CN101052656A - 具有宽的手性选择性的新手性柱 - Google Patents

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CN101052656A CNA200480043803XA CN200480043803A CN101052656A CN 101052656 A CN101052656 A CN 101052656A CN A200480043803X A CNA200480043803X A CN A200480043803XA CN 200480043803 A CN200480043803 A CN 200480043803A CN 101052656 A CN101052656 A CN 101052656A
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Abstract

本发明涉及具有基于多个脯氨酸基的手性固定相的通用手性柱。

Description

具有宽的手性选择性的新手性柱
政府支持
本发明与国立卫生研究院的资助号NIH 1R01GM63812-01和NIH1 R01 GM60637-01A1有关。美国政府对本发明享有权利。
发明领域
本发明涉及手性化学领域。更具体地，本发明涉及对映异构体的分离，所述对映异构体即其中原子或基团的排列使得2个分子不可重叠的异构体。
本发明人研究出了新的一类手性柱，其可以拆分大量的外消旋化合物。这些柱是稳定的，可以和很多的流动相溶剂一起使用。
发明背景
立体异构体是仅仅原子的空间定向彼此不同的分子。立体异构体一般分为非对映体或对映体；后者包括彼此互为镜像的分子，而前者则不是。表征特定立体异构体的原子的特定排列称作其光学构象，特定地由已知的次序规则来表示，例如+或-(也作D或L)和/或R或S。
尽管只是定向不同，但立体异构现象的实际作用是很重要的，例如许多化合物的生理和药理活性受到了其所包括的特定构象的强烈影响。的确，许多化合物只有当以给定的立体异构体形式使用时才有广泛应用。
活体通常只产生一对对映体中的一种。因此在淀粉的酵母发酵中仅产生(-)-2-甲基-1-丁醇；在肌肉收缩中仅产生(+)-乳酸；果汁仅包含(-)-苹果酸，由金鸡纳树仅能获得(-)-奎宁。在生物系统中，立体化学专一性是一种规律而不是异常现象，因为在这些系统中很重要的催化酶是有旋光活性的。例如糖(+)-葡萄糖在动物代谢中发挥重要作用，而且在发酵工业中是基本原料；但是，其光学对应体、或对映体(-)-葡萄糖既无法被动物代谢，也不能用酵母来发酵。这方面的其他例子包括霉菌-灰绿青霉菌，其仅消耗酒石酸的对映异构体混合物的(+)-对映体，而剩下完整的(-)-对映体。同时，氯霉素仅有一种对映体是抗生素；(+)-麻黄碱不仅不具有任何药物活性，而且它会干扰其对映体的药物活性。最后，在香精的领域里，对映体(-)-香芹酮提供了具有特征性气味的留兰香油，而其光学对应体(+)-香芹酮提供的则是黄蒿子类的香精。
因此，尽管酶和其他生物学受体分子具有手性结构，但可以通过不同的方法来吸收、活化和降解外消旋化合物的对映体。这种现象导致了在许多情况下，外消旋药物的两种异构体具有不同或者甚至相反的药理活性。为了认识这些不同效果，通常需要分别研究每种对映体的生理活性。在药学工业中的这种以及其他因素显著地促成了对对映体纯化合物的需求，因此需要进行手性色谱法。
因此，需要并且通常必须分离立体异构体，以获得具有旋光活性的化合物的有用类型。
关于这一点，当非对映体包括：具有不同物理性质例如熔点、沸点、在给定溶剂中的溶解度、密度、折光率等等的非对映体时，分离一般不是问题。这样，通过常规方法例如分馏、分步结晶或色谱法一般就可以把非对映体彼此分开。
另一方面，对映体则存在特别的问题，因为它们的物理性质是相同的。因此它们不能根据规则-特别是外消旋物的形式时-通过普通方法来分离；不能通过分馏分离，因为它们的沸点相同；不能通过常规的结晶分离，因为(除非溶剂是旋光活性的)它们的溶解度相同；不能通过常规的色谱分离，因为(除非吸附剂是旋光活性的)它们都相同地保留在吸附剂上。下列事实进一步加重了分离对映体的问题：常规的合成技术几乎总是产生对映体的混合物。当混合物包含等量具有相反光学构象的对映体时，我们称之为外消旋化合物。把外消旋化合物分离成各自的对映体一般称之为拆分；其是相当重要的一种方法。
对可以拆分大量外消旋化合物的手性柱(通用手性柱)有较高的需求。在许多实验室，特别是制药工业中一般都需要它们。在本发明之前，Daicel柱、大环抗生素柱和Whelk-O柱是这种类型的通用手性柱的工业领先者。本发明人发展出了一类新的基于使用脯氨酸及其类似物的通用手性柱。
