CN100496232C

CN100496232C - 新吉富罗非鱼选育技术

Info

Publication number: CN100496232C
Application number: CNB2005100294129A
Authority: CN
Inventors: 李思发; 何学军; 蔡完其
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-09-05
Filing date: 2005-09-05
Publication date: 2009-06-10
Anticipated expiration: 2025-09-05
Also published as: CN1926971A

Abstract

本发明公开了一种鱼类选育方法，它包括步骤：(a)选用吉富品系尼罗罗非鱼为选育基础群体；(b)产前雌鱼和雄鱼分离培育，将性成熟的雌性和雄性的罗非鱼配组、产卵，提高同步性；从鱼苗到亲鱼，对雌性和雄性分别从鱼群中选取生长速度快、个体大、体型好的个体。每代的总选择率为6%；(c)对步骤(b)中选出的鱼进行培育，跟踪观测生长、体色和性成熟情况；(d)重复步骤(b)和(c)4-15次(较佳地8次以上)。本发明选育获得的新吉富罗非鱼的生长速度比基础群体提高30%以上，种质纯度达90%以上。本发明的进行，将从种质上解决目前生产的罗非鱼规格偏小、品质低等难题。

Description

新吉富罗非鱼选育技术

技术领域

本发明涉及鱼类良种的选育技术，更具体地，本发明涉及新吉富罗非鱼的选育技术。

背景技术

中国大陆从1978年引进尼罗罗非鱼起，罗非鱼养殖业有了迅速发展。1984～1998年间，其产量以平均87％的速度迅猛增长，远高于同期亚洲其它地区的增长率，成为中国主要的淡水养殖对象之一。尤其是2000年以来，罗非鱼养殖和加工产品成为我国重要外贸产品。2004年中国罗非鱼养殖产量达90.63万吨，占世界罗非鱼养殖产量的68％。

中国大陆现有的水产品人均占有量刚达到世界平均水平，但实际消费水平较低。随着人们收入水平的提高，水产品的消费水平必将逐步提高，消费品种将以价格适中的种类为主。罗非鱼的品位与水产品消费市场的发展趋势相吻合。所以，中国大陆罗非鱼养殖业的前景看好。在国际上，罗非鱼正越来越被美国、日本及西欧发达国家的中产阶层所喜爱。单美国每年进口罗非鱼近10万吨，占其罗非鱼消费量的90％。罗非鱼在其它地区，如中东及大洋洲等地区也有较大需求量。

1994年，上海水产大学从菲律宾国际水生生物资源管理中心(ICLARM)引进了吉富品系尼罗罗非鱼。它是由四个非洲原种群体和四个亚洲养殖品系经过混合选择产生的优良品系。经过在黄河、长江和珠江三个农业生态区二年半的评估试验，发现吉富品系的个体生长速度比国内主养品系(“78”、“88”、“美国”和“埃及”品系)快5％～30％，单位面积产量高20％～30％，池养三网起捕率高1～2倍。1997年经全国水产原、良种审定委员会确认为良种，登记号为GS03001-1997。《吉富品系尼罗罗非鱼的引进及其养殖性能评估》1998年获农业部科技进步成果三等奖。同一时期，吉富品系尼罗罗非鱼在孟加拉、泰国、菲列宾、越南等国也得到了正面的评估结果。

鉴于该引进种是尼罗罗非鱼种内8个群体间杂交、选育产生的第三代，遗传性尚不够稳定，并有进一步改良的潜力，为了进一步提高该品系尼罗罗非鱼养殖性能，提高其遗传稳定性，培育出适合中国罗非鱼产业发展需要的罗非鱼新品种，需要以吉富尼罗罗非鱼为基础群体，进行进一步的选育工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的罗非鱼选育技术，它是群体选育与生物技术的集成技术。

