CN101066262A

CN101066262A - 治疗和预防病毒性流感感染的方法

Info

Publication number: CN101066262A
Application number: CNA2006101268821A
Authority: CN
Inventors: 帕特里克·T·普伦德加斯特
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-05-04
Filing date: 2006-09-07
Publication date: 2007-11-07
Also published as: GB0608792D0

Abstract

本发明涉及利用抑制素或其前体、或抑制素类化合物来治疗病毒性流感的方法。尤其是，本发明披露了抑制素羟酸盐可有效赋予对于流感病毒激发的抗性，其中抑制素羟酸盐包括但不限于美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀以及辛伐他汀。

Description

治疗和预防病毒性流感感染的方法

技术领域

本发明提供了用于治疗病毒性流感(流行性感冒)感染的新方法。尤其是，提供了一种用于预防和/或治疗流感的方法，该方法包括给予受治疗者治疗有效量的抑制素或抑制素类化合物，如美伐他汀(mevastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastain)以及辛伐他汀(simvastatin)。

背景技术

A型流感病毒

流感是世界范围内最广泛传播的传染病之一。仅在美国，估计每年有20,000至40,000例死亡可归因于A型流感病毒的感染。另外，还存在这样的可能性，即由于病毒通过人群的快速传播，使得流感病毒可引起时疫或大疫。

若干性能有助于流感病毒的流行病成功蔓延。首先，它通过浮质(气溶胶)可以很容易在人之间传播(也称作飞沫传染)。第二，流感病毒抗原的较小变化是频繁的(抗原漂移)，以致病毒很容易逃避通过由先前暴露于病毒的不同变异体所诱导的预防免疫性。第三，通过在不同菌株之间的遗传物质的重配或混合(抗原转移)可以很容易产生流感病毒的新菌株。在A型流感病毒的情况下，上述混合可以发生在影响不同物种的亚型或菌株之间。

尽管进行了大量深入的研究工作，但对于流感病毒感染仍然没有有效的治疗法并且现有疫苗的价值有限，这部分是由于上述抗原转移和漂移的性能。由于这些原因，对于A型流感病毒的全球监测已进行了许多年。虽然目前基于灭活病毒的疫苗能够在65岁以下的健康个体中预防大约70-80％的疾病，但在老年或免疫受损人群中，这种百分比要低得多。此外，与疫苗给予有关的费用和潜在的副作用使得这种方式不是最优的。

因此，仍然需要开发有效的治疗法来治疗和预防流感感染。

病毒重配和遗传

流感病毒是正粘病毒，并且分成三种类型：A型、B型以及C型。A型和B型流感病毒颗粒包含反义基因组、分成8个线性片断的单链RNA。单宿主同时感染两种不同的流感病毒可以导致产生“重配(reassortment)”子代病毒，其具有基因组片断的新组合，衍生自每个母病毒(在Baigent and McCauley，2003中对此有评述)。

A型流感病毒已引起最近4次严重人类呼吸病的大流行病。A型流感病毒根据它们的表面蛋白、血凝素(HA或H)以及神经氨酸酶(NA或N)可以分成各亚型。存在14种已知的H亚型和9种已知的N亚型。已经报道仅有三种H亚型(H1、H2和H3)和两种N亚型(N1和N2)，通常在人类中传播。

在称作“抗原漂移”的过程中，人类中的季节性流感流行病与在血凝素和神经氨酸酶蛋白的抗原部位的氨基酸变化有关。大流行病与下述有关：通过重配，将来自动物源的流感病毒的新的血凝素和神经氨酸酶基因引入目前传播人类病毒的遗传背景-称作“抗原转移”中。

流感感染的目前疗法

目前，有两类商业上可获得的药物用于预防和治疗人类的流感病毒感染：M2离子通道阻断剂和神经氨酸酶抑制剂。

三环癸胺(Amantadine)和金刚乙胺(Rimantadine)是通过阻断在病毒进入复制生命周期的早期主要需要的病毒M2蛋白质的离子通道活性来起作用。在治疗A型流感时，两种疗法都是高度有效的，但对于中枢神经系统、肝以及肾会引起显著的副作用。在体外和体内，敏感的流感菌株会快速产生耐药性。

