CN101029889A - 一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法。本发明提供了对大黄酚、菊花药材、枸杞子药材、茯苓药材的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了盐酸小檗碱的含量测定方法，因为盐酸小檗碱与其它组分分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中盐酸小檗碱的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，克服了原薄层定性鉴别方法不准确的缺点，大大提高了盐酸小檗碱的检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对治疗中老年眼部疾病中药制剂的真伪优劣进行鉴别。

Description

一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法
一、技术领域：
本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法。
二、背景技术：
以羚羊角、人参、石决明、黄连等制成的治疗中老年眼部疾病中药制剂复明系列药品，具有滋补肝肾、益精明目、清热利湿、祛风退翳的功效，用于治疗由于肝肾两亏，精血不足引起的白内障及视神经萎缩、青光眼等眼疾病症，效果显著，作用明显。然而中药成份比较复杂，含有许多未知成份。目前既能有效控制治疗中老年眼部疾病中药制剂的产品质量，又能操作方便的检测方法，还没有报道。
三、发明内容：
本发明的目的在于提供一种能有效控制治疗中老年眼部疾病中药制剂质量，准确度高的质量检测方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法，将蒺藜、木贼、菊花、车前子、决明子、山茱萸、石斛粉碎成细粉，过筛，混匀；羚羊角、人参单独粉碎成细粉，再与上述细粉混匀；其余夏枯草、枸杞子、菟丝子、女贞子、石决明、黄连、谷精草、木通、熟地黄、山药、泽泻、茯苓、牡丹皮、地黄、槟榔十五味药，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.12～1.15的清膏，与上述药粉及适量辅料混匀，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，包糖衣或薄膜衣，即得，其检测方法包括以下步骤：
(1)取本品30片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加乙酸乙酯40ml，置80℃的水浴上加热回流1小时，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取菊花对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶1的30～60℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本品25片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加甲醇30ml，浸渍1小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色；
(3)取本品25片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加水60ml，加热煮沸15分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯提取二次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取本品50片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加乙醚50ml，水浴加热回流1小时，滤过，滤液低温挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材3g，加乙醚30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以84∶15∶1的30～60℃石油醚-丙酮-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)盐酸小檗碱含量测定
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含6μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，精密称定，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加100∶1的甲醇-盐酸混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用100∶1的甲醇-盐酸混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
照高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以43∶57的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
本发明通过试验得出，本品每片含黄连以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于0.02mg。
本发明的治疗中老年眼部疾病中药制剂包括丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂常规剂型。
本发明相对于现有技术的优点为：本发明提供了对大黄酚、菊花药材、枸杞子药材、茯苓药材的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了盐酸小檗碱的含量测定方法，因为盐酸小檗碱与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中盐酸小檗碱的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，克服了原薄层定性鉴别方法不准确的缺点，大大提高了盐酸小檗碱的检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对治疗中老年眼部疾病中药制剂的真伪优劣进行鉴别。
四、具体实施例：
以下通过补肾康乐胶囊质量检测方法的实施例进一步说明本发明的有益的效果：
