CN100439503C - AMPKγ链的变体、其DNA编码序列及其用途 - Google Patents

AMPKγ链的变体、其DNA编码序列及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及脊椎动物AMP激活激酶(AMPK)γ链的变体，以及编码所说变体的核酸序列和它们在诊断或治疗能量代谢功能障碍中的用途。

Description

AMPKγ链的变体、其DNA编码序列及其用途
本发明涉及AMP激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)γ链的新变体，以及编码所说变体的基因及其用途。
AMPK在真核细胞的能量代谢调节中具有关键的作用(HARDIE等，生化年鉴(Annu.Rev.Biochem.)，67，821-855，1998；KEMP等，TIBS，24，22-25，1999)。哺乳动物AMPK是一种异三聚体复合物，它包括一个起催化作用的α亚基和调节α亚基活性的两个非催化性的β和γ亚基。此酶复合物的酵母同源物(表示为SNF1)已被很好的定性；它包括一条相应于哺乳动物α亚基的催化链(Snf1)，和相应于哺乳动物β亚基的调节亚基：Sip1、Sip2和Ga183，以及相应于哺乳动物γ亚基的Snf4。序列数据显示AMPK同源物也存在于Caenorhabditiselegans和果蝇中。
已发现酵母SNF1和SNF4中的突变引起葡萄糖抑制基因的转录、孢子形成、耐热性、过氧化酶体生物合成和糖原储存中的缺陷。
在哺乳动物细胞中，AMPK已被提议作为“燃料标尺”。它由于诸如热休克及葡萄糖和ATP损耗之类细胞压力所导致的AMP∶ATP比率增高而被激活。通过乙酰辅酶A羧化酶和羟甲戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的磷酸化作用，激活后的AMPK启动ATP生产途径(如脂肪酸氧化)并抑制ATP消耗途径(如脂肪酸和胆固醇合成)。还有报导说通过磷酸化作用使体外糖原合成酶这种糖原合成中的关键调节酶失活(HARDIE等，1998，见上文)；不过，仍不清楚糖原合成酶是否为AMPK的体内生理性靶目标。
AMPK的三个不同亚基在哺乳类中有几个同工型。在人中，人染色体(HAS)5p12上的PRKAA1和HSAlp31上的PRKAA2分别编码α亚基的同工型α1和α2，HSAl2q24.1上的PRKAB1和PRKAB2(还未作图)分别编码β亚基的同工型β1和β2，还有HSAl2q13.1上的PRKAG1和HSA7q35-q36上的PRKAG2分别编码γ亚基的同工型γ1和γ2(OMIM数据库，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/omim/，1999年7月)。HARDIE等(1998，见上文)也提及存在AMPKγ亚基的第三个同工型(γ3)，但未提供任何有关于它的信息。对这些γ亚基的序列分析显示它们基本上由功能未知的4个胱硫醚β合酶(CBS)组成。还未证实在某一AMPK亚基中的突变引起的任何表型效果。
另一方面，已发现多数汉普郡(Hampshire)猪具有高的肌肉内糖原浓度。在这些猪中，宰杀后出现的糖原分解导致了pH的严重降低，从而产生水分维持能力降低的酸肉，使腌制火腿的产量下降。
通过对来自汉普郡猪的表型数据进行家族分离分析，首次鉴定出了与肌肉内高糖原含量相关的位点(称为RN)(LE ROY等，遗传学研究(Genet.Res.)，55，33-40，1990)。与高糖原含量相关的完全显性等位基因RN-高频率出现于汉普郡种群中，而来自其它系的猪推测是正常隐性rn+等位基因纯合子。随后的研究显示RN-携带者骨骼肌中糖原大量增加(约70％)，而肝糖原并不如此(MONIN等，在第38期ICoMST，Clermont-Ferrand，法国，1992)。
RN-和rn+猪之间糖原含量的巨大差异导致了猪肉质量和工艺产量的明显不同(ENFALT等，动物科学杂志(J.Anim.Sci.)，75，2924-2935，1997)。因此RN-等位基因在养猪业中具有重要的经济学意义，大部分饲养公司希望降低或消除此显性突变。
通过对来自活动物的肌肉活体组织检查或宰杀后肌肉中糖分解潜力进行检测，可确定RN表型(MONIN等，(Meat Science，13，49-63，1985)。不过，此方法在实际饲养过程中具有严重的应用局限性。检测的精确度不是100％：因为RN-和rn+的表型分布中存在某些重叠，检测不能区分RN-/RN-纯合子和RN-/rn+杂合子。此外，在活动物上进行肌肉活体组织检查的取样是侵袭性的，并且昂贵。
因此，急需开发一种简便的DNA诊断方法用于检测RN位点。而且，在猪中RN基因的显著表型影响意味着此基因在其它脊椎动物，尤其是哺乳动物的骨骼肌糖代谢调节中具有重要作用。
骨骼肌和肝脏是哺乳动物中两个主要的糖原贮藏处，观察已知肌肉糖原增加而肝脏糖原含量正常，显示RN-表型可能是由于肌肉而非肝脏中表达的某个基因存在突变。发明者原先已报道过RN基因位于猪的第15染色体上(MILAN等，哺乳动物染色体组(Mamm.Genome)，7，47-51，1996；MILAN等，哺乳动物染色体组(Mamm.Genome)，7，52-54，1996；LOOFT等，遗传学选择性进化(Genetics Selection Evolution)，28，437-442，1996)。他们现已发现RN-等位基因与编码AMP激活蛋白激酶(AMPK)γ链之新型肌肉特异性同工型的基因中的保守性突变相关。
本发明的多个方面是基于此突变的发现和定性，以及此突变基因的鉴定和分离。
按照本发明，已显示AMPKγ链中的突变导致了糖代谢调节的改变，证实了AMPK是所说代谢的基本组分。本发明还提供了编码AMPKγ链肌肉特异性同工型的核酸序列。因而提供了调节糖代谢的方法，更具体地说，提供了检测和/或校正糖代谢调节中尤其是在骨骼肌中、潜在或已有的功能紊乱的方法。
本发明提供了所含氨基酸序列与多肽SEQ ID NO：2具有至少70％同一性或至少85％相似性的多肽，优选80％同一性或至少90％相似性的多肽，更优选至少90％同一性或至少95％相似性的多肽，还更优选至少95％同一性或至少99％相似性的多肽。本发明还提供了编码所说多肽的分离核酸序列，以及所说核酸序列的互补序列。
所说多肽代表了AMPKγ链的新的肌肉特异性同工型，本文将称之为Prkag3；编码所说多肽的基因也将在本文称之为PRKAG3。
按照本发明的优选实施方案，所说多肽包含了与多肽SEQ ID NO：28具至少75％同一性，优选至少80％同一性的氨基酸序列。
某一序列与参照序列的“同一性”指将两序列排列以比较残基位置之间最大相应性时相同残基的百分数。所含氨基酸序列与参照序列具至少X％同一性的多肽在此定义为对于参照氨基酸序列的每100个氨基酸来说，该多肽序列可包括多达100-X个氨基酸的改变。氨基酸改变包括参照序列中连续或分散氨基酸残基的缺失、取代或插入。
某一序列与参照序列的“相似性”指将两序列排列以比较残基位置之间最大相应性时相同的或只是由保守氨基酸取代造成不同的残基所占百分数。保守氨基酸取代定义为用一氨基酸残基取代另一具相似化学特性(如大小、电荷或极性)的氨基酸残基，它通常不改变蛋白质的功能特性。所含氨基酸序列与参照序列具至少X％相似性的多肽在此定义为对于参照氨基酸序列的每100个氨基酸来说，该多肽序列可包括多达100-X个非保守性的氨基酸改变。非保守性的氨基酸改变包括参照序列中连续或分散氨基酸残基的缺失、插入或非保守性取代。
例如：
*带默认值设置并以全序列SEQ ID NO：2为查询值，用BLASTp(ALTSCHUL等，核酸研究，25，3389-3402，1997)搜寻“GenBank nr”数据库，与SEQ ID NO：2具较高同一性或相似性百分数的发现如下：
-人的AMPKγ1亚基：65％的同一性或82％的相似性(评分：399)；
-大鼠的AMPKγ1亚基：65％的同一性或82％的相似性(评分：399)；
-小鼠的AMPKγ1亚基：64％的同一性或80％的相似性(评分：390)；
-果蝇的AMPKγ亚基：53％的同一性或75％的相似性(评分：332)；
-酵母的Snf4：33％的同一性或56％的相似性(评分：173)；
*带默认值设置并以全序列SEQ ID NO：28为查询值，用BLASTp搜寻“GenBank nr”数据库，具较高同一性或相似性百分数的发现如下：
-人的AMPKγ1亚基：64％的同一性或80％的相似性(评分：403)；
-人的AMPKγ2亚基：62％的同一性或83％的相似性(评分：425)；
-大鼠的AMPKγ1亚基：61％的同一性或77％的相似性(评分：404)；
-小鼠的AMPKγ1亚基：63％的同一性或79％的相似性(评分：394)；
-果蝇的AMPKγ亚基：52％的同一性或76％的相似性(评分：340)；
本发明的多肽包括例如来自任何脊椎动物的任何多肽(可以是天然的、合成的、半合成的，或重组的)，更特异的是来自诸如家禽之类的鸟类，或哺乳动物，包括牛、绵羊、猪、小鼠、马和人的多肽，它们包含或由以下任一种氨基酸序列组成：