奥塞米韦(Oseltamivir)和扎那米韦(Zanamivir)可阻断神经氨酸酶的作用，以防止来自感染细胞新形成的病毒释放以及在宿主内传播。在临床研究中，两种药物都有效地抑制流感病毒，然而在细胞培养以及在患者体内，已经观察到了逃避神经氨酸酶抑制剂的选择性压力。

许多目前的抗病毒疗法都直接针对靶病毒成分，因而倾向于代偿性病毒逃避机制。

希望有这样的疗法，这些疗法的目的在于通过增强抗病毒应答或通过抑制在宿主细胞内的前病毒活性来操纵宿主以干扰病毒复制，从而具有更大的潜力来控制流感而无需对病毒本身施加所需要的以代偿方式突变的选择性压力。同样特别引人关注的是，对于靶向病毒和宿主同时联合治疗的可能性，使得病毒获得耐药性的机会减到最低程度。

利巴韦林(ribavirin^TM)是一种基于嘌呤核苷类似物的广谱抗病毒剂，并且是丙型肝炎的标准治疗处方药(regimen)。已知利巴韦林通过诱导病毒RNA基因组的致死诱变而对于各种RNA病毒是活性的。并且已知利巴韦林相对于动物冠状病毒显示出抗病毒活性。虽然利巴韦林对于许多病毒都具有显著的抗病毒活性，但它未被承认为用于流感感染的药剂。此外，与利巴韦林有关的相当大的毒性限制了其作为药剂的应用。

抑制素化合物

抑制素是这样的化合物，已知这些化合物对人体血液中的LDL-胆固醇水平具有降低的效应。抑制素抑制羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶，其为在胆固醇生物合成中的速率决定步骤。

目前可获得的抑制素包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀(fluvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)以及阿托伐他汀(atorvastatin)。洛伐他汀(披露在美国专利第4,231,938号中)以及辛伐他汀(ZOCOR；披露在美国专利第4,444,784号以及WO00/53566号中)是以内酯形式给予的。在吸收以后，在肝中内酯环通过化学或酶催化水解作用被打开，并且产生活性羟酸。

普伐他汀(PRAVACHOL；披露在美国专利第4,346,227号中)是作为钠盐给予的。也是作为钠盐给予的氟伐他汀(LESCOL；披露在美国专利第4,739,073号中)以及西立伐他汀(披露在美国专利第5,006,530号以及第5,177,080号中)是全合成化合物，这些化合物是部分结构上不同于包含六氢萘环的一类化合物的真菌衍生物。阿托伐他汀以及两种新的“超抑制素”(称作罗苏伐他汀(rosuvastatin)和匹伐他汀(pitavastatin))是作为钙盐给予的。

国际专利申请WO 00/47196涉及一种用于治疗患有丙型肝炎、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎、G型肝炎或H型肝炎的哺乳动物的方法，其通过给予患者至少一种抑制素或抑制素类化合物。

然而，WO 00/47196并没有考虑到将所述抑制素化合物应用于预防上述病毒感染以及不同于在其中列出的病毒感染。

本发明人已经惊人地发现，抑制素或其前体、或抑制素类化合物可以以预防方式起作用，以防止A型流感感染。尤其是，已经惊人地和意想不到地发现，抑制素羟酸盐(在本领域称作抑制素的前药化合物的活性代谢物)，其包括但不限于美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀以及辛伐他汀，可有效用于预防性治疗暴露于流感病毒的任何菌株的脊椎动物、尤其是哺乳动物并且更尤其是人类。

本发明人已经惊人地发现，通过任何给药途径，但优选通过鼻内给药，以规定剂量给予患者抑制素前药(羟酸盐)的活性代谢物，将赋予对于流感病毒激发的感染抗性。

在临床研究中，以任何规定的浓度给予相应的前药抑制素未表现出预防性抗病毒效应，当在用抑制素进行治疗的正常条件下的活性抑制素羟酸盐的鼻内浓度时，这种活性代谢物并没有达到所需要的浓度以预防流感病毒附着和感染到对于流感病毒具有特异亲合性的鼻/胸上皮细胞。

发明内容

根据本发明的一方面，提供了一种药物组合物，其包含至少一种抑制素或其前药以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

在一具体实施方式的药物组合物中，抑制素是抑制素羟酸盐。

在另一具体实施方式的药物组合物中，抑制素是洛伐他汀羟酸钠盐，即，Mevinolinic酸。

在另一具体实施方式的药物组合物中，抑制素前药是选自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀组成的组。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含至少一种抑制素或其前药、抗病毒化合物以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