此外；而且重要的是，本发明的柱具有拆分至少相似或更高百分比的受试化合物的能力。此外，本发明的柱为一些受试化合物提供了更好的分离，其可以拆分某些不能用上述列举的常规使用的商业性柱拆分的化合物。
本发明的柱是稳定的，而且可以与大量的流动相溶剂一起使用。因此，本发明的柱作为通用手性柱应当会发现重要的应用。
过去，人们制造了大量的手性柱；但是仅有一些显示了较宽的手性选择性。如上所述，成功的例子包括通用的Daicel柱、Chirobiotic柱和Whelk-O1/2柱。制备Daicel柱，包括用糖类衍生物涂敷于硅胶上。制备Chirobiotic柱，包括将大环糖肽固定于硅胶上。Whelk-O1/2柱包含富电子和缺电子的芳香化合物。这些柱具有较宽的手性选择性，已经成功地应用于拆分相当数量的外消旋化合物。它们具有不同的选择性和稳定度曲线。在一些情况下它们的选择性互相补充，而在另一些情况中它们互相重复。一些柱更适合于反相的情况，另一些则适合正相的情况。每个柱都有它自己的长处和缺点。尽管有这样的进展，仍然有很多不能用商业销售的柱分离或很好地分离的化合物。因此，仍然存在对发展具有相对较宽的手性选择性的新柱的显著需求。
发明简述
本发明涉及一种手性选择器，其在对映体分离领域是改进的。因此，本发明的一个实施方案是具有基于多个脯氨酸的手性选择器的通用手性柱。
本发明的另一个实施方案是由具有2或更多脯氨酸的肽制成的手性固定相，包括具有2，3，4，5，6，或10个脯氨酸的手性选择器。在本发明的范围内也包括脯氨酸的类似物和异构体，以及本发明的手性选择器化合物的类似物和异构体。
本发明的另一个实施方案是下列通式的手性固定相(或柱)，：
Figure A20048004380300091
其中n是2或更大的任意整数，及其类似物和异构体。本发明的另一个实施方案是，其中n是2-10的任意整数。
所得到的对分析物的分离与在Daicel AD、Chirobiotic AD和Whelk-O2柱上所完成的是等同的，或者更好。本发明的基于多个脯氨酸的手性柱显示了作为更好的通用手性柱的前途。
附图简述
附图1显示的是氨基酸L-脯氨酸和其相关的固定相Fmoc-Pro-(Me)Ahx-APS(CSPI)，Fmoc-Pro2-(Me)Ahx-APS(CSP2)，Fmoc-Pro4-(Me)Ahx-APS(CSP3)；和Fmoc-Pro6-(Me)Ahx-APS(CSP4)的结构。CSP2-4是本发明化合物的实施方案。
附图2显示的是本发明一个实施方案的合成，Fmoc-Pro4-(Me)Ahx-APS手性固定相(CSP3)：Fmoc-Pro4-(Me)Ahx-APS手性固定相(CSP3)的合成：(a)Fmoc-(Me)Ahx-OH，DIC；(b)(1)哌啶；(2)Fmoc-Pro-OH，HATU；(c)AcOH；(d)氨基丙基-硅胶，HATU。
发明详述
本发明人发展出了与作为工业标准或工业模型的Daicel柱和Whelk-O2柱相比具有相对较宽的手性选择性的新手性柱。此外，本发明的手性柱在很多流动相的情况中是稳定的。
本发明的手性柱的成功率与过去数十年发展的最好的商业销售的通用手性柱是相当的。对于根据其可用性而选择的22种外消旋化合物，我们的Pro4柱(CSP 3)拆分了17种化合物；我们的Pro2柱(CSP 2)拆分了16种化合物；我们的Pro6柱(CSP 4)拆分了15种化合物。相比之下，Daicel OD柱拆分了18种，Daicel AD拆分了16种，Whelk-O2柱拆分了15种化合物。单脯氨酸柱(CSPI)的有效性要低得多，因为它们仅能拆分22种受试化合物中的6种。用单脯氨酸柱完成的拆分也是非常适当的。
在许多方面，脯氨酸是一种独特的氨基酸(附图1)。与在其他α-氨基酸中含有的主要是氨基不同，它包含的是仲胺。由于其环结构，限制了围绕氮-α-碳键的旋转。同样由于其环结构，理论上脯氨酸不适合于α-螺旋或β-片状构象；相反，脯氨酸形成了其自身独特的螺旋状构象(聚脯氨酸I和聚脯氨酸II)。与其他的寡肽相比，聚脯氨酸中的酰胺键是立体阻碍的。聚脯氨酸明显不同的构象和结构特征暗示，它们与在手性色谱中已经研究的其他短的寡肽相比表现可能非常不同。
本发明人发现了，基于脯氨酸的手性选择器，包括基于四脯氨酸的手性固定相3(附图1)、基于二脯氨酸的手性固定相2，基于六脯氨酸的手性固定相4的实施方案，具有相对较宽的手性选择性，而单-脯氨酸固定相1在很大程度上是无效的。
将本发明的手性选择器1固定在硅胶上是通过连接基来实现的。本发明的连接基的一个例子是N-烷氨基。第二个例子是N-甲氨基。另一个例子是6-N-甲氨基己酸。由于N-甲基或N-烷基，这些连接基和脯氨酸残基之间的酰胺键具有更大的立体位阻。本领域的普通技术人员可以根据所要测试的分析物来选择具体的连接基。例如，当用6-甲氨基己酸固定选择器Fmoc-Pro-Pro时，它可以从约22种受试的分析物中拆分出约16种。对于相同的手性选择器，当用6-氨基己酸固定时，它仅能从相同组的分析物中拆分出4种来。
