CN100594923C - 一种口服药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可用于治疗子宫肌瘤等病症的口服药物及其制备方法和用途。该药物含有熟大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、蒲黄等中药原料，采用分步煎煮提取精制并加入药剂学上可以接受的不同的赋形剂制成。本发明药物具有抗雌激素作用，抗炎作用，止血作用，免疫增强作用及改善低下的细胞免疫、体液免疫与非特异性免疫功能，改善血液流变性及贫血等作用，还具有活血逐瘀、消癥破积、养血清热等作用，对瘀血内停所致的小腹胀痛、经色紫黯有块、子宫肌瘤有很好的疗效，并且没有明显的不良反应。

Description

一种口服药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种口服药物组合物及其制备方法和用途，具体来说涉及一种以中药为主要原料并采用现代制剂技术生产制备的可用于治疗子宫肌瘤的口服药物。

背景技术

子宫肌瘤(包括子宫壁间肌瘤及浆膜下肌瘤等)是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，好发于30到50岁的中年及更年期妇女，其临床常见症状是子宫异常出血，常因出血过多导致贫血，是威胁妇女健康的常见多发病。子宫肌瘤属中医“癥积”范畴，病机多由瘀血内停所致，临床常见小腹胀痛、月经量多或经期延长、经色紫黯有块等症。临床上治疗子宫肌瘤的有效药物较为少见，中国专利95111214.7(对比文献1)介绍了一种以大黄、土鳖虫、水蛭、牡蛎、桃仁、蒲黄、白芍、黄芩、枳实、地黄、甘草为原料制成的口服型天然药物组合物，对子宫肌瘤有一定的疗效。但该项专利的不足之处是所用大黄的泻火解毒、清热利湿作用不足，泻下作用太强，降低了制成药物的疗效并增加了不良反应；该项专利的另一不足之处是各原料的重量比例不合理；该项专利的又一不足之处是没有合理的制备方法，无法在生产中具体实施应用。根据中医辩证分型，子宫肌瘤可分为气滞血瘀型、瘀血阻滞型、气虚血瘀型和痰湿血瘀型4种，其中子宫肌瘤瘀血阻滞型、痰湿血瘀型的主要表现为小腹胀满疼痛或不适，或可触及积块，月经延后或淋漓不断，经期延长，舌质异常，子宫增大等，而子宫肌瘤气滞血瘀型、气虚血瘀型的症状多有不同(赵献萍：子宫肌瘤的B超诊断与中医辩证分型关系初探.新疆中医药，2003，21(4)：15-16)。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新的配方，从而能够制备出疗效可靠、不良反应少的口服药物组合物；本发明的另一个目的是提供该药物中各中药原料的最优重量份比例，进一步增强疗效，减少不良反应；本发明的又一个目的是提供科学、合理的制备工艺，从而能保证该药物的疗效，并能在生产中具体实施，制备出多种剂型的药物；本发明的又一个目的是提供该药物在制备治疗子宫肌瘤等多种病症的药物中的用途。

本发明是在长期、反复试验研究的基础上，采用下列技术方案来实现的：

本发明药物含有下述重量份比例的中药原料：熟大黄200～300份，土鳖虫150～250份，水蛭150～250份，桃仁140～220份，蒲黄120～200份，黄芩80～160份，枳实140～220份，牡蛎200～300份，地黄200～300份，白芍140～220份，甘草40～80份。

本发明药物所含有中药原料的最优重量份比例为：熟大黄240～250份，土鳖虫190～200份，水蛭200～210份，桃仁174～180份，蒲黄160～164份，黄芩120～124份，枳实172～180份，牡蛎240～250份，地黄230～240份，白芍180～188份，甘草60～62份。

