CN100544716C - 鸢尾苷元制备工艺及其制备抗动脉粥样硬化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种鸢尾苷元新的药用用途，按照常规的制药技术，可以将其制备成任何一种常规药剂，用于制备抗动脉粥样硬化药物。本发明还公开了鸢尾苷元制备新工艺，用乙醇和大孔树脂从葛花中分离出鸢尾苷单体，不用有毒的有机溶剂，不污染环境，达到了环保的要求。乙醇和大孔树脂可以重复使用，降低了药物成本，与硅胶柱相比，上样量多，耗时少，效率高，适用于工业化生产。

Description

鸢尾苷元制备工艺及其制备抗动脉粥样硬化药物中的应用

技术领域

本发明提供一种鸢尾苷元制备工艺，同时还公开了其制备抗动脉粥样硬化药物中的用途，属于中药有效成分提取制药技术领域。

背景技术

异黄酮(isoflavoen)是一类植物雌激素(phytoestrongen)，具有类雌激素样或抗雌激素作用，被称为天然的选择性雌激素受体调节剂，对人体健康起重要的保护作用。异黄酮类药物毒副作用小，安全可靠，具有多种生物活性，应用前景广泛。然而，异黄酮的分离纯化工序烦琐，耗时费力，且常常需要多种有毒的有机溶剂，不仅提高了药品的造价，而且给环境带来或多或少的污染，在一定程度上限制了异黄酮类药物的开发和应用。

异黄酮类化合物广泛分布于植物界，但异黄酮的含量却很低。鸢尾苷元作为异黄酮的一种，从葛花中提取的鸢尾苷的活性成份为其苷元，含有一个甲氧基和三个羟基的异黄酮，具有强抗氧化活性。葛花在我国自然资源十分丰富，从葛花中提取异黄酮有效成分用于新药研制，是有效利用自然资源的一项有力措施。

发明内容

本发明公开一种鸢尾苷元制备新工艺，高效、经济和环保适用于工业化生产。

本发明还公开了其新的药用用途，用于制备抗动脉粥样硬化药物。

本发明的技术解决方案包括以下制备工艺：

①葛花粗粉，加10～15倍重量的60～70％乙醇室温浸泡5～7天，提取1～3次，合并提取液，减压回收乙醇，获得乙醇粗提物。

②将乙醇粗提物加去离子水悬浮，上AB-8大孔树脂柱，乙醇梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到鸢尾苷粗品。

③鸢尾苷粗加乙醇溶解，终浓度为10mg/ml，加入0.2mol/L盐酸水解，加入氢氧化钠调pH值为7.0。用正丁醇萃取后，旋转蒸发回收正丁醇即可得鸢尾苷元单体。

见图1：葛花异黄酮薄层层析，葛花异黄酮主要含三种成份，呈暗紫色荧光，Rf分别为0.44、0.58和0.72。

图2：鸢尾苷粗品酸解不同时间的薄层层析图。

本发明的化合物具有抗动脉粥样硬化的活性，按照常规的制药技术，可以将其制备成任何一种常规药剂，例如：片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、喷雾剂、口服液、混悬液、透皮吸收剂、注射剂等。

做为含有本发明化合物组合药，其组成为含有治疗有效量的本发明化合物，所说的化合物在药物组合物当中可以是单独使用，也可以与其他药物配合使用。

本发明的药物组合物除了含有上述化合物之外，还含有常规的药物赋形剂，例如：粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、调味剂、增溶剂、溶剂、防腐剂等。

以下药理实验证明本发明具有治疗动脉粥样硬化病的药理活性和医疗效果：

一、体外培养的大鼠血管内皮细胞，加入100mg/L ox-LDL导致内皮细胞损伤，鸢尾苷元可逆转这一作用，MTT法检测细胞活性显示，鸢尾苷元9.0×10^-5mol/L作用显著(1.17±0.080vs 0.86±0.07，P＜0.05)。

二、体外培养的大鼠血管平滑肌细胞，加入100mg/L ox-LDL促进细胞增殖，MTT法检测细胞活性显示，鸢尾苷元9.0×10^-5mol/L可明显抑制平滑肌细胞增殖。(0.667±0.044vs 0.308±0.026，P＜0.05)。

三、高胆固醇饲料建立大鼠的动脉粥样硬化模型，于高脂饮食开始两周后给药。腹膜下注射给予鸢尾苷元250mg/kg·d，连续给药12周。鸢尾苷元可明显降低血清中低密度脂蛋白的含量(0.72±0.21mmol/L vs 0.46±0.14mmol/L，P＜0.05)，减轻主动脉弓粥样斑块的形成。

结论：

本发明通过体外细胞培养及高脂血症的动物模型，证明鸢尾苷元具有抗内皮细胞损伤、抗血管平滑肌细胞增殖及降血脂和抗动脉粥样斑块形成的作用，是抗动脉粥样硬化的有效药物。可以用来预防和治疗由动脉粥样硬化所致的心血管疾病如冠心病、脑供血不足、脑血栓及闭塞性周围动脉粥样硬化等，即适合于明确诊断此类疾病的患者，也可用于具有致动脉粥样硬化的高危人群，如高血压病、高血脂、糖尿病等患者。

