CN101046461A - 一种电化学传感器及其制备方法和用途 - Google Patents
一种电化学传感器及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101046461A CN101046461A CN 200610018690 CN200610018690A CN101046461A CN 101046461 A CN101046461 A CN 101046461A CN 200610018690 CN200610018690 CN 200610018690 CN 200610018690 A CN200610018690 A CN 200610018690A CN 101046461 A CN101046461 A CN 101046461A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- walled carbon
- tubes
- carbon nano
- electrode
- terminal carboxyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 41
- 239000002048 multi walled nanotube Substances 0.000 claims abstract description 41
- 229910021397 glassy carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 36
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 claims abstract description 34
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 30
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 19
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 claims abstract description 13
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002715 modification method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 5
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 claims 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 12
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 abstract description 6
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 5
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 abstract description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 19
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 10
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 238000001903 differential pulse voltammetry Methods 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003738 black carbon Substances 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 2
- 101150100393 cml gene Proteins 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000835 electrochemical detection Methods 0.000 description 2
- 238000002509 fluorescent in situ hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical group N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明公开了一种电化学传感器及其制备方法和用途，将末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰在玻碳电极表面，通过共价修饰法将BCR/ABL的b3－a2型基因作为探针固定到碳纳米管的末端羧基上。通过探针DNA与靶DNA的杂交，选择姜黄素作为杂交指示剂，研究固定在修饰电极上的单链对其互补DNA的识别能力。由于碳纳米管的比表面积大，有利于DNA在电极表面的固定，另外碳纳米管良好的电子传递特性极大地增强了传感器的检测灵敏度。本发明实现了对慢粒融合基因在玻碳电极上的检测。该电化学传感器测定慢性粒细胞白血病基因不仅选择性和灵敏度高，而且实现了对慢性粒细胞白血病的早期诊断。
