CN100491342C - 结晶β2肾上腺素能受体激动剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种结晶盐形式的新的β2肾上腺素能受体激动剂。本发明还提供包含该结晶形式的药物组合物，含有该药物组合物的制剂，使用该结晶盐形式治疗与β2肾上腺素能受体活性有关疾病的方法，以及适用于制备这种结晶化合物的方法。

Description

结晶β2肾上腺素能受体激动剂
发明领域
本发明涉及一种结晶形式的β2肾上腺素能受体激动剂。本发明还涉及包含该结晶物质的药物组合物，含有该药物组合物的制剂，使用该结晶物质治疗与β2肾上腺素能受体活性有关疾病的方法，以及适用于制备这种结晶化合物的方法。
发明背景
β2肾上腺素能受体激动剂被认为是用于治疗肺疾病例如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支气管炎和肺气肿)的有效药物。β2肾上腺素能受体激动剂还适用于治疗早产，以及潜在地适用于治疗神经障碍和心脏障碍。共同转让的美国专利No.6,576,793 B1公开了新的化合物N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺，
Figure C03817929D00041
作为强的β2肾上腺素能受体激动剂。或者以化学名称N-[3-[(1R)-1-羟基-2-[[2-[4-[((2R)-2-羟基-2-苯乙基)氨基]苯基]乙基]氨基]乙基-6-羟基苯基]-甲酰胺和(α-R)-3-甲酰胺基-4-羟基-α-[[[p-(N-((2R)-羟基-苯乙基))-氨基-苯乙基]氨基]甲基苄醇提到化合物1。
有利地通过吸入给予治疗肺疾病的活性剂。吸入法是一种将药剂直接递送到呼吸道的有效方法。现有三种一般类型的药物吸入装置：雾化吸入器、干粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。通过吸入给药的制剂的制备通常依赖活性剂晶形的存在，或者依赖该活性剂药学上可接受盐晶形的存在，具有适合的物理和化学性质。例如，希望通过吸入法给药的以干粉和悬浮制剂形式使用的结晶盐在微粉化时通常是不吸湿并且是稳定的。
还希望这类药剂的溶液制剂长期储存时是稳定的。但是，对β2肾上腺素能受体激动剂福莫特罗酒石酸盐来说，已经确认用于雾化吸入给药的溶液制剂的稳定性为其可接受性的限制。如在美国专利号No.6,040,344中所报道的，＂由于R，R-福莫特罗L-酒石酸盐在水溶液中成问题的稳定性，这种制剂不适宜长期储存＂。
在前还没有报道化合物1或其盐的晶形，也没有报道适用于通过吸入给药的包含化合物1的制剂。
发明概述
本发明提供一种结晶形式的N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐。通过X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、红外光谱学(IR)、核磁共振光谱法(NMR)和通过元素分析，表征了化合物1的二盐酸盐。
令人惊奇地是，化合物1的结晶二盐酸盐可以被研磨成微粉化颗粒，而没有显著的分解。此外，现已发现，即使结晶二盐酸盐长时间被暴露给高相对湿度的空气，它既不吸湿也不潮解；并且它在高温下是热稳定的。
本发明还提供包含化合物1的二盐酸盐和药学上可接受的载体的药物组合物。所述药物组合物包括为吸入给药特定制备的制剂。
特别地，本发明提供一种适用于雾化吸入给药的含水药物组合物。本发明的含水气雾剂制剂包含N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐、缓冲剂和水。所述制剂被缓冲到pH在约4至约6之间，优选在约5至约5.5之间，更优选约5，并且理想地是等渗的。可以通过加入一种适合的盐，例如氯化钠，将该制剂调节至等渗。任选地，该制剂还可以包括一种表面活性剂。
此外，本发明提供包含化合物1的结晶二盐酸盐和一种或多种其它治疗剂的组合，以及包含这类组合的药物组合物。
另一方面，本发明提供一种治疗哺乳动物中与β2肾上腺素能受体活性有关的疾病或病症(例如肺病，例如哮喘或慢性阻塞性肺病，早产，神经障碍，心脏障碍，或炎症)的方法，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的化合物1的结晶二盐酸盐。本发明还提供一种治疗方法，该方法包括给予治疗有效量的化合物1的结晶二盐酸盐以及一种或多种其它治疗剂的组合。
还有另一方面，本发明提供一种制备化合物1的结晶二盐酸盐的方法，包括步骤：将N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺溶解在一种极性溶剂中，形成第一溶液；然后加入盐酸，形成第二溶液，从中生成本发明的结晶盐。本发明还提供一种通过上述方法生产的结晶盐酸盐。任选地，所述方法还包括随后的重结晶步骤，该步骤包括将结晶diHCl盐溶解在一种极性溶剂中，相对于每摩尔游离碱，任选加入约0.5至约1.5当量之间的盐酸，然后加入极性溶剂，形成溶液，从中生成本发明的结晶盐。
本发明还提供一种制备适用于制备化合物1的中间体2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)的方法。通过如下反应可以制备所述中间体：使2-(4-氨基苯基)乙胺或其盐与足够量的碱反应，基本上使4-氨基脱质子；然后使所得产物与(R)-氧化苯乙烯反应，得到中间体2。
附图简要说明
参照附图说明本发明。
图1表示N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的X射线粉末衍射图。
图2表示N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的差示扫描量热法轨迹。
发明的详细说明
当描述本发明的化合物、组合物和方法时，除非另有说明，以下术语具有下列含义。
术语＂治疗有效量＂是指，当给予需要治疗的患者时，足以产生治疗作用的量。
本文使用的术语＂治疗＂是指患者，例如哺乳动物(特别是人)中疾病或医学病症的治疗，其包括：
(a)预防疾病或医学病症的发生，即，患者的预防性治疗；
(b)改善疾病或医学病症，即消除或引起患者疾病或医学病症的退化；
(c)抑制疾病或医学病症，即减缓或阻止患者疾病或医学病症的发展；或
(d)减轻患者中疾病或医学病症的症状。
短语＂与β2肾上腺素能受体活性有关的疾病或病症＂包括现在已经认识或者将来被发现的，与β2肾上腺素能受体活性有关的所有疾病状态和/或病症。这类疾病状态包括，但是不局限于，支气管狭窄或肺疾病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支气管炎和肺气肿)，以及神经障碍和心脏障碍。还已知β2肾上腺素能受体活性与早产(参见美国专利No.5,872,126)和某些类型的炎症(参见WO 99/30703和美国专利No.5,290,815)有关。
本文使用的术语＂等渗的＂是指具有与生理液体的渗透压相等或相似的渗透压。体液通常具有常被描述为与0.9％(w/v)氯化钠水溶液的渗透压相当的渗透压。
本文使用的术语＂缓液＂或＂缓冲的＂是指含有弱酸和其共轭碱的溶液，当加入酸或碱时，其pH仅仅有略微地改变。术语＂缓冲剂＂是指一类物质，其包含在一种溶液中提供一种缓冲溶液。
本发明提供一种结晶形式的N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐。本文使用的术语＂二盐酸盐＂和＂本发明的diHCl盐＂是指一种物质，其相对于每摩尔游离碱物质，具有约1.65至约2.10当量之间的氯，优选约1.90至约2.05当量之间的氯。
