CN100500145C - 炎琥宁冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种炎琥宁冻干粉针剂，该粉针剂由炎琥宁、离子缓冲对以及抗氧化剂制成，优选的离子缓冲对采用磷酸盐缓冲对，抗氧化剂选择L-半胱氨酸盐酸盐。本发明冻干粉针剂由于加入了离子缓冲对以及抗氧化剂，使得其pH环境稳定，氧化速度慢，有效地提高了其保存期。
Description
技术领域
本发明涉及一种药剂及其制备方法，具体地说是炎琥宁冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
炎琥宁，化学名称为：14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯-3，19-二琥珀酸半酯钾钠盐，分子式：C28H34KNaO10·H2O；分子量：610.68。其能抑制早期毛细血管通透性增高与炎性渗出和水肿，能特异性地兴奋垂体-肾上腺皮质功能，促进ACTH释放，增加垂体前叶中ACTH的生物合成；体外具有灭活腺病毒、流感病毒、呼吸道病毒等多种病毒的作用。动物实验有抗早、中孕作用。有清热解毒及抗病毒作用，主要用于病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染。
现有的注射用炎琥宁为炎琥宁的无菌冻干品，可加适量的无菌注射用氯化钠作稀释剂。将其按贮藏条件(密闭，在阴凉干燥处)保存，因其pH环境不稳定，所以含量下降较快，有的一年后含量即降至下限，无法达到2年效期。
发明内容
本发明的目的在于针对上述不足提供一种化学稳定、有效期长的炎琥宁冻干粉针剂；本发明的另一个目的在于提供所述粉针剂的制备方法。
注射用炎琥宁失效的主要原因为水解及氧化作用，故需提高注射用炎琥宁的稳定性关键为控制溶液的pH值及添加适当的抗氧化剂。
因此，本发明使用炎琥宁、离子缓冲对及抗氧化剂作为主要原料制备成冻干粉针剂。所述的离子缓冲对为磷酸盐缓冲对、碳酸盐缓冲对或氨基酸盐缓冲对，优选为磷酸盐缓冲对。所述的抗氧化剂为L-半胱氨酸盐酸盐、L-半胱氨酸或亚硫酸氢钠，优选为L-半胱氨酸盐酸盐。
进一步，本发明确立了一个优选配方，其包括下列重量比的主要原料：炎琥宁720～880、磷酸氢二钠80.64～98.56、磷酸二氢钠58.05～70.95、L-半胱氨酸盐酸盐4.41～8.36。更优选地，炎琥宁800、磷酸氢二钠89.6、磷酸二氢钠64.5、L-半胱氨酸盐酸盐4.9～7.6。
本发明还提供了制备上述粉针剂的方法，其特征在于该方法包括步骤：取炎琥宁用注射用水溶解调节pH至6.0～7.0，加入离子缓冲对水溶液以及抗氧化剂水溶液，搅匀后用活性炭吸附处理，调节pH至6.3～7.1，补加注射用水至全量，搅拌均匀后冻干即得。
更具体地说，该方法包括步骤：量取配制量70％的45℃～60℃的注射用水，边搅拌边加入处方量的炎琥宁，保持温度45℃～60℃，待全部溶解后，立即冷却至室温，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.0～7.0，加入离子缓冲对水溶液，搅匀后加入重量百分比0.2～1.0％的活性炭，搅拌吸附20分钟，除炭，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.3～7.1，补加注射用水至全量，搅拌均匀后冻干即得。
优选地，该方法包括步骤：量取配制量70％的50℃～55℃的注射用水，边搅拌边加入处方量的炎琥宁，保持温度50℃～55℃，待全部溶解后，立即冷却至室温，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.6～6.8，加入离子缓冲对水溶液以及抗氧化剂水溶液，搅匀后加入重量百分比0.4～0.7％的活性炭，搅拌吸附20分钟，除炭，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至优选6.7～6.9，补加注射用水至全量，搅拌均匀。冷却至30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装。
本发明制备方法在配制过程全程充氮保护，以最大限度防止炎琥宁的氧化。