在本发明的一个方面，提供了一种鱼类选育方法，它包括步骤：

(a)选用尼罗罗非鱼为选育基础群体；

(b)产前雌鱼和雄鱼分离培育，将精选的性成熟的雌鱼和雄鱼配组、产卵，在从鱼苗生长到亲鱼期间，对雌性和雄性分别从鱼群中选取生长速度快、个体大、体型好的个体，总选择率为6％；

(c)对步骤(b)中选出的鱼进行养殖，跟踪观测生长、体色和性成熟情况，获得成熟的雌性鱼和雄性鱼；

(d)重复步骤(b)和(c)4-15次。

在另一优选例中，在进行生长速度选择时，雌鱼与雄鱼的选择分开进行，选择生长速度快、个体大的鱼，步骤(b)中选取生长速度比群体平均快10％以上的鱼。

在另一优选例中，在步骤(b)中，还包括如下进行形态特征选择：选择尾鳍条纹平行清晰的鱼，淘汰尾鳍条纹有断裂、交叉或切割的鱼。

在另一优选例中，在步骤(b)中，在50±10天进行第一次亚选择，保留生长速度最快的50-70％的鱼；在100±10天进行第二次亚选择，保留生长速度最快的40-60％的鱼，在200±20天进行第三次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的40-60％的鱼，在300±30天进行第四次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的30-50％的鱼。

在另一优选例中，对每一世代鱼的总选择率为6％。

在另一优选例中，在步骤(b)中，在200±20天进行第三次亚选择，保留生长速度最快并具有尾鳍特征典型的40-60％的鱼，在300±30天进行第四次亚选择，保留生长速度最快并具有尾鳍特征典型的30-50％的鱼。

在另一优选例中，步骤(d)中重复步骤(b)和(c)8次以上。

在另一优选例中，选育获得的新吉富罗非鱼群体的遗传多态性为10.5％，平均杂合度为小于0.05，平均遗传相似度大于90％。

在另一优选例中，在步骤(d)中，重复步骤(b)和(c)5-10次。

在另一优选例中，所述的尼罗罗非鱼是吉富品系尼罗罗非鱼。

在另一优选例中，在步骤(b)中分阶段进行2-6次选择，例如在50±10天进行第一次亚选择；在100±10天进行第二次亚选择；在200±20天进行第三次亚选择；在300±30天进行第四次亚选择，从而选出生长速度最快(较佳地，同时具有尾鳍特征典型)的30-50％的鱼。

附图说明

图1显示了实施例2中新吉富罗非鱼选育路线示意图。

图2显示了尼罗罗非鱼选育系F3与对照系F0出池体重的比较。

图3显示了尼罗罗非鱼选育系F5、F6、F7出池体重的离差图(2003年)。(其中，横坐标0线表示所有试验群体体重的总平均线，纵坐标residuals表示各试验群体相对于总平均的离差)

图4显示了尼罗罗非鱼选育系F6、F7、F8体重的离差图(2004年)。

图5显示了尼罗罗非鱼选育系典型尾鳍照片，可见尾鳍条纹平行清晰，无交叉切割。

图6显示了新吉富罗非鱼染色体组型图。

图7显示了新吉富罗非鱼肌肉中乳酸LDH电泳图谱。

图8显示了引物对新吉富罗非鱼扩增电泳图谱，其中1-10为奠基群体个体，11-20为新吉富罗非鱼个体，M为电泳标记。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，未详细说明的技术为常规技术。

本发明的选育鱼类良种的方法包括：群体持续选育技术；遗传变异监测和分子遗传标志生物技术：

(a)选择奠基群体。选择一种较好的群体(例如生长较快，体型较好)做为选育的奠基群体；建立选育系和对照系；

(b)群体选育与生物技术高度集成。首先依照数量遗传学原理，对选育系按照严格的程序进行操作；

(c)群体选育技术。建立多个平行的选育系。从鱼苗培养到亲鱼，约需1年，其间共进行四次选择，总选择率为6％(60％×50％×50％×40％＝6％)。选择目标有三：一是生长速度，即选择鱼群中生长最快者；二是形态特征，凡形态特征不明显的均予以淘汰；三是遗传纯度。按上述步骤反复进行。逐代选育并使用随机区组设计法对选系和对照系作跟踪测试与评估。直至选育系生长速度较对照系有明显提高(30％)、体型较为优良，而且遗传稳定时。

