存留物中不需要物质的量，并最大化产物回收。在一些情况中，除了测定存留物外，或者代替测定存留物，测定滤液的浊度。
在一些实施方案中，在缓冲液、或含有非离子表面活性剂的缓冲液渗滤到存留物中之后，对存留物浊度进行测试。浊度提供了对亚细胞颗粒和细胞碎片的量度。通常，较低的浊度与更理想的存留物质量相关。使用本领域已知的方法测定浊度。例如，可以使用浊度测定法(Baker等人，TrendsBiotechnol.2002 Apr；20(4)：149-56)或者光密度。光密度一般通过测量在550nm-650nm的吸光率来测定。非离子表面活性剂存在时浊度降低说明，非离子表面活性剂增加了TFF存留物的质量。在一些情况下，可以检测多种浓度的非离子表面活性剂来确定在具体过程中有利的浓度。
本领域中已知的用于测定存留物质量或检测细胞碎片存在的其它方法可以用于评估非离子表面活性剂对改善含有缓冲液的存留物质量的能力。例如，测试存留物和/或渗透物中的胞内乳酸脱氢酶(LDH)可以用作检测细胞裂解的方法。其它可用的方法包括确定添加缓冲液的存留物中的细胞数量。通常，在含有非离子表面活性剂的缓冲液存在时，和只有缓冲液存在时，测定存留物中的细胞数量。有用的缓冲液组合物是这样的，即其中在用含有非离子表面活性剂的缓冲液渗滤时，与渗滤的初始相比，渗滤结束后，存留物中的细胞总数维持恒定。有效的组合物，即缓冲液加非离子表面活性剂，也包括渗滤后存留物中的细胞总数比仅仅使用缓冲液渗滤后存留物中的细胞数量高的缓冲液组合物。
还可以调节渗滤过程中的温度来增强从存留物中的产物回收、降低浊度、降低滤器堵塞，或降低含有缓冲液的存留物的其它不理想的性质。一般而言，渗滤可以在以下温度进行，例如：约20℃-25℃、2℃到37℃，或2℃-25℃。
使用本文描述的方法可以回收的产物的非限制性实例包括蛋白质和肽，例如：抗体、抗体片段、重组蛋白质、天然分泌的蛋白质、被工程化来分泌的蛋白质和肽，以及由细胞生产的非蛋白质产物。
实施例
本发明将通过下列实施例进一步阐述。实施例仅出于解释性目的来提供。它们不应以任何方式解释为对本发明的范围或内容的限制。
实施例1.收获微量过滤的开发
利用产生重组蛋白质的细胞测试了上文中描述的收获和澄清方法。在微量过滤步骤的细胞浓缩全部阶段中，在细胞培养基中剪切保护剂如PVA(Celvol，Celanese Chemicals，Dallas，Texas)或PluronicF68(BASFLudwigshafen，德国)存在时再循环细胞。在这些条件下，渗透物(滤液)维持低的浊度并且存留物随着细胞质量的增加成比例的增加。使用浊度测定法测量的浊度，用于定量过程液流中亚细胞颗粒和碎片的量。向存留物中添加PBS渗滤缓冲液(不添加非离子表面活性剂)会导致存留物和渗透物的浊度增加。
渗透液流的浊度过量是不理想的，因为其会通过孔堵塞或其他机制导致澄清系统中滤器的阻塞/堵塞。由于添加缓冲液时的稀释，单独添加PBS缓冲液导致剪切保护剂浓度有效下降。因此，缺乏剪切保护剂时细胞系暴露在升高的剪切程度下。收获系统中由于剪切机制的细胞破坏导致过程液流的浊度升高。
表1说明了向渗滤缓冲液中添加可以作用为剪切保护剂的非离子表面活性剂(如，PVA或PluronicF68)的作用。这些研究证明，渗滤结束后最终存留物浊度为8到33 NTU/106个细胞，并且在渗透物中为2.6到4.1NTU/106个细胞。而在渗滤缓冲液中添加了剪切保护剂的收获物在存留物中浊度为9.7到10.1 NTU/106个细胞，在滤液中浊度为0.7到2.4 NTU/106个细胞。因此，渗滤过程中非离子表面活性剂的存在与存留物浊度的降低之间存在相关性。渗透物浊度也降低。
表1.微量过滤渗滤开始和结束时的细胞数、存留物离心浊度(1000rpm，5分钟(约201×g))，以及渗透物浊度。离心浊度(spunturbidity)是对从处理样品中离心细胞后的上清液浊度的测量。
Figure A20068000313400101
实施例2：实验室规模的模型(bench-scale model)
利用实验室规模的模型进行研究来检验在收获渗滤缓冲液中掺入剪切保护剂的作用。该模型由细胞储池组成，细胞从所述储池中泵入通过微量过滤切向流过滤(MFTFF)装置，并且之后回流到储池中。上清液被从MFTFF装置中移除，同时向储池中添加渗滤缓冲液，以允许恒容渗滤进行。对于每一项研究，使用来自相同生物反应器的细胞和完全相同的测试条件，唯一的区别是缓冲液本身。缓冲液是PBS或含有2.5g/L浓度的剪切保护剂聚乙烯醇(PVA)的PBS。使用浊度测定法测定浊度。
通常，渗透物的浊度通过渗滤缓冲液中包含PVA而下降。这是通过用渗滤前起始细胞浓度标准化的渗透液流浊度来指示的(表2，测试1和2)。第三个测试(表2，测试3)稍欠说服力，其PBS和PBS/PVA条件下的渗透物浊度大体相等。
表2.使用PBS或含有PVA的PBS的细胞的渗滤
渗滤开始 渗滤结束
VCD 渗透物浊度 渗透物浊度 比率(渗透物)
  实验 ×106个细胞/ml NTU NTU NTU/106个细胞/ml    缓冲液
  1a 55 9.1 54.5 1.0    PBS
  1b 55 12.5 40.7 0.7    PBS/PVA
  2a 57 13.3 77.8 1.1    PBS
  2b 57 11.9 64.3 1.1    PBS/PVA
  3a 73 14.1 80.8 1.1    PBS
  3b 73 15.1 87.3 1.2    PBS/PVA
在渗滤缓冲液中有或无PVA时，对活细胞密度(VCD)和活细胞损失的检测明确证实了含有PVA的渗滤缓冲液的保护性质(见表3)。测试3中此细胞损失造成的混浊物质可以良好地被保留在过滤装置的存留物一侧，因此没有体现出渗透物浊度的显著升高。考虑到渗滤开始时增加的活细胞密度，这是可能的，这会改变滤器的保留能力，例如通过额外的滤饼形成和/或膜极化。
在所有的测试情形中(测试1-3)，通过包含PVA使活细胞损失最小化，导致过程液流的过滤性能的改善，以及由于孔堵塞机制造成的滤器堵塞的风险降低。
表3.对表2的测试1-3，渗滤前后的活细胞密度
渗滤开始 渗滤结束
VCD VCD 活细胞损失
  实验 ×106个细胞/ml ×106个细胞/ml ×106个细胞/ml     缓冲液
  1a 55 42 13     PBS
  1b 55 47 8     PBS/PVA
  2a 57 40 17     PBS
  2b 57 40 14     PBS/PVA
  3a 73 49 24     PBS
  3b 73 59 14     PBS/PVA
其它实施方案
应该理解与本发明细节性描述相关的描述了本发明，但是前述描述旨在说明而非限制发明的范围，本发明的范围是由附属的权利要求的范围所定义的。其它方面、优点和变化包含在下面的权利要求的范围内。