将蒺藜、木贼、菊花、车前子、决明子、山茱萸、石斛粉碎成细粉，过筛，混匀；羚羊角、人参单独粉碎成细粉，再与上述细粉混匀；其余夏枯草、枸杞子、菟丝子、女贞子、石决明、黄连、谷精草、木通、熟地黄、山药、泽泻、茯苓、牡丹皮、地黄、槟榔十五味药，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.12～1.15的清膏，与上述药粉及适量辅料混匀，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，包糖衣或薄膜衣，即得，其检测方法包括以下步骤：
(1)取本品30片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加乙酸乙酯40ml，置80℃的水浴上加热回流1小时，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取菊花对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶1的30～60℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本品25片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加甲醇30ml，浸渍1小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色；
(3)取本品25片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加水60ml，加热煮沸15分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯提取二次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取本品50片(每片0.3g)，除去包衣，研细，加乙醚50ml，水浴加热回流1小时，滤过，滤液低温挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材3g，加乙醚30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以84∶15∶1的30～60℃石油醚-丙酮-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)盐酸小檗碱含量测定
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含6μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品20片(每片0.3g)，除去包衣，精密称定，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加100∶1的甲醇-盐酸混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用100∶1的甲醇-盐酸混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
照高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以43∶57的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
重复上述步骤一次，计算样品中盐酸小檗碱含量的平均值为0.035mg/片。
用实施例所述质量检测方法反复试验9次，得出盐酸小檗碱(mg/片)平均值，结果见下表：
  序号  步骤1  步骤2  步骤3  步骤4   盐酸小檗碱(mg/片)
  第一次   第二次   平均值
  1   检出   检出   检出   检出   0.032   0.035   0.033
  2   检出   检出   检出   检出   0.028   0.032   0.03
  3   检出   检出   检出   检出   0.027   0.025   0.026
  4   检出   检出   检出   检出   0.038   0.04   0.039
  5   检出   检出   检出   检出   0.035   0.036   0.035
  6   检出   检出   检出   检出   0.031   0.032   0.031
  7   检出   检出   检出   检出   0.038   0.037   0.037
  8   检出   检出   检出   检出   0.036   0.036   0.036
  9   检出   检出   检出   检出   0.029   0.027   0.028
实验报告：
1、仪器与试药
仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪，G1311A型四元梯度泵，G1314A型紫外检测器，G2170AA型化学工作站。
试剂：乙腈为色谱试剂，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
对照品：盐酸小檗碱，批号：0713-9906(供含量测定用)，由中国药品生物制品检定所购得。
供试品：复明片(糖衣片)，批号：200407105；规格：每片0.3g；包装：塑料瓶，每瓶装90片，由本公司生产。
2、色谱条件
色谱柱：Kromasil 5μ C-18柱，100，250×4.6mm。
流动相：43∶57的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液
检测波长：350.0nm。
3、提取条件选择与提取完全性考察
提取方法的选择  盐酸小檗碱在热水中溶解，在水或乙醇中微溶，在甲醇中溶解，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醚中不溶。因此，我们设计了以酸性甲醇回流，酸性甲醇超声提取等方法进行对比试验。称取同一批样品(批号：200407105)，制成同样体积的样品溶液，按色谱条件依法测定，试验结果请见表1。
             表1提取方法的选择试验及结果
  试验号   提取溶剂   峰面积值   含量(mg/片)
  1   酸性甲醇超声   197.87   0.0362
  2   酸性甲醇回流   182.82   0.0358
试验结果表明，两种方法处理的结果基本相同，但超声处理操作更为简便，故选择酸性甲醇超声处理作为本试验的提取方法。
提取完全性考察  称取同一批样品(批号：200407105)约2g，精密加100∶1的甲醇-盐酸各50ml，分别超声处理10、20、30分钟，按正文方法依法测定，试验结果请见表2。
