CN102633760B - 一种异秦皮啶结晶化合物及含有该化合物的肿节风分散片和滴丸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种异秦皮啶结晶化合物及含有该化合物的肿节风分散片及滴丸。所述的异秦皮啶结晶化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图特征峰在2θ为6.8°、11.4°、12.0°、12.6°、14.8°、15.8°、18.0°、19.4°、20.1°、21.7°、23.4°、25.6°、28.0°、29.0°和30.6°处显示。本发明还涉及含有该化合物的肿节风分散片和肿节风滴丸。该发明的制剂显著提高了稳定性和生物利用度，提高了制剂质量，保障了患者的用药安全。此外，还具有质量稳定、剂量准确、药物含量差异小，易实施机械化大生产，产量大，成本低的优点。

Description

一种异秦皮啶结晶化合物及含有该化合物的肿节风分散片和滴丸

技术领域

本发明涉及一种对呼吸系统、消化系统的炎症性疾患(如肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎等)具有较高疗效，还用于骨伤科疾病及各种癌症辅助治疗的药物，具体地说涉及一种异秦皮啶结晶化合物及含有该化合物的肿节风分散片及肿节风滴丸。

背景技术

肿节风为金粟兰科植物草珊瑚(Ssrcandraglabra Thunb)的全草，又名九节茶、接骨木等。具有疏风解表，清热解毒，止咳化痰的功能。肿节风临床应用范围广泛，特别是对呼吸系统、消化系统的炎症性疾患(如肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎等)具有较高疗效，还用于骨伤科疾病及各种癌症辅助治疗。

肿节风提取物是肿节风全草的提取物，近代研究表明，肿节风提取物含有多种活性成分，具有多种药理作用。系统化学成分预试验表明，肿节风提取物含有酚类、鞣质、黄酮苷、香豆素和内酯，目前分离出的化合物有30多个，包括倍半萜(苷)类13个，黄酮(苷)类9个，有机酸类2个，香豆素类3个等。现代药理和毒理研究表明肿节风具有抗菌消炎、抑制流感病毒、抗肿瘤、促进骨折愈合及镇痛等多种活性。

以肿节风提取物制成的肿节风片已收录于2000版《中国药典》中。原片剂的工艺技术特点是：肿节风提取物加适量辅料，制成颗粒，压片而成。

传统的肿节风片崩解较慢，溶出很差，直接影响了药物的吸收和应用，疗效缓慢。目前研究的新型肿节风制剂有滴丸、胶囊等，如中国专利申请03128756.5公开的一种肿节风口服滴丸及制备工艺。中国专利申请03118836.2公开的一种肿节风胶囊的制备方法。但这些制剂的溶出度很差，直接影响了药物的应用和疗效。

针对上述缺陷，CN1634265A公开了一种肿节风分散片及其制备方法，属于中成药及其制备方法；旨在提供一种释药迅速、生物利用度高、制备工艺简单的肿节风片改良剂型及其制备方法。其技术方案为：将肿节风3125g切碎，加8倍重量的水煎煮三次，每次1小时；合并煎液，将滤过后的煎液减压浓缩至相对密度为1.25-1.30的稠膏；将该稠膏真空干燥后粉碎过80-180目筛并与备用的肿节风混合均匀后压片成型。本发明崩解、吸收迅速，口感良好、易于服用且制备简单成本低。可广泛用于肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎等属于热毒雍盛症候者，对癌症也有一定的辅助疗效。

CN1939358A涉及一种肿节风分散片。本发明药物以肿节风干浸膏为原料，制备肿节风提取物的细粉，加入适量辅料制成3分钟内可完全崩解且达到均匀分散状态的肿节风分散片，具有清热解毒，消肿散结功效。用于肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎属热毒雍盛症候者，并可用于癌症辅助治疗。并具有遇水能快速崩解，溶解成香、甜的溶液，更易为病人接受和服用，且携带使用更为方便等特点。本发明优选的辅料能使得肿节风分散片崩解更为快速。

