CN101022806A - （4－烷基哌嗪基）（苯基）甲酮在治疗阿尔茨海默病中的应用 - Google Patents

（4－烷基哌嗪基）（苯基）甲酮在治疗阿尔茨海默病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于治疗哺乳动物(例如人)的阿尔茨海默症的至少一种症状的治疗方法，其中该症状涉及β－淀粉样肽病原体对哺乳动物细胞的毒性，并希望抑制后继诱发的病理通道，所述方法包括向需要这种治疗的哺乳动物施用有效数量的苯甲酰哌嗪衍生物，包括其可药用的盐。

Description

（4－烷基哌嗪基）（苯基）甲酮在治疗阿尔茨海默病中的应用
相关申请参考
本申请根据35 U.S.C.119(e)，要求对2004年4月15日提交的序列号为60/562,643的美国临时申请的优先权。
发明背景
阿尔茨海默病(AD)是老年人中最常见的痴呆症，影响65岁以上老人的约10％和80岁以上老人的约40％。熟悉的AD是该病的早发形式，它涉及淀粉样蛋白前体(APP)基因的各种变异，不超过AD总病例的5％。该病的迟发形式，也称作散发形式，占AD病例的95％以上，其起因仍不清楚。已经确定或推测了几种危险因子。这包括载脂蛋白E基因的ε4等位基因，社会经济处境或先前的医疗状况，但还未确定该病的发生或进展的因果关系。
AD的临床特点是认知过程的逐渐和不可逆的损害以及记忆变化，并且常伴随着非认知性的症状，包括抑郁(Robert et al.，Alzheimer’sDisease：from moleculat biology to therapy，R.Becker et al.，eds.，(1996)，487-493)。阿尔茨海墨病(AD)神经病理学在组织学上的特征在于，由于tau蛋白的过度磷酸化(Kosik et al.，(1986)PNAS USA83：4044-8)，造成脑β-淀粉样(Aβ)肽浓度增高伴随老年斑形成(Nikaidoet al.(1970)Trans.Am.Neurol.Assoc.95：47-50)和神经纤维缠结(NFT)的出现。Aβ是在膜酶β-和γ-分泌酶作用下β-淀粉样前体蛋白(β-APP)发生蛋白酶能而产生的。Aβ以最常见的40个氨基酸长度的Aβ1-40形式或42个氨基酸的Aβ1-42形式存在，据报道后者的神经毒性比Aβ1-40更大。虽然在过去10年中对Aβ-介导的神经毒性的了解有了显著的增加，但是还没有以Aβ1-42为目标的治疗策略显示出成功地减慢疾病的进展。相反，目前所研究的治疗AD的策略包括Aβ生产的抑制剂，防止其低聚或纤维化的化合物，消炎药物，胆固醇合成抑制剂，抗氧化剂，神经修复因子和疫苗
                                             Selkoe，D.J.(1999)Nature399，A23-31；Emilien，G.，et al.(2000)Arch.Neurol.57，454-459；Klein，W.L.(2002)Neurochem.Internat.41，345-52；Helmuth，L.(2002)Science 297(5585)，1260-21。
发明概述
本发明提供了一种通过例如阻断或抑制谷氨酸或β-淀粉样蛋白，例如Aβ1-42、Aβ1-40或Aβ1-43，损伤哺乳动物神经元的能力治疗阿尔茨海默病的方法。因此，本发明提供了一种治疗受到阿尔茨海默病威胁或折磨的哺乳动物的方法，该方法是向所述哺乳动物施用有效数量的式1化合物或其可药用的盐：
Figure A20058001942000051
其中：
a)R1、R2和R3分别是H，OH，卤素，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C3-C6)环烷基，(C3-C6)环烷基((C1-C6)烷基)，(C2-C6)烯基，(C2-C6)炔基，(C1-C6)烷酰基，卤素(C1-C6)烷基，羟基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基羰基，(C1-C6)烷硫基，硫代(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷酰氧基；N(R6)(R7)，其中R6和R7分别是H，O，(C1-C6)烷基，(C3-C6)环烷基，(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基，苯基或苄基，或者R6和R7与它们所连接的N一起形成一个5或6元环，该环可任选地含有1-2个S、N(R6)或非过氧化物的O；或者R1和R2合起来是亚甲二氧基；
b)Y和Z合起来是＝O，-O(CH2)mO-或-(CH2)m-，其中m是2-4，或者Y是H，Z是OR9或SR9，其中R9是H或(C1-C4)烷基；
c)X是(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基(C3-C12)烯基、(C2-C6)炔基、羧基、(C1-C6)烷氧羰基、硫代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷硫基、(C3-C12)杂环基、(C3-C12)杂环烷基(C1-C6)烷基、芳基或杂芳基，可任选地被1、2或3个R1取代。
优选R1、R2或R3中至少一个不是H，例如R1、R2和R3中的1、2或3个不是H。
优选R1是(C1-C6)烷氧基，例如(C1-C3)烷氧基，最好是在4-位。
优选R1和R2是(C1-C6)烷氧基，例如(C1-C3)烷氧基，最好是在3，4-位。
优选R1、R2和R3是(C1-C6)烷氧基，例如(C1-C3)烷氧基，优选在2，3和/或4-位，或者R1、R2和R3中的两个是亚甲二氧基。
优选Z和Y合起来是＝O(氧基)。
优选X是(C1-C6)烷基，例如(C1-C3)烷基，如CH3或CH2CH3；或者X是CH[(C1-C6)烷基][CO2Q]，其中Q是H或(C1-C6)烷基。
优选X是(C3-C12)杂环基。
本发明还提供了一种药物组合物，例如单位剂型，其中含有与可药用的稀释剂或载体组合的式I化合物或其可药用的盐，它可任选地包含上述一类或多类抗AD药物中的一种或多种抗AD药，并可任选地含有稳定剂、防腐剂和吸收控制剂。
