CN100463916C - 雪胆甲素的制备方法和在制备治疗癌症的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种药用成份雪胆甲素的制备方法，以及在制备治疗癌症的药物中的新应用。本发明所述方法由以下步骤组成：一、取雪胆属植物块根，粉碎，用18-26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60-75℃水浴锅中回收，即得浸膏；二、将提出的浸膏拌入1-2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2-10%，回收洗脱液，得粗品；三、用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得凌柱状结晶，即纯度为98%以上的雪胆甲素。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肝癌、肺癌、胃癌、喉癌以及白血病的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药用成份雪胆甲素的制备方法，以及在制备治疗癌症的药物中的新应用。
背景技术
雪胆素为一种混合物，由雪胆甲素和雪胆乙素组成。最早由陈维新等人从园果雪胆植物(Hemsleya amalils Diels)的根部分离得到(化学学报，1975，33(1)，5)，雪胆甲素鉴定为19—失碳--9β-甲基-10
-3-氢-2β，3，16，20，25-五羟基Δ5羊毛甾烯-11，20-双酮-25-乙酸酯(IIa)即葫芦素F(Ic)的23.24-cc双氢-25-乙酸酯，乙素鉴定为葫芦素F(Ic)的23，24-双氢化合物，为二种新的化合物，并研制雪胆素片剂，于1974年已收载于云南省药品药品标准，用于治疗菌痢肠炎、气管炎、急性扁桃腺炎。
为了寻找提取雪胆素的植物资源，一些学者先后对本属植物进行了资源化学的研究，先后从罗锅底(Hemsleya maerosperma c.y.wu)，长果雪胆(H，dolichocarp W.J.cheng)峨眉雪胆(H，emiensil L.T.Sent)分离出雪胆甲素，乙素，其提取方法与陈氏的提取方法类同，均用乙醇提取生药，提取浸膏在水中用醋酸乙酯提取，提出物上硅胶柱，用氯仿：丙酮：醋酸乙酯三种不同比例的混合溶剂洗脱，洗脱液回收得粗品，再用乙醇重结晶，可分别得到甲素、乙素(参考文献：Rui-Lin-Nie etal.planta Medica 1984:322:施亚琴等云南动植物研究。1990。12(4)，460；中草药1995，26(12)，619)。
中国专利申请CN01102620.0公开了一种“纳米雪胆素制剂药物及其制备方法”，是以纳米雪胆素为原料，按比例配制，制成新的药物制剂，其颗粒细度达1200—1500目，粒径为0.1—200nm，其中绝大部分粒径小于100nm，并具有新的物性。采用微波萃取、减压浓缩、超音速射流技术喷雾干燥等步骤制成。中国专利申请CN03159197.3公开了一种“雪胆素滴丸及其制备方法”，其特征在于：将1重量份经超微粉碎的雪胆素细粉加入至1～10重量份熔融的基质中，充分混匀，滴制法在冷却剂中冷凝成丸，除冷却剂，干燥，即得。中国专利申请CN02134164.8公开了一种“雪胆素类衍生物及其制备方法和作为抗菌剂的应用”，提供一种与现有技术不同的雪胆素衍生物，其制备方法，以该化合物为有效成分的抗菌剂。
目前，尚未发现雪胆甲素在抗癌的药物中应用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种雪胆甲素的制备方法。
本发明的另一目的是提供雪胆甲素在制备治疗癌症的药物中的应用。
本发明所述的雪胆甲素的制备方法由以下步骤组成：
一、取雪胆属植物块根，粉碎，用18—26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60—75℃水浴锅中回收，即得浸膏；
二、将提出的浸膏拌入1—2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿:甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2-10％，回收洗脱液，得粗品；
三、用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得凌柱状结晶，即纯度为98％以上的雪胆甲素。
步骤一中所述的雪胆属植物为罗锅底、长果雪胆、峨眉雪胆等。步骤二中先用纯氯仿洗脱杂质，再用氯仿:甲醇梯度洗脱；步骤三中所得雪胆甲素经高效液相(HPLC)分析纯度在98％以上，熔点226-228℃，经紫外光谱、红外光谱、核磁共振、质谱四谱分析，确认为雪胆甲素。其结构式为：