                 表2提取完全性试验及结果
  超声处理时间(min)   10   20   30
  盐酸小檗碱的含量(mg/片)   0.03298   0.03553   0.03489
试验结果表明，超声处理提取20分钟以后，其含量测定结果增加不明显，说明已基本提取完全，故选择酸性甲醇超声处理20分钟作为本方法的超声提取时间。
4、方法学考察
线性关系及范围的考察  取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，精密加100∶1的甲醇-盐酸配制成浓度为0.0018、0.0036、0.0072、0.0108、0.0144mg/ml的溶液，分别取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪依法测定，结果请见表3。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行直线回归，回归方程为Y＝4130.6X+7.0029，r＝0.9998。试验结果表明，本方法进样量在0.018～0.144μg范围内呈良好的线性关系。
                   表3线性关系考察试验及结果
  试验号   进样量(μg)   峰面积积分值   回归系数
  1   0.018   78.52 Y＝4130.6x+7.0029R＝0.9998
  2   0.036   157.21
  3   0.072   308.12
  4   0.108   451.08
  5   0.144   601.45
精密度试验：精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(C＝0.013mg/ml)10μl，连续重复进样5次，测定，记录其峰面积值，结果见表4。
                         表4盐酸小檗碱精密度试验
  试验次数   1   2   3   4   5   平均值  RSD(％)
  盐酸小檗碱峰面积值   520.13   528.73   521.20   524.43   516.17   522.13  0.9
结果表明：盐酸小檗碱对照品重复进样5次测得峰面积积分值的相对标准偏差RSD＜2.0％，故认为本方法具有良好的精密度。
阴性空白对照试验：取除去黄连的模拟处方，制成不含黄连的空白样品，按供试品溶液制法制成空白对照溶液。另取供试品溶液(批号：200407105)及对照品溶液C＝0.0064mg/ml)，按正文方法注入液相色谱仪测定。试验结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间位置上，有一对应的单一色谱峰，而空白对照液色谱中，在该保留时间相应位置处无相对应的峰出现。说明阴性空白对其测定无干扰，其方法的专属性较好。
稳定性试验：精密吸取同一批(批号：200407105)供试品溶液及对照品溶液(C＝0.0064mg/ml)，按0、0.5、1、2、4小时时间间隔，分别注入液相色谱仪进行测定，试验结果请分别见表5。
                                 表5稳定性试验结果
  试验号  放置时间(h)   峰面积积分值   平均值   RSD(％)
  对照品   1   0   232.23   234.60   0.67
  2   0.5   234.29
  3   1   234.71
  4   2   235.29
  5   4   236.49
  供试品   1   0   187.93   186.77   0.53
  2   0.5   187.78
  3   1   185.99
  4   2   186.05
  5   4   186.08
试验结果表明，盐酸小檗碱对照品与样品溶液中盐酸小檗碱均在4小时内稳定性良好，其相对标准偏差分别为RSD＝0.67％和RSD＝0.53％。
重复性试验：取同一批(批号：200407105)样品5份，按正文方法制备样品供试液，测得峰面积并计算含量，结果见表6。
                                表6样品重复性试验及结果
试验号 取样量(g) 峰面积积分值   样品含量(mg/片)   平均含量(mg/片) RSD(％)
  12345   2.103112.125702.122702.354572.13464   182.43188.11185.55204.97186.69   0.035490.036210.035760.035610.03579 0.0358 0.76
试验结果表明，测得该批样品的平均含量为0.0358mg/片，经统计其相对标准偏差为RSD＝0.76％。结果说明本方法的重复性较好。
加样回收率试验：精密称取已知含量的样品(0.0358mg/片，0.1193mg/g，批号：200407105)适量，精密称定，分别加入盐酸小檗碱对照品适量，依法测定，以下列公式计算回收率，结果见表7。
Figure A20071001758500141
                              表7样品回收率试验结果
试验号   取样量(g)   样品含量(mg)   加入对照品量(mg)   测得总含量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
  1   1.61634   0.19283   0.17   0.36318   100.2 99.7 1.24
  2   1.51885   0.18120   0.17   0.35086   99.8
  3   1.24571   0.14861   0.12   0.26751   99.1
  4   1.39286   0.16617   0.12   0.28315   97.5
  5   2.41143   0.28768   0.31   0.60101   101.1
  6   2.39324   0.28551   0.31   0.59618   100.2
试验结果表明：本方法具有较高的回收率，其平均回收率为99.7％，相对标准偏差为1.24％，加样回收良好。
5、样品中盐酸小檗碱含量测定
按正文方法分别处理十批样品(糖衣片)、三批样品(薄膜衣片)，精密吸取对照品溶液与样品溶液，按正文含量测定项下方法，测定。结果见表8，表9。
       表8十批样品(糖衣片)中盐酸小檗碱含量测定结果(n＝2)
批号   盐酸小檗碱的含量(mg/片) 盐酸小檗碱平均含量(mg/片)
  1   2
  200405059   0.02462   0.02489   0.0248
  200405067   0.03785   0.03883   0.0383
  200405071   0.04614   0.04510   0.0456
  200405075   0.03001   0.02970   0.0299
  200405079   0.02731   0.02793   0.0276
  200406087   0.04504   0.04489   0.0449
  200406091   0.02915   0.02875   0.0290
  200406095   0.03310   0.03226   0.0327
  200407100   0.03432   0.03397   0.0342
  200408108   0.04606   0.04639   0.0462
      表9三批样品(薄膜衣片)中盐酸小檗碱含量测定结果(n＝2)
批号   盐酸小檗碱的含量(mg/片) 盐酸小檗碱平均含量(mg/片)
  1   2
  200409001   0.0251   0.0256   0.0254
  200409002   0.0220   0.0228   0.0224
  200409003   0.0275   0.0271   0.0273
6、黄连药材中盐酸小檗碱含量测定
取不同产地的黄连药材约0.1g，加1∶100的盐酸-甲醇50ml按正文方法进行含量测定，结果请见表10。
          表10不同产地药材含量测定结果(n＝2)
编号 产地   盐酸小檗碱含量(％) 平均含量(％)
  1   2
  1   陕西   7.41   7.53   7.47
  2   四川   5.23   5.29   5.26
  3   湖北   5.93   5.87   5.90
7、含量限度的确定
十批样品(糖衣片)中，盐酸小檗碱的实测结果，最高含量为0.0462mg/片，最低为0.0248mg/片。药材实测结果，最高含量为7.47％，最低为5.26％。按中国药典2000年版一部规定，含量不得低于3.6％。中国药典2005年版一部规定，含量亦不得低于3.6％。考虑到处方用量、工艺提取损耗与装量差异等因素影响，故暂定本品(糖衣片)每片含黄连以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得低于0.02mg。
三批中试样品(薄膜衣片)中，盐酸小檗碱的实测结果，最高含量为0.0273mg/片，最低为0.0224mg/片。结合糖衣片限度，故暂定本品(薄膜衣片)每片含黄连以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得低于0.02mg。

Claims (3)

1、一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法，将蒺藜、木贼、菊花、车前子、决明子、山茱萸、石斛粉碎成细粉，过筛，混匀；羚羊角、人参单独粉碎成细粉，再与上述细粉混匀；其余夏枯草、枸杞子、菟丝子、女贞子、石决明、黄连、谷精草、木通、熟地黄、山药、泽泻、茯苓、牡丹皮、地黄、槟榔十五味药，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.12～1.15的清膏，与上述药粉及适量辅料混匀，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，即得成品，其特征在于包括以下步骤：
(1)取本品9g，研细，加乙酸乙酯40ml，置80℃的水浴上加热回流1小时，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取菊花对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶1的30～60℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本品7.5g，研细，加甲醇30ml，浸渍1小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色；
(3)取本品7.5g，研细，加水60ml，加热煮沸15分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯提取二次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取本品15g，研细，加乙醚50ml，水浴加热回流1小时，滤过，滤液低温挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯芩对照药材3g，加乙醚30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以84∶15∶1的30～60℃石油醚-丙酮-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)盐酸小檗碱含量测定
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含6μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品6g，除去包衣，精密称定，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加100∶1的甲醇-盐酸混合溶液50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用100∶1的甲醇-盐酸混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
照高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以43∶57的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
2、如权利要求1所述的一种治疗治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法，其特征在于：所述中药制剂每0.3g含黄连以盐酸小檗碱计，不得少于0.02mg。
3、如权利要求2所述的一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法，其特征在于：所述的中药制剂的剂型包括丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂常规剂型。
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