CN1682883A涉及一种肿节风固体分散片及其制备方法。采用肿节风提取物为药物活性成分，加入载体材料，载体选自聚乙烯吡咯烷酮类、聚乙二醇类、环糊精类、表面活性剂类、脲类、有机酸类和糖类中的至少一种或几种的混合物；肿节风提取物与载体的重量比为1∶5-1∶30.分别采用研磨法、喷雾干燥法、熔融法、溶剂法制备肿节风固体分散片，可制成胶囊、片剂和颗粒剂型。本发明能增大药物溶解度，能促进吸收，增加药物稳定性。广泛应用于抗菌消炎、抑制流感病毒、抗肿瘤、促进骨折愈合及镇痛等方方面。

香豆素类化合物是肿节风中最早报道的化学成分之一，通过药理试验，认为异秦皮啶是肿节风的主要有效成分之一，而且药典也是以异秦皮啶作为控制肿节风质量的指标成分。

肿节风中各化学物质的含量均较少，临床使用的肿节风制剂质量控制一般采用测定其中延索酸或异秦皮啶来控制质量，而延胡索酸为肿节风中抗炎的指标性成份，对于用于抗菌消炎的肿节风制剂有意义，但对于用于抗肿瘤的肿节风制剂则意义不大；2005版药典采用测定肿节风异秦皮啶的含量控制肿节风药材的质量，但由于肿节风中指标性成分异秦皮啶的绝对含量很少，约占干燥全草的0.02％，加之提取工艺落后，大都采用传统的水提醇沉，制剂中异秦皮啶等成分含量大都很低，质量没有保证，影响了疗效的发挥，制约了对肿节风和异秦皮啶进一步的开发应用。即使是注射液，其中异秦皮啶能够仅为10-340μg/ml，占总固体物中的2％左右，如此低的含量，治疗效果很难保证。因此肿节风的提取工艺及肿节风中异秦皮啶的富集纯化工艺趋待研究。异秦皮啶作为肿节风的主要活性成分，是肿节风提取的关键指标。现有文献报道肿节风提取方法主要有溶剂萃取法、膜分离法等。溶剂萃取法需要使用大量的有机溶剂，成本较高，安全性差，提取周期也较长；膜分离法成本高，效果也不够理想，异秦皮啶含量依然很低，且容易堵塞膜孔，膜再生困难。

同时，将肿节风的提取工艺，肿节风中主要成分的提取富集方法，有确切疗效的制剂，制剂中主要成分，主要成分的作用及作用机制这几方面联系起来研究，具有重要的科学价值和广阔的应用前景，可能会取得突破性的进展。

而肿节风的各种制剂中，均以肿节风药材的提取物入药，其虽然含有多种有效成分，但异秦皮啶为主要的有效成分之一。“肿节风滴丸的质量标准研究”(刘根才，戴德雄，李金和.肿节风滴丸的质量标准研究[J].中草药，41(8)：1303-1304)以异秦皮啶为检测指标，“肿节风分散片的溶出度测定”(黄顺旺，许龙，曹明成.肿节风分散片的溶出度测定[J].中成药，30(9)：1389-1391)以异秦皮啶为肿节风分散片的有效成分，并选其为溶出度的测定指标。可见，异秦皮啶的含量等将直接影响制剂的质量等。

本发明从肿节风的提取工艺入手，得到了一种异秦皮啶结晶化合物。采用该异秦皮啶结晶化合物与药学上可接受的辅料制备的分散片和滴丸具有更加优良的效果。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种异秦皮啶结晶化合物。

本发明的第二目的在于提供一种药物组合物，该药物组合物含有本发明所提供的异秦皮啶结晶化合物，所述的药物组合物可制备成药学上可接受的剂型，如肿节风分散片、肿节风滴丸。

为实现本发明的第一目的，本发明采用如下技术方案：

一种异秦皮啶结晶化合物，其中，所述的异秦皮啶结晶化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图特征峰在2θ为6.8°、11.4°、12.0°、12.6°、14.8°、15.8°、18.0°、19.4°、20.1°、21.7°、23.4°、25.6°、28.0°、29.0°和30.6°处显示，所述的异秦皮啶结晶化合物具有如下结构式：

所述的异秦皮啶结晶化合物是从肿节风中提取制备得到的。

所述的异秦皮啶结晶化合物的制备方法为：

1)取肿节风，切碎，煎煮三次，每次加12倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60℃时1.05～1.10的浸膏A；

