CN101091743A - 一种中药丹参的提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药丹参的提取物，其总丹酚酸含量达50％以上。同时还公开了制备该提取物的方法，即将丹参药物用弱酸水提取，提取液加金属离子，使丹酚酸沉淀；将沉淀物分离后用酸溶液溶解，再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯液，剩余物质即为所需丹参提取物。该方法简单实用，成本低廉，提取率高，具有工业实用性。

Description

一种中药丹参的提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种来源于植物材料的药用提取物和制备方法，具体的说是丹参药材的提取物和它的制备方法，属中药领域。

背景技术

丹酚酸(salvianolic acid)又称丹参酸，系丹参的水溶性有效成分，属酚酸类化合物。目前研究较多的有总丹酚酸(total salvianolic acid)、丹酚酸A(salvianolic acid A，SalA)和丹酚酸B(salvianolicacid B，SalB)。最早发现的丹参素化学名为β-3，4-二羟苯乳酸(β-3，4-dihydroxybenyl lacticacid)，是各种丹酚酸的基本化学结构。SalA是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成；Sal B为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成；丹酚酸C(salvianolic Sal C)则为二分子丹参素缩合而成，其它丹酚酸亦有类似结构。丹参水溶性成分中的迷迭香酸(rosmarinic acid A，Ros)，也是由一分子丹参素和一分子咖啡酸缩合而成。此外，还有四甲基丹酚酸(tetramethyl salvianolic acid A，Sal M)等等。

丹酚酸类成分在治疗心脑血管药物中的应用很多，疗效确切，有极高的临床应用前景。在丹参的总酚酸中，丹酚酸B占60％以上，是主要药用成分，丹酚酸B受温度影响很大，受热后分解成丹参素和咖啡酸，临床疗效降低。目前关于丹酚酸的生产工艺中，基本都采用水煎煮、浓缩、醇沉、回收乙醇后上大孔树脂或大量乙酸乙酯萃取的方法。但该方法有多种缺陷，主要包括：1、水煎煮和浓缩过程会使丹酚酸B破坏50％以上；2、大孔吸附树脂法和溶剂萃取法的工艺路线复杂，所用试剂或溶剂的种类较多，使用量较大，故生产成本很高。故目前尚没有真正意义的总丹酚酸有效部位，即没有一种提取物或其产品，其中总丹酚酸的含量可以占其总固体量的60％以上。临床急需一种低生产成本的方法，可以得到含量较高的总丹酚酸产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药丹参的提取物，其中总丹酚酸的含量可达提取物总固体量的50％以上；同时提供该丹参提取物的制备方法。

本发明目的是通过以下工艺过程实现的：将丹参药材用弱酸水提取，提取液加含金属离子的盐，并调节相应的PH值，使丹酚酸盐沉淀；将此沉淀物分离，用酸溶液溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯液，剩余物质即为所需丹参提取物。

在上述工艺过程中，丹参的提取方法可以是浸渍、渗漉或煎煮中的任一种，优选为浸渍或渗漉，也可以是其他可避免高温的提取方式；所用的弱酸水是指pH值在0～6之间的水液，优选为PH值为1-3水液；所说的金属离子是指ca²⁺、Mg²⁺、Al³⁺、Zn²⁺、Ba²⁺或Cu²⁺等可使丹酚酸沉淀的金属离子，这些离子与其他阴离子结合成盐的形式存在，在上述工艺过程中使用时可直接用它们的盐，也可以先配成溶液再使用；加入这些盐后还要根据盐的种类来调节相应的PH值以达到沉淀目的，一般该pH值范围为5-12，只要稍加调节，很容易找到。