本发明的积极效果在于：新的制备鸢尾苷元工艺应用乙醇和大孔树脂从葛花中分离出鸢尾苷单体，不用有毒的有机溶剂，不污染环境，达到了环保的要求。而且，乙醇和大孔树脂可以重复使用，降低了药物成本。与硅胶柱相比，上样量多，耗时少，效率高。常规制备工艺涉及的聚酰胺柱层析，层析容量较大，但重复利用效果差，而本发明采用的AB-8树脂具有物理化学稳定性高，吸附选择性独特，不受无机物存在的影响，再生简便、解吸条件温和，使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点。具有适当孔径、较高比表面积、较大比重，对异黄酮的吸附量大，解吸容易。

本发明利用AB-8树脂制备鸢尾苷粗品得率可达2.3％，0.2mol/L盐酸水解底物浓度为10mg/ml鸢尾苷成苷元，盐酸用量少，苷元产量高，得率为1.17％。

附图说明：

图1：葛花异黄酮薄层层析，展开剂为：CHCl₃-MeOH-H₂O(14∶7∶2)。葛花异黄酮主要含三种成份，呈暗紫色荧光，Rf分别为0.44、0.58和0.72。

图2：鸢尾苷粗品酸解不同时间的薄层层析图，展开剂为：

CHCl₃-MeOH-H₂O(14∶7∶2)。

具体实施方式

下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。在不背离本发明的精神和原则的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的待批权利要求范围之内。

实施例1

10kg葛花粉碎后，加100kg的70％乙醇室温浸泡7天，共提取3次，减压回收乙醇，而得到葛花乙醇初提物，水浴干燥备用。

将葛花乙醇粗提物加去离子水悬浮，湿法上样于的AB-8大孔树脂柱，分别用20％、30％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得到混合物即为鸢尾苷粗品

将鸢尾苷粗品加入75％乙醇溶解，浓度为10mg/ml。加入0.2mol/L盐酸，80℃水浴30小时，加入氢氧化钠调pH值7.0。

减压回收乙醇，加去离子水悬浮后，用正丁醇萃取。减压回收正丁醇，得到鸢尾苷元单体0.12kg。

实施例2

10kg葛花粉碎后，加130kg的70％乙醇室温浸泡6天，共提取3次，减压回收乙醇，而得到葛花乙醇初提物，水浴干燥备用。

将葛花乙醇粗提物加去离子水悬浮，湿法上样于的AB-8大孔树脂柱，分别用20％、30％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得到混合物即为鸢尾苷粗品

将鸢尾苷粗品加入75％乙醇溶解，浓度为10mg/ml。加入0.2mol/L盐酸，80℃水浴30小时，加入氢氧化钠调pH值7.0。

减压回收乙醇，加去离子水悬浮后，用正丁醇萃取。减压回收正丁醇，得到鸢尾苷元单体0.12kg。

实施例3

10kg葛花粉碎后，加150kg的70％乙醇室温浸泡5天，提取2次，减压回收乙醇，而得到葛花乙醇初提物，水浴干燥备用。

将葛花乙醇粗提物加去离子水悬浮，湿法上样于的AB-8大孔树脂柱，分别用20％、30％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得到混合物即为鸢尾苷粗品

将鸢尾苷粗品加入75％乙醇溶解，浓度为10mg/ml。加入0.2mol/L盐酸，80℃水浴30小时，加入氢氧化钠调pH值7.0。

减压回收乙醇，加去离子水悬浮后，用正丁醇萃取。减压回收正丁醇，得到鸢尾苷元单体0.12kg。

实施例4

称取鸢尾苷元单体100mg，溶于1000ml 0.9％氯化钠溶液，混合均匀后，分装成0.1mg/ml/支浓度的注射液于药瓶中密封，灭菌制成产品。

实施例3

称取鸢尾苷元单体100mg，溶于1000ml水中制成水溶液，混合均匀后，分装成0.1mg/ml/支浓度的注射液于药瓶中密封，灭菌，冻干制成成品。

实施例4

称取鸢尾苷粗品200mg，药用淀粉0.5kg，按公知的胶囊制备技术和装备制成胶囊，每粒10mg。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。

实施例5

称取鸢尾苷粗品200mg，微晶纤维素560g，无水乳糖380g，硬脂酸镁200g，氧化硅30g，按公知的制片技术和装备制成片剂，每片10mg。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项下要求。

Claims (1)

1、一种鸢尾苷元制备工艺，包括以下制备工艺：

将10kg葛花粉碎后加10～15倍重量的70％乙醇室温浸泡5～7天，提取1～3次，合并提取液，减压回收乙醇，获得乙醇粗提物，水浴干燥备用；

将葛花乙醇粗提物加去离子水悬浮，湿法上样干的AB-8大孔树脂柱，分别用20％、30％乙醇洗脱；收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得鸢尾苷粗品；

将鸢尾苷粗品加入75％乙醇溶解，浓度为10mg/ml；加入0.2mol/L盐酸，80℃水浴30小时，加入氢氧化钠调pH值7.0；

减压回收乙醇，加去离子水悬浮后，用正丁醇萃取；减压回收正丁醇，即得鸢尾苷元单体0.12kg。

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