本发明的晶形通过X射线粉末衍射图进行表征，该X射线粉末衍射图在选自由15.61±0.2，16.32±0.2，19.50±0.2，24.25±0.2，24.92±0.2，25.45±0.2，28.67±0.2和31.16±0.2组成的组的2θ值处具有两个或更多个衍射峰。特别地，本发明的晶形通过X射线粉末衍射图进行表征，该X射线粉末衍射图包含在2θ值24.25±0.2，24.92±0.2，25.45±0.2处的衍射峰。
本发明还提供N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺的结晶盐酸盐，通过X射线粉末衍射图进行表征，该X射线粉末衍射图在选自由15.61±0.2，16.32±0.2，19.50±0.2，24.25±0.2，24.92±0.2，25.45±0.2，28.67±0.2和31.16±0.2组成的组的2θ值处具有两个或更多个衍射峰。
在X射线粉末衍射领域众所周知，XRPD光谱的相对峰高取决于与样品制备和仪器几何形状有关的许多因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。因此，通过X射线粉末衍射图还表征化合物1的结晶diHCl盐，其中峰位置大体上与图1中所示的那些一致。
本发明diHCl盐的晶形还通过其红外吸收光谱进行表征，其在696±1，752±1，787±1，827±1，873±1，970±1，986±1，1020±1，1055±1，1066±1，1101±1，1197±1，1293±1，1371±1，1440±1，1542±1，1597±1，1658±1，2952±1，3372±1和3555±1cm-1处显示出明显的吸收带。
此外，本发明的结晶diHCl盐还通过其差示扫描量热法轨迹进行表征，如图2所示，其在约200℃处显示出吸热热流的开始。没有受任何作用理论的束缚，DSC轨迹与热重分析数据的比较支持以下推论：当温度被扫描在约200℃的开始温度以上时，本发明的晶形显示出同时熔融和分解。
现证实，当被暴露给高的温度和湿度时，本发明的结晶diHCl盐是稳定的。例如，在40℃和75％湿度下储存30天后，通过DSC分析表明，没有可检测的差别，通过高压液相色谱法(HPLC)分析表明，直接通过结晶获得形式的结晶物质或被研磨的物质都没有可检测的化学降解。在另一个测试中，在40℃和75％的湿度下储存6个月后，本发明结晶物质的化学纯度基本上没有变化。
可以以粒径在约1至约10μm之间的颗粒形式提供本发明物质，这种粒径通常被认为是适于通过吸入法给药的颗粒大小范围。因此本发明的化合物1的结晶diHCl盐适用于制备药物组合物，特别地，适用于制备为通过吸入给药配制的药物组合物。
通过将至少两当量的盐酸加到溶于一种极性溶剂中的活性化合物1中，可以生成本发明的结晶二盐酸盐。为了诱导结晶，优选diHCl产物从其中结晶出的溶液包含异丙醇和水，其中异丙醇与水的体积比为约4:1到约10:1。更优选地，异丙醇与水的体积比约4:1到约7:1。所述水组分可以存在于极性溶剂中，或者以盐酸水溶液的方式引入。优选地总溶剂与游离碱物质的体积(mL)与重量(g)比为约15:1到约50:1。任选地，可以将化合物1和极性溶剂的混合物进行加热，以溶解游离碱，然后在加入盐酸前，将所得混合物冷回到室温。
例如，通过在约40℃至约60℃之间的温度下，将化合物1溶解在异丙醇中，冷却到室温，加入盐酸水溶液，然后在结晶过程中搅拌，可以生成结晶diHCl盐。结晶产物可以通过过滤被分离，然后在真空下被干燥。因此，一方面，本发明提供通过上述方法生产的结晶盐酸盐。
任选地，所述结晶diHCl盐可以通过将该结晶盐再溶解到一种如上所述极性溶剂中进行重结晶。为了保证重结晶产物相对于每摩尔游离碱，具有两当量HCl，特别是当以大于克规模制备产物时，在极性溶剂中可以包含盐酸。在这些制备中，相对于每摩尔游离碱，约0.5至约1.5之间，例如，约1当量HCl，可以被包含在极性溶剂中。
如下面实施例7a和7b中所述，通过在高温下溶于异丙醇和水的混合物中，任选加入盐酸，用异丙醇稀释，接着搅拌下冷却到室温，可以对结晶diHCl盐进行重结晶。通过过滤可以分离产物，然后在真空下干燥。
本发明还提供一种含水药物组合物，包含N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐，在下文中称为适合雾化吸入给药的＂活性盐＂。可代替地，可以通过肌内注射或静脉内注射给予所述含水药物组合物。优选以结晶形式如上所述结晶diHCl盐提供所述活性盐。本发明的气雾剂制剂包含在水溶液中的活性盐，该溶液被缓冲到pH在约4至约6之间，优选在约5至约5.5之间，更优选约5。
根据本发明的制剂每克溶液含有约0.06μg至约1.2mg之间，优选约0.29μg至约234μg之间的N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐。
本发明制剂每克溶液中二盐酸盐的量相当于约0.05μg至约1mg之间，优选约0.25μg至约200μg之间的游离碱活性剂。
用一种药学上可接受的缓冲剂配制含水药物组合物，其以其质子化和其未质子化的形式存在于溶液中。以酸或酸的相应盐，优选以钠盐，引入缓冲剂，以使溶液的pH保持在特定范围内。适合的药物缓冲剂的例子包括柠檬酸盐、磷酸盐、硫酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐和酒石酸盐。优选柠檬酸盐缓冲溶液。优选用氯化钠将所述制剂调节至等渗。
此外，所述制剂每克溶液可以任选包括高达约1mg药学上可接受的表面活性剂，例如聚乙二醇单油酸山梨醇酐酯(
Figure C03817929D00101
 80)、去水山梨糖醇三油酸酯(
Figure C03817929D00102
 85)等等。制剂可以视需要进行灭菌。
因此，适合的本发明药物制剂由下面的组分组成：
(a)0.06μg-11.7mg活性盐
(b)0.021-21mg柠檬酸
(c)0-11mg NaCl
(d)0-1mg表面活性剂
(e)NaOH调节pH至4至6之间
(f)水至1g。
优选的药物制剂由下面的组分组成：
(a)0.29μg-234μg活性盐
(b)0.21-21mg柠檬酸
(c)8-10mg NaCl
(d)NaOH调节pH至5至5.5之间
(e)水至1g。
本发明还提供一种制备含水气雾剂制剂的方法。根据本发明的方法，将活性盐，优选本发明的结晶diHCl盐，溶于一种缓冲剂(以酸的形式提供)的酸性水溶液中。然后，通过加入一种碱，例如NaOH，调节pH。例如，将柠檬酸加到0.9％氯化钠溶液中。将活性剂溶于酸性盐溶液中；得到初始pH约2.5的溶液。然后，通过逐步加入1N NaOH调节pH值，直到溶液具有所想要的pH值为止。加入余下量的0.9％氯化钠溶液，得到所想要的总溶液重量。当在制剂中包括表面活性剂时，在导入缓冲剂前，可以将表面活性剂与氯化钠溶液混合。
令人惊奇地是，如上所述制备的，每克溶液具有0.1mg活性化合物1的雾化吸入溶液，已被证明在储存时是稳定的。与美国专利No.6,040,344中报道的关于福莫特罗酒石酸盐的情况相反，在本发明的情况中，在室温下储存四个月后，没有观察到不可接受的化学降解，如通过基于高压液相色谱(HPLC)的分析方法测定的。此外，在5℃下储存九个月后，雾化吸入溶液的游离碱组成基本上没有变化。
活性剂的合成
所述活性剂，N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺，化合物1，可以由如下流程图中所示和下面实施例中进一步描述的轻易可得的原料合成。将被理解，虽然给出了具体的工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等等)，但是还可以使用其它的工艺条件，除非另有说明。
流程图
Figure C03817929D00121
可以通过2-(4-氨基苯基)乙胺与(R)-氧化苯乙烯的偶联制备中间体2。所述胺，任选以盐的形式提供，首先与约1至约1.2当量之间的pKa值大于约18的碱进行反应，以便基本上使4-氨基脱质子化。将(R)-氧化苯乙烯加到胺反应的产物中。现已观察到：反应物的化学计量可以影响此反应产物的纯度。为了确保(R)-氧化苯乙烯的完全消耗，优选使用小于一当量的氧化苯乙烯反应物。例如，发现化学计量为1.0当量的2-(4-氨基苯基)乙胺、1.15当量的碱和0.95当量的(R)-氧化苯乙烯是有效的。
