CN101045111A - 一种脂肪酸合酶的抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肪酸合酶的抑制剂，包括油茶壳或油茶饼的提取物及其他药学上可接受的辅料。油茶壳或油茶饼的提取物制备方法为：将油茶壳或油茶饼粉碎，加入提取剂在35～70℃下超声波提取30～90min，趁热减压抽滤得到油茶壳或油茶饼的提取物溶液或进一步将油茶壳或油茶饼的提取物溶液浓缩、干燥得到油茶壳或油茶饼的提取物。油茶壳或油茶饼的提取物的提取物对FAS有非常强的慢结合不可逆抑制作用。油茶籽提取物的这种FAS强抑制能力为它在药物(抗癌药和减肥药)开发中打开了广阔的前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程领域，尤其是一种脂肪酸合酶(FAS)的抑制剂及其应用。
背景技术
脂肪酸合酶(FAS)是体内脂肪酸合成的关键酶，在体内的能量代谢中起关键的作用。2000年Loftus等人在“Reduced food intake and bodyweight in mice treated with fatty acid synthase inhibitors”(《Science》2000，288(5475)：2379-2381.)中的研究发现，抑制FAS可以导致底物丙二酸单酰辅酶A浓度的升高，后者抑制下丘脑中的进食激素神经信号肽Y(NPY)的表达，从而抑制食欲，显著降低了肥胖小鼠的摄食量和体重。田维熙等在“不同生长期蛋鸡的体脂水平和肝脏脂肪酸合成酶活性的关系”(生物化学杂志，1996，12(2)：234-236.)中的研究也表明家禽的体脂水平和肝脏FAS活性存在正相关关系，提出抑制FAS可能成为有效的减肥降脂方法。
随后的Kuhajda.F.P等在“Fatty acid synthesis：A potential selectivetarget for antineoplastic therapy”(《Proc Natl Acad Sci》USA，1994，91(14)：6379-6383.)中研究表明FAS极有可能成为治疗癌症和肥胖症的双重靶点。
FAS是治疗肥胖症和癌症等多种人类重大疾病的潜在靶点。低毒性、高活性的FAS抑制剂还有可能用于预防这些疾病。因此若要获得应用，寻找开发高活性的FAS抑制剂是非常必要的。但是关于FAS抑制剂的研究还处于初始阶段，FAS的抑制剂还非常稀缺，因此寻找新的有效的抑制剂有着极高的理论研究意义和实际应用潜力。
发明内容
本发明提供一种高活性的肪酸合酶的抑制剂及其制备方法和应用。
一种脂肪酸合酶的抑制剂，包括油茶壳或油茶饼的提取物及其他药学上可接受的辅料。
所述的油茶壳或油茶饼的提取物的制备方法：将油茶壳或油茶饼粉碎，加入提取剂在35～70℃下超声波提取30～90min，趁热减压抽滤得到油茶壳或油茶饼的提取物溶液或进一步将油茶壳或油茶饼的提取物溶液浓缩、干燥得到油茶壳或油茶饼的提取物，所述的提取剂为质量百分比浓度40～70％的乙醇水溶液、石油醚、乙醇或水，提取剂的质量为油茶壳或油茶饼质量的20～40倍。
所述的制备方法中，也可以根据需要不对滤液浓缩、干燥，而直接使用滤液，滤液以及将滤液浓缩、干燥得到油茶壳或油茶饼的提取物可以单独使用也可以添加其他药学上可接受的辅料制成各种剂型。
所述的制备方法中，提取条件优选在50℃下超声波提取45min。
所述的制备方法中，当原料为油茶壳时，所述的提取剂优选质量百分比浓度40％的乙醇水溶液。
所述的制备方法中，当原料为油茶饼时，所述的提取剂优选质量百分比浓度70％的乙醇水溶液。
所述的制备方法中，提取剂的质量优选为油茶壳或油茶饼质量的30倍。
本发明还提供了所述的抑制剂在抑制脂肪酸合酶中的应用。
本发明还提供了所述的抑制剂在制备用于抑制肥胖的药品或保健品中的应用。
本发明还提供了一种含有所述的抑制剂的用于抑制肥胖的药品或保健品。
