CN101073566A - 一种丹参酮类成分注射剂的制备及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以丹参为原料制备的丹参酮类有效成分制成的注射用浓溶液，本发明还涉及该注射用浓溶液的制备方法和临床使用方法。

Description

一种丹参酮类成分注射剂的制备及其应用

技术领域

本发明设计一种丹参酮类成分制成的针剂，具体为丹参酮I、丹参酮II_A、丹参酮II_B、隐丹参酮、异丹参酮、二氢丹参酮I等二萜醌类化合物制成的中药有效部位注射剂及其在心脑血管领域的应用。

背景技术

丹参酮是中药丹参根中的脂溶性成分，主要包括丹参酮I、丹参酮II_A、丹参酮II_B、隐丹参酮、异丹参酮、二氢丹参酮I等二萜醌类化合物，其共同特点是具有邻醌或对醌结构。现代药理研究表明，丹参酮类成分具有天然抗氧化作用、抗动脉粥样硬化、降低心肌耗氧量等心血管药理作用、抗菌消炎作用及抗肿瘤作用。

目前市面上使用的相关的注射剂有丹参酮II_A磺酸钠注射液、丹参注射液及复方丹参注射液，临床上常用于心脑血管疾病的治疗。其中丹参注射液和复方丹参注射液为纯中药注射剂，由于其成分复杂，不易控制质量，且临床应用的不良反应报道较多。另外，获得丹参酮单体的操作繁琐，获得量少，且常常用到大量的有毒溶剂，增加了不良反应的危险性。

中药注射剂代表了中药制剂的最高水平，发现中药当中的有效部位，制成注射剂，可以极大的改善中药的治疗作用，也是中药现代化的重要发展方向。

发明内容

在对丹参酮类成分的基础研究中，我们意外地发现，将其制成可供注射的注射剂静脉给药时，其疗效显著提高，与口服给药途径相比，具有疗效高、剂量低等优点。该效应在数个冠心病、心绞痛模型中得到验证。

本发明的目的在于提供一种质量可控、疗效稳定的注射剂及其制备方法。

本发明内容通过以下技术方案实现：

一、丹参酮类成分的提取、纯化工艺研究

根据相关文献及药理预试结果，制订出如下提取、纯化工艺：将丹参根粉碎成粗粉，用醇/水混合溶媒溶媒提取(优选甲醇、乙醇，醇浓度可以选择介于60～95％)，提取方法优选渗漉法，合并渗漉液，减压浓缩，得到粗提取物。将粗提取物溶于100％甲醇，去除不溶物，减压浓缩得到总丹参酮粗品。采用葡聚糖凝胶柱色谱法精制总丹参酮，葡聚糖凝胶柱优选Sephedex LH-20；将上步总丹参酮粗品以适当溶媒溶解，通过葡聚糖凝胶柱，以2-3倍柱床体积的10～30％甲醇洗去杂质，再以40～60％的甲醇洗脱，收集2～4倍柱床体积的醇溶液，减压浓缩，得提取物I；再用60～80％的甲醇洗脱，收集2～4倍柱床体积的醇溶液，减压浓缩，得提取物II。

总丹参酮的制备，按照下述比例，配制，即得：

提取物I：10～100份

提取物II：5～100份

以适当溶媒溶解，摇匀，挥干，即得。

其中各组分含量(重量比)：

丹参酮II_A：20％～99.8％。

其他成分：0.2％～80％。

二、制剂工艺研究

在上述提取物的基础上，通过制剂处方工艺研究，优选出制剂成型必须的药学上可以接受的一种或多种药用辅料，这些药用辅料可以是溶剂、助溶剂、抗氧化剂和稳定剂中的一种或者几种。

