CN100546602C - 抗肿瘤复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗肿瘤复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂,它是由下述按重量份计的原料制成的药剂:虎杖根2~5;藤梨根1~3;水杨梅根1~3;本发明还提供一种上述制剂的制备方法,包括以下步骤:将虎杖根、藤梨根、水杨梅根中药材或粉碎物混合,用热水浸提,得到提取液;向提取液中加入絮凝剂,静置沉淀,过滤或离心分离去沉淀;调节pH值,得到上清液;将上清液经大孔树脂吸附后,用有机溶剂洗脱;将洗脱液减压浓缩、干燥后,粉碎成细粉;将所得细粉添加辅型剂后,制成片剂或胶囊剂;本发明制剂可以用于制备治疗或预防大肠癌、胃癌等肿瘤的药剂,应用于治疗或预防大肠癌、胃癌等肿瘤疾病。
Description
技术领域
本发明涉及复方中草药制剂,特别涉及一种抗肿瘤复方中草药制剂及其制备方法和应用。
背景技术
复方三根组方中主要包括虎杖根、藤梨根和水杨梅根,来源于经验组方,其配比为等量配比(郁仁存,肿瘤常用方剂选,中医肿瘤学,1997:21)。在治疗消化道肿瘤时提示它具有显著的抗肿瘤作用(包素珍、孙在典等,中药复方三根汤结合化疗治疗中晚期大肠癌120例,辽宁中医杂志,1992(7):33~34),但是其中的有效成分并不明确,并未得到进一步研究。
虎杖为蓼科多年生草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的根,具有清热解毒,祛风利湿,活血通经之功效,含羟基蒽醌类化合物,主要有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芪三酚甙、芪三酚以及多种多聚糖等。虎杖根对小鼠肉瘤180和人类子宫颈癌细胞的抑制率较好,50%煎剂对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌及福氏痢疾杆菌等有抑制作用;虎杖中的有效成分为蒽醌类化合物,其药理作用研究得较多(张喜云,虎杖的化学成分、药理作用与提取分离,天津药学,1999,11(3):13),但其有效部位的分离方法研究得较少,有人采用渗漉、浸泡、回流、索氏提取和超声提取方法对虎杖蒽醌的提取率进行研究(曾里,袁佩,虎杖蒽醌提取分离方法的优化研究,中国药业,2003,12(9):45~48),最终以70%乙醇抽提较好,提取率最高为1.58%;白黎芦醇是近年来发现的虎杖中的又一抗癌活性成分,但在虎杖中的含量较低,仅为0.1%。公开号为CN1277954A的中国发明专利中报道了采用有机溶剂提取、萃取、浓缩、硅胶柱层析、结晶、重结晶获得较高纯度白黎芦醇;公开号为CN1341587A的中国发明专利公开了利用乙酸乙酯直接萃取技术;公开号为CN1513822A的中国发明专利公开了微波萃取技术,公开号为CN1513823A的中国发明专利公开了超临界CO2萃取技术,公开号为CN1546503A的中国发明专利公开了用聚酰胺层析分离技术。以上技术均未提及简便易行、成本低廉的大孔树脂提取法,也未将提取的有效部位直接用于复方药物。
藤梨根为猕猴桃科落叶大藤本猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)的根,具有解毒活血,清热利湿的作用,含维生素C、糖类、色素及氨基酸。有人发现了它具有抗癌作用(陈德轩,潘立群,抗肿瘤植物药藤梨根,中药材,2004,27(2):86~87),其乙醇提取物腹腔给药对试验S180的抑制剂为30~40%。有人对其成分进行研究,发现乙酸乙酯的提取物对白血病细胞和结肠癌低分化腺癌细胞的抑制率分别达到54%和60%(邹益友,谭桂山,谢兆霞,猕猴桃根抑制肿瘤细胞的实验研究,湖南中医药导报,1999,5(4):37~38),但未对其有效部位和成分分离方法作进一步研究,也无相关专利。
水杨梅根为茜草科落叶灌木植物水杨梅(Adina rubella(Sieb.etZucc.)Hance)的根,具有清热解毒,散淤止痛之功效。根醇浸膏每日以5g/kg连续灌胃或腹腔注射6d,对小鼠白血病L615有抑制作用,抑制率为21.4%,对宫颈癌细胞及小白鼠肉瘤AK,及大白鼠肉瘤均有抑制作用(郁仁存,肿瘤常用中草药,中医肿瘤学,1997:72),这提示它有广谱抗肿瘤作用。目前对水杨梅根研究停留在对药材的粗浅认识上,没有从中找到主要的抗癌活性成分,因此揭示其活性成分及作用机理,对于其作为抗肿瘤药物的研究与开发具有指导意义。