CN100457098C - 甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及甲磺酸萘莫司他的冻干制剂及其制备方法。本发明的冻干粉针剂由活性成分甲磺酸萘莫司他、药学可接受的载体及pH值调节剂组成，pH调节剂是枸橼酸或有机缓冲体系，pH调节剂使冻干前和冻干后再溶解时溶液的pH值保持在3～5范围内，有效维持药物稳定的稳定性。

Description

甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及甲磺酸萘莫司他的冻干制剂及其制备方法。

背景技术

甲磺酸萘莫司他的分子式、分子量、结构式分别如下：

分子式：C₁₉H₁₇N₅O₂·2CH₄O₃S

分子量：539.58

结构式：

甲磺酸萘莫司他是合成的蛋白酶抑制剂。用于治疗急性胰腺炎、慢性胰腺炎急性恶化、手术后胰腺炎，还可用于心脏直视手术及血液体外循环时的抗凝、DIC的早期治疗、休克以及自身免疫性疾病的治疗。

甲磺酸萘莫司他为白色结晶性粉末，在水中易溶，但因其为酯类结构，在水中(尤其在热水中)、碱性介质及强酸性条件下的稳定性差，易发生降解反应产生杂质，若要制成水针注射剂无法满足贮藏及使用时的稳定性要求，又因为给药剂量小所以无法采用无菌分装的方法，因此目前临床没有甲磺酸萘莫司的注射制剂，单一的剂型限制了它更广泛的应用。

发明内容

本发明公开了一种稳定的甲磺酸萘莫司他的注射制剂，更确切的说是甲磺酸萘莫司他的冻干制剂。

本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂由活性成分甲磺酸萘莫司他、药学可接受的载体及pH值调节剂组成。在本发明中，药学可接受的载体主要是赋形剂。

甲磺酸萘莫司他水溶液在浓度为1mg/ml时，pH值约为5.4，由于其为一酯类结构，在碱性溶液或强酸性介质中易发生降解，生成4-胍基苯甲酸和6-脒基-2-萘酚，其只有在弱酸性条件下才稳定。发明人通过试验考察发现，甲磺酸萘莫司他的药液在pH值大于5.0或pH值小于3.0时，稳定性明显下降，仅在pH3.0～5.0范围内稳定性较好，结果见下表1。

                 表1温度40℃、不同pH条件下药液的稳定性

本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂当用5％葡萄糖注射液或生理盐水稀释时，pH值在3～5范围内，优选在pH值3.5～4.5范围内，这样可以使甲磺酸萘莫司他溶解后在6小时内保持稳定，使临床静脉滴注成为可能。

一般地，药学上常用的pH值调节剂是盐酸、硫酸、醋酸、乳酸、甲磺酸、枸橼酸、酒石酸、富马酸、门冬氨酸或谷氨酸等。

通过对pH值调节剂的大量筛选试验，我们发现如采用无机酸类盐酸等调节药液的pH值，冻干品复溶效果不好，复溶后的药液酸度偏高，采用有机酸作为pH值调节剂，冻干品复溶效果好，能够有效控制甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂的酸度，经试验，分别采用了枸橼酸、酒石酸、甲磺酸及富马酸作为pH值调节剂，冻干后经复溶性试验，筛选试验结果表明，采用枸橼酸作为pH值调节剂，样品溶解性能好，无浑浊现象，因此，优选枸橼酸作为pH值调节剂。

甲磺酸萘莫司他的酯类结构对介质的酸碱度十分敏感：在弱酸性条件下稳定，但在强酸性或偏碱性时，极易发生降解反应。为提高主药在配制、灌装、过滤、冻干等长时间溶液状态下的稳定性，减少降解，我们惊奇地发现在冻干前药液中使用缓冲液体系，可以精确维持药液的pH值，得到稳定性更佳的冻干制品。选用缓冲液的pH值范围可以为3～5，优选pH3.5～4.5。例如醋酸—醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、枸橼酸—磷酸二氢钠缓冲液等。这些缓冲液在冻干前加入待冻干溶液中，精密维持药物所需的pH值，使药物稳定，冻干后水分挥发，但因为在固体状态，因此，药物不易降解。临床使用时，冻干制剂溶解在生理盐水或葡萄糖溶液中，这些缓冲体系由固态转变成缓冲液，仍能保持其冻干前的pH值，有效维护了药物的稳定性。通过对冻干品的长期留样试验发现，采用枸橼酸盐缓冲液作为pH值调节剂制成的冻干品，要比单独以枸橼酸作为pH值调节剂制成的冻干品的稳定性更好，表2和表3是同一pH值(3.5)条件下，枸橼酸和枸橼酸盐缓冲液作为pH调节剂的试验结果。