-有功能的Prkag3；或
-功能性改变的Prkag3突变体。
“有功能的”指具有正常生物学活性的蛋白质。这样的蛋白质可包含沉默突变，它不会诱发实际上的活性变化，且不具有明显的表型影响。功能性Prkag3的非局限性例子是：
-至少包含所附序列表中SEQ ID NO：2所表示序列的猪Prkag3；这包括，例如多肽SEQ ID NO：28；
-至少包含所附序列表中SEQ ID NO：4所表示序列的人Prkag3；这包括，例如多肽SEQ ID NO：30。
本发明还包括Prkag3的剪接变体：例如，核苷酸序列SEQ ID NO：27和相应的氨基酸序列SEQ ID NO：28，以及核苷酸序列SEQ ID NO：31和相应的氨基酸序列SEQ ID NO：32，代表了猪Prkag3的两种不同的剪接变体。
蛋白质的“功能性改变突变体”包含引起其活性改变的一个或数个突变。这些突变特别地包括在所说蛋白质生物学活性必需结构域中的氨基酸残基缺失、插入或取代。它们可能导致例如活性的部分或全部丢失，或相反地使活性提高，或导致对调节效应器应答的损伤。缺失、插入或非保守性取代更可能对生物学活性产生严重的影响；不过如果保守性取代发生于蛋白质活性位点的重要位置，它们也可能导致明显的影响。
Prkag3的功能性改变的突变体的非限定性例子是：
-用谷氨酰胺残基取代SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第41位精氨酸残基的非保守性取代产生的R41Q变体(这一取代导致了糖原含量的显著增加，从而使骨骼肌的糖分解能力提高)；
-用异亮氨酸残基取代SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第40位缬氨酸残基的取代产生的V40I变体(这一取代导致了糖原含量的显著降低，从而使骨骼肌的糖分解能力下降)。
这些取代发生于第一个CBS结构域中的一部分，此结构域在Prkag3和原先已知的AMPKγ亚基同工型之间是高度保守的。
Prkag3的残基编号指SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸编号。人和猪Prkag3序列与原先已知的γ1和γ2同工型之间的比对如图3所示。
本发明还提供了Prkag3的突变体，它可通过某些方法，如缺失部分Prkag3多肽获得。所说的突变体通常是功能有所改变的。它们与整个Prkag3序列的同一性可能低于70％。不过，在与相应Prkag3序列、更特别地是与SEQ ID NO：2相应序列比对时，所说突变体的非缺失序列同一性仍应高于70％。所说的突变体可来自例如，在功能性Prkag3核酸编码序列中缺失或插入核酸片段而获得的核酸序列的表达，或点突变引入无义密码子后的核酸序列的表达。
本发明还提供了功能有所改变的AMPKγ亚基突变体，其中所说的突变体包含至少一个造成第一CBS结构域内所说功能改变的突变，优选在其与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第30-50位残基区段比对的区域内。所说的突变可产生自邻近或非邻近的一个或多个氨基酸插入、缺失和/或取代。更优选此突变位于与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第35-45位残基区段比对的区域内，例如在γ1同工型的第65-75位残基区段内。
按照特殊实施方案，所说的突变是非保守性取代，优选R→Q的取代。按照另一特殊的实施方案，所说的突变是保守性取代，优选V→I的取代。
有利的是，突变位于与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第41位残基相应的残基上，例如在γ1同工型的情况下是位于第70位残基处，突变还可位于与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第40位残基相应的残基上，例如在γ1同工型的情况下是位于第69位残基处。
本发明还提供了异型三聚体AMPK，其中的γ亚基由本发明的多肽组成。
本发明还提供了编码任何上述有功能的或功能改变后的Prkag3或者功能改变后的AMPKγ亚基突变体的分离核酸序列，以及这些核酸序列中任一种的互补核酸序列。
这尤其包括具PRKAG3基因之任一天然存在的等位基因序列的任何分离核酸，以及具PRKAG3基因之人工突变体序列的任何分离核酸，条件是所说的核酸不是EST GENBANK AA178898组成。
这还包括具PRKAG1或PRKAG2基因之天然或人工突变体序列的任何分离核酸，其中所说的突变体编码如上所述功能改变后的AMPK之γ1或γ2亚基。
本发明的核酸可用众所周知的DNA重组技术和/或DNA化学合成方法获得。这些方法还可在天然存在的DNA序列中引入需要的突变。
编码PRKAG3基因之天然存在的等位基因的核酸实例表示为SEQ IDNO：1，它编码猪基因之天然存在的等位基因，以及SEQ ID NO：3，它编码人基因之天然存在的等位基因。这些序列可用于产生探针，以便通过筛选基因组DNA或cDNA文库，从其它物种中分离PEKAG3，或从同一物种中分离PRKAG3的其它等位基因形式。
本发明还包括来自任何脊椎动物物种的基因组DNA序列，更特别的是来自鸟类，如家禽，或哺乳动物，尤其包括牛、绵羊、鼠、马和人，的基因组序列，其至少包含编码本发明多肽的一部分核酸序列，优选一部分PRKAG3基因，且包括3’和/或5’邻近基因组序列长达500kb，优选长达100kb。
这样的基因组DNA序列可用本领域已知方法获得，例如通过编码本发明多肽的核酸序列的扩增，所用方法有诸如限制性位点PCR(SARKAR等，PCR方法应用(PCR Methods Applic.)，2，318-322，1993)，使用以Prkag3编码区为基础的差异引物的反向PCR(TRIGLIA等，核酸研究Nucleic Acids Res.，16，8186，1988)，捕捉PCR(LAGERSTROM等，PCR方法应用，1，111-119，1991)，等等。
本发明还包括编码本发明多肽之核酸序列的特异片段，或本发明基因组DNA序列的特异片段，以及与它们特异性杂交的核酸片段。优选这些片段至少长15bp，更优选至少长20bp。
“特异片段”指具有只能在编码本发明多肽之核酸序列中找到，而不存在于编码现有技术相关多肽之核酸序列中的序列的核酸片段。这排除了由与已知PRKAG1或PRKAG2基因之一共有的序列组成的核酸片段。
“特异杂交的片段”指在严谨条件下可以只与编码本发明多肽之核酸序列杂交，而不与编码现有技术相关多肽的核酸序列杂交的核酸片段。这就排除了由与已知PRKAG1或PRKAG2基因之一共有的序列的互补序列组成的核酸片段。
由EST GENBANK AA178898或EST GENBANK W94830或其互补序列组成的核酸片段也被排除在外。
所说的特异或特异性杂交的核酸片段可用作，例如引物或探针，用于探测和/或扩增编码本发明多肽的核酸序列。本发明包括一套引物，其中至少包含一个由上述特异的或特异性杂交的核酸片段组成的引物。
本发明还提供了含编码本发明多肽之核酸序列的重组载体。本发明的载体优选为表达载体，其中编码本发明多肽的序列处于适当的转录和翻译控制元件控制下。通过众所周知的重组DNA和遗传工程技术可获得这些载体并将其引入宿主细胞中。
本发明还包括由本发明载体，优选表达载体转化的原核或真核宿主细胞。
通过在适于表达所说多肽的条件下，培养包含其中有编码所说多肽之核酸序列的表达载体之宿主细胞并从宿主细胞培养物中回收所说多肽可获得本发明的多肽。
其中γ亚基由本发明多肽组成的异型三聚体AMPK可通过一起或分别表达编码本发明多肽的核酸序列、编码α亚基的核酸序列和编码β亚基的核酸序列并重组异型三聚体而获得。
应用本领域众所周知的方法，由此获得的多肽或其免疫原性片段可用于制备抗体。因此可获得直接抗完整Prkag3多肽并能识别其任何变体的抗体。还可获得直接抗Prkag3特殊变体(有或无功能)之特异表位的抗体，或直接抗在AMPKγ亚基第一CBS结构域中有突变之改变功能的突变体的特异表位，并能识别所说变体或功能改变后的突变体的抗体。
如本文所示，AMPKγ亚基中的突变，尤其是AMPKγ亚基第一CBS结构域中的突变可能引起包括人在内的脊椎动物中能量代谢的失调(如糖尿病、肥胖症)。此外，在PRKAG3基因第一CBS结构域或其它部分内的突变可能引起肌肉代谢的失调，导致诸如肌病、糖尿病和心血管病之类的疾病。
本发明提供了检测并治疗所说失调的方法。
更特别的是，本发明涉及将本发明的核酸序列和/或多肽序列用于代谢失调的诊断评估、遗传检测及预后的方法。
例如，本发明提供了用于诊断失调，更特异的是糖代谢失调的方法，优选与AMPKγ亚基编码基因中突变所引起的细胞中糖原积累改变，尤其是过多相关的失调，其中所说的方法包括探测和/或测量获自脊椎动物的核酸样品中功能改变之PRKAG3基因的表达，或AMPKγ亚基改变功能之突变体的表达，所说的突变体的第一CBS结构域内有突变，或探测被怀疑有此类失调的脊椎动物基因组中PRKAG3基因或AMPKγ亚基第一CBS结构域编码序列内的突变。