此外，本发明的固定相化合物可以包含各种本领域已知的各种封端基团。
在本发明中使用的术语脯氨酸，应当理解为也包括脯氨酸的类似物和异构体。例如包括所有的立体异构体。
此外，包括类似物。其中所包括的类似物的例子是在例如D-脯氨酸、羟脯氨酸和2-哌啶酸中具有如下骨架结构特征的那些：
Figure A20048004380300111
其中n是整数(例如1，2，3，4，5等等)，X是杂原子例如O，S，N；并且其他非指定的原子可以是碳或杂原子。
本发明的这些共价结合柱在通常的有机溶剂包括CH2Cl2和CHCl3中是稳定的。因此在方法的研究中可以较宽范围地选择流动相条件。对于一些分析物，本发明试图用CH2Cl2/己烷作为流动相来拆分，也可以实现有效的分离(实施例6)。当一些外消旋分析物仅能溶解在一些溶剂中并且一些化合物可以更好地溶解一些溶剂中时，较宽的溶剂选择就具有了益处。
从分析物可能的相互作用方式来看，本发明的手性选择器的例子是与分析物形成了有吸引力的氢键，它们也可以与分析物具有有吸引力的极性相互作用。此外，在分析物和手性选择器之间的空间相互作用也是重要的。
下列的实施例和试验部分实际上纯粹是为了举例示范。因此，该部分不应当被认为是对本发明的限制。
实施例
在本部分的上下文中，使用了各种缩写，包括如下：DIC，二异丙基碳二亚胺；HATU，六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑基-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲；DIPEA，N，N-二异丙基乙胺；DMF，N，N-二甲基酰胺；DCM，二氯甲烷；DMAP，4-(二甲基氨基吡啶)；NMM，N-甲基吗啉；Fmoc，9-芴甲氧羰基；(Me)Ahx，6-甲基氨基己酸；Fmoc-(Me)Ahx-OH，6-[(9H-芴基-9-基甲氧基)羰基]甲基氨基己酸；Fmoc-Ahx-OH，6-[(9H-芴基-9-基甲氧基)羰基]氨基己酸；Fmoc-Pro-OH，N-α-Fmoc-L-脯氨酸。
一般的辅助材料和设备：
氨基酸衍生物是购自NovaBiochem(San Diego，CA)。其它所有化学品和溶剂购自Aldrich(Milwaukee，WI)，Fluka(Ronkonkoma，NY)或Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。HPLC级Kromasil硅胶(粒径5μm，孔径100，表面积298m2/g)购自Akzo Nobel(EKA Chemicals，Bohus，Sweden)。来自Fisher Scientific的Selecto硅胶(32-63μm)用于目标化合物的快速柱色谱纯化。用EM硅胶60F-254TLC平板(0.25mm；E.Merck，Merck KGaA，64271Darmstadt，德国)来完成薄层色谱法。通过Atlantic Microlab，Inc.(Norcross，GA)进行元素分析。用Beckman分析梯度系统(System Gold)完成HPLC分析。用ShimadzuUV 201色谱仪(单元格容积3mL；单元格通过长度10mm)获得UV光谱。
实施例1：手性固定相Fmoc-Pro-(Me)Ahx-APS(CSPI)的制备
向0.80g的(Me)Ahx-APS硅石(表面(Me)Ahx浓度是0.64mmol/g)中加入在8mL DMF中的Fmoc-Pro-OH(3份当量，0.52g)，HATU(3份当量，0.58g)和DIPEA(3份当量，0.20g)的混合物。搅拌6小时后，过滤收集所得到的硅石，并用DMF、甲醇和DCM洗涤，以得到所需的手性固定相。根据Fmoc分裂法确定表面Pro浓度是0.57mmol/g。用标准匀浆填充法将所得到的手性固定相装入50×4.6mmHPLC柱中。
实施例2：手性固定相Fmoc-Pr02-(Me)Ahx-APS(CSP2)的制备
向0.80g的(Me)Ahx-APS硅石(表面(Me)Ahx浓度是0.64mmol/g)中加入在8mL DMF中的Fmoc-Pro-OH(3份当量，0.52g)，HATU(3份当量，0.58g)和DIPEA(3份当量，0.20g)的混合物。搅拌6小时后，过滤收集所得到的硅石，并用DMF、甲醇和DCM洗涤。根据Fmoc分裂法确定表面Pro浓度是0.55mmol/g。然后用在包含10mL 20％(V/V)哌啶的DMF中的硅石处理1小时来除去Fmoc保护基。过滤收集脱保护的硅石Pro-(Me)Ahx-APS，并用DMF、甲醇和DCM洗涤。然后在相同顺序的反应后将另一个模块Fmoc-Pro-OH结合到所得的硅石上，在硅胶上得到所需的手性选择器。根据Fmoc分裂法确定表面Fmoc浓度是0.52mmol/g。用标准匀浆填充法将所得到的手性固定相装入50×4.6mm HPLC柱中。
