CN101070545A - 脂肪酸合成酶及编码该酶的多核苷酸及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于新型脂肪酸合成的脂肪酸合成酶、编码此酶的多核苷酸(例如，含有(a)或(b)的多核苷酸，所述(a)为由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸，所述(b)为与含有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸)、包含此多核苷酸的表达载体及转化体、使用该转化体的食品等的制造方法、通过该制造方法制造的食品、被检脂质生产菌的评价或选择方法等。

Description

脂肪酸合成酶及编码该酶的多核苷酸及其应用
技术领域
本发明涉及编码脂肪酸合成酶的基因及其应用。
背景技术
用于新型脂肪酸合成的脂肪酸合成酶基因在各种生物中被克隆并得到了大量的研究(例如非专利文献1：E.Schweizer et.al.，Microbiol.Mol.Biol.Rev.，68，501-517，2004)。
已知一部分细菌及菌类和动物中，如下所示被称为类型I的多功能酶在脂肪酸合成中催化一系列的反应。
类型Ia：(菌类)AC-ER-DH-MPT/ACP-KR-KS-PPT，α6β6(β+α：约3950a.a.)。(细菌)AC-ER-DH-MPT-ACP-KR-KS-PPT，α6，菌类的FAS的β和α亚基是用头-尾(head-to-tail)连接的结构(α：约3000a.a.)。
类型Ib：(动物)KS-AT-DH-ER-KR-ACP-TE，α2(α：约2500a.a.)。上述各简称指以下物质：
AC：酰基(乙酰)转移酶(ac(et)yltransferase)
AT：丙二酰/乙酰转移酶(malonyl/acetyl-transferase)
MPT：丙二酰/棕榈酰转移酶(malonyl/palmitoyl-transferase)
KS：酮酰合成酶(ketoacyl synthase)
KR：酮酰还原酶(ketoacyl reductase)
DH：脱水酶(dehydratase)
ER：烯酰还原酶(enoyl reductase)
ACP：酰基载体蛋白(acyl carrier protein)
TE：硫酯酶(thioesterase)
PPT：棕榈酰/棕榈酰转移酶(palmitoyl/palmitoyl-transferase)。
在酵母Saccharomyces cerevisiae(以下有时简称为「S.cerevisiae 」)中，新型脂肪酸的合成是通过脂肪酸合成酶(由FAS1基因编码的β亚基和FAS2基因编码的α亚基组成的α6β6复合体)进行的，生成碳数达18(硬脂酸)的脂肪酸。另外，已知脂肪酸链延长酶基因有ELO1、ELO2、ELO3，ELO1用于C12～C16向C16～C18的链延长，ELO2用于C16～C18向C22的链延长，ELO3用于C18～C24向C26的链延长。
另一方面，因脂质生产菌高山被孢霉(Mortierella alpina)(以下有时简称为「M.alpina」)中，通过突变处理，可得到从棕榈酸向硬脂酸的脂肪酸链延长活性降低了的突变株(专利文献1：日本特开2001-245687)，所以可说明，至少到棕榈酸的合成和从棕榈酸到硬脂酸的合成是不同的酶控制的。
但是，用于以M.alpina为代表的脂质生产菌的新型脂肪酸合成的脂肪酸合成酶的基因至今为止还未被克隆。
发明内容
在上述情况下，希望鉴定用于以M.alpina为代表的脂质生产菌的新型脂肪酸合成的脂肪酸合成酶及编码此酶的基因。
本发明者锐意研究的结果，成功地克隆了用于作为脂质生产菌M.alpina的新型脂肪酸合成的脂肪酸合成酶的基因，完成了本发明。即本发明提供以下的多核苷酸、蛋白质、表达载体、转化体、使用该转化体的食品等的制造方法、通过其制造方法制造的食品等、以及被检脂质生产菌的评价和选择方法。
(1)以下(a)～(h)中任一项所述的多核苷酸，其为：
(a)多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸；
(b)多核苷酸，其含有由序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸或其一部分；
(c)多核苷酸，其含有编码具有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸；
(d)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成的，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(e)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(f)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(g)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(h)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
(2)上述(1)中所述的多核苷酸，其是以下(i)～(m)的任一项：
(i)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1～10个氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(j)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有90％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(k)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(1)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(m)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
(3)上述(1)中所述的多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸。
(4)上述(1)中所述的多核苷酸，其含有序列号：1的碱基序列组成的多核苷酸。
(5)上述(1)中所述的多核苷酸，其含有序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸。
(6)上述(1)中所述的多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。
(7)上述(1)～(6)中任一项所述的多核苷酸，其是DNA。
(8)蛋白质，其由上述(1)～(7)中任一项所述的多核苷酸编码。
(8a)含有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质。
(8b)含有序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质；
(8c)具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质。
(9)载体，其含有上述(1)～(7)中任一项所述的多核苷酸。
(9a)上述(9)中所述的载体，其包含具有以下(a)～(c)组成要素的表达盒：
(a)在宿主细胞内可转录的启动子；
(b)上述(1)～(7)中任一项所述的多核苷酸，其与该启动子结合；以及
(c)与RNA分子的转录终止及多聚腺苷酸化有关的、在宿主细胞中起作用的信号。
(9b)上述(9a)中所述的载体，其中上述宿主细胞是脂质生产菌(例如M.alpina)或酵母(例如S.cerevisiae)。
(10)转化生物，其中导入了上述(1)～(7)中任一项所述的多核苷酸。
(11)转化生物，其中导入了上述(9)中所述的载体。
(12)上述(11)中所述的转化生物，其通过导入上述(9)中所述的载体，使脂肪酸生成能力提高。
(13)上述(10)～(12)中任一项所述的转化生物，其中，所述生物是脂质生产菌。
(14)上述(13)中所述的转化生物，其中，上述脂质生产菌是高山被孢霉(Mortierella alpina)。
(15)脂质或脂肪酸的制造方法，其使用上述(10)～(14)中任一项所述的转化生物。
(16)食品、医药品或工业原料的制造方法，其使用上述(10)～(14)中任一项所述的转化生物。
(16a)上述(16)中所述制造方法，其中，所述食品是含有油脂的食品。
(17)食品、医药品或工业原料，其由上述(16)中所述方法制造。
(17a)上述(17)中所述的食品或工业原料，其中，所述食品是含有油脂的食品。
(18)评价方法，其是使用根据具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因的碱基序列设计的引物或探针，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法。
(18a)使用上述(18)中所述的方法，筛选脂肪酸生产能力强的脂质生产菌的方法。
(18b)使用通过上述(18a)中所述方法筛选的脂质生产菌制造油脂的方法。
(19)评价方法，其是通过培养被检脂质生产菌，和测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因的表达量，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法。
(19a)碳数16的脂肪酸生产能力强的脂质生产菌的筛选方法，其包括使用上述(19)中所述方法，评价被检脂质生产菌，和筛选上述脂肪酸合成酶基因表达量高的脂质生产菌。
(19b)制造油脂的方法，其包括使用通过上述(19a)中所述方法筛选的脂质生产菌。
(20)脂质生产菌的选择方法，其为培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因在各脂质生产菌中的表达量，选择该基因的表达高于标准脂质生产菌的被检脂质生产菌。
(21)脂质生产菌的选择方法，其为培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，对各脂质生产菌中的上述(8)中所述的蛋白质定量，选择该蛋白质的量高于标准脂质生产菌的被检脂质生产菌。即培养多种脂质生产菌，对各脂质生产菌中上述(8)中所述的蛋白质定量，选择其中该蛋白质量多的被检脂质生产菌。
本发明的多核苷酸用于脂质生产菌(例如M.alpina)、酵母等的转化，所以对使用了此种转化脂质生产菌或转化酵母等的食品、化妆品、医药品(例如皮肤外用药)、肥皂等的制造有益。
根据本发明的脂质或脂肪酸的制造方法，可高效生产脂肪酸。且通过将本发明的核苷酸用于酵母等的转化，可制造碳数为16的脂肪酸(例如棕榈酸、棕榈油酸等)的含量较高的脂质或脂肪酸。因此，对提高此种脂肪酸的生产能力有益。
通过使用本发明的脂质生产菌的评价、选择方法而评价、选择的脂质生产菌，可高效制造所需组成的油脂(例如碳数16的脂肪酸的含量较高的油脂)。
附图说明
图1是表示已知的FAS1蛋白质的氨基酸序列(来自Saeeharomyeescerevisiae、来自Candida albicans、来自Aspergillus nidulans)的比对图。
具体实施方式
本发明者首次成功进行了下述实施例中详细叙述的、来自脂质生产菌M.alpina 1S-4株的脂肪酸合成酶全长eDNA的克隆。且还获得了来自M.alpina1S-4株的脂肪酸合成酶的基因组DNA的碱基序列(序列号：2)、及该脂肪酸合成酶的推断氨基酸序列(序列号：3)。这些DNA及酶可通过下述的实施例中所述的方法、公知的基因工程的方法、公知的合成方法等获得。由于本发明提供的脂肪酸合成酶的多核苷酸用于脂质生产菌或酵母等的转化，所以对使用了此种转化脂质生产菌(例如M.alpina)或酵母的油脂的制造及食品、医药品(例如皮肤外用药)、工业原料(例如化妆品、肥皂)等的制造有益。
1.本发明的多核苷酸
因此，本发明的一种实施方式是提供以下的多核苷酸，其为：
(a)多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸；
(b)多核苷酸，其含有由序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸或其一部分；
(c)多核苷酸，其含有编码具有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸；
(d)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成的，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(e)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(f)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(g)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(h)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
本说明书中，“多核苷酸”是指DNA或RNA。
本说明书中，“由序列号：2的碱基序列组成的DNA的一部分”，是指包含例如序列号：2的碱基序列中相当于外显子的部分等。
本说明书中，“在严谨条件下杂交的多核苷酸”是指，例如与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列或序列号：2碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸、或由编码序列号：3氨基酸序列的碱基序列组成的多核苷酸的全部或一部分为探针，通过使用菌落杂交法、噬菌斑杂交法或Southern杂交法等得到的多核苷酸。杂交方法，例如可利用“Sambrook&Russell，MolecularCloning：A Laboratory Manual Vol.3，Cold Spring Harbor，Laboratory Press 2001”、“Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons 1987-1997”等中所述的方法。
本说明书中所述的“严谨条件”可为低严谨条件、中严谨条件、高严谨条件中的任一种。“低严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、32℃的条件。“中严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、42℃的条件。“高严谨条件”，例如，为5×SSC、5×Denhardt溶液、0.5％SDS、50％甲酰胺、50℃的条件。在上述条件中，越提高温度，越能期待高效地获得具有高同源性的DNA。影响杂交严谨性的因素可为温度、探针浓度、探针长度、离子强度、时间、盐浓度等多种因素，本领域技术人员通过适宜选择这些因素，可实现同样的严谨条件。
且杂交中使用市售的试剂盒时，例如，可使用Alkphos Direct LabellingReagents(Amersham Pharmacia公司制)。此时，根据试剂盒中附带的说明方案，与标记了的探针进行一夜孵育后，将膜在55℃的条件下，用含有0.1％(w/v)SDS的1次洗涤缓冲液洗涤，之后可检测杂交后的DNA。
除上述之外的可杂交的多核苷酸，通过FASTA、BLAST等同源性搜索软件，使用默认参数计算时，可为与序列号：1的DNA(或序列号：1的1位～12486位的碱基序列)、或序列号：2的DNA、或编码序列号：3的氨基酸序列的DNA有约60％以上、约70％以上、71％以上、72％以上、73％以上、74％以上、75％以上、76％以上、77％以上、78％以上、79％以上、80％以上、81％以上、82％以上、83％以上、84％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上或99.9％以上同源性的DNA。
且氨基酸序列、碱基序列的同源性，可使用根据Karlin及Altschul的BLAST算法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，872264-2268，1990；Proc Natl Acad Sci USA 90：5873，1993)决定。开发了基于BLAST算法、被称为BLASTN、BLASTX的程序(Altschul SF，et al：J.Mol.Biol.215：403，1990)。使用BLASTN分析碱基序列时，参数例如为score＝100、wordlength＝12。且使用BLASTX分析氨基酸序列时，参数例如为score＝50、wordlength＝3。使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序的默认参数。
上述本发明的多核苷酸，可通过公知的遗传工程学方法或公知的合成方法获得。
2.本发明的蛋白质及编码其蛋白质的多核苷酸
本发明的另一实施方式中，还提供由上述多核苷酸(a)～(h)中任一项编码的蛋白质。
本发明在另外其他的实施方式中，提供
(a)含有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质；
(b)含有序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质；
(c)具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质。
本发明还在其他实施方式中提供包含编码上述蛋白质的碱基序列的多核苷酸。
上述(b)或(c)中所述的蛋白质，代表性的是天然存在的序列号：3的蛋白质的突变体，例如可使用“Sambrook&Russell，Molecular Cloning：ALaboratory Manual Vol.3，Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001”、“Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons 1987-1997”、“Nuc.Acids.Res.，10，6487(1982)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，79，6409(1982)”、“Gene，34，315(1985)”、“Nuc.Acids.Res.，13，4431(1985)”、“Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，488(1985)”等中所述的定点诱变法人为获得。
本说明书中，“由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质”可为由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加例如1～500个、1～100个、1～90个、1～80个、1～70个、1～60个、1～50个、1～40个、1～39个、1～38个、1～37个、1～36个、1～35个、1～34个、1～33个、1～32个、1～31个、1～30个、1～29个、1～28个、1～27个、1～26个、1～25个、1～24个、1～23个、1～22个、1～21个、1～20个、1～19个、1～18个、1～17个、1～16个、1～15个、1～14个、1～13个、1～12个、1～11个、1～10个、1～9个、1～8个、1～7个、1～6个(1～数个)、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个、或1个氨基酸残基的氨基酸序列组成的，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质。上述氨基酸残基的缺失、取代、插入及/或添加的数量，一般优选较小的数量。此种蛋白质可例举为具有与序列号：3的氨基酸序列有约60％以上、约70％以上、71％以上、72％以上、73％以上、74％以上、75％以上、76％以上、77％以上、78％以上、79％以上、80％以上、81％以上、82％以上、83％以上、84％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.1％以上、99.2％以上、99.3％以上、99.4％以上、99.5％以上、99.6％以上、99.7％以上、99.8％以上、或99.9％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质。上述同源性的数值一般越大越好。且脂肪酸合成酶活性，例如可根据James K.Stoops et.A1.，J.B.C.，253，4464-4475，(1978)中所述的方法测定。
本发明的蛋白质氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个以上的氨基酸残基，是指在同一序列中任意的、且1个或多个氨基酸序列的位置上缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸残基之意，缺失、取代、插入及添加中的两种以上的变化也可同时发生。
以下，举例表示可相互取代的氨基酸残基。同一组中包括的氨基酸残基可相互取代。A组：亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、缬氨酸、正缬氨酸、丙氨酸、2-氨基丁酸、蛋氨酸、o-甲基丝氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、环己基丙氨酸；B组：天冬氨酸、谷氨酸、异天冬氨酸、异谷氨酸、2-氨基己二酸、2-氨基辛二酸；C组：天冬酰胺、谷氨酰胺；D组：赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、2，4-二氨基丁酸、2，3-二氨基丙酸；E组：脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸；F组：丝氨酸、苏氨酸、高丝氨酸；G组：苯丙氨酸、酪氨酸。