本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肝癌的药物中的应用。
本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肺癌的药物中的应用。
本发明涉及雪胆甲素在制备治疗胃癌的药物中的应用。
本发明涉及雪胆甲素在制备治疗喉癌的药物中的应用。
本发明涉及雪胆甲素在制备治疗白血病的药物中的应用。
药效学试验资料：
雪胆甲素单体成份经药理体内外抗癌试验，确认本品体外对人体实体癌细胞具有抑制或杀灭作用，对人体肺癌细胞A549生长的Ic50(μg/ml)为1.50，与顺铂的Ic50 1.60基本相同，小鼠体内抗癌试验与制剂类型，及给药途径相关，相比之下，口服给药比注射给药稍差，其乳剂静脉注射对肺癌抑制率最高可达59％。
抗癌试验：
1、体外筛选试验，采用抗癌物质活性的改良MTT法进行。
癌细胞株：
HL60 人白血病细胞株
A549 人肺癌细胞株
SGC-7901 人胃癌细胞株
Bel-7402 人肝癌细胞株
SMMC-7721 人肝癌细胞株
HEP-2 人喉癌细胞株
GLC-15 人肺癌细胞株
实验结果：
对7株人肿瘤细胞生长的IC50(μg/ml)
从上表可见，在本实验条件下，雪胆甲素对人体肿瘤细胞显示出较为明显的杀灭作用，但对不同组织来源的肿瘤细胞具有较明显的差异，提示雪胆甲素对不同肿瘤细胞具有相对选择性。
2、体内试验
采用昆明小鼠分别接种H22肝癌与小鼠Lewis肺癌，采用三种制剂，混悬剂、乳剂、冻干制剂三种给药途径，灌胃，腹腔注射，静脉注射，剂量分高、中、低三个治疗剂量，与阳性对照比较，计算抗肿瘤抑制率，实验结果见下面各表：
表1 雪胆甲素混悬剂灌胃给药对小鼠H22肝癌的疗效试验
与阴性对照组比较***P<0.01。本实验具有显著性差异。
表2 雪胆甲素混悬剂腹腔给药对小鼠H22肝癌接肿疗效试验
| 样品 | 剂量 | 给药方案 | 动物数(只) | 动物体重(g) | 瘤重(g) | 抑制率 |
| mg/kg/d | igx10qd | 始/终 | 始/终 | X±SD | ||
| 雪胆甲素 | 90 | igx10qd | 10/9 | 21.1/27.6 | 1.31±0.12 | 57.05 |
| 雪胆甲素 | 60 | igx10qd | 10/10 | 21.0/24.6 | 1.49±0.12 | 51.05 |
| 雪胆甲素 | 30 | igx10qd | 10/10 | 20.8/25.4 | 1.95±0.12 | 36.07 |
| 阳性对照CTX | 30 | ipx7qd | 10/10 | 21.2/23.1 | 0.33±0.13 | 89.18 |
| 阴性对照 | 相应溶剂 | igx10qd | 20/20 | 20.8/25.9 | 3.05±0.28 |
与阴性对照组相比***P<0.01。
表3 雪胆甲素乳剂对小鼠H22肝癌静脉给药试验疗效表
| 样品 | 剂量 | 给药方案 | 动物数(只) | 动物体重(g) | 瘤重(g) | 抑制率 |
| mg/kg/d | ivx10qd | 始/终 | 始/终 | X±SD | ||
| 雪胆甲素 | 15 | ivx10qd | 10/10 | 19.5/25.3 | 1.48±0.11 | 55.02 |
| 雪胆甲素 | 10 | ivx10qd | 10/10 | 19.3/25.9 | 1.76±0.08 | 44.12 |
| 雪胆甲素 | 5 | ivx10qd | 10/10 | 19.4/25.1 | 2.13±0.20 | 32.38 |
| 阳性对照CTX | 30 | ivx7qd | 10/10 | 19.6/22.9 | 0.31±0.13 | 90.16 |
| 阴性对照 | 相应溶剂 | ivx10qd | 10/10 | 19.4/26.0 | 3.15±0.44 |
与阴性对照组相比***P<0.01。
表4 雪胆甲素乳剂对小鼠Lewis肺癌静脉给药试验疗效表
| 样品 | 剂量 | 给药方案 | 动物数(只) | 动物体重(g) | 瘤重(g) | 抑制率 |
| mg/kg/d | ivx10qd | 始/终 | 始/终 | X±SD | ||
| 雪胆甲素 | 15 | ivx10qd | 10/10 | 19.5/22.1 | 1.16±0.16 | 59.30 |
| 雪胆甲素 | 10 | ivx10qd | 10/10 | 19.1/22.9 | 1.50±0.14 | 47.37 |