油茶籽是山茶科(camellia)油茶(camellia oleifera)的果实，其生长周期长，从开花到采摘，历经冬、春、夏、秋四季十三个月。茶果中，茶蒲占60.0％～61.3％，茶籽占38.7％～40％，茶籽中壳(油茶壳)占30.6％～34％，茶仁占66.0％～69.4％。油茶籽多用于榨油，榨油后留下的残渣即油茶饼。本发明对油茶壳与油茶饼的提取物进行了测定研究，发现其中存在新的能力很强的FAS抑制剂，其抑制活性强于已报道的FAS抑制剂，如浅蓝菌素、J.Hopkins大学开发的浅蓝菌素类抑制剂C75、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以及绿茶和红茶的提取物。
本发明油茶壳与油茶饼的提取物进行了测定研究，发现可以作为FAS抑制剂，其抑制活性强于已报道的FAS抑制剂，如浅蓝菌素、C75、EGCG以及绿茶和红茶的提取物。油茶壳提取物对FAS有很强的快结合抑制作用，和现有的FAS抑制剂相比，油茶壳提取物的抑制能力要强得多，它的IC50仅为2.02μg/ml，大大地低于EGCG的23.8μg/ml和浅蓝菌素的20μg/ml。此外，我们还发现油茶饼的提取物对FAS有非常强的慢结合不可逆抑制作用。油茶籽提取物的这种FAS强抑制能力为它在药物(抗癌药和减肥药)开发中打开了广阔的前景。
附图说明
图1.实施例1制备的油茶壳提取物溶液对FAS的快结合抑制作用；
图2.实施例2制备的油茶壳提取物溶液对FAS的快结合抑制作用；
图3.实施例3制备的油茶壳提取物溶液对FAS的快结合抑制作用；
图4.实施例4制备的油茶壳提取物溶液对FAS的快结合抑制作用；
图5.实施例5制备的油茶饼提取物溶液对FAS的快结合抑制作用；
图6.不同提取剂制备的提取物对FAS的IC50值比较，图中：
1：实施例1制备的油茶壳提取物对FAS的IC50值；
2：实施例2制备的油茶壳提取物对FAS的IC50值；
3：实施例3制备的油茶壳提取物对FAS的IC50值；
4：实施例4制备的油茶壳提取物对FAS的IC50值；
5：实施例5制备的油茶饼提取物对FAS的IC50值；
图7.不同提取物对FAS的慢结合抑制作用，图中：
◆：实施例1制备的油茶壳石油醚提取物，0.91mg/ml；
■：实施例2制备的油茶壳乙醇提取物，0.2mg/ml；
△：实施例3制备的油茶壳水提取物，0.056mg/ml；
□：实施例4制备的油茶壳40％乙醇提取物，0.056mg/ml；
◇：C75，0.12mg/ml；
▲：实施例5制备的油茶饼70％乙醇提取物，0.31mg/ml。
具体实施方式
实施例1 油茶壳提取物的制备
将油茶壳晒干、粉碎，加入30倍质量的石油醚，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶壳提取物溶液，黄酮含量0.23％。
实施例2 油茶壳提取物的制备
将油茶壳晒干、粉碎，加入30倍质量的乙醇，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶壳提取物溶液，黄酮含量0.42％。
实施例3 油茶壳提取物的制备
将油茶壳晒干、粉碎，加入30倍质量的水，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶壳提取物溶液，0.52％。
实施例4 油茶壳提取物的制备
将油茶壳晒干、粉碎，加入30倍质量的质量百分比浓度40％的乙醇水溶液，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶壳提取物溶液，黄酮含量1.09％
实施例5 油茶饼提取物的制备
将油茶饼晒干、粉碎，加入30倍质量的质量百分比浓度70％的乙醇水溶液，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶饼提取物溶液，黄酮含量0.74％。
FAS的全反应活性测定