另外，本发明提供了一种用于预防或治疗哺乳动物(例如人)中的病理状态或症状的治疗方法，该病理状态或症状与AD或AD的发作有关，或与病原体如β-淀粉样肽和/或谷氨酸对哺乳动物神经元细胞的毒性有关，其中希望抑制所述的毒性，或者希望下调随后诱发的病理途径，该方法包括对需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的式I化合物或其可药用的盐。
因此，本发明还提供了一种治疗方法，用以治疗与谷氨酸网络活性过高有关的神经疾病，例如脑缺血，与艾滋病有关的痴呆，中风，脑创伤或脊髓损伤等。
本发明提供了用于药物治疗(例如用于治疗受AD折磨或威胁的哺乳动物)的式I化合物，以及式I化合物在制造用于治疗哺乳动物(例如人，如AD患者)的至少一种AD症状的药物中的应用。
本发明还提供了新的式I化合物及其中所公开的可用于制备式(I)化合物或其盐的方法和中间体。这包括其中C(Y)(Z)基团与R1、R2或R3的碳原子结合或与哌嗪或高哌嗪的CH2基团结合的那些类似物。很多式I化合物还可作为中间体用于制备式I化合物。
附图简述
图1描绘了普鲁卡因和一些普鲁卡因衍生物的化学式。SP015、SP016和SP017是用普鲁卡因和普鲁卡因酰胺作为亚结构通过筛选天然化合物数据库确定的。
图2(实验组A至C)描绘了Aβ1-42对鼠嗜铬细胞瘤PC 12细胞的影响；细胞生存力利用MTT试验(A)和测定胞内ATP浓度(B)来确定。Aβ1-42对自由基产生的影响用荧光探针2，7-DCF确定(C)。将PC 12细胞暴露于浓度渐增的Aβ1-42中(C＝对照)，暴露24小时后测定各种参数。统计分析用单向ANOVA和随后的Dunnett试验进行。平均±SD，n＝6。除非另外指明，与对照样比较，*p＜0.05，***p＜0.001。
图3(实验组A-F)描绘了普鲁卡因和SP008对细胞生存力和Aβ1-42造成的PC 12细胞中ATP耗竭的影响。PC 12细胞预行用浓度渐增的普鲁卡因或SP 008预培养24小时，然后暴露于浓度渐增的Aβ1-42中24小时。细胞生存力用MTT试验测定(A，B，C)，自由基的产生用荧光探针2，7-DCF测定(D，E，F)。细胞生存力的结果表示成NADPH-黄递酶活性的抑制百分数，认为100％抑制相应于用Aβ1-42观察到的结果。统计分析用单向ANOVA和随后的Dun-nett试验进行。平均值±SD，n＝6。除非另外指明，与载体相比，*p＜0.05，**p＜0.001。
图4描绘了普鲁卡因和SP 008对于谷氨酸诱发的PC 12细胞死亡的神经保护作用。PC 12细胞用浓度渐增的普鲁卡因或SP 008预培养，24小时后暴露于100μM的谷氨酸中24小时。细胞生存力用MTT试验测定。用单向ANOVA和随后的Dunnett试验进行统计分析。平均值±SD，n＝6。与0μM相比，**p＜0.01。与对照组比较，***p＜0.001。
发明详述
已指出局部麻醉在活体试验中沙土鼠脑缺血期间(Fujitani et al.(1994)，Neurosci.Lett.，179：91-4；Chen et al.(1998)Brain Res.，4：16；Adachi et al.(1999)Brit.J.Anaesth；83：472)和在体外试验中于海马神经元缺氧发作期间(Lucas et al.(1989)J.Neurosci.Methods，28：47；Liu et al.(1997)Anesthesiology，87：1470；Raley-Susman et al.，(2001)J.Neurophysiol.86：2715-26)，显示出神经保护性能。与此同时，普鲁卡因和利多卡因显示能抑制NMDA受体活性(Nishzawa et al.(2002)Anesth.Analg.，94：325-30)，减小沙土鼠海马中缺氧引起的胞内钙浓度增加(Liu et al.(1997)Anesthesiology，87：1470)和防止沙土鼠脑内缺血触发的胞外浓度增高。
虽然普鲁卡因在血液中存在的各种酯酶的作用下代谢成对氨基苯甲酸和二乙基氨基乙醇的高代谢速度可以解释普鲁卡因在体内在及其局麻作用时间的短暂，但它造成了用这种分子治疗慢性疾病的难题。这一考虑导致用普鲁卡因作为前导结构对天然化合物的数据库进行筛选，以便鉴别稳定的生物活性类似物和断定具有该活性的共同的化学结构。因此，本发明涉及在与哺乳动物细胞接触时会显示神经保护作用的(4-烷基哌嗪-1-基)苯基甲酮衍生物的鉴定、设计、合成和药理活性。更具体地说，本发明提供了对于β-淀粉样蛋白造成的毒性具有神经保护性能的(4-烷基哌嗪-1-基)苯基甲酮衍生物。
如图1所示，4-乙基哌嗪-1-基-(2，3，4-三甲氧基苯基)甲酮(SP008)是由局部麻醉药普鲁卡因衍生的一种共同亚结构。这一亚结构是从菊类植物中分离出的分子(SP015，SP016，SP017)共有的，这些分子传统上用于恢复智力功能的丧失或下降。象普鲁卡因和SP天然化合物一样，SP008对于淀粉样蛋白肽Aβ1-42和保存的Aβ1-42在大鼠嗜铬细胞瘤PC 12细胞上引起的ATP耗竭显示出强烈的神经保护作用，意味着一种线粒体作用位点。普鲁卡因和SP 008还抑制谷氨酸对CP 12细胞显示的神经毒性作用。该作用解释了观察到的“抗淀粉样蛋白”作用，因为Aβ1-42肽被认为引发神经元细胞中谷氨酸网络的损害性活性过高。此外，还发现普鲁卡因是一种σ-1受体配体(IC50＝4.3μM)。该受体显示出保护线粒体的功能，并具有抗抑制剂作用。化学同源性表明SP 008这样一种药理型式。因此，认为SP 008及它的或式I的类似物可用来治疗AD。
这里使用的术语“阿尔茨海默的治疗”包括在显示出至少一种AD发作症状的对象或很可能发展成AD的对象中抑制AD的发展，以及阻停或减慢AD的进展，或者减轻或缓解至少一种AD症状。针对任何神经病理学所用的术语“治疗”也规定以这种方式定义。
除非另外说明，均使用以下定义：卤素是氟，氯，溴或碘。烷基、烷氧基、烯基、炔基等代表直链和支链两种基团；但提到个别的基团例如“丙基”时则只包括直链基团，支链异构体如“异丙基”则专门指出。芳基代表苯基或单边稠合的双环碳环基团，其中有约9-10个环原子，而且至少一个环是芳族的。杂芳基包括通过一个单环芳族环的环碳原子连接的基团，环中含有约5或6个环原子，由碳原子和1-4个杂原子组成，该杂原子选自非过氧化物的氧、硫和N(R6)，其中R6或是不存在，或是定义如上；还包括由其衍生的单边稠合的含约8-10个环原子的双环杂环，特别是苯并衍生物或通过向其稠合一个亚丙基、三亚甲基或四亚甲基双基衍生形成的基团。