| 雪胆甲素 | 5 | ivx10qd | 10/10 | 19.3/22.4 | 1.69±0.11 | 40.76 |
| 阳性对照CTX | 30 | ivx10qd | 10/10 | 18.7/18.1 | 0.362±0.03 | 87.76 |
| 阴性对照 | 相应溶剂 | ivx10qd | 20/20 | 18.9/23.0 | 2.85±0.23 |
与阴性对照组相比***P<0.01。
表5 雪胆甲素冻干剂对小鼠H22肝癌静脉给药试验疗效表
| 样品 | 剂量 | 给药方案 | 动物数(只) | 动物体重(g) | 瘤重(g) | 抑制率 |
| mg/kg/d | ivx10qd | 始/终 | 始/终 | X±SD | ||
| 雪胆甲素 | 15 | ivx10qd | 10/10 | 20.4/26.7 | 1.61±0.18 | 46.15 |
| 雪胆甲素 | 10 | ivx10qd | 10/10 | 20.7/25.9 | 1.82±0.19 | 39.13 |
| 雪胆甲素 | 5 | ivx10qd | 10/10 | 20.5/26.8 | 2.06±0.18 | 31.1 |
| 阳性对照CTX | 30 | Ipx7qd | 10/10 | 20.9/24.1 | 0.402±0.14 | 86.56 |
| 阴性对照 | 相应溶剂 | ivx10qd | 20/20 | 20.3/27.3 | 2.99±0.30 |
表6 雪胆甲素冻干剂对小鼠Lewis肺癌(皮下接种)疗效预试
| 样品 | 剂量 | 给药方案 | 动物数(只) | 动物体重(g) | 瘤重(g) | 抑制率 |
| mg/kg/d | ivx10qd | 始/终 | 始/终 | X±SD | ||
| 雪胆甲素 | 15 | ivx10qd | 10/10 | 18.0/20.7 | 1.20±0.20 | 51.20 |
| 雪胆甲素 | 10 | ivx10qd | 10/10 | 17.7/21.1 | 1.34±0.18 | 45.31 |
| 雪胆甲素 | 5 | ivx10qd | 10/10 | 18.1/20.5 | 1.56±0.14 | 36.33 |
| DDP | 7 | Ipx2，第1，3天 | 10/10 | 18.4/18.1 | 0.172±0.06 | 92.98 |
| 阴性对照 | NS | ivx10qd | 20/20 | 17.9/22.4 | 2.45±0.22 |
***P值<0.01与阴性对照组相比。
结论：通过上述实验证明，雪胆甲素对各种癌症，包括肝癌，肺癌，胃癌，喉癌，白血病等具有显著的抑制或杀灭作用，其作用强度与剂型、给药途径和剂量有关。
附图说明
图1为高效液相法分析图谱。
具体实施方式
实施例1：取云南巧家县地区罗锅底5kg，粉碎成中粉，盛入渗流容器中，在15-25℃，加24倍量丙酮浸泡48小时后，按中国药典渗漉法进行渗漉，回收渗漉液，提取物拌入等量的硅胶，50-70℃干燥，上硅胶柱，用氯仿：甲醇为洗脱液进行梯度洗脱，收集在3-5％甲醇浓度的洗脱液，回收后即可得到粗品，用甲醇多次重结晶，得凌柱晶，熔点226—228℃，HPLC分析纯度98.98％。见图1，经紫外、红外光谱、核磁共振、质谱四谱分析，确认为雪胆甲素。
以上述雪胆甲素为单体成分，按照常规工艺制成混悬剂、乳剂、冻干制剂、纳米冻干剂、片剂、丸剂、滴丸、胶囊剂、控释剂、微囊剂、片剂、脂质体等剂型。用于肝癌、肺癌、胃癌、喉癌以及白血病的治疗。
Claims (3)
1.一种雪胆甲素的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：
一、取雪胆属植物块根，粉碎，用18—26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60—75℃水浴锅中回收，即得浸膏；
二、将提出的浸膏拌入1—2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿:甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2-10％，回收洗脱液，得粗品；
三、用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得凌柱状结晶，即纯度为98％以上的雪胆甲素。
2.如权利要求1所述的雪胆甲素的制备方法，其特征在于所述的雪胆属植物为罗锅底、长果雪胆、峨眉雪胆。
3.如权利要求1所述的雪胆甲素的制备方法，其特征在于所述的步骤二中先用纯氯仿洗脱杂质，再用氯仿:甲醇梯度洗脱。
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