CN101081250A

CN101081250A - 一种改善贫血的何首乌提取物药剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN101081250A
Application number: CN 200610012026
Authority: CN
Inventors: 丘小惠; 古兴华; 孙景波; 巫志峰; 黄志海; 欧润妹
Original assignee: SECOND AFFILIATED HOSPITAL OF GUANGZHOU UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Current assignee: SECOND AFFILIATED HOSPITAL OF GUANGZHOU UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Priority date: 2006-05-29
Filing date: 2006-05-29
Publication date: 2007-12-05
Anticipated expiration: 2026-05-29
Also published as: CN101081250B

Abstract

本发明涉及一种治疗贫血的何首乌提取物药剂，何首乌提取物中多糖含量大于60％。其制备方法为将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为1％～10％，溶液除去蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，加相对于浓缩液体积4～9倍体积量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，与医/药学可接受的载体加工制得。本发明所述何首乌提取物药剂可改善血虚动物模型的贫血指征和提高白细胞水平，具有极好的治疗贫血疗效。

Description

一种改善贫血的何首乌提取物药剂及其制备方法和应用

发明领域

本发明涉及一种中药提取物药剂，具体的说，涉及一种改善贫血的何首乌提取物药剂及其制备方法和应用。

背景技术

贫血是指外周血液血红蛋白量低于正常值的下限，一般伴有红细胞数量或压积的减少。贫血是一种症状，而不是具体的疾病。根据不同的发病机理、临床表现和血细胞学的特征，贫血可分为不同的综合病征，如再生障碍性贫血、缺铁性贫血、骨髓病性贫血、溶血性贫血、血红蛋白病等。近年来对贫血的诊断治疗，虽然有长足的进步，但目前还是一种难治性疾病，贫血的治疗一般强调对症治疗，如缺铁性贫血的治疗主要是补充铁剂，但目前常用的铁剂仍有一定比例的胃肠道反应。上海医科大学《实用内科学》编辑委员会编，《实用内科学》(第九版)(下册)，人民卫生出版社：1636和《医学综述》，2005，11(2)：183-185“再生障碍性贫血的治疗。”中公开了再生障碍性贫血和肾性贫血的药物治疗主要是采用雄激素；免疫抑制剂如环孢菌素A(CsA)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)和抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、大剂量环磷酰胺(HD-CTX)；免疫调节剂(免疫刺激剂)如植物血凝素(PHA)左旋咪唑；糖蛋白类激素药物造血生长因子等。而自身免疫性溶血性贫血因缺乏根治手段，极易复发并迁延不愈，目前治疗药物主要应用单克隆抗体、免疫抑制剂和双磷酸盐等。以上用于治疗贫血的药物或毒副作用较大，或疗效仍有待进一步肯定和提高，而且费用昂贵，患者及家庭难以承受。因此，研究开发疗效好、毒副作用小、价格低的贫血治疗药物仍然是目前需要解决的问题。

近二十年有关何首乌和制何首乌有效成分的分析报道，主要着重于磷脂、羟基蒽醌类化合物和均二苯烯化合物，有关多糖的研究文献报道较少。最近国外学者已从何首乌中分离得到具有免疫促进作用的酸性多糖，国内也有研究表明，制首乌多糖类成分可能为制首乌抗衰老的主要活性成分之一。尚未见有关何首乌和制何首乌多糖的制剂报道。

发明内容

本发明的目的就是提供一种改善贫血的何首乌提取物药剂。

本发明的另外一个目的就是提供该何首乌提取物药剂的制备方法。

本发明还提供了该何首乌提取物药剂在制备改善贫血的药物中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供了一种改善贫血的何首乌提取物药剂，其中何首乌提取物中多糖含量大于60％，优选多糖含量80％～99％。

本发明还提供了一种制备改善贫血的何首乌提取物药剂的方法，包括将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为1％～10％，溶液除去蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，加相对于浓缩液体积4～9倍体积量乙醇(同比例量纲)，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，与医/药学可接受的载体加工制得。

其中提取粗制多糖的过程优选为将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，取相对于何首乌或制何首乌质量4～12倍体积量(同比例量纲)的含醇量80％～95％的乙醇溶液回流提取3～5次，每次1～3小时，过滤，滤渣挥干乙醇，加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～90％，静置沉淀，过滤，重复沉淀1～2次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥即得。