                 表2枸橼酸为pH值调节剂的长期试验结果

                 表3枸橼酸盐缓冲液为pH值调节剂的长期试验结果

由表2、表3可看出，当用缓冲体系作为pH值调节剂时更有利于甲磺酸萘莫司他的稳定。本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂配制药液时pH值调节剂最优选枸橼酸盐缓冲液。本发明所述的枸橼酸盐缓冲液可以是用中国药典上的方法配制，再调节到所需的pH值即可，也可以在枸橼酸水溶液中加入氢氧化钠到规定的pH值，枸橼酸缓冲液的制备是本领域技术人员的公知技术。

赋形剂可以选自甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、环糊精、可溶性淀粉、氯化钠、苯甲酸、纤维素类物质中的一种或多种成分的混合体系。优选甘露醇。其中甲磺酸萘莫司他与赋形剂的重量比可以是药学上常用的比例，优选1∶1～20，进一步优选1∶1。

本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂的规格为含活性成分甲磺酸萘莫司他1～1000mg，优选含活性成分甲磺酸萘莫司他10mg、20mg、50mg、100mg或200mg。

甲磺酸萘莫司他的酯类结构，在含水状态时易发生降解，因此冻干品的水份应严格控制，含水量不宜过高，否则在贮藏过程中会逐渐产生降解产物，本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂要求冻干品的含水量不超过3.0％，最好控制在2.0％以下。

本发明的冻干粉针注射剂用以下方法制备：

将甲磺酸萘莫司他加注射用水溶解，加入赋形剂使溶解，加注射用水到规定量，加pH值调节剂调节药液pH值在3～5范围内，加活性炭，滤过，除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

在制备过程中发现，水溶液温度也对甲磺酸萘莫司他稳定性影响较大，结果见下表4。

                               表4溶液温度的影响

试验结果表明，甲磺酸萘莫司他药液稳定性与温度有关，药液在低于40℃条件下比较稳定，在40℃条件下放置6小时有关物质接近1.0％，60℃条件下放置6小时有关物质超过1.0％，在80℃条件下放置3小时有关物质已超出1.0％，因此在配制药液时水溶液的温度不宜超过40℃，最好在20～30℃条件下配制。

本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针注射剂要求配制药液时的水溶液温度不超过40℃。由于冻干车间常规自供的注射用水的温度一般约为80℃，因此将注射用水进行预冷，严格控制配液时的水温，以防止主药的降解，是本发明的独特创新。

更具体及更优选的制备过程包括：

(1)配制药液：即将活性成分甲磺酸萘莫司他加注射用水(25～30℃)溶解，加入药物可接受的载体搅拌使溶解，混匀，加注射用水到规定量；

(2)调节pH值：加pH值调节剂调节药液pH值在3～5范围内；

(3)除热原：在步骤(2)的药液中加入注射用活性炭于常温(低于40℃)下搅拌15分钟滤过；

(4)除菌：将步骤(3)的滤液用除菌滤器进行正压除菌滤过；

(5)灌装：用管制西林瓶进行无菌灌装；

(6)冻干：在低温真空下进行冷冻干燥。

以使用2000ml注射用水配制1000支甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂为例，制备甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂使用的物料重量范围是：

甲磺酸萘莫司他                5～100g

甘露醇                        5～500g

枸橼酸盐缓冲液                适量

加注射用水至                  2000ml

                                          

制成                          1000瓶

具体步骤如下：

配制药液：称取注射用甲磺酸萘莫司他原料(含量不得少于98.5％)，加注射用水(25～30℃)使其溶解，浓度为10mg/ml。然后加入规定量的甘露醇搅拌使溶解，再加注射用水至规定体积如2000ml，使甲磺酸萘莫司他含量为5mg/ml，甘露醇含量为5mg/ml。

调节pH值：加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值在3.0～5.0范围内。

除热原：在上述药液中以重量/体积百分比的方式加入0.01％～0.1％注射用活性炭，在常温(40℃以下)搅拌吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液。

除菌：将上述滤液按无菌操作法用除菌滤器进行正压除菌滤过，压力在0.1Mpa以下，用0.22μm微孔滤膜，滤前应先进行起泡点试验，滤液送样进行热原和半成品含量检查，然后分装。