具体来讲，制备总丹酚酸的工艺过程为：

a、取丹参药材，加弱酸水提取1-3次，每次加6-10倍量，每次提取1-10小时，合并提取液，滤过；

b、将滤液加含金属离子的溶液并调节适当的pH值，至丹酚酸沉淀完全，分离沉淀；

c、将沉淀加弱酸水溶解，用乙酸乙酯萃取2-4次，合并，回收乙酸乙酯，将残渣干燥，即得丹参提取物。

经检验，以上提取物中的总酚酸含量可达50％～80％。基本达到了发明目的，所得到的产物也正是发明人想保护的产品。

得到初步结果后，为了细化参数，发明人进一步研究，得到一个更为具体的方法：

a、取丹参药材，加pH为2的酸水60℃温浸2次，每次加8倍量，每次温浸6小时，合并提取液，滤过；

b、将滤液加硫酸锌溶液并调解pH值为6.0～7.0，至不再有沉淀产生，离心，分离沉淀；

c、将沉淀加5％盐酸溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并，回收乙酸乙酯，喷雾干燥，得丹参提取物。

在上述技术方案中，体现出本发明的优点。一方面，是成本的降低：酸水提取可以避免丹酚酸B的破坏，经实验证明pH为2-3的酸水比较适合，工业生产中提取罐也能满足。由于弱酸水能够降低丹酚酸B的破坏率，故采用PH值为1～3的弱酸水为提取溶剂，采用渗漉、温浸两种温度较低的提取方法和弱酸水短时间煎煮的方法，可以保证丹酚酸B达到90％以上的转移率；同时采用金属离子沉淀法，此方法不需要将提取液浓缩，直接加金属离子即可，避免浓缩受热破坏，而金属离子的盐很便宜，成本降低；沉淀用少量酸水溶解再用乙酸乙酯萃取，此时的丹酚酸相对聚集，乙酸乙酯用量很少，成本也相应降低。

另一方面是产品纯度的提高：以上方法所制得的中药丹参提取物，如果以丹酚酸B为标准物质，采用分光光度法或高效液相色谱法测其中总丹酚酸量，结果将占该提取物总固体量的50％～80％，更精确地说是60％～70％；如果以原儿茶醛为标准物质，采用分光光度法或高效液相色谱法测其中总丹酚酸量，结果将占该提取物总固体量的60％～80％。但不论以什么物质为标准物质，都符合中药研究或新药开发领域对总丹酚酸有效部位的确认规则。上述总固体的制备方法参照国家药品监督管理局发《中药新药研究的技术要求》中关于注射剂总固体量的测定方法：精密量取溶液10ml，置于恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速称定重量，计算总固体的量。

为验证技术方案的先进性，发明人分别用二种方法对上述提取物进行了丹酚酸的含量测定。

(1)用高效液相色谱法：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸(22∶78)为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取提取物0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取上清液1ml加甲醇稀释至25ml量瓶中，摇匀，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果连续检验三批，提取物中丹酚酸B含量可以达到50％～80％。

在这里，按照我国中药新药研究的一般原则，由于丹酚酸B在总丹酚酸中占较大比例，也是主要药效成分，且对丹酚酸B的含量测定方法比较成熟，故在此也可以以丹酚酸B的含量来标示总丹酚酸的含量，即上述测定结果也可以表述为：提取物中总丹酚酸的含量以丹酚酸B计，达到50％～80％。

(2)用紫外分光光度法：

标准曲线精密称取干燥至恒重的原儿茶醛对照品15.05mg，用无水乙醇配成120μg/ml的对照品溶液。分别吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml于少10ml量瓶中，以无水乙醇定容，随行溶剂做空白，按紫外分光光度法在281nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备精密称取本明提取物10mg，置量瓶中加无水乙醇30ml，超声处理20min，过滤，滤液无水乙醇定容至20ml量瓶中，做为供试品溶液。

测定法分别精密吸取供试品液0.5ml于10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，随行溶剂做空白，按中国药典中紫外分光光度法，于281nm处测定吸光度。根据标准曲线计算供试品溶液中总丹酚酸含量。