重复沉淀为将“滤渣加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～90％，静置沉淀。”重复操作。

其中提取粗制多糖的过程优选将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05-1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～85％，静置沉淀，过滤，重复沉淀2～4次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥即得。

重复沉淀为“滤渣加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05-1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～85％，静置沉淀。”重复操作。

所述除去蛋白的方法优选为加鞣酸溶液沉淀除蛋白或通过蛋白酶酶解除蛋白。

其中鞣酸溶液沉淀除蛋白方法为将何首乌或制何首乌粗制多糖溶解于水，加适量活性碳(药用规格)脱色，滤过，滤液加1％鞣酸溶液(药用规格)适量，搅匀，静置沉淀，除去沉淀，上清液加乙醇至含醇量80％，冰箱静置沉淀，过滤，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥制得何首乌或制何首乌多糖。

蛋白酶酶解除蛋白方法为将何首乌或制何首乌粗制多糖溶解于水，加适量活性碳(药用规格)脱色，滤过，滤液加入蛋白酶水解，酶解液用其4倍体积的乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤，干燥制得何首乌或制何首乌多糖。

本发明还提供了所述的改善贫血的何首乌提取物药剂在制备改善贫血的药物中的应用。

本发明的何首乌提取物可以与医/药学上可接收的载体制得任何医药学上可接受的剂型。

本发明所述何首乌提取物药剂为口服或注射用药，口服剂量为3g-30g/天，一次或分次服用；注射剂剂量为30mg-300mg/次，1-2次/天。

本发明所述何首乌提取物药剂可改善血虚动物模型的贫血指征和提高白细胞水平，具有极好的治疗贫血疗效。

具体实施方式

通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地理解本发明，但下述实施例不是对本发明的限定。

本实施例所用原料为蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorumThunb.)的干燥块根，具有解毒、消痈、润肠通便之功效；或何首乌经炮制后的制首乌，具有补肝肾，益精血，乌须发等功效。

制何首乌采用常规的炮制方法炮制。

何首乌或制何首乌中多糖含量的测定方法为：

多糖含量测定：

仪器与试剂：仪器：紫外-可见光分光光度仪(美国发玛西亚公司，B20-RAD UV/V 4000型)；连续移液枪(德国BRAND)；电子恒温水浴锅(广东省汕头市医用设备厂)。供含量测定用D-葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号110833-200302)，蒽酮，98％浓硫酸，无水乙醇(以上均为分析纯)。

对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，置具塞试管中，分别加蒸馏水至1.0ml，迅速加入0.5％硫酸蒽酮溶液4.0ml，混匀，冰浴20min，90℃恒温水浴保温25min，迅速置常水中冷却至室温。照2005版《中华人民共和国药典》分光光度法(附录VB)，以第一份为空白，于627nm测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数为：A＝4.8884C+0.0309，r＝0.9992。线性范围为0.06～0.60mg/ml。

供试品溶液的制备：称取何首乌或制何首乌多糖提取物5mg溶解并定容至10ml，备用。

测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下方法，自“迅速加入0.5％硫酸蒽酮溶液4.0ml”起，依法测定吸收度，由标准曲线回归方程计算供试品中提取物中多糖含量，即得。

多糖含量＝实际测得含量(mg)/多糖取样量(mg)×100％

实施例1：口服液体制剂的制备

将何首乌粉碎成颗粒或粗粉，用4倍量的含醇量80％的乙醇溶液回流提取5次，每次3小时，过滤，滤渣挥干乙醇，加12倍量蒸馏水60℃温浸3次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％，静置沉淀，过滤，重复沉淀1次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为1％，鞣酸溶液沉淀除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.05(20℃)，加4倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为60％，溶解于适量药用纯水，加防腐剂，分装，灭菌即得。

实施例2：散剂的制备：

将何首乌粉碎成颗粒或粗粉，用8倍量的含醇量95％的乙醇溶液回流提取4次，每次2小时，过滤，滤渣挥干乙醇，加8倍量蒸馏水80℃温浸4次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.20(25℃)，浓缩物加乙醇至含醇量85％，静置沉淀，过滤，重复沉淀2次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为5％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(25℃)，加6倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为80％，过筛，分装即可。

实施例3：胶囊的制备

将制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，用12倍量的含醇量90％的乙醇溶液回流提取3次，每次1小时，过滤，滤渣挥干乙醇，加5倍量蒸馏水100℃回流提取5次，每次1小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.30(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量90％，静置沉淀，过滤，重复沉淀1次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为10％，鞣酸溶液沉淀除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.30(20℃)，加9倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为85％，加适量辅料制粒、装胶囊即可。