Description
所属技术领域：
本发明涉及生化工程、传感器和医学诊断技术，特别涉及一种用于慢性粒细胞白血病基因检测的DNA电化学传感器的制备方法和用途。
背景技术：
慢性粒细胞白血病，简称慢粒(chronic myelocytic leukemia，CML)，是伴有获得性染色体异常的多能干细胞水平的恶性病变而引起的一种细胞株病。其临床特征为显著的粒细胞过度生成。慢性粒细胞白血病是严重危害中青年健康的恶性血液病之一，为白血病中较常见的类型。慢性粒细胞白血病起病缓慢，早期常没有任何症状，给临床诊断造成困难。而早期诊断水平将直接影响白血病患者的治疗效果及生存质量，其重要意义不言而喻。
目前慢性粒细胞白血病的临床诊断方法主要包括染色体分析、Southern Blot、RT-PCR及FISH等技术，但这些方法均存在一定的局限性：染色体分析费时费力，且灵敏度低，灵敏度最高达到10-8mol/L；传统的Southern Blot检测虽特异性强，但对低拷贝基因序列的检测极不灵敏，不仅方法复杂，检测周期长，且价格昂贵兼有放射性污染，限制了临床上的广泛应用；RT-PCR操作繁琐、价格昂贵；FISH技术需要使用复杂的荧光显色系统，且相对灵敏度不高，临床大规模应用亦难以开展。因此开发研究一种简便、快速、准确、灵敏、经济的慢性粒细胞白血病基因检测技术具有极其广阔的应用前景，将有效解决慢性粒细胞白血病早期诊断这一临床迫切的实际问题，无疑具有极其重要的意义。
DNA电化学生物传感器是新近国际热点研究的一类新型DNA生物传感器，它是将单链的DNA(ssDNA)修饰到电极表面，构成探针DNA修饰电极，由于电极上的探针DNA与溶液中的互补链杂交的高度序列选择性，使得该DNA电极具有极强的分子识别能力。DNA探针分子与靶序列杂交，在电极表面形成双链的DNA(dsDNA)，从而导致杂交前后的电极表面结构的改变，这种杂交前后的差异可以通过电活性分子即杂交指示剂来识别，从而达到检测的目的。这种新型DNA电化学生物传感器具有灵敏度高、特异性高、响应快、操作简便、微型化、价格低廉等显著优点，因而在临床基因诊断、新药筛选、环境监测等多个领域具有巨大的潜在应用价值。
现代分子生物学研究表明费城(Ph)染色体为t(9；22)相互易位所致，其易位产物BCR/ABL融合基因发生于95％以上的慢性粒细胞白血病中，是恶性克隆的标志基因。
下面所述的为本发明人率先将具有灵敏、简便、经济等优点的DNA电化学生物传感器用于快速检测慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因，并首次设计出一种测定慢性粒细胞白血病基因的DNA电化学传感器：将末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰在玻碳电极表面，通过共价修饰法将BCR/ABL的b3-a2型基因作为探针固定到碳纳米管的末端羧基上。通过探针DNA与靶DNA的杂交，选择姜黄素作为杂交指示剂，成功实现了固定在修饰电极上的单链对其互补DNA的识别。由于碳纳米管的比表面积大，有利于DNA在电极表面的固定，另外碳纳米管良好的电子传递特性极大地增强了传感器的检测灵敏度。从而建立了高灵敏度、高特异性的慢性粒细胞白血病基因检测方法。今后，我们将在此新技术成功应用于慢性粒细胞白血病早期诊断的基础上，推广应用于其他类型肿瘤的早期诊断及筛选抗肿瘤新药工作中，因而本发明具有巨大的潜在应用价值和深远的意义。
发明内容：
本发明的目的是提供一种能用于慢性粒细胞白血病基因检测的DNA电化学传感器。本发明的另一目的是提供这种传感器的制法和用途。
本发明所述的电化学传感器，包括玻碳电极，其特殊之处在于玻碳电极的表面涂覆有敏感膜。所述的敏感膜由末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)和固定的探针基因组成，所述的探针基因通过其带有的氨基(-NH2)固定到末端羧基化的开口多壁碳纳米管的末端羧基上。所述的探针基因可采用由上海生工生物工程技术服务有限公司合成的，结构为5′-AGA GTT CAA AAG CCC TTC-3′(BCR/ABL)，其中基因片段5′带有氨基-NH2，5′-NH2-AGA GTT CAA AAG CCC TTC-3′是BCR/ABL的b3-a2型基因。
本发明的电化学传感器制备方法，依序包括如下步骤：1)多壁碳纳米管制备末端羧基化的开口多壁碳纳米管：一般先将多壁碳纳米管经HF酸浸泡除去铁等金属催化剂及其他杂质后，在浓硫酸和浓硝酸的混酸体积比例为1∶3中温度为120℃～130℃下回流1～2h，放置过夜，弃上清液，水洗涤至中性，冷冻干燥，即得末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)。2)将末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰在玻碳电极表面：称取适量的末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)，加到适量的DMF(N，N-二甲基甲酰胺)溶剂中，超声半小时使其分散均匀，得到0.1mg/ml～10mg/ml的黑色分散液，将此分散液适量滴加到处理好的玻碳电极表面，置于红外灯下，待溶剂挥发完全后即为末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)修饰玻碳电极。3)通过共价修饰法将BCR/ABL的b3-a2型基因作为探针固定到碳纳米管的末端羧基上。