本发明的蛋白质可通过Fmoc法(fluorenylmethoxycarbonyl)、tBoc法(t-ButylOxy Carbonyl)等的化学合成法制造。也可利用Advanced Chem Tech公司(アドバンスドケムテツク社)制、珀金埃尔默(Perkin Elmer)公司(パ一キンエルマ一社)制、Pharmacia公司(フアルマシア社)制、Protein TechnologyInstruments公司(プロテインテクノロジ一インストウルメント社)制、Synthecell-Vega公司(シンセセル一ベガ社)制、PerSeptive公司(パ一セペテイブ社)制、岛津制作所公司(島津製作所社)制等的肽合成仪进行化学合成。
3.本发明的载体及导入该载体的转化体
本发明还在其他实施方式中提供含有本发明的多核苷酸的表达载体。本发明的表达载体含有以下任一项的多核苷酸：
(a)多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸；
(b)多核苷酸，其含有由序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸或其一部分。
(c)多核苷酸，其含有编码具有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸；
(d)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成的，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(e)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(f)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(g)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(h)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
本发明的载体通常如下构成，其含有(i)在宿主细胞内可转录的启动子；(ii)与该启动子结合的、上述(a)～(h)中任一项所述的多核苷酸；以及(iii)与RNA分子的转录终止及多聚腺苷酸化有关的、在宿主细胞内起作用的信号作为构成因子的表达盒。如此构建的载体导入宿主细胞。本发明中所使用的适当的宿主细胞可例举为脂质生产菌、酵母等。
脂质生产菌例如可使用MYCOTAXON，Vol.XLIV，No.2，pp.257-265(1992)中所述的菌株，具体地说，可例举为属于被孢霉属(Mortierella)的微生物，例如长孢被孢霉(Mortierella elongata)IFO8570、Mortierella exiguaIFO8571、Mortierella hygrophila IFO5941、高山被孢霉(Mortierella alpina)IFO8568、ATCC16266、ATCC32221、ATCC42430、CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66、CBS527.72、CBS528.72、CBS529.72、CBS608.70、CBS754.68等的被孢霉亚属(subgenus Mortierella)的微生物，或深黄被孢霉(Mortierellaisabellina)CBS194.28、IFO6336、IFO7824、IFO7873、IFO7874、IFO8286、IFO8308、IFO7884、Mortierella nana IFO8190、拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)IFO5426、IFO8186、CBS112.08、CBS212.72、IFO7825、IFO8184、IFO8185、IFO8287、葡酒色被孢霉(Mortierella vinacea)CBS236.82等的属于Micromucor亚属(subgenus Micromucor)的微生物等。尤其优选高山被孢霉(Mortierellaalpina)。
酵母可例举为Saccharomyces cerevisiaeNBRC1951、NBRC1952、NBRC1953、NBRC1954等。用本发明的载体转化的这些宿主细胞，特别是可高效产生含有16个碳原子的脂肪酸。
导入脂质生产菌时所用的载体，例如可利用pDura 5(Appl.Microbiol.Biotechnol.，65，419-425，(2004))，但不限于此。
导入酵母时使用的载体，可利用多拷贝型(YEp型)、单拷贝型(YCp型)、染色体整合型(YIp型)中的任一种。例如，YEp型载体中的YEp24(J.R.Broachet al.，Experimental Manipulation of Gene Expression，Academic Press，New York，83，1983)、YCp型载体中的YCp50(M.D.Rose et al.，gene，60，237，1987)、YIp型载体中的YIp5(K.Struhl et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，76，1035，1979)均已为人所知，且易获得。
用于调节宿主细胞中基因表达的启动子/终止子，如能在宿主细胞中起作用，可任意组合。例如在脂质生产菌利用时，可利用histone H4.1基因的启动子、甘油醛3-磷酸脱氢酶基因的启动子等。
转化时使用的选择性标记，可利用营养缺陷型标记(ura5、niaD)、抗药性标记(hygromycine、zeocin)、氨基糖苷类抗生素(Geneticin)抗性基因G418r、铜抗性基因(CUP1)(Marin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81，337 1984)、浅蓝菌素抗性基因(fas2m，PDR4)(分别为猪腰淳嗣等，生化学，64，660，1992；和Hussain et al.，gene，101，149，1991)等。
宿主细胞的转化方法可利用一般可使用的公知的方法。例如，为脂质生产菌时，可使用电穿孔法(Mackenxie D.A.et al.Appl.Environ.Microbiol.，66，4655-4661，2000)、颗粒轰击法(日本特开2005-287403《脂质生产菌的育种方法》(日文原文：脂質生産菌の育種方法)中所述的方法)。为酵母时，可使用电穿孔法、原生质球法(Spheroplast法)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75p1929(1978))、醋酸锂法(J.Bacteriology，153，p163(1983))、Proc.Natl.Acad.Sci.USA，75 p1929(1978)、Methods in yeast genetics，2000 Edition：A Cold SpringHarbor Laboratory Course Manual等中所述的方法实施，但不限于此。
更具体地说，为脂质生产菌时，在Czapek-Dox培养基接种宿主，在28℃培养2星期，形成孢子。之后回收孢子，根据颗粒轰击法(particle delivery method)(日本特开2005-287403《脂质生产菌的育种方法》(日文原文：脂質生産菌の育種方法)中所述的方法)等导入基因。之后，移植到含有作为选择性标记使用的抗生素等的标准琼脂培养基上，或使用营养缺陷型标记时，移植到以缺少营养素作为标记的琼脂培养基上，以获得转化体。为酵母时，将宿主用标准营养培养基(例如YEPD培养基“Genetic Engineering.Vol.1，Plenum Press，NewYork，117(1979)”等)培养至OD600nm的值为1～6。将此培养细胞离心分离后收集、洗涤，用浓度约为1～2M的碱金属离子，优选锂离子进行预处理。将此细胞在约30℃条件，静置约60分钟后，与导入的DNA(约1～20μg)同时在约30℃条件，静置约60分钟。加入聚乙二醇，优选加入约4,000道尔顿的聚乙二醇，使最终浓度约为20％～50％。在约30℃，静置约30分钟后，将此细胞在约42℃条件，加热处理约5分钟。优选将此细胞悬浮液用标准营养培养基洗涤后，放入所定量的新鲜标准营养培养基中，约30℃，静置约60分钟。之后，移植到含有作为选择性标记使用的抗生素等的标准琼脂培养基中，或使用营养缺陷型标记时，移植到缺乏营养素作为标记的琼脂培养基，获得转化体。其他常规克隆技术，可参照“Sambrook&Russell，Molecular Cloning：A LaboratoryManual Vol.3，Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001”、“Methods in YeastGenetics、A laboratory manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold SpringHarbor，NY)”等。
4.本发明的脂质或脂肪酸的制造方法
本发明在其他的实施方式中，还提供使用上述的转化脂质生产菌或酵母制造脂质或脂肪酸的方法。
本说明书中，“脂质”是指含有脂肪酸和醇进行酯键结合的化合物(例如甘油酯)或其类似物(例如胆固醇酯)等的单纯脂质、在单纯脂质的一部分上再结合磷酸、氨基酸、糖等的复合脂质、及脂质的水解物在水中不溶解的衍生脂质。
本说明书中，“油脂”是指甘油和脂肪酸的酯(甘油酯)。
本说明书中，“脂肪酸”是指用通式RCOOH(R是烷基)表示的脂肪族一元羧酸(具有1个羧基，碳原子链状连接的羧酸)。脂肪酸中，包含碳氢化合物链中没有双键的饱和脂肪酸和含有双键的不饱和脂肪酸。
本发明的脂质或脂肪酸，可通过本发明转化的菌体中如下提取。生物(例如脂质生产菌或酵母)的转化株，可在培养结束后，用离心分离法、过滤等的通常方法获得培养菌体。将菌体充分清洗，最好干燥。干燥可使用冷冻干燥、风干等进行。干燥菌体，根据需要通过球磨机、超声波等破碎后，优选在氮气流下用有机溶剂提取处理。有机溶剂可使用醚、己烷、甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、石油醚等，或使用甲醇及石油醚的交互提取或氯仿-甲醇-水的单相系溶剂提取也可收到良好的效果。通过在减压下从提取物中馏去有机溶剂，可获得含有脂肪酸的脂质。
从含有上述脂肪酸的脂质(以混合脂肪酸或混合脂肪酸酯的状态)中，通过通常方法(例如尿素添加法、冷却分离法、柱色谱法等)进行浓缩和分离而分离出脂肪酸。
根据本发明的脂质或脂肪酸的制造方法，通过增加菌体的脂肪酸含量，可高效生产脂肪酸。将酵母作为宿主使用时，因可得到碳数为16的饱和或不饱和脂肪酸(即棕榈酸或棕榈油酸)的含量较高的脂质或脂肪酸，所以对需大量及/或高效生产此种脂肪酸特别有益。
如此得到的脂质或脂肪酸，根据通常方法，例如可用于含有油脂的食品、医药品(例如皮肤外用药)、工业原料(化妆品、肥皂等的原料)的制造等的用途。
例如，棕榈油酸是在人的皮脂中存在的约10％以上的脂肪酸，对皮脂的再生起很大的作用，为防止皮肤老化，可将其利用在皮肤化妆品或皮肤外用药等中。例如皮肤有湿疹等疾病时，不论年龄，通过补充棕榈油酸均可有助于皮肤组织的再生。因此，通过本发明的脂质或脂肪酸的制造方法获得的脂质或脂肪酸，例如可有效地用于为达到防止皮肤老化、促进皮肤组织再生等目的而进行的化妆品、医药品(皮肤外用药等)等的制造中。
因此，本发明还在其他的实施方式中提供使用本发明的转化脂质生产菌或转化酵母的食品、化妆品、医药品、肥皂等的制造方法。此方法包括使用本发明的转化脂质生产菌或转化酵母生成脂质或脂肪酸的工序。含有所生成的脂质或脂肪酸的食品、化妆品、药品、肥皂等的制备是根据常规方法制造的。如此，通过本发明的制造方法制造的食品、化妆品、药品、肥皂等，含有使用本发明的转化脂质生产菌或转化酵母而生成的脂质或脂肪酸。本发明还提供根据上述方法所制造的食品、化妆品、药品、肥皂等。
本发明的化妆品(组合物)或药品(组合物)的剂型无特别限制，可为溶液状、浆状、凝胶状、固体状、粉末状等的任意剂型。且本发明的化妆品组合物或药品组合物，除可用于油剂、化妆水、霜剂、乳液、凝胶、香波、染发液、护发素、指甲油、粉底霜、口红、面用粉、面膜、软膏、香水、爽身粉、古龙水、牙膏、肥皂、气雾剂、洁面膏等的化妆品或皮肤外用药以外，还可用于防止皮肤老化的改善剂、防止皮肤炎症的改善剂、浴用剂、生发精、皮肤美容液、防晒剂以及用于受伤皮肤、皲裂皮肤粗糙干燥皮肤的防止改善剂等。
本发明的化妆品组合物，根据需要可与其他的油脂、及/或色素、香料、防腐剂、表面活性剂、颜料、抗氧化剂等适当配合。其配比可根据目的由本领域技术人员适当决定(例如在组合物，可含有油脂1～99.99重量％，优选为5～99.99重量％，更优选为10～99.95重量％)。且本发明的药品组合物(例如皮肤外用药)根据需要可含有其他的药品活性成分(例如消炎成分)或辅助成分(例如润滑成分、载体成分)。例如化妆品或皮肤外用药中的其他常用成分可为粉刺用药剂、头屑和瘙痒防止剂、止汗防臭剂、烫伤用药剂、抗螨虫和虱子剂、角质软化剂、干皮症用药剂、抗病毒剂、经皮吸收促进剂等。
本发明的食品，例如可为营养辅助食品、健康食品、功能性食品、儿童食品、婴儿配方乳、早产儿配方乳、老人食品等。本说明书中，食品是固体、流体及液体、及其混合物，是可摄食的食物的总称。
营养辅助食品是指特定的营养成分被强化了的食品。健康食品是指健康的或对健康有益的食品，包含营养辅助食品、天然食品、减肥食品等。功能性食品是指用于补充实现人体调节功能的营养成分的食品，与特定保健用食品同义。幼儿用食品是指提供给到约6岁的儿童的食品。老人食品是指与无处理食品相比，被处理成易消化及吸收的食品。婴儿用配方乳是指提供给到约1岁的婴儿的配方乳。早产儿用配方乳是指提供给早产儿生后到约6个月的配方乳。
这些食品的形式可为肉、鱼、坚果等的天然食品(用油脂处理后的食品)、中华菜肴、面条、汤等的配制时加入油脂的食品、天麸罗、油炸食品、油炸豆腐、炒饭、炸面圈、江米条等的作为油脂使用热媒介的食品、黄油、人造黄油、沙拉酱、调味酱、巧克力、即食面、奶糖、饼干、曲奇、蛋糕、冰淇淋等的油脂食品或加工时需加入油脂的加工食品、日式年糕片、硬饼干、豆沙面包等加工完成时需喷或涂油脂的食品。但是，含有油脂的食品并非限定于此，例如，面包、面类、米饭、点心类(糖果、口香糖、橡皮糖、压片糖、日式点心)、豆腐及其加工品等的农产食品、清酒、药酒、甜料酒、食醋、酱油、酱等的发酵食品、酸奶、火腿、腊肉、香肠等的畜产食品、鱼糕、炸鱼糕、鱼肉山芋饼等的水产食品、果汁饮料、清凉饮料、运动饮料、酒精饮料、茶等。
本发明的食品可为胶囊等药物制剂的形态、或可为本发明的油脂与蛋白质、糖类、脂肪、微量元素、维生素类、乳化剂、香料等配合的流食、半消化营养食品及成份营养食品、能量饮料、经肠营养剂等的加工形态。
5.本发明的被检脂质生产菌脂肪酸产生能力的评价方法及脂质生产菌的选 择方法
本发明在其他实施方式中，提供以下方法，其为(i)使用根据具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因的碱基序列设计的引物或探针，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法，(ii)通过培养被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因的表达量，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法，及(iii)培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因在各脂质生产菌中的表达量，选择该基因的表达高于标准脂质生产菌的被检脂质生产菌的脂质生产菌的选择方法。也可使用序列号：2的碱基序列代替序列号：1的1位～12486位的碱基序列。
此种评价方法的一般的手法为公知，例如，如WO01/040514号公报、日本特开平8-205900号公报等中所记载。以下，就此评价方法进行简单的说明。
首先，制备被检脂质生产菌的基因组。制备方法可使用DNeasy plant kit(QIAGEN公司)等市售的试剂盒等、以及公知的任何方法。以所得到的基因组为对象，使用根据具有序列号：1的1位～12486位或序列号：2的脂肪酸合成酶基因的碱基序列(优选序列号：1的1位～12486位的碱基序列)设计的引物或探针，检验被检脂质生产菌的基因组中是否存在该基因或该基因的特异性序列。引物或探针的设计可使用公知的方法进行。
基因或特异性序列的检测可使用公知的手法进行。例如，将含有具有特异性序列的一部分或全部的多核苷酸或其碱基序列的互补碱基序列的多核苷酸作为一个引物使用，另一个引物使用含有具有此序列的上游或下游序列的一部分或全部的多核苷酸或其碱基序列的互补碱基序列的多核苷酸，通过PCR法扩增脂质生产菌的核酸，并测定扩增物的有无、扩增物分子量的大小等。用于引物的多核苷酸的碱基数通常为10bp以上，优选为15～25bp。且夹在两引物间的碱基数，通常为300～2000bp较适当。
PCR法的反应条件无特别限定，例如，可使用变性温度：90～98℃、退火温度：40～60℃、延伸温度：60～75℃、循环数：10次以上等的条件。所得到的反应生成物可使用琼脂糖凝胶等的电泳法等分离测定扩增产物的分子量。根据此方法，通过扩增产物的分子量是否含有特异部分的DNA分子的大小，来预测、评价其脂质生产菌的脂肪酸生成能力。且通过分析扩增物的碱基序列，可进一步更正确地预测、评价上述性能。
本发明中，可通过培养被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因的表达量，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力。此时，可通过培养被检脂质生产菌，对序列号：1的1位～12486位的脂肪酸合成酶基因的产物mRNA或蛋白质定量来进行。mRNA或蛋白质的定量，可使用公知的手法。mRNA的定量例如可通过Northern杂交法、定量RT-PCR等，蛋白质的定量例如可通过Western印迹法进行(Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley&Sons 1994-2003)。
而且，可通过培养被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因的表达量，选择基因表达量与目标脂肪酸生成能力相应的被检脂质生产菌，选择适合的脂质生产菌。也可培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，测定各脂质生产菌中前述基因的表达量，比较标准脂质生产菌和被检脂质生产菌的前述基因的表达量，以选择所需的脂质生产菌。具体地说，例如，可通过培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因在各脂质生产菌中的表达量，选择该基因的表达高于标准脂质生产菌的被检脂质生产菌，来选择适合的脂质生产菌。
或者可通过培养被检脂质生产菌，选择脂肪酸生成能力高或低、或序列号：1的1位～12486位的脂肪酸合成酶活性高或低的脂质生产菌，以选择所需的被检脂质生产菌。此时，被检脂质生产菌或标准脂质生产菌，例如可使用上述导入了本发明载体的脂质生产菌、抑制了上述本发明的多核苷酸(DNA)表达的脂质生产菌、实施了突变处理的脂质生产菌、自发突变的脂质生产菌等。脂肪酸生成能力，可使用对菌体内脂肪酸定量的方法，脂肪酸合成酶活性，可通过James K.Stoops et.Al.，J.B.C.，253，4464-4475，(1978)中所述的方法测定。
如此，因通过本发明可评价脂质生产菌(例如M.alpina)的脂肪酸生成能力，选择所需的脂质生产菌(例如脂肪酸生产能力强的脂质生产菌或菌体中脂肪酸含量多的脂质生产菌)，所以可高效制造所需组成的油脂。
还可以该基因的表达量为指标，用于高效进行脂肪酸生产的培养条件的探讨、培养管理等中。
实施例
以下，使用实施例更具体地说明本发明，但本发明的范围不限于以下实施例。
EST分析
将M.alpina 1S-4株接种于100mL的培养基(1.8％葡萄糖、1％酵母浸膏、pH6.0)，28℃下预培养3日。10L培养槽(Able Co.，东京)中，加入5L的培养基(1.8％葡萄糖、1％大豆粉、0.1％橄榄油、0.01％增稠剂(ADEKANOL)、0.3％KH2PO4、0.1％Na2SO4、0.05％CaCl2·2H2O、0.05％MgCl2·6H2O、pH6.0)，将预培养物全量接种，300rpm、1vvm、26℃的条件下通气搅拌培养8日。在培养的第1、2、及3日时，分别添加相当于2％、2％及1.5％的葡萄糖。回收培养第1、2、3、6、及8日的各阶段的菌体，用盐酸胍/CsCl法制备总RNA。使用Oligotex-dT30<Super>mRNA Purification Kit(TAKARA BIO)，进行总RNA向poly(A)+RNA的纯化。使用ZAP-cDNA Gigapack III GoldCloning Kit(STRATAGENE)制备各阶段的cDNA文库，从cDNA的5’端进行序列的一次分析(8000克隆×5阶段)。
FAS同源物的检索
从所得到的碱基序列中，通过BLAST检索已知脂肪酸合成酶基因的同源基因。其结果，找到与来自Schizosaccharomyces pombe的脂肪酸合成酶α亚基(GB登记号是No.BAB62032，基因是FAS2)在一部分上显示很高同源性的两段碱基序列。这些序列具有保守部分，认为来自同1个基因。装配的结果所得到的序列相当于序列号：1(cDNA)的碱基编号12262-12920。另外，未能找到FAS1的同源物。
FAS1同源物部分序列的获得
根据上述分析，因未能找到FAS1同源物，所以，进行了已知FAS1蛋白质氨基酸序列(来自Saccharomyces cerevisiae：GB No.P07149、来自Candidaalbicans：GB No.P34731、来自Aspergillus nidulans：GB No.AAB41494)的比对(图1)，以其保守区序列(1)及(2)：