Claims (26)

1.用于渗滤的方法，其包括：
a)提供用于渗滤的存留物；和
b)向存留物添加非离子表面活性剂。
2.权利要求1的方法，其中非离子表面活性剂为PluronicF68。
3.权利要求1的方法，其中非离子表面活性剂为聚乙烯醇(PVA)。
4.权利要求1的方法，其中非离子表面活性剂在缓冲液中。
5.权利要求1或权利要求2的方法，其中非离子表面活性剂在缓冲液中，且非离子表面活性剂在缓冲液中的浓度在0.2g/L和4g/L、0.2g/L和3g/L、0.5g/L和2.5g/L、0.5g/L和2g/L，以及0.5g/L和1.5g/L之间。
6.权利要求1或权利要求2的方法，其中缓冲液中非离子表面活性剂的浓度约为1g/L或2.5g/L。
7.权利要求1或权利要求2的方法，其中存留物包含细胞和培养基。
8.权利要求1或权利要求2的方法，其中与没有非离子表面活性剂时进行的渗滤相比，渗滤获得的滤液浊度降低。
9.权利要求1或权利要求2的方法，其中与没有非离子表面活性剂时的产物回收相比，在存在非离子表面活性剂时产物从存留物中定性或定量的回收增加。
10.权利要求1或权利要求2的方法，其中存留物包含药品。
11.权利要求1或权利要求2的方法，其中存留物包含重组蛋白质。
12.权利要求1或权利要求2的方法，其中存留物包含与存留物中的细胞等渗的缓冲液。
13.权利要求1或权利要求2的方法，其中存留物包含磷酸缓冲盐溶液(PBS)。
14.权利要求1或权利要求2的方法，其中渗滤步骤在大约20℃-25℃、2℃到37℃，或2℃-25℃的温度发生。
15.权利要求1的方法，其中渗滤为不连续渗滤。
16.权利要求1的方法，其中渗滤为恒容渗滤。
17.权利要求1的方法，其中非离子表面活性剂的浓度在渗滤过程中不显著改变。
18.权利要求1的方法，其中非离子表面活性剂在细胞培养基中。
19.使用权利要求1或权利要求2的方法产生的产品。
20.渗滤的方法，该方法包括维持大约1g/L的非离子表面活性剂浓度。
21.权利要求20的方法，其中非离子表面活性剂为PluronicF68。
22.用于渗滤的组合物，该组合物包含约1g/L或2.5g/L的非离子表面活性剂。
23.权利要求22的组合物，其中非离子表面活性剂是PluronicF68。
24.权利要求22的组合物，其中非离子表面活性剂是PVA。
25.权利要求22或权利要求23的组合物，其中该组合物还包含等渗缓冲液。
26.权利要求22或权利要求23的组合物，其中该组合物还包含PBS。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102413908A (zh) * 2009-04-29 2012-04-11 巴斯夫欧洲公司 借助膜过滤调节催化剂的方法
CN109790549A (zh) * 2016-07-21 2019-05-21 星火治疗有限公司 生产高产重组腺相关病毒(rAAV)载体可扩展高回收法及其产生的重组腺相关病毒(rAAV)载体