适用的碱性化合物包括二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠，或者称为六甲基二硅氮烷钠盐(NaHMDS)，二异丙基酰胺锂和正丁基锂。该反应优选在一种溶剂体系中进行，该溶剂体系包括一种极性非质子溶剂，例如1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮(DMPU)。非质子极性溶剂的另外例子包括二甲亚砜、N-甲基吡咯烷酮、N，N-二甲基乙酰胺、四甲基乙二胺和六甲基磷酰胺。
在本发明的方法中，反应物上不需要保护基。此外，在本发明的条件下，以显著的是生成所想要的区域异构体。当没有包含能够使苯胺脱质子化的强碱时，该反应主要得到不想要的区域异构体，这是由环氧化物的内部开环引起的。在溶剂体系中极性非质子溶剂的包含允许由苯胺脱质子化生成的阴离子留在溶液中。
水溶液提取后，通过加入盐酸水溶液，偶联反应的产物以盐酸盐从溶剂例如异丙醇中结晶出来。所述结晶方法有效地将所想要的产物与在反应过程中生成的副产物分离。用10N的氢氧化钠水溶液将该盐酸盐再溶解，得到2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)。
通过在上述合成中间体2的方法中用(S)-氧化苯乙烯代替(R)-氧化苯乙烯，可以制备相应的(S)立体异构体，2-[4-((S)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺。
如美国专利No.6,268,533B1和在R.Hett等，Organic ProcessResearch and Development，1998，2，96-99中所述，可以制备(R)-2-溴-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙醇(3)。还可以使用与Hong等，Tetrahedron Lett.，1994，35，6631所述的那些相似；或与美国专利No.5,495,054中所述的那些相似的方法制备中间体3。中间体4，2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙烷，包括在3的羟基位置的保护基叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)，可以通过将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(TBDMSC1)和咪唑加到溶于二甲基甲酰胺(DMF)中的中间体3中进行制备。
使用二甲亚砜(DMSO)作为溶剂，通过加入碳酸钾和碘化钠，并加热到约140℃，使中间体2和4偶联，以生成中间体5，N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙胺。通过加入三乙胺三氟化氢(TREAT HF)，从溶于四氢呋喃(THF)中的5上脱去TBS保护基，得到中间体6，N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙胺，接着分离。使用活性炭上的钯，通过催化氢解从中间体6上脱去苄基保护基，得到活性化合物1。
药物组合物和给药装置
本发明结晶形式的diHCl盐有利地被用于制备为吸入给药而配制的药物组合物。药物吸入装置通常被分为雾化吸入器、干粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。常规雾化器装置产生一股高速气流，将药物以雾的形式喷射，所述雾被携带到患者的呼吸道中。如上面所公开的，为雾化吸入给药配制的含水药物组合物构成本发明的一个方面。或者，可以将治疗剂配制成可吸入大小的微粉化颗粒的悬浮剂，供雾化吸入给药，其中通常将微粉化定义为约90％或更多的颗粒具有小于约10μm的直径。
适合的雾化器装置是商业上可得到的，例如由PARI GmbH(Starnberg，Germany)得到。其它的雾化器装置已经被公开例如在美国专利6,123,068中。将本发明含水制剂的等分试样填充到适合通过雾化器装置给药的无菌容器，例如单位剂量容器中。因此，本发明还提供一种试剂盒，包括一种雾化器装置以及其内容物包含本发明制剂的容器。根据这类装置的实际递送容积，可以调节制剂的浓度，以为患者提供合适的剂量。制剂中表面活性剂的包含可以有益于减少活性剂在雾化器容器上的吸附，如果这类吸附发生。另外制剂中表面活性剂的存在可以改善某些装置中的气溶胶化。
DPI通常给予呈自由流动粉末形式的治疗剂，在吸气过程中，该粉末可被分散在患者的气流中。还开发了可替代的DPI装置，其使用外部能量源来分散粉末。为了获得一种自由流动的粉末，可以将治疗剂与适合的赋形剂(例如乳糖或淀粉)一起配制。例如，通过将干燥的乳糖颗粒与化合物1的diHCl盐的微粉化颗粒混合，然后干掺和，可以制得干粉制剂。或者，不使用赋形剂配制所述药剂。将制剂装载到干粉分配器中，或者装载到供用干粉递送装置使用的吸入筒或胶囊中。
商业上提供的DPI给药装置的例子包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(例如参见，美国专利No.5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(例如参见，美国专利No.6,378,519)；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(例如参见，美国专利No.4,524,769)；以及Rotahaler(GlaxoSmithKline)(例如参见，美国专利No.4,353,365)。适合的DPI装置的其它例子被描述在美国专利Nos.5,415,162、5,239,993和5,715,810以及其中的参考文献中。
使用压缩推进气体，MDI通常释放出定量的治疗剂。用于MDI给药的制剂包括液化推进剂中的活性成份的溶液或悬浮剂。虽然常规使用氯氟烃，例如CCl3F，作为推进剂，但是由于对这类试剂对臭氧层不良影响的担心，现已开发了使用氢氟烷烃(HFA)，例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷，(HFA 227)的制剂。用于MDI给药的HFA制剂的另外组分包括共溶剂，例如乙醇、戊烷或少量的水；以及表面活性剂，例如去水山梨糖醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和甘油。(例如参见，美国专利No.5,225,183、EP 0717987 A2和WO 92/22286)。
因此，用于MDI给药的适合的制剂可以包含约0.001％-约2％重量的本发明的晶形，约0％-约20％重量的乙醇，以及约0％-约5％重量的表面活性剂，其余是HFA推进剂。在一种方法中，为了制备所述制剂，将冷却的或加压的氢氟烷烃加到一个含本发明晶形、乙醇(如果存在)和表面活性剂(如果存在)的瓶中。为了制备悬浮剂，药用盐以微粉化颗粒的形式提供。将所述制剂装载到一个气雾剂罐中，其构成MDI装置的一部分。美国专利Nos.6,006,745和6,143,227中提供了为与HFA推进剂一起使用而特别开发的MDI装置的例子。
在一种可替代的制备中，通过将表面活性剂的涂层喷雾干燥到本发明结晶物质的微粉化颗粒上，制备悬浮制剂。(例如参见，WO 99/53901和WO 00/61108)。关于制备可吸入颗粒的方法、以及适合吸入给药的制剂和装置的其它例子，参见美国专利Nos.6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398，以及WO 99/55319和WO 00/30614。