2)将浸膏溶于热水中，微孔滤膜过滤，所得溶液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱径高比为1∶10～14，先用水以3～6V/h的流速洗脱，再用5倍柱床体积的40％乙醇溶液以3～6V/h的流速洗脱，收集40％乙醇洗脱溶液，回收乙醇，得浸膏B；

3)将浸膏B溶于热水中，所得溶液上200-300目的硅胶柱，依次用正己烷、乙酸乙酯体积比为10∶1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为6∶1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为3∶1的洗脱剂洗脱至薄层层析跟踪监测至洗脱液中无异秦皮啶组分，洗脱剂流速为1.5～2.0ml/min，等体积收集洗脱液，将收集得到的洗脱液用薄层层析进行检测，合并与异秦皮啶标准品Rf值相同的洗脱液，回收溶剂，得到异秦皮啶粗品；而将与异秦皮啶标准品Rf值不相同的洗脱液合并后回收溶剂，干燥得到固形物；

4)将异秦皮啶粗品溶于乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中，再加入活性炭，搅拌吸附，过滤，收集滤液，超声场下向滤液中滴加水，至黄色结晶析出；静置养晶，过滤，用乙醇洗涤，干燥，得到黄色结晶性粉末。

步骤4)中，所述混合物溶剂中乙醇和四氢呋喃的体积比为1∶3-8，所述超声场的频率为0.4～0.6MHz，所述的静置养晶为在15-28℃下养晶2-4小时。

药物晶体结构对其理化性质如熔点、密度、硬度、制剂稳定性等有重要影响，晶型不同可能会造出药物溶出度和生物利用度的不同，从而影响药物疗效。异秦皮啶是肿节风的主要有效成分，本发明从晶体结构的研究出发，采用本发明的方法制得了一种新的异秦皮啶晶体，以获得理化性质更好的肿节风制剂。

本发明的异秦皮啶结晶化合物测定其熔点为114～116℃。

本发明还提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括本发明前述的异秦皮啶结晶化合物或前述的制备方法制得的异秦皮啶结晶化合物的肿节风提取物。

所述的药物组合物可制备成药学上可接受的剂型。

本发明的药物组合物优选制备成肿节风分散片、肿节风滴丸。

当所述的药物组合物制备成肿节风分散片，各组成成分重量配比为：肿节风2000-2500份、崩解剂190-240份、填充剂0-30份、粘合剂0-10份、润滑剂8-13份。

所述的崩解剂为微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠或预胶化淀粉中的任意一种或几种；

所述的填充剂为乳糖或甘露醇中的一种或两种；

所述的粘合剂为聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000或聚乙二醇4000中的任意一种或几种；

所述的润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、十二烷基硫酸镁或二氧化硅中的任意一种或几种。

本发明所述的肿节风分散片，其优选由肿节风2000-2500重量份、交联羧甲基纤维素钠60-80重量份、低取代羟丙基纤维素60-80重量份、二氧化硅6-10重量份、微晶纤维素70-80重量份和硬脂酸镁2-3重量份制备而成；更优选由肿节风2344重量份、交联羧甲基纤维素钠70重量份、低取代羟丙纤维素70重量份、二氧化硅8重量份、微晶纤维素75重量份和硬脂酸镁2.8重量份制备而成。

当所述的药物组合物制备成肿节风滴丸时，其由3000-3500重量份肿节风、500-600重量份PEG-4000和80-120重量份PEG-6000制备而成；优选由3125重量份肿节风、567重量份PEG-4000和100重量份PEG-6000制备而成。

同时，本发明还提供所述药物组合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

1)取肿节风，切碎，煎煮三次，每次加12倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60℃时1.05～1.10的浸膏A；

2)将浸膏溶于热水中，微孔滤膜过滤，所得溶液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱径高比为1∶10～14，先用水以3～6V/h的流速洗脱，再用5倍柱床体积的40％乙醇溶液以3～6V/h的流速洗脱，收集40％乙醇洗脱溶液，回收乙醇，得浸膏B；