灌装：在100级洁净度超净工作间进行灌装。

冻干：在-40℃～-55℃以下预冻1～2小时，然后打开压缩机，开始对制品抽真空，压力在9～10Mpa，时间20分钟；当制品温度达到-15℃～-17℃时，进行升华干燥，干燥时间20小时，除去制品中90％的水分；当制品温度达到-10℃～5℃时，进行反复升华干燥过程，干燥时间5小时；最后加温干燥(最高温度不得超过35℃)，直至温度曲线和真空曲线分别重合，使冻干品的最终水分含量控制在2％以下，冻干箱内自动全加塞。

封口：管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝塑复合盖封口。

本发明的甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂具有稳定性好，疗效确切，使用方便的特点，以下通过影响因素试验、加速及长期试验说明本发明的产品的质量稳定性。同时进行过敏性、溶血性和局部刺激性等特殊安全性试验，以说明本发明产品安全、有效。

一、本发明中甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂的化学稳定性试验

1强光照射试验

取本品(实施例1)，置于4000Lx光条件下，照射十天，分别于第5、10天取样，按考察项目检查和测定，并与0天的结果进行比较，观察样品在强光照射下的稳定性。

                        表5强光照射试验结果

结论：本发明注射用甲磺酸萘莫司他在4000Lx光照条件下考察10天，各项考察指标的检查结果稳定，说明本品在强光条件下稳定。

2高温试验

取本品(实施例1)，置于60℃恒温箱中放置，分别于第5、10天取样，按考察项目检查和测定，并与0天的结果进行比较，观察样品在高温条件下的稳定性。

结论：本发明的注射用甲磺酸萘莫司他在60℃条件下考察10天，各项考察指标的检查结果稳定，说明本品在60℃条件下稳定。

                       表6高温(60℃)试验结果

4.加速试验

分别取本品(实施例1)适量，按模拟上市包装，置RH 75％，温度40℃的恒温培养箱中，分别于第1、2、3、6月取样，按考察项目检查和测定，并与0月的结果进行比较，观察样品的稳定性。

结论：在40℃、RH 75％条件下考察6个月，注射用甲磺酸萘莫司他的各项考察指标的检查结果基本稳定，说明本品在40℃、RH 75％条件下性质基本稳定。

                    表7加速(RH75％、40℃)试验结果

5.长期试验

取本品(实施例1)，按模拟上市包装，分别于第3、6、9、12、18、24月取样，按考察项目检查和测定，并与0月的结果进行比较，观察样品的稳定性。

                          表8长期试验结果

结论：长期试验至24个月，注射用甲磺酸萘莫司他的各项考察指标的检查结果基本没有变化，说明本品在该条件下稳定。

6.总结

本发明的注射用甲磺酸萘莫司他经过强光(4000Lx)照射、高温(60℃)试验、加速试验(40℃、RH 75％)6个月及长期试验24个月的考察，结果表明：

(1)本品在强光条件下考察10天，性质基本稳定，外观、溶液澄清度与颜色、pH值、有关物质、含量等各项理化指标基本没有改变。

(2)本品在60℃加热条件下考察10天，各项考察指标稳定，说明本品在高温条件下稳定。

(3)本品加速试验考察6个月，各项考察指标基本没有变化，说明本品在40℃、RH 75％条件下性质基本稳定。

(4)本品长期试验至24个月，各项考察指标基本没有变化，说明本品在该条件下稳定。

二、本发明中甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂的特殊安全性试验

注射用甲磺酸萘莫司他临床给药方法为以灭菌5％葡萄糖注射液500ml溶解、稀释后静脉滴注。本试验根据《新药审批办法及有关法规》的要求，进行了局部用药毒性试验，供临床参考。

1.试验材料

1.1药物

1.1.1注射用甲磺酸萘莫司他：白色疏松块状物(实施例1)规格为10mg/瓶。临用前用灭菌5％葡萄糖溶解并稀释成浓度为10mg/500ml的溶液备用。

1.1.2卵白蛋白：Albumin egg GrabeII SigmaA5253(华美生物工程公司经销)。临用前用5％葡萄糖配制成混悬液备用。

1.2动物：新西兰种家兔，雄性，体重2.7kg；豚鼠，体重200-250g，雌雄各半，正常饲养一周后供试。

2.试验方法

2.1静脉血管刺激性试验

家兔5只，雄性，分别于家兔一侧耳缘静脉注射注射用甲磺酸萘莫司他5％葡萄糖溶液(浓度为10mg/500ml)10ml/kg，对侧相应部位同法注入等容积灭菌5％葡萄糖作为空白对照，每天1次，连续注射3天。每天观察注射部位血管变化情况。于最后1次给药后，放血处死家兔，剪取注射部位血管，制作组织切片，进行组织学检查，观察药物对静脉血管的刺激性。