本发明的活性剂，化合物1，在一系列剂量下是有效的，并且通常以治疗有效量给药。但是，将被理解，实际给予化合物的量将由医生根据有关情况决定，这些情况包括所治疗的病症，所选的给药途径，个体患者的年龄、体重和反应，患者症状的严重程度等等。
用于吸入给药的治疗剂的适合剂量通常在约0.05μg/天到约1000μg/天的一般范围内，优选在约0.1μg/天到约500μg/天的范围内。将被理解，在测定吸入给药的适合剂量中，要考虑具有特定递送装置特征的递送到肺的活性剂部分。
可以周期剂量给予化合物：每周一次，每周多次，每天一次，或每天多剂量。治疗方案可能需要长时间给药，例如，几周或几个月，或者治疗方案可能需要长期给药。口服给药的适合剂量通常在约0.05μg/天至约100mg/天的一般范围内，优选在约0.5μg/天至约1000μg/天的范围内。
因此，本发明提供一种治疗哺乳动物中与β2肾上腺素能受体活性有关的疾病或病症的方法，包括给予所述哺乳动物治疗有效量的化合物1的结晶二盐酸盐或治疗有效量的含有化合物1的结晶二盐酸盐的药物组合物。
本发明的活性剂还可以与一种或多种其它的治疗剂共同给药。例如，本发明的药剂可以与一种或多种治疗剂联合给药，所述治疗剂选自抗炎药(例如皮质类固醇和非甾类抗炎药(NSAIDs)、抗胆碱能药(特别是毒蕈碱性受体拮抗剂)、其它的β2肾上腺素能受体激动剂、抗感染药(例如抗生素或抗病毒药)或抗组胺药。因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的二盐酸盐以及一种或多种治疗剂，例如抗炎药、抗胆碱能药、另一种β2肾上腺素能受体激动剂、抗感染药或抗组胺药的组合。
可以药学上可接受的盐或溶剂化物的形式使用其它的治疗剂。需要时，其它的药物可以光学纯立体异构体的形式被使用。
适合的抗炎药包括皮质类固醇和NSAIDs。可以与本发明的化合物结合使用的适合的皮质类固醇是那些口服的和吸入的皮质类固醇和具有抗炎活性的它们的前体药物。例子包括甲基泼尼松龙，泼尼松龙，地塞米松，丙酸氟替卡松，6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯，6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氢-呋喃-3S-基)酯，倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)，布地缩松，氟尼缩松，莫米松酯(例如糠酸酯)，曲安奈得，罗氟奈德，环索奈德，布替可特丙酸酯，RPR-106541和ST-126。优选的皮质类固醇包括丙酸氟替卡松，6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯，更优选6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。
适合的NSAIDs包括色甘酸钠；奈多罗米钠；磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如茶碱，PDE4抑制剂或混合的PDE3/PDE4抑制剂)；白三烯拮抗剂(例如孟鲁司特(monteleukast))；白三烯合成的抑制剂；iNOS抑制剂；蛋白酶抑制剂，例如类胰蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂；β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(例如腺苷2a激动剂)；细胞因子拮抗剂(例如趋化因子拮抗剂例如，白细胞介素抗体(α IL抗体)，具体地说，αIL-4治疗，αIL-13治疗，或其组合)；或细胞因子合成的抑制剂。适合的其它β2-肾上腺素受体激动剂包括沙美特罗(例如以昔萘酸酯的形式)，沙丁氨醇(例如以硫酸酯或游离碱的形式)，福莫特罗(例如以富马酸酯的形式)，非诺特罗或叔丁喘宁及其盐。
本发明的活性剂与磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂或混合的PDE3/PDE4抑制剂结合的应用也是令人感兴趣的。适用于本发明这一方面的PDE4-特异抑制剂可以是已知抑制PDE4酶或被发现起PDE4抑制剂作用，以及仅仅是PDE4抑制剂的任何化合物。优选的化合物是顺4-氰基-4-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)环己烷-1-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-酮和顺-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-醇]。
其它感兴趣的化合物包括：
1996年9月3日公布的美国专利5,552,438中阐述的化合物；此专利及其公开的化合物被引入本文作为参考。特别感兴趣的化合物，它被公开在美国专利5,552,438中，是顺-4-氰基-4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-羧酸(亦称为cilomalast)及其盐、酯、前体药物或物理形式；
来自elbion的AWD-12-281(Hofgen，N.等15thEFMC Int Symp MedChem(9月6-10日，爱丁堡)1998，摘要第98页；CAS标引号247584020-9)；命名为NCS-613的9-苄基腺嘌呤衍生物(INSERM)；来自Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；被鉴定为CI-1018(PD-168787)并且认为是Pfizer所有的苯并二氮杂
Figure C03817929D0018111451QIETU
PDE4抑制剂；由Kyowa Hakko在WO 99/16766中公开的苯并二噁茂衍生物；来自Kyowa Hakko的K-34；来自Napp的V-11294A(Landells，L.J.等Eur Resp J[Annu Cong Eur Resp Soc(9月19-23日，日内瓦)1998]1998，12(Suppl.28)：摘要第2393页)；来自Byk-Gulden的罗氟司特(CAS标引号162401-32-3)和pthalazinone(WO 99/47505，其内容被引入本文作为参考)；普马芬群，(-)-p-[(4aR*，10bS*)-9-乙氧基-1，2，3，4，4a，10b-六氢-8-甲氧基-2-甲基苯并[c][1，6]1，5-二氮杂萘-6-基]-N，N-二异丙基苯甲酰胺，其是一种混合的PDE3/PDE4抑制剂，由Byk-Gulden，即现在的Altana制备和发表；由Almirall-Prodesfarma正在开发的阿罗茶碱；来自Vernalis的VM554/UM565；或T-440(Tanabe Seiyaku；Fuji，K.等J Pharmacol ExpTher，1998，284(1)：162)，以及T2585。
其它可能的PDE-4以及混合PDE3/PDE4抑制剂包括在WO 01/13953中所列的那些，其内容被引入本文作为参考。
适合的抗胆碱能药是那些在毒蕈碱性受体上起拮抗剂作用的化合物，特别是为M1、M2或M3受体或其组合的拮抗剂的那些化合物。举例性的化合物包括颠茄植物的生物碱，例如阿托品、东莨菪碱、后马托品、莨菪碱；这些化合物通常以盐，作为叔胺被施用。这些药物，特别是盐形式，从许多商业来源中可轻易获得，或者可根据文献资料生产或制备出来，即：
阿托品-CAS-51-55-8或CAS-51-48-1(无水形式)，硫酸阿托品-CAS-5908-99-6；阿托品氧化物-CAS-4438-22-6或它的HCl盐-CAS-4574-60-1以及甲基阿托品硝酸盐-CAS-52-88-0。
后马托品-CAS-87-00-3，氢溴酸盐-CAS-51-56-9，甲基溴盐-CAS-80-49-9。