(d)生物技术。使用细胞遗传和分子遗传技术测定选育良种的遗传变异。建立良种的分子遗传标记。

本发明的选育技术关键如下：

①生长速度的选择按性别分别进行——尼罗罗非鱼雄性的生长速度比雌性快30％以上，如忽视此点，雌雄混杂不分，在选留大个体时，雄性鱼选留机会较多，雌性鱼选留机会较少，容易将许多好的雌鱼误遭淘汰；

②进行形态学特征选择，在符合尼罗罗非鱼标准的诸多形态特征中，特别着重尾部条纹数量、平行程度及清晰度。这一特征在群体的繁衍过程中不稳定，在尾鳍条纹典型鱼的后代中，这一特征有严重分离现象。但本发明人发现，坚持严格选择，务求条纹平行清晰，有断裂、交叉或切割的则淘汰，是能逐代地提高尾鳍条纹典型鱼的比例。

③确定合理的选择强度：鉴于尼罗罗非鱼的个体怀卵量仅1000-2000粒左右，远低于鲤科鱼类的数万粒至数十万粒，故采取低强度选择。从鱼苗期到亲鱼期，每隔一段时间选择一次，对选育系的每一世代优选进行4次选择，总选择率为6％。

④克服罗非鱼产卵不同步的难题，产卵不同步使出苗时间不一，致使个体间初始体重相差较大，影响选择和评估的准确性。本发明人采取了二项措施：一是产前将雌鱼和雄鱼严格分开饲养，临产前才

入产卵池；二是严密观察产卵情况，及时捞苗，以2-3天内孵出的鱼苗为一组，放入一只池中选育，不同批组的鱼苗分池饲养。

本发明人将群体选育和先进的生物技术相结合，每年产生一代。从1996年第一代选育开始，到2004年，生长速度比基础群体提高30％，种质纯度达90％以上。

本发明的选育工作分别在国家级青岛罗非鱼良种场(黄河流域)、国家级广东罗非鱼良种场(珠江流域)和安徽省蚌埠水产研究所(江淮流域)同时进行。选择三个不同的农业生态区进行同步选育试验，一是为了保证种质的安全，即在长期的试验过程中，当选育系发生退化、混杂或其它意外的情况时，可从别的试验点引种恢复；二是作为试验的重复，提高结果的可信度；三是为了测试选育过程中遗传因子—环境因子交互作用的大小。

2005年在上海水产大学鱼类育种实验站建成罗非鱼越冬棚70m²。由于在上海越冬问题的解决，从此罗非鱼也能在上海进行保种和周年性试验。

在本发明中，标记“♀”表示雌性的鱼，标记“”表示雄性的鱼。

实施例1 选育系和对照系的建立

1.选育基础群体的确定

由于吉富品系尼罗罗非鱼在国内外获得了一致的良好评价，并开始在世界各地推广，故确定选用1994年引进的吉富品系尼罗罗非鱼为本发明的选育基础群体。

2.选育系的建立

1996年底，在三个试验基地，分别挑选体形标准、健康的吉富品系尼罗罗非鱼建立选育系。在国家级青岛罗非鱼良种场选用了455尾雌鱼，233尾雄鱼；在国家级广东罗非鱼良种场选用了70尾雌鱼、31尾雄鱼；在安徽省蚌埠水产研究所选用了300尾雌鱼、100尾雄鱼。合计雌鱼825尾、雄鱼364尾。

3.对照系的建立

在三个试验基地，从同一批保种的吉富品系尼罗罗非鱼群体中，随机选取相同数量的罗非鱼，建立对照系。

实施例2 逐代选育

吉富品系尼罗罗非鱼在长到50日龄时，为2-3cm的小鱼苗(夏花)；在100日龄时，为10-15cm的小鱼；在200日龄时，成鱼在24cm以上，体重480g以上；在300日龄时，成鱼体长在28cm以上，750g以上。