序列(1)：QGSQEQGMGM(序列号：4)
序列(2)：ATQFRQPALT(序列号：5)
为基础，设计以下简并引物：
F1h-f：CARGGNWSNCARGARCARGGNATGGGNATG(序列号：6)
F1h-r：GTNARNGCNGGYTGNGTRAAYTGNGTNGC(序列号：7)。
M.alpina 1S-4的cDNA是根据由上述EST分析得到的总RNA，并使用用于RT-PCR的第一链合成试剂盒(invitrogen)的6碱基随机引物而合成的。以M.alpina 1S-4的cDNA为模板，使用ExTaq(TAKARA BIO)，进行94℃1分钟、50℃1分钟、72℃1分钟为1循环的30循环的PCR反应，获得约300bp的DNA片段。将所得到的DNA片段用TA克隆试剂盒(invitrogen)进行TA克隆，所得到的质粒作为pCR-MaFAS1-1。确定碱基序列。BLAST的结果显示了与脂肪酸合成酶β亚基的一部分具有高度的同源性。
cDNA文库的筛选
将FAS1同源物及FAS2同源物从cDNA文库中如下筛选。筛选使用DIG标记系统(Roche)。以质粒pCR-MaFAS1-1为模板，使用引物F1-1f：5’-GCTCTGTATGACTCTTCCCCC-3’(序列号：8)和引物F1-1r：5’-GCCAAAAGACCGTTGGGTGAC-3’(序列号：9)，通过PCR，制备DIG标记的FAS1同源物用探针。
另外，为制备FAS2同源物用的探针，以M.alpina 1S-4株的cDNA为模板，使用引物F2-1f：5’-GGTGCAGGAGCGGGACTGAGTG-3’(序列号：10)和F2-1r：5’-CGCATTTGCAACCGCAACCGCG-3’(序列号：11)，通过ExTaq(TAKARA BIO)，进行94℃1分钟、55℃1分钟、72℃1分钟为1循环的30循环的反应，将所得到的约170bp的DNA片段通过TOPO-TA克隆试剂盒(invitrogen)进行TA克隆，将所得到的质粒作为pCR-MaFAS2-1。以质粒pCR-MaFAS2-1为模板，使用引物F2-1f和引物F2-1r，通过PCR，制备DIG标记的探针。
使用这些探针，从cDNA文库中筛选。在FAS1同源物用探针中，未能获得阳性克隆。
另外，使用FAS2同源物用探针时，可获得一些阳性克隆，最长的克隆包含相当于序列号：1(cDNA)的7861-12920的序列(5060bp)。将此克隆作为质粒pBSMAFAS2-1。但是，与已知的FAS2基因比较，认为其不包含全长基因。
基因组文库的制备
将M.alpina 1S-4株接种于100mL的液体培养基(葡萄糖1％、酵母浸膏0.5％、pH6.0)中，28℃下振荡培养4日。通过过滤器过滤集菌，用CTAB法提取基因组DNA。
将所得到的基因组DNA约200μg用限制性内切酶Sau3AI部分分解，使切割的DNA的分布集中在20kb左右。将所得到的DNA片段进行10％-40％的蔗糖密度梯度离心(SW28转子(Beckman)、25,000rpm、10℃、24小时)，使用AUTOMATIC LIQUID CHARGER(ADVANTEC公司)和MICRO TUBEPUMP(EYELA公司)，按每1mL分离。精制分布集中在20kbp附近的馏分。将如此得到的基因组DNA片段使用λBlueSTAR/BamHI载体试剂盒(NOVAGEN公司)，制备基因组文库。
从基因组文库的筛选
从基因组文库中，将FAS1同源物及FAS2同源物进行与实施例(从cDNA文库中的筛选)同样的筛选。其结果，得到了FAS1同源物用探针和FAS2同源物用探针的两者均显示阳性的克隆。确定了该克隆插入片段的碱基序列的一部分(序列号：2(基因组))15539bp)。
通过比较已知的FAS1蛋白质及FAS2蛋白质的氨基酸序列，推测出序列号：2(基因组)的1062-1064(ATG)为起始密码子。且推测出FAS1同源物和FAS2同源物由1条多肽编码。
全长cDNA的克隆化
首先，以M.alpina 1S-4的cDNA为模板，使用引物F1-2f：ATGACTACCGCACAGTCCAACTTGACC(序列号：12)和引物F1-1r，通过LATaq(TAKARA BIO)，进行98℃10秒、68℃15分钟为1循环的30循环的PCR反应。其结果，
将所得到的约5.4kb的DNA片段用TOPO-TA克隆试剂盒(invitrogen)克隆，作为质粒pCR-MAFAS-1。确认插入片段的碱基序列时，得知其相当于序列号：1(cDNA)的1-5435。将其用限制性内切酶EcoRI酶切后得到的5.4kb的DNA片段与载体pBluescriptII SK+的EcoRI位点连接。选择序列号：1(cDNA)的碱基号1位于载体pBluescriptII SK+的多克隆位点的SacI端的载体，作为质粒pBS-MAFAS-1。
其次，将质粒pBS-MAFAS2-1用限制性内切酶ApaI和EcoRV酶切后所得到的约2kb的DNA片段连接于载体pBluescriptII SK+的ApaI、EcoRV位点。将所得到的质粒作为pBS-FAS-2。之后，以M.alpina 1S-4的cDNA为模板，使用引物F1-3f：TGTCTTGAAGAGCAAGGAGTGG(序列号：13)和引物F2-2r：GCGTAGTAGTCGCCGTGCTCAGCCATC(序列号：14)，通过Pfu TurboDNA Polymerase(STRATAGENE)，进行92℃2分钟后，92℃10秒、55℃30秒、68℃8分钟为1循环的10循环，然后再进行92℃10秒、55℃30秒、68℃8分钟+10秒为1循环的20循环的反应。其结果，将得到的约3.6kb的DNA片段使用Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit(Invitrogen)，克隆到载体pCR4 Blunt-TOPO载体中，作为质粒pCR-MAFAS-5。使质粒pCR-MAFAS-5用限制性内切酶EcoRV及SpeI酶切后所得到的约3.1kb的DNA片段与用限制性内切酶EcoRV及SpeI酶切质粒pBS-MAFAS-2后得到的4.9kb的DNA片段连接，作为质粒pBS-MAFAS-3。
进一步将pBS-MAFAS2-1用限制性内切酶EcoRV酶切后得到的2.6kb的DNA片段与用限制性内切酶EcoRV酶切质粒pBS-MAFAS-3后的DNA片段连接，确认插入的DNA片段为正方向，获得质粒pBS-MaFAS。
质粒pBS-MaFAS包含具有序列号：1中所示的碱基序列的DNA，并认为包含来自M.alpina 1S-4的FAS同源物的cDNA的全长。CDS是1-12489位的碱基序列，ORF是序列号：1的1位-12486位的碱基序列。推断的氨基酸序列如序列号：3(protein)所示。
此氨基酸序列与已知的脂肪酸合成酶基因比较时，结果显示其和来自已知菌类的脂肪酸合成酶的β和α亚基一样，具有头-尾连接的结构。但是与来自已知具有同样结构的细菌的类型I脂肪酸合成酶的同源性低。将来自菌类的β亚基和α亚基相连的氨基酸序列和该蛋白质的氨基酸序列进行比较时，它们具有50％左右的同一性。该氨基酸序列具有相当于3-氧酰基-[酰基-载体蛋白](3-oxoacyl-[acyl-carrier protein])的保守序列(COG4982)的一部分基序，该基序由165氨基酸组成，且该基序重复2次。
与在先得到的基因组序列比较时，本基因具有7个内含子。序列号：2中，外显子为8个，分别是1062位-1304位、2140位-2679位、2778位-4724位、4823位-7027位、7115位-7243位、7339位-7497位、7582位-10668位、和10772位-14947位。内含子为7个，分别是1305位-2139位、2680位-2777位、4725位-4822位、7028位-7114位、7244位-7338位、7498位-7581位、和10669位-10771位。
酵母Sacchoromyces cerevisiae的表达载体的构建
将质粒pBS-MaFAS用限制性内切酶ApaI酶切后，使用DNA Blunting Kit(TAKARA BIO)将末端平滑化。之后，将其用限制性内切酶EcoRI酶切，获得约13kb的DNA片段。将此DNA片段用限制性内切酶BamHI酶切后平滑化，再与用限制性内切酶EcoRI酶切的载体pYE22m(Biosci.Biotech.Biochem.，59，1221-1228，1995)连接，构建质粒pYE-MaFAS。
MaFAS高表达酵母的脂肪酸分析
用质粒pYE-MaFAS转化酵母S.cerevisiae EH1315株(Appl.Microbiol.Biotechnol.，30，515-520，1989)得到转化株后，将任意的两株分别作为MaFAS-1株、MaFAS-2株。另外，用载体pYE22m转化酵母S.cerevisiae EH1315株得到转化株后，将其中的任意1株作为对照株(C-1株)。将上述株在SC-Trp液体培养基10mL或YPD液体培养基10mL中分别接种1白金耳，30℃下培养2日。通过离心分离将菌体集菌，冷冻干燥。通过盐酸甲醇法，将菌体的脂肪酸衍生成甲酯后，用己烷提取，去除己烷，通过气相色谱法分析。其结果如表1所示。
表1
用不同培养基培养时的酵母菌体的脂肪酸组成
培养基                 SC-Trp                 YPD
菌株     C-1     FAS-1     FAS-2     C-1     FAS-1     FAS-2
脂肪酸组成(％)
14∶0     nd     1.2     1.2     nd     nd     1.4
14∶1     nd     1.0     1.1     nd     nd     nd
16∶0     4.7     10.9     10.6     5.4     13.7     13.0
16∶1     38.3     52.2     53.0     34.0     59.8     57.0
18∶0     3.7     2.6     2.5     5.6     nd     2.9
18∶1     51.3     28.5     27.9     52.3     26.5     24.1
C-1株中，与碳数16的脂肪酸相比，碳数18的硬脂酸、油酸的比率高，而在MaFAS高表达的MaFAS-1株和MaFAS-2株中，碳数16的棕榈酸、棕榈油酸的比率高。
脂质生产菌高山被孢霉(Mortierella alpina)的表达载体的构建
将质粒pBlueHpt(日本特开2005-287403)用限制性内切酶Ncol和BamHI酶切后，通过将5’末端磷酸化的MCSl-F和MCSl-R退火插入，获得了质粒pBlueHptMCS。
MCS1-F：5′-catggatcctctagactgcaggcatgcaagcttctcga(序列号：15)
MCS1-R：5′-ctaggagatctgacgtccgtacgttcgaagagctctag(序列号：16)
将质粒p Dura5(Appl.Microbiol.Biotechnol.，65，419-425，(2004))用限制性内切酶BamHI酶切，将末端平滑化后进行自己结扎。之后，将得到的质粒用限制性内切酶Xbal酶切，将末端平滑化后进行自己结扎。进一步将得到的质粒用限制性内切酶HindIII酶切，将末端平滑化后进行自己结扎。将得到的质粒用EcoRI酶切，以将质粒pBlueHptMCS用EcoRI酶切所得到的约1.7kbp片段插入后，histonH4.1基因的启动子选择同样方向被插入的质粒，作为质粒载体pDura5MCS。
脂质生产菌高山被孢霉(Mortierella alpina)的表达载体的构建
将质粒pBS-MaFAS用限制性内切酶ApaI酶切后，使用DNA Blunting Kit(TAKARA BIO)将末端平滑化。之后，将其用限制性内切酶XbaI酶切，获得了约13kb的DNA片段。将此DNA片段用限制性内切酶HindIII酶切后平滑化，再与用限制性内切酶XbaI酶切的载体pDura 5MCS连接，构建质粒pDura5-MaFAS。
脂质生产菌M.alpina的转化
使用质粒pDura5-MaFAS，通过M.alpina，以根据专利文献(脂质生产菌的育种方法)的方法诱导的尿嘧啶缺陷型株Δura-3为宿主，用颗粒轰击法进行转化。选择转化株时，使用SC琼脂培养基(Yeast Nitrogen Base w/o AminoAcids and Ammonium Sulfate(Difco)0.5％、硫酸铵0.17％、葡萄糖2％、腺嘌呤0.002％、酪氨酸0.003％、蛋氨酸0.0001％、精氨酸0.0002％、组氨酸0.0002％、赖氨酸0.0004％、色氨酸0.0004％、苏氨酸0.0005％、异亮氨酸0.0006％、亮氨酸0.0006％、苯丙氨酸0.0006％、琼脂2％)。
将所得到的转化株中的两株作为FAS-3株、FAS-4株。另外，将导入pDura5后所得到的任意一株作为C-2株。将上述株接种于葡萄糖2％、酵母浸膏1％的液体培养基中，28℃振荡培养，培养的第3日，将20％葡萄糖溶液按培养液的1/20的量添加。第4日，回收菌体的一部分，冷冻干燥。将菌体的脂肪酸衍生成甲酯后，用己烷提取，去除己烷后，通过气相色谱法分析，对菌体中的脂肪酸量定量。其结果如表2所示。
表2
单位菌体中的脂肪酸含量(％)
株 FAS-3  FAS-4  C-2
30.6  30.1  28.1
与C-2株相比，FAS-3株及FAS-4株中单位菌体的脂肪酸含量增加了。
本发明对提高脂肪酸的生产率、或制造所需脂肪酸及/或制造含有所需脂肪酸的食品、化妆品、皮肤外用药及/或肥皂等的工业原料有益。
序列表(SEQUENCE LISTING)
<110>三得利株式会社(suntory Limited)
<120>脂肪酸合成酶及编码该酶的多核苷酸及其应用
(A fatty acid synthase，a polynucleotide encoding thereof，and
        uses thereof)
<130>PCT07-0017
<150>JP2006-128779
<151>2005-05-08
<160>14
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>12926
<212>DNA
<213>高山被孢霉(Mortierella alpina)
<400>1
atgactaccg cacagtccaa cttgacccgt cctttggccc tcaagcaagg aacttctgag     60
gtctcgatcc tcgttccttc ggatgtctgg gtagcggctg aacaacttcg tgaggagttt    120
ctgatctcgg tcgaggctgc tcctgcagag gaggccgcag cgaccggaag tgctgacgat    180
caggccccgg agatggcttt ggtggcccgt tttctcaaat ttgctacgga caagagcgag    240
cagagcgatc cttcactgca gttcattcct gtgctgagaa ccgtcttcct gttctttgtc    300
accaaatacc ttaaaggaaa cgacatccac gcggtcactc gacttttagc aaaggatacc    360
cgggtggtga tcatcaatgc gttcttctcg gccttggtct tcctccgtgc tacggaggct    420
cttgcacccg aggactacac cccgccaacc tcggcactat ttgccgctgc tcaggaggga    480
aaggctaagc tgtttgccat ctttggcggt cagggcaata tcgaggagta ctttgacgag    540
ctggcagaca tctacacgac ctataccacg ttggtgcagg actacgtcga ggacatggct    600
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ttttacacct tccagtcacc caacggtctt ttggctgcca ctcagttcac acagcctgcc    5460
ttgaccctta tggagaaggc cgccttcgag gacatgcgct ccaagggttt gatccagggc    5520
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tctagcttct tgttgtccgg tgtcgctccc ttccgcacct atctcgccaa gaagatcaac    6120
cctacgttca ttaacgtgcc cctgttgact tccaagtaca ttcccaattt gactgctcag    6180
cccttcagca ttgagaagtc ctacattgag ggcgtctaca acctcacgtc gtctccccgt    6240
ctggccaagg tcctcaagaa ctggatcgac accaagctga ctgccaagca gcagcagcgt    6300
ctgggatata ctctcttggt cgagttgctc gcttaccagt tcgcttcgcc cgtccgttgg    6360
attgagaccc aggatagact cttcaaggag tacaacgtcg tccgcttgat tgaggttgga    6420
ccctcgccca cgctctgtgg tatggcccaa cgcacgctca agttcaagta cgaggcttat    6480
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cccgccccca aagccacccc agttgccgct gcagcccccg ctcccgtggc tgtcgccgct    6660
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atcgttgccc aaaaggtcaa gaagactctc gaagaggtcc ctctctcgaa ggccatcaag    6780
gatcttgtag gaggcaagtc gactcttcag aacgaaatct tgggtgatct tcagaaggag    6840
tttggtagca gcggattccc tgagaagggc gaggaggctc ctctggagga gcttgccaac    6900
gctcttcagg gcaacttcaa cggagctctt ggaaagcaga ccacttcgct catcgccaag    6960
atgattggat ccaagatgcc cggtggttat tcgctctcga ctgccaaggg atacctggcc    7020
aaggcccacg gcctgggtcc tgtccgtgcc gatgctgcgc tcttggtcgg tttgacgatg    7080
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aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa ctcgac                                       12926
<210>2
<211>15539
<211>DNA
<213>高山被孢霉(Mortierella alpina)
<400>2
tccagggttc cagggttcgg agaatataat aaatctttga aagagagaca gaggaggcag    60
aggcaattca tcttgggatc gactgggatg cgagagacag agggcgttgt ttatttaatg    120
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cgccaggacg acgcaagcat agatgcagct aatcgtgcag tgtgcagcga cagtgatggg    240
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tgagacgaag aagccgagag tgaaaatttt gttctatcgg aggaatgggg ggacggaggc    420
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agtgcgtcag agaaacagga aagaccagat gcgactcttt tttttttttg ttttttgttt    1500
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cttggatgct gtcttgccct tggtcaaggt cgagacttac gacaacggca aggtcaagat    5520
ggtggagacc tccatgctag agtcaagctt gcccaagaat gaggattggc tcgagtacct    5580
tgctggccag gacccctctt ggttccgcgc cctcttgact gcccccgccg tcattcaagg    5640
caagaagttc ttggataatc ctcttgcacg catcttccgt cctcgtgtct ctcaagccgt    5700
tcacttcgag tacgccgagg acaagttgca aaccattacc gtttacgatc gtcgctcctg    5760
gtctgcttcc agcaagtcga gcgagctctc tccctcgctt cgcgcccgtc tgcagcccaa    5820
cgagctcatt gaggtcgtgc tggtggagaa gaacggcgag cgtttgattc ctttccctct    5880