莨菪碱(d，1)-CAS-101-31-5，氢溴酸盐-CAS-306-03-6以及硫酸盐-CAS-6835-16-1。
东莨菪碱-CAS-51-34-3，氢溴酸盐-CAS-6533-68-2，甲基溴盐-CAS-155-41-9。
优选的抗胆碱能药包括异丙托铵(例如以溴化物的形式)，以名称Atrovent销售，氧托溴铵(oxitropium)(例如以溴化物的形式)以及塞托溴铵(tiotropium)(例如以溴化物的形式)(CAS-139404-48-1)。同样感兴趣的是：乙胺太林(CAS-53-46-3)，溴丙胺太林(CAS-50-34-9)，甲溴辛托品或Valpin 50(CAS-80-50-2)，克利胺溴(Quarzan，CAS-3485-62-9)，copyrrolate(Robinul)，异丙碘铵(CAS-71-81-8)，溴化甲哌佐酯(美国专利2,918,408)，氯化三乙己苯铵(Pathilone，CAS-4310-35-4)和环苯甲哌甲硫酸盐(Tral，CAS-115-63-9)。还参见盐酸环戊通(CAS-5870-29-1)，托品卡胺(CAS-1508-75-4)，盐酸苯海索(CAS-144-11-6)，哌仑西平(CAS-29868-97-1)，替仑西平(CAS-80880-90-9)，AF-DX 116或美索曲明，以及公开在WO 01/04118中的化合物，其内容被引入本文作为参考。
适合的抗组胺药(也称为H1-受体拮抗剂)包括已知抑制H1-受体并且人用安全的许多拮抗剂中的任何一种或多种。全部都是组胺与H1-受体相互作用的可逆的、竞争性抑制剂。这些抑制剂的大多数，主要为第一代拮抗剂，基于它们的核心结构，被表征为乙醇胺类、乙二胺类和烷基胺类。此外，其它的第一代抗组胺药包括可以基于piperizine和吩噻嗪类进行表征的那些。第二代拮抗剂，是非镇静性的，具有相似的结构-活性关系，因为它们保持核心乙烯基(烷基胺类)或模拟piperizine或哌啶的叔胺基团。下列是举例性的拮抗剂：
乙醇胺类：马来酸氯苯吡醇胺、富马酸氯马斯丁、盐酸苯海拉明和茶苯海明。
乙二胺类：马来酸吡拉明、盐酸吡甲胺和柠檬酸吡甲胺。
烷基胺类：氯苯那敏及其盐例如马来酸盐和阿伐斯汀。
哌嗪类：盐酸羟嗪、双羟萘酸羟嗪、盐酸赛克力嗪、乳酸赛克力嗪、盐酸氯苯甲嗪和盐酸西替立嗪。
哌啶类：阿司咪唑、盐酸左卡巴斯汀、氯雷他定或其脱乙酯基(descarboethoxy)类似物，以及特非那定和非索非那定盐酸盐或另一种药学上可接受的盐。
氮卓斯汀盐酸盐是另一种H1受体拮抗剂，其可以与本发明的活性剂联合被使用。
优选的抗组胺药的例子包括美沙吡林和氯雷他定。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和皮质类固醇的组合。
特别地，本发明提供包含化合物1的结晶二盐酸盐和丙酸氟替卡松；化合物1的结晶二盐酸盐和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯；以及化合物1的结晶二盐酸盐和6α，9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氢-呋喃-3S-基)酯的组合。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和PDE4抑制剂的组合。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和抗胆碱能药的组合。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和抗组胺药的组合。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和PDE4抑制剂以及皮质类固醇的组合。
因此，还一方面，本发明提供一种包含化合物1的结晶二盐酸盐和抗胆碱能药以及皮质类甾醇的组合。
因此，如上所述，本发明的药物组合物可以任选包含化合物1的结晶二盐酸盐与一种或多种其它治疗剂的组合。
可以水溶液或悬浮液的形式提供其它治疗剂。例如，在美国专利No.5,993,781中描述了一种丙酸氟替卡松的可雾化吸入的悬浮液制剂。因此，除化合物1的二盐酸盐以外，本发明的含水气雾剂药物组合物还可以任选包含呈溶液或悬浮液形式的另一种治疗剂。
本发明组合中的单个化合物可以依次或同时分开给药，或被组合药物制剂。本领域技术人员可以轻易地理解已知治疗剂的适宜剂量。
根据还一方面，本发明提供一种治疗哺乳动物中与β2肾上腺素能受体活性有关的疾病或病症的方法，该方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的化合物1的结晶二盐酸盐与一种或多种其它治疗剂的组合。
此外，本发明的结晶盐，可以潜在地被配制供其它形式给药，例如口服给药或肠胃外给药。可以将所述盐与常规的药物载体和赋形剂混合，以粉剂、片剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂(wafers)等等的形式使用。这类药物组合物将含有约0.05至约90％重量的活性化合物，更一般地约0.1至约30％。用于配制本发明结晶盐的其它适合药物载体可以在Remington：The Scienceand Practice ofPharmacy，20th Edition，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，PA，2000中找到。
下列非限制性实施例说明本发明的代表性药物组合物，其中活性成份被定义为结晶N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐。
制剂实施例1
通过下面方法制得备了用于雾化吸入给药的含水气雾剂制剂，每克溶液具有0.1mg活性化合物，化合物1。将柠檬酸(755.8mg)加到一个装有0.9％氯化钠溶液(325.7g)的容器中。将活性成分(42.3mg)加到该氯化钠溶液中，搅拌所得混合物5分钟，接着超声处理7分钟，以溶解该活性成分。溶液的初始pH值被测定为2.54。缓慢地将1NNaOH(7.1g)加到该溶液中，以获得最终pH值5.00。加入另外量的0.9％氯化钠溶液(26.7g)，搅拌所得溶液，得到含水制剂(360.3g)。
制剂实施例2
为了制备1g用于雾化吸入给药的含水气雾剂制剂，每克溶液具有0.15mg活性化合物，化合物1，将柠檬酸(2.1mg)加到一个装有0.9％氯化钠溶液(0.9g)的容器中。将活性成分(0.1755mg)加到该氯化钠溶液中，搅拌所得混合物并超声处理直到该活性成分溶解为止。溶液的初始pH值为约2.5。通过缓慢地加入1N NaOH(19.6mg)，将溶液的pH值调节至5.0。加入另外量的0.9％氯化钠溶液(78.1mg)，调节溶液的重量至1g，然后搅拌所得溶液。
制剂实施例3
使用下列组分，按照实施例2的步骤，可以配制每克溶液具有10μg化合物1浓度的含水气雾剂制剂：
活性成分                   0.0117mg
柠檬酸                     2.10mg
1N NaOH                    适量至pH值5.0
0.9％NaCl溶液              适量至1克
制剂实施例4
使用下列组分，按照实施例2的步骤，可以配制每克溶液具有0.15mg化合物1浓度的含水气雾剂制剂：
活性成分                    0.1755mg
磷酸                        1.07mg
1N NaOH                     适量至pH值5.0
0.9％ NaCl溶液              适量至1克
制剂实施例5
为了制备1g用于雾化吸入给药的含水气雾剂制剂，每克溶液具有0.15mg活性化合物，化合物1，将
Figure C03817929D00231