实施例3：手性固定相Fmoc-Pro4-(Me)Ahx-APS(CSP3)的制备
向用DCM(20mL，30分钟)预溶胀的Rink酸性树脂(100-200目，3.0g，0.43mmol/g)中加入在DCM-DMF(1∶1V/V，10mL)中的Fmoc-(Me)Ahx-OH(1.42g，3.87mmol)，DMAP(0.16g，1.29mmol)，NMM(0.39g，3.87mmol)，和DIC(0.49g，3.87mmol)的混合物。搅拌6小时后，过滤收集树脂，并用DMF、DCM和甲醇(20mL×3)洗涤。用在DMF中的20mL 20％(V/V)哌啶处理30分钟来除去Fmoc保护基。收集脱保护的(Me)Ahx-O-Rink树脂，并用DMF、DCM和甲醇(20mL×3)洗涤。
向(Me)Ahx-O-Rink树脂中加入在20mL无水DMF中的Fmoc-Pro-OH(1.31g，3.87mmol)，HATU(1.47g，3.87mmol)，和DIPEA(0.50g，3.87mmol)的混合物。搅拌3小时后，过滤该树脂，并用DMF、DCM和甲醇(20mL×3)洗涤。
然后除去Fmoc基，通过与上述完全相同的方法结合第二、第三和第四模块Fmoc-Pro-OH，得到所需的Fmoc-(Pro)4-(Me)Ahx-O-Rink树脂。
然后用在DCM(20mL，10分钟)中的1％TFA处理该树脂，以从树脂中释放Fmoc-(Pro)4-(Me)Ahx-OH。将该断裂反应再重复几次以确保完全反应。通过在硅胶上(流动相：在DCM中的5％甲醇)的快速色谱法纯化所得到的粗品，得到所需的Fmoc-(Pro)4-(Me)Ahx-OH白色固体(0.90g，92％)。1H NMR(CD2Cl2)：δ1.2-1.7(m，6H)，1.9-2.4(m，18H)，2.80(s，3H)，3.2-3.6(m，10H)，4.2-4.7(m，7H)，7.1-7.6(m，8H)，9.6(br，1H)。ESI-MS：m/z 756.0(M+H+)。
取在8mL的无水DMF中的Fmoc-(Pro)4-(Me)Ahx-OH(0.90g，1.19mmol)，HATU(0.45g，1.19mmol)，和DIPEA(0.15g，1.19mmol)的混合物加入到0.7g的3-氨基丙基硅胶(APS)中。APS是由Kromasil硅胶(5μm球形硅石，100，298m2/g)和3-氨基丙基三乙氧基硅烷制成的。根据氮的元素分析数据(C，3.11；H，0.83；N，0.93)，表面氨基浓度是0.66mmol/g。混合物搅拌4小时后，过滤收集固定相，并用DMF、DCM和甲醇(10mL×3)洗涤。根据Fmoc分裂法确定表面Fmoc浓度是0.27mmol/g。用标准匀浆填充法将所得到的手性固定相装入50×4.6mm HPLC柱中。
下列的实施例显示的是不同的色谱测定。其中保留因子(k)等于(tr-t0)/t0，其中tr是保留时间，t0是空载时间。分离因子(α)等于两个对映体的保留因子k2/k1的比。分离因子为1则说明没有分离。分离因子越大，分离得越好。用1，3，5-三-叔丁基苯作为空体积标记来测定空载时间。流速1ml/分钟，在254nm UV检测。
实施例4
本实施例比较了用手性柱进行的外消旋化合物的色谱分离，包括本发明的实施方案(Pr02(CSP2)、Pro4CSP3)、Pro6(CSP4))。在下列表格中，k1是保留最少的对映体的保留因子，分离因子(α)如前定义。本实施例也显示了，单-脯氨酸手性柱完成得不充分。
此外，本实施例显示了本发明的实施方案与已知的商业化柱的比较。
表1：用手性柱进行外消旋化合物的色谱拆分。k1是保留最少的对映体的保留因子。流动相是特定比例的IPA和乙酸的己烷溶液。
Figure A20048004380300151
实施例5：用于示范目的本发明的固定相化合物和硅石载体的具体实施方案
本实施例列举了本发明的聚-脯氨酸化合物，包括具有不同封端基团的实施方案。封端基团与离载体更远的氮原子结合。在本实施例中需要注意的是，对于一些分析物来说一些封端基团例如特戊酰(PIV)(CSP-6)要比其它的例如TAPA更有效。总的来说，一些可以在本发明中使用的不同的封端基团例如Piv、Fmoc、Boc、Cbz、Aca、Dmb、Tpa都能很好地运行。不具有封端基团的CSP-5对于一些分析物是无法运行的。
Figure A20048004380300181
Figure A20048004380300191