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009111022A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-11 Corning Incorporated Hydrophobically modified cellulose ether derivatives for cell culture and release
CA2750263C (en) * 2009-01-21 2018-03-20 Smartflow Technologies, Inc. Optimization of separation for viscous suspensions
CA2787656A1 (en) * 2010-01-22 2011-07-28 Lonza Walkersville, Inc. High yield method and apparatus for volume reduction and washing of therapeutic cells using tangential flow filtration
KR20160056876A (ko) * 2013-07-19 2016-05-20 써클 테크놀로지스, 인크. 생물공정 분석을 위한 시스템 및 방법
EP4189064A1 (en) * 2020-07-30 2023-06-07 Amgen Inc. Cell culture media and methods of making and using the same

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4707542A (en) * 1983-08-22 1987-11-17 Merck & Co., Inc. Immunogenic HbsAg derived from transformed yeast
DE3515650A1 (de) * 1985-05-02 1986-11-06 Biochemie GmbH, Kundl, Tirol Verfahren zur abtrennung von biotechnologisch hergestellten wertstoffen durch querstrom-mikrofiltration
US5336603A (en) * 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
DE4204700A1 (de) * 1992-02-17 1993-08-19 Henkel Kgaa Verfahren zur abtrennung anorganischer salze
CN1038512C (zh) * 1992-10-20 1998-05-27 空军第四研究所 促肝细胞生长素生产方法
US5681746A (en) * 1994-12-30 1997-10-28 Chiron Viagene, Inc. Retroviral delivery of full length factor VIII
US5597486A (en) * 1995-05-01 1997-01-28 Millipore Investment Holdings Limited Membrane filtration with optimized addition of second liquid to maximize flux
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
US6436897B2 (en) * 1998-06-01 2002-08-20 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulations for IGF/IGFBP
US6245568B1 (en) * 1999-03-26 2001-06-12 Merck & Co., Inc. Human papilloma virus vaccine with disassembled and reassembled virus-like particles
CA2389613A1 (en) * 1999-11-19 2001-05-25 Zycos Inc. Continuous-flow method for preparing microparticles
GB2364052B (en) 2000-06-27 2003-05-14 Univ London A method and apparatus for producing a biomaterial product
JP2002066273A (ja) * 2000-09-01 2002-03-05 Terumo Corp 中空糸膜の酸化抑制方法
US20050164929A1 (en) * 2000-11-06 2005-07-28 Lupine Logic, Inc. Methods of preventing and treating inflammatory bowel disease
US6869617B2 (en) * 2000-12-22 2005-03-22 Baxter International Inc. Microprecipitation method for preparing submicron suspensions
JP3815351B2 (ja) * 2002-03-12 2006-08-30 栗田工業株式会社 糖液精製装置及び糖液精製方法
EP1554398A4 (en) * 2002-09-13 2005-12-14 Valentis Inc DEVICE AND METHOD FOR THE CLEANING OF NUCLEAR SULFUR IN THE PREPARATIVE SCALE
DE60326012D1 (de) * 2002-11-01 2009-03-12 Bayer Healthcare Llc Verfahren zur Konzentration von Proteinen
DE602004028736D1 (de) * 2003-06-20 2010-09-30 Microbix Biosystems Inc Verbesserungen bei der virusproduktion
US20060083694A1 (en) * 2004-08-07 2006-04-20 Cabot Corporation Multi-component particles comprising inorganic nanoparticles distributed in an organic matrix and processes for making and using same
US7385028B2 (en) * 2004-12-22 2008-06-10 Ambrx, Inc Derivatization of non-natural amino acids and polypeptides

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102413908A (zh) * 2009-04-29 2012-04-11 巴斯夫欧洲公司 借助膜过滤调节催化剂的方法
CN102413908B (zh) * 2009-04-29 2015-09-23 巴斯夫欧洲公司 借助膜过滤调节催化剂的方法
CN109790549A (zh) * 2016-07-21 2019-05-21 星火治疗有限公司 生产高产重组腺相关病毒(rAAV)载体可扩展高回收法及其产生的重组腺相关病毒(rAAV)载体

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