按照本发明的优选实施方案，失调与肌肉细胞中糖原积累改变，尤其是过量相关，且来自功能改变型PRKAG3基因的表达。
如上所述，用特异于本发明功能改变型多肽的多克隆或单克隆抗体，可探测或检查功能改变型Prkag3的表达，或于第一CBS结构域中具突变的AMPKγ亚基功能改变的突变体的表达。恰当的方法是本领域所已知的。它们包括，例如酶联免疫试验(ELISA)、放免试验(RIA)和荧光激活的细胞分拣术(FACS)。
通过检测正常、携带者或受影响个体间基因序列或邻近序列中的差异，本发明的核苷酸序列可用于探测PRKAG3基因中或AMPKγ亚基第一CBS结构域编码序列中的突变。
本发明提供了检测PRKAG3基因中或AMPKγ亚基第一CBS结构域编码序列中的突变的方法，其中所说的方法包括：
-从脊椎动物中获取核酸样品；
-如上所述，检查所说核酸样品中编码突变Prkag3之核酸序列的存在，或在第一CBS结构域中具有突变的AMPKγ亚基突变体核酸编码序列的存在。
按照本发明的优选实施方案，提供了在PRKAG3基因或AMPKγ亚基第一CBS结构域编码序列中含突变之核酸序列的检测方法，其中所说的方法包括：
-从脊椎动物中获取核酸样品；
-在允许所说探针与待测突变序列间进行特异杂交的条件下，将核酸样品与获自本发明核酸且跨越所说突变位点的核酸探针接触；
-检测杂交复合物。
优选地，本发明的方法进一步包括，在杂交前从核酸样品中PCR扩增至少含PRKAG3序列部分的序列，或扩增编码AMPKγ亚基第一CBS结构域的序列，其中有突变待检测。
本领域已知只允许探针与完全匹配的互补序列特异杂交并可用于检测点突变的方法。它们包括例如，等位基因特异PCR(GIBBS，核酸研究，17，2427-2448，1989)、等位基因特异性寡核苷酸筛选(SAIKI等，自然(Nature)，324，163-166，1986)，等等。
还可通过检测与所说突变紧密连锁的多态标记来探测PRKAG3基因中的突变。
本发明还提供了鉴定所说多态标记、更特别地是基因组DNA序列中所含的多态标记的方法，所说的基因组DNA序列包含至少一部分PRKAG3基因，以及长达500kb，优选300kb，更优选长达100kb的3’和/或5’邻近序列。
为了选择含所说核酸序列及侧翼染色体序列的克隆，可通过用特异于PRKAG3基因的探针筛选脊椎动物基因组DNA文库，并鉴定所说侧翼染色体序列中的多态标记，获得所说的多态标记。还可通过使用来自个体的基因组DNA文库方便的鉴定与所给PRKAG3基因之突变等位基因相关联的多态标记等位基因，其中所说突变等位基因的存在事先已用本发明的核酸探针杂交检测过。
多态标记包括，例如，单核苷酸多态性(SNP)、微卫星、插入/缺失多态性和限制性片段长度多态性(RFLP)。这些多态标记可通过将获自数个个体的PRKAG3基因侧翼序列比较而得以鉴定。微卫星也可通过与特异于已知微卫星基元之核酸探针的杂交而鉴定。
一旦鉴定了多态标记，就可对跨越多态位点的DNA区段进行测序，并可设计一套引物用于所说DNA区段扩增。
本发明包括所说的DNA引物。
PRKAG3基因中突变的检测可通过以下步骤完成：从脊椎动物中获得基因组DNA样品，用本发明的一套引物通过聚合酶链式反应扩增跨越多态标记的所说DNA区段，并检测在所说的扩增DNA中与所说突变相关联的多态标记等位基因的存在。
作为例证，可按本发明方法获得的多态标记以及可用于检测与猪PRKAG3基因之RN-等位基因紧密连锁的多态标记的DNA引物列于下文表1中。
按照本发明的优选实施方案，脊椎动物是哺乳动物，优选家畜，更优选猪，待测突变产生功能改变了的Prkag3。所说突变的检测可用于预测所说哺乳动物或其后代是否可能具有较平均水平高或低的肌肉内糖原浓度。如此突变的一个例子产生了具R41Q取代之功能改变的Prkag3，导致骨骼肌中糖原含量增加。
所说突变的另一例子产生了具V40I取代之功能改变的Prkag3，导致骨骼肌中糖原含量下降。在具有此类突变的家畜中，宰杀后出现的糖原分解作用不如正常动物中重要，导致较高的pH及可能质量较好的肉。
本发明还包括用于本发明方法实践的试剂盒。该试剂盒中包括含有本发明核酸序列至少一个特异片段或能与本发明核酸序列特异杂交之至少一个核酸片段的容器。所说的核酸片段可被标记。试剂盒中还可包括本发明的一套引物。它们可与购得的扩增试剂盒结合起来使用。它们还可阳性或阴性对照反应或标记、凝胶电泳的分子量标准，等等。
本发明的其它试剂盒可包括本发明的抗体，其任选地可被标记，以及检测抗原-抗体反应的适当试剂。它们还可包括阳性或阴性对照反应或标记。
本发明进一步提供了调节脊椎动物AMPKγ亚基编码基因表达的方法，更特异的是调节PRKAG3基因表达和/或所说基因产物合成或活性的方法。
含有野生型或突变Prkag3亚基，或第一CBS结构域中具突变之功能改变的突变γ亚基的纯化AMPK异型三聚体可用于体外筛选能调节AMPK活性或恢复被改变的AMPK活性的化合物。这可通过例如以下步骤进行：
-用例如高流通量的筛选方法检测化合物与所说异型三聚体的结合；或，
-用例如高流通量的筛选方法检测AMPK激酶活性的改变。
高流通量筛选方法公布于文献，例如，“高流通量筛选：生物活性物质的发现(High throughput screening：The Discovery ofBioactive Substances)”，J.P.DEVLIN(编辑)，MARCEL DEKKER Inc.，纽约(1997)。
本发明的核酸还可用于治疗的目的。例如，其互补分子或片段(反义寡核苷酸)可用于调节AMPK活性，更特异的是肌肉组织中的活性。
此外，编码功能性Prkag3的核酸序列可用于恢复正常的AMPK功能。
表达野生型或突变Prkag3或如上所述之AMPKγ亚基之功能改变型突变体的转化细胞或动物组织，或表达含所说突变Prkag3或所说AMPKγ亚基之功能改变型突变体的转化细胞或动物组织，可用作体外模型以说明AMPK活性的机制或筛选能调节AMPK表达的化合物。
筛选可通过以下步骤完成：添加待测化合物至所说细胞或所说组织的培养基中，用诸如检测葡萄糖浓度(水平)、葡萄糖摄入、或ATP/AMP比率改变、糖原或脂/蛋白质含量之类的方法检测所说细胞或所说组织中能量代谢的改变。
本发明提供了用本发明核酸序列转化的动物。
在一个实施方案中，所说的动物是至少有一个含本发明核酸之转基因的转基因动物。
在另一实施方案中，所说动物是基因敲除动物。“基因敲除动物”指其天然或内源PRKAG3等位基因已被灭活且自身不能产生功能性Prkg3的动物。
按照本发明对于编码野生型或突变Prkag3或AMPKγ亚基之功能改变型突变体的DNA序列的公开内容，可根据本领域已知的技术产生转基因动物及基因敲除动物，例如用体内同源重组的方法。
用于转基因或基因敲除动物制备的合适方法公布于文献中，例如：小鼠胚胎的处理(Manipulating the Mouse Embryo)，第二版，HOGAN等人，冷泉港实验室出版社，1994；转基因动物技术(TransgenicAnimal Technology)，编辑C.PINKERT，学术出版有限公司，1994；基因靶向：实用方法(Gene Targeting：A Practical Approach)，编辑A.L.JOYNER，牛津大学出版社，1995；转基因动物科学中的谋略，编辑G.M.MONASTERSKY和J.M.ROBL，ASM出版社，1995；小鼠遗传学：概念和应用(Mouse Genetics：Concepts and Applications)，LeeM.SILVER，牛津大学出版社，1995。
这些动物可用作代谢疾病和失调的模型，更特异的是用作肌肉中糖原代谢疾病和失调的模型。例如它们可用于筛选待测分子。因此转基因动物可用于筛选能调节AMPK活性的化合物。本发明的基因敲除动物也可应用，特别是用于筛选在功能性Prkag3缺乏的情况下能调节能量代谢，尤其是糖代谢的化合物。
可通过以下步骤完成筛选：将待测化合物施用于动物并检测所述动物中能量代谢的改变，使用方法有诸如葡萄糖耐受性试验、血液中胰岛素水平的检测、ATP/AMP比率的改变、组织和细胞中糖原或脂类/蛋白质的含量。
还可获得具改良肉质或改良能量代谢的转基因或基因敲除家畜。
通过以下的描述将对本发明进行进一步的说明，描述中谈到了有关本发明核酸之获得及应用的例子。不过应当理解为所给出的这些实施例只用作对本发明的说明而非以任何方式对其构成限制。
实施例1：PRKAG3基因的分离
我们已筛选了猪细菌人工染色体(BAC)文库(ROGEL-EAILLARD等，细胞发生学和细胞遗传学(Cytogenet and cell Genet)，851，273-278，1999)，并构建了跨越猪第15号染色体携有RN基因区域的重叠BAC克隆群。这些BAC克隆可以下表所述的单核苷酸多态性(SNP)或微卫星(MS)形式用于发展新的遗传标记。