本领域技术人员将会理解，具有手性中心的本发明化合物可以存在并分离成旋光或外消旋形式。一些化合物可显示出多晶型现象。应该清楚，本发明包括本发明化合物的具有本文所述有用性质的任何外消旋的、旋光的、多晶型的或立体异构的形式，或它们的混合物。如何制备旋光形式(例如，利用重结晶技术将外消旋形式拆解，由旋光性起始物合成，利用手性合成，或利用手性固定相进行色谱分离)和如何利用本文所述的标准试验或本领域公知的其它类似试验测定活性，是本领域中众所周知的。
以下对基团、取代基和范围列出的具体的和优选的涵义只是为了示例说明，它们不排除对基团和取代基定义的其它涵义或在所定义范围内的其它涵义。
具体地说，(C1-C6)烷基可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基；(C3-C12)环烷基可以是单环、双环或三环基团，包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.2]辛基、降冰片基、金刚烷基，以及各种萜烯和类萜烯结构。(C3-C12)环烷基(C1-C6)烷基包括以上的环烷基，可以是环丙基甲基、环丁基甲基、环丙基甲基、环己基甲基、2-环丙基乙基、2-环丁基乙基、2-环戊基乙基或2-环己基乙基。杂环烷基和(杂环烷基)烷基包括以上的环烷基，其中该环烷基环系是单环、双环或三环，并任选含有1-2个S、非过氧化物O或N(R6)以及2-12个环碳原子；例如吗啉基、哌啶基、哌嗪基、2，3-二氢化茚基、1，3-二噻烷-2-基等。环烷基环系任选地包括1-3个双键或环氧部分，并任选地被1-3个OH、(C1-C6)烷酰氧基、(CO)、(C1-C6)烷基或(C2-C6)炔基取代。(C1-C6)烷氧基可以是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基；(C2-C6)烯基可以是乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基或5-己烯基；(C2-C6)炔基可以是乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基或5-己炔基；(C1-C6)烷酰基可以是甲酰基、乙酰基、丙酰基或丁酰基；卤代(C1-C6)烷基可以是碘甲基、溴甲基、氯甲基、氟甲基、三氟甲基、2-氯乙基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基或五氟乙基；羟基(C1-C6)烷基可以是被1或2个OH基团取代的烷基，例如被1或2个OH基团取代的烷基，如羟甲基、1-羟基乙基、2-羟基乙基、1-羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、1-羟基丁基、4-羟基丁基、3，4-二羟基丁基、1-羟基戊基、5-羟基戊基、1-羟基己基或6-羟基己基；(C1-C6)烷氧基羰基可以是甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基或己氧基羰基；(C1-C6)烷硫基可以是甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、异丁硫基、戊硫基或己硫基；(C2-C6)烷酰氧基可以是乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、戊酰氧基或己酰氧基；芳基可以是苯基、茚基、2，3-二氢化茚基或萘基；杂芳基可以是呋喃基、咪唑基、三唑基、三嗪基、唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或其N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或其N-氧化物)、1H-吲哚基、异喹啉基(或其N-氧化物)或喹啉基(或其N-氧化物)。
式I化合物可如以下方案A所示制备。
方案A
Figure A20058001942000101
苯基上的对SOCl2或(C(O)Cl)2有活性的基团R1、R2和/或R3，例如含羟基或含硫基团，可以用能去除的保护基例如乙氧基乙基、THP、(C1-C4)3甲硅烷基等保护起来。被保护的OH和羟烷基可以去保护，并用有机合成的已知方法转化成卤素、CN、烷氧羰基、烷酰氧基和烷酰基。被保护的氨基可以用本领域已知的方法去保护并转化成N(R6)(R7)。如果需要，在这些转化期间可以将C＝0基团保护起来和/或还原，然后去保护和再氧化成C＝0。参见例如I.T.Harrison，Compendium of Organic Synthetic Reactions，Wiley-Interscience，N.Y.(1971)；L.F.Fieser et al.，Reagents for Organic Synthesis，John Wiley&Sons，Inc.，N.Y.(1967)，及美国专利5，411,965。
于是，在以上式I中R1、R2或R3的具体涵义是H，(C2-C4)烷基，N(R6)(R7)，(C2-C4)烷氧基或(C3-C6)杂环烷基。
N(R6)(R7)的具体涵义是氨基，二乙基氨基，二丙基氨基，环己基氨基或丙氨基，R3的一种具体涵义是NH2。
本发明的一种优选的化合物是SP 008(图1)。
如果化合物有足够的碱性或酸性，能形成稳定无毒性的酸或碱盐，则服用盐形式的该化合物可能合适。可药用的盐的实例是与形成生理上可接受的阴离子的酸形成的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。也可以形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。
可药用的盐也可以用本领域公知的标准方法得到，例如，通过有足够碱性的化合物如胺与提供生理上可接受的阴离子的合适的酸反应得到。也可以制成碱金属(例如钠、钾或锂)、碱土金属(例如钙或镁)或锌盐。
式I化合物可以配制成药物组合物，并以适合所选择的用药途径的各式各样的形式施用于哺乳动物，例如人类患者，所述用药途径包括口服或非肠道，以静脉内、肌内、局部或皮下途径或以吸入或吹入方式给药。