本发明药物可以加入制备不同剂型时所需的各种药剂学上可接受的赋形剂，如崩解剂、润滑剂、粘合剂、助溶剂、增稠剂、防腐剂等，并以现代中药制剂方法制备成药剂学可接受的多种药用剂型。例如可以将各中药原料直接粉碎后混合制成散剂；也可以将这些原料药用水或用乙醇提取后进行相应的处理并加入制备不同固体制剂所需的不同辅料，即可制成胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、滴丸、颗粒剂等不同形式的口服固体制剂；也可以将这些原料药用水或用乙醇提取后进行相应的处理并加入制备不同液体制剂所需的不同辅料，即可制成合剂、糖浆剂、乳剂等不同形式的口服液体制剂。

本发明的药物在采用水煎煮的方式对中药原料进行提取时，先取熟大黄、土鳖虫、水蛭、蒲黄、枳实、地黄、白芍、甘草八味药加4～12倍量水浸泡0～4小时，煮沸后再加桃仁、黄芩二味药煎煮0.5～2小时，药渣再煎煮1～3次，每次0.5～2小时，加4～10倍量水，煎煮液滤过后浓缩；牡蛎单独如上述条件煎煮，即加4～12倍量水浸泡0～4小时，煮沸后煎煮0.5～2小时，药渣再煎煮1～3次，每次0.5～2小时，加4～10倍量水，煎煮液滤过后浓缩；浓缩液合并。这种煎煮方式可以明显减少各中药原料有效成分的损失，提高成品中有效成分的含量。

提取煎煮的条件优选为：第一次加6～11倍量水，浸泡1～3小时，煎煮0.5～1.5小时，第二次、第三次加5～9倍量水，均煎煮0.5～1.5小时，共煎煮3次。提取煎煮的最佳条件为：第一次加8～10倍量水，浸泡2小时，煎煮1～1.5小时，第二次加6～8倍量水，煎煮1小时，共煎煮2次。

经筛选发现，在制备需用淀粉进行制粒的固体制剂(如片剂、胶囊剂、颗粒剂等)时，所使用的淀粉量应为干浸膏重量的10％以上。所使用的淀粉量为干浸膏重量的优选值为16％～100％，最优值为20％～35％，这样可以使制得的颗粒吸湿量低，流动性好，有利于下一步工序的进行，同时又使得服用量不至于过大。

由于用熟大黄取代了对比文献1的大黄，优化了各中药原料的重量份比例并制定出独特、合理的制备工艺，本发明药物在与对比文献1服用生药量相同的情况下，具有更好的疗效和更少的不良反应，提高了质量，并且出人意料地具有了更多、更有效的药理作用和更广泛的治疗用途，可以制成多种剂型如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、颗粒剂等口服固体制剂和合剂、糖浆剂、乳剂等口服液体制剂，以满足临床上的需要。

研究结果表明，本发明药物具有抗雌激素作用，活血化瘀作用，抗炎作用，止血作用，免疫增强作用以及改善低下的细胞免疫、体液免疫与非特异性免疫功能，改善血液流变性及贫血等作用。临床实践证明，本发明药物具有活血逐瘀、消癥破积、养血清热、养阴清热止血等作用，对瘀血内停所致的小腹胀痛、经色紫黯有块、子宫肌瘤(含子宫壁间肌瘤及浆膜下肌瘤)有很好的疗效，并且没有明显的不良反应。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物及其制备方法，这些实施例包括了本发明药物的毒性试验、药效学试验和临床疗效试验结果。但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实施例，凡是基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明要求保护的范围。

实施例1：本发明药物胶囊剂的制备

取熟大黄250g，土鳖虫200g，水蛭205g，桃仁175g，蒲黄160g，黄芩122g，枳实175g，牡蛎240g，地黄230g，白芍186g，甘草60g，其中熟大黄、土鳖虫、水蛭、蒲黄、枳实、地黄、白芍、甘草等八味药加10倍量水浸泡2小时，煮沸后加桃仁、黄芩二味药煎煮1.5小时，药渣再加8倍量水煎煮1小时，煎液滤过后合并，减压浓缩至相对密度约为1.20(65℃)；牡蛎同法煎煮并浓缩，与前述浓缩液合并，真空干燥，粉碎得浸膏粉。取浸膏粉1份，淀粉0.25份，用适量乙醇制粒，干燥，20目筛整粒，装胶囊，制成1000粒，即得。本品一日3次，每次服用3粒。