结果连续检验三批，提取物中总丹酚酸含量可以达到60％～80％。

由以上结果可见，本发明技术方案既制得了品质较高的总丹酚酸，又降低了生产成本，达到了发明人的发明目的。

以下通过具体实施方式进一步说明本发明的技术方案。

具体实施方式

实施例

取丹参1000g，加pH2的酸水8倍量，浸泡一夜，提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并，滤过，滤液加氢氧化钠试液调解pH值为7，加1mol/L的三氯化铝溶液，同时加氢氧化钠试液调解pH为7，至溶液pH为7时再加三氯化铝溶液，至无沉淀生成即可。离心，分取沉淀，沉淀用5％的盐酸溶液3倍量溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次为5％的盐酸溶液体积的一半，合并乙酸乙酯液，回收，减压干燥，得丹参提取物，以高效液相色谱法测定丹酚酸B含量大于50％。

实施例二：取丹参药材1000g，加8倍量pH为2的酸水温浸提取2次，每次温浸4小时，并每隔半小时搅拌一次，合并提取液，滤过；滤液加硫酸锌溶液并保持pH值为6.2～6.7，至不再有沉淀产生，离心，分离沉淀；将沉淀加10％硫酸溶液溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每次1倍量，合并，回收乙酸乙酯，喷雾干燥，得丹参提取物。以高效液相色谱法测定，总丹酚酸含量达70％。

实施例三

取丹参1000g，加pH＝3的酸水渗漉，渗漉至加氯化锌溶液无沉淀，滤过，滤液加氢氧化钠试液调解pH值为7，加1mol/L的硫酸镁溶液，同时加氢氧化钠试液调解pH为6.5，至溶液pH为6.5时再加硫酸镁溶液无沉淀生成即可。离心，分取沉淀，沉淀用15％的盐酸溶液4倍量溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次为10％的盐酸溶液的2倍量，合并乙酸乙酯液，回收，喷雾干燥，得丹参提取物。以紫外分光光度法测定，其总丹酚酸的含量达72％。

Claims (10)

1.一种中药丹参的提取物，其特征在于用分光光度法或高效液相色谱法测得该提取物中总丹酚酸量占总固体量的50％～80％。

2.如权利要求1所述的提取物，其特征在于该提取物中总丹酚酸量占总固体量的60％～80％。

3.如权利要求2所述的提取物，其特征在于测定其中的总丹酚酸的含量时以丹酚酸B为标准物质。

4.一种制备如权利要求1、2或3所述的丹参提取物的方法，其特征在于采用以下步骤：将丹参药材用弱酸水提取，提取液加含金属离子的盐，并调节相应的pH值，使丹酚酸盐沉淀；将沉淀物分离，用酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯液，干燥，即为丹参提取物。

5.如权利要求4所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于丹参的提取方法可以是浸渍、渗漉或煎煮中的任一种。

6.如权利要求4所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所说的弱酸水是指pH值为1-3的水液；酸水则是指5％-15％的盐酸或硫酸溶液。

7.如权利要求4所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于其中的金属离子是指ca2+、Mg2+、Al3+、Zn2+、Ba2+或Cu2+等可使丹酚酸沉淀的金属离子；相应的pH值范围为5-12。

8.如权利要求4至7中任一所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a、取丹参药材，加弱酸水提取1-3次，每次加6-10倍量，每次提取1-10小时，合并提取液，滤过；

b、将滤液加含金属离子的溶液并调节pH值，至丹酚酸沉淀完全，分离沉淀；

c、将沉淀加酸溶液溶解，用乙酸乙酯萃取2-4次，合并，回收乙酸乙酯，将残渣干燥，即得丹参提取物。

9.如权利要求8所述丹参提取物的制备方法，其特征在于具体步骤为

a、取丹参药材，加pH为2的酸水60℃温浸2次，每次加8倍量，每次温浸6小时，合并提取液，滤过；

b、将滤液加硫酸锌溶液并调解pH值为6.0～7.0，至不再有沉淀产生，离心，分离沉淀；

c、将沉淀加5％盐酸溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并，回收乙酸乙酯，喷雾干燥，得丹参提取物。

10.如权利要求4至9中任一所述方法在制备酚酸类物质的工艺中的应用。