因此，本发明化合物可以与可药用赋形剂如惰性稀释剂或可吸收的可食载体一起，全身性用药，例如口服。可以将其以粉末、小粒或悬浮液形式包封在硬或软壳明胶胶囊中，或者可压制成片剂。为了口服治疗给药，活性化合物可以与一种或多种赋形剂一起，以可吞咽的片剂、颊含片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。这些组合物和制剂应含有至少0.1％的活性化合物。组合物和制剂的百分含量当然可以变化，适宜为给定的单位剂型的约2-60％重量。活性化合物在这种用于治疗的组合物中的数量应能达到有效剂量水平。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等还可以含有以下成分：粘合剂，例如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；甜味剂，例如蔗糖、果糖、乳糖或天冬甜素，或者可加入调味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃香精。如果单位剂型是胶囊，则除了以上各类材料外，还可以含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。其它各种物质可作为包衣存在，或用来改变固体单位剂型的物理型式。例如，片剂、丸剂或胶囊可以用明胶、蜡、虫胶或糖等包覆。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的羟基苯甲酸甲酯和丙酯、染料和调味剂，例如樱桃或桔子香精。当然，在制备任何单位剂型时使用的任何物质应该是可药用的，并且就其用量而言基本上无毒性。此外，活性化合物可以掺加到持久释放的制剂和装置中，例如贴剂、输注泵或植入的贮库制剂。
活性化合物也可以通过输注或注射静脉内或腹腔内给药。活性化合物或其盐的溶液可以在水中制备，可任选地与无毒的表面活性剂混合。分散体也可以配制在甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物中，以及在油中。在通常的贮存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以阻止微生物的生长。
适合注射、输注或吸入的药物剂型可以包括无菌的水溶液或分散体。可制备或含有活性成分的无菌粉末，它适合临时配制成无菌的注射或输注液或分散体，可任选地包封在脂质体中。在任何情形，最终的剂型在制造和贮存条件下应该是无菌的稳定流体。液体载体或赋形剂可以是溶剂或液体分散体介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯及其合适的混合物。合适的流动度可以通过形成脂质体，在分散体的情形保持所需的颗粒大小，或使用表面活性剂来维持。利用各种抗菌和抗真菌剂，例如羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，可产生阻止微生物作用的效果。在很多情形，最好是包含等渗剂，例如，糖、缓冲剂或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝、纤维素醚和明胶，可造成注射组合物的延长吸收。
无菌注射液通过将所需数量的活性化合物掺入到需要时含有以上列举的各种其它成分的合适溶剂中，随后过滤灭菌得到。在用来制备无菌注射液的无菌粉末的情形，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，它们产生其中含有活性化合物加上先前灭菌过滤液中存在的任何其它所需成分的粉末。
为了局部给药，本发明化合物在其为液体时可以以纯形式施用。然而，通常最好是以与皮肤病学可接受的载体一起，以组合物或制剂的形式施用在皮肤上，该载体可以是固体或液体。
适用的固体载体包括细分的固体，例如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。适用的液体载体包括水、醇或二醇，或水-醇/二醇掺混物，本发明化合物可以以有效浓度溶解或分散于其中，任选地借助于无毒的表面活性剂。可以加入辅剂例如香料和另外的抗微生物剂以便优化对于指定用途的性能。所形成的液体组合物可以从用来浸渍绷带或其它敷料的吸收垫中施加，或者用泵型或气雾型喷雾器喷射在受感染的部位。
增稠剂，例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性的无机材料，也可以与液体载体一起使用，以便形成糊剂、凝胶、膏剂、皂等，用来直接涂敷在使用者的皮肤上。
可用来向皮肤输送式I化合物的适用的皮肤用组合物的实例是本领域已知的；例如，参见Jacquet等(美国专利4,608,392)，Geria(美国专利4,992,478)，Smith等(美国专利4,559,157)和Wortzman(美国专利4,820,508)。
通过比较式I化合物的体外活性和在动物模型中的体内活性，可以确定其适用剂量。将小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人类的方法是本领域已知的，例如见美国专利4,938,949。
通常，式I化合物在液体组合物(例如洗剂)中的浓度为约0.1-25％重量，优选为约0.5-10％重量。在半固本或固体组合物(例如凝胶或粉末)中的浓度为0.1-5％重量，优选为0.5-2.5％重量。治疗中需使用的化合物或其活性盐或衍生物的数量不仅会随所选择的具体的盐而变，而且与用药途径、所治疗的病症的本质以及患者的年龄和状态有关，最终由主治医师或临床医师决定。
但一般来说，合适的剂量是约0.5-100mg/kg，例如，每天每kg体重约10-75mg，比如每天每kg体重3至约50mg，优选6-90mg/kg/天，最优选15-60mg/kg/天。
化合物宜以单位剂型服用，例如，每单位剂型含5mg至多达1-3g，适宜为10-1000mg，最适宜为50-500mg活性成分。
理想的是，应当服用活性成分以达到约0.5-75μM的活性化合物峰值血浆浓度，优选为约1-50μM，最优选为约2-30μM。这可以通过例如静脉内注射0.05-5％的活性化合物溶液来实现，可任选地为盐水溶液。例如，可以将多至约0.5-3g的式I化合物溶在含有例如0.9％NaCl和约5-10％葡萄糖的约125-500ml静脉用溶液中。这种溶液可以在最多达几小时的长时间内输注，任选地与其它的抗病毒药、抗生素等一起。活性成分也可以以含有大约1-100mg活性成分的药团形式口服。通过连续输注以提供约0.01-5.0mg/kg/hr的活性化合物，或间歇输注含约0.4-15mg/kg活性化合物的输注液，可以保持理想的血液浓度。