实施例4：片剂的制备：

何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加5倍量蒸馏水60℃温浸3次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％，静置沉淀，过滤，重复沉淀2次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为5％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(20℃)，加4倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为90％，粉碎成极细粉，加适量辅料制粒，压片即可。

实施例5：软胶囊

何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加9倍量蒸馏水80℃温浸4次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.20(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量85％，静置沉淀，过滤，重复沉淀3次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为5％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为93％，加聚乙二醇等混合，与药物混合均匀，明胶、甘油等加水溶解，加入药物，压制即可。

实施例6：颗粒剂

何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加12倍量蒸馏水100℃回流5次，每次1小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.30(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量80％，静置沉淀，过滤，重复沉淀3次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为5％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为89％，加适量可溶性口服制剂药用辅料，制粒，干燥，分装即得。

实施例7：水针剂和输液剂

制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加8倍量蒸馏水80℃温浸4次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.20(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量80％，静置沉淀，过滤，重复沉淀5次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为10％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为95％，取何首乌或制何首乌多糖溶解于适量注射用水，加入针用活性炭，煮沸、过滤，再分别用100000分子量和10000分子量的超滤膜过滤，加等渗调节剂、调节pH值，滤过，分装，灭菌，即得。

实施例8：粉针剂

制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加8倍量蒸馏水80℃温浸4次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.20(20℃)，浓缩物加乙醇至含醇量80％，静置沉淀，过滤，重复沉淀5次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥制得粗制多糖。用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为10％，蛋白酶酶解除蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20(20℃)，加6倍量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，测得其中多糖的含量为95％，取何首乌或制何首乌多糖溶解于适量注射用水，加入针用活性炭，煮沸、过滤，再分别用100000分子量和10000分子量的超滤膜过滤，加等渗调节剂、调节pH值，滤过，冷冻干燥，即得。

实验例1

1.材料

1.1实验动物

雄性SD大鼠，体重(150±20g)，购于广州中医药大学实验动物中心，合格证编号：广东省科委实验动物监测所合格证(粤检证字)第2002A001。

1.2试剂：环磷酰胺，上海华联制药有限公司，批号：050215，乙酰苯肼，广州化学试剂厂，批号：20040901-1。

1.3供试样品：何首乌或制何首乌提取物药剂制备成口服液体制剂，给药量：高剂量4.0g/kg、中剂量组2.0g/kg、低剂量组0.5g/kg。

2.方法

2.1分组

将雄性SD大鼠随机分组，每组10-11只。设模型对照组，正常对照组和药物组。每种受试药物为一组药物组。

2.2模型

大鼠血虚模型：分别于实验第2日、第5日给动物皮下注射乙酰苯肼20mg/kg、40mg/kg。第5日起腹腔注射环磷酰胺40mg/kg，连续4日。末次给药1.5h后动物在麻醉状态下心脏采血1ml，用临床检测患者标本的全自动生化分析仪检测血常规。除正常对照组外，其余组别均按上述方法造模。正常对照组在上述时间点分别皮下和腹腔注射等量生理盐水。

2.3给药方式和剂量

于实验第1日开始给药，连续9天，灌胃给药，给药剂量3ml/200g。

统计学分析采用方差分析进行方差齐性检验和显著性检验，如分析数据方差不齐时，使用非参数统计方法分析。统计软件采用PEMS3.0 for Windows Package for encyclopaedia of medical statistics(《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包)。结果见表1。

表1.何首乌和制首乌多糖对血虚动物模型红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、白细胞(WBC)指标的影响