3)将浸膏B溶于热水中，所得溶液上200-300目的硅胶柱，依次用正己烷、乙酸乙酯体积比为10∶1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为6∶1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为3∶1的洗脱剂洗脱至薄层层析跟踪监测至洗脱液中无异秦皮啶组分，洗脱剂流速为1.5～2.0ml/min，等体积收集洗脱液，将收集得到的洗脱液用薄层层析进行检测，合并与异秦皮啶标准品Rf值相同的洗脱液，回收溶剂，得到异秦皮啶粗品；而将与异秦皮啶标准品Rf值不相同的洗脱液合并后回收溶剂，干燥得到固形物；

4)将异秦皮啶粗品溶于乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中，再加入活性炭，搅拌吸附，过滤，收集滤液，超声场下向滤液中滴加水，至黄色结晶析出；静置养晶，过滤，用乙醇洗涤，干燥，得到黄色结晶性粉末；

5)将步骤3)所得的固形物和步骤4)所得的黄色结晶性粉末混合，得到肿节风提取物；

6)将所得的肿节风提取物与药学上可接受的辅料制备成药学上可接受的剂型。

当制备成肿节风分散片时，步骤6)为：将所得的肿节风提取物与填充剂、崩解剂混匀，用粘合剂制粒，干燥，再加入润滑剂混匀，压制成1000片，即得。

当所述的肿节风分散片为本发明的优选或最优选处方时，其步骤6)为：将所得的肿节风提取物与所述用量65-75％的交联羧甲基纤维素钠、所述用量的低取代羟丙基纤维素、所述用量85-95％二氧化硅和所述用量的微晶纤维素混匀，制粒，干燥，再加入余量的交联羧甲基纤维素钠、余量的二氧化硅和所述用量的硬脂酸镁混匀，压制成1000片，即得。

当制备成肿节风滴丸时，步骤6)为：取所述用量的聚乙二醇4000和聚乙二醇6000，加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

本发明所制得的制剂中异秦皮啶的含量显著提高，从而显著提高了制剂质量，保障了患者的用药安全。此外，还具有质量稳定、剂量准确、药物含量差异小，易实施机械化大生产，产量大，成本低的优点。

附图说明

图1为本发明制备的异秦皮啶结晶化合物的X-射线粉末衍射图；

图2为本发明的肿节风分散片与现有技术的肿节风分散片的体外溶出曲线。

具体实施方式

以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。

【实施例1】异秦皮啶结晶化合物的制备

1)取肿节风2344g，切碎，煎煮三次，每次加12倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60℃时1.05～1.10的浸膏A；

2)将浸膏溶于热水中，微孔滤膜过滤，所得溶液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱径高比为1∶10，先用水以3V/h的流速洗脱，再用5倍柱床体积的40％乙醇溶液以3V/h的流速洗脱，收集40％乙醇洗脱溶液，回收乙醇，得浸膏B；

3)将浸膏B溶于热水中，所得溶液上200目的硅胶柱，依次用正己烷、乙酸乙酯体积比为10∶1的洗脱剂洗脱100min，正己烷、乙酸乙酯体积比为6∶1的洗脱剂洗脱100min，正己烷、乙酸乙酯体积比为3∶1的洗脱剂洗脱至薄层层析跟踪监测至洗脱液中无异秦皮啶组分，洗脱剂流速为1.5ml/min，等体积收集洗脱液，将收集得到的洗脱液用薄层层析进行检测，合并与异秦皮啶标准品Rf值相同的洗脱液，回收溶剂，得到异秦皮啶粗品；而将与异秦皮啶标准品Rf值不相同的洗脱液合并后回收溶剂，干燥得到固形物；

4)将步骤3)所得的异秦皮啶粗品溶于1670ml乙醇和四氢呋喃(乙醇和四氢呋喃的体积比为1∶3)的混合溶剂中，再加入活性炭，搅拌吸附，过滤，收集滤液，超声场下向滤液中滴加水，至黄色结晶析出；静置养晶，过滤，用乙醇洗涤，干燥，得到黄色结晶性粉末，即为异秦皮啶结晶化合物。

所述的异秦皮啶结晶化合物具有如下结构式：

该异秦皮啶结晶化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图特征峰在2θ为6.8°、11.4°、12.0°、12.6°、14.8°、15.8°、18.0°、19.4°、20.1°、21.7°、23.4°、25.6°、28.0°、29.0°和30.6°处显示，见图1所示。