本发明所述的全量是指按照处方总量与注射用水的重量体积比1:14～21添加注射用水。
本发明冻干粉针剂由于加入了离子缓冲对以及抗氧化剂，使得其pH环境稳定，氧化速度慢，有效地提高了其保存期。
附图说明
图1是血管刺激给药组实验结果；
图2是血管刺激对照组实验结果；
图3是肌肉刺激给药组实验结果；
图4是肌肉刺激对照组实验结果。
具体实施方式
下面实施例用于进一步说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 炎琥宁冻干粉针剂的制备
取炎琥宁800g，用14000ml 55℃的注射用水保持在50℃～55℃溶解，调pH值至6.7；分别取磷酸氢二钠89.6g和磷酸二氢钠64.5g，用1000ml的注射用水溶解；取L-半胱氨酸盐酸盐6g，用1000ml注射用水溶解，将上述三种溶液混合均匀，活性炭吸附，除炭，调节pH值至6.8，补加注射用水至20000ml，搅拌均匀，30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装，即得成品。
实施例2 炎琥宁冻干粉针剂的制备
取炎琥宁720g，用12000ml 50℃的注射用水溶解，调pH值至6.0；分别取磷酸氢二钠80.64g和磷酸二氢钠50.05g，用注射用水溶解；取L-半胱氨酸盐酸盐4.9g，用注射用水溶解，将上述三种溶液混合均匀，按重量比0.4％加入活性炭吸附，除炭，调节pH值至6.3，补加注射用水至13000ml，搅拌均匀，30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装，即得成品。
实施例3 炎琥宁冻干粉针剂的制备
取炎琥宁880g，用13000ml 60℃的注射用水溶解，调pH值至7.0；分别取磷酸氢二钠98.56g和磷酸二氢钠70.95g，用注射用水1000ml溶解；取L-半胱氨酸盐酸盐7.6g，用注射用水1000ml溶解，将上述三种溶液混合均匀，按重量比0.7％加入活性炭吸附20分钟，除炭，调节pH值至6.9，补加注射用水至25000ml，搅拌均匀，30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装，即得成品。
实施例4 炎琥宁冻干粉针剂的制备
取炎琥宁850g，用12000ml 53℃的注射用水溶解，调pH值至6.6；分别取磷酸氢二钠80g和磷酸二氢钠60g，用注射用水溶解；取L-半胱氨酸盐酸盐4.41g，用注射用水溶解，将上述三种溶液混合均匀，按重量比0.2％加入活性炭吸附20分钟，除炭，调节pH值至7.1，补加注射用水至22000ml，搅拌均匀，30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装，即得成品。
实施例5 炎琥宁冻干粉针剂的制备
取炎琥宁750g，用10000ml 45℃的注射用水溶解，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.8；分别取磷酸氢二钠90g和磷酸二氢钠65g，用注射用水溶解；取L-半胱氨酸盐酸盐8.36g，用注射用水溶解，将上述三种溶液混合均匀，按重量比1.0％加入活性炭吸附，除炭，用10％碳酸氢钠溶液调节pH值至6.7，补加注射用水至20000ml，搅拌均匀，30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装，即得成品。
实施例6 注射剂安全性试验研究
(1)过敏性试验
取豚鼠18只，雌雄各半，体重250～300g，随机分为阴性对照组(5％葡萄糖注射液)、阳性对照组(5％卵白蛋白生理盐水溶液)和注射用炎琥宁受试物组(用5％葡萄糖注射液配成1.6mg/ml)，每组6只。各组动物间日腹腔注射相应药液0.5ml/只，共三次。分别在首次给药后14天，21天，每组随机取三只，静脉注射相应药液1ml/只，给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干咳或咳嗽、颤抖、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡的过敏反应，观察时间为15分钟。过敏反应分级见表1。