80(0.01mg)与0.9％氯化钠溶液(0.9g)在一个容器中混合。将柠檬酸(2.1mg)加到所述氯化钠溶液中，然后加入活性成分(0.1755mg)。搅拌所得混合物，并超声处理，直到活性成分溶解为止。溶液的初始pH值为约2.5。通过缓慢地加1N NaOH(19.6mg)，调节溶液的pH值至5.0。加入另外量的0.9％氯化钠溶液，调节溶液的重量到1g，然后搅拌所得溶液。
制剂实施例6
使用下列组分，按照实施例5的步骤，可以配制每克溶液具有0.15mg的化合物1浓度的含水气雾剂制剂：
活性成分                 0.1755mg
柠檬酸                   2.10mg
Figure C03817929D00241
 80                0.05mg
1N NaOH                  适量至pH值5.0
0.9％ NaCl溶液           适量至1克
制剂实施例7：稳定性测试
将如实施例1中制得的制剂的等分试样储存在-20℃、5℃、室温和40℃下。1个月的间隔，取出样品进行HPLC分析。使用ZorbaxRP-bonus，C14，25cm×4.6mm柱，在35℃下平衡，进行HPLC分析。使用的流动相是：A：在98:2的水：乙腈中的0.1％ TFA；和B：在10:90的水：乙腈中的0.1％TFA。通过在215nm处的UV吸收进行检测。使用1.0mL/分钟的流速，以及在20分钟内0-60％ B的梯度。下表1中给出了以储存在-20℃下的样品为标准，在所示期间后保留的活性化合物1的百分比。
表1：储存1-4个月后剩余的活性化合物的百分比
 
温度 1个月 2个月 3个月 4个月
5℃ 101 100 100 99
室温 99 99 97 96
40℃ 94 87 72 74
在第二个稳定性试验中，如上制备和储存等分试样。以不同的间隔取出样品进行HPLC分析。使用MAC MOD Ace-5，C18，25cm×4.6mm，5μm柱，在30℃下平衡，进行HPLC分析。流动相如上所述。通过在244nm处的UV吸收进行检测。初始条件是6％相B。使用1.0mL/分钟的流速，以及25分钟内6-30％B，10分钟内30％-60％B，以及2分钟内60％-100％B的梯度。化合物1的保留时间为约20分钟。下表2中给出了以储存在-20℃下的样品为标准，在所示期间后保留的活性化合物1的百分比。
表2：储存4-9个月后剩余的活性化合物的百分比
 
温度 1个月 2个月 3个月 4个月
5℃ 99 99 100 99
室温 97 95 94 90
40℃ 74 69 63
制剂实施例8：其它药物组合物
制剂实施例8A
本实施例说明用于口服给药的本发明结晶diHCl盐的代表性药物组合物的制备：
Figure C03817929D00251
将上述组分混合，然后装到硬壳明胶胶囊中。
制剂实施例8B
本实施例说明用于口服给药的本发明结晶diHCl盐的另一种代表性药物组合物的制备：
Figure C03817929D00252
将上述组分完全混合然后压成单一划痕片剂。
制剂实施例8C
本实施例说明用于口服给药的本发明结晶diHCl盐的代表性药物组合物的制备：
制备了一种具有以下组成的口服悬浮液。
制剂实施例8D
本实施例说明含有本发明结晶diHCl盐的代表性药物组合物的制备。
制备了一种具有下列组成，被缓冲至pH为4的可注射制剂：
Figure C03817929D00262
制剂实施例8E
本实施例说明用于注射的使用本发明结晶diHCl盐的代表性药物组合物的制备。
通过将20mL无菌水加到1mg本发明的化合物中，制备了一种重构的溶液。然后，在使用前，用与所述活性化合物兼容的200mL静脉内液体稀释该溶液。这类液体选自5％葡萄糖溶液、0.9％氯化钠或5％葡萄糖和0.9％氯化钠的混合物。其它例子是乳酸林格氏注射液、乳酸林格氏加5％葡萄糖注射液、Normosol-M以及5％葡萄糖、Isolyte E以及酰化林格氏注射液。
制剂实施例8F
本实施例说明局部应用的本发明结晶diHCl盐的代表性药物组合物的制备。
Figure C03817929D00271
将以上全部组分，除水之外，混合并且在搅拌下加热至60℃。然后，在60℃下，在剧烈搅拌下加入足量的水，以乳化所述组分，然后加入适量水至100g。
制剂实施例8G
本实施例用说明用于吸入药筒的含本发明diHCl盐的干粉制剂的制备。
用具有下列组分的药物组合物填装吸入药筒：
在与乳糖混合前，将活性成分微粉化。使用粉末吸入器施用药筒的内容物。
制剂实施例8H
本实施例说明用于干粉吸入装置的含有本发明结晶diHCl盐的干粉制剂的制备。
制备了微粉化活性成分与乳糖的体积比(bulkformulation ratio)为1∶200的药物组合物。将该组合物装入干粉吸入装置，该装置每剂量能够递送25μg活性药物组分。
制剂实施例8I
本实施例用说明用于定量吸入器的含有本发明结晶diHCl盐的制剂的制备。
通过下述步骤制备了含有5％活性成分、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的悬浮液：将作为平均大小小于10μm的微粉化颗粒的5g活性化合物分散在由溶于100mL软化水中的0.5g海藻糖和0.5g卵磷脂形成的胶体溶液中。将该悬浮液喷雾干燥，然后将所得物质微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将颗粒装载到具有压缩的1，1，1，2-四氟乙烷的罐中。
制剂实施例8J
本实施例说明用于定量吸入器的含有本发明结晶diHCl盐的制剂的制备。
通过将作为平均大小小于10μm的微粉化颗粒的10g活性化合物分散在由溶于200mL软化水中的0.20g卵磷脂形成的溶液中，制备了含有5％活性成分和0.1％卵磷脂的悬浮液。将悬浮液喷雾干燥，然后将所得物质微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将颗粒装载到具有1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷的罐中。
制剂实施例8K-80
制剂实施例8K-80说明悬浮液气雾剂制剂，它含有本发明diHCl盐的微粉化颗粒在氢氟烷烃推进剂中的悬浮液，供在定量吸入器中使用。为了制备该制剂，将冷却或加压的氢氟烷烃加到含有其它组分的瓶中。将所述制剂装载到气雾剂罐中。
制剂实施例8K
Figure C03817929D00291
制剂实施例8L
Figure C03817929D00292
制剂实施例8M
Figure C03817929D00293
Figure C03817929D00301
制剂实施例8N
Figure C03817929D00302
制剂实施例8O
以下举例说明N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺，化合物1的制备；以及化合物1的结晶diHCl盐的制备、表征和稳定性测试。
实施例1a：2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)的合成