实施例2：本发明药物片剂的制备

取熟大黄125g，土鳖虫100g，水蛭105g，桃仁90g，蒲黄82g，黄芩60g，枳实86g，牡蛎120g，地黄115g，白芍94g，甘草31g，其中熟大黄、土鳖虫、水蛭、蒲黄、枳实、地黄、白芍、甘草等八味药加10倍量水浸泡2小时，煮沸后加桃仁、黄芩二味药煎煮1小时，药渣再加8倍量水煎煮1小时，煎液滤过后合并，减压浓缩至相对密度约为1.20(65℃)；牡蛎同法煎煮并浓缩，与前述浓缩液合并，以浸膏量约35％的淀粉作底料，喷加浸膏进行一步制粒，整粒，压制成1000片，包衣，即得。本品一日3次，每次服用6片。

实施例3：本发明药物合剂的制备

取熟大黄70g，土鳖虫65g，水蛭55g，桃仁50g，蒲黄48g，黄芩36g，枳实50g，牡蛎72g，地黄75g，白芍48g，甘草18g，其中熟大黄、土鳖虫、水蛭、蒲黄、枳实、地黄、白芍、甘草等八味药加11倍量水浸泡3小时，煮沸后加桃仁、黄芩二味药煎煮2小时，药渣再加9倍量水煎煮1.5小时，煎液滤过后合并，减压浓缩至相对密度1.15～1.20(60℃)，加乙醇使含醇量达65％～70％，静置24小时后滤过，滤液减压回收乙醇，离心，取上清液，加甜蜜素0.4g，山梨酸2g，聚山梨酯809g，混匀，加水至1000ml，滤过，灌装，灭菌，即得。本品一日3次，每次服用10ml。

实施例4：本发明药物颗粒剂的制备

取熟大黄240g，土鳖虫200g，水蛭200g，桃仁180g，蒲黄160g，黄芩120g，枳实180g，牡蛎240g，地黄240g，白芍180g，甘草60g，其中熟大黄、土鳖虫、水蛭、蒲黄、枳实、地黄、白芍、甘草等八味药加9倍量水浸泡1小时，煮沸后加桃仁、黄芩二味药煎煮1.5小时，药渣再加8倍量水煎煮1小时，药渣再加7倍量水煎煮0.5小时，煎液滤过后合并，减压浓缩至相对密度约为1.10(65℃)；牡蛎同法煎煮并浓缩，与前浓缩液合并，喷雾干燥，加入2g甜代糖和适量淀粉，制粒，干燥，制成1000g，分装为每袋3g，即得。本品一日3次，每次服用1袋。

毒性试验：

取昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18～20g，禁食12小时后以本发明药物混悬液的最大浓度与最大容量分两次灌胃，其一日给药量相当于临床一日用量的600倍，结果大鼠一周内进食、饮水及行为活动正常，被毛光润，眼、耳、口、鼻处无异常分泌物，粪便正常，无一只死亡，体重增长值为4.6±1.3

取大鼠80只，饲养观察一周，按性别、体重分层随机分为3组，对照组与大剂量组各30只，小剂量组20只。大、小剂量组分别灌服相当于临床一日用量的120倍和60倍的本发明药物，对照组灌服等容积生理盐水，每日一次，连续给药180天(每15天根据体重变化调整给药量一次)，停药后继续观察15天。结果本发明药物对动物外观体征，行为活动，体重增长，红细胞(R.B.C)、白细胞(W.B.C)总数及分类、血小板(P.C)计数和血红蛋白(Hb)含量等血液学指标，谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BuN)、肌酐(Cr)等血液生化学指标，心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫、卵巢等主要脏器系数均无明显影响，主要脏器组织学检查未见明显病理损害，停药15天的血液学指标、血液生化学指标、主要脏器系数等亦未发现延迟性毒性反应(以上各给药组的各项指标与对照组比较均为P＞0.05)。