以下为实施例2-9，具体操作步骤同实施例1，工艺参数见表1：

表1、实施例2-9

对实施例2-9所得的异秦皮啶结晶化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图与实施例1相似。

以下为制剂实施例：

【制剂实施例1】肿节风分散片的制备

原料组成：肿节风2344g、交联羧甲基纤维素钠70g、低取代羟丙纤维素70g、二氧化硅8g、微晶纤维素75g和硬脂酸镁2.8g。

制备方法：将实施例1的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例1的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；将所得的取肿节风提取物与50g交联羧甲基纤维素钠、70g低取代羟丙基纤维素、7.2g二氧化硅和75g微晶纤维素混匀，制粒，干燥，再加入20g交联羧甲基纤维素钠、0.8g二氧化硅和2.8g硬脂酸镁混匀，压制成1000片，得到所述的肿节风分散片。

【制剂实施例2】肿节风分散片的制备

原料组成：肿节风2400g、交联羧甲基纤维素钠80g、羧甲基淀粉钠60g、二氧化硅6g、微晶纤维素80g和硬脂酸镁2g。

制备方法：将实施例2的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例2的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；将所得的肿节风提取物与52g交联羧甲基纤维素钠、60g羧甲基淀粉钠、5.1g二氧化硅和80g微晶纤维素混匀，制粒，干燥，再加入28g交联羧甲基纤维素钠、0.9g二氧化硅和2g硬脂酸镁混匀，压制成1000片，得到所述的肿节风分散片。

【制剂实施例3】肿节风分散片的制备

原料组成：肿节风2000g、交联羧甲基纤维素钠60g、羧甲基纤维素钠80g、二氧化硅10g、预胶化淀粉70g和硬脂酸镁3g。

制备方法：将实施例3的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例3的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；将所得的肿节风提取物与45g交联羧甲基纤维素钠、80g羧甲基纤维素钠、9.5g二氧化硅和70g预胶化淀粉混匀，制粒，干燥，再加入28g交联羧甲基纤维素钠、0.5g二氧化硅和3g硬脂酸镁混匀，压制成1000片，得到所述的肿节风分散片。

【制剂实施例4】肿节风分散片的制备

原料组成：肿节风2500g、交联羧甲基纤维素钠68g、聚乙烯吡咯烷酮75g、二氧化硅7.5g、乳糖72g和微粉硅胶2.5g。

制备方法：将实施例4的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例4的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；将所得的肿节风提取物与47.6g交联羧甲基纤维素钠、75g聚乙烯吡咯烷酮、6.75g二氧化硅和72g乳糖混匀，制粒，干燥，再加入20.4g交联羧甲基纤维素钠、0.75g二氧化硅和2.5g微粉硅胶混匀，压制成1000片，得到所述的肿节风分散片。

【制剂实施例5】肿节风分散片的制备

原料组成：肿节风2300g、交联羧甲基纤维素钠60g、聚乙烯吡咯烷酮80g、二氧化硅10g、预胶化淀粉70g和硬脂酸镁3g。

制备方法：将实施例5的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例5的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；将所得的肿节风提取物与45g交联羧甲基纤维素钠、80g聚乙烯吡咯烷酮、9.5g二氧化硅和70g预胶化淀粉呢混匀，制粒，干燥，再加入28g交联羧甲基纤维素钠、0.5g二氧化硅和3g硬脂酸镁混匀，压制成1000片，得到所述的肿节风分散片。

【制剂实施例6】肿节风滴丸的制备

原料组成：3125g肿节风、567g聚乙二醇-4000和100g聚乙二醇-6000。

制备方法：将实施例6的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例6的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；取所述用量的聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000，80℃加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

【制剂实施例7】肿节风滴丸的制备

原料组成：3000g肿节风、500g聚乙二醇-4000和120g聚乙二醇-6000。

制备方法：将实施例7的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例7的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；取所述用量的聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000，80℃加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

【制剂实施例8】肿节风滴丸的制备

原料组成：3500g肿节风、600g聚乙二醇-4000和80g聚乙二醇-6000。

制备方法：将实施例8的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例8的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；取所述用量的聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000，80℃加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