cctcttccac tacacccccg agaagggata tgcccctatc catgaggtca tggagggtcg    5940
caacgagaga atcaaggagt tctactacaa gctttggttc ccttcagagg aggatcaatt    6000
caacgcctgc ctggccactg atgccttcac cgaaaagttt atttgcaatg gtgagcaggt    6060
cagcacgcca gagatcaagg agttttgcca ggctgtcgga aaccaggccg agctctacgt    6120
tgagcgccgc cagaaagttg tctatgcgcc catggatttt gctattgtcg ttggctggaa    6180
gtctatcatc aaggccatct tccccaagtc gattgacggt gatctgttga agcttgtcca    6240
tctctcgaac ggcttccgta tgttagatgg cgccgagtcc ttgaagcaag gcgacattgt    6300
tgacactgtt gccgagatca atgccgttgt caacaacgat tccgggaagt tggttcaggt    6360
caagggcgtg gttctgcgtg agggcaagcg cgtcatggag gtgacctcgg agttcttgta    6420
ccgcggcacc tttgtggatt accagaacac attccaaaag acggttgaga cccccatgga    6480
ggttaagctg acgtccgcca aggatgtggc tgtcttgaag agcaaggagt ggatccagtg    6540
ggccgagggt gagcacaccg tcgggcctaa tgcgtccttg gtcttccgcc tgaacacgat    6600
tgttcgcttc aagaacaaga ccaccttctc gcatgttgag accactggta ccgtgtcgat    6660
gcagatttcc actaaggagc atgtcgagat tgccactgtt cactatagca acgacgagga    6720
gactcaggga aatcccgtcc tcgcctactt gaagcgctcg ggttctccta tcgagcaggc    6780
catccacttc gagaacggtg gatattctgt catgcccgag ggttccttca gctcggaggt    6840
catttctccc ttcagcaatg agccctatgc taaggtttcg ggtgacttta accctatcca    6900
cgttaaccct tactttgctg atctcgctga gctccctggc actattaccc atggcatgtg    6960
gactagtgcc tcgacccgca agtttgtgga gatctttgct gcagagaatc atcctcagcg    7020
tgtcactagg ttagttcgtt ttcttttccg cattgcttga gagtatgcac tctagtattc    7080
tttccggcgt agctaattct tgattcttct ctctagctac gaggtcaagt tcctttctat    7140
ggtgcttcct caggaccgtc tttcgaccaa gttatcgcac attggaatga tcaacggaaa    7200
gaagatcatc aaagtggaaa ctttcaacca gaacggcagc aaggtaaaac cagaaacgtc    7260
ttgttagcat ttcatgtgaa aaatcgcgta acctgttgga atcatttatt aacgttggca    7320
gcgattcatt tggcacaggt tgttgagggc actgctgaga ttgatcagcc cacgatcgcc    7380
tatgtgttca ctggacaggg atctcaggag cagggaatgg gaatggctct gtatgactct    7440
tcccccgtcg ccaaggacat ctggcagaga gccgaccgtc atttcttgga aaactatggt    7500
atgtaccttg ccagcttttc ttgttatgat attcgttctc tttcgttatg ctgtaactga    7560
tcgattttgt tccttttgac aggcttctcc attctggata ttgtccgcaa caatcctctg    7620
aagaagacga ttcactttgg tggtcccaag ggtaacgcca ttcgtcagaa ttacatgtcg    7680
atgcgctacg atcaagttga ccaggatggc tccatcaaat ctttgcctct gttccccggc    7740
atcaacgaga ccacgcactt ttacaccttc cagtcaccca acggtctttt ggctgccact    7800
cagttcacac agcctgcctt gacccttatg gagaaggccg ccttcgagga catgcgctcc    7860
aagggtttga tccagggcaa ctgtgccttt gccggtcact cgctcggaga gtactctgct    7920
cttgctgcca ttggtgaggt ccttcccatc gaatccttgg ttgatgtcgt cttctaccgt    7980
ggtatgacca tgcaggtcgc tgttccccgc gactctgtcg gccgctccaa ctatggaatg    8040
gtcgccatca acccatcgcg tgtctcgccc acattcaacg actctgctct ccgctatgtc    8100
gtggacgcaa tcgccagaca gtcgaacggt cttttggaaa ttgtcaatga gaacgttgag    8160
aactggcagt atgttgctgc tggtgagctt tctaacttgg acgctctctc gactgtcctg    8220
aactacctca aggtgcagaa gatcgatctt cagaagctga tggagaccat gcccttggaa    8280
gaggtcaaga agcacctgtc tcagatcatt gccggcgccc ttgagaaggt tgccgagaag    8340
gttgccaagg atggtcacat caagcctgag cgcggtgttg ctaccatccc cttggctgga    8400
atcgatgtcc ccttccactc tagcttcttg ttgtccggtg tcgctccctt ccgcacctat    8460
ctcgccaaga agatcaaccc tacgttcatt aacgtgcccc tgttgacttc caagtacatt    8520
cccaatttga ctgctcagcc cttcagcatt gagaagtcct acattgaggg cgtctacaac    8580
ctcacgtcgt ctccccgtct ggccaaggtc ctcaagaact ggatcgacac caagctgact    8640
gccaagcagc agcagcgtct gggatatact ctcttggtcg agttgctcgc ttaccagttc    8700
gcttcgcccg tccgttggat tgagacccag gatagactct tcaaggagta caacgtcgtc    8760
cgcttgattg aggttggacc ctcgcccacg ctctgtggta tggcccaacg cacgctcaag    8820
ttcaagtacg aggcttatga tgatgccttg accttccagc gttcgactct ttgcacgtcc    8880
aaggactcca aggagattta ttatgccatg gacaatgtcg agtcctcggc tcctgctccg    8940
gctgccagtg ctgctgctcc cgcccccaaa gccaccccag ttgccgctgc agcccccgct    9000
cccgtggctg tcgccgctgc aggacctgct gccgccgttt cagatgtccc catcaaggcc    9060
cttgagatct tgcatgtgat cgttgcccaa aaggtcaaga agactctcga agaggtccct    9120
ctctcgaagg ccatcaagga tcttgtagga ggcaagtcga ctcttcagaa cgaaatcttg    9180
ggtgatcttc agaaggagtt tggtagcagc ggattccctg agaagggcga ggaggctcct    9240
ctggaggagc ttgccaacgc tcttcagggc aacttcaacg gagctcttgg aaagcagacc    9300
acttcgctca tcgccaagat gattggatcc aagatgcccg gtggttattc gctctcgact    9360
gccaagggat acctggccaa ggcccacggc ctgggtcctg tccgtgccga tgctgcgctc    9420
ttggtcggtt tgacgatgga gcccgcagcc cgtctgggcg ccgttcctga ggccaatgct    9480
tggttggatt cggtcgctca ggcttacgcc cgccgtgctg gtatctcgct gtcggctggt  9540
gcccccgctg gtggtgccgc tcccgtcatg atggcggctg ctggccctgc tgctgctggt  9600
cctgcagctg ctgttgctga tgctcctatc aaggctattg acattcttca cgtcattgtt  9660
gcccaaaaga tcaagaagac tgtcgaggag gtcccactct cgaaggccat caaggatctt  9720
gttggtggca agtcgactct gcagaacgag atcttgggtg atcttcagaa ggagtttggc  9780
agcagtggct tccctgagaa gggcgaggag gctcctttgg aagatctcgg aaatgctctc  9840
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ggatccaaga tgccaggtgg atttacccag tcctcagcca aggcttacct cgcctcgtct  9960
tatggcttgg gtccactccg cgctgacggt gcgttgctct tgggtgtcac tatggagccc  10020
agcgcccgcc tcggatccga gggtgatgcc aaggcttggt tggacactgt cgcccaagct  10080
tacgctcgtc gtgccggtat ttccttggga ggcggcggcg gcggtgctgt cgctggtggt  10140
gccgttggtg gtgccatgat gaacagtgag gagttcaacc aattccaggc caagcagaac  10200
gcgatgatgt accagcacct cgagatctat gctcgttacc ttgagaagga tctccgtgct  10260
ggcgaaaagc agtacgagga ggagaagctg gcgaccctgc gcttgcaggc agatatcgac  10320
cagtggatgg ctgagcacgg cgactactac gccgagggca tcaagcctgc cttcagcgcc  10380
aagaaggccc gcaagtacga ctcacactgg aactgggtcc gtcaggatgc catgtcgctc  10440
ttgtacgaca tgatctttgg ccgactcacc gtcgttgacc gcgaggtcgt ggcccagtgc  10500
atccatgtca tgaaccgcgc taacccccag ttgcttgagt ttatgatcta ccacattgac  10560
aacactgctg ctgatcgcgg caagacctat gctttggcca aggagtttgg taacatgttg  10620
atcgagaact gtcgcgaggt tctggaagcc gcgcctgtct acaaggatgg tgagtctgct  10680
tttcttttca caccctctct cacatgtaac gcttaagatt atgatcagct agctaatgac  10740
atcctccttt tgtttgtttg tttttctaat agtcggtgtt cctaccggtc cccagacgac  10800
gatcgataac aagggcaata tcttgtacga ggaggttcag cgcgtgggtg tccgcaagct  10860
ggatcactat gtcaaggata tggtcgctgg tggcaagatg tccgagtaca gcaaccgcca  10920
gaaggtgcag aagaaccttg ctcagatcta caagatcatt aaggctcaga acacgatgaa  10980
gtcttcctcc aagttggcga tcaagtcact ctacggcgag gtcatccatg ccatgaacat  11040
gtccaacacc atcatccgtg aggagaagaa ccgccgtgcc agccgcgtcc gccgcgcctc  11100
ggccgttccc agcgccgacc gccctaagaa ggaggccaag aaggagacca ttcccttctt  11160
gcacctcaag aagaagaacc cccagtctga gagcggatgg gagttcagtc agcgtttgac  11220
aagcgtttac ttggatgtct tgaccaacat tgcgcgcgac ggtgttacat ttgagaaccg  11280
catggtcctg atgaccggtg ctggaaagga ctcgatcgga gcctcgatcc tcaagggtct  11340
cttgtccgga ggagccaagg ttgttgtcac gacctcgcgc ttcagccgtg atgtgaccga  11400
gtactaccaa tcgatctacc agcgccacgg atccaagaac tcatgcttgg ttgttgttcc  11460
cttcaacgga ggctccaagc aggatgtcga cgcacttgtc aactacattt acgataagga  11520
tctcaagaag ggtcttggct gggatctcga ctacatcatc cccttcgctg ccatctcggt  11580
ccagggcaag gagattgaca acatcgactc gcagtccgag ctggctcacc gtatcatgtt  11640
gaccaacgtt ttgcgtctgc tcggaaacgt taaggccaag aagatggagc acggctacga  11700
cactcgccct gctcaggtca tcctgccctt gtcgcccaac cacggaacct tcggagctga  11760
cggtctctat ggtgagtcta aggttgctct cgagaccttg ttcaaccgct ggagttccga  11820
gtcttggggc gcctatctga ccatcaccgg agccgttatt ggctggactc gcggtactgg  11880
attgatgagc ggtaacaaca ttgtggccga gggcctggag aagtacggtg tccgcacctt  11940
ctctggccag gagatggcat tcaacattct cggtctcatg catccctcga tcaccaacct  12000
ctgccaggtc gagcctgtct gggccgactt gaacggtggt cttcagtact tgcccaacct  12060
gaacgaaatc tcggccaact tgcgtgccga ataccgccag acggccgaga tccgcaaggc  12120
gatcgtcacc gagaacactc tggatttcaa ggagacccac ggtgctgagg ccgagcgtaa  12180
gcaccaaccc cacaaggtca cgcctcgtgc caacatgaaa ttccctttcc ctgagctgaa  12240
ggactacaag gacctgtcgc acgctcacaa gctccgcggc atgctcgatc ttgagaaggt  12300
tgtcgtcgtc actggtttct ctgaggtcgg accttggggt aactcgcgca ctcgctggga  12360
aatggaggct aatggccagt tctcactcga gggatgcatt gagatggcct ggatcatggg  12420
cttcatcaaa catcacaatg gtaacctcaa gtctggctcc ccttactctg gctgggtcga  12480
tgccaagact gaagagcccg tcaaggatcg cgatgtgaaa gccaagtacg agaagcagat  12540
cttggagcac actggtatcc gtctgattga gcccgagctc tttggaggtt atgatcccaa  12600
gcgtaaggga ctgcttcagg aggtcttgat cgaccatgat cttgaggcct ttgaggtctc  12660
gaaggaggag gcccagatgt tcaagcttga gcacggcgac aaggtcgaca tttacgagga  12720
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cctgaagttc gatcgtcttg ttgctggcca gatccccact ggatgggatg ctgcccgctt  12840
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tcacgtgtct gaggttggaa atacagctgg atccggtgtc ggaggcatgc tctcgcttcg  13020
cggcatgtac cgcggtcgcg tgatggatga tcctgtgcag aaggatatct tgcaggagtc  13080
cttcatcaac acgatgcctg cctgggtcaa catgctgctc ctgtcatcct ctggacctat  13140
caagacaccc gtcggagctt gtgccaccgc tgtcgagtct gtcgagattg gtgtggatac  13200
gatccagagc ggtaaggcaa agattgtgat tgtcggaggc tacgatgact tccaggagga  13260
aggttcgtac gagtttgcca acatgaaggc gaccagcaac accgaggaag agtttgcgca  13320
tggacgtacg cccaaggaga tgtcccgccc tgcaacctcg acccgctctg gattcatgga  13380
gtctcacgga gctggtattg agattttgat gcaggccaag cttgccgtgg agatgggtgt  13440
gcccatttac ggtatcgtcg gtctcaccaa cactgccacc gacaaggagg gtcgctctgt  13500
tccagctcct ggacagggtg tcctcaccac tgctcgtgag gctaagggca agatgccttc  13560
gcgccttctg gacatcaagt accgcaagcg ccagatcgat tcccgccgag ctcagattaa  13620
gcaatgggtc gagaacgagt atgctgagct ccgctacgag ctcgatgagc tcaaggccag  13680
caacagcctc accgtctcgg aagaagagta tcttgctgct gagactgagc gcattcagaa  13740
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ggaccctcag atcgctcctc tgcgtggtgc ccttgcctcc tttggcttga cgatcgatga  13860
cattggtgtt ggatccttcc acggtacctc caccaaggcc aacgacaaga acgaatccga  13920
agtcgtcaac aagcagctcg agcatttggg tcgcagcaag ggtaacgctt tgccctctat  13980