药效学试验：

一、本发明药物的抗雌激素作用

(一)对小鼠子宫重量的影响

取小鼠72只，按体重随机分为6组：(1)正常对照组、(2)己烯雌酚组(模型对照)；(3)～(5)己烯雌酚+本发明药物大、中、小剂量组，(6)己烯雌酚+甲基睾丸素组(阳性对照)。除正常对照组外，各组按表1所列剂量先灌服己烯雌酚，(3)～(6)组灌服己烯雌酚后2h再灌胃相应的药物，灌胃容积均为0.2ml/10g，正常对照组与模型对照组灌服等容积1％CMC溶液，每日给药一次，连续给药5天。末次给药后24h，小鼠逐只称重并脱颈椎处死，取下子宫，剥离附着的组织，用滤纸吸去组织液，置电子天平(感量0.1mg)上称重，计算其子宫系数，用t检验进行组间显著性差异比较(以下同)，结果见表1。

表1对小鼠子宫重量的影响

与己烯雌酚组比较：^*P＜0.05，^***P＜0.001

与正常对照组比较：^△△△P＜0.001

表1结果表明，己烯雌酚可以促进幼年小鼠的子宫生长，子宫系数显著增大，同时给予本发明药物10、5g/kg的小鼠子宫重量减轻，子宫系数明显小于己烯雌酚组，提示本发明药物具有抗雌激素的作用。

(二)血清雌二醇含量测定

取大鼠56只，按体重随机分为7组，照表2所列剂量与途径给药，灌胃容积均为1.5ml/100g，正常对照组与苯甲酸雌二醇组灌服等容积1％CMC溶液，每日一次，连续给药10天，末次给药后24h，眶后血管丛取血，取血清用放射免疫分析法测定各组大鼠血清雌二醇含量，结果见表2。

表2对大鼠血清雌二醇水平的影响

与正常对照组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。

与苯甲酸雌二醇组比较：^**P＜0.01。

由表2可见，本发明药物大、小剂量组血清雌二醇含量与正常对照组比较，虽然有不同程度的降低，但差别均无显著性(P＞0.05)，表明药物对正常大鼠雌二醇水平无显著影响；大鼠肌注苯甲酸雌二醇后，血清雌二醇水平显著升高，同时给予10、2g/kg的本发明药物，可降低血清中雌二醇的含量，以大剂量的作用为显著。提示本发明药物有对抗外源性雌激素升高血清雌二醇的作用。

二、本发明药物的活血化瘀作用

(一)对“离经之血”型血瘀证小鼠的作用

取小鼠48只，按体重随机分为对照组、本发明药物中、小剂量组与复方丹参片组(阳性对照)，照表2所列剂量灌胃给药，给药容积为0.2ml/10g，对照组灌服等容积1％CMC溶液，每日一次，连续给药3天。末次给药后1h，于每只小鼠腹腔内注入10％压积绵羊红细胞(SRBC)悬液0.3ml(约6亿个SRBC)，4h后脱颈椎处死小鼠，腹部剖一小口，用血红蛋白吸管吸取腹腔液20μl于4ml红细胞稀释液内，混匀，置显微镜下计数腹腔液中残留SRBC数，结果见表3。

表3对“离经之血”型血瘀证小鼠腹腔液中残留SRBC数的影响

注：复方丹参片0.08g/kg为临床一日用量的13.9倍。

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

表3结果表明，本发明药物5g/kg可使小鼠腹腔液中残留SRBC数明显减少，以相同临床用量倍数比较，其作用与复方丹参片无显著性差异，提示5g/kg本发明药物有促进腹腔内绵羊红细胞吸收的作用。

(二)对高分子葡聚糖所致家兔“血瘀”模型微循环的影响

选取家兔40只，于每只家兔左耳尖部作一标记，在标记处选择清晰的微血管，测量其血流速度与血流量，同时观察血液流态。按所测血流速度值随机分为5组(正常对照组，模型对照组，本发明药物中、小剂量组与复方丹参片组)，按表4所列剂量灌胃给药，给药容积均为13ml/kg，正常对照组与模型对照组灌服1％CMC溶液，各组每日给药一次，连续给药5天，末次给药后1h，模型组与各给药组家兔右耳静脉注射12％葡聚糖溶液10ml/kg，正常对照组静注等容积生理盐水，20min后同法测量同一部位微血管的血流速度与血流量，观察血液流态，结果见表4。

