CN101010316A - 用于抑制chk1的化合物 - Google Patents

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Abstract

公开了可用于治疗与DNA损伤或DNA复制中的损害有关的疾病和C1－3亚烷基OR3状况的取代的式(I)脲化合物，其中X1是空的、－O－、－S－、－CH2－或－N(R1)－；X2是－O－、－S－或－N(R1)－；Y是O或S；或者＝Y代表附着在共同的碳原子上的两个氢原子；W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1－6烷基；R6是－C≡C－R7或杂芳基；R8、R9和R10独立地选自卤、任选地被取代的C1－6烷基、C2－6链烯基、C2－6炔基、OCP3、CF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R8)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1－3亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1－3亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1－3亚烷基OR3、N(R1)C(O)C1－3亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1－3亚烷基SO2NR3、C1－3亚烷基OR3和SR3；还公开了制备所述化合物的方法，和它们作为治疗剂的用途，例如，用于治疗癌症和特征在于DNA复制、染色体分离或细胞分裂的缺陷的其它疾病。

Description

用于抑制CHK1的化合物
与相关申请的交叉参考
本申请要求享有2004年7月2日提交的美国临时申请系列号60/585,292的利益。
发明领域
本发明涉及用于抑制维持和修复遗传材料的完整性的酶的化合物。更具体地，本发明涉及一系列芳基-和杂芳基-取代的脲化合物，制备这些化合物的方法，和它们作为治疗剂的用途，例如，用于治疗癌症和特征在于脱氧核糖核酸(DNA)复制、染色体分离或细胞分裂的缺陷的其它疾病。
发明背景
许多种疾病、状况和障碍(在下文中称作“征候”)的特征在于包含异常增殖的细胞。如本文所使用的，“异常增殖的细胞”(或“异常的细胞增殖”)指偏离正常的、正确的或预期的过程的细胞增殖。例如，异常的细胞增殖包括其中DNA或其它细胞组分已经受损或有缺陷的细胞的不适当的增殖。异常的细胞增殖也包括由下述情况造成、介导或导致下述情况的征候：不适当地高水平的细胞分裂，不适当地低水平的细胞死亡(例如，细胞凋亡)，或二者。这样的征候的特征在于，例如，细胞、细胞群或组织的单个或多个局部的异常增殖，且包括癌性的(良性的或恶性的)和非癌性的征候。
作为定义，所有癌症(良性的和恶性的)包含一些异常的细胞增殖形式。一些非癌性征候也包含异常的细胞增殖。包含异常的细胞增殖的非癌性征候的实例包括类风湿性关节炎、银屑病、白癫风、韦格纳肉芽肿病和全身性狼疮。
治疗包含异常增殖的细胞的征候的一个方案包括使用DNA损伤剂。这些试剂被设计用于通过破坏关键的细胞过程，例如DNA代谢、DNA合成、DNA转录和微管纺锤体形成，杀死异常增殖的细胞。它们也可以通过例如将破坏染色体结构完整性的损伤导入DNA来起作用。以试图对异常增殖的细胞的造成最大的损伤和作为结果的细胞死亡、且对正常的健康的细胞造成最小的损伤的方式，设计和施用DNA损伤剂。
迄今为止，已经开发了许多种DNA损伤剂，包括化疗和辐射，且正在开发其它的。不幸的是，在治疗包含异常的细胞增殖的状况中，尤其是在癌症的治疗中，DNA损伤剂的有效性已经低于所预期的。这样的试剂对异常增殖的细胞的超过对健康细胞的选择性(有时称作治疗指数)经常是最低限度的。
而且，所有细胞都具有感觉和修复机制，其可以以和DNA损伤剂相反的目的起作用。这样的感觉机制(称作细胞周期关卡)有助于维持各种细胞复制阶段的次序，并确保高保真度地执行每个步骤(Hartwell等，Science，246：629-34(1989)；Weinert等，Genes Dev.，8：652(1994))。当细胞检测到DNA损伤时，包括由DNA损伤剂有目的地诱导的损伤，某些信号传导途径激活细胞周期关卡，且细胞复制周期暂时中止(“停滞”)。该停滞使细胞有时间修复它们的DNA，经常达到足以使受影响的细胞继续存活和增殖的程度。在异常增殖的细胞的情况下，不希望该修复，因为它可能破坏诱导足以杀死这样的细胞的DNA损伤的努力。
例如，称作GEMZARTM(吉西他滨或2′，2′二氟-2′-脱氧胞嘧啶核苷)的化疗剂通过将它自身整合进合成中的DNA，来破坏DNA。剩下的未修复的、受损的DNA通常不能维持生命。但是，在许多靶细胞中，细胞周期关卡检查不正确地产生的(或以其他方式受损的)DNA。激活的细胞周期关卡触发细胞周期停滞足够的时间，以允许修复受损的DNA。这是将异常增殖的细胞理论化(theorized)，以抵抗DNA-损伤剂(例如化疗、辐射和其它疗法)的细胞杀死作用的一种方式。
其它DNA-损伤剂造成肿瘤细胞停滞在S-期。已经观察到肿瘤细胞简单地通过在施用化疗剂时停滞在S期，来抵抗某些化疗。那么，一旦将药物去除，就会修复DNA损伤，细胞周期停滞中止，且细胞继续进行剩余的细胞周期(Shi等，Cancer Res.61：1065-72，2001)。其它治疗剂造成细胞周期停滞在其它关卡，包括G1和G2。因此，预期各种DNA损伤关卡的抑制，有助于阻止细胞修复治疗地诱导的DNA损伤，并使靶定的细胞对DNA损伤剂敏化。又预期这样的敏化增加这些治疗的治疗指数。
在所有真核生物物种中，细胞周期的基本过程和调节模式在结构上和功能上是相同的。有丝分裂的(体细胞的)细胞周期由4个期组成：G1(间期)期、S(合成)期、G2(间期)期和M(有丝分裂)期。G1、S和G2期共同称为细胞周期的分裂间期。在G1期期间，细胞的生物合成活性高速进展。当DNA合成开始时，S期开始，且当细胞核的DNA内容物已经复制、且形成2套相同的染色体时终止。
然后，细胞进入G2期，它持续到有丝分裂开始。在有丝分裂中，染色体配对并分离，形成2个新核，并发生胞质分裂，其中细胞分裂成2个子细胞，每个接受一个含有2套染色体之一的核。胞质分裂使M期终止，并标志着下一个细胞周期的分裂间期的开始。细胞周期事件进展的次序受到严密调控，从而使得一个细胞周期事件的开始依赖于前一个细胞周期事件的结束。这允许遗传材料的复制和分离从一代体细胞至下一代的保真度。
已经报道，细胞周期关卡包括至少3类不同的多肽，其作为对细胞周期信号或染色体机制中缺陷的反应而顺序地起作用(Carr，Science，271：314-15，1996)。第一类是探测或感觉DNA损伤或细胞周期中的异常的蛋白家族。这些传感蛋白包括共济失调毛细血管扩张症突变的蛋白(Atm)和共济失调毛细血管扩张症Rad-相关蛋白(Atr)。第二类多肽放大和传递由检测器检测到的信号，且其实例是Rad53(Alen等，Genes Dev.8：2416-88，1994)和Chk1。第三类多肽包括细胞周期效应物，例如p53，其介导细胞反应，例如有丝分裂和细胞凋亡的停滞。
很多目前对于细胞周期关卡功能的理解都来自肿瘤衍生的细胞系的研究。在许多情况下，肿瘤细胞已经失去了关键的细胞周期关卡(Hartwell等，Science 266：1821-28，1994)。据报道，在细胞向肿瘤状态发展中的关键步骤是获得突变，这些突变使细胞周期关卡途径(例如包含p53的那些)失活(Weinberg，Cell 81：323-30，1995；Levine，Cell88：3234-31，1997)。这些细胞周期关卡的丧失，导致肿瘤细胞的复制，尽管存在DNA损伤。
具有完整细胞周期关卡的非癌性组织一般地与单个关卡途径的暂时破坏隔离开。然而，肿瘤细胞在控制细胞周期进行的途径中存在缺陷，从而其它关卡的扰乱使它们对DNA损伤剂特别敏感。例如，含有突变的p53的肿瘤细胞在G1 DNA损伤关卡和保持G2 DNA损伤关卡的能力方面都有缺陷(Bunz等，Science，282：1497-501，1998)。预期以G2关卡或S期关卡的开始为靶的关卡抑制剂能进一步削弱这些肿瘤细胞修复DNA损伤的能力，且因此是提高辐射和全身化疗的治疗指数的候选物(Gesner，Abstract at SRI Conference：ProteinPhosphorylation and Drug Discovery World Summit，March 2003)。
在有DNA损伤或对DNA复制的任何妨碍物存在下，关卡蛋白Atm和Atr启动导致细胞周期停滞的信号转导途径。已经表明Atm在电离辐射导致的DNA损伤关卡中起作用。Atr受造成双链DNA断裂、单链DNA断裂的试剂和阻断DNA辐射的试剂的刺激。
Chk1是位于DNA损伤关卡信号转导途径中的Atm和/或Atr的下游的蛋白激酶(Sanchez等，Science，277：1497-501，1997；美国专利No.6,218,109)。在哺乳动物细胞中，Chk1被磷酸化，这是对引起DNA损伤的试剂，包括电离辐射、紫外(UV)线和羟基脲的反应(Sanchez等，同上，Lui等，Genes Dev.，24：1448-59，2000)。该激活哺乳动物细胞中的Chk1的磷酸化依赖于Atm(Chen等，Oncogene，18：249-56，1999)和Atr(Lui等，同上)。此外，已经表明Chk1磷酸化wee1(O′Connell等，EMBO J.，16：545-54，1997)和Pds1(Sanchez等，Science，286：1166-71，1999)，它们是已知对细胞周期控制很重要的基因产物。
这些研究证明，哺乳动物Chk1在导致在S期停滞的依赖于Atm的DNA损伤关卡中起作用。近来已经阐明了Chk1在S期哺乳动物细胞中的作用(Feijoo等，J.Cell.Biol.，154：913-23，2001；Zhao等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，99：14795-800，2002；Xiao等，J Biol Chem.，278(24)：21767-773，2003；Sorensen等，Cancer Cell，3(3)：247-58，2003)，突出了Chk1在监控DNA合成的完整性中的作用。Chk1通过磷酸化调节细胞周期蛋白A/cdk2活性的Cdc25A，引起S-期停滞(Xiao等，同上和Sorensen等，同上)。Chk1还通过磷酸化和灭活双特异性磷酸酶Cdc25C(随着细胞从G2向有丝分裂的进展，该酶通常使细胞周期蛋白-B/cdc2(也称作Cdk1)去磷酸化)，来引起G2停滞(Fernery等，Science，277：1495-7，1997；Sanchez等，同上；Matsuoka等，Science，282：1893-91，1998；和Blasina等，Curr.Biol.，9：1-10，1999)。在两种情况下，Cdk活性的调节诱导细胞周期停滞，以在有DNA损伤或未复制的DNA存在下，阻止细胞进入有丝分裂。
其它类的细胞周期关卡抑制剂在G1或G2/M期起作用。UCN-01或7-羟基星形孢菌素，最初被分离为对蛋白激酶C具有它的基本效应的非特异性的激酶抑制剂，但是近来已经发现它抑制Chk1的活性，并取消G2细胞周期关卡(Shi等，同上)。因而，因为UCN-01是非选择性的Chk1抑制剂，所以它在高剂量时是对细胞有毒的。在低剂量时，它会非特异性地抑制许多细胞激酶，且也抑制G1关卡(Tenzer等，Curr.Med.Chem.Anti-Cancer Agents，3：35-46，2003)。
UCN-01已经与癌症疗法联合使用，例如辐射、抗癌剂喜树碱(Tenzer等，同上)和吉西他滨(Shi等，同上)，取得有限的成功。另外，UCN-01已经用于在成胶质细胞瘤细胞中加强替莫唑胺(TMZ)-诱导的DNA错配修复(MMR)作用(Hirose等，Cancer Res.，61：5843-49，2001)。在临床上，UCN-01不是如期望的那样有效的化疗剂，可能是由于治疗方案的失败和不能鉴别特别关键的分子靶(Grant等，Drug Resistance Updates，6：15-26，2003)。因而，Mack等报道了UCN-01对顺铂在培养的非小细胞肺癌细胞系中的细胞周期-依赖性的增强，但是未特异性地鉴定由UCN-01靶定的关键细胞周期关卡(Mack等，Cancer Chemother.Pharmacol.，51(4)：337-48，2003)。
存在几种使肿瘤细胞对影响细胞周期的化疗治疗敏化的其它策略。例如，2-氨基-嘌呤的施用取消了多种细胞周期关卡机制，例如含羞草碱-诱导的G1停滞或羟基脲-诱导的S期停滞，从而允许细胞进展至且经过有丝分裂(Andreassen等，Proc Natl Acad Sci USA，86：2272-76，1992)。咖啡因(一种甲基黄嘌呤)也已经用于通过介导经G2关卡的进展，并从而诱导细胞死亡来增强DNA-损伤剂(例如顺铂和电离辐射)的细胞毒性，(Bracey等，Clin.Cancer Res.，3：1371-81，1997)。但是，用于完成细胞周期取消的咖啡因的剂量超过了临床上可接受的水平，且不是可行的治疗选择。另外，Chk1激酶的反义核苷酸已经被用于增加对拓扑异构酶抑制剂BNP1350的敏感性(Yin等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，295：435-44，2002)，但是表现出一般地与反义治疗和基因治疗有关的问题。
已经公开了Chk1抑制剂，包括美国专利申请号10/087,715和美国临时专利申请号60/583,080和60/602,968所述的芳基-和杂芳基-取代的脲化合物；美国专利公开号2004/0014765、美国专利公开号2003/199511、美国专利公开号2004/0014765和WO 03/101444所述的二芳基脲化合物；Fan等，Cancer Res.55：1649-54，1995所述的甲基黄嘌呤和有关的化合物；WO 03/029241和WO 03/028731所述的ureidothiphenes；WO 03/028724所述的N-吡咯并吡啶基羧酰胺；WO01/57206和美国专利号6,211,164所述的反义Chk1寡核苷酸；WO00/16781所述的Chk1受体拮抗剂；WO 03/037886所述的杂芳族羧酰胺衍生物；WO 03/029242所述的氨基噻吩；WO 03/004488所述的(吲唑基)苯并咪唑；美国专利公开号2004/0092535和WO 04/018419所述的苯并咪唑喹啉酮；WO 02/16326所述的杂环-羟亚氨基芴；美国专利号6,495,586所述的scytoneman衍生物，例如scytonemin；WO 01/53274所述的杂芳基苯甲酰胺；WO 01/53268所述的吲唑；上面的Tenzer等所述的indolacarbazole；WO 02/070515所述的色满衍生物；Schultz等，J.Med.Chem.，Vol：2909-19，1999所述的paullones；WO 99/17769所述的indenopyrazole；Sedlacek等，Int J.Oncol.，9：1143-68，1996所述的黄酮；WO 98/53050所述的丝氨酸苏氨酸激酶的肽环的肽衍生物；WO 03/051838所述的羟吲哚；WO04/063198所述的二氮杂吲哚酮(diazepinoindolone)；WO 04/048343所述的嘧啶；WO 04/014876所述的脲化合物；和WO 03/091255所述的吡咯并咔唑、苯并呋喃异吲哚(benzofuroisoindole)和氮杂环戊芴。
但是，本领域仍然需要Chk1的有效的且选择性的抑制剂。本发明解决了该需要和其它需要。
发明概述
本发明涉及关卡激酶Chk1的抑制剂。本发明的Chk1抑制剂可用于治疗包含异常的细胞增殖的征候，和用作治疗与DNA损伤或DNA复制中的损害有关的征候的化学敏化剂和辐射敏化剂。
因此，本发明的一个方面是，提供结构式(I)的化合物。该化合物可用于抑制Chk1的方法中，该方法包含向需要其的个体施用有效量的结构式(I)的化合物的步骤。
式(I)的化合物具有结构式：
Figure A20058002940600141
其中X1是空的、-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；
X2是-O-、-S-或-N(R1)-；
Y是O或S；或者＝Y代表附着在共同的碳原子上的两个氢原子；
W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-6烷基，其中所述芳基W任选被1-4个由R2代表的取代基取代，所述杂芳基W任选被1-4个由R5代表的取代基取代，且所述杂环烷基和环烷基W任选地被1或2个C1-6烷基取代基取代；
R1选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
R2选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基SO2NR3、C1-6亚烷基OR3和SR3；
R3选自氢，卤，C1-6烷基，C2-6链烯基，环烷基，芳基，杂芳基，SO2R4，被一个或多个卤、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R4)2和SO2R4取代的C1-6烷基，C1-6亚烷基芳基，C1-6亚烷基杂芳基，C1-6亚烷基C3-8杂环烷基，C1-6亚烷基SO2芳基，任选地被取代的C1-6亚烷基N(R4)2，OCF3，C1-6亚烷基N(R4)3 +，C3-8杂环烷基，和CH(C1-6亚烷基N(R4)2)2，或2个R3基团一起形成任选地被取代的3-至8-元脂族环；
R4选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-6亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或2个R4基团一起形成任选地被取代的3-至8-元环；
R5选自C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、杂环烷基、N(R3)2、OR3、卤、N3、CN、C1-6亚烷基芳基、C1-6亚烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)N(R3)2、N(R1)C(O)R3、N(R1)C(O)OR3，和
Figure A20058002940600151
R6是-C≡C-R7或杂芳基；
R7选自氢、C1-6烷基、芳基、C1-6亚烷基芳基、杂芳基、C1-6亚烷基杂芳基、烷氧基；
R8、R9和R10独立地选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、OCF3、CF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)-OR3、N(R8)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基OR3、N(R1)C(O)-C1-3亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基SO2NR3、C1-3亚烷基OR3和SR3；
或它们的药学上可接受的盐或前体药物或溶剂化物。
本发明的另一个方面是，提供包含一种或多种结构式(I)的化合物的药物组合物，和该组合物在征候的治疗性治疗中的用途，其中Chk1的抑制(体内或离体)提供了治疗益处或具有研究或诊断重要性。
本发明的另一个方面是，提供使接受化疗或辐射治疗的治疗的受试者的细胞对征候敏感化的方法，其包含与化疗剂、辐射治疗剂或二者联合地向该个体施用结构式(I)的化合物。该方法治疗的非限制性征候是癌症。
本发明的另一个方面是，提供抑制或阻止异常的细胞增殖的方法。在一个实施方案中，该方法包含使包含异常增殖的细胞的细胞群体接触至少一种Chk1激活剂，其量和时间足以基本上使异常增殖的细胞中的细胞周期停滞同步化。在细胞群体中基本上达到细胞周期停滞的同步化后，使细胞群体接触至少一种Chk1抑制剂，其量和时间足以基本上取消细胞周期停滞。
本发明的另一个方面是，提供人药物用途的制品，其包含：
(a)药物组合物，其包含结构式(I)的化合物；
(b)包装插页，其告知该组合物可用于治疗包含异常的细胞增殖的征候；和，任选地，
(c)容器。
本发明的另一个方面是，提供：
(a)药物组合物，其包含结构式(I)的化合物；
(b)包装插页，其告知该组合物可用作治疗与DNA损害或DNA复制有关的征候的化学敏化剂和辐射敏化剂；和，任选地，
(c)容器。
从下面的描述中，可以明白本发明的这些方面和其它方面。
优选实施方案的详细描述
本发明的化合物具有结构式(I)：
其中X1是空的、-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；
X2是-O-、-S-或-N(R1)-；
Y是O或S；或者＝Y代表附着在共同的碳原子上的两个氢原子；
W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-6烷基，其中所述芳基W任选被1-4个由R2代表的取代基取代，所述杂芳基W任选被1-4个由R5代表的取代基取代，且所述杂环烷基和环烷基W任选地被1或2个C1-6烷基取代基取代；
R1选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
R2选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基SO2NR3、C1-6亚烷基OR3和SR3；
R3选自氢，卤，C1-6烷基，C2-6链烯基，环烷基，芳基，杂芳基，SO2R4，被一个或多个卤、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R4)2和SO2R4取代的C1-6烷基，C1-6亚烷基芳基，C1-6亚烷基杂芳基，C1-6亚烷基C3～8杂环烷基，C1-6亚烷基SO2芳基，任选地被取代的C1-6亚烷基N(R4)2，OCF3，C1-6亚烷基N(R4)3 +，C3-8杂环烷基，和CH(C1-6亚烷基N(R4)2)2，或2个R3基团一起形成任选地被取代的3-至8-元脂族环；
R4选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-6亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或2个R4基团一起形成任选地被取代的3-至8-元环；
R5选自C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、杂环烷基、N(R3)2、OR3、卤、N3、CN、C1-6亚烷基芳基、C1-6亚烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)N(R3)2、N(R1)C(O)R3、N(R1)C(O)OR3，和
Figure A20058002940600171
R6是-C≡C-R7或杂芳基；
R7选自氢、C1-6烷基、芳基、C1-6亚烷基芳基、杂芳基、C1-6亚烷基杂芳基、烷氧基；
R8、R9和R10独立地选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、OCF3、CF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)-OR3、N(R8)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基OR3、N(R1)C(O)-C1-3亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基SO2NR3、C1-3亚烷基OR3和SR3；
和它们的药学上可接受的盐或前体药物或溶剂化物。
本发明的优选化合物是这样的，其中X1和X2是-N(H)-；
Y是O或S；且
W是任选地被取代的杂芳基。在一个实施方案中，W是含有至少2个选自N、O和S的杂原子的杂芳基，所述杂芳基环任选地被1-4个选自下述的取代基取代：任选地被取代的C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、C(O)N(R3)2、CO2R3、CN和卤，其中R3如前面所定义。
其它优选的结构式(I)化合物是这样的，其中W选自哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基，其任选地被1-4个选自下述的取代基取代：C1-6烷基、芳基、N(R3)2、C(O)N(R3)2、CO2R3、OR3和卤。
在有些优选的实施方案中，W选自
Figure A20058002940600181
Figure A20058002940600182
和
Figure A20058002940600183
其任选地被1-4个选自下述的取代基取代：C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、杂芳基、CN、CO2R3、N(R3)2、OR3和卤。
在更优选的实施方案中，W是
Figure A20058002940600184
或
在一个最优选的实施方案中，W是吡嗪基，且X1和X2各自是N(H)。
在另一个优选的实施方案中，R6是选自下述的杂芳基：
Figure A20058002940600192
和
Figure A20058002940600193
且其任选地被C1-3亚烷基N(R4)2取代。
如本文所使用的，术语“烷基”指含有指定数目碳原子的直链和支链烃基，一般地为甲基、乙基以及直链和支链丙基和丁基。除非另有说明，烃基可含有最高达20个碳原子。术语“烷基”包括“桥连烷基”，即C6-C16二环或多环烃基，例如降冰片烷基(norbornyl)、金刚烷基(adamantyl)、二环[2.2.2]辛基、二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基或十氢萘基。烷基可以被例如下列基团取代：羟基(OH)、卤、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、氨基(N(R3)2)和磺酰基(SO2R3)，其中R3如前面所定义。
术语“环烷基”指环状C3-8烃基，例如环丙基、环丁基、环己基和环戊基。“杂环烷基”类似地定义为环烷基，只是环含有1-3个独立地选自氧、氮和硫的杂原子。环烷基和杂环烷基可以是饱和的或部分不饱和的环系，其任选地被例如1-3个独立地选自下列的基团取代：C1-4烷基、C1-3亚烷基OH、C(O)NH2、NH2、氧代(＝O)、芳基、三氟乙酰基和OH。杂环烷基可任选地进一步被C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C1-3亚烷基芳基或C1-3亚烷基杂芳基N-取代。
术语“链烯基”与“烷基”的定义相同，只是该基团含有碳碳双键。
术语“炔基”与“烷基”的定义相同，只是该基团含有碳碳三键。
术语“亚烷基”指具有取代基的烷基。例如，术语“C1-6亚烷基C(O)OR”指被-C(O)OR取代的含有1-6个碳原子的烷基。亚烷基任选地被一个或多个以前作为任选的烷基取代基列出的取代基取代。
术语“卤”或“卤素”指氟、溴、氯和碘。
单独的或组合的术语“芳基”指单环或多环芳族基团，优选单环或二环芳族基团，例如苯基或萘基。除非另有说明，芳基可以是未取代的或者被一个或多个(特别是1-4个)独立地选自下列的基团取代的：例如，卤、C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)-C1-3亚烷基SO2NR3、C1-3亚烷基OR1和SR3，其中R1和R3如前面所定义。示例性的芳基包括，但不限于，苯基、萘基、四氢萘基、氯苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、硝基苯基、2，4-甲氧基氯苯基等。术语“芳基C1-3烷基”和“杂芳基C1-3烷基”指具有C1-3烷基取代基的芳基或杂芳基。
术语“杂芳基”指含有1或2个芳环、且在芳环中含有至少一个氮、氧或硫原子的单环或二环环系。除非另有说明，杂芳基可以未取代或者被一个或多个(特别是1-4个)选自下列的取代基取代：例如，C1-6烷基、芳基、杂芳基、CF3、CN、C(O)N(R3)2、CO2R2、N(R3)2、OR3和卤，其中R3如前面所定义。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡啶基、唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、三嗪基、三唑基、异噻唑基、异唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基(thiadiazolyl)。
术语“氢”是-H。
术语“羟基”是-OH。
术语“硝基”是-NO2。
术语“氰基”是-CN。
术语“异氰基”是-NC。
术语“三氟甲氧基”是-OCF3。
术语“叠氮基”是-N3。
术语“3-至8-元环”指碳环和杂环脂族或芳族基团，包括但不限于吗啉基、哌啶基、苯基、苯硫基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、嘧啶基和吡啶基，其任选被一个或多个(特别是1-3个)上面为芳基所例举的取代基取代。
通过下标指出含烃部分的碳原子含量，所述下标指出了部分中碳原子的最小和最大数目，例如“C1-6烷基”指具有1-6个(包括端值)碳原子的烷基。
在本文的结构中，对于没有取代基的键，所述取代基是甲基，例如
Figure A20058002940600211
是
Figure A20058002940600212
当没指出有取代基附着在环的碳原子上时，应当理解为该碳原子含有适当数目的氢原子。此外，当没指出有取代基附着在羰基或氮原子上时，例如，应当理解该取代基为氢，例如
是
Figure A20058002940600214
和
R-N是R-NH2。
缩写“Me”是甲基。缩写CO和C(O)是羰基(C＝O)。
符号N(Rx)(其中x代表α或数字字符，例如Ra、Rb、R3、R4等)用于表示附着在共同的氮原子上的两个Rx基团。当用于这样的概念中时，Rx基团可以相同或不同，并选自如通过Rx基团所定义的基团。
激活细胞周期关卡的DNA-损伤剂在本文中通常称作“关卡激活剂”。激活命名为“Chk1”(发音为“check-one”)的关卡的DNA-损伤剂在本文中称作“Chk1激活剂”。类似地，这样的关卡的抑制剂在本文中分别称作“关卡抑制剂”和“Chk1抑制剂”。
如本文所使用的，Chk1抑制剂是能至少部分地取消Chk1蛋白的细胞周期关卡活性的化合物。当充分地克服细胞关卡机制，以允许细胞从它停在的细胞周期的期进入细胞周期的下一个期，或者允许细胞直接通到细胞死亡时，实现了细胞周期关卡的取消。细胞周期关卡的取消允许细胞将损伤或缺陷带至随后的细胞周期的期，从而诱导或促进细胞死亡。细胞死亡可以通过任何相关的机制发生，包括细胞凋亡和有丝分裂的灾变。本发明的化合物是Chk1抑制剂。
Chk1激活剂包括具有激活Chk1激酶活性的能力的任何已知的或后来发现的试剂，并从而诱导至少部分的细胞周期停滞。Chk1激活剂包括能使细胞周期停滞在细胞周期的任意期的试剂，该期在本文中可以称作激活剂的“靶期”。靶期包括除了有丝分裂以外的任何细胞周期的期，即G1期、S期和G2期。在本发明中有用的Chk1激活剂包括DNA损伤剂，例如化疗剂和/或辐射。辐射Chk1激活剂包括，但不限于，电离辐射。电离辐射包括能通过与物质相互作用产生离子对的电磁的或微粒的辐射。电离辐射包括X和γ射线、α和β粒子、中子和带电荷的核。辐射包括紫外线、可见光、红外线辐射、微波辐射和其混合物。可以使用测定(例如实施例9所述的测定)来确定试剂是否是Chk1激活剂。
“抑制异常的细胞增殖”指延缓异常增殖的细胞的增殖速度，或完全消除这样的增殖。该抑制可以源自降低的复制速度，提高的细胞死亡速度，或二者。细胞死亡可以通过任何机制发生，包括细胞凋亡和有丝分裂的灾变。
“阻止异常的细胞增殖”指在发生之前抑制异常的细胞增殖，或抑制其复发。
“体内”指在活受试者内，如在动物或人内。在该背景下，可以治疗性地体内地使用试剂来延缓或消除异常复制的细胞的增殖。该试剂也可以体内地用作预防剂，来预防异常的细胞增殖或与其有关的症状的表现。
“离体”指在活受试者外。离体细胞群体的实例包括细胞培养物和生物样品，例如来自人或动物的流体或组织样品。这样的样品可以通过本领域众所周知的方法得到。示例性的生物流体样品包括血液、脑脊液、尿和唾液。示例性的组织样品包括肿瘤和其活组织检查。在该背景下，本发明的化合物可以用于许多治疗性的和实验性的应用。
“辐射敏化剂”指以治疗有效量施用给人或其它动物的化合物，其用于提高细胞对电磁辐射的敏感性，和/或促进可用电磁辐射治疗的疾病的治疗。
“辐射”包括，但不限于，具有10-20至100米的波长的辐射。
术语“容器”指适用于储存、运输、分配和/或处理药物产品的任何容器和罩子。
术语“包装插页”指伴随产品的信息，其提供了如何施用产品的描述，以及使医生、药剂师和患者作出关于产品的使用的知情的决定所需的安全性和功效数据。包装插页通常被视作药物产品的“标签”。
本发明包括结构式(I)化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体。本发明不仅包括外消旋化合物，而且还包括光学活性异构体。当需要结构式(I)化合物作为单一的对映体时，其可以如下获得：将终产物拆分，或者从异构体纯的原料或使用手性辅助试剂进行立体有择合成，例如，参见Ma等，Tetrahedron：Asymmetry，8(6)，第883-88页，1997。终产物、中间体或原料的拆分，可通过本领域已知的任意合适的方法来实现。此外，在可能存在结构式(I)化合物的互变异构体时，本发明意在包括该化合物的所有互变异构体形式。如下文所证明的，在与化疗或辐射治疗的治疗相组合时，特定的立体异构体可以表现出异常的抑制Chk1的能力。
结构式(I)化合物的前体药物也可以用作本发明的方法中的化合物。充分确认的是，其中化合物衍生成适于配制和/或施用的形式、之后在体内作为药物释放的前体药物方法，已被成功地用来暂时(例如生物可逆地)改变化合物的物理化学性质(参见，H.Bundgaard，Ed.，“Design of Prodrugs，”Elsevier，Amsterdam，1985；Silverman，“TheOrganic Chemistry of Drug Design and Drug Action，”AcademicPress，San Diego，chapter 8，1992；Hillgren等，Med.Res.Rev.，15，83，1995)。
本发明化合物可以含有一个或多个官能团。如果希望或必需，可以修饰官能团，以提供前体药物。合适的前体药物包括例如酸衍生物，例如酰胺和酯等。本领域的技术人员还理解，N-氧化物可用作前体药物。
本发明的化合物可以作为盐存在。本发明的化合物的药学上可接受的盐通常在本发明的方法中是优选的。如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”指结构式(I)化合物的盐或两性离子形式。在化合物的最终分离和纯化的过程中，或者通过单独地使化合物与具有合适的阳离子的酸反应，可以制备式(I)化合物的盐。合适的药学上可接受的阳离子包括碱金属(例如钠或钾)和碱土金属(例如钙或镁)阳离子。此外，含有碱性中心的结构式(I)化合物的药学上可接受的盐是与药学上可接受的酸形成的酸加成盐。可以用于形成药学上可接受的盐的酸的实例包括，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，和有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸、丙二酸和柠檬酸。本发明的化合物的盐的非限制性实例包括，但不限于，氢氯化物、氢溴化物、氢碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、2-羟基乙磺酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、磷酸甘油、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、均三甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、十一酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。另外，存在于本发明的化合物中的可利用的氨基可以用下述基团季铵化：甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸酯；癸基、月桂基、肉豆蔻基和甾基的氯化物、溴化物和碘化物；和苄基和苯乙基溴化物。根据上述内容，任何一次提及在本文中出现的本发明化合物都意在包括结构式(I)化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前体药物。
本发明化合物可作为纯的化学药品治疗地施用，但是有用的是可以将该化合物作为药物组合物或制剂施用。因此，本发明提供了药物组合物，其含有式(I)化合物及其药学上可接受的稀释剂或载体。还提供了制备药物组合物的方法，其包含使式(I)化合物与其药学上可接受的稀释剂或载体相混合。
因此，本发明还提供了药物制剂，其包含结构式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、前体药物或溶剂化物，以及一种或多种药学上可接受的载体，和任选地，其它治疗成分和/或预防成分。载体是“可接受的”含义是，与制剂的其它成分相容，并且对其受体无害。这样的载体可以参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1985)。
本发明的化合物表现出针对Chk1的良好效能。一般地将效能表达为达到某种结果所需的化合物的浓度。效能越大，发挥它的预期功能需要越少的化合物。一般地用IC50值表达体外效能，并使用剂量-反应测定来测量。可以如下测量IC50值：使敏感的测定系统接触一定浓度范围的目标化合物，包括从没有观察到作用或观察到最小作用的浓度，经过观察到部分作用的更高的浓度，至观察到最大作用的饱和浓度。在理论上，当绘制在对数标尺上时，可以将这样的抑制剂化合物的剂量-反应作用的测定描述为S形曲线，其表示随浓度而变化的抑制程度。在理论上，该曲线还经过这样的点，在该点的浓度足以将关卡酶的活性降至在该测定中观察到的最小和最大酶活性之间的差值的50％的水平。将该浓度定义为在50％抑制时的抑制浓度或IC50值。
使用本领域的普通技术人员众所周知的常规生化(无细胞的)测定技术或基于细胞的测定技术，可以确定IC50值。下面的实施例1提供了这样的测定的一个实例。
优选地，如下得到IC50值：进行相关的测定至少2次，将IC50值表达为得到的单个值的平均值(算术平均值，或“平均值”)。更优选地，重复测定3至10(或更多)次，将IC50值表达为得到的值的平均值。最优选地，使用本领域的普通技术人员已知的统计学方法，以足以产生统计学上可靠的平均IC50值的次数，进行测定。
当如下面的实施例1所述测定时，本发明的化合物表现出小于约5μM的IC50值，且低至约0.1nM。在有些实施方案中，化合物表现出约550nM或更小的IC50值，在其它实施方案中，小于约250nM，在其它实施方案中小于约200nM，在其它实施方案中小于约150nM，在其它实施方案中小于约100nM，在其它实施方案中小于约75nM，在其它实施方案中小于约50nM，和在其它实施方案中小于约25nM。在优选的实施方案中，本发明的化合物表现出抑制Chk1超过其它蛋白激酶的选择性。在减少不利的副作用和/或提高治疗指数方面，选择性可以是有利的。
“选择性”在本文中表达为“倍数选择性”。通常，如本文所使用的倍数选择性是参比酶的实验化合物的IC50除以比较酶的IC50。更具体地，如本文所使用的Chk1抑制剂的倍数选择性是Chk1(参比酶)的Chk1抑制剂(实验化合物)的IC50除以比较酶的IC50。比较酶(可以针对它测量本发明的化合物)包括至少下面的蛋白激酶：Cdc2、Chk2、CTAK、EphA1、EphA2、Erk1、FGFR1、FGFR4、IR、JNK1、c-Kit、p38α、p38β、p38δ、Ros、Rse、Rsk2、TrkA、TrkB、蛋白激酶A、蛋白激酶C、pp60v-src、蛋白激酶B/Akt-1、p38MapK、p70S6K、依赖于钙-钙调蛋白的激酶II和ab1酪氨酸激酶。在实施例2中描述了测定实验化合物针对比较酶的IC50值的测定，且是本领域的普通技术人员众所周知的。优选的本发明的化合物表现出超过测试的前述蛋白激酶至少约20-倍的选择性。
适用于本发明的化合物和药物组合物包括其中活性组分是以有效量施用以实现其预期目的的那些。更具体地，“治疗有效量”指足以治疗患有征候的个体或减轻征候的已有症状的量。本领域的技术人员利用其知识能力，尤其是考虑本文所提供的详细公开内容，能充分确定有效量。
除了Chk1抑制剂以外，可以将本发明的药物组合物配制成包括细胞因子、淋巴因子、生长因子、其它造血因子或其混合物，以减少可能源自或与单独的药物组合物施用有关的不利的副作用。或者，可以将这样的生物活性剂包含在本发明的药物组合物中，以促进希望的治疗效果。在本发明的药物组合物中有用的辅助的生物活性的药物组合物包括，但不限于，M-CSF、GM-CSF、TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IFN、TNF、G-CSF、Meg-CSF、GM-CSF、血小板生成素、干细胞因子、促红细胞生成素、血管生成素(angiopoietin)包括Ang-1、Ang-2、Ang-4、Ang-Y、和/或人血管生成素样多肽、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生长素、骨形成蛋白-1(BMP-1)、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9、BMP-10、BMP-11、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15、BMP受体IA、BMP受体IB、脑衍生的神经营养因子、睫状neutrophic因子、睫状neutrophic因子受体细胞因子-诱导的嗜中性粒细胞趋化因子1、细胞因子-诱导的嗜中性粒细胞趋化因子2、内皮细胞生长因子、内皮素1、表皮生长因子、上皮衍生的嗜中性粒细胞引诱剂、成纤维细胞生长因子(FGF)4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF8b、FGF8c、FGF9、FGF10、FGF酸性的、FGF碱性的、神经胶质细胞系衍生的神经营养因子受体1、神经胶质细胞系衍生的神经营养因子受体2、生长相关蛋白、生长相关蛋白、生长相关蛋白、生长相关蛋白、肝素结合表皮生长因子、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子受体、胰岛素样生长因子I、胰岛素样生长因子受体、胰岛素样生长因子II、胰岛素样生长因子结合蛋白、角质形成细胞生长因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受体、神经生长因子、神经生长因子受体、神经营养蛋白-3、神经营养蛋白-4、胎盘生长因子、胎盘生长因子2、血小板衍生的内皮细胞生长因子、血小板衍生生长因子、血小板衍生生长因子A链、血小板衍生生长因子AA、血小板衍生生长因子AB、血小板衍生生长因子B链、血小板衍生生长因子BB、血小板衍生生长因子受体、血小板衍生生长因子受体、前-B细胞生长刺激因子、干细胞因子、干细胞因子受体、转化生长因子(TGF)、TGF、TGF1、TGF1.2、TGF2、TGF3、TGF5、潜伏TGF1、TGF结合蛋白I、TGF结合蛋白II、TGF结合蛋白III、I型肿瘤坏死因子受体、II型肿瘤坏死因子受体、尿激酶型纤溶酶原激活物受体、血管内皮生长因子及其嵌合蛋白和生物或免疫活性的片段。
也可以将结构式(I)化合物缀合或连接到辅助部分上，后者会促进该化合物在治疗性用途的方法中的有益性能。这样的缀合物可以增强化合物向特定目标解剖学部位或区域(例如肿瘤)的递送，能够在靶细胞中实现持续的化合物治疗浓度，改变化合物的药物代谢动力学和药物动力学性能，和/或提高化合物的治疗指数或安全特征。合适的辅助部分包括例如氨基酸、寡肽或多肽，例如，抗体如单克隆抗体和其它工程改造的抗体；和靶细胞或组织中受体的天然或合成配体。其它合适的辅助物包括促进靶细胞对化合物的生物分布和/或摄取的脂肪酸或脂质部分(参见，例如，Bradley等，Clin.Cancer Res.，7：3229，2001)。
本发明制剂可以以标准方式施用来治疗指定的疾病，例如经口、肠胃外、跨粘膜(例如舌下或经颊施用)、局部、经皮、直肠或吸入(例如经鼻或深肺吸入)施用。肠胃外施用包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内和关节内的施用方式。肠胃外施用还可以使用高压技术如POWDERJECTTM(Powderject Pharmaceuticals PLC，Oxford，England)来完成。
对于经口施用和经颊施用，组合物可以呈以常规方式配制成的片剂或锭剂的形式。例如，用于经口施用的片剂和胶囊可以含有常规赋形剂，例如粘合剂(例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、西黄蓍胶、淀粉粘胶或聚乙烯吡咯烷酮)、填充物(例如乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙或山梨糖醇)、润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(例如土豆淀粉或羟基乙酸淀粉钠)或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)。可依据本领域众所周知的方法将片剂包衣。
或者，可将本发明化合物掺入到经口液体制剂例如水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆或酏剂中。此外，含有这些化合物的制剂可以作为在使用前用水或其它适当载体构造的干燥产品存在。这样的液体制剂可含有常规添加剂，例如悬浮剂，如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖的糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化的可食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、失水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水载体(其可包括食用油)，例如杏仁油、分馏的椰子油、油酯、丙二醇和乙醇；和防腐剂例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯和山梨酸。
这样的制剂还可以配制成栓剂，例如含有常规栓剂基质，如可可脂或其它甘油酯的栓剂。用于吸入的组合物一般地可以以下述形式提供：可作为干粉施用的，或使用常规推进剂(例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)的气雾剂形式的溶液、悬浮液或乳剂。局部和经皮制剂包含常规的水性或非水载体，例如滴眼剂、乳膏、软膏、洗剂和糊剂，或者呈含有药物的药膏、贴剂或膜的形式。
此外，本发明组合物可以配制成通过注射或连续输注来肠胃外施用。注射制剂可以呈在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，并且可以含有配制试剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以呈在使用前用合适的载体(例如无菌的、无致热原的水)构造的粉末形式。
本发明组合物还可以配制成贮存(depot)制剂。这样的长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射来施用。因此，可以用合适的聚合的或疏水的材料(例如在可接受的油中的乳剂)、离子交换树脂配制本发明化合物，或者配制成微溶的衍生物(例如微溶的盐)。
对于兽医用途，依据标准的兽医实践，将式(I)化合物或其药学上可接受的盐、前体药物或溶剂化物作为适当接受的制剂施用。兽医可容易地确定对于特定动物最合适的给药方案和施用途径。可由本发明的化合物和方法治疗的动物包括但不限于宠物、家畜、表演动物(showanimal)和动物园样本。
合成方法
通过下面的合成方案，可以制备出本发明的化合物。原料可从商业渠道得到，或通过本领域的普通技术人员已知的非常确定的文献方法制备。除非下面另有说明，基团X、R1、R3、R4、R5，R6、R7、R8、R9和R10如上面所定义。
方案1
方案1所示，通过用碱(例如DIEA和二苯基磷酰基叠氮化物)处理，可以从式6化合物制备出式4化合物。该反应的一般溶剂是THF，在防爆屏蔽(blast shield)后，在室温进行该反应1-12小时时间段。
方案2
方案2显示了式5化合物的一种替代合成。用根据方案4制备的式7化合物，处理式3化合物。有用的非限制性的溶剂是DMF，且将反应温度维持在室温至60℃之间约1-12小时。
方案3
Figure A20058002940600302
如方案3所示，通过在有碱(例如吡啶)存在下用氯甲酸芳基酯(例如氯甲酸苯酯或氯甲酸对硝基苯酯)处理可以从式8化合物制备式7化合物。在该反应中使用的非限制性的溶剂包括CH2Cl2或吡啶，温度为0℃至室温。
方案4
Figure A20058002940600311
方案4显示了式3化合物的制备方法。通过在碱性水溶液(例如Na2CO3、K2CO3或K3PO4)存在下，用芳基硼酸和钯(0)源(例如，四(三苯基膦)钯)处理，将式1化合物转化成式2化合物。在该反应中使用的溶剂的非限制性实例包括THF、二烷或乙二醇二甲醚。该反应一般地在0至90℃的温度进行约1至12小时。在有例如Pd/C、Pt/C或锌存在下，将式2化合物转化成式3化合物。在该反应中使用的溶剂的实例包括，但不限于，MeOH、EtOH或HOAc。或者，可以使用催化剂例如PdCl2(PPH3)2或任何其它钯(0)源，用式1化合物来芳基化末端炔11。一般地，在有碱(例如三乙胺)存在下，在室温至90℃的温度进行反应。
而且，可以从式9化合物得到式1化合物，其中X是三氟甲磺酸(triflate)，即tf。一般的试剂包括三氟甲磺酸酐或N-苯基三氟甲磺酰胺(N-phenyl triflimide)。一般地在-10℃至室温的温度进行反应。溶剂的非限制性的实例是二氯甲烷。碱的非限制性的实例是TEA或二异丙基乙胺。
方案6
Figure A20058002940600321
方案6解释了式5化合物的替代合成。按照方案2所述的方法，可以将式3化合物转化成式10化合物。然后按照方案4所述的方法，可以将式10化合物转化成式5化合物。
下面提供了结构式(I)化合物的非限制性的实例，按照下面和这里引作参考的共同未决的美国专利申请公开号2003/0069284中所述的一般方法，进行它的合成。使用上面的一般方案和下面的特定合成，通过正确的原料溶液，可以制备本发明的其它化合物。
在本文所述的合成中使用的缩写是：小时(h)、分钟(min)、大气压(atm)、去离子的(DI)、氮气(N2)、水(H2O)、硫酸镁(MgSO4)、盐酸(HCl)、二甲基亚砜(DMSO)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、二(三苯基膦)二氯化钯(PdCl2(PPh3)2)、三乙胺(TEA)、二氧化碳(CO2)、二氯甲烷(CH2Cl2)、氯仿(CHCl3)、甲醇(MeOH)、氢氧化铵(NH4OH)、氯化铵(NH4Cl)、氘化的氯仿(CDCl3)、四氢呋喃(THF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸(HOAc)、氢氧化钠(NaOH)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、二甲基亚砜(DMSO)、二乙醚(Et2O)、对甲苯磺酸(p-TsOH)、碳酸钠(Na2CO3)、碳酸氢钠(NaHCO3)、硝酸(HNO3)、氯化钠(NaCl)、饱和的(sat′d)、薄层色谱(TLC)、碳酸钾(K2CO3)、磷酸钾(K3PO4)、钯/碳(Pd/C)、氯化钾(KCl)、磷酸缓冲盐水(PBS)、碘化亚铜(Cu(1)I)、硫酸钠(Na2SO4)、二甲基甲酰胺(DMF)、1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA)。
中间体1：
Figure A20058002940600331
5-甲基-吡嗪-2-羰基叠氮化物
在N2下，在室温，向5-甲基-吡嗪-2-羧酸(25g，181mmol)溶于540mL THF中的搅拌的悬浮液中，加入DIEA(31.7mL，181mmol)，从而得到褐色溶液。然后，在防爆屏蔽后，作为溶于50mL THF中的溶液，经1小时逐滴加入二苯基磷酰基叠氮化物(39.2mL，181mmol)。使反应物搅拌过夜。然后，在室温将反应物旋转蒸发至小体积，并在Et2O(1L)和H2O(1L)之间分配。用2×250mL Et2O仅萃取H2O层，并用饱和的Na2CO2洗涤合并的有机物2×1L。干燥(MgSO4)有机物，过滤，并浓缩成固体物质，其用Et2O研磨，以产生黄色固体产物(15g，50％)。通过将xg粗产物放入20xmL Et2O中，并用1-2xg脱色炭在室温处理几分钟，可以分离更纯的化合物。过滤和浓缩后，该材料在EtOAc中的TLC上是均匀的，且是纯白色。回收率一般地是65％。
化合物1：
Figure A20058002940600341
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基乙炔基-苯基)-脲
步骤1.叔丁基-二甲基-(4-甲基-2-硝基-苯基乙炔基)-硅烷
向1-溴-4-甲基-2-硝基-苯(3.24g，15.0mmol)、PdCl2(PPh3)2(1.05g，1.5mmol)和Cu(1)I(5.7g，30mmol)的搅拌溶液中，加入TEA(40mL)，随后加入TMS-乙炔(5.3mL，37.5mmol)。在60℃搅拌12小时后，过滤反应物，并用EtOAc(150mL)和10％Na2CO3(150mL)稀释。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下干燥，以产生4.0g无定形的黑色残余物。
步骤2.1-乙炔基-4-甲基-2-硝基-苯
向叔丁基-二甲基-(4-甲基-2-硝基-苯基乙炔基)-硅烷(3.5g，15mmol)溶于MeOH(20mL)的搅拌溶液中，加入NaOH(1.8g，45mmol，溶于5mL H2O中)。搅拌1小时后，用EtOAc(150mL)和10％Na2CO3(150mL)稀释反应物。分离各层，并用EtOAc(1×75mL)萃取水层。合并有机层，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下干燥，以产生1.40g(58％，经2步)褐色固体。
步骤3.3-(4-甲基-2-硝基-苯基乙炔基)-吡啶
向3-溴吡啶(608mg，3.85mmol)、PdCl2(PPh3)2(246mg，0.35mmol)和Cu(1)I(733mg，3.85mmol)的搅拌溶液中，加入TEA(10mL)，随后加入1-乙炔基-4-甲基-2-硝基-苯(564mg，3.5mmol)。在60℃搅拌4小时后，过滤反应物，并用EtOAc(150mL)和10％Na2CO3(150mL)稀释。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下干燥。使用Biotage 40M柱体，用己烷/EtOAc(7/3)洗脱，纯化材料，以得到浅褐色油。
步骤4.5-甲基-2-吡啶-3-基乙炔基-苯胺
向3-(4-甲基-2-硝基-苯基-乙炔基)-吡啶(1mmol)溶于MeOH(1mL)中的溶液中，加入0.5mL饱和的NH4Cl，然后加入锌粉(0.33g，5.0mmol)。将混合物搅拌10分钟，然后用EtOAc(50mL)和Na2CO3(50mL 10％水溶液)稀释。经MgSO4干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩，以得到作为澄清油的所需材料。
步骤5.1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基乙炔基-苯基)-脲
向预先加热到90℃15分钟的5-甲基-吡嗪-2-羰基叠氮化物(化合物7)(163mg，1.0mmol)溶于甲苯(4ml)中的搅拌溶液中，加入5-甲基-2-吡啶-3-基乙炔基-苯胺(1mmol)。将混合物冷却至65℃，并搅拌12小时。然后，将反应混合物冷却至室温。向有机层加入乙酸乙酯，用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤后，在减压下蒸发，分离油，并在柱色谱(硅胶)上纯化，其中以EtOAc/己烷1∶4洗脱。
1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ
11.39(brs，1H)，.8.79(s，1H)，8.61(d，1H)，8.25(s，1H)，8.19(s，1H)，8.15(s，1H)，7.79(d，1H)，7.41(m，2H)，7.31(m，1H)，6.91(d，1H)，2.41(s，3H)，2.37(s，3H).LRMS(apci，正)m/e 344.4(M+1)。
化合物2
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基-苯基)-脲
步骤1.3-(4-甲基-2-硝基-苯基)-吡啶
用5mL二烷稀释4-溴-2-硝基-苯酚(648mg，3.0mmol)和3-吡啶基硼酸(387mg，3.15mmol)，并置于N2下。在1mL H2O中稀释碳酸钾，并将其加入反应混合物。加入四(三苯基膦)钯(173mg，0.15mmol)，然后将反应物加热至70℃，并搅拌过夜。允许反应物冷却至室温，然后用30mL EtOAc和30mL 10％Na2CO3稀释。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。用Biotage 40M柱体，以己烷/EtOAc，1/1洗脱，纯化材料，以产生灰白色固体。
步骤2.5-甲基-2-吡啶-3-基-苯胺
根据化合物1、步骤4，从3-(4-甲基-2-硝基-苯基)-吡啶制备。
步骤3.1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基-苯基)-脲
根据化合物1、步骤5，使用5-甲基-2-吡啶-3-基-苯胺和化合物7制备。
1H-
NMR(400 MHz，CDCl3)δ11.00(br s，1H)，9.00(s，1H)，8.75(s，1H)，8.70(d，1H)，8.40(s，2H)，7.75(d，1H)，7.40(m，2H)，7.15(d，1H)，7.05(d，1H)，2.45(s，3H)，2.40(s，3H).LRMS(apci，正)m/e 320.3(M+1)。
化合物3
Figure A20058002940600361
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-4-基-苯基)-脲
步骤1.4-(4-甲基-2-硝基-苯基)-吡啶
根据化合物2、步骤1，使用4-吡啶基硼酸和4-溴-2-硝基-苯酚制备。
步骤2.5-甲基-2-吡啶-4-基-苯胺
根据化合物1、步骤4，使用4-(4-甲基-2-硝基-苯基)-吡啶制备。
步骤3.1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-4-基-苯基)-脲
根据化合物1、步骤5，使用5-甲基-2-吡啶-4-基-苯胺和化合物7制备。
1H-
NMR(400 MHz，CDCl3)δ10.90(br s，1H)，8.65(d，2H)，8.25(s，1H)，8.20(s，1H)，8.10(br s，1H)，7.45(d，2H)，7.33(s，1H)，7.15(d，1H)，7.05(d，1H)，2.48(s，3H)，2.46(s，3H ).LRMS(apci，正)m/e 320.0(M+1)。
化合物4：
Figure A20058002940600371
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-唑-5-基-苯基)-脲
步骤1：2-唑-5-基-苯胺
在室温，将2-唑-5-基-苯基硝基(190mg，1mmol)溶于3mLEtOH。加入催化量的Pearlman氏催化剂，并在1atm下进行氢化。经C盐过滤后，在减压下蒸发溶液。分离黄色固体。
步骤2：1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-唑-5-基-苯基)-脲
根据化合物1、步骤5，使用2-唑-5-基-苯胺和化合物7制备。LRMS(apci，正)m/e 296.0(M+1)。
化合物5：
Figure A20058002940600381
1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-噻唑-2-基-苯基)脲
步骤1：4-甲基-2-硝基-苯甲酰胺
通过J.Am.Chem.Soc，75：1389(1957)所述的方法，从4-甲基-2-硝基苯甲酸得到4-甲基-2-硝基苯甲酰胺。
步骤2：4-甲基-2-硝基-硫代苯甲酰胺
在N2下，将4-甲基-2-硝基苯甲酰胺(180mg，1mmol)和Belleu氏试剂(529mg，1mmol)溶于3mL THF中。将悬浮液搅拌过夜。形成黄色溶液。浓缩溶液，重新溶于20mL CH2Cl2，并加入新鲜级硅胶。在减压下蒸发溶液，并将硅胶/吸附的化合物装载进Biotage ZIF单元。在Biotage 12M柱上，用EtOAc∶己烷3∶7，对化合物进行色谱。合并所需级分，并浓缩，以得到深黄色固体所需材料。
步骤3：2-(4-甲基-2-硝基-苯基-噻唑)
将4-甲基-2-硝基-硫代苯甲酰胺(37mg，0.18mmol)溶于含有pTsOH(90mg，0.047mmol)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(48mg，0.24mmol)的HOAc(5mL)中。将混合物加热到100℃1.5小时。使用Chem.Pharm.Bull.，39(9)：2323-2332(1991)所述的方法，分离所需产物。
步骤4：2-(4-甲基-2-氨基-苯基-噻唑)
将2-(4-甲基-2-硝基-苯基-噻唑)(30mg，0.13mmol)溶于含有催化量的Pearlman氏催化剂的EtOH(3mL)中。按照化合物4、步骤1所述的方法。以良好的得率得到所需材料。
步骤5：1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-噻唑-2-基-苯基)脲
根据化合物1、步骤5，使用2-(4-甲基-2-氨基-苯基-噻唑)和化合物7制备。LRMS(apci，正)m/e 326.0(M+1)。
化合物6：
Figure A20058002940600391
1-[2-(4-二甲氨基甲基-噻唑-2-基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
步骤1：2-(4-甲基-2-硝基-苯基-噻唑-4-羧酸乙酯
在室温在N2下，在1mL无水EtOH中搅拌4-甲基-2-硝基-硫代苯甲酰胺(60mg，0.30mmol，如化合物5、步骤2所述制备。加入溴丙酮酸乙酯(65mg，0.33mmol)，并将得到的溶液加热到70℃3小时。用EtOAc稀释反应物至30mL，并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，并浓缩成黄色油，其原样用于下一步。
步骤2：2-(4-甲基-2-硝基苯基)噻唑-4-基甲醇
在室温，将2-(4-甲基-2-硝基-苯基-噻唑-4-羧酸乙酯(292mg，1mmol)溶于在敞口烧瓶中的5mL无水EtOH中。经几小时逐份地加入硼氢化钠(1mmol，38mg)，并通过TLC(EtOAc∶己烷2∶3)监控反应。反应结束后，在搅拌下小心地加入2N HCl。15分钟后，在旋转蒸发器(rotavap)上浓缩澄清的黄色溶液，并在EtOAc(60mL)和水(60mL)之间分配粗混合物。分离有机层，并用饱和NaHCO3和60mL饱和NaCl洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤和浓缩，以提供橙色固体所需材料。
步骤3：2-(4-甲基-2-硝基-苯基)噻唑-4-醛(carbaldehyde)
在室温，在N2下，在5mL CH2Cl2中搅拌2-(4-甲基-2-硝基苯基)噻唑-4-基甲醇(297mg，1.18mmol)。加入作为固体的Dess-Martin试剂(500mg，1.18mmol)。30分钟后，反应结束。用60mL CH2Cl2稀释反应物，并用60mL 1N NaOH洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。在biotage柱12M上以EtOAc/己烷1∶4洗脱纯化粗材料，以得到所需材料。
步骤4：二甲基-[2-(4-甲基-2-硝基-苯基)-噻唑-4-基甲基]胺
在室温，在N2下，在2.6mL MeOH中搅拌二甲胺(640μL溶于MeOH中的2M溶液)、乙酸钠和氰基硼氢钠(56mg，0.89mmol)。加入冰醋酸，以将pH调节至7-8。然后加入作为溶于3.2mL MeOH中的溶液的2-(4-甲基-2-硝基-苯基)噻唑-4-醛(159mg，0.64mmol)溶液。2小时后，通过质谱分析观察到产物形成。使反应进行过夜。在那时，加入丙酮(500μL)以猝灭任何未反应的氢硼化物，并将反应物酸化至pH＜3。浓缩反应物。在Et2O(30mL)和H2O(30mL)之间分配残余物。用Et2O萃取水相，然后用1N NaOH中和至pH10。用Et2O再次萃取水相。合并的有机相经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以得到所需材料。
步骤5：二甲基-[2-(4-甲基-2-氨基-苯基)-噻唑-4-基甲基]胺
根据化合物5、步骤4，从二甲基-[2-(4-甲基-2-硝基-苯基)-噻唑-4-基甲基]胺制备。
步骤6：1-[2-(4-二甲氨基甲基-噻唑-2-基)-5-甲基-3-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲
根据化合物1、步骤5，从化合物7和二甲基-[2-(4-甲基-2-氨基-苯基)-噻唑-4-基甲基]胺制备。LRMS(apci，正)m/e 383.0(M+1)。
治疗方法
本发明的化合物可以用于治疗包括异常的细胞增殖的状况。例如，该化合物可以用于加强在癌症和包含真核细胞的其它细胞增殖征候(包括人和其它动物的那些)的治疗中使用的辐射和/或化学治疗剂的治疗效果。通常，本发明的化合物会抑制癌性的和非癌性的异常增殖的细胞。例如，本发明的化合物可以用于增强通常用抗代谢物(例如甲氨蝶呤或5-氟尿嘧啶(5-FU))治疗的肿瘤的治疗。
本发明的化合物的使用，可以导致异常增殖的细胞的部分或完全消退，即从细胞群体减少或消除这样的细胞。因而，例如，当异常增殖的细胞的群体是肿瘤细胞时，本发明的化合物可以用于延缓肿瘤生长速度，减少肿瘤数目，和/或诱导部分或完全的肿瘤消退。
当尚未鉴别出异常的细胞增殖或没有发生异常的细胞增殖，但是怀疑或预期异常的细胞增殖时，可以体内或离体地使用本发明的化合物。当以前已经为阻止或抑制它的复发而治疗异常的细胞增殖时，也可以使用本发明的化合物。
本发明的一种方法包含，向需要的个体与化疗剂联合地施用治疗有效量的本发明的Chk1抑制剂化合物。或者，本发明的一种方法包含，向需要的个体与具有抑制癌细胞增殖活性的抗体(例如，herceptin)联合地施用治疗有效量的至少一种本发明的Chk1抑制剂。
因此，通过与化疗剂或抗体联合施用本发明的Chk1抑制剂，可以对癌症进行增强的治疗。本发明可治疗的癌症包括特征在于实体瘤的癌症和肉瘤，和骨髓或淋巴系统的癌症，包括白血病、淋巴瘤和一般地缺少肿瘤块、但是分布在血管或淋巴网状内皮细胞系统中的其它癌症。这些癌症包括，例如，结肠直肠癌、头和颈癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、外阴癌(vulvar cancer)、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌、卵巢癌、脑癌、骨肉瘤和肺癌。
因此，本发明的化合物可用于Chk1活性介导的癌症。更具体地，Chk1活性与下述癌症形式有关，包括但不限于，成人和儿科肿瘤学，实体瘤/恶性肿瘤的生长，粘液样和圆形细胞癌，局部发展的肿瘤，转移性癌，人软组织肉瘤，包括Ewing氏肉瘤，癌症转移，包括淋巴转移，鳞状上皮细胞癌，尤其是头和颈的鳞状上皮细胞癌，食管鳞状上皮细胞癌，口腔癌，血细胞恶性肿瘤，包括多发性骨髓瘤，白血病，包括急性淋巴细胞性白血病，急性非淋巴细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，慢性髓细胞性白血病，和毛细胞性白血病，渗漏性淋巴瘤(基于体腔的淋巴瘤)，胸腺淋巴瘤肺癌(包括小细胞癌，皮肤T细胞淋巴瘤，何杰金氏淋巴瘤，非-何杰金氏淋巴瘤，肾上腺皮质癌，产生ACTH的肿瘤，非小细胞癌，乳腺癌，包括小细胞癌和导管癌)，胃肠癌(包括胃癌，结肠癌，结肠直肠癌，和与结肠直肠瘤形成有关的息肉)，胰腺癌，肝癌，泌尿系统癌(包括膀胱癌，例如原发性表面膀胱肿瘤，侵袭性膀胱移行细胞癌，和肌肉侵袭性膀胱癌)，前列腺癌，女性生殖道的恶性肿瘤(包括卵巢癌，原发性腹膜上皮肿瘤，子宫颈癌，子宫内膜癌，阴道癌，外阴癌，子宫癌和卵泡中的实体瘤)，男性生殖道的恶性肿瘤(包括睾丸癌和阴茎癌)，肾癌(包括肾细胞癌)，脑癌(包括固有性脑肿瘤，成神经细胞瘤，星形细胞脑肿瘤，神经胶质瘤，和中枢神经系统中的转移性肿瘤细胞侵袭)，骨癌(包括骨瘤和骨肉瘤)，皮肤癌(包括恶性黑素瘤，人皮肤角质形成细胞的肿瘤进行，和鳞状上皮细胞癌)，甲状腺癌，成视网膜细胞瘤，成神经细胞瘤，腹膜渗漏，恶性胸膜渗漏，间皮瘤，Wilms氏肿瘤，胆囊癌，滋养层肿瘤，血管外皮细胞瘤和卡波西肉瘤。
本发明的化合物也可以用于辐射敏化细胞。辐射可治疗的疾病包括但不限于，肿瘤性疾病，良性和恶性肿瘤，和癌性细胞。辐射治疗采用电磁辐射，例如γ-辐射(10-20-10-13m)、X-射线辐射(10-12-10-9m)、紫外线(10nm-400nm)、可见光(400nm-700nm)、红外线辐射(700nm-1.0mm)和微波辐射(1mm-30cm)。
目前，许多癌症治疗方案采用通过电磁辐射(例如X-射线)激活的辐射敏化剂。X-射线激活的辐射敏化剂的实例包括但不限于下列敏化剂：甲硝哒唑、醚醇硝唑、去甲醚醇硝唑(desmethylmisonidazole)、匹毛尼唑、依他硝唑、尼莫唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟尿脱氧核苷(FUdR)、羟基脲、顺铂和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
癌症的光动力学治疗(PDT)使用可见光作为敏化剂的辐射激活剂。光动力学辐射敏化剂的实例包括但不限于下列：血卟啉衍生物、光敏素、苯并卟啉衍生物、NPe6、锡初卟啉(SnET2)、pheoborbide-a、细菌叶绿素-a、萘酞菁(naphthalocyanines)、酞菁染料、锌酞菁和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
辐射敏化剂可以与治疗有效量的一种或多种除Chk1抑制剂之外的化合物联合施用，这样的化合物包括但不限于：促进辐射敏化剂掺入到靶细胞中的化合物，控制治疗剂、营养物和/或氧向靶细胞的流动的化合物，在有或没有另外的辐射下作用于肿瘤的化疗剂，或用于治疗癌症或其它疾病的其它治疗上有效的化合物。可以与辐射敏化剂联合使用的其它治疗剂或方法的实例包括但不限于：5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、氧、carbogen、红细胞输注、全氟化碳(例如FLUOSOLW-DA)、2，3-DPG、BW12C、钙通道阻断剂、己酮可可碱、抗血管生成化合物、肼酞嗪和L-BSO。
可以与本发明的化合物联合使用以治疗癌症的化疗剂包括但不限于：烷基化剂、抗代谢物、激素及其拮抗剂、放射性同位素、抗体、以及天然产物和它们的组合。例如，本发明的抑制剂化合物可以与下列药物联合施用：抗生素，例如阿霉素和其它蒽环霉素类似物，氮芥，例如环磷酰胺，嘧啶类似物例如5-氟尿嘧啶，顺铂，羟基脲，紫杉醇及其天然和合成衍生物等。作为另一个实例，对于混合型肿瘤例如乳腺腺癌，当肿瘤包括依赖于促性腺激素和不依赖于促性腺激素的细胞时，可将化合物与醋酸亮丙瑞林或性瑞林(LH-RH的合成肽类似物)联合施用。其它抗肿瘤方案包括使用抑制剂化合物与另一治疗方式(例如外科手术或辐射)，后者在本文中还称为“辅助抗肿瘤方式”。在本发明中有用的其它化疗剂包括激素和其拮抗剂、放射性同位素、抗体、天然产物和它们的组合。下表中列出了在采用本发明的化合物的方法中有用的化疗剂的实例。
表1
A)烷基化剂 i)氮芥氮芥环磷酰胺异环磷酰胺美法仑苯丁酸氮芥ii)亚硝基脲卡莫司汀(BCNU) G)天然产物 i)抗有丝分裂药物 ii)taxanes紫杉醇长春花生物碱长春碱(VLB)长春新碱长春烯碱Taxotere(多西他赛)
 洛莫司汀(CCNU)司莫司汀(甲基-CCNU)iii)乙撑亚胺/甲基三聚氰胺曲他胺(TEM)塞替哌(三胺硫磷)六甲三聚氰胺(HMM，六甲密胺)iv)烷基磺酸酯白消安v)三嗪达卡巴嗪(DTIC)  雌莫司汀磷酸雌莫司汀iii)表鬼臼毒素依托泊苷替尼泊苷iv)抗生素放线菌素D柔红霉素(柔毛霉素)阿霉素(羟基柔红霉素)米托蒽醌伊达比星博来霉素splicamycin(光辉霉素)丝裂霉素C放线菌素艾菲地可宁v)酶L-天冬酰胺酶L-精氨酸酶
  B)抗代谢物 i)叶酸类似物甲氨蝶呤曲美克特培美曲塞(pemetrexed)(多重靶向的氨基叶酸(multitargetedantifolate))ii)嘧啶类似物5-氟尿嘧啶氟尿脱氧核苷吉西他滨阿糖胞苷(AraC，阿糖胞嘧啶)5-氮杂胞苷  H)辐射敏化剂甲硝哒唑醚醇硝唑去甲醚醇硝唑匹毛尼唑依他硝唑尼莫唑RSU 1069EO9RB 6145SR4233烟酰胺5-溴脱氧尿苷
 2，2’-二氟脱氧胞苷iii)嘌呤类似物6-巯基嘌呤6-硫代鸟嘌呤硫唑嘌呤2’-去氧助间型霉素(喷司他丁)赤羟基壬基腺嘌呤(EHNA)磷酸氟达拉滨2-氯脱氧腺苷(克拉利平，2-CdA)  5-碘脱氧尿苷溴脱氧胞苷
 表1
  C)I型拓扑异构酶抑制剂喜树碱拓扑替康伊立替康   I)杂类试剂 i)铂配位络合物顺铂卡铂奥沙利铂anthracenedione米托蒽醌ii)取代的脲羟基脲iii)甲基肼衍生物N-甲基肼(MIH)丙卡巴肼iv)肾上腺皮质抑制剂米托坦(o，p’-DDD)氨鲁米特(ainoglutethimide)
  D)生物反应调节剂G-CSFGM-CSF   J)细胞因子干扰素(α、β、γ)白细胞介素-2
  E)分化剂视黄酸衍生物   K)光敏剂血卟啉衍生物光敏素苯并卟啉衍生物Npe6锡初卟啉(SnET2)pheoborbide-a细菌叶绿素-a萘酞菁酞菁染料锌酞菁
  F)激素和拮抗剂   L)辐射
  i)肾上腺皮质类固醇/拮抗剂泼尼松和等效物地塞米松氨鲁米特ii)孕酮己酸羟孕酮醋酸甲羟孕酮醋酸甲地孕酮iii)雌激素己烯雌酚乙炔雌二醇/等效物iv)抗雌激素他莫昔芬v)雄激素丙酸睾酮氟甲睾酮/等效物vi)抗雄激素氟他胺促性腺素释放激素类似物醋酸亮丙瑞林vii)非甾醇类抗雄激素氟他胺  X-射线紫外线γ-辐射可见光红外线辐射微波辐射
可与辐射敏化剂特别地联合使用的化疗剂的实例包括，例如喜树碱、卡铂、顺铂、柔红霉素、阿霉素、干扰素(α、β、γ)、依立替康、羟基脲、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、2-氯腺苷、氟达拉滨、氮杂胞苷、吉西他滨、培美曲塞、白细胞介素-2、伊立替康、多西他赛、紫杉醇、拓扑替康和它们的治疗有效的类似物和衍生物。
根据本发明，本发明的化合物可以与单独的吉西他滨联合使用，或另外还与紫杉醇联合使用。本发明的化合物也可以与与单独的培美曲塞联合使用，或另外还与顺铂、卡铂或其它铂联合使用。本发明的Chk1抑制剂也可以与吉西他滨和培美曲塞联合施用。
与吉西他滨联合施用的本发明的Chk1抑制剂可以用于治疗，例如，胰腺癌、子宫平滑肌肉瘤、骨肉瘤、转移性非小细胞肺癌、肢体和躯干软组织肉瘤、肾细胞癌、腺癌和何杰金病。与培美曲塞联合施用的本发明的Chk1抑制剂可以用于治疗间皮瘤。
本发明的化合物也可以加强特征在于异常的细胞增殖的炎性疾病、状况或障碍的治疗中使用的药物的功效。本发明的化合物可以治疗的炎性疾病的实例包括，但不限于，类风湿性关节炎(RA)、银屑病、白癫风、韦格纳肉芽肿病、全身发作的青少年慢性关节炎(JCA)和全身性红斑狼疮(SLE)。关节炎、韦格纳肉芽肿病和SLE的治疗，经常包含使用免疫抑制疗法，例如电离辐射、甲氨蝶呤和环磷酰胺。这样的治疗一般地会直接或间接诱导DNA损伤。抑制损害的免疫细胞内的Chk1活性，使细胞对这些标准治疗的控制更敏感。通常，用紫外辐射(UV)与补骨脂素联合治疗银屑病和白癫风。本发明的化合物会增强UV和补骨脂素的杀死作用，并提高该治疗方案的治疗指数。通常，在与免疫抑制药物联合使用时，本发明的化合物加强对炎性疾病细胞的控制。
本发明的化合物也可以用于治疗特征在于异常增殖的细胞的其它非癌性状况的方法中。这样的状况包括，但不限于，动脉粥样硬化、再狭窄、血管炎、肾炎、视网膜病、肾病、增生性皮肤病、银屑病、瘢痕瘤瘢痕形成、光化性角化病、Stevens-Johnson综合征、骨质疏松症、眼睛的过度增生病，包括上皮下生长、增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)、diabetic retropathy、血管增生病、鱼鳞病和乳头状瘤。
在WO 05/027907中，描述了施用本发明的Chk1抑制剂的一种优选的方法，其公开内容引作参考。这样的抑制异常的细胞增殖的方法包含有计划地施用根据本发明的Chk1激活剂(例如，化疗剂)和Chk1抑制剂。在该方法中，以足以在增殖细胞中诱导细胞周期停滞的基本同步化的剂量和时间，施用至少一种Chk1激活剂。在达到基本上的期同步化后，施用至少一种Chk1抑制剂，以取消细胞周期停滞和诱导治疗性的细胞死亡。该方法可以与任意的Chk1激活剂一起使用，并用于治疗或预防包含异常的细胞增殖的癌性和非癌性的状况。
可以使一群异常增殖的细胞接触一种或超过一种本发明的Chk1抑制剂。如果使用超过一种Chk1抑制剂，则如通过熟练的技术人员例如主治医师(在人患者的情况下)或实验室实验人员(在体外或离体操作的情况下)确定的，可以使用相同或不同的方法(例如，同时或先后，相同或不同的持续时间，或通过相同或不同的方式)，使Chk1抑制剂接触细胞。
也可以使一群异常增殖的细胞接触一种或多种Chk1激活剂。如果使用超过一种Chk1激活剂，则可以使用相同或不同的方法，通常如上面的Chk1抑制剂的上下文中所述，使Chk1激活剂接触细胞。
本发明的化合物可以离体地应用于细胞群体。例如，可以离体地使用本发明的化合物，以得到关于为给定征候施用Chk1抑制剂的最佳方案和/或剂量、细胞类型、患者和/或其它治疗参数的信息。该信息可以用于实验目的或临床，以确定体内治疗的方案。本领域的技术人员会明白本发明的化合物的其它离体用途。
本领域的技术人员会明白，在本文所述的方法中可以使用其它活性剂或辅助剂。本领域的技术人员还会明白，本文中提及的治疗延伸至预防，以及确定的疾病或症状的治疗。
用于治疗所需要的本发明的化合物的量，随着待治疗的状况的性质、患者的年龄和状况而变，且最终由主治医生或兽医确定。但是，一般地，为成年人治疗施用的剂量一般地是在每天0.001mg/kg至约100mg/kg的范围内。可以在单剂中施用该剂量，或作为以适当的时间间隔施用的多剂(例如作为每天2、3、4或更多个亚剂量)施用该剂量。在实践中，医师决定适于个体患者的给药方案，并且剂量随特定患者的年龄、体重和反应而变化。上述剂量是平均情况的示例，但是存在其中更高或更低剂量是值得的个别情况，并且其在本发明范围内。
细胞群体接触任意剂量的本发明的Chk1抑制剂足以实现基本上取消细胞周期关卡的时间。一般地，尽管不是必需的，这样的时间包括最高达约72小时至约96小时，这取决于多种因素。在有些实施方案中，希望或必须施用Chk1抑制剂最高达约数周或更多的时间段，如主治医师或技术人员所确定的。因而，本发明的Chk1抑制剂一般地可以施用最高达约1小时、最高达约2小时、最高达约3小时、最高达约4小时、最高达约6小时、最高达约12小时、最高达约18小时、最高达约24小时、最高达约48小时或最高达约72小时。本领域的技术人员明白，本文中表述的时间范围仅仅是示例性的，且在表述的范围之内和之外的范围和子范围也在本发明的范围内。
可以以多个剂量施用本发明的Chk1抑制剂。例如，可以以下述频率施用Chk1抑制剂：以4天时间间隔每天一剂地送递4剂(q4d×4)；以3天时间间隔每天一剂地送递4剂(q3d×4)；以5天时间间隔每天送递一剂(qd×5)；每周一剂，持续3周(qwk3)；5天每天给药，停止2天，且另5天每天给药(5/2/5)；或者，确定为适合情况的任何给药方案。
实施例
实施例1
Chk1抑制剂的IC50值的测定
如以前在1998年9月4日提交的WO 99/11795所述，鉴别和克隆人Chk1 cDNA。将FLAG标记插到具有全长Chk1的氨基末端的读框中。5′引物含有EcoRI位点，Kozak序列，且也编码FLAG标记，后者用于使用M2抗体(Sigma，Saint Louis，IL)的亲和纯化。3′引物含有SalI位点。将PCR-扩增的片段作为EcoRI-SalI片段克隆进pCI-Neo(Invitrogen，Carlsbad，CA)，然后作为EcoRI-NotI片段亚克隆进pFastBacI(Gibco-BRL，Bethesda，MD)。如Gibco-BRL Bac-to-Bac手册所述，制备重组杆状病毒，并用于感染在CCM3培养基(Hy-Clone Laboratories，Logan，UT)中生长的Sf-9细胞，以用于表达FLAG-标记的Chk1蛋白。
从杆状病毒-感染的SF9细胞的冷冻沉淀，纯化FLAG-标记的Chk1。将冷冻的细胞沉淀与等体积的2X裂解缓冲液相混合，所述缓冲液含有100mM Tris-HCl pH7.5、200mM NaCl、50mM B-磷酸甘油、25mM NaF、4mM MgCl2、0.5mM EGTA、0.2％TWEEN-20、2mM钒酸钠、2mM DTT和蛋白酶抑制剂的混合物(Complete mini，Boehringer Mannheim 2000目录号1836170)。然后，用dounce匀浆器的松研杵研磨(dounce)细胞20次，并在48,400xg离心1小时。用10柱体积的50mM甘氨酸pH3.5、随后用20mM Tris pH7.5、150mM NaCl(交替3次)和最终用Tris NaCl洗涤物(wash)预洗涤M2亲和树脂(affinity)。然后，用25柱体积的20mM Tris pH7.5、150mM NaCl、0.1％TWEEN-20、1mM EGTA、1mM EDTA和1Xcomplete mini蛋白酶片剂洗涤柱。然后，在4℃，使澄清裂解液分批结合M2亲和树脂4小时。然后，将树脂和裂解物的混合物倒入柱中，并收集流通物。用10柱体积的20mM Tris pH7.5、150mM NaCl和3mM N-辛基葡糖苷洗涤树脂。然后，用含有0.5mg/mL FLAG肽(Sigma，2000目录号F-3290)的6柱体积的冷20mM Tris pH7.5、150mM NaCl、3mM N-辛基葡糖苷，从柱洗脱FLAG-标记的Chk1。收集3个级分，并分析FLAG-标记的Chk1的存在。
Chk1激酶活性的测定包括100ng纯化的FLAG-Chk1(150pmol ATP/min)、20μm Cdc25C肽(H-leu-tyr-arg-ser-pro-ser-met-pro-glu-asn-leu-asn-arg-arg-arg-arg-OH)(SEQ ID NO：1)、4μmATP、2μCi[32P]γ-ATP、20mM Hepes pH7.2、5mM MgCl2、0.1％NP40和1mM DTT。通过加入含有ATP的反应混合物，开始反应，并在室温进行10分钟。通过加入磷酸(150mM终浓度)终止反应，并转移至磷酸纤维素盘。用150mM磷酸洗涤磷酸纤维素盘5次，并风干。加入闪烁液，并在Wallac闪烁计数器中计数盘。在有广浓度范围的Chk1抑制剂化合物存在下，温育测定，并计算化合物的IC50值。如上所述，进行测定的本发明的所有化合物都在测定中表现出小于约500nM的IC50值。
实施例2
选择性
测试本发明的Chk1抑制剂的选择性，以Chk1作为参比酶，且下述蛋白激酶作为比较酶：Cdc2、Chk2、CTAK、EphA1、EphA2、Erk1、FGFR1、FGFR4、IR、JNK1、c-Kit、p38α、p38β、p38δ、Ros、Rse、Rsk2、TrkA、TrkB、蛋白激酶A、蛋白激酶C、pp60v-src、蛋白激酶B/Akt-1、p38MapK、p70S6K、依赖于钙-钙调蛋白的激酶II和ab1酪氨酸激酶。
如上所述，测量化合物对Chk1的IC50值。使用SelectSmartTM(MDS Pharma Servies，Bothell，Washington，美国)所有的技术平台，利用经修改的ELISA方法或荧光偏振，测量化合物相对于比较酶的IC50值。测试的所有抑制剂都表现出对Chk1超过对测试的比较酶的至少20-倍选择性。
或者，测定每种这样的激酶的IC50的测定，以前已经记载在文献中，包括美国专利公开号2002/016521和WO 95/19988，它们二者在这里引作参考。
实施例3
本发明的Chk1抑制剂抑制细胞中的Chk1功能
为了确认本发明的Chk1抑制剂抑制细胞中的Chk1功能，可以在基于分子细胞的测定中，测试抑制剂。因为已经表明哺乳动物Chk1体外磷酸化Cdc25C，从而表明它对DNA损伤作出响应会负调节细胞周期蛋白B/cdc2，所以可以分析Chk1抑制剂增强细胞周期蛋白B/cdc2的活性的能力。可以如下设计实验：用800拉德辐照HeLa细胞，并在37℃温育7小时。因为这些细胞在功能上是p53阴性的，所以它们排他地停滞在G2。然后，加入洛可达唑至0.5μg/mL的浓度，并在37℃温育细胞15小时。洛可达唑的加入被设计用于捕捉穿过G2停滞进入M的任何细胞。最后，加入Chk1抑制剂8小时，收获细胞，裂解，并如生产商所建议的，用细胞周期蛋白B1的抗体(NewEngland Biolabs)，免疫沉淀等量的蛋白。然后，通过测定组蛋白H1激酶活性，分析免疫沉淀的细胞周期蛋白B-相关的cdc2激酶活性(Yu等，J Biol Chem.，Dec.11，1998；273(50)：33455-64)。
另外，使用有丝分裂指数测定实验，可以确认主题Chk1抑制剂取消电离辐射-诱导的G2 DNA损伤关卡的能力。如上所述，处理HeLa细胞(大约1×106)。通过离心收获细胞，用PBS洗涤一次，然后重新悬浮于2.5mL 75mM KCl中，并再次离心。然后将细胞固定在3mL新制备的冷HOAc∶MeOH(1∶3)中，并在冰上温育20分钟。沉淀细胞，吸出固定溶液，并重新悬浮于0.5mL PBS中。通过将100μL固定的细胞移液到玻璃显微镜载玻片上，并用1mL固定溶液冲洗(flood)样品，制备有丝分裂展开样(spread)。然后，使载玻片风干，用Wright氏染料(Sigma)染色1分钟，然后用H2O洗涤一次，并用50％MeOH洗涤一次。浓缩的染色体的存在和核被膜的缺乏，指示着有丝分裂的细胞。
实施例4
本发明的Chk1抑制剂增强癌症治疗对细胞的杀死
为了证实本发明的化合物对Chk1的抑制使靶定的细胞对DNA-损伤剂的杀死作用敏感化，可以在有本发明的Chk1抑制剂存在下温育细胞，并暴露于辐照或化学DNA-损伤剂。在37℃，在5％CO2的湿润培养箱中，在含有10％FBS、100 U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RMPI 1640中，生长以每孔1000-2000个的密度铺平板在96-孔微量滴定板中的细胞18小时。测试的细胞可以包括任何目标细胞或细胞系，例如HeLa、ACHN、786-0、HCT116、SW620、HT29、Colo205、SK-MEL-5、SK-MEL-28、A549、H322、OVCAR-3、SK-OV-3、MDA-MB-231、MCF-7、PC-3、HL-60、K562和MOLT4。所有细胞系的名称指下面的人细胞系：
HeLa 子宫颈腺癌
ACHN 肾腺癌
786-0 肾腺癌
HCT116 结肠癌
SW620 结肠癌，淋巴结转移
HT-29 结肠直肠腺癌
Colo205 结肠腺癌
SK-MEL-5 黑素瘤
SK-MEL-28 恶性黑素瘤
A549 肺癌
H322 细支气管肺泡癌(broncholoalveolar carcinoma)
OVCAR-3 卵巢腺癌
SK-OV-3 卵巢腺癌
MDA-MB-231 乳腺腺癌
MCF-7 乳腺腺癌
PC-3 前列腺腺癌，从转移至骨
HL-60 急性早幼粒细胞白血病
K562 慢性髓细胞性白血病
MOLT4 急性成淋巴细胞性白血病；T成淋巴细胞
用仅含有化疗药物或含有化疗药物与Chk1抑制剂的培养基处理细胞。将细胞培养大约5天，然后通过测定3H-胸苷摄取水平来测量生长。化疗药物包括依托泊苷、阿霉素、顺铂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶。将细胞生长抑制至未处理的对照细胞的90％所需的药物浓度定义为GI90。
可以用另外的抗代谢物，包括甲氨蝶呤、羟基脲、2-氯腺苷、氟达拉滨、氮杂胞苷和吉西他滨测试本发明的化合物，以评价其增强这些试剂的杀死作用的能力。通过评价与吉西他滨联合的对HT29结肠直肠癌的增强的杀死作用，可以彼此对比本发明的化合物。
另外，可以测试本发明的Chk1抑制剂增强辐射的杀死作用的能力。
实施例5
测量动物模型中的Chk1抑制剂活性的灵敏性测定
开发了下面的灵敏性测定，以测量啮鼠类动物肿瘤模型中的Chk1抑制剂活性。具体地，除了别的以外，可以使用该测定，以测量Chk1抑制剂阻断肿瘤模型中的Chk1功能的能力，并允许评价促进Chk1抑制剂向分子靶的接近的条件。
使用定量免疫荧光测定，其通过监控丝氨酸10上的组蛋白H3磷酸化(H3-P)(有丝分裂-特异性的事件)来测量有丝分裂指数，测量选择性的Chk1抑制剂取消化疗-诱导的关卡能力(Ajiro等，J BiolChem.，271：13197-201，1996；Goto等，J Biol Chem.，274：25543-9，1999)。测定方案如下。切离来自用或未用Chk1激活剂(在本研究中，化疗剂)和/或Chk1抑制剂处理的啮齿类动物的肿瘤，并用石蜡包埋。将肿瘤切成6微米厚的切片，并封固到玻璃载玻片上。通过连续用二甲苯、100％乙醇、95％EtOH、70％EtOH和DI H2O处理3分钟，从载玻片取出石蜡。然后，在10mM柠檬酸钠中将载玻片加热到95℃进行10分钟，随后为20分钟冷却步骤。用封闭缓冲液(溶于含有0.05％Triton X-100的磷酸缓冲盐水(PBST)中的20％正常人血清和2％牛血清清蛋白)封闭载玻片30分钟。在封闭缓冲液中1∶200稀释抗磷酸组蛋白(antiphospho histone)H3抗体(Upstate Biotech，目录号06-570)，并与载玻片一起温育1小时。在PBST中洗涤载玻片3次、5分钟。加入第二抗体驴抗兔罗丹明(Jackson，目录号711-295-152)30分钟。然后，在PBST中洗涤载玻片2次，加入75μM溶于PBS中的0.1μM/ml DAPI(Sigma)，并允许染色30分钟。然后，在PBST中洗涤载玻片另外2次，并用Vectashield(Vector，目录号H-1400)封固。使用荧光显微镜术观察载玻片。使用Metamorph软件(Universal Imaging Corporation，Version 4.6)，定量用H3-P抗体染色的细胞相对于总(DAPI染色的)细胞的百分比。
实施例6
选择性的Chk1抑制剂取消DNA损伤-诱导的G2和S期关卡
以前的研究证实，选择性的Chk1抑制剂基本上取消DNA损伤-诱导的G2/M和S期关卡。在前者中，DNA损伤由电离辐射(IR)诱导，它的靶期是G2期。在后者中，DNA损伤由化疗剂诱导，它的靶期是S期。见公开的美国专利申请公开号2003/0069284和其中引用的文献。
简而言之，通过有丝分裂指数实验，测定IR-诱导的G2 DNA损伤关卡的Chk1抑制剂取消。用800拉德辐照大约1×106 HeLa细胞，并在37℃温育7小时。因为这些细胞在功能上是p53阴性的，所以它们排他地停滞在G2。然后，加入洛可达唑至0.5μg/mL的浓度，并在37℃温育15小时(洛可达唑的加入被设计用于捕捉穿过有丝分裂中的G2停滞的细胞，从而阻止它们进一步进入G1，并允许定量M期细胞)。加入选择性的Chk1抑制剂8小时，通过离心收获细胞，用PBS洗涤一次，然后重新悬浮于2.5mL 75mM KCl中，并再次离心。然后将细胞固定在3mL新制备的冷HOAc∶MeOH(1∶3)中，并在冰上温育20分钟。沉淀细胞，吸出固定溶液，并将细胞重新悬浮于0.5mL PBS中。通过将100μL固定的细胞移液到玻璃显微镜载玻片上，并用1mL固定溶液冲洗样品，制备有丝分裂展开样。然后，使载玻片风干，用Wrights染料(Sigma，St.Louis，MO)染色1分钟，然后在水中洗涤一次，并在50％MeOH中洗涤一次。浓缩的染色体的存在和核被膜的缺乏，指示着有丝分裂的细胞。在有辐照存在下，Chk1抑制剂导致有丝分裂细胞数目的增加，从而证实IR-诱导的G2停滞的取消。该关卡取消会导致细胞周期蛋白B/-cdc2的活性的增强，这是细胞进入有丝分裂所必需的。用IR、随后用Chk1抑制剂处理的细胞，因而携带受损的DNA进入有丝分裂。这些实验证实了下述假设，即Chk1参与IR-诱导的G2。
实施例7
在有Chk1激活剂存在下，异种移植肿瘤模型中的肿瘤细胞摄取Chk1抑制剂
在异种移植肿瘤模型中，将HT29结肠癌肿瘤移入裸鼠的胁腹，并允许生长至200mm3。然后在第1天和第4天，间隔3天，用载体、300mg/kg Chk1抑制剂、20mg/kg吉西他滨或共同施用300mg/kgChk1抑制剂和20mg/kg吉西他滨处理小鼠2次。与单独的吉西他滨相比，共同施用Chk1抑制剂和吉西他滨处理携带肿瘤的小鼠导致肿瘤的4天生长延迟。
为了评价Chk1抑制剂向肿瘤组织中的扩散，测量Chk1抑制剂的血浆和组织水平。使用Alzet泵，在连续送递系统中，经24小时时间段，将500mg/kg Chk1抑制剂施用给携带HT29肿瘤的小鼠。取血浆样品，然后收集肿瘤、肾、肝、脾和肺。在1、2、4、8和24小时的时间点收集。提取组织，并定量Chk1抑制剂的水平。该实验证实，Chk1抑制剂穿入正常和肿瘤组织，在肿瘤组织中达到约15μM的水平，且在脾组织中在8小时达到约20μM的峰值。因而，Chk1抑制剂能容易地被增殖细胞摄取，且可以与Chk1激活化疗剂一起，用作治疗增殖性疾病的疗法。
实施例8
用Chk1抑制剂和吉西他滨治疗的肿瘤的剂量反应
为了确定吉西他滨治疗后的Chk1抑制剂的有效剂量和剂量依赖性的关卡取消是否与抗肿瘤活性有关，进行了剂量反应实验。
将HT29肿瘤细胞移入裸鼠，并允许肿瘤发展10天。肿瘤在开始时大约100mm3。用MTD(160mg/kg)的吉西他滨、然后用50mg/kg、200mg/kg或400mg/kg的Chk1抑制剂，治疗动物。如基于细胞的测定所确定的，在该实验中的吉西他滨预处理时间是32小时，所述测定指示该时间点对于这类肿瘤是最佳的。在每个治疗方案中的肿瘤体积的分析表明，用所述疗法治疗携带HT29肿瘤的小鼠，会比单独的吉西他滨更强地减慢肿瘤生长，200mg/kg或400mg/kgChk1抑制剂+吉西他滨再次显示了Chk1抑制剂的剂量依赖性效应。
实施例9
确定试剂是否是Chk1激活剂的测定
为了确定试剂是否是Chk1激活剂，可以使用Chk1上的特定磷酸化位点的磷酸特异性的抗体，测量Chk1的磷酸化状态。已经表明，在用电离辐射、紫外线辐射、羟基脲、N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)、替莫唑胺和吉西他滨处理细胞后，丝氨酸317和345会被磷酸化。Liu等，Genes Dev.14：1448-59，2000；Zhao等，Mol.Cell Biol.21：4129-39，2001；Lopez-Girona等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98：11289-94，2001；Guo等，Genes Dev.14：2745-56，2000；Gatei等，J.Biol.Chem.278：14806-11，2003；Ng等，J Biol Chem.279(10)-.8808-19，2004；Wang等，Natl Acad Sci U S A.100(26)：15387-92，2003；Stojic等，Genes Dev.18(11)：1331-44，2004。这些丝氨酸位点会被上游关卡激酶Atm和Atr磷酸化。Liu等，Genes Dev.14：1448-59，2000；Zhao等Mol.Cell Biol.，21：4129-39，2001)。
通过肿瘤细胞的蛋白印迹或免疫组织化学，可以监控候选Chk1激活剂引起的这些位点的磷酸化。例如，可以使用下面的方案来证实，吉西他滨导致丝氨酸345和317处的Chk1激活。用20μM吉西他滨处理HT29细胞2小时。从细胞生长培养基中洗掉吉西他滨，并将细胞培养另外的22小时。制备蛋白裂解物，并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。将蛋白转移到PVDF膜上，并用对磷酸化的丝氨酸317或345(Cell Signalling)特异性的抗血清(Cell Signalling)探测。蛋白印迹表明，用吉西他滨处理HT29结肠癌细胞，导致丝氨酸317和345的磷酸化。
实施例10
监控Chk1抑制剂引起的Chk1活性的测定
已经发现，Chk1在丝氨酸296处的磷酸化由吉西他滨处理肿瘤细胞刺激，且在该位点的磷酸化由Chk1抑制剂抑制。在该位点的磷酸化不受到渥曼青霉素的抑制，后者抑制Atm和Atr。因此，丝氨酸296的磷酸化不同于丝氨酸317和345的磷酸化。另外，已经发现，在纯化的Chk1制剂中，该位点被磷酸化，从而表明纯化的酶能磷酸化它自身或其它Chk1分子的丝氨酸296。综上所述，这些数据表明丝氨酸296处的磷酸化由Chk1自身进行。因此，该方法可以用于监控Chk1激活剂引起的肿瘤中的Chk1活性。而且，该方法可以用于测量Chk1抑制剂对Chk1激活的抑制。
因而，用20μM吉西他滨处理HT 29细胞2小时。从细胞生长培养基中洗掉吉西他滨，并将细胞培养另外的22小时。制备蛋白裂解物，并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。将蛋白转移到聚偏1，1-二氟乙烯(PVDF)膜上，并用对磷酸化的丝氨酸296(Cell Signalling)特异性的抗血清(Cell Signalling)探测。蛋白印迹表明，用吉西他滨处理HT29结肠癌细胞，导致丝氨酸296的磷酸化。而且，用选择性的Chk1抑制剂处理HT29细胞15分钟，没有表现出丝氨酸296磷酸化。这些数据表明丝氨酸296磷酸化由Chk1激酶进行。
实施例11
动物肿瘤模型
为了在小鼠中测试本发明的Chk1抑制剂增强DNA损伤剂杀伤肿瘤的能力，确立了使用结肠肿瘤细胞系的异种移植肿瘤模型。5-氟尿嘧啶(5-FU)或吉西他滨可以用作DNA损伤剂。使用HT29和Colo205(人结肠癌)和H460和Calu-6(非小细胞癌)来在6-8周龄的雌性胸腺Balb/c(nu/nu)小鼠中繁殖异种移植肿瘤。将小鼠保持在无病原体的条件下的空气层流小室中，并随意给它们饲喂无菌食物和水。在5％CO2湿润环境下，使细胞系在补充了10％FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1.5mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中生长至分汇合。在CMF-PBS中制备单细胞悬浮液，并将细胞浓度调节至1×108个细胞/mL。给小鼠在右胁腹或右腿处皮下(s.c.)接种总共1×107个细胞(100μL)。
将小鼠随机分配成4个治疗组(5-15只小鼠/组)，并在肿瘤达到75-100cm3的体积时使用(通常在接种后7-11天)。用游标卡尺测量肿瘤，并使用下述经验公式估算肿瘤体积：肿瘤体积(cm3)＝肿瘤长度(cm)×肿瘤宽度(cm)×肿瘤深度(cm)/3.3。治疗由下述组成：i)100μL腹膜内(i.p)注射160mg/kg的吉西他滨。在用吉西他滨治疗的小鼠中观察到了肿瘤生长的延迟。预期用160mg/kg吉西他滨联合经口施用Chk1抑制剂治疗小鼠，会减小肿瘤体积，并延长寿命。在实验期间，每隔一天监控肿瘤大小。
显然，在不背离本发明精神和范围的情况下，可对前面所述的本发明作很多改进和变化，且因此，仅应施加这样的限定，正如所附权利要求书所指出的那样。
序列表
<110>ICOS Corporation
<120>用于抑制CHK1的化合物
<130>27866/40188A
<150>US 60/585,292
<151>2004-07-02
<160>1
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>16
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>合成的肽
<400>1
Leu Tyr Arg Ser Pro Ser Met Pro Glu Asn Leu Asn Arg Arg Arg Arg
1               5                   10                  15

Claims (32)

1.具有下式的化合物
Figure A2005800294060002C1
其中X1是空的、-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；
X2是-O-、-S-或-N(R1)-；
Y是O或S；或者＝Y代表附着在共同的碳原子上的两个氢原子；
W选自杂芳基、芳基、杂环烷基、环烷基和被杂芳基或芳基取代的C1-6烷基，其中所述芳基W任选被1-4个由R2代表的取代基取代，所述杂芳基W任选被1-4个由R5代表的取代基取代，且所述杂环烷基和环烷基W任选地被1或2个C1-6烷基取代基取代；
R1选自氢、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和芳基；
R2选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亚烷基SO2NR3、C1-6亚烷基OR3和SR3；
R3选自氢，卤，C1-6烷基，C2-6链烯基，环烷基，芳基，杂芳基，SO2R4，被一个或多个卤、羟基、芳基、杂芳基、杂环烷基、N(R4)2和SO2R4取代的C1-6烷基，C1-6亚烷基芳基，C1-6亚烷基杂芳基，C1-6亚烷基C3-8杂环烷基，C1-6亚烷基SO2芳基，任选地被取代的C1-6亚烷基N(R4)2，OCF3，C1-6亚烷基N(R4)3 +，C3-8杂环烷基，和CH(C1-6亚烷基N(R4)2)2，或2个R3基团一起形成任选地被取代的3-至8-元脂族环；
R4选自氢、C1-6烷基、环烷基、芳基、杂芳基、C1-6亚烷基芳基和SO2C1-6烷基，或2个R4基团一起形成任选地被取代的3-至8-元环；
R5选自C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、杂环烷基、N(R3)2、OR3、卤、N3、CN、C1-6亚烷基芳基、C1-6亚烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)N(R3)2、N(R1)C(O)R3、N(R1)C(O)OR3，和C1-3亚烷基
Figure A2005800294060003C1
R6是-C≡C-R7或杂芳基；
R7选自氢、C1-6烷基、芳基、C1-6亚烷基芳基、杂芳基、C1-6亚烷基杂芳基和烷氧基；
R8、R9和R10独立地选自卤、任选地被取代的C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、OCF3、CF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)-OR3、N(R8)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基OR3、N(R1)C(O)-C1-3亚烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亚烷基SO2NR3、C1-3亚烷基OR3和SR3；
和它们的药学上可接受的盐或前体药物或溶剂化物。
2.权利要求1的化合物，其中
X1和X2是-N(H)-；
Y是O或S；
W是含有至少2个选自N、O和S的杂原子的杂芳基，所述环任选地被1-4个选自下述的取代基取代：C1-6烷基、芳基、杂芳基、N(R3)2、OR3、C(O)N(R3)2、CO2R3、CN和卤。
3.权利要求2的化合物，其中W选自哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基，其任选地被1-4个选自下述的取代基取代：任选地被取代的C1-6烷基、芳基、N(R3)2、OR3、C(O)OR3、C(O)N(R3)2和卤。
4.权利要求2的化合物，其中W选自
Figure A2005800294060004C1
5.权利要求2的化合物，其中W选自
Figure A2005800294060004C2
和
Figure A2005800294060004C3
6.权利要求2的化合物，其中W是吡嗪基。
7.权利要求1的化合物，其中R7是杂芳基。
8.权利要求7的化合物，其中杂芳基是吡啶基。
9.权利要求1的化合物，其中R6是选自下述的杂芳基：
Figure A2005800294060004C4
Figure A2005800294060005C1
10.权利要求9的化合物，其中杂芳基被C1-3亚烷基N(R4)2取代。
11.组合物，其包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
12.选自下述的化合物：1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基乙炔基-苯基)-脲、1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-3-基-苯基)-脲、1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-吡啶-4-基-苯基)-脲、1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(2-唑-5-基-苯基)-脲、1-(5-甲基-吡嗪-2-基)-3-(5-甲基-2-噻唑-2-基-苯基)脲、1-[2-(4-二甲氨基甲基-噻唑-2-基)-5-甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡嗪-2-基)-脲和它们的混合物。
13.抑制细胞中的关卡激酶1的方法，其包含使细胞接触有效量的权利要求1的化合物的步骤。
14.使接受对医学状况的化疗或辐射治疗的治疗的个体中的细胞敏化的方法，其包含与化疗剂、辐射治疗剂或其混合物联合地向该个体施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
15.权利要求14的方法，还包含施用一种或多种细胞因子、淋巴因子、生长因子或其它造血因子。
16.权利要求14的方法，其中化疗剂选自烷基化剂、抗代谢物、激素或其拮抗剂、放射性同位素、抗体和它们的混合物。
17.权利要求14的方法，其中所述辐射治疗剂选自γ-辐射、X-射线辐射、紫外线、可见光、红外线辐射和微波辐射。
18.权利要求14的方法，其中所述状况是选自下述的癌症：结肠直肠癌、头和颈癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、外阴癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌、卵巢癌、脑肿瘤、骨肉瘤和肺癌。
19.权利要求14的方法，其中所述状况是选自下述的癌症：粘液样和圆形细胞癌、局部发展的肿瘤、转移性癌、Ewing氏肉瘤、癌症转移、淋巴转移、鳞状上皮细胞癌、食管鳞状上皮细胞癌、口腔癌、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、毛细胞性白血病、渗漏性淋巴瘤(基于体腔的淋巴瘤)、胸腺淋巴瘤肺癌、小细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非-何杰金氏淋巴瘤、肾上腺皮质癌、产生ACTH的肿瘤、非小细胞癌、乳腺癌、小细胞癌、导管癌、胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、与结肠直肠瘤形成有关的息肉、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、原发性表面膀胱肿瘤、侵袭性膀胱移行细胞癌、肌肉侵袭性膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、原发性腹膜上皮肿瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、子宫癌和卵泡中的实体瘤、睾丸癌、阴茎癌、肾细胞癌、固有性脑肿瘤、成神经细胞瘤、星形细胞性脑肿瘤、神经胶质瘤、中枢神经系统中的转移性肿瘤细胞侵袭、骨瘤和骨肉瘤、恶性黑素瘤、人皮肤角质形成细胞的肿瘤进行、鳞状上皮细胞癌、甲状腺癌、成视网膜细胞瘤、成神经细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸膜渗漏、间皮瘤、Wilms氏肿瘤、胆囊癌、滋养层肿瘤、血管外皮细胞瘤和卡波西肉瘤。
20.权利要求14的方法，其中为选自下述的炎性状况施用治疗：类风湿性关节炎、银屑病、白癫风、韦格纳肉芽肿病和全身性红斑狼疮。
21.权利要求14的方法，其中所述化疗剂包含吉西他滨、培美曲塞、顺铂、卡铂、紫杉醇或它们的混合物。
22.抑制异常的细胞增殖的方法，其包含使包含异常增殖的细胞的细胞群体接触Chk1激活剂，以基本上使所述异常增殖的细胞中的细胞周期停滞同步化，并随后使所述细胞群体接触权利要求1的化合物，以基本上取消所述细胞周期停滞。
23.权利要求22的方法，其中所述Chk1激活剂包含至少一种化疗剂。
24.权利要求22的方法，其中所述Chk1激活剂包含电离辐射或紫外线辐射。
25.权利要求22的方法，其中所述电离辐射与辐射敏化剂、光敏剂或其混合物联合施用。
26.权利要求22的方法，其中所述异常增殖的细胞是非癌性的。
27.权利要求1的化合物在生产用于抑制关卡激酶1的药物中的用途。
28.权利要求1的化合物在生产用于使接受对医学征候的化疗或辐射治疗的治疗的个体中的细胞敏化的药物中的用途。
29.权利要求1的化合物在生产用于抑制包含异常增殖的细胞的细胞群体的异常细胞增殖的药物中的用途。
30.权利要求1的化合物在生产用于治疗性或预防性治疗状况的细胞中的药物中的用途，在所述状况中关卡激酶1的抑制具有治疗益处。
31.人药物用途的制品，其包含：
(a)药物组合物，其包含权利要求1的化合物；
(b)包装插页，其告知该组合物可用于治疗包含异常的细胞增殖的征候；和，
(c)任选的容器。
32.人药物用途的制品，其包含：
(a)药物组合物，其包含权利要求1的化合物；
(b)包装插页，其告知该组合物可用作治疗与DNA损害或DNA复制有关的征候的化学敏化剂和辐射敏化剂；和，
(c)任选的容器。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103038221A (zh) * 2010-05-13 2013-04-10 圣提内尔肿瘤学有限公司 Chk-1活性调节剂
CN105272930A (zh) * 2014-07-17 2016-01-27 广东东阳光药业有限公司 取代脲衍生物及其在药物中的应用
CN107922375A (zh) * 2015-07-30 2018-04-17 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向idh2突变的抗肿瘤化合物及其使用方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1608319A4 (en) 2003-04-03 2007-02-28 Univ California IMPROVED HEMMER FOR SOLUBLE EPOXY HYDROLASE
EP1765311A4 (en) 2004-03-16 2009-04-29 Univ California REDUCTION OF NEPHROPATHY WITH INHIBITORS OF SOLUBLE EPOXY HYDROLASE AND EPOXYEICOSANOIDS
CN101115727A (zh) * 2004-08-19 2008-01-30 艾科斯有限公司 用于抑制chk1的化合物
AU2005295167B2 (en) 2004-10-20 2012-05-10 The Regents Of The University Of California Improved inhibitors for the soluble epoxide hydrolase
AR059826A1 (es) * 2006-03-13 2008-04-30 Univ California Inhibidores de urea conformacionalmente restringidos de epoxido hidrolasa soluble
US20080076770A1 (en) * 2006-09-25 2008-03-27 Arete Therapeutics, Inc. Soluble epoxide hydrolase inhibitors
EP2190429B1 (en) * 2007-09-10 2016-04-20 Boston Biomedical, Inc. A novel group of stat3 pathway inhibitors and cancer stem cell pathway inhibitors
EP2070929A1 (en) * 2007-12-11 2009-06-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Alkynylaryl compounds and salts thereof, pharmaceutical compositions comprising same, methods of preparing same and uses of same
EP2528604B1 (en) 2010-01-29 2017-11-22 The Regents of the University of California Acyl piperidine inhibitors of soluble epoxide hydrolase
GB201119799D0 (en) 2011-11-16 2011-12-28 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
BR112015025347A2 (pt) 2013-04-09 2017-07-18 Boston Biomedical Inc 2-acetil-nafto [2-3-b] furan-4,9-diona para uso no tratamento do câncer
CN112472699A (zh) 2013-07-26 2021-03-12 种族肿瘤学公司 改善比生群及衍生物的治疗益处的组合方法
GB201402277D0 (en) 2014-02-10 2014-03-26 Sentinel Oncology Ltd Pharmaceutical compounds
TW201702218A (zh) 2014-12-12 2017-01-16 美國杰克森實驗室 關於治療癌症、自體免疫疾病及神經退化性疾病之組合物及方法
EP3411036B1 (en) 2016-02-04 2021-12-29 Pharmaengine, Inc. 3,5-disubstituted pyrazoles useful as checkpoint kinase 1 (chk1) inhibitors, and their preparations and applications
JP7106563B2 (ja) 2016-11-29 2022-07-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ナフトフラン誘導体、その調製、および使用方法
MX2019011506A (es) 2017-03-31 2019-11-01 Seattle Genetics Inc Inhibicion de cinasa 1 de punto de control (chk1) para el tratamiento de cancer.
US10646464B2 (en) 2017-05-17 2020-05-12 Boston Biomedical, Inc. Methods for treating cancer
WO2021119236A1 (en) 2019-12-10 2021-06-17 Seagen Inc. Preparation of a chk1 inhibitor compound
GB202107932D0 (en) 2021-06-03 2021-07-21 Sentinel Oncology Ltd Preparation of a CHK1 Inhibitor Compound
GB202107924D0 (en) 2021-06-03 2021-07-21 Sentinel Oncology Ltd A pharmaceutical salt

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01163723A (ja) * 1987-12-21 1989-06-28 Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> 有機非線形光学材料
CN1213022C (zh) * 1997-12-22 2005-08-03 拜尔有限公司 用对称和不对称的取代二苯脲抑制raf激酶
GB9823873D0 (en) * 1998-10-30 1998-12-30 Pharmacia & Upjohn Spa 2-ureido-thiazole derivatives,process for their preparation,and their use as antitumour agents
UA76977C2 (en) * 2001-03-02 2006-10-16 Icos Corp Aryl- and heteroaryl substituted chk1 inhibitors and their use as radiosensitizers and chemosensitizers
US20030187026A1 (en) * 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US20040034038A1 (en) * 2002-08-13 2004-02-19 Goaquan Li Urea kinase inhibitors

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103038221A (zh) * 2010-05-13 2013-04-10 圣提内尔肿瘤学有限公司 Chk-1活性调节剂
CN105272930A (zh) * 2014-07-17 2016-01-27 广东东阳光药业有限公司 取代脲衍生物及其在药物中的应用
CN105272930B (zh) * 2014-07-17 2018-07-13 广东东阳光药业有限公司 取代脲衍生物及其在药物中的应用
CN107922375A (zh) * 2015-07-30 2018-04-17 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向idh2突变的抗肿瘤化合物及其使用方法
CN107922375B (zh) * 2015-07-30 2020-05-22 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向idh2突变的抗肿瘤化合物及其使用方法

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