在一具体实施方式的药物组合物中，抑制素或其前药配制在β-羟基环糊精中。

在一具体实施方式的药物组合物中，其进一步包括适宜的第二抗病毒化合物。

在进一步的具体实施方式的药物组合物中，第二抗病毒化合物选自由利巴韦林、三环癸胺、金刚乙胺、奥塞米韦(达菲^，Tamifelu^TM)或扎那米韦组成的组。

根据本发明的另一方面，提供了所述药物组合物在制备用于治疗或预防人类感染A型流感的药物中的应用。

根据本发明的另一方面，提供了所述药物组合物在制备用于预防人感染甲型肝炎的药物中的应用。

根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗或预防人感染A型流感的方法，该方法包括以下步骤：

提供一种包含至少一种抑制素或其药用活性盐或其前药的组合物，以及

将有效治疗量的所述组合物给予至需要治疗的受治疗者。

在各具体实施方式中，抑制素可以是至少一种抑制素羟酸盐。在优选的具体实施方式中，抑制素是洛伐他汀羟酸钠盐，这种化合物也称作Mevinolinic酸(Mevinolinic Acid)，该化合物具有444,54的分子量和CAS号[75225-50-2]。

在一具体实施方式中，洛伐他汀由以下化学结构所定义：

在另外的一具体实施方式中，也称作Mevinolinic酸的洛伐他汀羟酸钠盐具有以下结构式：

在本文中提及“抑制素”时，该术语用来包括游离碱形式的抑制素、或这样的抑制素的药用盐。另外，在提及抑制素的“前药”时，它是进一步用来包括前药的盐。

在某些具体实施方式中，抑制素前药可以选自由洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀组成的组。

在另外的具体实施方式中，抑制素前药可以是洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀的药用活性盐。在另一具体实施方式中，抑制素是洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀的羟酸盐。

在一具体实施方式中，抑制素是普伐他汀羟酸盐、辛伐他汀羟酸盐、或美伐他汀羟酸盐。

本发明的另一方面提供了至少一种抑制素或其前药在制备用于治疗人类的A型流感感染药剂中的应用。

本发明的又一个方面提供了一种用于治疗人类感染A型流感的药物组合物，其中所述组合物包含至少一种抑制素或其前药以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

在一具体实施方式中，组合物配制在β-羟基环糊精中。

本发明人也已经确定，本发明的抑制素或抑制素前药组合物可以与第二抗病毒组合物一起给予。这将提供联合疗法，其相对于具有特别高致病性的病毒感染可能具有实效。

因此，本发明的另一方面提供了一种用于预防或治疗人类感染A型流感的方法，该方法包括以下步骤：

提供一种包含至少一种抑制素或其前药的组合物，

将有效治疗量的所述组合物给予需要治疗的受治疗者，以及

进一步给予有效治疗量的适宜的第二抗病毒化合物。

在各具体实施方式中，抑制素可以是至少一种抑制素羟酸盐(例如，洛伐他汀羟酸钠盐，也称作Mevinolinic酸)。

在另外的具体实施方式中，抑制素前药可以选自由洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀组成的组。

在一具体实施方式中，抗病毒化合物是与抑制素或抑制素前药组合物一起给予的，然而，在另外的具体实施方式中，第二抗病毒化合物可以在给予抑制素或抑制素前药组合物之前或之后给予。

在优选的具体实施方式中，第二抗病毒化合物可以选自由利巴韦林(ribavirin)、三环癸胺、金刚乙胺、奥塞米韦(oseltamivir)(达菲^，Tamifelu^TM)或扎那米韦(zanamivir)组成的组。

根据本发明的又一个方面，提供了抑制素或抑制素前药和抗病毒化合物在制备用于治疗或预防感染A型流感的复方药物(combined medicament)中的应用。

在优选的具体实施方式中，第二抗病毒化合物可以选自由利巴韦林、三环癸胺、金刚乙胺、奥塞米韦(达菲^，Tamifelu^TM)或扎那米韦组成的组。

本发明的又一个方面提供了一种用于治疗人类感染A型流感感染的药物组合物，其中所述组合物包含至少一种抑制素或其前药、抗病毒化合物以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