采用群体选育方法，从鱼苗培养到亲鱼，约需1年，其间共进行四次选择，总选择率为6％(60％×50％×50％×40％＝6％)(见表1，图1)。选择标准有三：一是生长速度，即选择鱼群中生长最快者；二是形态特征，凡形态特征不明显的均予以淘汰；三是遗传纯度。

表1 选育步骤

*1 生长—按预定选择率选留大个体

*2 形态—尾鳍上垂直条纹典型、清晰

*3 由于雌鱼的生长慢于雄鱼，从选择的第二阶段起，雌、雄鱼分开饲养，分别挑选较大个体，以避免从雌、雄鱼混养的鱼群中挑选时，较好的雌鱼因小于雄鱼而被淘汰。

实施例3 选育过程中各年生长性能评价

1、2000年F3、F0生长性能评价

在三个试验基地同时进行选育系F3和对照系F0的生长性能对比试验。采用完全随机区组设计。F3与F0剪鳍标志，同池混养。放养时F3与F0的体重差异不显著。青岛试验始于2000年6月7日，三个重复，流水水泥池，使用的是当年早繁的夏花，始重为0.021～0.027g；广东试验始于2000年6月3日，三个重复，静水水泥池，使用的也是当年早繁的夏花，始重为1.22～1.40g；蚌埠试验始于2000年6月8日，四个重复，静水水泥池，使用的是隔年鱼种，始重为16.9～20.8g。除观察生长速度外，同时观察形态学特征的差异。结果如下。

(1)生长速度

在三个试验基地，到试验结束时，F3的体重都显著地高于F0(p>0.05)(见表2，图2)，从日增重率看，青岛与广东的一致，分别为14.1％和14.0％，平均每代选育效应为4.7％；但蚌埠基地F3的日增重率比F0的高出80.8％，平均每代选择效应高达26.9％，高出青岛基地与广东基地约5倍。

表2 尼罗罗非鱼选育系F3与F0生长比较

(2)变异系数

同对照系相比，F3体重的变异系数较之对照系(F0)有明显降低。在青岛、广东及蚌埠试验基地，F3的体重变异系数分别为对照系的87.7％，93.9％及50.4％(见表3)。

表3 尼罗罗非鱼选育系F3与F0的体重变异系数比较

在蚌埠试验基地，F3的日增重率和选育效应比其它2个试验基地的高出甚多，其原因可能与蚌埠基地的试验环境变更较大有关。

2、2002年F6、F5、F0生长性能比较

2002年，选育工作进入到F6代。在青岛，F6的平均日增重率比F5提高2.5％，比F0提高29.5％，体重变异系数比F5降低14.2％，比F0降低16.4％(表4)。在蚌埠，F6的平均日增重率比F5提高8.5％，2.5％，体重变异系数比F5降低11.0％(见表5)。

表4 尼罗罗非鱼选育系F6、F5与对照组(F0)生长比较(青岛)

*实际试验天数为145天。

表5 尼罗罗非鱼选育系F6、F5生长比较(蚌埠)

**实际试验天数为142天。

3、2003年F7、F6、F5生长性能比较

在青岛，F7的平均日增重率比F6、F5分别提高12.5％和28.6％，体重变异系数比F6、F5减少9.9％和21.0％(见表6)。

表6 尼罗罗非鱼选育系F5、F6、F7生长速度和变异系数比较

试验结束时F5、F6、F7三个试验池平均体重的离差图见图3，它清楚地表明F7的生长速度显著地优于F5、F6。

4、2004年F6、F7、F8生长速度的比较试验

在青岛，F8平均日增重率比F7、F6分别提高14.3％和61.3％，体重变异系数比F6、F5分别降低21.3％和27.1％(表7)。

表7 尼罗罗非鱼选育系F6、F7、F8生长速度和变异系数比较(2004年)