测活体系为100mmol/L KH2PO4-K2HPO4缓冲液，pH 7；含有1mmoL/L EDTA；3μmol/L AcCoA；10μmol/L MalCoA；35μmol/L NADPH，37℃恒温，加入10μg FAS启动反应，用Amersham Pharmacia Ultrospec4300 pro UV-Vis spectrophotometer紫外-可见分光光度计连续监测340nm光吸收变化。反应总体积为2ml。最初2分钟吸收值的变化为直线代表该反应的初速度。
快结合(可逆)抑制的测定
被测萃取液样品加到测活系统中，再加FAS启动反应，测定酶的活性为Ai，以萃取溶剂代替萃取液样品的测活结果为Ao。Ai/Ao为剩余活性，此值越低抑制能力越强，此抑制通常为可逆抑制。
半抑制浓度值的测定
在不同的提取液加量下测定对FAS的快结合抑制，以剩余活性对每毫升测活溶液含油茶籽提取物的干重(μg/ml)作图。由剩余活性随油茶籽提取物量增加而降低的曲线上活性被抑制一半处得到半抑制浓度值(IC50)。此参数值越小抑制能力越强。
慢结合(不可逆)抑制的速度常数测定
抑制剂(油茶籽萃取液)加到FAS溶液中，混匀后25℃放置，在不同的时间间隔取混合溶液测定酶活性At，只加同样量的萃取溶剂时的测活作为对照Ao。At/Ao为该时刻的剩余活性(Remaining Activity，R.A.)。1-At/A0为该时刻的慢结合抑制程度。该抑制通常为抑制剂和酶共价反应所造成，是用较长时间完成的不可逆失活。
慢结合抑制过程的测定
油茶壳提取物对FAS有快结合抑制作用。但在慢结合抑制过程的测定中，其作用并不明显，而油茶饼的提取物对FAS却显示出了很强的慢结合不可逆抑制作用，见图8。0.12mg/ml C75的慢结合抑制时间作为对照，见图8。从图8中可以看出，油茶壳40％乙醇提取物与水提取物在混合体系中的浓度较低，没有显示出对FAS的慢结合抑制作用；油茶壳石油醚提取物有一定的慢结合抑制作用；相比较于其他提取物及C75，油茶饼70％乙醇提取物显示出很强的使FAS慢失活的作用，在酶与抑制剂混合体系中，油茶饼提取物0.31mg/ml浓度下，2min内FAS全反应不可逆失活超过85％，其对FAS的慢结合抑制作用显著强于C75及其他油茶壳提取物。
Claims (8)
1、一种脂肪酸合酶的抑制剂，包括油茶壳或油茶饼的提取物及其他药学上可接受的辅料。
2、如权利要求1所述的抑制剂的制备方法，其特征在于：将油茶壳或油茶饼粉碎，加入提取剂在35～70℃下超声波提取30～90min，趁热减压抽滤得到油茶壳或油茶饼的提取物溶液或进一步将油茶壳或油茶饼的提取物溶液浓缩、干燥得到油茶壳或油茶饼的提取物，所述的提取剂为质量百分比浓度为40～70％的乙醇水溶液、石油醚、乙醇或水，提取剂的质量为油茶壳或油茶饼质量的20～40倍。
3、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：提取剂提取条件为50℃下超声波提取45min。
4、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：将油茶壳粉碎，加入质量百分比浓为40％的乙醇水溶液，在50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶壳的提取物溶液或进一步将油茶壳的提取物溶液浓缩、干燥得到油茶壳的提取物，乙醇水溶液质量为油茶壳质量的30倍。
5、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：将油茶饼粉碎，加入质量百分比浓为70％的乙醇水溶液，在50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤得到油茶饼的提取物溶液或进一步将油茶饼的提取物溶液浓缩、干燥得到油茶饼的提取物，乙醇水溶液质量为油茶饼质量的30倍。
6、如权利要求1所述的抑制剂在抑制脂肪酸合酶中的应用。
7、如权利要求1所述的抑制剂在制备用于抑制肥胖的药品或保健品中的应用。
8、一种含有权利要求1所述的抑制剂的用于抑制肥胖的药品或保健品。
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