水杨梅的花果序中含儿茶素类化合物,另有熊果酸、齐墩果酸、β-谷甾醇、水杨梅甲素及生物碱等,但水杨梅根的有效成分报道较少,只有何直升等(何直升等,水杨梅化学成分的研究,中草药,1996,26(6):285~288)曾报道了采用硅胶柱层析自水杨梅根中分离的数种新的Quinovic acid糖苷化合物,但是未能进行抗肿瘤活性研究。Quinovic acid糖苷在其它抗肿瘤植物中也被发现,早在1978年Raffauf RF等自金鸡纳树皮中发现了此种化合物,具有抗肿瘤活性,以后在其它植物中也发现(Raffauf RF,etal.Antitumor Plants.V.Constituents of Cinchona pubescens,Lloydia,1978,41(5):432~434),表明它也有可能是水杨梅根中主要抗肿瘤活性物质。但未对其有效部位和成分分离方法作进一步研究。
虎杖根、藤梨根、水杨梅根及其组方有效成分或部位的大孔树脂分离方法及制剂技术未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述现有技术存在的缺陷和不足,提供一种抗肿瘤复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂。
本发明的另一目的是提供一种上述制剂的制备方法。
本发明的再一目的是提供一种上述制剂在制备治疗或预防大肠癌、胃癌等肿瘤疾病的药中的应用。
本发明目的通过下述技术方案实现:本抗肿瘤复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂是由下述按重量份计的原料制成:虎杖根2~5;藤梨根1~3;水杨梅根1~3。
将上述各组分制成本发明制剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将虎杖根、藤梨根、水杨梅根中药材或其粉碎物混合,用热水浸提,水温80~100℃,提取时间1~2小时,过滤或离心分离去药渣,保留提取液;热水浸提重复提取2~3次,合并提取液;
(2)向提取液中加入絮凝剂,静置沉淀,过滤或离心分离去沉淀;
(3)调节pH值,静置沉淀,过滤或离心分离去沉淀,得到上清液;
(4)将上清液经大孔树脂吸附后,用有机溶剂洗脱;
(5)将洗脱液减压浓缩、干燥后,粉碎成细粉;
(6)将所得细粉添加辅型剂后,制成片剂或胶囊剂。
所述步骤(1)中的热水浸提中,药水比分别是第一次药水比1∶8~12,第二次药水比1∶4~6,第三次药水比1∶4~6,其中药水比为质量百分比;所述提取液可以经浓缩或未经浓缩。
所述步骤(2)中的絮凝剂加入量可优选按重量百分比计为药材量的0.1~1%。絮凝剂可以是甲壳素、ZTC絮凝剂(天津正天成澄清技术有限公司产品)或明胶等中任一种。
所述步骤(3)中的提取液pH值调节为2~5,调节pH值所用试剂为盐酸或醋酸等酸性试剂。
所述步骤(4)中的大孔树脂为含各种非极性或弱极性的大孔树脂;洗脱所用有机溶剂可以是乙醇水溶液、丙酮水溶液等有机溶剂。
所述步骤(5)所述干燥工艺可为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥等方法。
以本发明制备的抗肿瘤复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂,可以用于制备治疗或预防大肠癌、胃癌、直肠癌等肿瘤的药剂;所述的药剂可以是任何一种药剂学上包括的剂型。
本发明相对现有技术具有如下的优点及效果:(1)采用80~100℃浸提2~3次,每次1~2小时,可以尽可能提高药材中有效成分的转移率;(2)采用絮凝剂沉淀,避免了乙醇沉淀法因沉淀不完全造成的损失和乙醇回收多增加的步骤;(3)采用调酸法,除去酸不溶物,提高大孔树脂的吸附效果;(4)采用大孔树脂对提取液中活性成分的精制,可以有效地纯化中药虎杖根、藤梨根、水杨梅根的有效部位(有效成分含量达80%以上),便于工业化生产;(5)将虎杖根、藤梨根、水杨梅根的有效部位按一定比例混合制成制剂,可有效提高生物利用率,提高药效;(6)填补了现有虎杖根、藤梨根、水杨梅根有效部位分离提取及制剂的缺乏,开发出一种新型的抗肿瘤有效部位或有效成分制剂。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
虎杖根2Kg、藤梨根1Kg、水杨梅根1Kg,粉碎成粗粉,加入100℃沸水40L,计时浸提90分钟,期间保持加热,维持微沸状态。过滤,滤渣再加入100℃沸水20L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持微沸状态。过滤,弃滤渣,合并两次的滤液,滤液经常压浓缩至热比重1.05,加入絮凝剂甲壳素4g,搅拌后离心(3000转/分钟,10分钟),保留上清液,用10%HCl调pH至2,静置,离心去沉淀(同上条件),上清液经过大孔树脂HPD100,以70%乙醇水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物真空干燥,真空度大于0.01Mpa,干燥时间3小时。共制得干燥品105g,此干燥品中蒽醌类化合物含量89%。