ctggcaaaag tacctcacgg gacatcccaa gggtgctgct gctgcctgga tgatgaacgg  14040
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cgacacaatg agacagtatg agcacgtctt gtacacctcg cggtcgattc agactgatgg  14160
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caagcagcag gcgcgccagg ccaagtcgta ccggtacttg catgactcta tgaccggcgg  14340
ccctgccctg gtccaggtca agaacgctcc cccatactcg cccgagctcg agtcccccgt  14400
gtacttgaac cccaaggccc gtgcgcagta caacaacgcg accaagtcct gggcgttcaa  14460
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ctatttcttt acttcttata ccttttcatg ggcccttgta tacaaacaac ttataaataa  15120
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gcttacgcaa caagtaccca gcgcgcctcc ttcaccttca cttacgagag caatatctct  15360
aaaaaaaaat aatgcttcta ttgtacttca aaatgcagtg cgatgattat gatgcttttg  15420
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cttctcgttc agccgtgcgt tggctcctga gcctcactgt ccagcgttcc tcgccgata   15539
<210>3
<211>4162
<212>PRT
<213>高山被孢霉(Mortierella alpirna)
<400>3
Met Thr Thr Ala Gln Ser Asn Leu Thr Arg Pro Leu Ala Leu Lys Gln
1                 5                      10                     15
Gly Thr Ser Glu Val Ser Ile Leu Val Pro Ser Asp Val Trp Val Ala
              20                      25                      30
Ala Glu Gln Leu Arg Glu Glu Phe Leu Ile Ser Val Glu Ala Ala Pro
         35                     40                      45
Ala Glu Glu Ala Ala Ala Thr Gly Ser Ala Asp Asp Gln Ala Pro Glu
    50                      55                      60
Met Ala Leu Val Ala Arg Phe Leu Lys Phe Ala Thr Asp Lys Ser Glu
65                    70                     75                    80
Gln Ser Asp Pro Ser Leu Gln Phe Ile Pro Val Leu Arg Thr Val Phe
               85                          90                      95
Leu Phe Phe Val Thr Lys Tyr Leu Lys Gly Asn Asp Ile His Ala Val
             100                    105                     110
Thr Arg Leu Leu Ala Lys Asp Thr Arg Val Val Ile Ile Asn Ala Phe
         115                    120                     125
Phe Ser Ala Leu Val Phe Leu Arg Ala Thr Glu Ala Leu Ala Pro Glu
    130                     135                   140
Asp Tyr Thr Pro Pro Thr Ser Ala Leu Phe Ala Ala Ala Gln Glu Gly
145                     150                    155                160
Lys Ala Lys Leu Phe Ala Ile Phe Gly Gly Gln Gly Asn Ile Glu Glu
                   165                     170                    175
Tyr Phe Asp Glu Leu Ala Asp Ile Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Leu Val
              180                    185                    190
Gln Asp Tyr Val Glu Asp Met Ala Ala Val Leu Arg Glu His Ala Arg
        195                     200                    205
Ser Asp Asp Ala Ser Val Phe His Ser Lys Gly Leu Asp Val Met Gly
     210                    215                   220
Trp Leu Arg Ser Pro Asp Ser Lys Pro Asp Val Ala Tyr Leu Val Ser
225                   230                     235                 240
Ala Pro Val Ser Leu Pro Leu Ile Gly Leu Val Gln Leu Met His Tyr
                  245                     250                    255
Tyr Val Met Leu Lys Val Leu Asp Gln Thr Pro Ala Gln Leu Arg Asp
             260                    265                    270
Val Ile Leu Gly Ser Thr Gly His Ser Gln Gly Ile Ile Ser Ser Val
          275                    280                        285
Val Ile Ser Ser Ser Ala Thr Phe Glu Glu Phe Phe Ala Asn Ser Arg
     290                      295                    300
Lys Ala Leu Gly Leu Leu Phe Trp Ile Gly Thr Arg Ser Gln Glu Val
305                   310                     315                 320
Tyr Pro Gln Thr Thr Leu Asn Pro Ala Ile Leu Gln Asp Ser Leu Ser
                   325                    330                    335
Asn Asn Glu Gly Asn Pro Thr Pro Met Leu Val Val Asn Ser Leu Arg
             340                    345                    350
Ala Ser Glu Val Gln Lys Tyr Val Glu Ala Thr Asn Arg His Leu Pro
         355                    360                     365
Glu Asp Arg Lys Ile Lys Ile Ala Leu Ile Asn Gly Pro Arg Ser Ser
    370                      375                     380
Ile Cys Thr Gly Pro Pro Gln Ser Leu Tyr Gly Leu Asn Leu Ala Leu
385                     390                     395                 400
Arg Lys Leu Lys Ala Pro Thr Gly Leu Glu Gln Gly Arg Val Pro Phe
                  405                    410                    415
Ser Gln Arg Lys Val Lys Phe Ser Ser Arg Phe Leu Pro Ile Thr Ala
              420                    425                     430
Pro Phe His Ser Ser Tyr Leu Asp Gly Val Ser Ala Leu Val Glu Ser
         435                     440                    445
Asp Ile Ala Arg Tyr Asp Leu Arg Phe Asp His Thr Gln Met Thr Ile
    450                     455                   460
Pro Val Phe Ser Thr Asp Ser Gly Lys Asp Ile Ala Gly Ser Pro Thr
465                    470                     475                 480
Ile Thr Thr Asp Leu Val Asn Gln Ile Cys Ser Leu Pro Val His Trp
                   485                     490                   495
Glu Lys Ala Thr Ala Met Ala Gly Leu Thr His Val Ile Asp Phe Gly
              500                   505                      510
Pro Gly Gly Ser Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Ala Arg Asn Lys Asp
         515                     520                    525
Gly Thr Gly Val Gln Val Met Leu Ala Gly Ala Ser Glu Gly Val Asn
    530                     535                    540
Arg Glu Leu Ser Tyr Lys Pro Asp Ile Phe Asp Ala Asn Pro Ala Ala
545                    550                    555                 560
Leu Arg Tyr Ala Pro Asn Trp Ala Asn Glu Phe Gln Pro Lys Leu Val
                  565                    570                    575
Arg Ser Val Asn Gly Glu Ile His Ile Asp Thr Arg Met Ser Arg Leu
             580                      585                    590
Leu Ser Lys Pro Pro Leu Met Val Ala Gly Met Thr Pro Ser Thr Val
         595                    600                     605
Asn Glu Gly Phe Val Ser Ala Val Met Asn Ala Gly Tyr His Val Glu
    610                    615                    620
Leu Ala Gly Gly Gly His Tyr Asn Glu Ala Ala Val Arg Ser Lys Val
625                    630                    635                 640
Lys Lys Ile Met Gln Leu Thr Thr Pro Gly Ala Gly Ile Thr Leu Asn
                  645                     650                     655
Thr Leu Phe Ile Asn Val Arg Gln Trp Gly Phe Gln Ala Pro Leu Val
              660                    665                    670
Pro Lys Leu Arg Arg Glu Gly Leu Pro Met Glu Gly Phe Cys Cys Ala
         675                    680                   685
Ala Gly Val Pro Ser Leu Glu Val Ala Asp Glu Phe Ile Thr Asp Met
     690                    695                     700
Leu Ser Ala Gly Ile Arg His Ile Ser Phe Lys Pro Gly Ser Ala Glu
705                     710                     715                 720
Ala Ile Arg Gln Val Leu Ala Ile Ala Asn Ala His Pro Glu Met Pro
                   725                     730                   735
Ile Val Leu Gln Trp Thr Gly Gly Arg Ala Gly Gly His His Ser Phe
              740                    745                     750
Glu Asp Phe His Gln Pro Ile Leu Glu Thr Tyr Ser Ala Ile Arg Arg
         755                     760                     765
His Pro Asn Val Val Leu Val Ala Gly Ser Gly Phe Gly Gly Ala Glu
     770                    775                   780
Asp Thr Tyr Pro Tyr Leu Thr Gly Asp Trp Ser Val Gln Leu Asp Tyr
785                    790                    795                 800
Pro Pro Met Pro Phe Asp Gly Met Leu Phe Gly Ser Arg Val Met Val
                  805                    810                    815
Ala Lys Glu Gly Met Ala Ser Leu Gly Val Lys Gln Ala Ile Val Asp
              820                   825                      830
Ala Pro Gly Val Glu Asp Ser Glu Trp Glu Lys Thr Tyr Lys Gly Pro
          835                    840                     845
Thr Gly Gly Val Met Thr Val Arg Ser Glu Leu Gly Glu Pro Ile His
     850                     855                   860
Lys Ile Ala Thr Arg Gly Val Lys Leu Trp Lys Glu Met Asp Asp Thr
865                     870                   875                 880
Ile Phe Ala Leu Pro Lys Asp Lys Arg Pro Ala Ala Leu Leu Ala Lys
                    885                   890                    895
Lys Asp Tyr Ile Ile Lys Arg Leu Asn Ala Asp Phe Gln Lys Val Trp
              900                     905                    910
Phe Gly Lys Lys Ala Asn Gly Ser Val Ala Asp Leu Gln Asp Met Thr
         915                    920                   925
Tyr Glu Glu Val Ile Asn Arg Leu Ile Glu Leu Met Phe Ile Lys His
    930                     935                     940
Glu Glu Arg Trp Ile Asp His Ser His Arg Asn Leu Leu Gly Asp Ile
945                    950                    955                 960
Leu Arg Arg Ile Glu Glu Arg Phe Val Gly Val Glu Lys Lys Ser Ile
                  965                    970                    975
Val Gln Thr Phe Ser Gln Leu Asp Ile Pro Phe Ala Phe Ala Gln Glu
              980                    985                    990
Phe Val Asp Thr Tyr Pro Leu Thr  Lys Thr Gln Leu Leu  Thr Thr Glu
         995                    1000                   1005
Asp Val  Gly Tyr Phe Leu Phe  Leu Met Asn Arg Arg  Gly Gln Lys
    1010                   1015                  1020
Pro Val Pro Phe Ile Pro Val  Leu Asp Lys Asp Phe  Glu Val Trp
    1025                   1030                  1035
Phe Lys  Lys Asp Ser Leu Trp  Gln Ala Glu Asp Leu  Ala Ala Val
    1040                   1045                  1050
Val Asp  Gln Asp Val Gln Arg  Thr Cys Ile Leu Gln  Gly Pro Ala
    1055                   1060                  1065
Ala Val  Arg Tyr Ala Thr Lys  Val Asp Glu Pro Val  Lys Asp Ile
    1070                   1075                    1080