上述的传感器制备方法，将末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)修饰玻碳电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的多壁碳纳米管，再将其浸泡在含有10mmol/L二环己基碳二亚胺量的30mmol/L的pH为4.8的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L探针基因的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，即将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)的羧基上。
上述涂覆在玻碳电极表面的末端羧基化的开口多壁碳纳米管溶解在N，N-二甲基甲酰胺溶剂形成的分散液的量为10～50μl。
上述的电化学传感器应用于慢性粒细胞白血病基因的检测。所述的的传感器检测方法，是通过探针DNA与靶DNA的杂交，选择姜黄素作为杂交指示剂，通过固定在修饰电极上的单链成功地对其互补DNA的识别。
本发明电化学传感器为全固态不含对人体有毒、污染环境的材料，稳定性好、灵敏度高、重现性好，抗环境中其它常见离子干扰的能力强，而且传感器便于携带。本发明通过对常规固体电极进行表面分子设计，将具有优良电化学性能的碳纳米管进行修饰使之结合上羧基，并将末端羧基化的开口多壁碳纳米管固定在玻碳电极表面，通过共价修饰法将BCR/ABL的b3-a2型基因作为探针固定到碳纳米管的末端羧基上。通过探针DNA与靶DNA的杂交，选择姜黄素为杂交指示剂，实现了对慢性粒细胞白血病的早期诊断。该方法对特定序列DNA(是由上海生工生物工程技术服务有限公司合成的慢性粒细胞白血病DNA)的最低检测下限为2.0×10-10g/ml。纳米碳管显著提高了NH2-DNA在玻碳电极上的共价固定量，并能加快嵌入剂与电极间的电子传递速率，从而提高其对互补序列识别的灵敏度。
本发明的优点：
95％以上的慢性粒细胞白血病中有费城(Ph)染色体，其易位产物BCR/ABL融合基因是恶性克隆的标志基因。选取BCR/ABL的b3-a2型基因作为探针，该型基因在慢性粒细胞白血病(CML)病人中突变率高，用作探针后特异性好。
在玻碳电极表面修饰碳纳米管的优点在于碳纳米管的比表面积大，有利于DNA在电极表面的固定，另外碳纳米管良好的电子传递特性极大地增强了传感器的检测灵敏度。
选择天然活性小分子姜黄素作为杂交指示剂，可以解决一些染料，金属离子配合物作为杂交指示剂时，与单链脱氧核糖核酸ssDNA和双链脱氧核糖核酸dsDNA相结合，只是结合力大小不同，而且容易脱落，不利于检测等缺点。
附图说明：
图1为本发明的电化学传感器的原理和结构示意图。
图2为本发明的多壁碳纳米管经纯化后于端口修饰上羧基的红外表征图。
图3为本发明的b3-a2型基因在修饰电极上的固定表征图。
图4为本发明的电化学信号检测图。
图1中：1为玻碳电极，2为羧基化的多壁碳纳米管，3为探针基因，4为DNA，5为姜黄素。
图3中：玻碳电极(GCE)未修饰和修饰后电化学信号比较：A为未修饰；B为修饰后。
图4中：玻碳电极(GCE)杂交链不同浓度电化学信号A、B、C、D比较。
具体实施方式：
下列结合附图和实施例对本发明进行详细描述：
参见图1，本发明的电化学传感器包括玻碳电极1，表面涂覆有敏感膜。敏感膜由羧基化的多壁碳纳米管2和固定的探针基因3(NH2-AGA GTT CAA AAG CCC TTC-3′)组成，将固定了探针DNA的玻碳电极浸入含有一定浓度的互补或三碱基错配或不互补DNA4的PBS(磷酸磷酸盐)缓冲溶液中pH 7.0，进行杂交反应。取出电极后浸入含姜黄素5做为指示剂的0.3mol/L PBS(磷酸磷酸盐)缓冲溶液中，让其嵌入到DNA的双螺旋结构中。随后，将该电极用磷酸缓冲溶液清洗三次。再在磷酸缓冲溶液中对电极施加一定的电位，以除去非特异性吸附在电极表面的姜黄素，清洗后即可用于电化学检测。
上述传感器的制备方法
1)羧基化的多壁碳纳米管的制备：将碳纳米管经HF酸浸泡除去催化剂及其他杂质后，在混酸(浓硫酸：浓硝酸)中120℃～130℃下，回流1～2h，放置过夜，弃上清液，水洗涤至中性，冷冻干燥，备用。碳纳米管经HF酸浸泡除去催化剂及其他杂质后，用混酸煮沸处理一定时间，测定其红外光谱.结果如图2所示。随着混酸煮沸处理后.羧基峰(v-cooH1720cm)逐渐增强，说明混酸的氧化作用确实能产生羧基。
2)多壁碳纳米管(MWNTS)修饰玻碳电极的制备：1～100mg的羧基化的多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)，加入到10～10mL的DMF(N，N-二甲基甲酰胺)中，超声半小时使其分散均匀。将得到的黑色分散液滴加到处理好的玻碳电极表面，置于红外灯下，待溶剂挥发完全后即可。