2.2过敏试验

取健康无伤豚鼠18只，分为三组，每组6只，按无菌操作，分别隔日腹腔注射5％葡萄糖、卵白蛋白和注射用甲磺酸萘莫司他5％葡萄糖溶液(浓度为10mg/100ml)0.5ml/只，共注射三次。然后分成两组，分别在首次给药后14天及21天再次腹腔注射5％葡萄糖、卵白蛋白2ml和缓慢静脉注射注射用甲磺酸萘莫司他5％葡萄糖溶液0.5ml/只(从颈部略剪开皮肤)每组各3只进行攻击，观察注射后动物的过敏反应，按过敏反应级数分级。反应级数在2以下(包括2级)时，可认为该制剂过敏试验合格。

豚鼠过敏反应级数

                                 

反应级数反应症状

                                 

0无明显反应

1只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛

2有几次咳嗽、有抓鼻、颤抖或竖毛。

3多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等。

4痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡。

                                                     

2.3溶血性试验

取家兔1只，清醒状态下颈动脉取血20ml，置三角瓶中，用玻璃棒搅拌去除纤维蛋白，然后将血移入刻度离心管内，加入5％葡萄糖10ml，混匀后离心10分钟(2500r/分钟)，去除上清液，再加5％葡萄糖混匀离心，反复3～4次，至上清液呈无色透明。将所得红细胞按其容积，用5％葡萄糖稀释成2％的混悬液。

取试管14支，按下表先后复管加入各组溶液，第6、6’为阳性对照，不加供试样溶液，以蒸馏水代替；第7、7’管为阴性对照，不加供试样溶液，以5％葡萄糖代替。将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温1小时，取出后按表中次序记录结果。

结果判断：

全溶血(+)：溶液澄明红色，管底无细胞残留。

部分溶血(±)：溶液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留。

无溶血(-)：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。

聚集(--)：虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散。

凡1小时后第3管或第3管以前的各管出现溶血、部分溶血或出现凝聚反应的制剂，不宜作静脉注射。

溶血性试验加样顺序表

3.试验结果

3.1血管刺激性试验

连续静脉注射灭菌5％葡萄糖或注射用甲磺酸萘莫司他3天，仅见注射处血管轻度扩张、充血，无淤血，周围组织无明显改变，两侧相比无差别。

血管组织学检查结果：两侧血管内皮完整，无血栓形成，血管壁仅见少量炎性细胞浸润，血管周围组织无明显改变，两侧血管组织学检查无明显差异。

3.2过敏试验：结果表明豚鼠在首次注射后14天和21天，注射用甲磺酸萘莫司他组和空白对照组，过敏反应级数均在2以下，阳性对照卵白蛋白组的平均反应分值均在2以上。

                注射用甲磺酸萘莫司他对豚鼠的过敏反应

3.3溶血性试验

结果表明蒸馏水管溶液出现澄明红色，管底无细胞残留；其余各管红细胞全部下沉，上层液体均无色澄明。

               注射用甲磺酸萘莫司他的溶血作用

注：“-”为无溶血。“+”为全部溶血。

4.结论

本发明的注射用甲磺酸萘莫司他连续3天静脉注射对静脉血管无明显刺激作用；对豚鼠无过敏反应；未发生溶血现象。以上试验表明，注射用甲磺酸萘莫司他局部用药均未发生毒性反应，符合静脉注射用药标准，可供临床使用。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明，但本发明不局限于这些实施例，应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

                                 实施例1

甲磺酸萘莫司他                    10g

甘露醇                            10g

枸橼酸盐缓冲液                    适量

加注射用水至                      2000ml

                                                 

制成                              1000瓶

配制药液：称取注射用甲磺酸萘莫司他原料，加注射用水(25～30℃)使其溶解，浓度为10mg/ml。然后加入甘露醇搅拌使溶解，再加注射用水至规定体积如2000ml，使甲磺酸萘莫司他含量为5mg/ml，甘露醇含量为5mg/ml。

制备枸橼酸缓冲液：取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠调节pH值至3～5，即得枸橼酸盐缓冲液。

调节pH值：加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到3.5。

除热原：在上述药液中以重量/体积百分比的方式加入0.05％注射用活性炭，在常温(40℃以下)搅拌吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液。