上述各组分的含量为：

丹参酮类提取物          0.2～40％

溶剂                    0～99.8％

助溶剂                  0～99.8％

抗氧化剂和稳定剂        0～5％

以上均为重量比

优选各组分的含量为：

丹参酮类提取物          0.2～20％

溶剂和助溶剂            80～99.8％

抗氧化剂和稳定剂        0～1％

以上均为重量比

其中溶剂可以是水、乙醇、丙二醇、大豆油、甘油、聚乙二醇中的一种或几种。

其中助溶剂可以是聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85、聚乙二醇、聚丙二醇、聚维酮、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯单油酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、环糊精、甲基环糊精、丙基环糊精、羟乙基环糊精、环糊精聚合物、乙基环糊精、支链环糊精、卵磷脂、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。

其中抗氧化剂和稳定剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、半胱氨酸及其盐、抗坏血酸及其衍生物、谷胱甘肽、维生素E及其衍生物、二硫代甘醇酸、乙二胺四乙酸及其盐、硫代甘油中的一种或几种。

一般地，本发明注射用浓溶液的体积为0.5～10ml，每瓶总丹参酮的含量为5～200mg，优选20～80mg。

制剂处方：

丹参酮类提取物	25g
		丙二醇	500ml
无水乙醇	加至1000ml
			制成1000瓶，1ml/瓶

制法：称取上述提取物，加适量的无水乙醇溶解，加入丙二醇中，搅拌均匀，加入乙醇至1000ml，混匀，精滤除菌，无菌分装，压塞，轧盖，包装，即得。

三、药效学研究

1、对家兔动脉粥样硬化模型血液流变学的影响

试验模型：采用喂饲高脂饲料(80％基础饲料中加入15％蛋黄粉、0.5％胆固醇和4.5％猪油)6周，复制家兔动脉粥样硬化模型，随机分为4组，分别

(1)丹参酮有效部位组：静脉注射丹参酮类提取物(2、4、8mg/kg)

(2)丹参酮II_A磺酸钠组：静脉注射丹参酮II_A磺酸钠注射液(4mg/kg，约相当于临床用药剂量的4倍)

(3)正常对照组：正常动物(不造模)，静脉给予生理盐水

(4)模型对照组：不给任何药物

以上各组给药1次/日，给药1周，末次给药后2h取血，采用全自动血流变快测仪测血液粘度(η_b)，毛细管粘度法测定(η_p)，文氏管法测红细胞压积(Hct)，微量毛细管高速血球压积离心机测定纤维蛋白原含量(Fg)，结果如下：

组别

ηb(mpa s)

ηp(mpa s)

Hct(％)

Fg(g％)

丹参酮类提取物(2mg/kg)	9.72±0.64**▲##	4.10±0.21**▲▲##	35.67±1.42**▲##	2.83±1.16**▲▲##
					丹参酮类提取物(4mg/kg)	9.15±0.57**▲	3.18±0.18**▲▲#	37.66±1.50**▲▲	2.42±1.09**▲▲#
丹参酮类提取物(8mg/kg)	8.41±0.53**▲▲##	2.30±0.13**▲▲##	40.18±1.66▲▲##	1.96±1.20**▲▲##
					丹参酮IIA磺酸钠注射液(4mg/kg)	9.13±0.56**▲	3.33±0.09**▲▲	37.82±1.09**▲▲	2.36±1.10**▲▲
正常对照组	7.32±0.50	1.64±0.13	41.44±1.67	1.70±1.02
					模型对照组	12.21±0.69**	4.83±0.14**	32.89±1.92**	3.28±1.45**

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01与正常对照组比较；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01与模型组比较；#P＜0.05，##P＜0.01与丹参酮II_A磺酸钠注射液组比较。

结果表明：模型组与对照组比较，η_b、η_p和Hct显著升高，血液呈高粘状态，红细胞压积显著降低(P＜0.01)；与模型组比较，丹参酮类提取物组(2、4、8mg/kg)，丹参酮II_A磺酸钠注射液(4mg/kg)组均能显著抑制模型所致的η_b、η_p、Hct的异常升高，并能显著提高红细胞压积的异常降低；与丹参酮II_A磺酸钠注射液(4mg/kg)组比较，丹参酮类提取物(8mg/kg)组对模型所致各项指标的异常变化的改善作用显著优于该组(P＜0.01)，丹参酮类提取物(4mg/kg)组在改善η_b和红细胞压积方面与该组无显著性差异，在改善η_p和Fg方面差异显著(P＜0.05)。