实施例2
虎杖根5Kg、藤梨根1Kg、水杨梅根1Kg,粉碎成粗粉,加入100℃沸水84L,计时浸提120分钟,期间保持加热,维持微沸状态。离心(3000转/分钟,10分钟),滤渣再加入100℃沸水41L,计时浸提120分钟,期间保持加热,维持微沸状态。离心(3000转/分钟,15分钟),弃滤渣,合并两次的离心液,加入絮凝剂明胶70g,搅拌后过滤,滤液用5%HCl调pH至5,静置,过滤去沉淀,上清液经过大孔树脂HPD300,以80%丙酮水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物冷冻干燥,温度-50℃,干燥时间24小时,共制得干燥品95g,此干燥品中蒽醌类化合物含量96%。
实施例3
虎杖根3Kg、藤梨根2Kg、水杨梅根1Kg,经粉碎成粗粉,加入100℃沸水48L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持微沸状态。过滤,滤渣再加入100℃沸水24L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持微沸状态。过滤,滤渣再加入100℃沸水24L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持微沸状态。过滤,弃滤渣,合并三次的滤液,滤液经减压浓缩至热比重1.05(真空度大于0.04Mpa),加入天津正天成澄清技术有限公司生产的ZTC絮凝剂30g,搅拌后离心(3000转/分钟,10分钟),保留上清液,用20%醋酸l调pH至3,静置,离心去沉淀(同上条件),上清液经过大孔树脂HPD600,以60%乙醇水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物喷雾干燥,进风温度180℃,出口温度90℃。共制得干燥品112g。此干燥品中蒽醌类化合物含量92%。
实施例4
虎杖根2Kg、藤梨根3Kg、水杨梅根3Kg,粉碎成粗粉,加入80℃水80L,计时浸提90分钟,期间保持加热,维持80℃。过滤,滤渣再加入80℃水40L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持80℃。过滤,弃滤渣,合并两次的滤液,滤液经常压浓缩至热比重1.05,加入絮凝剂甲壳素10g,搅拌后离心(3000转/分钟,10分钟),保留上清液,用10%HCl调pH至2,静置,离心去沉淀(同上条件),上清液经过大孔树脂D101,以80%乙醇水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物真空干燥,真空度大于0.01Mpa,干燥时间4小时。共制得干燥品135g。此干燥品中蒽醌类化合物含量86%。
实施例5
虎杖根3Kg、藤梨根3Kg、水杨梅根2Kg,粉碎成粗粉,加入90℃水96L,计时浸提120分钟,期间保持加热,维持90℃。离心(3000转/分钟,10分钟),滤渣再加入90℃水41L,计时浸提120分钟,期间保持加热,维持90℃。离心(3000转/分钟,15分钟),弃滤渣,合并两次的离心液,加入絮凝剂明胶40g,搅拌后过滤,滤液用5%HCl调pH至5,静置,过滤去沉淀,上清液经过大孔树脂HPD300,以70%丙酮水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物冷冻干燥,温度-50℃,干燥时间24小时。共制得干燥品103g。此干燥品中蒽醌类化合物含量98%。
实施例6
虎杖根3Kg、藤梨根1Kg、水杨梅根2Kg,经粉碎成粗粉,加入90℃水54L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持90℃。过滤,滤渣再加入90℃水27L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持90℃。过滤,滤渣再加入90℃水24L,计时浸提60分钟,期间保持加热,维持90℃。过滤,弃滤渣,合并三次的滤液,滤液经减压浓缩至热比重1.05(真空度大于0.04Mpa),加入ZTC絮凝剂50g,搅拌后离心(3000转/分钟,10分钟),保留上清液,用20%醋酸l调pH至3,静置,离心去沉淀(同上条件),上清液经过大孔树脂HPD600,以70%乙醇水溶液洗脱被吸附的药材有效成分,洗脱液减压回收乙醇,真空度大于0.04Mpa,残留物喷雾干燥,进风温度180℃,出口温度90℃,共制得干燥品98g,此干燥品中蒽醌类化合物含量95%。