Leu Asp  Gly Ile Phe His Ser  His Ile Ala Trp Leu  Lys Glu Arg
    1085                   1090                    1095
Tyr Tyr  Asn Asn Asn Asp A1a  Asn Ile Pro Gln Val  Glu Tyr Phe
    1100                   1105                    1110
G1y Gly  Lys Pro Gly Arg Phe  Glu Ser Ala Leu Asp  Ala Val Leu
    1115                   1120                    1125
Pro Leu  Val Lys Val Glu Thr  Tyr Asp Asn Gly Lys  Val Lys Met
    1130                   1135                    1140
Val Glu  Thr Ser Met Leu Glu  Ser Ser Leu Pro Lys  Asn G1u Asp
    1145                   1150                    1155
Trp Leu  Glu Tyr Leu Ala Gly  Gln Asp Pro Ser Trp  Phe Arg Ala
    1160                   1165                    1170
Leu Leu  Thr Ala Pro Ala Val  Ile Gln Gly Lys Lys  Phe Leu Asp
    1175                   1180                    1185
Asn Pro  Leu Ala Arg Ile Phe  Arg Pro Arg Val Ser  Gln A1a Val
     1190                   1195                   1200
His Phe  Glu Tyr Ala Glu Asp  Lys Leu Gln Thr Ile  Thr Val Tyr
     1205                   1210                   1215
Asp Arg  Arg Ser Trp Ser Ala  Ser Ser Lys Ser Ser  Glu Leu Ser
    1220                    1225                   1230
Pro Ser  Leu Arg Ala Arg Leu  Gln Pro Asn Glu Leu  Ile Glu Val
     1235                   1240                   1245
Val Leu  Val Glu Lys Asn Gly  G1u Arg Leu Ile Pro  Phe Pro Leu
     1250                   1255                   1260
Leu Phe  His Tyr Thr Pro Glu  Lys Gly Tyr Ala Pro  Ile His Glu
    1265                   1270                    1275
Val Met  Glu Gly Arg Asn Glu  Arg Ile Lys Glu Phe  Tyr Tyr Lys
    1280                   1285                    1290
Leu Trp  Phe Pro Ser Glu Glu  Asp Gln Phe Asn Ala  Cys Leu Ala
    1295                   1300                    1305
Thr Asp  Ala Phe Thr Glu Lys  Phe Ile Cys Asn Gly  Glu Gln Val
    1310                   1315                    1320
Ser Thr  Pro Glu Ile Lys Glu  Phe Cys Gln Ala Val  Gly Asn Gln
    1325                   1330                    1335
Ala Glu  Leu Tyr Val Glu Arg  Arg Gln Lys Val Val  Tyr Ala Pro
    1340                   1345                    1350
Met Asp  Phe Ala Ile Val Val  Gly Trp Lys Ser Ile  Ile Lys Ala
    1355                   1360                    1365
Ile Phe  Pro Lys Ser Ile Asp  G1y Asp Leu Leu Lys  Leu Val His
    1370                   1375                    1380
Leu Ser  Asn Gly Phe Arg Met  Leu Asp Gly Ala Glu  Ser Leu Lys
    1385                   1390                    1395
Gln G1y  Asp Ile Val Asp Thr  Val Ala Glu Ile Asn  Ala Val Val
    1400                   1405                    1410
Asn Asn  Asp Ser Gly Lys Leu  Val Gln Val Lys Gly  Val Val Leu
    1415                   1420                    1425
Arg Glu  Gly Lys Arg Val Met  Glu Val Thr Ser Glu  Phe Leu Tyr
    1430                   1435                    1440
Arg Gly  Thr Phe Val Asp Tyr  Gln Asn Thr Phe Gln  Lys Thr Val
    1445                   1450                    1455
Glu Thr  Pro Met Glu Val Lys  Leu Thr Ser Ala Lys  Asp Val Ala
    1460                   1465                    1470
Val Leu  Lys Ser Lys Glu Trp  Ile G1n Trp Ala Glu  Gly Glu His
    1475                    1480                    1485
Thr Val  Gly Pro Asn Ala Ser  Leu Val Phe Arg Leu   Asn Thr Ile
    1490                    1495                    1500
Val Arg  Phe Lys Asn Lys Thr  Thr Phe Ser His Val  Glu Thr Thr
    1505                    1510                    1515
Gly Thr  Val Ser Met Gln Ile  Ser Thr Lys Glu His  Val Glu Ile
    1520                    1525                    1530
Ala Thr  Val His Tyr Ser Asn  Asp Glu Glu Thr Gln  Gly Asn Pro
    1535                    1540                    1545
Val Leu  Ala Tyr Leu Lys Arg  Ser Gly Ser Pro Ile  Glu Gln Ala
    1550                    1555                    1560
Ile His  Phe Glu Asn Gly Gly  Tyr Ser Val Met Pro  Glu Gly Ser
    1565                    1570                    1575
Phe Ser  Ser Glu Val Ile Ser  Pro Phe Ser Asn Glu  Pro Tyr Ala
    1580                    1585                    1590
Lys Val  Ser Gly Asp Phe Asn  Pro Ile His Val Asn  Pro Tyr Phe
    1595                    1600                    1605
Ala Asp  Leu Ala Glu Leu Pro  Gly Thr Ile Thr His  Gly Met Trp
    1610                    1615                    1620
Thr Ser  Ala Ser Thr Arg Lys  Phe Val Glu Ile Phe  Ala Ala Glu
    1625                    1630                    1635
Asn His  Pro Gln Arg Val Thr  Ser Tyr Glu Val Lys  Phe Leu Ser
    1640                    1645                    1650
Met Val  Leu Pro Gln Asp Arg  Leu Ser Thr Lys Leu  Ser His Ile
    1655                    1660                    1665
Gly Met  Ile Asn Gly Lys Lys  Ile Ile Lys Val Glu  Thr Phe Asn
    1670                    1675                   1680
Gln Asn  Gly Ser Lys Val Val  Glu Gly Thr Ala Glu  Ile Asp Gln
    1685                    1690                   1695
Pro Thr  Ile Ala Tyr Val Phe  Thr Gly Gln Gly Ser  Gln Glu Gln
    1700                    1705                   1710
Gly Met  Gly Met Ala Leu Tyr  Asp Ser Ser Pro Val  Ala Lys Asp
    1715                    1720                   1725
Ile Trp  Gln Arg Ala Asp Arg  His Phe Leu Glu Asn  Tyr Gly Phe
    1730                    1735                   1740
Ser Ile  Leu Asp Ile Val Arg  Asn Asn Pro Leu Lys  Lys Thr Ile
    1745                    1750                   1755
His Phe  Gly Gly Pro Lys Gly  Asn Ala Ile Arg Gln  Asn Tyr Met
    1760                    1765                   1770
Ser Met  Arg Tyr Asp Gln Val  Asp Gln Asp Gly Ser  Ile Lys Ser
    1775                    1780                   1785
Leu Pro  Leu Phe Pro Gly Ile  Asn Glu Thr Thr His  Phe Tyr Thr
    1790                    1795                   1800
Phe Gln  Ser Pro Asn Gly Leu  Leu Ala Ala Thr Gln  Phe Thr Gln
    1805                    1810                   1815
Pro Ala  Leu Thr Leu Met Glu  Lys Ala Ala Phe Glu  Asp Met Arg
    1820                    1825                   1830
Ser Lys  Gly Leu Ile Gln Gly  Asn Cys Ala Phe Ala  Gly His Ser
    1835                    1840                   1845
Leu Gly  Glu Tyr Ser Ala Leu  Ala Ala Ile Gly Glu  Val Leu Pro
    1850                    1855                   1860
Ile Glu  Ser Leu Val Asp Val  Val Phe Tyr Arg Gly  Met Thr Met
    1865                    1870                   1875
Gln Val  Ala Val Pro Arg Asp  Ser Val Gly Arg Ser  Asn Tyr Gly
    1880                    1885                   1890
Met Val  Ala Ile Asn Pro Ser  Arg Val Ser Pro Thr  Phe Asn Asp
    1895                    1900                   1905
Ser Ala  Leu Arg Tyr Val Val  Asp Ala Ile Ala Arg  Gln Ser Asn
    1910                    1915                   1920
Gly Leu  Leu Glu Ile Val Asn  Glu Asn Val Glu Asn  Trp Gln Tyr
    1925                    1930                   1935
Val Ala  Ala Gly Glu Leu Ser  Asn Leu Asp Ala Leu  Ser Thr Val
    1940                    1945                   1950
Leu Asn  Tyr Leu Lys Val Gln  Lys Ile Asp Leu Gln  Lys Leu Met
    1955                    1960                   1965
Glu Thr  Met Pro Leu Glu Glu  Val Lys Lys His Leu  Ser Gln Ile
    1970                    1975                   1980
Ile Ala  Gly Ala Leu Glu Lys  Val Ala Glu Lys Val  Ala Lys Asp
    1985                    1990                   1995
Gly His  Ile Lys Pro Glu Arg  Gly Val Ala Thr Ile  Pro Leu Ala
    2000                    2005                   2010
Gly Ile  Asp Val Pro Phe His  Ser Ser Phe Leu Leu  Ser Gly Val
    2015                    2020                   2025
Ala Pro  Phe Arg Thr Tyr Leu  Ala Lys Lys Ile Asn  Pro Thr Phe
    2030                    2035                   2040
Ile Asn  Val Pro Leu Leu Thr  Ser Lys Tyr Ile Pro  Asn Leu Thr
    2045                    2050                   2055
Ala Gln  Pro Phe Ser Ile Glu  Lys Ser Tyr Ile Glu  Gly Val Tyr
    2060                    2065                   2070
Asn Leu  Thr Ser Ser Pro Arg  Leu Ala Lys Val Leu  Lys Asn Trp
    2075                    2080                   2085
Ile Asp  Thr Lys Leu Thr Ala  Lys Gln Gln Gln Arg  Leu Gly Tyr
    2090                    2095                   2100
Thr Leu  Leu Val Glu Leu Leu  Ala Tyr Gln Phe Ala  Ser Pro Val
    2105                    2110                   2115
Arg Trp  Ile Glu Thr Gln Asp  Arg Leu Phe Lys Glu  Tyr Asn Val
    2120                    2125                   2130
Val Arg  Leu Ile Glu Val Gly  Pro Ser Pro Thr Leu  Cys Gly Met
    2135                    2140                   2145
Ala Gln  Arg Thr Leu Lys Phe  Lys Tyr Glu Ala Tyr  Asp Asp Ala
    2150                    2155                   2160
Leu Thr  Phe Gln Arg Ser Thr  Leu Cys Thr Ser Lys  Asp Ser Lys
    2165                    2170                   2175
Glu Ile  Tyr Tyr Ala Met Asp  Asn Val Glu Ser Ser  Ala Pro Ala
    2180                    2185                   2190
Pro Ala  Ala Ser Ala Ala Ala  Pro Ala Pro Lys Ala  Thr Pro Val
    2195                    2200                   2205
Ala Ala  Ala Ala Pro Ala Pro  Val Ala Val Ala Ala  Ala Gly Pro
    2210                    2215                   2220
Ala Ala  Ala Val Ser Asp Val  Pro Ile Lys Ala Leu  Glu Ile Leu
    2225                    2230                   2235
His Val  Ile Val Ala Gln Lys  Val Lys Lys Thr Leu  Glu Glu Val
    2240                    2245                   2250
Pro Leu  Ser Lys Ala Ile Lys  Asp Leu Val Gly Gly  Lys Ser Thr
    2255                    2260                   2265
Leu Gln  Asn Glu Ile Leu Gly  Asp Leu Gln Lys Glu  Phe Gly Ser
    2270                    2275                   2280
Ser Gly  Phe Pro Glu Lys Gly  Glu Glu Ala Pro Leu  Glu Glu Leu
    2285                    2290                   2295
Ala Asn  Ala Leu Gln Gly Asn  Phe Asn Gly Ala Leu  Gly Lys Gln