2、对缺血再灌注心肌局部血流量的影响

试验模型：用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉犬，气管插管，控制呼吸，使血气维持正常。右侧股动、静脉插管，经胸骨正中线开胸，剪开心包，暴露心脏，在冠状动脉左前降支(LAD)中段，分离冠脉，穿线备结扎。对照组结扎40min，然后松开结扎线，再灌注30min。其余四组相同，分别于结扎前10min静注生理盐水2.5ml·kg-1，丹参酮II_A磺酸钠10mg·kg-1，丹参酮类提取物(5、10、20mg/kg)(容量相同)。术中监测心率和平均动脉压。

血流量测定：将50μm铜丝铂电极(氢电极)用自制银丝悬浮装置植入测定部位(结扎线上0.5cm、结扎线下0.5cm、1.0cm和1.5cm，沿LAD排列，以A、B、C、D表示)，深度0.5cm(相当于中层心肌)，参比电极放在胸前切口皮下，然后将电极接到末梢组织血流仪上。测定时给动物吸入0.10的氢气(0.90空气)，待氢气饱和后，中断吸氢，记录氢气清除曲线，绘制半对数-静脉分布曲线，求出T_1/2(为氢清除半衰期)，按公式F/W＝0.639/T_1/2计算血流量值(式中F/W为单位重量的血流量，单位为ml·g-1)。分别于缺血、再灌注中测A、B、C、D的血流量两次，取均值作为A、B、C、D的血流量。

组别	缺血				再灌注
									A	B	C	D	A	B	C	D
	丹参酮类提取物(5mg/kg)	1.37±0.07*	0.17±0.03	0.41±0.10	0.77±0.12*	1.36±0.14*	0.68±0.07	0.95±0.12*									1.13±0.05*
丹参酮类提取物(10mg/kg)									1.44±0.06**	0.15±0.04	0.41±0.08	0.78±0.09*	1.42±0.11**	0.68±0.06	0.97±0.08*	1.17±0.06*
	丹参酮类提取物(20mg/kg)	1.56±0.13**	0.16±0.05	0.43±0.13	0.80±0.14*	1.47±0.15**	0.69±0.05	0.98±0.06*									1.18±0.08*
丹参酮IIA磺酸钠注射液(10mg/kg)									1.43±0.09**	0.15±0.04	0.42±0.10	0.79±0.11*	1.45±0.09**	0.70±0.06	0.98±0.09*	1.17±0.10*
	对照组	1.34±0.08	0.14±0.03	0.40±0.11	0.71±0.09	1.29±0.08	0.65±0.07	0.92±0.10									1.03±0.07

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01与对照组比较。

结果表明：缺血期间，静脉注射丹参酮类提取物与丹参酮II_A磺酸钠注射液均能显著增加A、D区血流量，再灌注后，对照组B、C、D区血流有所恢复，丹参酮类提取物与丹参酮II_A磺酸钠注射液均能显著增加A、C、D区血流量。

具体实施方式：

实施例1：丹参酮类提取物的制备1

取丹参药材1000g，粉碎成粗粉，置渗漉器中，用10倍量95％乙醇浸泡24小时，再以48倍量的95％乙醇缓缓渗漉，流速为3ml/min，收集渗漉液，减压浓缩至干，加入5倍量的甲醇，超声使充分溶解，滤过，将滤液浓缩至约20ml，加至葡聚糖凝胶柱Sephedex LH20上，以3倍柱床体积的10％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再以50％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，得提取物I，以80％甲醇洗脱，收集洗脱也，蒸干，得提取物II，将上述提取物以提取物I∶提取物II＝2∶1混合，得到丹参酮类提取物。

实施例2：注射用丹参酮浓溶液的制备(2ml：40mg)