在一具体实施方式中，组合物配制在β-羟基环糊精中。

抑制素不仅至少部分有效地抑制A型流感病毒的感染，而且有效地降低病毒传播到未感染细胞的速度。在一具体实施方式中，抑制素或其前体在制备用于治疗感染A型流感的个体或具有被A型流感感染危险的个体的药物中应用。由于抑制素或其前体在感染性水平起作用，所以它们和抗病毒化合物协同地作用，其中抗病毒化合物通过其它方式起作用以预防病毒感染和传播。

本发明人已进一步确定，抑制素化合物及其羟酸盐可用作预防药，用于预防人感染肝炎病毒，尤其是丙型肝炎。

因此，在本发明的又一个方面提供了一种用于预防人感染A型流感的方法，该方法包括以下步骤：

提供一种包含至少一种抑制素或其前药的组合物，

将有效治疗量的所述组合物给予至需要治疗的受治疗者。

在一具体实施方式中，该方法进一步包括进一步给予有效治疗量的适宜的第二抗病毒化合物的步骤。

在本发明的又一个方面，提供了抑制素或抑制素前药以及抗病毒化合物在制备用于预防感染肝炎病毒的药物中的应用。在一具体实施方式中，肝炎病毒是丙型肝炎。

本发明的又一个方面提供了用于预防人感染甲型肝炎的药物组合物，其中所述组合物包含至少一种抑制素或其前药以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

抑制素化合物的合成

本文中披露的活性化合物，即，抑制素羟酸盐，可以合成或分离自作为原料的天然来源如红曲(red yeast rice)。Mevinolinic酸(洛伐他汀羟酸盐)是红曲的一种已知成分。

治疗/疗法

在本文中术语“治疗”用来指任何可以有利于人或非人动物的方案(regimen)。治疗可以是相对于现有状态或可以是预防性的(预防性治疗)。治疗可以包括治愈效应、减轻效应或预防效应。

更具体地说，本文中提及“治疗性”和“预防性”治疗时应在最广泛的范围内加以理解。术语“治疗性的”并不一定意味着受治疗者被治疗直到完全恢复。类似地，“预防性的”并不一定指受治疗者不会最后得病。

因此，治疗性和预防性治疗包括改善特定状态的症状或预防或其他降低形成特定状态的危险。术语“预防性的”可以看作是降低特定状态的严重性或发作。“治疗性的”也可以降低现有状态的严重性。

给药

本发明的抑制素或其前体可以单独给予，但优选作为药物组合物的一部分给予，其中药物组合物通常还包含适宜的药用赋形剂、稀释剂或载体，其根据预计的给药途径加以选择。

本发明的抑制素产品可以通过任何适宜的途径给予需要治疗的患者。精确剂量将取决于多种因素，这些因素包括要给予的抑制素形式的精确特性。

给药途径可以包括：肠外(包括借助于例如滴液贴片(drippatch)的皮下、肌内、静脉内)途径，一些另外的适宜的给药途径包括(但不限于)口服、直肠、鼻内、局部(包括口腔和舌下)、输注、阴道、皮内、腹膜内、颅内、鞘内以及硬膜外给药，或借助例如雾化器或吸入器，或借助植入物通过口腔或鼻吸入的给药。

在优选的具体实施方式中，组合物可作为可注射组合物递送，口服给药，或作为气雾剂通过口腔或鼻吸入给予肺部。

对于通过口腔或鼻吸入途径的给药，活性组分优选是在适宜的药剂剂型中，并且可以利用包括但不限于吸入器或雾化器装置的机械形式加以递送。其中机械形式包括但不限于吸入器或雾化器装置。

另外，在使用口腔或鼻吸入途径的情况下，可以使用SPAG(小颗粒气雾剂发生器)进行给药。

对于静脉注射，活性组分具有肠外可接受的水溶液形式，其是无热原的(pyrogen-free)、并具有适宜的pH值、等渗性以及稳定性。使用例如等渗载体，如氯化钠注射液、林格注射液(Ringer’sinjection)、乳酸盐化林格注射液(Lactated Ringer’s injection)，本领域技术人员可以很好地制备适宜的溶液。需要时，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。

用于口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、散剂或液体形式。片剂可以包括固体载体如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体如水、凡士林、动物或植物油、矿物油或合成油类。可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖类溶液或二醇如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。