                                                                表2：封端基团的影响
  分析物名称   CSP-5   CSP-6   CSP-2   CSP-7   CSP-8   CSP-9   CSP-10   CSP-11   CSP-12
  苯偶姻   α：1k1：5.843％IPA   α：1.12k1：6.343％IPA   α：1.07k1：8.223％IPA   α：1.07k1：4.453％IPA   α：1.08k1：4.633％IPA   α：1k1：7.713％IPA   α：1k1：19.023％IPA   α：1.10k1：7.763％IPA   α：1.07k1：6.003％IPA
  氢化苯偶姻   α：1.07k1：16.714％IPA   α：1.22k1：17.004％IPA   α：1.12k1：21.154％IPA   α：1.11k1：10.714％IPA   α：1.11k1：13.334％IPA   α：1.10k1：16.814％IPA   α：1.14k1：26.414％IPA   α：1.13k1：18.094％IPA   α：1.16k1：15.174％IPA
  苯偶姻肟   α：1k1：11.4420％IPA   α：1.12k1：14.6520％IPA   α：1.09k1：16.0820％IPA   α：1k1：10.0920％IPA   α：1k1：12.2320％IPA   α：1k1：13.4420％IPA   α：1k1：16.0320％IPA   α：1.10k1：15.0020％IPA   α：1.08k1：11.7120％IPA
  2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇   α：1k1：17.2310％IPA   α：1.58k1：22.410％IPA   α：1.28k1：23.4410％IPA   α：1.28k1：15.0810％IPA   α：1.33k1：15.8210％IPA   α：1.16k1：20.0210％IPA   α：1.28k1：31.5940％IPA   α：1.30k1：20.4710％IPA   α：1.40k1：16.0310％IPA
  α-(五氟乙基)-α-(三氟甲基)苯甲醇   α：1k1：9.723％IPA   α：1.14k1：8.893％IPA   α：1.06k1：16.083％IPA   α：1.11k1：7.553％IPA   α：1.10k1：5.763％IPA   α：1.06k1：6.183％IPA   α：1.10k1：8.133％IPA   α：1.09k1：13.803％IPA   α：1.09k1：5.753％IPA
  华法林   α：1k1：41.1090％IPA   α：1.20k1：12.4110％IPA&1％AcOH   α：1.11k1：10.5710％IPA&1％AcOH   α：1k1：19.5325％IPA   α：1.16k1：11.5510％IPA&1％AcOH   α：1.12k1：14.3410％IPA&1％AcOH   α：1k1：28.6110％IPA&1％AcOH   α：1.16k1：13.4125％IPA   α：1.14k1：12.6810％IPA&1％AcOH
  仲苯乙基乙醇   α：1k1：6.471％IPA   α：1.08k1：8.421％IPA   α：1.02k1：11.31％IPA   α：1.03k1：6.301％IPA   α：1k1：6.021％IPA   α：1k1：6.841％IPA   α：1k1：9.371％IPA   α：1k1：19.341％IPA   α：1k1：1.901％IPA
  α-甲基-2-萘甲醇   α：1k1：15.301％IPA   α：1k1：17.311％IPA   α：1k1：22.361％IPA   α：1k1：13.071％IPA   α：1.02k1：12.961％IPA   α：1.10k1：14.891％IA   α：1k1：17.155％IPA   α：1.04k1：7.651％IPA   α：1k1：1.191％IPA
  1-二氢苊醇(I·Accnophlhenol)   α：1k1：8.123％IPA   α：1k1：10.783％IPA   α：1k1：13.363％IPA   α：1k1：7.343％IPA   α：1k1：8.453％IPA   α：1k1：11.043％IPA   α：1k1：21.417％IPA   α：1k1：13.903％IPA   α：1k1：8.953％IPA