组别	动物数	RBC(×10¹²个/L)	HGB(g/l)	HCT	MCHC(g/l)	WBC(×10¹²个/L)
组别	动物数	RBC(×10¹²个/L)	HGB(g/l)	HCT	MCHC(g/l)	WBC(×10¹²个/L)	正常组	12	7.1858±0.3510^**	145.6667±5.8361^**	40.8625±4.9385^*	363.8333±10.1866^*	3.9917±1.7599^**
模型组	11	3.0955±0.2298^△△	77.8182±6.1289^△△	16.9182±1.5452^△	460.9091±16.4162^△	1.1636±0.4056^△△	正常组	12	7.1858±0.3510^**	145.6667±5.8361^**	40.8625±4.9385^*	363.8333±10.1866^*	3.9917±1.7599^**
模型组	11	3.0955±0.2298^△△	77.8182±6.1289^△△	16.9182±1.5452^△	460.9091±16.4162^△	1.1636±0.4056^△△	何首乌提取物低剂量组	10	4.0080±0.8186	92.9887±11.2260	22.0580±3.9694	423.3000±26.2118	1.5673±0.4517
何首乌提取物中剂量组	9	4.6563±0.4273	99.0012±7.1099	24.6954±2.1993	399.2542±97895	2.8444±0.7963	何首乌提取物低剂量组	10	4.0080±0.8186	92.9887±11.2260	22.0580±3.9694	423.3000±26.2118	1.5673±0.4517
何首乌提取物中剂量组	9	4.6563±0.4273	99.0012±7.1099	24.6954±2.1993	399.2542±97895	2.8444±0.7963	何首乌提取物高剂量组	9	4.9022±0.4357	107.6667±8.1086	26.3667±2.7032	409.1111±13.1951	3.0000±1.2874
制何首乌提取物低剂量组	10	3.6110±0.4021	90.0153±9.1781	18.1056±2.3042	433.1000±10.3020^△	1.6621±0.7136	何首乌提取物高剂量组	9	4.9022±0.4357	107.6667±8.1086	26.3667±2.7032	409.1111±13.1951	3.0000±1.2874

制何首乌提取物中剂量组	9	4.33 10±0.4292	93.6980±9.3001	23.8971±2.5216	407.0012±8.0001	2.5340±1.0863
制何首乌提取物中剂量组	9	4.33 10±0.4292	93.6980±9.3001	23.8971±2.5216	407.0012±8.0001	2.5340±1.0863	制何首乌提取物高剂量组	8	4.7463±0.4587	98.7500±7.2259	24.7875±2.2003	398.8750±9.8480	3.000±2.4321

注：与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；与正常组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

结果表明，模型组与正常组比较各项指标均有显著差异，说明造模成功。何首乌和制何首乌提取物药剂三个剂量组均有抵抗模型所致红细胞、血红蛋白、红细胞压积和白细胞水平降低等作用，对贫血症状有改善作用。

Claims

1、一种改善贫血的何首乌提取物药剂，其特征在于所述何首乌提取物中多糖含量大于60％。

2、如权利要求1所述的改善贫血的何首乌提取物药剂，其特征在于所述何首乌提取物中多糖含量为80％～99％。

3、如权利要求2所述的改善贫血的何首乌提取物药剂，其特征在于所述何首乌提取物中多糖含量为90％～99％。

4、如权利要求1～3任一所述的一种改善贫血的何首乌提取物药剂，其特征在于所述何首乌提取物药剂为任何医药学上可接受的剂型。

5、一种制备如权利要求1～4任一所述的改善贫血的何首乌提取物药剂的方法，其特征在于包括以下步骤：将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，提取粗制多糖，用蒸馏水溶解使粗制多糖质量含量为1％～10％，溶液除去蛋白，过滤，滤液浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，加相对于浓缩液体积4～9倍体积量乙醇，静置沉淀，过滤，滤渣用乙醇洗涤后干燥，与医/药学可接受的载体加工制得。

6、如权利要求5所述的一种制备改善贫血的何首乌提取物药剂的方法，其特征在于提取粗制多糖的过程为将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，取相对于何首乌或制何首乌质量4～12倍体积量的含醇量80％～95％的乙醇溶液回流提取3～5次，每次1～3小时，过滤，滤渣挥干乙醇，加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～90％，静置沉淀，过滤，重复沉淀1～2次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥即得。

7、如权利要求5所述的一种制备改善贫血的何首乌提取物药剂的方法，其特征在于提取粗制多糖的过程为将何首乌或制何首乌粉碎成颗粒或粗粉，加5～12倍量蒸馏水60～100℃温浸或回流3～5次，每次1～3小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度1.05～1.35(20～30℃)，浓缩物加乙醇至含醇量75％～85％，静置沉淀，过滤，重复沉淀2～4次，过滤，滤渣用乙醇洗涤，干燥即得。

8、如权利要求5所述的一种制备改善贫血的何首乌提取物药剂的方法，其特征在于所述除去蛋白的方法为加鞣酸溶液沉淀除蛋白或加蛋白酶酶解除蛋白。

9、如权利要求1～4中任一所述的改善贫血的何首乌提取物药剂在制备改善贫血的药物中的应用。