除菌：将上述滤液按无菌操作法用除菌滤器进行正压除菌滤过，压力在0.1Mpa以下，用0.22μm微孔滤膜，滤前应先进行起泡点试验，滤液送样进行热原和半成品含量检查然后分装。

灌装：在100级洁净度超净工作间进行灌装。

冻干：在-40℃～-55℃以下预冻1～2小时，然后打开压缩机，开始对制品抽真空，压力在9～10Mpa，时间20分钟；当制品温度达到-15℃～-17℃时，进行升华干燥，干燥时间20小时，除去制品中90％的水分；当制品温度达到-10℃～5℃时，进行反复升华干燥过程，干燥时间5小时；最后加温干燥(最高温度不得超过35℃)，直至温度曲线和真空曲线分别重合，使冻干品的最终水分含量控制在2％以下，冻干箱内自动全加塞。

封口：管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝塑复合盖封口。

                                实施例2

甲磺酸萘莫司他                    10g

甘露醇                            50g

枸橼酸盐缓冲液                    适量

加注射用水至                      2000ml

                                             

制成                              1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到4。

                                实施例

甲磺酸萘莫司他                    10g

右旋糖酐                          10g

枸橼酸盐缓冲液                    适量

加注射用水至                      2000ml

                                                            

制成                              1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到3。

                                实施例4

甲磺酸萘莫司他                    10g

右旋糖酐                          50g

枸橼酸盐缓冲液                    适量

加注射用水至                      2000ml

                                                      

制成                              1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到4.5。

                                实施例5

甲磺酸萘莫司他                    10g

乳糖                              10g

枸橼酸盐缓冲液                    适量

加注射用水至                      2000ml

                                                  

制成                              1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到3.5。

                                实施例6

甲磺酸萘莫司他                    10g

乳糖                              50g

枸橼酸盐缓冲液                适量

加注射用水至                  2000ml

                                             

制成                          1000瓶

制备方法他同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到5。

                              实施例7

甲磺酸萘莫司他                10g

右旋糖酐                      20g

甘露醇                        20g

枸橼酸盐缓冲液                适量

加注射用水至                  2000ml

                                             

制成                          1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到4.2。

                              实施例8

甲磺酸萘莫司他                10g

乳糖                          20g

甘露醇                        20g

枸橼酸盐缓冲液                适量

加注射用水至                  2000ml

                                              

制成                          1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到3.5。

                              实施例9

甲磺酸萘莫司他                10g

乳糖                          20g

右旋糖酐                      20g

枸橼酸盐缓冲液                适量

加注射用水至                  2000ml

制成                        1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸盐缓冲液适量调节药液pH值到4。

                            实施例10

甲磺酸萘莫司他              10g

甘露醇                      10g

枸橼酸                      适量

加注射用水至                2000ml

                                           

制成                        1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸适量调节药液pH值到4。

                            实施例12

甲磺酸萘莫司他              10g

甘露醇                      10g

枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲液     适量

加注射用水至                2000ml

                                             

制成                        1000瓶

制备方法同实施例1，加枸橼酸-磷酸二氢钠缓冲液适量调节药液pH值到4。

将上述实施例1～12的甲磺酸萘莫司他冻干粉针剂进行加速试验稳定性考察，结果：产品质量稳定，符合中国药典相关要求。

Claims (6)

1、一种甲磺酸萘莫司他冻干制剂，由甲磺酸萘莫司他、赋形剂及pH调节剂组成，其中pH调节剂是枸橼酸盐缓冲液，并且当冻干粉末加入1～20倍体积水时，溶液pH值范围为3～5。

2、权利要求1的甲磺酸萘莫司他冻干制剂，其中赋形剂选自甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、环糊精、可溶性淀粉、氯化钠、苯甲酸、纤维素中的一种或几种。

3、权利要求2的甲磺酸萘莫司他冻干制剂，其中赋形剂与甲磺酸萘莫司他的重量比为1～20∶1。

4、权利要求3的甲磺酸萘莫司他冻干制剂，其中赋形剂与甲磺酸萘莫司他的重量比为1∶1。

5、权利要求1至4中任一项的甲磺酸萘莫司他冻干制剂的制备方法，包括：将甲磺酸萘莫司他加注射用水溶解，加入赋形剂使溶解，加注射用水到规定量，加pH值调节剂调节药液pH值在3～5范围内，加活性炭，滤过，除菌过滤，灌装，冷冻干燥。

6、权利要求5的甲磺酸萘莫司他冻干制剂的制备方法，其中配制药液的水温低于40℃。