Figure C0081342400191
将新标记与前述标记一起用于构建高分辨率的连锁图谱。利用含有约1000个分离于RN位点的信息型减数分裂分离谱系数据进行标准连锁分析，有可能将RN排除在接近MS479L3并远离微卫星Sw936的区域之外。用相同的标记和68头来自瑞典汉普郡种群之饲养公猪的随机样品进行不平衡连锁(LD)分析，通过检测肌肉中的糖原含量对RN表型进行评分。用DISMULT软件(TERWILLIGER，美国人类遗传学杂志(Am.J.Hum.Genet.)，56，777-787，1995)进行LD分析的结果如图1所示。它们在标记MS127B1和SNP127G63周围展示出一个尖的LD峰。看起来这些标记显示了与RN-等位基因的完全不均衡连锁，即RN-与这两个位点的单个等位基因相联。对此发现的最简单解释是RN-突变是由于携带这些等位基因的染色体上，而且这两个标记与RN位点连接如此紧密连锁，从而重组频率接近于0％。两个标记都存在于重叠的BAC克隆127G6和134C9上，显示RN基因可能位于同一克隆或邻近克隆之一上。
构建BAC克隆127G6的鸟枪(shot-gun)文库并收集1000个以上的读取序列，从克隆中给出了约500000个碱基对的随机DNA序列。分析数据并用PHRED、PHRAP和CONSED软件包(华盛顿大学基因中心，http://bozeman.mbt.washington.edu)构建序列毗连群。用REPEATMASKER软件(http://ftD.genome.washington. edu/cgibin/RepeatMasker)对重复片段进行序列数据屏蔽并用NCBI网址(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)进行BLAST搜寻。获得了三个与编码序列令人信服的匹配序列。其中两个是与人cDNA序列/基因匹配的，据描述与猪微管蛋白-酪氨酸连接酶类似且位于HSA2q上的KIAA0173(UniGene cluster Hs.169910，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/)以及位于HSA2q33-ter(UniGene cluster Hs.82568)的CYP27A1。结果有力的说明猪编码序列与这些人基因是直向同源的，因为已明确确定RN区域与HSA2q 33-36同源(ROBIC等，哺乳动物染色体组(Mamm.Genome)，10，565-568，1999)。不过，这些序列中没有一个看上去是RN候选基因。在BAC 127G6中鉴定出的第三个编码序列显示出与包括酵母SNF4序列在内的多种AMP-活化蛋白激酶γ序列具有非常显著的序列相似性。利用来自rn+/rn+纯合体的肌肉mRNA，通过RT-PCR和RACE分析确定此基因的cDNA序列。此序列如图2所示，并以SEQ ID NO：1列于所附序列表中。
图2的说明：
5’UTR：5’非翻译区
3’UTR：3’非翻译区
CDS：编码序列
***：终止密码子
‘_’：与主要序列同一
‘.’：比对缺口
以与蛋白质家族中其它成员的同源性为基础确定翻译框架，并假定框架中的第一个甲硫氨酸为起始密码子。以此为基础推断的多肽序列如SEQ ID NO：2所示。
猪PRKAG3cDNA的完整核苷酸序列如SEQ ID NO：27所示，而完整的多肽序列如SEQ ID NO：28所示，见图3。
图3显示了用CLUSTAL W程序(THOMPSON等，核酸研究，22，4673-4680，1994)建立的与核苷酸数据库中典型AMPKγ序列进行的氨基酸比对。
图3的说明：
所用序列：
HumG1：基因库编号U42412
MusG1：基因库编号AF036535
HumG2：人PRKAG2(基因库编号AJ249976)
PigG3：猪PRKAG3(此研究项目)
HumG3：人PRKAG3(此研究项目)
Dros：果蝇(基因库编号AF094764)
SNF4(酵母)：基因库编号M30470
PRKAG2和果蝇序列均具有较长的氨基末端区，但它们未显示出与PRKAG3氨基末端区有明显的同源，因此并未包括在内。
缩与：
*：终止密码子
‘_’：与主要序列同一
‘.’：比对缺口
四个CBS结构域均用上划线标示，RN-突变的位置以箭头标出。
下表2显示了哺乳动物、果蝇和酵母AMPKG/SNF4序列中的氨基酸(对角线以上)和核苷酸序列(对角线以下)的同一性(以％表示)。以猪PRKAG3和人PRKAG3为例，分别参照其由SEQ ID NO：1和SEQID NO：3代表的部分计算核苷酸序列同一性，参照SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4计算氨基酸序列同一性。
表2
  PigG3   HumG3   HumG1   RatG1   MusG1   HumG2   Dros   SNF4
  PigG3   -   97.0   64.2   64.2   63.9   62.6   53.2   34.0
  HumG3   90.7   -   63.6   63.6   63.6   62.6   53.5   34.4
  HumG1   64.2   64.5   -   96.7   96.3   75.6   60.9   33.5
  RatG1   65.8   65.8   88.0   -   97.4   75.3   61.1   33.5
  MusG1   65.3   64.8   87.2   92.8   -   74.6   61.7   33.5
  HumG2   61.6   61.6   68.1   67.8   65.9   -   63.1   34.5
  Dros   58.4   58.4   59.0   59.3   59.0   60.0   -   36.2
  SNF4   44.0   442   45.4   44.6   45.3   45.7   44.8   -
图4显示了以酵母SNF4作为外组(out group)，用PAUP软件(SWOFFORD，应用吝啬法(或其它方法)进行的系统发生分析，Sinaurer联合有限公司出版社，Sunderland，Massachusetts，1998)建立的邻近接合的系统发生树；显示了在引导程序分析中用1000个复制子获得的分支次序值，树的比例尺标示于底部。结果显示位于RN区的猪基因与哺乳动物PRKAG1和PRKAG2同工型不同，且最可能与来自肌肉cDNA文库之人EST序列AA178898(GenBank)所代表的人基因直向进化同源。此基因在此命名为PRKAG3，因为它是迄今为止鉴定的哺乳动物AMP-活化蛋白激酶γ的第三个同工型。
利用人骨骼肌cDNA通过RT-PCR和5’RACE分析确定此基因的cDNA序列(Clontech，Palo Alto，CA)。该序列显示于图2和序列表中的SEQ IDNO：3。推断与猪序列SEQ ID NO：2(参照表2)具97％同一性的多肽序列如图2及序列表中的SEQ ID NO：4所示。
完整的cDNA序列如所附序列表中的SEQ ID NO：29所示；推断的多肽序列如所附序列表中的SEQ ID NO：30及图3所示。
我们用高分辨率的人TNG放射性杂交盘(http://shgc-www.stanford.edu/RH/TNGindex.html)将均存在于猪BAC127G6中的PRKAG3、CYP27A1和KIAA0173的人直向进化同源物进行作图。这三个基因在人基因组中也是非常紧密连锁。PRKAG3作图于距KIAA0173 33 cR50.000而距CYP27A1 52 cR50.000处，优势对数记分值(lodscore support)分别为6.8和4.5。
由于已确定AMPK在能量代谢调节，包括糖原贮存中有重要作用，以及它位于最大连锁不均衡区域内，使得PRKAG3成为极强的RN候选基因。这一结论通过用人PRKAG1(相应于GenBank登录号AA018675的IMAGE克隆0362755)、人PRKAG2(相应于GenBank登录号W15439的IMAGE克隆0322735)和猪PRKAG3探针进行的人多组织RNA印迹杂交分析得到进一步的证实。结果如图5所示。
图5的说明：
H：心脏，B：脑，Pl：胎盘，L：肺，Li：肝脏，M：骨骼肌，K：肾脏，Pa：胰腺，S：脾脏，Th：胸腺，P：前列腺，T：睾丸，O：卵巢，I：小肠，C：结肠(粘膜内层)，PBL：外周血白细胞。
PRKAG1和PRKAG2探针显示出广泛的表达组织分布，而PRKSAG3显示了独特的肌肉特异性表达。此结果也得到了人EST数据库的支持，其中代表PRKAG1和PRKAG2的多个EST已在多个cDNA文库中得到鉴定，而代表PRKAG3的单个EST(基因库登录号AA178898)获自肌肉cDNA文库。PRKAG3的肌肉特异性表达以及在肝脏中缺乏表达与RN-的表型效果完全一致，即糖原含量在肌肉中有所改变而在肝脏中是正常的(ESTRADE等，Comp.Biochem.Physiol.104B，321-326，1993)。