表1 过敏反应分级及结果判定方法
结果为阴性对照组的豚鼠过敏反应级数均为0，无过敏反应；阳性对照组豚鼠出现喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、抽搐、颤抖、呼吸困难、大小便失禁、休克等过敏反应，且皆于15min内死亡，过敏反应级数为四级，试验条件成立。注射用炎琥宁组6只豚鼠均无过敏反应，过敏反应级数均为0。注射用炎琥宁对豚鼠无致敏作用。结果见表2。
表2 注射用炎琥宁过敏试验结果
(-)无过敏反应 (+)有过敏反应
(2)溶血性试验
取家兔心脏穿刺采血10ml，以玻璃球搅拌去纤维蛋白后，用生理盐水洗涤后离心(3000rpm)，去掉上清液，再以生理盐水反复洗涤数次(均离心弃上清)直至上清液无红色，然后按体积比用生理盐水配成2％红细胞混悬液备用。
取试管7支，按表3所示各管分别加入不同体积的试药液和相同体积的红细胞混悬液，其中第6管不加药，为0.9％氯化钠溶液空白对照，第7管加蒸馏水做完全溶血对照(阳性对照管)。各管轻轻摇匀后，置37℃水浴中温孵4小时，观察0.25小时至4.0小时内各管是否有溶血及红细胞聚集现象，按表4标准判断。结果见表5。
表3 体外溶血试验加样表
表4 溶血结果判断
| 程度 | 标识 | 现象 |
| 无溶血 | - | 红细胞全部下沉，上层液无色透明 |
| 部分溶血 | ± | 溶液澄明红色或棕红色，管底有少量红细胞 |
| 全溶血 | + | 溶液澄明红色，管底无细胞残留 |
| 凝集 | 红细胞聚集成块，摇匀后不分散 |
表5 注射用炎琥宁体外溶血及细胞凝集试验结果
实验结果表明，注射用炎琥宁(用5％葡萄糖注射液配成1.6mg/ml)组和0.9％氯化钠溶液组各管在0.25～4.0小时内均无溶血现象，也无凝集反应，蒸馏水组在各时间点完全溶血，产生红色透明溶液。
(3)血管刺激试验
取2.5～3.0kg家兔3只，雌雄兼用，采用同体左右耳对照，左耳由耳缘静脉缓慢注射注射用炎琥宁(用5％葡萄糖注射液配成1.6mg/ml，给药容量为5.0ml/只)，右耳给予等容量的葡萄糖注射液做对照，每日1次，连续3日。每日肉眼观察两组家兔耳注射部位及周围血管是否有水肿、充血等刺激现象，并按表6的标准进行肉眼观察评分。末次注射后，处死动物，分别剪取注射部位耳缘静脉及周围组织约2cm，用10％的甲醛固定后，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察其炎性细胞浸润、血管周围组织出血、血栓形成及坏死等情况。
表6 血管刺激性肉眼观察评分标准
结果注射用炎琥宁连续给药3天，肉眼观察家兔耳静脉血管及周围组织，未见明显红肿、充血的异常现象。按评分标准判断无刺激性，结果见表7。显微镜下观察可见：左耳注射用炎琥宁注射部位处血管内皮连续、完整、未见增生、肿胀，血管周围组织未见明显炎性细胞浸润及坏死，管腔内无血栓形成(如图1所示)；右耳(5％葡萄糖注射液)注射部位血管内皮细胞、血管腔及周围组织均未见明显异常(如图2所示)。按评分标准判断注射用炎琥宁无明显血管刺激性。
表7 注射用炎琥宁血管刺激性肉眼观察评分
| 组别 | 给药剂量 | 动物数 | 评分 |
| 5％葡萄糖注射液 | 5.0ml/只 | 3 | 0 |
| 注射用炎琥宁 | 5.0ml/只 | 3 | 0 |
(4)肌肉刺激性试验
取健康家兔3只，体重在2.5-3.0kg之间，雄性，各家兔左侧股四头肌内以无菌注射器注入注射用炎琥宁(用5％葡萄糖注射液配成1.6mg/ml)1ml，右侧注入葡萄糖注射液1ml作为对照，然后观察注药后48h注射局部肌肉有无出现充血、红肿、变性、坏死等现象，并按肌肉刺激反应分级标准(见表8)打分和评判结果。肉眼观察后，处死动物，取注射部位肌肉2cm3，甲醛固定，进行病理组织学检查。
表8 肌肉刺激反应分级标准
| 刺激反应 | 反应级 |
| 无明显变化 | 0 |
| 轻度充血范围在0.5X1cm以下 | 1 |
| 中度充血范围在0.5X1cm以上 | 2 |
| 重度充血伴有肌肉变性 | 3 |
| 出现坏死，有褐色变性 | 4 |
| 广泛性坏死 | 5 |