【制剂实施例9】肿节风滴丸的制备

原料组成：3250g肿节风、550g聚乙二醇-4000和110g聚乙二醇-6000。

制备方法：将实施例9的步骤4)所制得的黄色结晶性粉末与实施例9的步骤3)中所得的固形物混合，得到肿节风提取物；取所述用量的聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000，80℃加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

试验例1

肿节风制剂中异秦皮啶含量的考察

1、肿节风分散片中异秦皮啶含量的测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

1.1色谱条件与系统适用性试验    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(30∶70)为流动相；检测波长为342nm。理论板数异秦皮啶峰计算应不低于3000。

1.2对照品溶液的制备  取经五氧化二磷减压干燥24小时的异秦皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得。

1.3供试品溶液的制备  取本品10片，精密称定，研细，取60mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W、频率250kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.4测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

按照上述测定方法，分别对试验药(本发明的制剂实施例1-5的肿节风分散片)和对照药(按照CN1634265A实施例1的方法制备)进行测定，结果见表2：

表2、肿节风分散片中异秦皮啶的测定结果

药物	异秦皮啶/(mg·片-1)
		制剂实施例1	0.61
制剂实施例2	0.58
		制剂实施例3	0.57
制剂实施例4	0.56
		制剂实施例5	0.59
对照药	0.35

2、肿节风滴丸中异秦皮啶含量的测定

参照“肿节风滴丸的质量标准研究”(刘根才，戴德雄，李金和.肿节风滴丸的质量标准研究[J].中草药，41(8)：1303-1304)中的方法，分别对试验药(本发明的制剂实施例6-9制备的肿节风滴丸)和对照药(CN101744849A实施例2制备的肿节风滴丸)进行测定，结果见表3：

表3、肿节风滴丸中异秦皮啶的测定结果

药物	异秦皮啶/(mg·粒-1)
		制剂实施例6	0.68
制剂实施例7	0.61
		制剂实施例8	0.63
制剂实施例9	0.60
		对照药	0.21

上述结果表明，本发明的肿节风制剂中异秦皮啶的含量明显高于对照药。

试验例2

肿节风分散片溶出度考察

该试验例在于比较本发明的肿节风分散片和现有技术的肿节风分散片的溶出度。

试验药：本发明制剂实施例1所制备的肿节风分散片；

对照药：按照CN1634265A实施例1的方法制备。

(1)异嗪皮啶含量测定方法：色谱柱：Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.2％磷酸溶液(20∶80)；检测波长：344nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。

(2)溶出度测定方法：按照中国药典2005年版二部附录XC溶出度测定第二法。溶出介质为0.1mol/L的盐酸溶液900ml，温度(37±0.5)℃，转速为100r/min，依法操作，分别在3、5、10、20、30、45min时取样，并及时补加溶出介质；以异嗪皮啶为检测指标，高效液相色谱法测定含量，并计算浓度和各取样时间的累积溶出百分率。

(3)溶出度测定：取肿节风分散片6片，按“(2)”项下方法测定分散片在3、5、10、15、30、45min时的溶出度，结果见图2。

从图2可知，本发明的肿节风分散片的体外溶出优于现有技术的肿节风分散片。

对本发明其它制剂实施例所制备的肿节风分散片也进行了上述相同的试验，其获得的结果相似。

试验例3

肿节风制剂治疗小儿急性上呼吸道感染疗效观察

1、资料与方法

1.1一般资料

选择上呼吸道感染患儿120例，其中男性69例，女性51例，年龄3～15岁。随机分为试验组A、对照组A及试验组B、对照组B各30例。试验组A平均发病时间为1.5d，对照组A平均发病时间为1.6d；试验组B平均发病时间为1.4d，对照组平均发病时间为1.6d。所有病例以发热为主要症状，符合《实用儿科学》第7版的急性上呼吸道感染诊断标准。经胸片证实及查体排除急性支气管炎及急性支气管肺炎，且在后期治疗中排除其他发热性疾病如传染性单核细胞增多等。两组一般情况及病情比较，无统计学差异，具可比性。见表4。

表4、两组临床症状对比例(％)