  3-苯基-缩水甘油   α：1k1：9.543％IPA   α：1k1：11.133％IPA   α：1k1：5.643％IPA   α：1k1：10.753％IPA   α：1k1：9.123％IPA   α：1k1：11.293％IPA   α：1k1：20.853％IPA   α：1k1：15.493％IPA   α：1k1：9.783％IPA
  1，1′-B1-2-萘酚   α：1.05k1：13.3175％IPA   α：1.34k1：20.9075％IPA   α：1.16k1：32.8075％IPA   α：1.17k1：13.2175％IPA   α：1.17k1：17.0775％IPA   α：1.35k1：15.7375％IPA   α：1k1：28.6375％IPA   α：1.18k1：21.8975％IPA   α：1.30k1：19.5175％IPA
  2，2′-二醇-   α：1   α：1.08   α：1.17   α：1.06   α：1.14   α：1.33   α：1.34   α：1.24   α：1
  5，5′，6，6′，7，7′，8，8′-八氢-1，1′-二萘   k1：13.0310％IPA   k1：17.9210％IPA   k1：11.1010％IPA   k1：8.8010％IPA   k1：12.1610％IPA   k1：12.3310％IPA   k1：7.8310％IPA   k1：13.5410％IPA   k1：12.7310％IPA
  1，2，3，4-四氢-4-(4-甲氧苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶羧酸乙酯   α：1k1：11.5210％IPA   α：1.30k1：11.3415％IPA   α：1.18k1：18.6815％IPA   α：1.19k1：7.9115％IPA   α：1.15k1：12.9315％IPA   α：1.22k1：13.3615％IPA   α：1.48k1：23.0715％IPA   α：1.21k1：12.9815％IPA   α：1.26k1：9.6115％IPA
  1，2，3，4-四氢-4-(4-羟苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶羧酸乙酯   α：1.07k1：36.7270％IPA   α：1.49k1：39.0030％IPA   α：1.20k1：27.8050％IPA   α：1.40k1：23.1130％IPA   α：1.36k1：31.1430％IPA   α：1.37k1：27.1830％IPA   α：1.26k1：28.5640％IPA   α：1.40k1：24.6440％IPA   α：1.36k1：16.8030％IPA
  1-[1，2，3，4-四氢-4-(4-甲氧苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶基]乙基酮   α：1k1：26.5410％IPA   α：1.29k1：26.2715％IPA   α：1.20k1：40.6015％IPA   α：1.24k1：19.0015％IPA   α：1.11k1：32.9315％IPA   α：1.34k1：31.7215％IPA   α：1k1：50.8515％IPA   α：1.34k1：34.4515％IPA   α：1.23k1：17.3015％IPA
  环己烯巴比妥   α：1k1：29.921％IPA   α：1k1：11.511％IPA   α：1k1：22.281％IPA   α：1.22k1：7.211％IPA   α：1.10k1：13.111％IPA   α：1k1：15.021％IPA   α：1k1：9.742％IPA   α：1k1：14.941％IPA   α：1k1：15.271％IPA
  替马西泮   α：1k1：20.772％IPA   α：1k1：17.732％IPA   α：1k1：25.542％IPA   α：1k1：12.522％IPA   α：1k1：17.342％IPA   α：1k1：27.752％IPA   α：1k1：25.4410％IPA   α：1k1：20.242％IPA   α：1k1：27.302％IPA
  5-甲基-5-(2，5-二氯苯基)-乙内酰脲   α：1k1：9.3510％IPA   α：1.30k1：10.0015％IPA   α：1.16k1：14.615％IPA   α：1k1：12.3915％IPA   α：1k1：15.7815％IPA   α：1k1：8.2715％IPA   α：1k1：7.5215％IPA   α：1.22k1：9.9115％IPA   α：1.16k1：7.3015％IPA