向一个1000mL的三颈烧瓶中加入10g(74mmol)的2-(4-氨基苯基)乙胺和15mL 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮(DMPU)。所述反应烧瓶配备一个高架搅拌器(overhead stirrer)、一个125mL加料漏斗和一个温度计。将反应烧瓶用氮气清洗，然后放入一个冷水槽中。加料漏斗装有在四氢呋喃中的83mL(83mmol)1.0M二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠。剧烈搅拌下，在30分钟内，滴加二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠溶液。移去加料漏斗，并用一个橡胶隔片代替。在10分钟内，通过注射器滴加(R)-氧化苯乙烯(8.4mL，74mmol)。控制滴加的速率，以使温度保持在35℃以下。1h后，通过滴加88mL水，猝灭反应。将反应混合物转移到一个分液漏斗中，用56mL乙酸异丙酯稀释，接着用84mL饱和氯化钠水溶液洗涤。用84mL水和84mL饱和氯化钠水溶液的混合物再次洗涤有机层，最后用84mL饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机层真空浓缩。将残余物从异丙醇(每次55mL)中再浓缩两次，然后再溶解到异丙醇(235mL)中，然后在搅拌下加热到70℃。在两分钟内加入浓盐酸(13.2mL，160mmol)。允许混合物冷却到室温，并搅拌14h。借助过滤分离沉淀的产物，用异丙醇和乙酸异丙酯洗涤。真空干燥产物3h，然后将其溶于56mL水中，接着将其转入到分液漏斗中。加入乙酸异丙酯(56mL)和10N氢氧化钠水溶液(19mL，190mmol)。摇晃分液漏斗，分离相。用硫酸钠干燥有机层，浓缩，得到产物2，是一种橙棕色油(11g，44mmol，59％)。m/z：[M+H+]计算值C16H20N2O 257.2；实测值257.2。
实施例1b：2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)二盐酸盐的合成
向一个500mL的三颈烧瓶中加入10g(74mmol)2-(4-氨基苯基)乙胺和15.2mL 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)嘧啶酮(DMPU)。所述反应烧瓶配备一个高架搅拌器、一个125mL加料漏斗和一个温度计。将反应烧瓶用氮气清洗，然后放入一个冷水槽中。加料漏斗装有在四氢呋喃中的84.4mL(84.4mmol，1.15当量)1.0M二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠。剧烈搅拌下，在30分钟内，滴加二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠溶液。移去加料漏斗，并用一个橡胶隔片代替。在15分钟内，通过注射器滴加(R)-氧化苯乙烯(8.0mL，70.3mmol，0.95当量)。控制滴加的速率，以使温度保持在35℃以下。1h后，通过滴加90mL水，猝灭反应。将反应混合物转入到一个分液漏斗中，用60mL乙酸异丙酯稀释，接着用90mL饱和氯化钠水溶液洗涤。用90ml水和90ml饱和氯化钠水溶液的混合物再次洗涤有机层，最后用90ml饱和氯化钠水溶液洗涤。真空浓缩有机层。将残余物从异丙醇(每次51mL)中浓缩两次，然后再溶解到异丙醇(250mL)中，然后在搅拌下加热到70℃。在两分钟内加入浓盐酸(13.2mL，160mmol)。允许混合物冷却到室温，并搅拌12h。借助过滤分离沉淀产物，用异丙醇和乙酸异丙酯洗涤，在真空下干燥3小时，得到13.67g(57％收率)的2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙胺(2)二盐酸盐，是一种白色固体。
实施例2：2-溴-(R)-1-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙烷(4)的合成
将(R)-2-溴-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙醇(中间体3)(9.9g，28mmol)溶于36mL二甲基甲酰胺中。加入咪唑(2.3g，34mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(4.7g，31mmol)。在氮气氛中搅拌所述溶液72h。加入另外的咪唑(0.39g，5.7mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.64g，4.3mmol)，搅拌反应另外20h。用乙酸异丙酯(53mL)和己烷(27mL)的混合物稀释反应，然后转入到一个分液漏斗中。用水(27mL)和饱和氯化钠水溶液(27mL)的混合物洗涤有机层两次，最后用饱和氯化钠水溶液(27mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层。加入硅胶(23.6g)和己烷(27mL)，搅拌悬浮液10分钟。过滤除去固体，真空浓缩滤液。残余物用己烷(45mL)结晶，得到8.85g(19mmol，68％)中间体4，是一种白色固体。m/z：[M+H+]计算值C22H30NO3SiBr 464.1，466.1；实测值464.2，466.4。
实施例3：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙胺(5)的合成
将中间体4(5.0g，11mmol)、中间体2(3.5g，14mmol)和二甲亚砜(10mL)在一个100mL的圆底烧瓶中混合，并搅拌至形成一种均匀的溶液。加入碳酸钾(6.0g，43mmol)和碘化钠(1.7g，11mmol)，然后将反应混合物加热到140℃。将反应混合物在140℃下保持10分钟，然后冷却到室温，用水(24mL)和乙酸异丙酯(28mL)稀释。搅拌反应，直到所有的固体溶解为止，然后将其转入到一个分液漏斗中。有机层依次用水(17mL)、乙酸盐缓冲液(在水中的5％v/v乙酸，12％w/v三水乙酸钠，18ml)、碳酸氢钠溶液(5％w/v在水中，17mL)、饱和氯化钠水溶液(17mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，浓缩，得到中间体5，是一种褐色凝胶状固体(7.0g，11mmol，>99％)。m/z：[M+H+]计算值C38H49N3O4Si 640.4；实测值640.6。
实施例4：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙胺(6)的合成
将中间体5(5.2g，8.1mmol)溶于四氢呋喃(26mL)中，然后加入三乙胺三氢氟酸盐(1.4mL，8.6mmol)。搅拌所述溶液20h。通过加入水(7.6mL)，接着加入10.0N氢氧化钠(3.8ml，38mmol)猝灭反应。3分钟后，用乙酸异丙酯(20ml)稀释反应，然后将其转入到分液漏斗中。摇晃混合物，通过硅藻土过滤双相混合物，以除去不溶固体。将滤液回到分液漏斗中，分离相。有机层用9mL水和9ml饱和氯化钠水溶液的混合物洗涤，接着用15mL饱和氯化钠水溶液洗涤。用硫酸钠干燥有机层，浓缩，得到产物6，是一种褐色凝胶状固体(4.2g，8.0mmol，99％)。m/z：[M+H+]计算值C32H35N3O4 526.3；实测值526.4。
实施例5：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺(1)的合成
将中间体6(2.5g，4.8mmol)溶于8.0mL乙醇中，然后用活性炭、Darco G-60(1.25g)处理。在50℃下搅拌悬浮液20分钟，然后过滤除去Darco。向滤液中加入10％披钯炭(250mg)，然后将悬浮液放在一个Parr振荡器上。在30psi氢气下，摇晃反应10h。通过硅藻土过滤反应，真空浓缩，得到化合物1，是一种褐色的凝胶状固体(1.9g，4.3mmol，91％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 2.40-2.68(m，6H)，2.92-3.18(m，2H)，4.35-4.45(m，1H)，4.60-4.69(m，1H)，5.22-5.30(m，1H)，6.82(s，1H)，6.85(s，1H)，6.68-6.86(m，4H)，7.12-7.36(m，5H)，7.95(d，1H，J＝1.4Hz)，8.19(s，1H)，9.49(brs，1H).m/z：[M+H+]计算值C25H29N3O4 436.2；实测值436.4.