还可以通过微球体、脂质体、其它微粒递送系统或放置在某些组织(包括血液)中的缓释剂型来给予组合物。

可以根据本发明加以使用的上述技术和方案以及其它技术和方案的实例，可以在下述文献中找到：Remington’s PharmaceuticalScience，18th edition，Gennaro，A.R.，Lippincott Williams & Wilkins；20th edition(December 15，2000) ISBN 0-912734-04-3以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems；Ansel，H.C.，et al.7th Edition ISBN 0-683305-72-7，将其全部内容结合于此作为参考。

药物组合物

如上所述，本发明延伸到药物组合物，其包括用于治疗疾病的抑制素或其前药。根据本发明的组合物和根据本发明的应用除了活性组分(即，至少一种抑制素)以外，还可以包含药用赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其它物质。上述物质应该是非毒性的并且应该不干扰活性组分的效力。

剂量

优选以“有效治疗量”将抑制素给予个体，这足以对个体显示益处。实际给予的量、以及给药速率和时间进程将取决于要治疗的疾病的特性和严重性。治疗处方例如剂量等的确定，最终是普通医师(全科医师)和其它医生的责任并由他们判断，并且通常考虑到要治疗的病症、患者个体的状况、递送部位、给药方法以及医师所知道的其它因素。

除非上下文中另有要求，本发明的每个方面的优选特点和具体实施方式是就在细节上已作必要改动的每个其它方面而论的。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属技术领域的普通技术人员通常所理解的含意。

在整个说明书中，除非上下文中另有要求，术语“包含”或“包括”应理解为意味着包括所陈述的整体或整体的组，但不排除任何其它整体或整体的组。

附图说明

图1示出了Mevinolinic酸对流感H5N1的影响的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加，病毒抑制的水平的变化。

图2示出了Mevinolinic酸对流感H5N1的影响的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加，病毒抑制的水平的变化。

图3示出了Mevinolinic酸对流感H5N1的影响的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加，病毒抑制的水平的变化。

具体实施方式

现将参照以下实施例来描述本发明，其中实施例是用来说明而不是用来限制本发明。

本发明涉及预防性治疗可能暴露于任何菌株的流感病毒的脊椎动物(包括人)的方法，其通过给予所述脊椎动物或人至少一种抑制素羟酸盐(例如，洛伐他汀羟酸钠盐，其也称作Mevinolinic酸)。

这是意料不到的和重要的，因为它使得首次可获得一种化学个体，如果给予该化学个体的话则可以预防感染流感病毒，并且其作用方式似乎并不依赖于抑制流感病毒的任何特定的酶，因为借助本专利说明的化合物，耐受两种已知抗流感化合物的菌株也被阻止而不能形成有效感染。

实施例

实施例1-实验和预防方案

利用如在本专利范围内所描述的化合物对棉鼠(S.Hispidus)相对于A型流感/Wuhan(H3N2)进行预防性治疗。

对动物进行如下治疗：

第0天-步骤：

将70只6-8周龄的年轻成年棉鼠(S.Hispidus)分成7组，每组10只。将所有动物预放血并作耳标记，然后用指定制剂进行治疗：

组

A 未治疗/未感染

B 模拟治疗/Wuhan 107

C 化合物剂量1/Wuhan 107

D 化合物剂量2/Wuhan 107

E 化合物剂量3/Wuhan 107

F 0.5mg/ml的扎那米韦/Wuhan 107

G 1.75mg/ml的奥塞米韦/Wuhan 107

在C-G组鼻内接种0.1ml的指定制剂而H组用0.2ml进行胃管饲法。

第2天：重复C-G组的鼻内接种以及H组的胃管饲法。

第3天：重复C-F组的鼻内接种以及H组的胃管饲法。

第4天：用0.1ml体积的107 TCID 50(半数感染剂量)的A型流感/Wuhan鼻内感染B-H组。

第5天：使每组的5只动物安乐死，并除去双肺(lung bloc.)。分成三份用于病毒定量、组织病理学、以及细胞活素/趋化激素分析(TNF-α和IFN-α)。

第6天：对所有组中的剩余动物重复步骤5。

治疗方案

利用如在本文披露内容中所描述的化合物对棉鼠(S.Hispidus)相对于A型流感/Wuhan(H3N2)进行预防性治疗。

第0天-步骤：将70只6-8周龄的年轻成年棉鼠(S.Hispidus)分成7组，每组10只。将所有动物预放血和进行耳标记，然后用0.1ml的A型流感/Wuhan(H3N2)在鼻内感染B-H组。