3)探针和目标DNA的设计探针：探针：NH2-AGA GTT CAA AAG CCC TTC-3′(由上海生工生物工程技术服务有限公司合成)，目标DNA：5′-GAA GGG CTT TTG AACTCT-3′为特定序列DNA(也由上海生工生物工程技术服务有限公司合成的慢性粒细胞白血病DNA)，将探针溶于ph4.8醋酸缓冲液中制成100μg/ml的探针溶液，将目标DNA溶解于ph7.0Tris-HCL缓冲液中制成100μg/ml的目标DNA溶液。
4)b3-a2型基因在修饰电极上的固定：多壁碳纳米管修饰玻碳电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的碳纳米管。再将其浸泡在含有10mmol/L EDC的30mmol/L的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L NH2-DNA的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于羧基化碳纳米管的羧基上。从实验结果可知(见图附图3)，若电极不经修饰，则单链脱氧核糖核酸/玻碳电极(ssDNA/GCE)电极与玻碳电极(GCE)之间的峰电流差(ΔIp)小；若电极经过修饰，则ΔIp大。这是由于未经修饰的电极表面则是由DNA链中嘌呤环的N原子与其结合，这种结合杂乱无章且固定量变化不定，不利于检测。而修饰上多壁碳纳米管后电极表面，产生-COOH基团，与带氨基的DNA结合更牢固，产生的指示剂还原峰电流增大。
通过以上方法即可得到所需的传感器。
上述电化学传感器用于检测慢性粒细胞白血病基因即慢粒融合基因，具体检测方法为：将固定了探针DNA的玻碳电极浸入含有一定浓度的互补或三碱基错配或不互补DNA4的PBS缓冲溶液中pH 7.0，进行杂交反应。取出电极后浸入含姜黄素5做为指示剂的0.3mol/L PBS缓冲溶液中，让其嵌入到DNA的双螺旋结构中。随后，将该电极用磷酸缓冲溶液清洗三次。再在磷酸缓冲溶液中对电极施加一定的电位，以除去非特异性吸附在电极表面的姜黄素，清洗后即可于磷酸盐缓冲溶液中用示差脉冲伏安法检测。
本发明运用现有技术的示差脉冲伏安法电化学检测技术观察指示剂的氧化还原信号变化。实验结果见附图4，由图可知，一定范围内，随着目的DNA浓度增加，杂交形成的双链脱氧核糖核酸(dsDNA)量增加，指示剂嵌入增加，峰电流信号线性加大。指示剂姜黄素的峰电位别为-0.0950V。测定的条件：测定介质为PBS缓冲溶液，pH＝7.0；开路富集5分钟。示差脉冲伏安法测定参数：脉冲振幅0.1V；脉冲持续时间40ms。其线性范围为：8.0×10-9～5.0×10-6g/ml。回归方程为Y＝5.273X-0.0538(X为互补DNA的浓度，单位：g/ml；Y为姜黄素示差脉冲伏安法(DPV)氧化峰电流，单位：μA，线性相关系数为0.9956，该方法对特定序列DNA的最低检测下限为2.0×10-10g/ml。纳米碳管能显著提高NH2-DNA在玻碳电极上的共价固定量，并能加快嵌入剂与电极间的电子传递速率，从而提高其对互补序列识别的灵敏度。
实施例1：一种电化学传感器，包括玻碳电极，玻碳电极的表面涂覆有敏感膜。敏感膜由0.01mg羧基化的的多壁碳纳米管和末端修饰氨基的b3-a2型基因(NH2-DNA)组成，下述的NH2-DNA均为末端修饰氨基的b3-a2型基因。
上述电化学传感器的制备方法，将10mg碳纳米管加入10毫升DMF中，超声分散直至得到均一、浅黑色的碳纳米管分散液，将10微升碳纳米管分散液涂覆到玻碳电极表面，红外灯下照烤蒸发溶剂，MWNTS-COOH修饰电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的碳纳米管。再将其浸泡在含有10mmol/L EDC的30mmol/L的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L NH2-DNA的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，即将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于羧基化碳纳米管的羧基上。即得所需传感器。
实例2：一种电化学传感器，包括玻碳电极，玻碳电极的表面涂覆有敏感膜。敏感膜由0.1mg羧基化的的多壁碳纳米管和末端修饰氨基的b3-a2型基因组成。
上述电化学传感器的制备方法，将50mg碳纳米管加入10毫升DMF中，超声分散直至得到均一、浅黑色的碳纳米管分散液，将20微升碳纳米管分散液涂覆到玻碳电极表面，红外灯下照烤蒸发溶剂，MWNTS-COOH修饰电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的碳纳米管。再将其浸泡在含有10mmol/L EDC的30mmol/L的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L NH2-DNA的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，即将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于羧基化碳纳米管的羧基上。即得所需传感器。
实例3：一种电化学传感器，包括玻碳电极，玻碳电极的表面涂覆有敏感膜。敏感膜由0.5mg羧基化的的多壁碳纳米管和末端修饰氨基的b3-a2型基因组成。