  5-甲基-5-苯基乙内酰脲   α：1k1：18.128％IPA   α：1.18k1：17.918％IPA   α：1.10k1：25.008％IPA   α：1.08k1：12.938％IPA   α：1.16k1：14.718％IPA   α：1k1：13.548％IPA   α：1.16k1：13.448％IPA   α：1.10k1：19.008％IPA   α：1k1：14.258％IPA
  美芬妥英   α：1k1：7.422％IPA   α：1k1：5.732％IPA   α：1.14k1：7.862％IPA   α：1k1：5.432％IPA   α：1k1：5.432％IPA   α：1k1：6.272％IPA   α：1.10k1：9.742％IPA   α：1k1：8.092％IPA   α：1.07k1：9.002％IPA
  苯氨基-甲酸仲丁基酯(sec·Vutylcarbaonllats)   α：1.47k1：4.091％IPA   α：1k1：9.041％IPA   α：1k1：7.301％IPA   α：1.04k1：5.911％IPA   α：1k1：5.911％IPA   α：1k1：7.741％IPA   α：1k1：11.891％IPA   α：1k1：9.641％IPA   α：1k1：9.611％IPA
  扁桃酸甲酯   α：1k1：9.241％IPA   α：1.23k1：9.001％IPA   α：1.10k1：10.81％IPA   α：1k1：6.501％IPA   α：1k1：8.461％IPA   α：1.10k1：6.271％IPA   α：1k1：19.371％IPA   α：1k1：19.001％IPA   α：1k1：17.641％IPA
实施例6
本实施例比较了在两种流动相系统中用本发明的一个实施方案—Fmoc-Pro-Pro-Pro-Pro-N(Me)Ahx-APS(CSP-3)进行外消旋化合物的色谱分离的比较。相应地，本实施例有助于证明在不同流动相系统中本发明的手性固定相的适应性。
表3.在两种流动相系统中用Fmoc-Pro-Pro-Pro-Pro-N(Me)Ahx-APS(CSP-3)进行外消旋化合物的色谱分离
  分析物名称   IPA/Hex   DCM/Hex/MeOH
  苯偶姻   α：1.09k1：6.353％IPA   α：1.07k1：11.615％DCM在己烷中
  氢化苯偶姻   α：1.13k1：17.984％IPA   α：1.12k1：12.9340％DCM在己烷中
  苯偶姻肟   α：1.13k1：15.3620％IPA   α：1.08k1：15.85100％DCM
  2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇   α：1.56k1：18.4810％IPA   α：1.20k1：9.54100％DCM
  α-(五氟乙基)-α-三氟甲基)苯甲醇   α：1.10k1：8.913％IPA   α：1.06k1：28.2330％DCM在己烷中
  华法林   α：1.08k1：11.1910％IPA&1％AcOH   α：1k1：5.8430％DCM在己烷中&1％AcOH
  仲苯乙基乙醇   α：1.02k1：8.071％IPA   α：1.02k1：13.0810％DCM在己烷中
  α-甲基-2-萘甲醇   α：1.04k1：17.621％IPA   α：1k1：23.6610％DCM在己烷中
  1-二氢苊醇(I-Accnophthenol)   α：1k1：10.283％IPA   α：1k1：7.3130％DCM在己烷中
  3-苯基-缩水甘油   α：1k1：6.773％IPA   α：1k1：7.3930％DCM在己烷中
  1，1′-B1-2-萘酚   α：1.29k1：23.83   α：1.06k1：12.21
  75％IPA   1％MeOH在己烷中
  2，2′-二醇-5，5′，6，6′，7，7′，8，8′-八氢-1，1′-二萘   α：1.32k1：10.9510％IPA   α：1k1：12.0850％DCM在己烷中
  1，2，3，4-四氢-4-(4-甲氧苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶羧酸乙酯   α：1.24k1：12.6015％IPA   α：1.18k1：6.2660％DCM在己烷中
  1，2，3，4-四氢-4-(4-羟苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶羧酸乙酯   α：1.41k1：25.0730％IPA   α：1.19k1：12.723％MeOH在己烷中