    2300                    2305                   2310
Thr Thr  Ser Leu Ile Ala Lys  Met Ile Gly Ser Lys  Met Pro Gly
    2315                    2320                   2325
Gly Tyr  Ser Leu Ser Thr Ala  Lys Gly Tyr Leu Ala  Lys Ala His
    2330                    2335                   2340
Gly Leu  Gly Pro Val Arg Ala  Asp Ala Ala Leu Leu  Val Gly Leu
    2345                    2350                   2355
Thr Met  Glu Pro Ala Ala Arg  Leu Gly Ala Val Pro  Glu Ala Asn
    2360                    2365                   2370
Ala Trp  Leu Asp Ser Val Ala  Gln Ala Tyr Ala Arg  Arg Ala Gly
    2375                    2380                   2385
Ile Ser  Leu Ser Ala Gly Ala  Pro Ala Gly Gly Ala  Ala Pro Val
    2390                    2395                   2400
Met Met  Ala Ala Ala Gly Pro  Ala Ala Ala Gly Pro  Ala Ala Ala
    2405                    2410                   2415
Val Ala  Asp Ala Pro Ile Lys  Ala Ile Asp Ile Leu  His Val Ile
    2420                    2425                   2430
Val Ala  Gln Lys Ile Lys Lys  Thr Val Glu Glu Val  Pro Leu Ser
    2435                    2440                   2445
Lys Ala  Ile Lys Asp Leu Val  Gly Gly Lys Ser Thr  Leu Gln Asn
    2450                    2455                   2460
Glu Ile  Leu Gly Asp Leu Gln  Lys Glu Phe Gly Ser  Ser Gly Phe
    2465                    2470                   2475
Pro Glu  Lys Gly Glu Glu Ala  Pro Leu Glu Asp Leu  Gly Asn Ala
    2480                    2485                   2490
Leu Gln  Gly Asn Phe Gly Gly  Ser Leu Gly Met Gln  Thr Thr Ser
    2495                    2500                   2505
Leu Ile  Ala Lys Met Met Gly  Ser Lys Met Pro Gly  Gly Phe Thr
    2510                    2515                   2520
Gln Ser  Ser Ala Lys Ala Tyr  Leu Ala Ser Ser Tyr  Gly Leu Gly
    2525                    2530                   2535
Pro Leu  Arg Ala Asp Gly Ala  Leu Leu Leu Gly Val  Thr Met Glu
    2540                    2545                   2550
Pro Ser  Ala Arg Leu Gly Ser  Glu Gly Asp Ala Lys  Ala Trp Leu
    2555                    2560                   2565
Asp Thr  Val Ala Gln Ala Tyr  Ala Arg Arg Ala Gly  Ile Ser Leu
    2570                    2575                   2580
Gly Gly  Gly Gly Gly Gly Ala  Val Ala Gly Gly Ala  Val Gly Gly
    2585                    2590                   2595
Ala Met  Met Asn Ser Glu Glu  Phe Asn Gln Phe Gln  Ala Lys Gln
    2600                    2605                   2610
Asn Ala  Met Met Tyr Gln His  Leu Glu Ile Tyr Ala  Arg Tyr Leu
    2615                    2620                   2625
Glu Lys  Asp Leu Arg Ala Gly  Glu Lys Gln Tyr Glu  Glu Glu Lys
    2630                    2635                   2640
Leu Ala  Thr Leu Arg Leu Gln  Ala Asp Ile Asp Gln  Trp Met Ala
    2645                    2650                   2655
Glu His  Gly Asp Tyr Tyr Ala  Glu Gly Ile Lys Pro  Ala Phe Ser
    2660                    2665                   2670
Ala Lys  Lys Ala Arg Lys Tyr  Asp Ser His Trp Asn  Trg Val Arg
    2675                    2680                   2685
Gln Asp  Ala Met Ser Leu Leu  Tyr Asp Met Ile Phe  Gly Arg Leu
    2690                    2695                   2700
Thr Val  Val Asp Arg Glu Val  Val Ala Gln Cys Ile  His Val Met
    2705                    2710                   2715
Asn Arg  Ala Asn Pro Gln Leu  Leu Glu Phe Met Ile  Tyr His Ile
    2720                    2725                   2730
Asp Asn  Thr Ala Ala Asp Arg  Gly Lys Thr Tyr Ala  Leu Ala Lys
    2735                    2740                   2745
Glu Phe  Gly Asn Met Leu Ile  Glu Asn Cys Arg Glu  Val Leu Glu
    2750                    2755                   2760
Ala Ala  Pro Val Tyr Lys Asp  Val Gly Val Pro Thr  Gly Pro Gln
    2765                    2770                   2775
Thr Thr  Ile Asp Asn Lys Gly  Asn Ile Leu Tyr Glu  Glu Val Gln
    2780                    2785                   2790
Arg Val  Gly Val Arg Lys Leu  Asp His Tyr Val Lys  Asp Met Val
    2795                    2800                   2805
Ala Gly  Gly Lys Met Ser Glu  Tyr Ser Asn Arg Gln  Lys Val Gln
    2810                    2815                   2820
Lys Asn  Leu Ala Gln Ile Tyr  Lys Ile Ile Lys Ala  Gln Asn Thr
    2825                    2830                   2835
Met Lys  Ser Ser Ser Lys Leu  Ala Ile Lys Ser Leu  Tyr Gly Glu
    2840                    2845                   2850
Val Ile  His Ala Met Asn Met  Ser Asn Thr Ile Ile  Arg Glu Glu
    2855                    2860                   2865
Lys Asn  Arg Arg Ala Ser Arg  Val Arg Arg Ala Ser  Ala Val Pro
    2870                    2875                   2880
Ser Ala  Asp Arg Pro Lys Lys  Glu Ala Lys Lys Glu  Thr Ile Pro
    2885                    2890                   2895
Phe Leu  His Leu Lys Lys Lys  Asn Pro Gln Ser Glu  Ser Gly Trp
    2900                    2905                   2910
Glu Phe  Ser Gln Arg Leu Thr  Ser Val Tyr Leu Asp  Val Leu Thr
    2915                    2920                   2925
Asn Ile  Ala Arg Asp Gly Val  Thr Phe Glu Asn Arg  Met Val Leu
    2930                    2935                   2940
Met Thr  Gly Ala Gly Lys Asp  Ser Ile Gly Ala Ser  Ile Leu Lys
    2945                    2950                   2955
Gly Leu  Leu Ser Gly Gly Ala  Lys Val Val Val Thr  Thr Ser Arg
    2960                    2965                   2970
Phe Ser  Arg Asp Val Thr Glu  Tyr Tyr Gln Ser Ile  Tyr Gln Arg
    2975                    2980                   2985
His Gly  Ser Lys Asn Ser Cys  Leu Val Val Val Pro  Phe Asn Gly
    2990                    2995                   3000
Gly Ser  Lys Gln Asp Val Asp  Ala Leu Val Asn Tyr  Ile Tyr Asp
    3005                    3010                   3015
Lys Asp  Leu Lys Lys Gly Leu  Gly Trp Asp Leu Asp  Tyr Ile Ile
    3020                    3025                   3030
Pro Phe  Ala Ala Ile Ser Val  Gln Gly Lys Glu Ile  Asp Asn Ile
    3035                    3040                   3045
Asp Ser  Gln Ser Glu Leu Ala  His Arg Ile Met Leu  Thr Asn Val
    3050                    3055                   3060
Leu Arg  Leu Leu Gly Asn Val  Lys Ala Lys Lys Met  Glu His Gly
    3065                    3070                   3075
Tyr Asp  Thr Arg Pro Ala Gln  Val Ile Leu Pro Leu  Ser Pro Asn
    3080                    3085                   3090
His Gly  Thr Phe Gly Ala Asp  Gly Leu Tyr Gly Glu  Ser Lys Val
    3095                    3100                   3105
Ala Leu  Glu Thr Leu Phe Asn  Arg Trp Ser Ser Glu  Ser Trp Gly
    3110                    3115                   3120
Ala Tyr  Leu Thr Ile Thr Gly  Ala Val Ile Gly Trp  Thr Arg Gly
    3125                    3130                   3135
Thr Gly  Leu Met Ser Gly Asn  Asn Ile Val Ala Glu  Gly Leu Glu
    3140                    3145                   3150
Lys Tyr  Gly Val Arg Thr Phe  Ser Gly Gln Glu Met  Ala Phe Asn
    3155                    3160                   3165
Ile Leu  Gly Leu Met His Pro  Ser Ile Thr Asn Leu  Cys Gln Val
    3170                    3175                   3180
Glu Pro  Val Trp Ala Asp Leu  Asn Gly Gly Leu Gln  Tyr Leu Pro
    3185                    3190                   3195
Asn Leu  Asn Glu Ile Ser Ala  Asn Leu Arg Ala Glu  Tyr Arg Gln
    3200                    3205                   3210
Thr Ala  Glu Ile Arg Lys Ala  Ile Val Thr Glu Asn  Thr Leu Asp
    3215                    3220                   3225
Phe Lys  Glu Thr His Gly Ala  Glu Ala Glu Arg Lys  His Gln Pro
    3230                    3235                   3240
His Lys  Val Thr Pro Arg Ala  Asn Met Lys Phe Pro  Phe Pro Glu
    3245                    3250                   3255
Leu Lys  Asp Tyr Lys Asp Leu  Ser His Ala His Lys  Leu Arg Gly
    3260                    3265                   3270
Met Leu  Asp Leu Glu Lys Val  Val Val Val Thr Gly  Phe Ser Glu
    3275                    3280                   3285
Val Gly  Pro Trp Gly Asn Ser  Arg Thr Arg Trp Glu  Met Glu Ala
    3290                    3295                   3300
Asn Gly  Gln Phe Ser Leu Glu  Gly Cys Ile Glu Met  Ala Trp Ile
    3305                    3310                   3315
Met Gly  Phe Ile Lys His His  Asn Gly Asn Leu Lys  Ser Gly Ser
    3320                    3325                   3330
Pro Tyr  Ser Gly Trp Val Asp  Ala Lys Thr Glu Glu  Pro Val Lys
    3335                    3340                   3345
Asp Arg  Asp Val Lys Ala Lys  Tyr Glu Lys Gln Ile  Leu Glu His
    3350                    3355                   3360
Thr Gly  Ile Arg Leu Ile Glu  Pro Glu Leu Phe Gly  Gly Tyr Asp
    3365                    3370                   3375
Pro Lys  Arg Lys Gly Leu Leu  Gln Glu Val Leu Ile  Asp His Asp
    3380                    3385                   3390
Leu Glu  Ala Phe Glu Val Ser  Lys Glu Glu Ala Gln  Met Phe Lys
    3395                    3400                   3405
Leu Glu  His Gly Asp Lys Val  Asp Ile Tyr Glu Glu  Glu Ser Gly
    3410                    3415                   3420
Gln Trp  Ala Val Lys Phe Lys  Lys Gly Ala Asn Met  Tyr Ile Pro
    3425                    3430                   3435
Lys Ala  Leu Lys Phe Asp Arg  Leu Val Ala Gly Gln  Ile Pro Thr
    3440                    3445                   3450
Gly Trp  Asp Ala Ala Arg Phe  Gly Val Pro Lys Asp  Ile Ile Asp
    3455                    3460                   3465
Gln Val  Asp Thr Ile Thr Leu  Tyr Val Leu Val Ser  Thr Val Glu
    3470                    3475                   3480
Ala Leu  Val Ala Ser Gly Ile  Thr Asp Pro Tyr Glu  Phe Tyr Gln
    3485                    3490                   3495
Tyr Val  His Val Ser Glu Val  Gly Asn Thr Ala Gly  Ser Gly Val
    3500                    3505                   3510
Gly Gly  Met Leu Ser Leu Arg  Gly Met Tyr Arg Gly  Arg Val Met
    3515                    3520                   3525
Asp Asp  Pro Val Gln Lys Asp  Ile Leu Gln Glu Ser  Phe Ile Asn