上述电化学传感器的制备方法，将100mg碳纳米管加入10毫升DMF中，超声分散直至得到均一、浅黑色的碳纳米管分散液，将50微升碳纳米管分散液涂覆到玻碳电极表面，红外灯下照烤蒸发溶剂，MWNTS-COOH修饰电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的碳纳米管。再将其浸泡在含有10mmol/L EDC的30mmol/L的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L NH2-DNA的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，即将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于羧基化碳纳米管的羧基上。即得所需传感器。
Claims (7)
1.一种电化学传感器，包括玻碳电极，其特征在于：玻碳电极的表面涂覆有敏感膜，所述的敏感膜由末端羧基化的开口多壁碳纳米管和固定的探针基因组成，所述的探针基因通过其带有的氨基(-NH2)固定到末端羧基化的开口多壁碳纳米管的末端羧基上。
2.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于探针基因采用5′-AGA GTT CAAAAG CCC TTC-3′(BCR/ABL)，其中基因片段5′带有氨基(-NH2)，5′-NH2-AGA GTT CAAAAG CCC TTC-3′是BCR/ABL的b3-a2型基因。
3.权利要求1所述的电化学传感器制备方法，依序包括如下步骤：1)多壁碳纳米管制备末端羧基化的开口多壁碳纳米管：将多壁碳纳米管在体积比为1∶3浓硫酸和浓硝酸的混酸中，于温度为120℃～130℃下，回流1～2h，放置过夜，弃上清液，水洗涤至中性，冷冻干燥，即得末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)；2)将末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰在玻碳电极表面：称取适量的末端羧基化的开口多壁碳纳米管，加到适量的N，N-二甲基甲酰胺溶剂中，超声半小时使其分散均匀，得到0.1mg/ml～10mg/ml的黑色分散液，将此分散液适量滴加到处理好的玻碳电极表面，置于红外灯下，待溶剂挥发完全后即为末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰玻碳电极；3)通过共价修饰法将BCR/ABL的b3-a2型探针基因固定到碳纳米管的末端羧基上。
4.根据权利要求3所述的电化学传感器制备方法，其特征在于将末端羧基化的开口多壁碳纳米管修饰玻碳电极在乙醇、二次水中充分洗涤除去多余的多壁碳纳米管，再将其浸泡在含有10mmol/L二环己基碳二亚胺量的30mmol/L的PH为4.8的醋酸缓冲溶液中搅拌反应，用醋酸缓冲溶液冲洗后置于含3.5μmol/L探针基因的醋酸缓冲溶液中，室温下搅拌反应，即将末端修饰氨基的b3-a2型基因寡聚核苷酸共价固定于末端羧基化的开口多壁碳纳米管(MWNTS-COOH)的羧基上。
5.根据权利要求3或4所述的的电化学传感器制备方法，其特征在于涂覆在玻碳电极表面的末端羧基化的开口多壁碳纳米管溶解在N，N-二甲基甲酰胺溶剂形成的分散液的量为10～50μl。
6.权利要求1所述的电化学传感器应用于慢性粒细胞白血病基因的检测。
7.权利要求1所述的的电化学传感器检测方法，其特征在于通过探针DNA与靶DNA的杂交，选择姜黄素作为杂交指示剂，通过固定在修饰电极上的单链对其互补DNA的识别。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610018690 CN101046461B (zh) | 2006-03-29 | 2006-03-29 | 一种电化学传感器及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610018690 CN101046461B (zh) | 2006-03-29 | 2006-03-29 | 一种电化学传感器及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101046461A true CN101046461A (zh) | 2007-10-03 |
| CN101046461B CN101046461B (zh) | 2011-04-13 |
Family
ID=38771238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200610018690 Expired - Fee Related CN101046461B (zh) | 2006-03-29 | 2006-03-29 | 一种电化学传感器及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101046461B (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101158663B (zh) * | 2007-11-21 | 2010-06-02 | 上海理工大学 | 碳纳米管修饰电极的制备方法 |
| CN101271079B (zh) * | 2008-05-07 | 2010-12-08 | 天津大学 | 碳纳米管-dna复合物修饰的玻炭电极及制备方法和应用 |