组

A 未感染/未治疗

B Wuhan 107/模拟

C Wuhan 107/化合物剂量1

D Wuhan 107/化合物剂量2

E Wuhan 107/化合物剂量3

F Wuhan 107/0.5mg/ml的扎那米韦

G Wuhan 107/1.75mg/ml的奥塞米韦

第2天：用0.1ml的指定制剂鼻内治疗C-G组。通过胃管饲法用0.2ml的制剂治疗H组。

第3天：重复步骤2。

第4天：重复步骤2。

第5天：使每组的5只动物安乐死，并除去双肺。分成三份用于病毒定量、组织病理学、以及细胞活素/趋化激素分析(TNF-α和IFN-α)。

第6天：对所有组中的剩余动物重复步骤5。

实施例2-Mevinolinic酸(洛伐他汀羟酸钠盐)对A型流感H5N1体外复制的抑制效应的评价

材料和方法：

宿主细胞—使用了犬肾源细胞(Mardin Darby Canine Kidney，MDCK)，其已广泛用于分离流感病毒和确定抗流感效应。

H5N1病毒—通过WHO标准中心(WHO reference centre)证实了病毒分离菌是A型流感H5N1，并且全部基因组可在基因库( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBanK/index.html)获得。该病毒分离自在香港于1997年感染的人病例。使用的病毒种群(stock)是最初分离菌的第三代。

阳性对照—将已知对A型流感具有体外效应的利巴韦林(Ribavirin^TM)用作阳性对照。使用的利巴韦林浓度，已经确定为对于我们实验室相应的试验系统，可对流感H5N1产生抑制效应。

抗病毒测定—将两种通常使用的方法平行用于试验化合物Mevinolinic酸。第一种方法是“病毒产率降低测定”，其利用两种方式进行。在第一种方式(称作“无吸附”)中，将病毒接种物和各种浓度的试验化合物进行混合。在混合和温育30分钟以后，将病毒-药物混合物加入到包含MDCK细胞的试验孔中(一式三份)。然后通过标准噬菌斑测定(其量化感染病毒颗粒的量)来确定37℃下温育24小时后产生的病毒量。在第二种方式(称作“有吸附”)中，步骤基本上相同，不同之处在于将病毒接种物加入到MDCK细胞中，并在加入药物以前温育1小时。后一种方式使病毒能够在药物具有任何起作用的机会以前进入MDCK细胞中。因此，将“有吸附”方式用作验证测定，其用于在病毒进入以后靶向病毒生命周期过程的化合物。

在本研究中使用的第二种抗病毒测定是“空斑降低测定”。这是通常使用的用于确定抗病毒效应的方法。将病毒接种物加入到MDCK细胞中，其然后覆盖以含有各种药物浓度的半固体琼脂。半固体琼脂可限制由感染细胞释放的病毒的传播。因而，在温育24小时后观察到的每个空斑(噬菌斑)表示病毒的一个感染单位。

因而，在这个实施例中，进行了三种独立的抗病毒测定以证实Mevinolinic酸对A型流感H5N1的抑制效应。

结果：

(A)无吸附(同时加入Mevinolinic酸和病毒接种物)

试验的病毒：A型流感H5N1(1997年分离自人)

病毒接种物：1×10^-3pfu/细胞

药物浓度(μg/mL)	空斑数目	在病毒产率降低测定中的细胞毒性
药物浓度(μg/mL)	空斑数目	在病毒产率降低测定中的细胞毒性	100	0	有
50	0	有	100	0	有
50	0	有	25	96000	无
12.5	151000	无	25	96000	无
12.5	151000	无	6.25	166000	无
3.125	228000	无	6.25	166000	无
3.125	228000	无	1.5625	220000	无
0.78	239000	无	1.5625	220000	无
0.78	239000	无	0.39	244000	无
阳性对照，利巴韦林(10μg/mL)	11000	无	0.39	244000	无
阳性对照，利巴韦林(10μg/mL)	11000	无	病毒对照(没有药物)	240000	无

图1示出了根据这个实验获得的结果的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加病毒抑制的水平的变化。

(B)有吸附(病毒吸附后1小时加入Mevinolinic酸)

试验的病毒：A型流感H5N1(1997年分离自人的菌株)