实施例6：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的结晶
在50℃下，将化合物1(3.17g，7.3mmol)溶于浴槽中的111mL异丙醇中，然后允许其冷却。快速搅拌溶液，接着加入1.0N HCl(24mL，24mmol)。在室温下搅拌混合物6h。过滤分离无色结晶产物，真空干燥，得到化合物1的二盐酸盐(1.71g，3.4mmol，46％)。
实施例7a：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的重结晶
在50℃下，将来自实施例6的化合物1的结晶二盐酸盐(1.5g，3.0mmol)溶于24mL 50％的v/v含水异丙醇中。用48mL异丙醇稀释该温热溶液，并搅拌2h。过滤分离重结晶产物，在真空中干燥，得到1.0g化合物1的二盐酸盐(2.0mmol，66％)。
实施例7b：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的重结晶
250mL三颈烧瓶装有化合物1的盐酸盐(每摩尔化合物1具有1.52当量的氯)(6.1g，12mmol)和1:1的异丙醇：水(98mL)。将混合物加热至50-60℃以溶解固体。在50-55℃下，加入盐酸(38％，1.2mL，12mmol)，然后在50-55℃下，在30分钟内，缓慢地加入异丙醇(98mL)。在2h内，将溶液冷却至室温。在30分钟内，缓慢地加入异丙醇(98mL)，在室温下搅拌所述溶液16h。过滤分离结晶，用异丙醇(30mL)洗涤，在真空中干燥24h，得到化合物1的二盐酸盐(4.8g，9.4mmol，79％收率，通过HPLC测定的纯度为99.3％)
每摩尔化合物1具有1.52当量氯的化合物1的盐酸盐获得如下。将根据实施例1-4的方法制备的中间体6(3.1kg)按照实施例5的方法进行脱苄基化，然后根据实施例6a的方法结晶，得到2.2kg化合物1的盐酸盐。根据实施例7a的方法将所述结晶产物重结晶，得到1.2kg化合物1的盐酸盐，具有1.52当量氯。
实施例8：N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的表征
图1和2中分别显示了如实施例6中从游离碱结晶的化合物1的结晶diHCl盐的X射线粉末衍射图和差示扫描量热法轨迹。被分析以提供图1和2结果的结晶物质的样品，具有32.3±19.1μm的特征颗粒大小。
特征IR峰位置被测定为diHCl盐的三种不同样品的共同峰的平均位置：696±1，752±1，787±1，827±1，873±1，970±1，986±1，1020±1，1055±1，1066±1，1101±1，1197±1，1293±1，1371±1，1440±1，1542±1，1597±1，1658±1，2952±1，3372±1和3555±1cm-1。
通过实施例1至7a的方法生产的化合物1的diHCl盐表征如下：
IR：697,753,787,827,873,970,986，1021，1055，1065，1100，1198，1294，1371，1440，1541，1597，1658，2499，2771，2953，3371，3555cm-1。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 2.86-3.37(m，8H)，4.80-4.91(m，2H)，6.91(s，2H)，7.12-7.43(m，9H)，8.13(s，1H)，8.27(d，1H，J＝1.6Hz)，8.80(br s，1H)，9.27(br s，1H)，9.63(s，1H)，10.18(brs，1H).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ 30.8，47.8，53.7，56.3，68.1，68.4,114.9，118.4，121.6，121.9，125.9，126.0，127.6，128.2，129.7，132.2，142.0，146.4，160.0.m/z：[M+H+]计算值C25H29N3O4436.2；实测值436.2。元素分析(wt％)计算值C25H29N3O4·2HCl：C，59.06；H，6.15；N，8.26；O，12.59；Cl，13.95.实测值：C，59.62；H，6.28；N，8.41；O，11.71；Cl，13.52。
实施例9：N-(2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基)-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐的固态稳定性测试
利用单批化合物1的结晶diHCl盐，如在实施例6中制备的，制备每个约30mg的四个样品。用研钵和槌将两个样品研磨成细颗粒。将两个样品，一个研磨，一个没有被处理的，在40℃和75％相对湿度的密室中贮存30天，以及将两个样品，一个研磨，一个没有被处理的，在室温的干燥器中储存相同的时间。在第11天，将样品取出进行DSC和TGA分析，在第30天进行XRPD和HPLC分析。
四个样品DSC轨迹的比较显示，暴露给高的温度和湿度后，对晶体稳定性没有可检测的影响。TGA结果表明：暴露给高的相对湿度后，没有可察觉的水与研磨的或不研磨的晶体有关。类似地，XRPD图表明，暴露给热和湿度不会可察觉地影响样品，以及在HPLC数据中没有观察到可察觉的化学降解。
在另一个测试中，将实施例7a的重结晶的diHCl盐的样品储存在40℃和75％的相对湿度下。6个月后，物质的外观没有看得见的污点，水含量仍然可以忽略(最初0.12％的水，6个月时为0.37％的水)，通过HPLC分析测定的样品的化学纯度基本上没有变化，并且样品的手性纯度也没有改变。
分析方法
用Shimadzu 6000衍射仪，使用Cu Kα(40.0kV，35.0mA)辐射，得到X射线粉末衍射图。用测角计进行分析，其中测角计以0.02°的步长，2°/分钟的速度，在4-45°的范围内连续扫描的方式运行。在玻璃试样支座上将样品制备成粉末物质的薄层。
用型号DSC2010的TA仪器获得差示扫描量热法轨迹。将样品放在密封的铝盘中进行分析，用一个空盘作为参考。在30℃下平衡样品，然后以每分钟5℃的速度加热至300℃。仪器用铟标准进行校准。
使用型号Q50的TA仪器进行热重量分析。在铝盘中称量样品的重量，然后以10℃/分钟的速度从50℃加热到300℃。通过测定在50℃至120℃之间(在这样的一个范围内，没有观察到显著的分解)的总重量损失，估算水含量。
使用装备有Nicolet omnis样品衰减全反射(ATR)样品座的Avatar360FT-IR光谱仪，在4000-675cm-1的波数(v)范围内，测定IR光谱。
在室温度下，在300MHz Varian Gemini 2000光谱仪上获得1H NMR光谱。将样品溶于DMSO-d6中，使用残余DMSO质子(2.49ppm)作为参照，以TMS刻度报道化学位移。在JEOL Eclipse+400MHz光谱仪上获得13C NMR谱。
除非另有说明，使用Zorbax RP-bonus，C14，25cm×4.6mm柱，在35℃下平衡，进行HPLC分析。使用的流动相是：A：在98:2的水:乙腈中的0.1％TFA；和B：在10:90的水:乙腈中的0.1％TFA。通过在215nm处的UV吸收进行检测。使用1.0mL/分钟的流速，以及在20分钟内0-60％B的梯度。化合物1diHCl盐的保留时间为11.7分钟。
用Perkin Elmer仪器(PE SCIEX API 150 EX)，通过电喷射离子化方法(ESMS)进行质谱鉴定。
使用Beckman P/ACE MDQ毛细管电泳系统测定手性纯度。使用七-(2，3-二乙酰基-6-硫酸根合)-β-环糊精(HDAS-β-CD)作为手性选择剂，并且使用50μm X 31.2cm的熔融石英毛细管在pH2.5进行分析。通过在200nm处的UV吸收进行检测。四个立体异构体按以下顺序迁移：SS、RS、SR、RR，其中化合物1被指定为RR。
虽然参照其具体的实施方案描述了本发明，但是本领域熟练技术人员应该理解，在不偏离本发明真实的实质和范围的情况下，可以进行各种改变和等同替代。此外，可以进行许多修饰，使特定的情况、物质、物质的组合物、方法、方法步骤或步骤，适应本发明的目的、实质和范围。所有这些修饰都落入本发明所附的权利要求的范围内。此外，在上文中引用的所有出版物、专利和专利文献以全文被引入本文作为参考，尽管它们是单个地被引入作为参考的。

Claims (10)

1.结晶N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐，其特征在于X射线粉末衍射图，其中峰位置基本上与图1中所示图的峰位置一致。
2.一种药物组合物，它包含治疗有效量的权利要求1的化合物以及药学上可接受的载体。
3.权利要求2的药物组合物，其中所述组合物还包含治疗有效量的皮质类固醇。
4.权利要求2的药物组合物，其中所述组合物被配制成供通过吸入给药。
5.一种组合制剂，它包含第一治疗剂和第二治疗剂，其中第一治疗剂是权利要求1的化合物，第二治疗剂是皮质类固醇，并且所述治疗剂被配制在一起或单独配制。
6.一种制备权利要求1化合物的方法，所述方法包括如下步骤：
(a)将N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺溶解在第一极性溶剂中，以形成第一溶液；
(b)加入盐酸，以形成第二溶液，从中生成结晶产物，其中所述第二溶液包含异丙醇和水，异丙醇:水的体积比为4:1至10:1；
(c)将步骤(b)的产物溶解在第二极性溶剂中；以及
(d)每摩尔游离碱加入0.5至1.5当量的盐酸和第三极性溶剂，以形成第三溶液，从中生成结晶产物。
7.一种药物组合物，它包含：
(a)N-{2-[4-((R)-2-羟基-2-苯基乙基氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羟基-2-(3-甲酰胺基-4-羟基苯基)乙胺二盐酸盐；
(b)缓冲剂；以及
(c)水；
其中缓冲剂以足以为组合物提供4至6范围内的pH的量存在。
8.权利要求7的药物组合物，其中所述组合物还包含治疗有效量的皮质类固醇。
9.一种试剂盒，它包含：
(a)一种雾化器装置；以及
(b)一种容器，其内容物包含权利要求7或8的药物组合物。
10.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗哺乳动物的哮喘或慢性阻塞性肺病的药物中的用途。
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