| CN101982764A (zh) * | 2010-11-01 | 2011-03-02 | 湖南大学 | 复合膜修饰的生物传感器及其制备方法和应用 |
| CN101441192B (zh) * | 2008-12-06 | 2012-08-01 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种生物电极及其制作方法 |
| CN103842815A (zh) * | 2011-05-17 | 2014-06-04 | 萨班吉大学 | 全细胞细菌生物电容器芯片和用该芯片检测毒性化学物质诱导的细胞应激的方法 |
| CN104458842A (zh) * | 2014-12-03 | 2015-03-25 | 深圳威芯华创科技有限公司 | 超灵敏的dna电化学检测方法、试剂以及系统 |
| CN104988214A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-10-21 | 福建医科大学 | 基于多信号放大技术的双电极传感器检测急早幼粒PML/RARα基因序列的方法 |
| CN105973959A (zh) * | 2016-06-22 | 2016-09-28 | 广西师范学院 | 修饰电极的制备方法 |
| CN106198693A (zh) * | 2016-06-22 | 2016-12-07 | 广西师范学院 | 检测溶液中亚硝酸根离子浓度的方法 |
| CN103191526B (zh) * | 2012-01-05 | 2016-12-14 | 汪宏波 | 功能化修饰的碳纳米管在抗卵巢肿瘤中的热消融作用 |
| RU169124U1 (ru) * | 2016-08-11 | 2017-03-03 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Амперометрический сенсор для определения антрациклиновых препаратов |
| CN106483174A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-03-08 | 广西民族师范学院 | 一种聚姜黄素‑镍‑碳纳米管糊电极电化学检测辛弗林的方法 |
| CN108928812A (zh) * | 2017-05-22 | 2018-12-04 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种基于碳基材料的离子收集方法 |
| CN116908265A (zh) * | 2023-09-11 | 2023-10-20 | 常州先趋医疗科技有限公司 | 检测核酸lamp扩增产物电化学生物传感器的制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991007489A1 (en) * | 1989-11-22 | 1991-05-30 | Childrens Hospital Of Los Angeles | Bcr/abl transgenic animals as models for philadelphia chromosome positive chronic myelogenous and acute lymphoblastic leukemia |
| CN1187607C (zh) * | 2002-06-10 | 2005-02-02 | 武汉大学 | 一种电化学传感器及其制备方法和用途 |
| CN1548551A (zh) * | 2003-05-05 | 2004-11-24 | 虹 王 | 肽核酸分子信标探针的设计及其在基因诊断中的应用 |
-
2006
- 2006-03-29 CN CN 200610018690 patent/CN101046461B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101158663B (zh) * | 2007-11-21 | 2010-06-02 | 上海理工大学 | 碳纳米管修饰电极的制备方法 |
| CN101271079B (zh) * | 2008-05-07 | 2010-12-08 | 天津大学 | 碳纳米管-dna复合物修饰的玻炭电极及制备方法和应用 |
| CN101441192B (zh) * | 2008-12-06 | 2012-08-01 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种生物电极及其制作方法 |
| CN101982764A (zh) * | 2010-11-01 | 2011-03-02 | 湖南大学 | 复合膜修饰的生物传感器及其制备方法和应用 |
| CN101982764B (zh) * | 2010-11-01 | 2013-05-29 | 湖南大学 | 复合膜修饰的生物传感器及其制备方法和应用 |
| CN103842815A (zh) * | 2011-05-17 | 2014-06-04 | 萨班吉大学 | 全细胞细菌生物电容器芯片和用该芯片检测毒性化学物质诱导的细胞应激的方法 |