  1-[1，2，3，4-四氢-4-(4-甲氧苯基)-6-甲基-2-硫代-5-嘧啶基]乙基酮   α：1.21k1：25.7215％IPA   α：1.22k1：12.2060％DCM在己烷中
  环己烯巴比妥   α：1k1：16.981％IPA   α：1k1：8.0830％DCM在己烷中
  替马西泮   α：1k1：20.242％IPA   α：1k1：4.6210％DCM在己烷中
  5-甲基-5-(2，5-二氯苯基)-乙内酰脲   α：1.17k1：8.5515％IPA   α：1.12k1：13.56100％DCM
  5-甲基-5-苯基乙内酰脲   α：1.15k1：15.68％IPA   α：1.11k1：18.51100％DCM
  美芬妥英   α：1.14k1：6.932％IPA   α：1.17k1：17.1020％DCM在己烷中
  苯氨基-甲酸仲丁基酯(scc-Butyl carbanllate)   α：1k1：7.641％IpA   α：1.12k1：4.1610％DCM在己烷中
  扁桃酸甲酯   α：1.17k1：8.311％IPA   α：1k1：8.1810％DCM在己烷中
上面对本发明进行了描述，对于本领域技术人员显而易见地，对本发明可以做出各种的变更或变化而不脱离本发明的范围或精神。从对所公开的本发明的说明书和实施出发，本发明的其它实施方案对于本领域的技术人员也是显而易见的。因此，所附属的内容应当认为仅仅是举例说明，而不是限制本发明的范围和精神。
除非另有说明，表示各成分的量、性质例如分子量，反应条件、实验结果和在说明书和附属内容中所列出的所有数字都应当理解为是由术语“约”修饰的。因此，除非有相反的特定说明，数字都是近似值，其取决于本发明设法要获得的所需的性质。
                        参考文献
下列参考文献都以其整体引入本文作为参考。
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Claims (16)

1.下列结构式的手性固定相化合物：
Figure A2004800438030002C1
其中n是2或更大的任意整数，及其类似物和异构体。
2.权利要求1的手性固定相化合物，n是2到10的任意整数。
3.权利要求1的手性固定相化合物，其中载体是硅石载体。
4.权利要求1的手性固定相化合物，其中连接基是N-烷氨基。
5.权利要求4的手性固定相化合物，其中连接基是N-甲氨基。
6.权利要求4的手性固定相化合物，其中连接基是6-甲氨基己酸基。
7.权利要求1的手性固定相化合物，其中封端基团是Piv、Fmoc、Boc、Cbz、Aca、Tapa、Dmb、或Tpa基。
8.权利要求1的手性固定相，其中连接基是如下通式：
Figure A2004800438030002C2
其中n是整数，R是烷基，包括甲基。
9.权利要求1的手性固定相化合物，其中连接基是如下通式：
10.权利要求1的手性固定相化合物，其中封端基团是Piv、Fmoc、Boc基。
11.下列通式的权利要求1的手性固定相化合物：
Figure A2004800438030003C1
Figure A2004800438030004C1
及其类似物和异构体。
12.下列通式的手性选择器：
Figure A2004800438030004C2
其中n是2或更大的任意整数，及其类似物和异构体。
13.一种通过液相色谱法分离对映体混合物的方法，包括：
提供外消旋混合物；
提供一种手性柱，包括光学活性的多-脯氨酸化合物或其类似物或异构体；和
将混合物引入到该手性柱中。
14.权利要求13的方法，其中光学活性的多-脯氨酸化合物是如下通式：
Figure A2004800438030005C1
其中n是2或更大的任意整数，及其类似物和异构体。
15.权利要求13的方法，其中光学活性的多-脯氨酸化合物是如下通式：
Figure A2004800438030005C2
及其类似物和异构体。
16.下列通式的权利要求1的手性固定相化合物：
Fmoc-Pro-Pro-(Me)N-(CH2)5CO-NH(CH2)3硅石(CSP2)；
Fmoc-Pro-Pro-Pro-Pro-(Me)N-(CH2)5CO-NH(CH2)3硅石(CSP3)；
Fmoc-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-(Me)N-(CH2)5CO-NH(CH2)3硅石(CSP4)；
及其类似物和异构体。
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