用RT-PCR从rn+/rn+和RN-/RN-纯合子中测定PRKAG3序列。比较显示出共有7个核苷酸差异，其中4个无义取代发现存在于rn+和RN-动物序列之间，如下表3中所示。对带有来自另外的不同种类rn+和RN-猪之基因组DNA的这7个SNP进行筛选，展示有5个不同的PRKAG3等位基因，但只有R41Q错义取代是唯一与RN-相关的。此非保守性取代发生于CBS1中，在AMPKγ链同种型中CBS1是最保守的区域，而此残基(在Prkag1中为第70位)处的精氨酸在哺乳动物AMPKγ链的不同同工型及相应的果蝇序列中是保守的(图3)。以寡核苷酸连接检测法为基础设计了检测R41Q突变的简单诊断DNA试验(OLA；LANDEGREN等，科学，241，1077-1080，1988)。从汉普郡种中筛选大量RN-和rn+动物以及从其它品系中筛选大量rn+动物，显示41Q等位基因存在于所有的RN-动物中，但在任何rn+动物中均未发现，如下表4所示。其它种类中缺乏41Q等位基因的结果与有关RN-等位基因起源于汉普郡种的假设相一致；在来自其它品系的纯种动物中至今未发现该等位基因。总之，这些结果提供了令人信服的证据证明PRKAG3是与RN基因同一的，而R41Q取代最可能是作为起因的突变。
表3.与不同猪种群中rn+和RN-等位基因相关的PRKAG3序列比较a
Figure C0081342400241
a核苷酸和密码子的数字指序列SEQ ID NO：1的编号
bH＝汉普郡猪，L＝兰德瑞斯猪，LW＝大白猪，M＝Meishan，WB＝野猪，D＝杜洛克猪
N.D.＝未确定，“-”表示与上排序列相同。
表4
Figure C0081342400251
a代表法国和瑞典汉普郡种群
b用家谱信息推断为杂合子RN-/rn+
c品种：Angler Saddleback，n＝31；Blond Mangalitza，n＝2；Bunte Bentheimer，n＝16；杜洛克猪，n＝160；Gottinger Minipig，n＝4；兰德瑞斯猪，n＝83；大白猪，n＝72；Meishan，n＝8；Pietrain，n＝75；Red Mangalitza，n＝5；Rotbunte Husumer，n＝15；SchwalbenbaUch Mangalitza，n＝7；Schwabisch Hallische，n＝2；欧洲野猪，n＝5；日本野猪，n＝3。
d指SEQ ID NO：1的核苷酸编号
不用结合任何特殊的机制，推测包括PRKAG3在内的AMPK异型三聚体涉及葡萄糖转运入骨骼肌的调节。
最近已报道了由AMP类似物AICAR或肌肉收缩引起的AMPK激活导致了骨骼肌中葡萄糖摄入的增加(BERGERON等，美国生理学杂志(Am.J.Physiol.)，276，E938-944，1999；HAYASHI等，糖尿病(Diabetes)，47，1369-1373，1998)。若这是包括PRKAG3在内的异型三聚体的作用，则R41Q可能是产生组成型活性全酶的功能获得型突变，例如由于失活性变构位点的缺失所造成。如果这样，则RN-动物中降低的AMPK活性有可能反映由肌肉高能状态所造成的反馈抑制作用。如RN-动物中所观察到的，骨骼肌中葡萄糖摄入的增加预期会导致肌肉糖原含量的增加。已显示在转基因小鼠中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的过表达导致葡萄糖摄入增加和糖原贮存增加(TREADWAY等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，269，29956-29961，1994)。此类功能获得型模型与RN-的显性是一致的，因为单个的不受调控拷贝的存在会对AMPK酶活性产生很大的影响。
还可对与RN-等位基因相关的R41Q取代的功能意义提出另一种假设。基于酵母SNF1酶在糖原利用和哺乳动物AMPK抑制能量消耗途径和刺激能量产生途径的应用中已确定的作用，活化的AMPK预期能抑制糖原合成并刺激糖原降解。若这是包括PRKAG3产物在内的同工型的功能作用，R41Q取代将是一功能丧失型突变或锁定AMPK异型三聚体于失活状态的显性失活突变，并因而抑制AMP活化和糖原降解。在这些情况下，应该用单倍体不足来解释表型效应，因为RN-呈现完全的显性。
因此R41Q可以是显性失活突变，但只有在它干扰多个同工型时才有此可能，因为看起来肌肉中的主要AMPK活性与PRKAG1和2同工型相关[CHEUNG等，生化杂志(Biochem.J.)346，659(2000)]。
RN-突变的独特表型显示了PRKAG3在骨骼肌能量代谢的调节中起关键作用。例如，PRKAG3可能涉及对体育锻炼的适应性改变，与糖原贮存的增加相关。还可想象到的是，PRKAG3(或其它AMPK基因)中的功能丧失型突变可能使个体倾向于非胰岛素依赖型糖尿病，而AMPK同工型是治疗此类失调的潜在药物目标。
实施例2：猪PRKAG3中R41Q取代的检测
在10μl反应体系中扩增包括第41位密码子在内的一部分PRKAG3，反应体系中含100ng基因组DNA、0.2mM dNTP、1.5mM MgCl2、各4.0pmol的正向(AMPKG3F3：5′-GGAGCAAATGTGCAGACAAG-3′)和反向(AMPKG3R2：5′-CCCACGAAGCTCTGCTTCTT-3′)引物、10％DMSO、1U TaqDNA聚合酶和反应缓冲液(ADVANCED BIOTECH，伦敦，英国)。循环条件包括，起始于94℃保温5分钟，然后于94℃(1分钟)、57℃(1分钟)和72℃(1分钟)进行3个循环，之后是在94℃(20秒)、55℃(30秒)和72℃(30秒)进行35个循环。用寡核苷酸连接试验在第122位核苷酸处进行等位基因的辨别(OLA，LANDEGREN等，科学，241，1077-1080，1988)。OLA的方法是作为以凝胶为基础的试验来进行的。每10μl OLA反应液中含探针SNPRN-A(5’Hex-TGGCCAACGGCGTCCA-3′)，SNPRN-G(5′ROX-GGCCAACGGCGTCCG-3′)和SNPRN-普通型(5’磷酸酯-AGCGGCACCTTTGTGAAAAAAAAAA-3’)各0.5pmol、1.5U的热稳定性AMPLIGASE和反应缓冲液(EPICENTRE TECHNOLOGIES，Madison，WI)和0.5μlAMPKG3F3/AMPKG3R2 PCR产物。95℃起始保温5分钟后，重复以下的热循环过程10次：94℃(30秒)变性和55℃(90秒)探针退火和连接。OLA循环后，94℃(3分钟)热变性1μl产物，冰置冷却，然后加样至7％的聚丙烯酰胺变性凝胶中在ABI377 DNA序列仪(PERKINELMER，Foster City，美国)上进行电泳。用GENESCAN软件(PERKINELMER，Foster City，美国)分析产生的片段长度和荧光峰值。
用针对R41Q突变的OLA方法确定收集自68头瑞典汉普郡动物之DNA样品的基因型，基于它们的糖分解潜能(GP)值，这些动物表型为RN-或rn+。图6描述了来自3种可能基因型的典型OLA结果。所有的RN-动物归为第122位核苷酸纯合子A/A(n＝28)，杂合子A/G(n＝36)，而rn+动物在此位置纯合，是G/G(n＝4)。
实施例3：用紧密连锁的微卫星MS127B1预计RN-等位基因的存在
微卫星127B1(MS127B1)克隆自含猪PRKAG3的BAC 127G7。用Sau3AI消化该BAC克隆并将限制性片段亚克隆入pUC18的BamHI位点。用标记了[γ-32P]-dATP的(CA)15寡核苷酸探针探测所产生的文库。对强杂交的克隆进行测序，并设计用于微卫星位点PCR扩增的引物。进行10μlPCR反应，其中含100ng基因组DNA、0.2mM dNTPs、1.5mM MgCl2、各4.0pmol的正向(MS127B1F：5’-荧光素-CAAACTCTTCTAGGCGTGT-3′)和反向(MS127B1R：5′-GTTTCTGGAACTTCCATATGCCATGG-3′)引物、1U TaqDNA聚合酶和反应缓冲液(ADVANCED BIOTECH，伦敦，英国)。循环条件包括，起始于94℃保温5分钟，然后于94℃(1分钟)、57℃(1分钟)和72℃(1分钟)进行3个循环，之后是在94℃(20秒)、55℃(30秒)和72℃(30秒)进行35个循环。用4％的聚丙烯酰胺变性凝胶在ABI377DNA序列仪(PERKIN ELMER，Foster City，美国)上电泳分离PCR产物(0.3μl)。用GENESCAN和GENOTYPER软件(PERKIN ELMER，Foster City，美国)分析产生的片段长度。
此方法用于确定收集自87头瑞典汉普郡动物之DNA样品的基因型，基于它们的糖分解潜能(GP)值，这些动物表型为RN-或rn+。如下表5所示，108(bp)的等位基因显示出与此材料中的RN-等位基因全部相关，因为对于此等位基因来说，所有的RN-(RN-/RN-或RN-/rn+)动物都是纯合子或杂合子，而rn+(rn+/rn+)动物没有携带此等位基因的。