结果，通过肉眼和组织学检查，注射用炎琥宁对家兔股四头肌注射给药后，未产生充血、红肿、变性、坏死等现象，结果见表9。显微镜下观察可见：注射用炎琥宁组和葡萄糖注射液组注射部位肌肉组织均未见肿胀、增生，细胞形态完好，未见炎性细胞浸润及坏死，(如图3、4所示)。表明注射用炎琥宁无肌肉刺激性。
表9 注射用炎琥宁肌肉刺激肉眼评分
| 部位 | 观察时间 | 无明显反应 | 轻度反应 | 中度反应 | 重度反应 | 变性坏死 | 严重坏死 | 平均分 |
| 左腿 | 24h | 3/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 |
| 右腿 | 24h | 3/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 | 0/3 |
实施例7 加速试验结果
取3批样品，按市售包装，在温度40℃±2℃，相对湿度75％±5％条件下放置6个月，进行加速试验，结果见表10。
表10 加速试验
通过六个月的恒温加速观察，3批注射用炎琥宁pH值和含量均合格，其他各项检查均符合规定。样品在超过加速观察期限6个月后于第8个月再次送检，结果pH值和含量仍较稳定，表明炎琥宁粉针剂在阴凉干燥处保存，在2年效期内可保持质量稳定。
Claims (8)
1、炎琥宁冻干粉针剂，其通过下述方法制备获得：取炎琥宁用注射用水溶解，调节pH至6.0～7.0，加入离子缓冲对水溶液以及抗氧化剂水溶液，用活性炭吸附处理，调节pH至6.3～7.1，补加注射用水至全量，搅拌均匀后冻干即得；其中所述离子缓冲对为磷酸盐缓冲对、碳酸盐缓冲对或氨基酸盐缓冲对，所述抗氧化剂为L-半胱氨酸盐酸盐、L-半胱氨酸或亚硫酸氢钠。
2、如权利要求1所述的粉针剂，其特征在于，所述的离子缓冲对为磷酸盐缓冲对，所述的抗氧化剂为L-半胱氨酸盐酸盐。
3、如权利要求1所述的粉针剂，其特征在于，该粉针剂由下列重量份的主要原料制成：炎琥宁720～880、磷酸氢二钠80.64～98.56、磷酸二氢钠58.05～70.95、L-半胱氨酸盐酸盐4.41～8.36。
4、如权利要求3所述的粉针剂，其特征在于，该粉针剂由下列重量份的主要原料制成：炎琥宁800、磷酸氢二钠89.6、磷酸二氢钠64.5、L-半胱氨酸盐酸盐4.9～7.6。
5、一种制备权利要求1～4任一项所述粉针剂的方法，其包括步骤：取炎琥宁用注射用水溶解，调节pH至6.0～7.0，加入离子缓冲对水溶液以及抗氧化剂水溶液，用活性炭吸附处理，调节pH至6.3～7.1，补加注射用水至全量，搅拌均匀后冻干即得。
6、如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，该方法包括步骤：量取配制量70％的45℃～60℃的注射用水，边搅拌边加入处方量的炎琥宁，保持温度45℃～60℃，待全部溶解后，立即冷却至室温，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.0～7.0，加入离子缓冲对水溶液，搅匀后加入重量百分比0.2～1.0％的活性炭，搅拌吸附20分钟，除炭，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.3～7.1，补加注射用水至全量，搅拌均匀后冻干即得。
7、如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，该方法包括步骤：量取配制量70％的50℃～55℃的注射用水，边搅拌边加入处方量的炎琥宁，保持温度50℃～55℃，待全部溶解后，立即冷却至室温，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.6～6.8，加入离子缓冲对水溶液以及抗氧化剂水溶液，搅匀后加入重量百分比0.4～0.7％的活性炭，搅拌吸附20分钟，除炭，用10％碳酸氢钠溶液调pH值至6.7～6.9，补加注射用水至全量，搅拌均匀，冷却至30℃以下精滤，灌装，半压塞，冻干，压塞，轧盖，目检，包装。
8、如权利要求5～7任一项所述的制备方法，其特征在于，配制过程全程充氮保护。
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