| CN103842815B (zh) * | 2011-05-17 | 2016-05-18 | 萨班吉大学 | 全细胞细菌生物电容器芯片和用该芯片检测毒性化学物质诱导的细胞应激的方法 |
| CN103191526B (zh) * | 2012-01-05 | 2016-12-14 | 汪宏波 | 功能化修饰的碳纳米管在抗卵巢肿瘤中的热消融作用 |
| CN104458842A (zh) * | 2014-12-03 | 2015-03-25 | 深圳威芯华创科技有限公司 | 超灵敏的dna电化学检测方法、试剂以及系统 |
| CN104988214A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-10-21 | 福建医科大学 | 基于多信号放大技术的双电极传感器检测急早幼粒PML/RARα基因序列的方法 |
| CN106198693A (zh) * | 2016-06-22 | 2016-12-07 | 广西师范学院 | 检测溶液中亚硝酸根离子浓度的方法 |
| CN105973959A (zh) * | 2016-06-22 | 2016-09-28 | 广西师范学院 | 修饰电极的制备方法 |
| CN106198693B (zh) * | 2016-06-22 | 2018-08-07 | 广西师范学院 | 检测溶液中亚硝酸根离子浓度的方法 |
| CN105973959B (zh) * | 2016-06-22 | 2018-08-24 | 广西师范学院 | 修饰电极的制备方法 |
| RU169124U1 (ru) * | 2016-08-11 | 2017-03-03 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Амперометрический сенсор для определения антрациклиновых препаратов |
| CN106483174A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-03-08 | 广西民族师范学院 | 一种聚姜黄素‑镍‑碳纳米管糊电极电化学检测辛弗林的方法 |
| CN106483174B (zh) * | 2016-10-12 | 2018-12-18 | 广西民族师范学院 | 一种聚姜黄素-镍-碳纳米管糊电极电化学检测辛弗林的方法 |
| CN108928812A (zh) * | 2017-05-22 | 2018-12-04 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种基于碳基材料的离子收集方法 |
| CN108928812B (zh) * | 2017-05-22 | 2020-10-20 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种基于碳基材料的离子收集方法 |
| CN116908265A (zh) * | 2023-09-11 | 2023-10-20 | 常州先趋医疗科技有限公司 | 检测核酸lamp扩增产物电化学生物传感器的制备方法 |
| CN116908265B (zh) * | 2023-09-11 | 2023-12-12 | 常州先趋医疗科技有限公司 | 检测核酸lamp扩增产物电化学生物传感器的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101046461B (zh) | 2011-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101046461B (zh) | 一种电化学传感器及其制备方法和用途 | |
| Gao et al. | Graphene oxide directed in-situ deposition of electroactive silver nanoparticles and its electrochemical sensing application for DNA analysis | |
| Wang et al. | Novel electrochemical biosensor based on functional composite nanofibers for sensitive detection of p53 tumor suppressor gene | |
| Wang et al. | A novel “signal-on/off” sensing platform for selective detection of thrombin based on target-induced ratiometric electrochemical biosensing and bio-bar-coded nanoprobe amplification strategy | |
| Singh et al. | Chitosan–iron oxide nano-composite platform for mismatch-discriminating DNA hybridization for Neisseria gonorrhoeae detection causing sexually transmitted disease | |