表5
实施例4：用PCR-RFLP试验检测RN-等位基因的存在
RN-突变使BsrBI位点GAG^CGG/CTC^GCC位点失活(BsrBI RE位点不是回文结构的)。在此位点，RN-序列是AAGCGG而非GAGCGG。
从猪基因组DNA中扩增134bp长的RN基因片段。在用BsrBI消化后，通过检测83和51bp长的两片段鉴定rn+等位基因的存在。
试验进行如下：
1°引物序列：
用于扩增RN突变区的引物序列：
RNU：5′GGGAACGATTCACCCTCAAC    3′
RNL：5′AGCCCCTCCTCACCCACGAA    3′
为提供消化的内部对照，已在两个引物之一末端20bp长尾部内添加BsrBI位点。此尾部允许BsrBI位点的产生(较短的尾部可能就已足够了)，且易于从其它片段中区别出未切的片段。使用加尾引物不会影响扩增的效率和特异性。
包括带BsrBI位点之调节尾部在内的RNL修饰引物序列是：
RNLBsrA14：5′
A5C2A7CCGCTCAGCCCCTCCTCACCCACGAA  3′
2°所用的PCR反应混合物：
50ng DNA
0.5U Taq聚合酶(GIBCO BRL)
1.5mM MgCl2
200mM dNTP
0.2μM各引物
总反应体积：25μl
3°所用的PCR条件(在OMNIGENE HYBAID热循环仪上)：
1x(95℃5分钟)
35x(57℃45秒，72℃45秒，95℃45秒)
1x(57℃45秒，72℃15分钟)
4°在37℃进行限制酶消化2小时：
10μl PCR产物
1xBsrBI BIOLABS缓冲液
5U BsrBI限制酶(BIOLABS)
总反应体积：15μl
5°用带调节尾部的引物进行PCR并以BsrBI消化后产生的片段大 小：：
来自RN-或rn+等位基因的未切片段：154bp
扩增自RN-等位基因的片段消化后：137bp+17bp
扩增自rn+等位基因的片段消化后：83bp+54bp+17bp
可在聚丙烯酰胺、琼脂糖/NUSIEVE或琼脂糖凝胶电泳后鉴定大小差异。
实施例5：V40I多态性对糖分解潜能的影响。
用FokI限制酶通过PCR-RFLP分析一套181个rn+/rn+纯合子动物(在SEQ ID NO：2的第41位为R/R)的V40I多态性(指SEQ ID NO：2的第40位)。按MONIN等人所述方法(肉制品科学(Meat Science)，13，49-63，1985)平行测定糖分解潜能。
结果如下表6所示：
表6
  在第40位的基因型   平均糖分解潜能   标准偏差   被检测动物的数目
  I/I   178.30   31.13   13
  V/I   204.15   37.73   164
  V/V   210.83   38.21   104
这些结果显示，V40I多态性对骨骼肌中的糖分解潜能具有重要的影响。
序列表
<110>INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE
     MILAN，Denis
     ANDERSSON，Leif
     LOOFT，Christian
     ROBIC，Annie
     ROGEL-GAILLARD，Claire
     IANNUCCELLI，Nathalie
     GELLIN，Joēl
     KALM，Ernst
     LE ROY，Pascale
     CHARDON，Patrick
<120>AMPKγ链的变体、其DNA编码序列及其用途
<130>MJPcb539-99
<140>
<141>
<150>EP 99402236.3
<151>1999-09-10
<150>EP 00401388.4
>151>2000-05-18
<160>32
<210>1
<211>1867
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<220>
<221>CDS
<222>(472)..(1389)
<400>1
ttcctagagc aaggagagag ccgttcatgg ccatcccgag ctgtaaccac cagctcagaa 60
agaagccatg gggaccaggg gaacaaggcc tctagatgga caaggcagga ggatgtagag 120
gaaggggggc ctccgggccc gagggaaggt ccccagtcca ggccagttgc tgagtccacc 180
gggcaggagg ccacattccc caaggccaca cccttggccc aagccgctcc cttggccgag 240
gtggacaacc ccccaacaga gcgggacatc ctcccctctg actgtgcagc ctcagcctcc 300
gactccaaca cagaccatct ggatctgggc atagagttct cagcctcggc ggcgtcgggg 360
gatgagcttg ggctggtgga agagaagcca gccccgtgcc catccccaga ggtgctgtta 420
cccaggctgg gctgggatga tgagctgcag aagccggggg cccaggtcta c atg cac  477
                                                         Met His
                                                           1
ttc atg cag gag cac acc tgc tac gat gcc atg gcg acc agc tcc aaa   525
Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser Lys
          5                  10                  15
ctg gtc atc ttc gac acc atg ctg gag atc aag aag gcc ttc ttt gcc    573
Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe Ala
     20                  25                  30
ctg gtg gcc aac ggc gtc cga gcg gca cct ttg tgg gac agc aag aag    621
Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys Lys
 35                  40                  45                  50
cag agc ttc gtg ggg atg ctg acc atc aca gac ttc atc ttg gtg ctg    669
Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu Val Leu
                 55                  60                  65
cac cgc tat tac agg tcc ccc ctg gtc cag atc tac gag att gaa gaa    717
His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu Glu
             70                  75                  80
cat aag att gag acc tgg agg gag atc tac ctt caa ggc tgc ttc aag    765
His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe Lys
         85                  90                  95
cct ctg gtc tcc atc tct ccc aat gac agc ctg ttc gaa gct gtc tac    813
Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val Tyr
    100                 105                 110
gcc ctc atc aag aac cgg atc cac cgc ctg ccg gtc ctg gac cct gtc    861