处方：丹参酮类提取物          40g

      异丙醇                  1000ml            乙醇               1000ml

                                                制成1000支

制备方法：

(1)在无菌操作室内精密称取处方量的丹参酮类提取物40g，加入1000ml经脱热原处理的丙二醇和1000ml经脱热原处理的乙醇置于适当的无菌、无热原容器内，搅拌使混合均匀；

(2)上述溶液，精滤除菌(0.22μm)，滤过后加无水乙醇补足全量(2000ml/1000瓶)；

(3)溶液送检(含量测定)；

(4)无菌分装于西林瓶中，每瓶装2.0ml；

(5)扎盖、封口。

(6)质检，包装。

实施例3：注射用丹参酮浓溶液的制备(2ml：40mg)

处方：丹参酮类提取物       40g          乙醇            600ml

      吐温-80              400ml        异丙醇          1000ml

                                        制成1000支

制备方法同实施例1，其中步骤(1)为取经脱热原处理的乙醇600ml、吐温-80 400ml和异丙醇1000ml，置于适当的无菌、无热原容器内，搅拌使混合均匀。

实施例4：注射用丹参酮浓溶液的制备(5ml：50mg)

处方：丹参酮类提取物       50g           异丙醇         1000ml

      甘油                 2000ml        硫代甘油       2g

      乙醇                 加至5000ml

                                         制成1000支

制法：

按照制剂处方称取丹参酮类提取物及硫代甘油，加入异丙醇1000ml、甘油2000ml，混合均匀，加入乙醇至5000ml，加入活性炭10g，水浴加热15min，滤过除炭，加入乙醇至全量；0.22μm微孔滤膜过滤，测定含量，分装，每支5ml，盖塞，轧盖，即得。

Claims (9)

1、一种注射用丹参酮浓溶液，其特征是：含有丹参酮类成分(丹参酮I、丹参酮II_A、丹参酮II_B等二萜醌类化合物)，并至少含有一种药学上可以接受的载体，载体包括：溶剂、助溶剂、抗氧化剂和稳定剂。

2、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有丹参酮II_A、丹参酮I、丹参酮II_A、丹参酮II_B、隐丹参酮、异丹参酮、15，16-二氢丹参酮I、丹参新酮、脱氢丹参新酮、羟基丹参酮A、1，2-二氢丹参酮I、亚甲基丹参醌中的一种或几种。

3、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有的溶剂可以是水、乙醇、丙二醇、大豆油、甘油、聚乙二醇中的一种或几种。

4、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有的助溶剂可以是聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85、聚乙二醇、聚丙二醇、聚维酮、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯单油酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、环糊精、甲基环糊精、丙基环糊精、羟乙基环糊精、环糊精聚合物、乙基环糊精、支链环糊精、卵磷脂、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮一种或几种。

5、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有的抗氧化剂和稳定剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、半胱氨酸及其盐、抗坏血酸及其衍生物、谷胱甘肽、维生素E及其衍生物、二硫代甘醇酸、乙二胺四乙酸及其盐、硫代甘油中的一种或几种。

6、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有的主药、溶剂、助溶剂、抗氧化剂和稳定剂的比例为：

丹参酮类化合物     0.2～50％

溶剂               0～99.8％

助溶剂             0～99.8％

抗氧化剂和稳定剂   0～10％

以上均为重量比

7、根据权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液，其特征在于：其中含有的主药、溶剂和助溶剂、抗氧化剂和稳定剂的比例为：

丹参酮类化合物     0.2～20％

溶剂和助溶剂       80～99.8％

抗氧化剂和稳定剂   0～1％

以上均为重量比。

8、一种如权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液的制备方法，其特征在于：取丹参药材，用适当的方法提取、纯化得丹参酮类提取物后，测定含量，称取处方量的丹参酮类提取物、溶剂、助溶剂、抗氧化剂和稳定剂，混合均匀，精滤除菌，无菌分装，压塞，轧盖，质检，包装，即得。

9、如权利要求1所述的注射用丹参酮浓溶液的使用方法，其特征在于：将其用临床常用的葡萄糖或氯化钠注射液20～1000ml稀释给药。