注：试验组A和对照组A比较，P＞0.05，两组无显著性差异；

试验组B和对照组B比较，P＞0.05，两组无显著性差异

1.2方法

试验组A(给予本发明制剂实施例1的肿节风分散片)男性20例，女性10例；对照组A(给予CN1634265A实施例1制备的肿节风分散片)男性19例，女性11例。两组病人均给予相同对症处理，如必要时给予退热处理、止咳、雾化吸入等。两组病人均口服，一次2片，一日3次。

试验组B(给予本发明制剂实施例6的肿节风滴丸)男性20例，女性10例；对照组B(给予CN101744849A实施例2制备的肿节风滴丸)男性19例，女性11例。两组病人均给予相同对症处理，如必要时给予退热处理、止咳、雾化吸入等。两组病人均口服，一次3丸，一日3次。

1.3观察指标

每日观察患者的体温、鼻塞、流涕、咽痛、咳嗽情况以及用药后的不良反应。

1.4疗效评定

根据国家卫生部制定的《新药(中药)治疗小儿外感发热(急性上呼吸道感染)临床研究指导原则》[1]中的“疗效评定”进行疗效评定：(1)用药24～48h后体温恢复，临床症候大部分消失，异常理化指标接近正常为显效；(2)用药48～72h后体温有所下降，临床症候部分消失，异常理化指标有所改善为有效；(3)不符合以上标准者为无效。

1.5统计处理

两组疗效的比较用秩和检验。

2结果

2.1症状改善情况

见表5。

表5、两组症状改善情况

d

组别	退热时间	咽部红肿消失时间	止涕时间	咳嗽消失时间
					试验组A	1.01±0.58	2.66±1.08	3.16±1.59	2.54±1.03
对照组A	2.59±0.95	3.40±1.29	3.23±1.84	3.95±1.39
					P	＜0.01	＜0.05	＞0.05	＜0.05
试验组B	1.11±0.58	2.63±1.06	3.14±1.56	2.51±1.03
					对照组B	2.61±0.93	3.43±1.26	3.32±1.84	3.98±1.39
P	＜0.01	＜0.05	＞0.05	＜0.05

2.2临床疗效

见表6。

表6、两组疗效对比例

组别	n	显效	有效	无效	有效率(％)
						试验组A	30	12	14	4	86.7
对照组A	30	11	10	9	70.0
						试验组B	30	13	15	2	93.3
对照组B	30	12	10	8	73.3

注：两组有效率差异有显著性，P＜0.05，试验组疗效优于对照组。

2.3 副作用

在应用肿节风分散片和滴丸治疗过程中，未发现明显不良反应。

以上结果表明，本发明的肿节风分散片和肿节风滴丸治疗儿童上呼吸道感染疗效显著，能明显改善临床症状，试验组A、B的临床总有效率均显著高于其对应的各对照组(P＜0.05)。说明本发明所述的异秦皮啶结晶化合物能够显著提高肿节风制剂的疗效，适于广泛推广应用。

对本发明其它制剂实施例所制备的肿节风分散片和肿节风滴丸也进行了上述相同的试验，其获得的结果相似。

Claims (12)

1.一种异秦皮啶结晶化合物，其特征在于，所述的异秦皮啶结晶化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图特征峰在2θ为6.8°、11.4°、12.0°、12.6°、14.8°、15.8°、18.0°、19.4°、20.1°、21.7°、23.4°、25.6°、28.0°、29.0°和30.6°处显示，所述的异秦皮啶结晶化合物具有如下结构式：

2.根据权利要求1所述的异秦皮啶结晶化合物，其特征在于，所述的异秦皮啶结晶化合物是从肿节风中提取制备得到的。

3.权利要求2所述的异秦皮啶结晶化合物的制备方法，其特征在于，该方法为：

1）取肿节风，切碎，煎煮三次，每次加12倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60℃时1.05～1.10的浸膏A；

2）将浸膏溶于热水中，微孔滤膜过滤，所得溶液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱径高比为1:10～14，先用水以3～6V/h的流速洗脱，再用5倍柱床体积的40%乙醇溶液以3～6V/h的流速洗脱，收集40%乙醇洗脱溶液，回收乙醇，得浸膏B；