所需剂量可方便地表示成单一剂量或按适当的时间间隔服用的分剂量，例如，每天2、3、4或更多次分剂量。分剂量本身可以进一步分成例如多次彼此大致分开的不连续的投药，例如从吸入器中多次吸入，或向眼中施加多滴。
本发明化合物作为抗病毒剂起作用的能力可以用本领域公知的药理模型或用下述试验确定。
下面示例说明用于人类的治疗或预防的含式I化合物的代表性药物剂型。
(1)片剂1                 mg/片
SP 008                  100.0
乳糖                    77.5
聚乙烯吡咯烷酮          15.0
交联的羧甲基纤维素钠    12.0
微晶纤维素              92.5
硬脂酸镁                 3.0
300.0
(2)片剂2                mg/片
SP 008                  20.0
微晶纤维素              410.0
淀粉                    50.0
淀粉羟乙酸钠            15.0
硬脂酸镁                 5.0
                        500.0
(3)胶囊                 mg/胶囊
SP 008                  10.0
胶体二氧化硅            1.5
乳糖                    465.5
预胶化淀粉              120.0
硬脂酸镁                 3.0
                        600.0
(4)注射剂1(1mg/ml)      mg/ml
SP 008(游离碱形式)      1.0
磷酸氢二钠              12.0
磷酸二氢钠              0.7
氯化钠                  0.4
1.0N氢氧化钠溶液        适量
(pH调节至7.0-7.5)
注射用水                适量加至1ml
(5)注射剂2(10mg/ml)     mg/ml
SP 008(游离碱形式)      0.0
磷酸二氢钠              0.3
磷酸氢二钠              1.1
聚乙二醇400             200.0
0.1N氢氧化钠溶液        适量
(pH调节至7.0-7.5)
注射用水                适量加至1ml
(6)气雾剂               mg/筒
SP 008                  20.0
油酸                    10.0
三氯一氟甲烷            5000.0
二氯二氟甲烷            10000.0
三氯四氟乙烷    5000.0
本发明将参照以下详细的实施例作进一步的说明，其中Aβ1-42肽购自American Peptide Co.(Sunnyvale，CA)。普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普鲁卡因酰胺、抗氧化剂叔丁基苯基硝酮(PBN)、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂(+)-MK801、莱恩素和河豚毒素(TTX)购自Sigma(St.Louis，MO)。普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普鲁卡因酰胺SP 015、SP 016和SP 017的结构示于图1。SP 008如下所述由Taros，Inc.(Marburg，Germany)合成。细胞培养的塑料器具购自Corning(Corning，NY)和Packard BioSciences Co.(Meriden，CT)。RNA STAT-60得自TEL-TEST，Inc.(Friends-wood，TX)。TaqMan反转录试剂、无规六聚物和SYBRGreen PCR MasterMix得自Applied Biosystems(Foster City，CA)。
方法
A. 用于普鲁卡因衍生物的计算机筛选
利用ISIS软件(Information Systems，Inc.，San Leandro，CA)，对于天然存在实体的Interbioscreen数据库筛选含有普鲁卡因结构的化合物。所鉴别出的乙酸7-乙酰氧基-3-(4-苯甲酰哌嗪-1-基甲基)-5-羟基-4a，8-二甲基-2-氧-十二氢薁并[6，5-b]呋喃-4-基酯(SP 105)、乙酸5-乙酰氧基-3-(4-苯甲酰哌嗪-1-基甲基)-4-羟基-4a，8-二甲基-2-氧-十二氢薁并[6，5-b]呋喃-7-基酯(SP 016)和3-(4-苯甲酰哌嗪-1-基甲基)-6，6a-环氧基-6，9-二甲基-3a，4，5，6，6a，7，9a，9b-八氢-3H-薁并[4，5-b]呋喃-2-酮(SP 017)化合物购自Interbioscreen(Moscow，Russia)(图1)。
B. 细胞培养和处理
PC 12细胞(鼠嗜铬细胞瘤)(ATCC，Manassas，VA)在37℃和5％CO2下于不含谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中培养，其中含有10％牛血清和5％马血清。这些细胞通过神经元表型的诱导可逆地响应NGF。将PC 12细胞在96孔板(每孔5×104细胞)中用浓度渐增(1，10和100μM)的普鲁卡因、普鲁卡因酰胺、利多卡因、丁卡因、SP 015、SP 016、SP 017或SP 008培养24小时。半Aβ1-42在4℃培养过夜，然后以0.1、1或10μM的最终浓度加到细胞中24小时。
为研究NMDA受体在Aβ1-42诱导的神经毒性中所起的作用，在加入Aβ1-42之前的即刻向细胞培养基中加入浓度递增的(+)-MK801。4小时后用MTT试验确定细胞生存力。为确定普鲁卡因和SP 008对谷氨酸诱发的兴奋性神经毒性的影响，将PC 12细胞用0.3、1、3、10和30μM的普鲁卡因或SP 008预处理24小时，然后用谷氨酸再处理24小时。随后用MTT试验确定细胞生存力。为确定钠通道在Aβ1-42诱发的神经毒性中的作用，PC 12细胞用3、30或300μM的钠通道阻断剂TTX培养4小时，随后加入Aβ1-42。24小时后用MTT法确定细胞生存力。将PC 12在10、100或500μM PBN存在下培养24小时，确定氧化应激在Aβ1-42的毒性中的作用。然后向培养基中加入Aβ1-42。24小时后用MTT试验确定细胞生存力。