表4对葡聚糖所致“血瘀”模型家兔耳尖部微血管血流速度及血流量的影响

与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

与正常对照组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001

由表4可见，家兔静脉注射高分子葡聚糖溶液造型后，微血管血流速度明显减慢，血流量显著减少，同时观察到血液流态发生改变，由0级(直线状)变为I级(虚线状)或II级(粒状)，且以II级为主，表明动物已呈微循环障碍的“血瘀”状态。本发明药物6g/Kg组动物表现出微血管血流速度显著增快，血流量明显增加，血液流态亦有不同程度的改善，2/3动物由II级转为I级。提示6g/Kg的本发明药物有改善血瘀家兔微循环的作用。

(三)对葡聚糖所致“血瘀”型家兔血液流变学指标的影响

家兔40只，分组，给药均同实验(二)，末次给药后1h，模型组与各给药组家兔耳静脉注射12％葡聚糖溶液10ml/kg，1h后心脏取血作全血与血浆粘度测定，并测定血浆纤维蛋白原含量，结果见表5。

表5对葡聚糖所致“血瘀”型家兔血液粘度及血浆纤维蛋白原的影响

与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

与正常对照组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001

表5结果表明，家兔注射高分子葡聚糖溶液后，出现血液流变学特性的明显改变，表现为全血粘度与血浆粘度增高，血浆纤维蛋白原含量均显著升高。本发明药物两个剂量组家兔的全血粘度、血浆粘度及纤维蛋白原含量均有不同程度的下降，以6g/Kg对全血粘度(高切与低切)的降低为显著。

三、本发明药物的抗炎作用

(一)对小鼠皮肤毛细血管通透性增高的影响

取小鼠60只，按性别、体重随机分为5组，照表6所列剂量分别灌服本发明药物、醋酸泼尼松，给药容积为0.2ml/10g，对照组灌服等容积1％CMC溶液，每日一次，连续给药3天，末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射1％伊文思蓝溶液0.1ml/10g，立即于腹部皮肤(已脱毛)滴涂二甲苯10μl致炎，20min后处死动物，剪下二甲苯致炎部位蓝染皮肤，剪碎后浸入2.5ml丙酮生理盐水中，室温放置24h，离心后取上清液置721分光光度计610nm比色，记录O.D值，结果见表6。

表6对小鼠皮肤毛细血管通透性增高的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

表6结果表明，本发明药物10g/kg对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高有显著抑制作用，5g/kg仅有抑制趋势。

(二)对大鼠塑料环肉芽肿的影响

大鼠40只，按性别、体重分为5组。在手术条件下，于大鼠两前肢腋部皮下各埋入内径为5mm的塑料环(已知重量)一个，手术次日照表6所列剂量分别灌服本发明药物与醋酸泼尼松，给药容积为1.5ml/100g，每日一次，连续给药10天，末次给药后24h处死大鼠，取出已包裹有肉芽组织的塑料环，用滤纸吸去表面组织液，置电子天平(感量0.1mg)上称重，减去原塑料环重量即为肉芽组织湿重，结果见表7。

表7对大鼠塑料环肉芽肿的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

表7结果表明，本发明药物10、5、2g/kg均能显著抑制大鼠塑料环肉芽肿的形成，使肉芽组织重量明显减轻，10g/kg的抑制作用最强。

四、本发明药物的止血作用

(一)小鼠出血时间测定

小鼠60只，按性别、体重随机分为5组，照表8所列剂量分别灌服本发明药物与安络血，灌胃容积为0.2ml/10g，对照组灌服等容积1％CMC，每日一次，连续给药3天。末次给药后1h，每只小鼠距尾尖3mm处用利剪横断，计时，每间隔0.5min用滤纸轻轻吸去断尾处血滴一次，直至血液自然停止(滤纸吸时无血)为止，计算出血时间，结果见表8。