3）将浸膏B溶于热水中，所得溶液上200-300目的硅胶柱，依次用正己烷、乙酸乙酯体积比为10：1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为6：1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为3：1的洗脱剂洗脱至薄层层析跟踪监测至洗脱液中无异秦皮啶组分，洗脱剂流速为1.5～2.0ml/min，等体积收集洗脱液，将收集得到的洗脱液用薄层层析进行检测，合并与异秦皮啶标准品Rf值相同的洗脱液，回收溶剂，得到异秦皮啶粗品；而将与异秦皮啶标准品Rf值不相同的洗脱液合并后回收溶剂，干燥得到固形物；

4）将异秦皮啶粗品溶于乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中，再加入活性炭，搅拌吸附，过滤，收集滤液，超声场下向滤液中滴加水，至黄色结晶析出；静置养晶，过滤，用乙醇洗涤，干燥，得到黄色结晶性粉末。

4.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括一含有权利要求2所述的异秦皮啶结晶化合物或权利要求3所述的制备方法制得的异秦皮啶结晶化合物的肿节风提取物。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物可制备成药学上可接受的剂型。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物制备成肿节风分散片或肿节风滴丸。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，当所述的药物组合物制备成肿节风分散片时，其由肿节风2000-2500重量份、崩解剂190-240重量份、填充剂0-30重量份、粘合剂0-10重量份、润滑剂8-13重量份制备而成；

当所述的药物组合物制备成肿节风滴丸时，其由3000-3500重量份肿节风、500-600重量份PEG-4000和80-120重量份PEG-6000制备而成。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，当所述的药物组合物制备成肿节风滴丸时，其由3125重量份肿节风、567重量份PEG-4000和100重量份PEG-6000制备而成。

9.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的崩解剂为微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠或预胶化淀粉中的任意一种或几种；

所述的填充剂为乳糖或甘露醇中的一种或两种；

所述的粘合剂为聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000或聚乙二醇4000中的任意一种或几种；

所述的润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、十二烷基硫酸镁或二氧化硅中的任意一种或几种。

10.一种权利要求5-9任意一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

1）取肿节风，切碎，煎煮三次，每次加12倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为60℃时1.05～1.10的浸膏A；

2）将浸膏溶于热水中，微孔滤膜过滤，所得溶液上大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱径高比为1:10～14，先用水以3～6V/h的流速洗脱，再用5倍柱床体积的40%乙醇溶液以3～6V/h的流速洗脱，收集40%乙醇洗脱溶液，回收乙醇，得浸膏B；

3）将浸膏B溶于热水中，所得溶液上200-300目的硅胶柱，依次用正己烷、乙酸乙酯体积比为10：1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为6：1的洗脱剂洗脱100～120min，正己烷、乙酸乙酯体积比为3：1的洗脱剂洗脱至薄层层析跟踪监测至洗脱液中无异秦皮啶组分，洗脱剂流速为1.5～2.0ml/min，等体积收集洗脱液，将收集得到的洗脱液用薄层层析进行检测，合并与异秦皮啶标准品Rf值相同的洗脱液，回收溶剂，得到异秦皮啶粗品；而将与异秦皮啶标准品Rf值不相同的洗脱液合并后回收溶剂，干燥得到固形物；

4）将异秦皮啶粗品溶于乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中，再加入活性炭，搅拌吸附，过滤，收集滤液，超声场下向滤液中滴加水，至黄色结晶析出；静置养晶，过滤，用乙醇洗涤，干燥，得到黄色结晶性粉末；

5）将步骤3）所得的固形物和步骤4）所得的黄色结晶性粉末混合，得到肿节风提取物；

6）将所得的肿节风提取物与药学上可接受的辅料制备成药学上可接受的剂型。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，当制备成肿节风分散片时，步骤6）为：将所得的肿节风提取物与填充剂、崩解剂混匀，用粘合剂制粒，干燥，再加入润滑剂混匀，压制成1000片，即得。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，当制备成肿节风滴丸时，步骤6）为：取所述用量的聚乙二醇4000和聚乙二醇6000，加热至熔融状态；向其中加入所得的肿节风提取物，混合均匀；上滴丸机，以甲基硅油为冷却剂，在85℃恒温滴制成1000g，即得。

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