    3530                    3535                   3540
Thr Met  Pro Ala Trp Val Asn  Met Leu Leu Leu Ser  Ser Ser Gly
    3545                    3550                   3555
Pro Ile  Lys Thr Pro Val Gly  Ala Cys Ala Thr Ala  Val Glu Ser
    3560                    3565                   3570
Val Glu  Ile Gly Val Asp Thr  Ile Gln Ser Gly Lys  Ala Lys Ile
    3575                    3580                   3585
Val Ile  Val Gly Gly Tyr Asp  Asp Phe Gln Glu Glu  Gly Ser Tyr
    3590                    3595                   3600
Glu Phe  Ala Asn Met Lys Ala  Thr Ser Asn Thr Glu  Glu Glu Phe
    3605                    3610                   3615
Ala His  Gly Arg Thr Pro Lys  Glu Met Ser Arg Pro  Ala Thr Ser
    3620                    3625                   3630
Thr Arg  Ser Gly Phe Met Glu  Ser His Gly Ala Gly  Ile Glu Ile
    3635                    3640                   3645
Leu Met  Gln Ala Lys Leu Ala  Val Glu Met Gly Val  Pro Ile Tyr
    3650                    3655                   3660
Gly Ile  Val Gly Leu Thr Asn  Thr Ala Thr Asp Lys  Glu Gly Arg
    3665                    3670                   3675
Ser Val  Pro Ala Pro Gly Gln  Gly Val Leu Thr Thr  Ala Arg Glu
    3680                    3685                   3690
Ala Lys  Gly Lys Met Pro Ser  Arg Leu Leu Asp Ile  Lys Tyr Arg
    3695                    3700                   3705
Lys Arg  Gln Ile Asp Ser Arg  Arg Ala Gln Ile Lys  Gln Trp Val
    3710                    3715                   3720
Glu Asn  Glu Tyr Ala Glu Leu  Arg Tyr Glu Leu Asp  Glu Leu Lys
    3725                    3730                   3735
Ala Ser  Asn Ser Leu Thr Val  Ser Glu Glu Glu Tyr  Leu Ala Ala
    3740                    3745                   3750
Glu Thr  Glu Arg Ile Gln Lys  Glu Ala Lys Arg Gln  His Arg Glu
    3755                    3760                   3765
Ala Leu  Asn Leu Trp Gly Asn  Glu Phe Tyr Arg Gln  Asp Pro Gln
    3770                    3775                   3780
Ile Ala  Pro Leu Arg Gly Ala  Leu Ala Ser Phe Gly  Leu Thr Ile
    3785                    3790                   3795
Asp Asp  Ile Gly Val Gly Ser  Phe His Gly Thr Ser  Thr Lys Ala
    3800                    3805                   3810
Asn Asp  Lys Asn Glu Ser Glu  Val Val Asn Lys Gln  Leu Glu His
    3815                    3820                   3825
Leu Gly  Arg Ser Lys Gly Asn  Ala Leu Pro Ser Ile  Trp Gln Lys
    3830                    3835                   3840
Tyr Leu  Thr Gly His Pro Lys  Gly Ala Ala Ala Ala  Trp Met Met
    3845                    3850                   3855
Asn Gly  Val Leu Gln Val Leu  Gln Thr Gly Leu Ile  Pro Gly Asn
    3860                    3865                   3870
Arg Asn  Ala Asp Asn Ile Asp  Asp Thr Met Arg Gln  Tyr Glu His
    3875                    3880                   3885
Val Leu  Tyr Thr Ser Arg Ser  Ile Gln Thr Asp Gly  Val Lys Ala
    3890                    3895                   3900
Gly Leu  Leu Lys Ser Phe Gly  Phe Gly Gln Val Gly  Gly Glu Val
    3905                    3910                   3915
Leu Leu  Ile His Ser Asp Tyr  Ile Leu Gly Ala Leu  Glu Glu His
    3920                    3925                   3930
Glu Tyr  Glu Ala Tyr Lys Val  Lys Gln Gln Ala Arg  Gln Ala Lys
    3935                    3940                   3945
Ser Tyr Arg  Tyr Leu His Asp  Ser Met Thr Gly Gly  Pro Ala Leu
    3950                    3955                   3960
Val Gln  Val Lys Asn Ala Pro  Pro Tyr Ser Pro Glu  Leu Glu Ser
    3965                    3970                   3975
Pro Val  Tyr Leu Asn Pro Lys  Ala Arg Ala Gln Tyr  Asn Asn Ala
    3980                    3985                   3990
Thr Lys  Ser Trp Ala Phe Asn  Ala Lys His Leu Val  Pro Glu Ser
    3995                    4000                   4005
Asp Lys  Ile Asp Val Asp Met  Thr Arg Ala Ile Leu  Glu Thr Ser
    4010                    4015                   4020
Ala Gln  Glu Ser Leu Gly Val  Thr Ser Ser Ser Ser  Arg Gly Val
    4025                    4030                   4035
Gly Val  Asp Val Glu Met Val  Ser Ala Ile Asn Ile  Glu Asn Asp
    4040                    4045                   4050
Thr Phe  Leu Glu Arg Asn Phe  Thr Gln Gln Glu Ile  Asp Tyr Cys
    4055                    4060                   4065
Leu Ser  Arg Pro Asp Pro Gln  Ala Ser Phe Ala Gly  Arg Trp Ser
    4070                    4075                   4080
Ala Lys  Glu Ala Val Val Lys  Ala Val Ser Ser Phe  Ser Leu Asp
    4085                    4090                   4095
Ser Glu  Lys Val Trp Thr Gln  Gly Ala Gly Ala Gly  Leu Ser Glu
    4100                    4105                   4110
Ile Glu  Ile Val Met Ala Glu  Ser Gly Ala Pro Ser  Val Val Phe
    4115                    4120                   4125
Ser Gly  Ala Ala Gln Glu Ala  Ala Ala Lys Ala Gly  Val Lys Glu
    4130                    4135                   4140
Ile Lys  Val Ser Ile Ser His  Ser Gly Ala Tyr Ala  Val Ala Val
    4145                    4150                   4155
Ala Asn  Ala Leu
    4160
<210>4
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>保守氨基酸序列(Conserved amino acid sequence)1
<400>4
Gln Gly Ser Gln Glu Gln Gly Met Gly Met
1                  5                    10
<210>5
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>保守氨基酸序列(Conserved amino acid sequence)2
<400>5
Ala Thr Gln Phe Arg Gln Pro Ala Leu Thr
1                 5                    10
<210>6
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1h-f引物(primer)
<220>
<221>misc_feature
<222>(6)..(6)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(9)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(21)..(21)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(27)..(27)
<223>n as a，c，g，or t
<400>6
carggnwsnc argarcargg natgggnatg                       30
<210>7
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1h-r引物(primer)
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_featute
<222>(6)..(6)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(9)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(15)..(15)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(24)..(24)
<223>n as a，c，g，or t
<220>
<221>misc_feature
<222>(27)..(27)
<223>n as a，c，g，or t
<400>7
gtnarngcng gytgngtraa ytgngtngc                         29
<210>8
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1-1f引物(primer)
<400>8
gctctgtatg actcttcccc c                               21
<210>9
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1-1r引物(primer)
<400>9
gccaaaagac cgttgggtga c                               21
<210>10
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F2-1f引物(primet)
<400>10
ggtgcaggag cgggactgag tg                             22
<210>11
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F2-1r引物(primer)
<400>11
cgcatttgca accgcaaccg cg                             22
<210>12
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1-2f引物(primer)
<400>12
atgactaccg cacagtccaa cttgacc                        27
<210>13
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F1-3f引物(primer)
<400>13
tgtcttgaag agcaaggagt gg                                   22
<210>14
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>F2-2r引物(primer)
<400>14
gcgtagtagt cgccgtgctc agccatc
<210>15
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>MCS1-F primer
<400>15
catggatcctctagactgcaggcatgcaagcttctcga                       38
<210>16
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial)
<220>
<223>MCS1-R primer
<400>16
ctaggagatctgacgtccgtacgttcgaagagctctag                       38

Claims (20)

1.以下(a)～(h)的任一项中所述的多核苷酸，其为：
(a)多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸；
(b)多核苷酸，其含有由序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸或其一部分；
(c)多核苷酸，其含有编码具有序列号：3的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸；
(d)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成的，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(e)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有60％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(f)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(g)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(h)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其是以下(i)～(m)的任一项：
(i)多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1～10个氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(j)多核苷酸，其含有编码具有与序列号：3的氨基酸序列有90％以上同源性的氨基酸序列，且具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(k)多核苷酸，其含有与由序列号：1的1位～12486位的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；
(l)多核苷酸，其含有与由序列号：2的碱基序列的互补碱基序列或其一部分的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸；或
(m)多核苷酸，其含有与编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交，且编码具有脂肪酸合成酶活性的蛋白质的多核苷酸。
3.根据权利要求1所述的多核苷酸，其含有由序列号：1的1位～12486位的碱基序列组成的多核苷酸。
4.根据权利要求1所述的多核苷酸，其含有序列号：1的碱基序列组成的多核苷酸。
5.根据权利要求1所述的多核苷酸，其含有序列号：2的碱基序列组成的多核苷酸。
6.根据权利要求1所述的多核苷酸，其含有编码由序列号：3的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的多核苷酸，其是DNA。
8.蛋白质，其由权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸编码。
9.载体，其含有权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸。
10.转化生物，其中导入了权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸。
11.转化生物，其中导入了权利要求9中所述的载体。
12.根据权利要求11所述的转化生物，其通过导入权利要求9中所述的载体，使脂肪酸生成能力提高。
13.根据权利要求10～12中任一项所述的转化生物，其中，所述生物是脂质生产菌。
14.根据权利要求13所述的转化生物，其中，所述脂质生产菌是高山被孢霉。
15.脂质或脂肪酸的制造方法，其使用权利要求10～14中任一项所述的转化生物。
16.食品、医药品或工业原料的制造方法，其使用权利要求10～14中任一项所述的转化生物。
17.食品、医药品或工业原料，其由权利要求16中所述方法制造。
18.评价方法，其是使用根据具有序列号：1的1位～12486位的碱基序列的脂肪酸合成酶基因的碱基序列设计的引物或探针，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法。
19.评价方法，其是通过培养被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因的表达量，评价被检脂质生产菌的脂肪酸生成能力的方法。
20.脂质生产菌的选择方法，其为培养标准脂质生产菌及被检脂质生产菌，测定具有序列号：1的1位～12486位碱基序列的脂肪酸合成酶基因在各脂质生产菌中的表达量，选择该基因的表达高于标准脂质生产菌的被检脂质生产菌。
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