表8对小鼠出血时间的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表8可见，本发明药物10、5g/kg均可使小鼠断尾出血时间显著缩短，2g/kg则仅有缩短出血时间的趋势。

(二)小鼠凝血时间测定

小鼠60只，按性别、体重随机分为5组，照表9所列剂量灌胃给药，每日一次，连续给药3天。末次给药后1h，用长约8c m，内径约1mm的玻璃毛细管插入小鼠内眦球后静脉丛取血，至毛细管内血液充满，每间隔0.5min轻轻折断一小段毛细管，仔细检查有无血凝丝出现，从毛细管采血至出现血凝丝的时间作为凝血时间，结果见表9。

表9对小鼠凝血时间的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

表9结果表明，本发明药物2g/Kg对小鼠凝血时间略有缩短，与对照组比较无显著性差异；但随着药物剂量增大凝血时间明显缩短，以10g/Kg作用最显著，三个剂量组呈现一定的量效关系。

五、本发明药物的免疫增强作用

(一)对小鼠单核巨噬功能的影响

1、第一次试验

采用碳粒廓清法。取昆明种小鼠84只，按性别、体重随机分为7组，每组雌雄各半，照表10所列剂量与途径给药，灌胃给药容积为0.2ml/10g，腹腔注射给药容积为0.1ml/10g，正常对照组与环磷酰胺组灌服等容积1％CMC，每日一次，连续给予7天。停药后次日，每只小鼠尾静脉注射印度墨汁(chroma，西德产)0.1ml/10g，注射后0.5分与3分钟分别自眶后血管丛取血30μl，加入0.1％无水碳酸钠溶液2ml中，摇匀，置721分光光度计(675nm)测定OD值，按下式计算吞噬指数K。结果见表10。

$K=\frac{\mathrm{Log}{\mathrm{OD}}_1-\mathrm{Log}{\mathrm{OD}}_2}{T_2-T_1}$

2、第二次试验

昆明种小鼠72只，随机分为6组，按表11所示剂量与途径连续给药7天，其余方法同第一次试验，结果见表11。

表10本发明药物对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

与环磷酰胺组比较：^△P＜0.05

表11本发明药物对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

与正常对照组比较：^**P＜0.01

与环磷酰胺组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01

表10与表11结果表明，本发明药物对正常小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能无明显影响。环磷酰胺能抑制小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，使吞噬指数显著减小，同时给与10g/kg、5g/kg本发明药物，其吞噬指数明显增大，提示大、中剂量的本发明药物可以增强小鼠免疫抑制状态下的非特异性吞噬功能。

(二)对小鼠NK细胞活性的影响

1、第一次试验

NIH小鼠60只，按性别、体重随机分为6组，每组雌雄各半，按表12所示剂量与途径给药，每日一次，连续给药7天，末次给药后24h处死小鼠，无菌操作摘取脾脏制作脾细胞悬液，用3h-TUR掺入抑制法测定NK细胞活性。结果见表12。

2、第二次试验

NIH小鼠60只，随机分为5组，按表13所示剂量与途径连续给药7天，其余方法同第一次试验，结果见表13。

表12本发明药物对小鼠NK细胞活性的影响

与对照组比较：^**P＜0.01，^***P＜0.001

与环磷酰胺组比较：△P＜0.05

表13本发明药物对免疫功能低下小鼠NK细胞活性的影响

与正常对照组比较：^***P＜0.001

与环磷酰胺组比较：△P＜0.05，△△△P＜0.001

由表12，表13可见，本发明药物大、小剂量组NK细胞杀伤活性与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)，提示药物对正常小鼠NK细胞活性无明显影响。但大剂量(10g/kg)和小剂量(2g/kg)的本发明药物均能明显对抗环磷酰胺对小鼠NK细胞活性的抑制作用，提高NK细胞的功能。