实施例7
称取实施例2制得的有效部位干燥品1Kg,加入药用淀粉、糖粉和糊精质量比7∶2∶1混合物2Kg,混合均匀,湿法制粒,用水调节,制得颗粒松散,便于压片状态,过20目筛,晾干,加15g硬脂酸镁,压片,即得复方三根有效部位的片剂。
实施例8
称取实施例1制得的有效部位干燥品1Kg,加入药用微晶纤维素2Kg,混合均匀,湿法制粒,用水调节,制得颗粒松散过20目筛,晾干,干燥后填充胶囊,即得复方三根有效部位胶囊剂。
实施例9
称取实施例3制得的有效部位干燥品1Kg,加入6Kg PEG6000(聚乙二醇6000),加热至60℃熔化后混合均匀,置于滴丸机内,用液体石蜡致冷,滴丸。冷却即得复方三根有效部位的滴丸剂。
实施例10
称取实施例4制得的有效部位干燥品1Kg,加入2Kg甘露醇,用灭菌水溶解后,过0.3μm微孔滤膜,罐装入安培瓶中,-50℃冷冻干燥24小时,即得复方三根有效部位的冻干粉针。
实施例11
将肿瘤细胞(2×106/ml),放入无菌的96孔培养平板,每孔加肿瘤细胞悬液50μl,加含15%小牛血清的1640培养液50μl,加实施例1提取物水溶液10μl,每组3孔,孔内加等量的生理盐水振荡混匀,然后放入5%的CO2培养箱(37℃)培养24h,加入四唑盐(MTT)磷酸缓冲液,每孔10μl(每ml含MTT5mg)继续培养4h,然后加二甲砜100ml,终止反应,用酶胶免疫检测仪,分别于波长570nm,630nm处测定光密度OD值,计算结果。
计算公式:
在胃癌RF细胞株和直肠癌LS174T细胞株肿瘤细胞培养实验中发现,复方三根有效部位对二种肿瘤的抑制率显著高于复方三根水提液(直接加重量比10倍沸水提取2小时后滤液的浓缩液),其抑瘤效果随剂量递增而提高。结果见表一。
表一复方三根有效部位对胃癌和直肠癌细胞的抑制实验
实施例12
方法:取小鼠S180瘤块,匀浆后稀释并调整细胞数至1×107/ml,以0.2ml注入小鼠右腋皮下,24h后随机分组给药,环磷酰胺(CTX)组腹腔给药,生理盐水(对照组),三根水煎液组(直接加重量比10倍沸水提取2小时后滤液的浓缩液)和实施例1的复方三根有效部位提取物组灌胃,于第11天称重处死小鼠取瘤块,称瘤重和测瘤体积,计算抑瘤率。
结果:三根水煎液对S180抑瘤率为36.8%,而等剂量的复方三根有效部位的抑瘤率为65.5%,与对照组有显著差异,而与CTX的差异不显著,提示它具有良好的抗肿瘤作用。结果见表二。
表二复方三根有效部位对S180肉瘤的抑制动物实验
Claims (5)
1、一种抗肿瘤的复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将虎杖根、藤梨根、水杨梅根中药材或其粉碎物按重量份(2~5)∶(1~3)∶(1~3)混合,用热水浸提,水温80~100℃,提取时间1~2小时,过滤或离心分离去药渣,保留提取液;热水浸提重复提取2~3次,合并提取液;
(2)向提取液中加入药材重量0.1~1%的絮凝剂,静置沉淀,过滤或离心分离去沉淀;
(3)调节pH值为2~5,静置沉淀,过滤或离心分离去沉淀,得到上清液;
(4)将上清液经非极性或弱极性的大孔树脂吸附后,用乙醇水溶液或丙酮水溶液洗脱;
(5)将洗脱液减压浓缩、干燥后,粉碎成细粉;
(6)将所得细粉添加辅型剂后,制成片剂或胶囊剂。
2、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中的热水浸提中,浸提次数为3次,药材与热水的重量比分别是第一次1∶(8~12),第二次1∶(4~6),第三次1∶(4~6)。
3、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中调节pH值所用试剂为盐酸或醋酸。
4、根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(5)中的干燥为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
5、根据权利要求1所述的制备方法所制得的复方虎杖根、藤梨根、水杨梅根制剂的应用,其特征在于:用于制备治疗或预防大肠癌、胃癌、直肠癌的药剂。
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20091007 Termination date: 20120104 |