病毒接种物：1×10^-3pfu/细胞

药物浓度(μg/mL)	空斑数目	细胞毒性
药物浓度(μg/mL)	空斑数目	细胞毒性	50	0	+/-
25	1000	无	50	0	+/-
25	1000	无	12.5	27000	无
6.25	30000	无	12.5	27000	无
6.25	30000	无	3.125	34000	无
1.5625	34000	无	3.125	34000	无
1.5625	34000	无	0.78	38000	无
0.39	40000	无	0.78	38000	无
0.39	40000	无	0.19	41000	无
0.097	43000	无	0.19	41000	无
0.097	43000	无	阳性对照，利巴韦林(5μg/mL)	0	无
病毒对照(没有药物)	54000	无	阳性对照，利巴韦林(5μg/mL)	0	无

图2示出了根据这个实验获得的结果的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加病毒抑制的水平的变化。

(C)空斑降低测定

试验的病毒：A型流感H5N1(1997年分离自人)

病毒接种物：加以调节以产生每孔约200个空斑

药物浓度(μg/mL)	第一孔的空斑数目	第二孔的空斑数目	第三孔的空斑数目	细胞毒性
药物浓度(μg/mL)	第一孔的空斑数目	第二孔的空斑数目	第三孔的空斑数目	细胞毒性	25	113	100	110	无
12.5	192	181	180	无	25	113	100	110	无
12.5	192	181	180	无	6.25	223	215	222	无
3.125	230	226	221	无	6.25	223	215	222	无
3.125	230	226	221	无	1.5625	240	246	243	无
0.78	257	264	258	无	1.5625	240	246	243	无
0.78	257	264	258	无	阳性对照，利巴韦林(5μg/mL)	134	131	132	无
病毒对照(没有药物)	260	263	269	无	阳性对照，利巴韦林(5μg/mL)	134	131	132	无

图3示出了根据这个实验获得的结果的曲线图，其描述说明了相对于Mevinolinic酸浓度的增加病毒抑制的水平的变化。

总结

这些实验的结果表明，Mevinolinic酸对A型流感H5N1病毒具有抑制效应，如由基于Mardin Dauby犬肾(MDCK)细胞的体外系统所证实的。当使用病毒产率降低方法时，Mevinolinic酸可降低病毒复制的50％，即，当和病毒接种物同时加入化合物时，抑制浓度50(IC50)为20.61μg/mL的药物浓度；而当Mevinolinic酸在病毒吸附1小时后加入时，IC50是15.22μg/mL。这表明化合物Mevinolinic酸是在病毒进入宿主细胞后的阶段起作用。当利用空斑降低测定进行进一步的实验时，Mevinolinic酸还显示出IC50为22.57μg/mL的抑制效应。

将所有在本说明书中提到的文献全部结合于此作为参考。对于本领域技术人员来说，在不偏离本发明的范围的情况下，对本发明所描述的具体实施方式的各种改进和变化是显而易见的。虽然结合特定的优选具体实施方式对本发明进行了描述，但应当明了，所要求保护的本发明不应当受限于这样的特定具体实施方式。实际上，对于本领域技术人员来说，所描述的实施本发明的方式的各种显而易见的改进都将包括在本发明的范围内。

Claims

1.一种药物组合物，包含至少一种抑制素或其前药以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述抑制素是抑制素羟酸盐。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述抑制素是洛伐他汀羟酸钠盐，即，Mevinolinic酸。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述抑制素前药是选自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀组成的组。

5.一种药物组合物，包含至少一种抑制素或其前药、抗病毒化合物以及药用赋形剂、载体或稀释剂。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述抑制素或其前药配制在β-羟基环糊精中。

7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其中，所述抑制素前药是选自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀组成的组。

8.根据权利要求5所述的药物组合物，其进一步包括适宜的第二抗病毒化合物。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述第二抗病毒化合物选自由利巴韦林、三环癸胺、金刚乙胺、奥塞米韦(达菲^，Tamifelu^TM)或扎那米韦组成的组。

10.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗或预防人类感染A型流感的药物中的应用。

11.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物在制备用于预防人感染甲型肝炎的药物中的应用。

12.根据权利要求5至9中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗或预防人类感染A型流感的药物中的应用。

13.根据权利要求5至9中任一项所述的药物组合物在制备用于预防人类感染甲型肝炎的药物中的应用。