(三)对二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠迟发型皮肤超敏反应的影响

1、第一次试验

昆明种小鼠84只，按性别、体重随机分为7组，每组雌、雄各半，每只小鼠背颈部皮肤脱毛区滴50％二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液2μl致敏，致敏当日起照表14所示剂量与途径给药，每日一次，连续给药10天，末次给药后24h，以2.5％DNCB丙酮溶液20μl/只进行腹部皮肤(已脱毛)攻击，次日尾静脉注射1％伊文思兰溶液0.1ml/10g，30min后处死小鼠，剥取腹部兰染皮肤，剪碎后置2.5ml丙酮生理盐水溶液中浸泡提取24h，离心，吸取上清液置721分光光度计(610nm)测定OD值，结果见表14。

2、第二次试验

昆明种小鼠72只，随机分为6组，于致敏当日起按表15所示剂量与途径给药10天，其余方法同第一次试验，结果见表15。

表14本发明药物对DNCB所致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

与环磷酰胺组比较：^△P＜0.05。

表15本发明药物对免疫功能低下小鼠迟发型皮肤超敏反应的影响

与正常对照组比较：^**P＜0.01

与环磷酰胺组比较：△P＜0.05

由表14、表15表明，对于DNCB所致正常小鼠的迟发型皮肤超敏反应，10g/kg本发明药物具有显著增强作用；对于在环磷酰胺作用下免疫呈抑制状态的小鼠，10g/kg与5g/kg本发明药物均能增强其迟发型皮肤超敏反应。提示本发明药物大剂量可以提高小鼠正常和低下的细胞免疫功能，中剂量可以提高低下的细胞免疫功能。

(四)对羊红细胞(SRBC)致敏小鼠溶血素抗体生成的影响

1、第一次试验

昆明种小鼠84只，随机分为7组，每组雌、雄各半，照表16的剂量与途径给药(环磷酰胺仅在免疫当日及处死前一天各注射一次)，每日一次，连续给药7天，于给药4天后每只小鼠腹腔注射37％压积绵羊红细胞(SRBC)悬液0.2ml免疫，免疫后第4天眼眶后血管丛取血，分离血清，按1∶500稀释，取此血清1ml，加5％SRBC悬液0.5ml，置冰浴中加入1∶10稀释的豚鼠血清1ml，放入37℃水浴中反应10min，移至冰浴内终止反应，离心，取上清液1ml，加都氏液3ml，摇匀，放置10min后与半数溶血管(5％SRBC悬液0.25ml，加都氏液3.75ml)同时于721分光光度计540nm比色，记录O.D值，按下式计算样品HC₅₀。结果见表16。

2、第二次试验

取昆明种小鼠72只，随机分为6组，按表17的剂量与途径连续给药7天，其余方法同第一次试验，结果见表17。

表16本发明药物对小鼠溶血素抗体生成的影响

与对照组比较：^*P＜0.05，^***P＜0.001

表17本发明药物对免疫功能低下小鼠溶血素抗体生成的影响

与正常对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

与环磷酰胺组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01

由表16，17可见，本发明药物有促进正常小鼠体内溶血素抗体生成的趋势，大、中剂量组的HC₅₀值较对照组均有一定程序提高，但无显著性差异；对于免疫功能被环磷酰胺抑制的小鼠，本发明药物大剂量能促进其溶血素抗体的形成，其HC₅₀值较环磷酰胺组有明显提高。

临床疗效试验结果

一、临床疗效试验方法：

选择经妇科检查和B超等辅助检查确诊的子宫肌瘤患者进行治疗。中医辨证标准为血瘀证：下腹部肿块，固定不移，小腹作胀隐痛，月经量多或经期延长，经色红或紫黯有块，舌质黯红，边有瘀斑点，脉沉弦或细涩。

对照治疗试验阶段采用随机双盲对照试验，治疗组与对照组病例各30例，1∶1随机分组。扩大对照治疗试验阶段采用随机对照原则，3∶1随机分组，按随机表编号分配治疗组和对照组，分别在三家医院进行，每家医院治疗组病例为90例，对照组病例为30例。治疗前两组患者的年龄，病程分布与平均病程，月经周期、经期及月经量，子宫肌瘤大小，子宫厚度及宫腔深度，中医症状，红细胞总数及血色素，血液流变学指标，血激素含量均无显著性差异(P＞0.05)。