| Tang et al. | A reusable electrochemical biosensor for highly sensitive detection of mercury ions with an anionic intercalator supported on ordered mesoporous carbon/self-doped polyaniline nanofibers platform | |
| CN111175365B (zh) | 一种检测外泌体miRNA的电化学传感器及其制备与应用 | |
| Zhang et al. | Decorating graphene sheets with gold nanoparticles for the detection of sequence-specific DNA | |
| CN107389755B (zh) | 用于检测汞的电化学传感器及其制备方法和应用 | |
| Chen et al. | Exonuclease-assisted target recycling for ultrasensitive electrochemical detection of microRNA at vertically aligned carbon nanotubes | |
| CN105866205B (zh) | 基于金纳米粒子-巯基化石墨烯修饰电极的电化学dna生物传感器的构建及应用 | |
| Taufik et al. | Bismuth oxide nanoparticles/chitosan/modified electrode as biosensor for DNA hybridization | |
| Tang et al. | Label free electrochemical sensor for Pb2+ based on graphene oxide mediated deposition of silver nanoparticles | |
| Ehzari et al. | Signal amplification of novel sandwich-type genosensor via catalytic redox-recycling on platform MWCNTs/Fe3O4@ TMU-21 for BRCA1 gene detection | |
| CN101825597A (zh) | Dna适体修饰的生物电化学传感器及其制备方法 | |
| Mohammadian et al. | ALS genosensing using DNA-hybridization electrochemical biosensor based on label-free immobilization of ssDNA on Sm2O3 NPs-rGO/PANI composite | |
| Gholivand et al. | A sensitive electrochemical genosensor for highly specific detection of thalassemia gene | |
| CN109060917B (zh) | 一种检测肠致病性大肠杆菌的核酸适配体电化学传感器及其制备方法和应用 | |
| You et al. | Label-free electrochemical multi-sites recognition of G-rich DNA using multi-walled carbon nanotubes–supported molecularly imprinted polymer with guanine sites of DNA | |
| Zhao et al. | 3D MoS2-AuNPs carbon paper probe for ultrasensitive detection and discrimination of p53 gene | |
| Saeedfar et al. | A DNA biosensor based on gold nanoparticle decorated on carboxylated multi-walled carbon nanotubes for gender determination of Arowana fish | |
| Cheng et al. | Hairpin probes based click polymerization for label-free electrochemical detection of human T-lymphotropic virus types II | |
| CN103901020B (zh) | 以电化学发光生物传感器检测dna 甲基转移酶的方法及应用 | |
| CN110988077A (zh) | 一种三嵌段dna探针及核酸检测方法和应用 | |
| CN105334253A (zh) | 碳点@氧化石墨烯复合材料的电化学生物传感器检测PML/RARα基因的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110413 Termination date: 20170329 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |