CN100998654A - 双黄连分散片的制备方法及其质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及双黄连分散片的制备方法：连翘2500g、金银花1250g、黄芩1250g，以上三味，黄芩水煎煮，提取黄芩甙；金银花、连翘水煎煮，醇沉，得稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用；取微晶纤维素165g、羟丙基纤维素33g、交联聚乙烯吡咯烷酮42g、甘露醇14g、阿斯帕坦6g及硬脂酸镁适量，加入药粉，混合均匀，过80目筛，压片，即得。本申请进一步提供了对黄芩、连翘、绿原酸、黄芩甙的鉴别及含量测定方法，能更好地反映和控制制剂的内在质量。

Description

双黄连分散片的制备方法及其质量控制方法

技术领域

本发明涉及双黄连分散片的制备方法及其质量控制方法。

背景技术

双黄连片记载于《中国药典》2005年版一部，由金银花、黄芩、连翘等几味中药组成，具有辛凉解表，清热解毒的功效，用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒或细菌感染引起的肺炎、上呼吸道感染、扁桃体炎等。经药理、药效、临床等方面资料显示，其药理、药效学具有以下特点：1.具有抗病毒作用。2.具有较强的抑菌作用。3.具有显著的降低大鼠体温升高作用，对醋酸引起的小鼠毛细血管通透性有明显抑制作用。4.具有显著增强机体免疫功能。5.长期毒性试验未见明显毒副作用。双黄连片崩解和药物溶出缓慢，不利于儿童、老人及体弱的患者使用，所以我们将其开发为分散片；与同类产品的其他剂型相比，分散片兼具口服片剂和口服液体制剂的优点，稳定性好，便于携带，服用方便等，还具有分散度高，溶出速度快、吸收快、生物利用度高，不良反应少等优点；可吞服、咀嚼、含吮，也可置于水中分散后单独服用或与果汁、牛奶等同服，尤其适合老人、幼儿和吞服固体药剂困难的患者；因其制备工艺和普通片剂相同，对生产设备无特殊要求。因双黄连分散片更适合患者的需求，具有更广泛的市场前景，所以我们选择该项目进行研究。

发明目的和发明内容

一、制备工艺

原料组成：连翘2500g、金银花1250g、黄芩1250g，加辅料适量，制成1000片，每次服用量为6片。

制法：以上三味，黄芩水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08(80℃)的清膏，调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用。金银花、连翘水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(80℃)的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用。取微晶纤维素165g，羟丙基纤维素33g，交联聚乙烯吡咯烷酮42g，甘露醇14g，阿斯帕坦6g及硬脂酸镁适量的辅料，加入药粉，混合均匀，过80目筛，压片即得。

优选制备方法为：以上三味，黄芩加10倍量的水浸泡60分钟后，煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08(80℃)的清膏，于80℃用2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置24小时，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用。金银花、连翘加10倍量的水温浸30分钟后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(80℃)的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，残渣加5倍量75％的乙醇，搅匀，静置12小时，滤过，合并二次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用。取处方量微晶纤维素165g，羟丙基纤维素33g，交联聚乙烯吡咯烷酮42g，甘露醇14g，阿斯帕坦6g及硬脂酸镁适量的辅料，加入药粉，混合均匀，过80目筛，直接压片，即得。

功能与主治：疏风解表、清热解毒。用于外感风热所致的感冒，症见发热、咳嗽、咽痛。

用法与用量：口服，一次6片，一日3次；小儿酌减或遵医嘱。

规格：每片重0.55克。

二、制备工艺的研究

1、处方中黄芩提取工艺的研究

(1)黄芩饮片浸泡时间的确定

称取黄芩200g三份，分别置烧杯中，加水500ml，浸泡，每隔10分钟观察一次药材浸透情况，分别记录药材芯部浸透时间，求平均数，结果60分钟后药材芯部浸透，确定黄芩饮片的浸泡时间为60分钟。

(2)黄芩饮片提取时加水量的确定

称取处方量的黄芩1250g三份，分别以每次8倍、10倍和12倍量的水浸泡50分钟，煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩定容至1000ml，测定黄芩苷的含量。

测定方法：精密吸取黄芩提取物1ml，置100ml的量瓶中，加乙醇适量，超声处理30分钟，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1ml，置25ml的量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在275±1nm的波长处测定吸收度，按C₂₁H₁₈O₂的吸收系数为673计算，即得。结果见下表：

表2处方中药材不同加水量提取后的黄芩苷的含量

不同加水量	提取物量(ml)	黄芩甙含量(g)
			每次8倍量水每次10倍量水每次12倍量水	100010001000	112163167

结果：8倍量水提取的提取物黄芩苷含量较低，10倍量水和12倍量水提取的提取物黄芩苷含量没有明显差别，为了节省能耗，最后确定加10倍量的水浸泡1小时，煎煮提取三次，第一次2小时，第二、三次各1小时。

2、处方中金银花、连翘提取工艺的研究

(1)处方中金银花、连翘水提取加水量的考察

称取1/2处方量的金银花625g、连翘1250g三份，置于烧杯中，分别以8倍、10倍和12倍量的水温浸30分钟，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩定容至1000ml，测定绿原酸的含量。

测定方法：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(10∶90)为流动相；检测波长为324nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备  取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取上述提取物1ml，置50ml棕色量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见下表：

表3处方中金银花连翘不同加水量提取后绿原酸的含量

不同加水量	提取物量(ml)	绿原酸含量(g)
			每次8倍量水每次10倍量水每次12倍量水	100010001000	2.192.532.57

结果：8倍量水提取的提取物绿原酸的含量较低，10倍量和12倍量水提取的提取物绿原酸的含量没有明显差别，为了节省能耗，最后确定加10倍量的温水浸泡30分钟，煎煮二次，每次1.5小时。

(2)金银花、连翘提取物加醇量的考察

精密量取上述用10倍量水提取并定容后的提取液三份，每份300ml，80℃水浴上浓缩至相对密度为1.20～1.25，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，残渣分别加3倍、5倍、8倍量的75％乙醇，搅匀，静置12小时，滤过，合并二次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，置已干燥至恒重的蒸发皿中，减压干燥后，再于105℃干燥5小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算干膏得率，测定绿原酸的含量，含量测定方法同前文所述，仅供试品取样量为50mg。结果下表：

表4处方中金银花连翘不同加醇量提取后绿原酸的含量

不同加醇量	干膏量(g)	绿原酸含量(g)
			3倍量5倍量8倍量	16.5520.6422.07	0.530.680.71

结果：3倍量醇提取的出膏率及绿原酸含量较低，5倍量和8倍量醇提取的出膏率及绿原酸的含量没有明显差别，为了考虑出膏率和节省能耗，最后确定加5倍量75％乙醇对提取物进行醇沉。

3、根据上述实验，双黄连分散片药材提取工艺确定如下：

连翘2500g  金银花1250g  黄芩1250g  辅料适量

以上三味，黄芩加10倍量的水浸泡60分钟后，煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08(80℃)的清膏，于80℃用2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置24小时，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用。金银花、连翘加10倍量的水温浸30分钟后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(80℃)的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，残渣加5倍量75％乙醇，搅匀，静置12小时，滤过，合并二次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用。

4、双黄连分散片成型工艺的研究

(1)、崩解剂的选择实验

为了更好的解决本品的崩解问题，根据国内外相关文献资料的报导，本品首先采用粉末直接压片法，选择微晶纤维素(MCC)、羟丙基纤维素(HPC)为粘合剂，交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)作为崩解剂。

处方药材提取后的药粉量为274g，将微晶纤维素的用量固定为处方量的60％左右，以其为基础含量，确定其他辅料的用量，处方设计见下表：

表6辅料处方比例设计

处方	微晶纤维素量(份)	羟丙基纤维素(份)	交联聚乙烯吡咯烷酮(份)
				12345	55555	11111	0.50.751.01.251.5

采用直接压片法，将以上配比的辅料分别过80目筛，加入药材提取物与适量的润滑剂混合均匀，压片。检查分散均匀性，结果见下表：

分散均匀性检查方法采用药典方法：取供试品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过2号筛。

表7以上各处方制成片剂后的分散均匀性检查结果

处方	1	2	3	4	5
						分散均匀性	4分钟崩解能通过2号筛	3.5分钟崩解能通过2号筛	3分钟崩解能通过2号筛	2分钟崩解，能通过2号筛	2.5分崩解能通过2号筛

根据上述实验结果，处方4最为理想，即MCC/HPC/PVPP为5∶1∶1.25(处方4)时，崩解最快，因此确定处方4为本品的处方。

(2)、矫味剂种类及用量的选择

因分散片可加水分散后口服，也可将分散片含于口中吮服或吞服，因此口感比较重要，口感好，易被病人接受，特别是儿童。根据文献报道，分散片常用的矫味剂有甘露醇、阿斯帕坦、甜蜜素、乳糖，将以上矫味剂按照不同的配比进行实验，选择不同的人群进行品尝；结果见下表：

表8矫味剂种类不同的配比的选择结果

矫味剂	甘露醇	阿斯帕坦	甜蜜素	甘露醇+阿斯帕坦	甘露醇+阿斯帕坦+乳糖
						口感	一般	较好	一般	很好	很好

从上述实验结果，“甘露醇+阿斯帕坦”与“甘露醇+阿斯帕坦+乳糖”口感比较好，为节省原辅料、降低成本，选用甘露醇+阿斯帕坦作为矫味剂。

按下表设计甘露醇与阿斯帕坦的用量，分别加入药材提取物及崩解剂，混匀，给不同人群进行品尝，检查口感，结果见下表：

表9矫味剂甘露醇、阿斯帕坦用量的筛选

矫味剂		用	量(％)
					甘露醇阿斯帕坦	0.50.5	10.5	21.0	2.51.0
口    感	+	+	++	+++

根据上述实验结果可见，矫味剂以甘露醇2.5％、阿斯帕坦1.0％的比例配合，口感好，所以确定矫味剂为甘露醇2.5％，阿斯帕坦1.0％。

(3)、润滑剂种类及用量的选择

根据文献报导，我们取双黄连提取物，粉碎成细粉，加入崩解剂及矫味剂，混匀，过80目筛，经一漏斗流下并呈圆锥体状，测其休止角，结果见下表：

表10测得休止角结果

编号	1	2	3	平均
					休止角	37.7°	38.9°	38.2°	38.27°

从上表结果可以看出本品细粉的休止角平均为38.27°，流动性较差，不能进行大规模生产，必须使用润滑剂加以改善。制剂中常用的润滑剂有滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶等，以相同用量(1.5％)将上述润滑剂加入细粉中，测其休止角，考察对其压片过程的影响，结果见下表：

表11润滑剂种类的选择实验结果

润滑剂种类	滑石粉	微粉硅胶	硬脂酸镁
				休止角	36.3°	35.9°	34.6°

由以上结果可见，硬脂酸镁润滑效果较好，因此选择硬脂酸镁为本品的润滑剂。

按下表设计硬脂酸镁的用量，分别加入处方量比例的药材提取物、崩解剂、矫味剂，混匀，过80目筛，测其休止角，对其用量进行筛选，结果见下表：

表12硬脂酸镁用量的筛选

用量	0.1％	0.2％	0.3％	0.4％	0.5％
						休止角	36.8°	35.1°	34.4°	34.3°	33.4°

根据以上结果可见，硬脂酸镁的用量为0.5％效果较好，休止角明显最低，流动性好，所以确定硬脂酸镁的用量为0.5％。

根据以上实验结果，辅料处方结果：微晶纤维素165g、羟丙基纤维素33g、交联聚乙烯吡咯烷酮42g、甘露醇14g、  阿斯帕坦6g、硬脂酸镁适量。

(4)、压片硬度的实验研究

取1/5处方量的提取物与辅料，混匀，过80目筛，直接压片，在不同压力下，制得分散片，测得硬度分别为2～3kg、3～4kg、4～5kg、5～6kg、6～7kg，观察片的外观形状，检查分散均匀性，结果见下表：

表13不同硬度下外观与分散均匀性实验结果

硬度	2.2kg	3.4kg	4.0kg	5.4kg	6.1kg
						外观分散均匀性	表面粗糙无光泽103S崩解，能通过2号筛	表面光滑有光泽122S崩解，能通过2号筛	表面光滑有光泽168S崩解，能通过2号筛	表面光滑有光泽203S崩解，能通过2号筛	表面光滑有光泽243S崩解，能通过2号筛

根据以上实验结果可见，硬度对崩解时间的影响很大，随着压片硬度的增加，崩解时间减慢。在硬度为2～3kg时虽然崩解很快，但片表面粗糙无光泽，易裂片；在硬度为4～5kg及以上时，崩解时间明显减慢，不符合要求；而硬度为3～4kg时，崩解在1808以内，而且片表面光滑有光泽，符合要求，确定本品压片硬度为3～4kg作为生产条件。

(七)双黄连分散片生产工艺确定如下：

1、处方

连翘2500g         金银花1250g        黄芩1250g

微晶纤维素165g    羟丙基纤维素33g    交联聚乙烯吡咯烷酮42g

甘露醇14g         阿斯帕坦6g         硬脂酸镁适量

制成                                 1000片

2、制备方法

以上三味，黄芩加10倍量的水浸泡60分钟后，煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08(80℃)的清膏，于80℃用2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置24小时，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％7醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用。金银花、连翘加10倍量的水温浸30分钟后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(80℃)的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，残渣加5倍量75％的乙醇，搅匀，静置12小时，滤过，合并二次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用。取处方量的辅料，加入药粉，混合均匀，过80目筛，直接压片即得。

三、双黄连分散片质量控制方法的制定

【鉴别】(1)取粉末0.5g，加75％甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品、绿原酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录V B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取连翘对照药材1g，加甲醇10ml，置水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录V B)试验，吸取对照药材溶液及〔鉴别〕(1)项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[含量测定]

金银花照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-0.1％磷酸(10∶90)为流动相；检测波长为324nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品研细，取约0.1g，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含金银花以绿原酸(C₁6H₁₈O₉)计，不得少于3.75mg。

黄芩照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取适量加50％甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品研细，取约0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于34.0mg。

Claims (7)

1.双黄连分散片的制备方法，其特征在于原料及方法如下：连翘2500g、金银花1250g、黄芩1250g，以上三味，黄芩水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08(80℃)的清膏，调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用；金银花、连翘水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(80℃)的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置，取上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩成相对密度为1.34～1.40(60℃)的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用；取微晶纤维素165g、羟丙基纤维素33g、交联聚乙烯吡咯烷酮42g、甘露醇14g、阿斯帕坦6g及硬脂酸镁适量，加入药粉，混合均匀，过80目筛，压片，即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤：黄芩加10倍量的水浸泡60分钟后，煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃测定相对密度为1.03～1.08的清膏，于80℃用2mol/L盐酸溶液调pH值至1.0～2.0，保温1小时，静置24小时，滤过，沉淀用水洗至pH值为5.0，再用70％乙醇洗至pH值为7.0，低温干燥，备用；金银花、连翘加10倍量的水温浸30分钟后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃测定相对密度为1.20～1.25的清膏，冷至40℃，加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，残渣加5倍量75％的乙醇，搅匀，静置12小时，滤过，合并二次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩成60℃测定相对密度为1.34～1.40的稠膏，减压干燥，加入上述黄芩提取物，粉碎成细粉，备用；取处方量微晶纤维素165g，羟丙基纤维素33g，交联聚乙烯吡咯烷酮42g，甘露醇14g，阿斯帕坦6g及硬脂酸镁适量，加入药粉，混合均匀，过80目筛，直接压片，即得。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于分散片的硬度为3-4公斤。

4.双黄连分散片，其特征在于由权利要求1-3中任一权利要求所述的方法制得。

5.鉴别含有连翘、金银花、黄芩的组合物中某类成分的方法，包括以下至少一项：

鉴别(1)取组合物适量，加75％甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品、绿原酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，观察供试品与对照品色谱中的荧光斑点；

(2)取连翘对照药材1g，加甲醇10ml，置水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及鉴别(1)项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；观察供试品与对照品色谱中的荧光斑点。

6.测定含有连翘、金银花、黄芩的的组合物中绿原酸含量的方法，其特征在于采用高效液相色谱法，测定方法为：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙睛-0.1％磷酸(10∶90)为流动相；检测波长为324nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000；

用绿原酸对照品的50％甲醇溶液为对照品溶液，每1ml含绿原酸0.05mg；

供试品溶液的制备取待测品适量，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.测定含有连翘、金银花、黄芩的的组合物中黄芩甙含量的方法，其特征在于采用高效液相色谱法，测定方法为：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500；

黄芩甙对照品溶液的制备  取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取适量加50％甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取待测品适量，精密称定，置25ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理20分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.5ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。