C. 细胞生存力测定
Aβ的细胞毒性如前所述(Lecanu et al.(2004)Steroids，69：1-16)用溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑(MTT)试验(Trevigen，Gaithersburg，MD)测定。简言之，向在100μl培养基中培养的细胞中加入10μl MTT溶液。在与以上相同的条件下培养4小时后，加入10μl洗涤剂，将细胞在37℃培养过夜。在600nm和690nm下用Victor分光光度计(EGG-Wallac，Gaithersburg，MD)定量测定蓝色。Aβ1-42的作用以(DO600-DO690)表示。为比较所试验的化合物的保护作用，用Aβ1-42时观察到的MTT信号的减小被认为是NADPH黄递酶活性的100％抑制，用该百分的增加或减少表示所试化合物的作用。
D. ATP测定
ATP浓度如前所述地(Lecanu et al.，同上)用ATPLite-MTM试验法(Packard BioSciences Co.)测定。简言之，根据制造商的建议，将细胞在黑色的96孔View PlateTM上培养，并在Top Count NXTTM计数器(Packard BioSciences Co.)上测定ATP浓度。Aβ1-42的作用以任意的单位表示。为比较试验化合物对ATP回收的潜在的保护作用，将Aβ1-42诱发的ATP浓度降低作为100％减小，试验化合物的作用表示成该百分数的变化。
E. 自由基产生
如前所述(Lecanu et al.，同上)，使用荧光探针二羟基二氯荧光素二乙酸盐(2，7-DCF)(Molecular Probes，Eugene，OR)通过测定自由基产生确定氧化应激。对于这些实验，在聚赖氨酸涂覆的微型板中培养细胞。将细胞用RPMI 1640洗一次，然后用100μl RPMI 1640替换培养基。将细胞在室温下于暗处用100μl 2，7-DCF(50μM)培养45分钟，用Victor多标记计数器(EGG-Wallac，Gaithersburg，MD)测定荧光(激发波长λ＝485nm，发射波长λ＝535nm)。
F. 放射性配体结合性研究
放射性配体结合性研究用表达在Jurkat细胞中的人重组Sigma-1受体进行。将浓度从3.0×10-10至1.0×10-5M递增的普鲁卡因在特定的8nM特异性Sigma-1受体配体[3H]-(+)-喷他佐辛存在于22℃温育120分钟，以确定普鲁卡因的IC50和Hill值nH。
G. 实时定量反转录-聚合酶链式反应(Q-PCR)
将在6孔板中培养18小时的PC 12细胞用浓度递增的普鲁卡因处理所示的时间。处理后，将细胞于1μM的Aβ1-42中暴露24小时。在温育结束时，按照制造商的说明，用RNASTAT-60(Tel-Test，Inc.，Friendswood，TX)萃取全细胞RNA。使用ABI Prism 7700序列测定体系(Perkin-Elmer/Applied Biosystems，Foster，City，CA)用Q-PCR定量测定HMG-CoA还原酶mRNA。RT反应用TaqMan反转录试剂与1μg全RNA和作为各反应的引物的无规六聚体进行，如先前所述(Xu et al.(2003)J.pharmacol.Ther.，307：1148-57)。为了用Q-PCR定量测定鼠HMG-CoA还原酶mRNA，引物按照GenBank AccessionNumber BC 019782用PE/AB引物表达软件设计，该软件是专门设计用来选择引物和探针的。正向引物是5’-GAC TGT GGT TTG TGA AGCTGT CAT-3’(24个核苷酸；SEQ ID NO：1)，反向引物是5’-AAT ACTTCT CTA ACC ACC TTG GCT-3’(24个核苷酸；SEQ ID NO：2)。引物由BioSynthersis，Inc.(Lewisville，TX)合成。反应在由含10μl SYBRGreen PCR Master Mix和1μl引物混合物(各5μM)的20μl溶液及2μl cDNA构成的反应混合物中进行。循环条件为：起始步骤为50℃下2分钟和95℃下10分钟，随后95℃下15秒和60℃下1分钟循环40次。将Ampli Taq Gold聚合酶在95℃活化10分钟。同时将18S RNA扩增并作为内控样使用。为消除非特异性PCR产物如引物二聚体的污染，在该循环方案之后对所有的最终PCR产物进行解链曲线分析。另外，对各样品还进行无RT反应的PCR反应，以便排除基因组DNA污染。收集PCR产物并在3％(w/v)的琼脂/TAE凝胶上扩散以证实产物尺寸。利用PE/AB计算机软件计算18S RNA和样品的循环阈值(Ct)。Ct被确定在该反应的最大指数生长期。相对转录水平计算成x＝2ΔΔCt，其中ΔΔCt＝ΔE-ΔC，ΔE＝Ct实验-Ct18S，ΔC＝Ct对照-Ct18S。
H. 统计分析
将数据用平均值±SD表示。用单向AVOVA对所得数据进行实验组间评估，并用Dunnett试验进行比较。当p＜0.05时认为差别是显著性的。
实施例1.SP 008合成
1.材料和方法
溶剂用标准方法纯化。MS：记录在VG Tribid，Varian CH7上(EI)。薄层色谱分析(TLC)在层厚为0.2mm的硅胶60 F254上进行。NMR谱：Bruker AMX 300。所有共振均以ppm给出，以残余溶剂信号(CDCl3：7.25 ppm)作为对照。
2.2，3，4-三甲氧基苯甲酰氯
将2，3，4-三甲氧基苯甲酸(5.00g，23.6mmol)溶于无水甲苯(2mL)中，加入催化量的N，N-二甲基甲酰胺(2滴)。向该混合物中逐滴加入草酰氯(4.27g，33.6mmol)在甲苯(11ml)中的溶液，室温下继续搅拌3.5小时。减压除去多余的试剂和溶剂(产量：5.13g产物，94％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.82(D，1h，9Hz)，6.68(d，1H，9Hz)，3.89(s，3H)，3.80(s，1H)，MS(E1)m/z 230(M+)，212，195，179，152.
3.4-乙基-1-(2，3，4-三甲氧基苯甲酰)哌嗪SP 008
在0℃向粗制的2，3，4-三甲氧基苯甲酰氯(0.93g，4.0mmol)在无水二氯甲烷(40ml)中的溶液滴加N-乙基哌嗪(0.92g，8.1mmol)。继续搅拌30分钟。用NH4Cl饱和水溶液洗该混合物。水层用二氯甲烷萃取2次，合并的有机层用盐水洗，干燥(MgSO4)后浓缩。粗产物自乙醚/石油醚中重结晶，得到SP 008固体(0.63g，51％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.88(D，1H，8.5Hz)，6.62(d，1H，8.5Hz)，3.83(s，3H)，3.81(s，3H)，3.80(s，3H)，3.76(m，2H)，3.25(m，2H)，2.43(m，4H)，2.35(q，2H，7Hz)，1.02(t，3H，7Hz)；MS(EJ)m/z 308(M+)，237，195，97.
实施例2.用MTT试验、ATP测定和PC 12细胞内游离基产生评估Aβ1-42神经毒性(图2)
Aβ1-42引起PC 12细胞生存力(p＜0.001)(图2A)和胞内ATP浓度(p＜0.001)(图2B)的剂量依赖性降低。还观察到在Aβ1-42为1和10μM时自由基产生诱发的氧化应激显著增高的剂量依赖性关系(分别为p＜0.01和p＜0.001)(图2c)。
实施例3.SP 008对细胞生存力和暴露于浓度递增的Aβ1-42中PC 12细胞的ATP浓度的影响
10μM的SP 008起着对抗0.1μM Aβ1-42诱发的细胞毒性的保护作用(p＜0.01，n＝6)(图3A)，虽然这一浓度不能保存Aβ1-42耗竭的ATP储备液。反常的是，1和100μM的SP 008不能减小0.1μM Aβ1-42诱发的NADPH黄递酶抑制作用(图3A)，但它们阻止ATP减少(p＜0.05)(图3D)。当以1(p＜0.05)、10(p＜0.01)和100μM(p＜0.001)的用量使用时，SP 008显示出由MTT试验确定的对抗1μM Aβ1-42的神经保护作用。这一作用伴随着与剂量有关的ATP保护作用(图3E)。
以10和100μM的浓度服用SP 008显示出对抗10μM Aβ1-42在PC12细胞中诱发毒性的神经保护作用；此效应在10μM(p＜0.05，n＝6)和100μM(p＜0.01，n＝6)浓度均是统计显著性的(图3C)。SP 008的这一作用伴随着与剂量有关的ATP水平的修复，虽然只有100μMSP 008的作用是统计显著性的(p＜0.01，n＝6；图3F)。
实施例4.普鲁卡因和SP 008对谷氨酸在PC 12细胞上诱发的兴奋性细胞毒性的作用
谷氨酸100μM急剧降低PC 12细胞生存力(p＜0.001，n＝6；图4)。普鲁卡因以两相方式阻止谷氨酸诱发的神经毒性。在0.3和10μM观察到最大作用(相对于对照样，p＜0.001，n＝6)。SP 008的作用也是两相的，在3μM达到保护峰值(相对于对照样，p＜0.001，n＝6)，随后在更高浓度的谷氨酸存在下其神经保护性能下降。在相同的浓度下，SP 008的神经保护作用比普鲁卡因的作用更显著。
讨论
在过去几十年间，改进与AD相关的胆碱能网络机能不良是科学界的主要热点。这导致以他克林为代表的乙酰胆碱酯酶抑制剂类(AchEI)治疗药物的诞生。尽管临床数据充满希望，但他克林的疗效中等，而以加兰他敏和多奈哌齐的代表的新一代的Ach EI与他克林相比，推迟症状发作的作用没有改进。短短的1-2年的推迟虽然对患者有其亲属很宝贵，但多半是由于胆碱能神经元的进行性退化，是Ach EI的限制。即使AD患者的胆碱能传递的改进是有关和必要的，但它肯定不足以停止或逆转疾病的进展。此后在AD药物开发中尚无大的进展，虽在一种谷氨酸能NMDA-亚型受体的拮抗剂美金刚(memantine)近来被批准在美国市场销售。本发明提供了由一系天然化合物的同源结构域衍生的一类新化合物，所述天然化保物是用普鲁卡因作为起始点通过筛选数据库得到的。这些分子能保护鼠嗜铬细胞瘤PC 12细胞对抗Aβ1-42神经毒性。
肾上腺激素皮质醇被认为通过增加神经元死亡、改变情绪和衣发抑郁会恶化AD的发展。Xu等人近来报道一种基于普鲁卡因的药物制剂能降低应激诱发的大鼠肾上腺皮质类固醇功能亢进(J.Pharmacol.Exp.Ther.307：1148(2003))，因此提出普鲁卡因作为一种有意义的治疗AD的方法。然而，普鲁卡因快速降解成对氨基苯甲酸和二乙基氨基乙醇使其难以用于AD的治疗。SP 015、SP 016和SP 017是用普鲁卡因作为亚结构对天然化合物数据库进行筛选得到(图1)，它们来源自菊科植物欧亚旋覆花和亮绿蒿。引人注目的是，蒿属植物传统上就被作为智力功能丧失或下降的修复剂(Wake et al.(2000)J.Ethnopharmacol.69：105-14)。
普鲁卡因能部分恢复由Aβ1-42诱发的ATP产生的减少，表明了对线粒体呼吸链的活性。在所分泌的中性化合物中，SP 017显示出最高的保护线粒体功能的作用，这由观察到的线粒体黄递酶活性的变化得到证实，抑制Aβ1-42毒性的效力范围为30-70％。有意思的是，尽管SP015和SP 016之间存在显著的化学类似性，但在以1μM施用时，SP 016只对低Aβ1-42浓度(0.1μM)显示出明显的作用，而1μM的SP 015即使对所检验的最高Aβ1-42浓度也具有显著的保护作用。令人惊奇的是，这些不同化合物对PC 12在暴露于Aβ1-42后的生存力的影响与所观察到的对ATP含量恢复的影响不完全一致。特别是，SP 015在1和10μM只对10μM Aβ1-42显示神经保护作用，而SP 016则观察不到作用。这一明显差异表明，胞内ATP贮存物的保存不是普鲁卡因和普鲁卡因衍生物藉以发挥其神经保护性能的唯一机制。
SP 015、SP 016和SP 017的化学结构均有一个共同的4-乙基-1-苯甲酰哌嗪亚结构。用SP 015和SP 017得到的神经保护作用和由SP015、SP 016和SP 017造成的保存ATP胞内贮存物对抗Aβ1-42的作用，导致以下的设想，即，这一共同的亚结构可能至少部分地是本发明对于这些天然化合物所公开的“抗淀粉样蛋白”作用的原因。该亚结构经改性后衍生出4-乙基-1-(2，3，4-三甲氧基苯甲酰)哌嗪化合物(SP008)，它可以分两步制备。
SP 008显示出显著的对抗Aβ1-42的神经保护作用，并且对于两个最高浓度的Aβ1-42比普鲁卡因更有效力。SP 008对于10μM Aβ1-42显示出有意义的剂量-效果关系，预示着与该系列最有效的天然化合物SP017相比，在高浓度时没有毒性。SP 008对PC 12生存力的有利作用由于它即使对于10μM Aβ1-42也能防止Aβ1-42诱发的胞内ATP贮物耗竭而得到进一步的证实。象普鲁卡因一样，SP 008即使在浓度低至0.3μM时也能显著降低谷氨酸对PC 12细胞引起的神经毒性，这大概是其对抗Aβ1-42的神经保护作用的原因。
虽然对于NMDA受体的可能阻断尚需澄清，但这些数据表明SP008与用于AD治疗的NMDA拮抗剂美金刚有相同的药物机制。此外，因其与普鲁卡因有共同的结构，SP 008可有与普鲁卡因的某些作用有机制相同。
就像个别地并入作为参考一样，本文中所有的出版物、专利和专利文件均被引用作为参考。本发明已参照各个具体的和优选的实施方案及技术作了描述。然而，应当理解，在保持在本发明的精神和范围之内的同时，可以作出很多变动和修改。
序列表
<110>Samaritan Pharmaceuticals，Inc.
Georgetown University
Lecanu，Laurent
Greeson，Janet
Papadopoulos，Vassilios
<120>(4-烷基哌嗪基)(苯基)甲酮
<130>1941，001WO1
<150>US 60/562,643
<151>2004-04-15
<160>2
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成引物
<400>1
gactgtggtt tgtgaagctg tcat    24
<210>2
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成引物
<400>2
aatacttctc tcaccacctt ggct    24

Claims (27)

1.一种治疗受阿尔茨海默病威胁或折磨的哺乳动物的方法，包括向该哺乳动物施用有效数量的式I化合物及其可药用的盐：
其中：
a)R1、R2和R3各自为H、OH、卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基((C1-C6)烷基)、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷酰基、卤素(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷硫基、硫代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷酰氧基，N(R6)(R7)，其中R6和R7分别是H、O、(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基、苯基或苄基，或者R6和R7与它们所连接的N一起形成一个5或6元环，该环可任选地含有1-2个S、N(R6)或非过氧化物的O；或者R1和R2合起来是亚甲二氧基；
b)Y和Z合起来是＝O、-O(CH2)mO-或-(CH2)m-，其中m是2-4，或者Y是H，Z是OR9或SR9，其中R9是H或(C1-C4)烷基；
c)X是(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基(C3-C12)烯基、(C2-C6)炔基、羧基、(C1-C6)烷氧羰基、硫代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷硫基、(C3-C12)杂环基、(C3-C12)杂环烷基(C1-C6)烷基、芳基或杂芳基，可任选地被1、2或3个R1取代。
2.权利要求1的方法，其中的数理对于抑制Aβ肽引起的神经毒性是有效的。
3.权利要求1或2的方法，其中的数量对于抑制Aβ1-42神经毒性是有效的。
4.权利要求1-3的方法，其中的数量对于抑制谷氨酸在该哺乳动物中引起的神经毒性有效。
5.权利要求1-4的方法，其中的数量对于维持该哺乳动物中神经元细胞内的ATP水平有效。
6.权利要求5的方法，其中细胞在体外被接触。
7.权利要求5的方法，其中细胞在体内被接触。
8.权利要求1-5或7的方法，其中式I化合物是施用于人。
9.权利要求8的方法，其中的人是处在AD的早期阶段。
10.权利要求8的方法，春中的人是AD患者。
11.权利要求1-10的方法，其中R1、R2或R3是N(R6)(R7)。
12.权利要求1-11的方法，其中R2是(C1-C6)烷氧基。
13.权利要求1-12的方法，其中R3是(C1-C6)烷氧基。
14.权利要求1-10或12-13的方法，其中R1、R2和R3均为(C1-C3)烷氧基。
15.权利要求1-14的方法，其中Y和Z合起来是＝0。
16.权利要求1-14的方法，其中Y是H，Z是OH。
17.权利要求1-16的方法，其中X是(C1-C6)烷基。
18.权利要求1-17的方法，其中X是CH3。
19.权利要求1-5和7-18的方法，其中式I化合物是口服用药。
20.权利要求1-5和7-18的方法，其中式I化合物是肠道外用药。
21.权利要求1-20的方法，其中式I化合物与一种可药用的载体联合服用。
22.权利要求21的方法，其中载体是液体、混悬液或凝胶。
23.权利要求21的方法，其中载体是固体。
24.权利要求1-23的方法，其中式I化合物是[(2，3，4-三甲氧基)苯基]-[4-乙基哌嗪-1-基]甲酮。
25.一种组合物，其中含有与可药用载体组合的式(I)化合物。
26.一种治疗与谷氨酸网络或通道活性过高有关的神经病的方法，包括向受到该神经病威胁和/或折磨的哺乳动物施用有效数量的式(I)化合物。
27.式(I)化合物制备用于治疗至少一种AD症状的药物的应用。
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