试验结束时F6、F7、F8三个试验池平均体重的离差图见图4，可见F8的生长速度显著地快于F6、F7。

前述表6和表7，图3和图4都一致地、清楚地表明了：平均日增重率从F5到F6到F7到F8的不断提高，体重变异系数从F5到F6到F7到F8的不断降低。

实施例4 各世代鱼的尾鳍条纹变化

在认识到尾鳍条纹平行清晰程度有可能获得积极的选择响应后，发明人从F5开始，加强了这一选择标准的严格度。每代只选留典型尾鳍，即条纹平行清晰，无交叉切割的鱼，否则淘汰。逐代变化如表8：

表8 尼罗罗非鱼选育系F5、F6、F7、F8及对照系尾鳍条纹平行清晰比例变化

选育系代数	F5	F6	F7	F8	对照系
选育系代数	F5	F6	F7	F8	对照系	典型尾鳍(％)	24.8	28.8	32.2	37.6	17.6
观察尾数	260	260	577	680	260	典型尾鳍(％)	24.8	28.8	32.2	37.6	17.6

实施例5 选育获得的新吉富罗非鱼的遗传标志和纯度

1、染色体与核型

体细胞染色体二倍数2n＝44。核型公式为6sm+24st+14t，核型见图6，染色体臂数NF＝50。

2、生化遗传学特性

(1)同工酶的酶谱表型

对新吉富罗非鱼的肌肉、肝脏中ADH、α-GPDH、LDH、MDH、ME、IDH、G-6-PDH、EST、SOD等同工酶进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。其中EST-1(A＝0.875，a＝0.125)、EST-3(A＝0.815，a＝0.185)位点上表现有多态性。肌肉中乳酸脱氢酶的电泳图谱见图7。

(2)群体遗传变异程度

新吉富罗非鱼群体的遗传多态性：10.5％，平均杂合度为0.027。

3、分子遗传学特性

(1)RAPD特征标记

取新吉富罗非鱼尾鳍，提取基因组DNA，选取40个10碱基的随机引物进行PCR扩增分析。引物扩增的结果如图8所示，750bp片段为新吉富罗非鱼群体的代表性的谱带。

(2)群体遗传相似度

根据Lynch[1990]的公式对40个引物扩增的结果进行种内个体间平均遗传相似度计算。得到新吉富罗非鱼个体间的平均遗传相似度为91.1％。

应理解，在阅读了本发明的上述公开内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请的权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种鱼类选育方法，其特征在于，它包括步骤：

(a)选用尼罗罗非鱼为选育基础群体；

(b)产前雌鱼和雄鱼分离培育，将精选的性成熟的雌鱼和雄鱼配组、产卵，在从鱼苗生长到亲鱼期间，对雌性和雄性分别从鱼群中选取生长速度快、个体大、体型好、尾鳍条纹平行清晰的个体，淘汰尾鳍条纹有断裂、交叉或切割的个体；总选择率为6％，包括：在50±10天进行第一次亚选择，保留生长速度最快的50-70％的鱼；在100±10天进行第二次亚选择，保留生长速度最快的40-60％的鱼；在200±20天进行第三次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的40-60％的鱼；在300±30天进行第四次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的30-50％的鱼；

(d)重复步骤(b)和(c)4-15次。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在进行生长速度选择时，雌鱼与雄鱼的选择分开进行，选择生长速度快、个体大的鱼，步骤(b)中选取生长速度比群体平均快10％以上的鱼。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，在50天进行第一次亚选择，保留生长速度最快的60％的鱼；在100天进行第二次亚选择，保留生长速度最快的50％的鱼；在200天进行第三次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的50％的鱼；在300天进行第四次亚选择，保留生长速度最快和尾鳍特征典型的40％的鱼。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(d)中重复步骤(b)和(c)8次以上。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，选育获得的新吉富罗非鱼群体的遗传多态性为10.5％，平均杂合度为小于0.05，平均遗传相似度大于90％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(d)中，重复步骤(b)和(c)5-10次。