治疗组口服本发明药物的胶囊每次3粒，每日三次(与对照药桂枝茯苓胶囊外观、口感相似)。对照组口服桂枝茯苓胶囊，每次3粒，每日三次(与本发明药物外观、口感相似)。两组疗程均为三个月。

中医症状用症状轻重分级表中(+、++、+++)表示后填写。症状轻重积分表见表18。

表18症状轻重积分表

疗效判定标准为：

(一)痊愈：肌瘤消失，临床症状消失。

(二)显效：肌瘤缩小1/2以上，症状轻重积分较治疗前下降≥2/3。

(三)有效：肌瘤缩小1/3，症状轻重积分较治疗前降低≥1/3～2/3。

(四)无效：肌瘤未见明显缩小，症状轻重积分较治疗前降低不足1/3。

二、治疗结果：

见表19～25。

表19两组患者总疗效比较

两组疗效经RIDIT分析，R治＝0.4470，R对＝0.6324，u＝5.95，P＜0.01，差异有极显著性，说明治疗组疗效优于对照组。

表20随机双盲对照试验的疗效比较

两组疗效经RIDIT分析，R治＝0.4189，R对＝0.5811，u＝2.18，P＜0.05，差异有显著性，说明治疗组疗效优于对照组。

表21两组患者治疗后中医症状疗效比较

注：症状显效指治疗后症状减少2级以上或症状消失

表22两组患者治疗后子宫肌瘤大小分层疗效比较

两组子宫肌瘤大小分层(＜5cm³)疗效比较，经RIDIT分析，R治＝0.4450，R对＝0.6525，u＝3.43，P＜0.01；两组子宫肌瘤大小分层(5～10cm³)疗效比较，经RIDIT分析，R治＝0.4474，R对＝0.6316，u＝3.05，P＜0.01；两组子宫肌瘤大小分层(＞10cm³)疗效比较，经RIDIT分析，R治＝0.4480，R对＝0.6223，u＝3.82，P＜0.01；以上统计分析均说明治疗组疗效明显优于对照组。

表23两组患者治疗后子宫肌瘤大小比较

两组患者治疗后子宫肌瘤缩小差值比较，t＝4.75，P＜0.01，说明治疗组缩小子宫肌瘤的疗效明显优于对照组。

表24两组患者治疗后子宫厚径及宫腔深度(X±SD)比较

治疗组治疗前后子宫厚径及宫腔深度自身比较，t值分别为4.27、3.70，P值均＜0.01，说明治疗组有确切的缩小子宫厚径及宫腔深度的作用；治疗后宫腔深度的减少差值与对照组比较，t值为4.94，P＜0.05，说明治疗组缩小宫腔深度的疗效优于对照组。

表25治疗组患者治疗后血液流变学指标疗效

治疗组治疗后血浆粘度、全血还原比粘度、血沉、血沉K方程均有明显下降(P＜0.05)，Ht明显升高(P＜0.05)，说明治疗后患者血液凝、粘、聚状态及贫血状况均明显改善。两组比较，治疗组低切还原粘度及血沉K方程的下降均优于对照组(P＜0.05)。

在临床疗效试验过程中，未发现本发明药物有明显不良反应。治疗组部分患者于治疗前后进行了肝功、肾功、心电图检测，均未发现异常改变。

Claims (10)

1.一种由下述重量份比例的中药原料熟大黄200～300份，土鳖虫150～250份，水蛭150～250份，桃仁140～220份，蒲黄120～200份，黄芩80～160份，枳实140～220份，牡蛎200～300份，地黄200～300份，白芍140～220份，甘草40～80份组成的口服药物在制备治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型的制剂中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括缩小子宫肌瘤。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括缩小子宫厚径或宫腔深度。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括治疗经期延长或月经量多。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括抗雌激素。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括改善微循环或血液流变学指标。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括增强免疫。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括抗炎。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括止血。

10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗子宫肌瘤瘀血阻滞型或痰湿血瘀型包括养阴清热止血。