Ala Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro Val
115                 120                 125                 130
tcc ggg gct gtg ctc cac atc ctc aca cat aag cgg ctt ctc aag ttc    909
Ser Gly Ala Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys Phe
                135                 140                 145
ctg cac atc ttt ggc acc ctg ctg ccc cgg ccc tcc ttc ctc tac cgc    957
Leu His Ile Phe Gly Thr Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr Arg
            150                 155                 160
acc atc caa gat ttg ggc atc ggc aca ttc cga gac ttg gcc gtg gtg    1005
Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val Val
        165                 170                 175
ctg gaa acg gcg ccc atc ctg acc gca ctg gac atc ttc gtg gac cgg    1053
Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp Arg
    180                 185                 190
cgt gtg tct gcg ctg cct gtg gtc aac gaa act gga cag gta gtg ggc    1101
Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Thr Gly Gln Val Val Gly
195                 200                 205                 210
ctc tac tct cgc ttt gat gtg atc cac ctg gct gcc caa caa aca tac    1149
Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr Tyr
                215                 220                 225
aac cac ctg gac atg aat gtg gga gaa gcc ctg agg cag cgg aca ctg    1197
Asn His Leu Asp Met Asn Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr Leu
            230                 235                 240
tgt ctg gaa ggc gtc ctt tcc tgc cag ccc cac gag acc ttg ggg gaa    1245
Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Thr Leu Gly Glu
        245                 250                 255
gtc att gac cgg att gtc cgg gaa cag gtg cac cgc ctg gtg ctc gtg    1293
Val Ile Asp Arg Ile Val Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu Val
    260                 265                 270
gat gag acc cag cac ctt ctg ggc gtg gtg tcc ctc tct gac atc ctt    1341
Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp Ile Leu
275                 280                 285                 290
cag gct ctg gtg ctc agc cct gct gga att gat gcc ctc ggg gcc tga    1389
Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
                295                 300                 305
gaaccttgga acctttgctc tcaggccacc tggcacacct ggaagccagt gaagggagcc  1449
gtggactcag ctctcacttc ccctcagccc cacttgctgg tctggctctt gttcaggtag  1509
gctccgcccg gggcccctgg cctcagcatc agcccctcag tctccctggg cacccagatc  1569
tcagactggg gcaccctgaa gatgggagtg gcccagctta tagctgagca gccttgtgaa  1629
atctaccagc atcaagactc actgtgggac cactgctttg tcccattctc agctgaaatg  1689
atggagggcc tcataagagg ggtggacagg gcctggagta gaggccagat cagtgacgtg  1749
ccttcaggac ctccggggag ttagagctgc cctctctcag ttcagttccc ccctgctgag  1809
aatgtccctg gaaggaagcc agttaataaa ccttggttgg atggaatttc cacactcg    1867
<210>2
<211>305
<212>PRT
<213>Sus  scrofa
<400>2
Met His Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser
  1               5                  10                  15
Ser Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe
             20                  25                  30
Phe Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser
         35                  40                  45
Lys  Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu ThrIle Thr Asp Phe Ile Leu
      50                  55                  60
Val Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile
 65                  70                  75                  80
Glu Glu His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys
                 85                  90                  95
Phe Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala
            100                 105                 110
Val Tyr Ala Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp
        115                 120                 125
Pro Val Ser Gly Ala Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu
    130                 135                 140
Lys Phe Leu His Ile Phe Gly Thr Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu
145                 150                 155                 160
Tyr Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala
                165                 170                 175
Val Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val
            180                 185                 190
Asp Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Thr Gly Gln Val
        195                 200                 205
Val Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln
    210                 215                 220
Thr Tyr Asn His Leu Asp Met Asn Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg
225                 230                 235                 240
Thr Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Thr Leu
                245                 250                 255
Gly Glu Val Ile Asp Arg Ile Val Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val
            260                 265                 270
Leu Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp
        275                 280                 285
Ile Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly
    290                 295                 300
Ala
305
<210>3
<211>2109
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(472)..(1389)
<400>3
ttcctagagc aagaaaacag cagctcatgg ccatcaccag ctgtgaccag cagctcagaa  60
agaatccgtg ggaaacggag ggccaaagcc ttgagatgga caaggcagaa gtcggtggag  120
gaaggggagc caccaggtca gggggaaggt ccccggtcca ggccaactgc tgagtccacc  180
gggctggagg ccacattccc caagaccaca cccttggctc aagctgatcc tgccggggtg  240
ggcactccac caacagggtg ggactgcctc ccctctgact gtacagcctc agctgcaggc  300
tccagcacag atgatgtgga gctggccacg gagttcccag ccacagaggc ctgggagtgt  360
gagctagaag gcctgctgga agagaggcct gccctgtgcc tgtccccgca ggccccattt  420
cccaagctgg gctgggatga cgaactgcgg aaacccggcg cccagatcta c atg cgc   477
                                                               Met Arg
                                                                 1
ttc atg cag gag cac acc tgc tac gat gcc atg gca act agc tcc aag    525
Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser Lys
          5                  10                  15
cta gtc atc ttc gac acc atg ctg gag atc aag aag gcc ttc ttt gct    573
Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe Ala
     20                  25                  30
ctg gtg gcc aac ggt gtg cgg gca gcc cct cta tgg gac agc aag aag    621
Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys Lys
 35                  40                  45                  50
cag agc ttt gtg ggg atg ctg acc atc act gac ttc atc ctg gtg ctg    669
Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu Val Leu
                55                  60                  65
cat cgc tac tac agg tcc ccc ctg gtc cag atc tat gag att gaa caa    717
His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu Gln
             70                  75                  80
cat aag att gag acc tgg agg gag atc tac ctg caa ggc tgc ttc aag    765
His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe Lys
         85                  90                  95
cct ctg gtc tcc atc tct cct aat gat agc ctg ttt gaa gct gtc tac    813
Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val Tyr
    100                 105                 110
acc ctc atc aag aac cgg atc cat cgc ctg cct gtt ctt gac ccg gtg    861
Thr Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro Val
115                 120                 125                 130
tca ggc aac gta ctc cac atc ctc aca cac aaa cgc ctg ctc aag ttc    909
Ser Gly Asn Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys Phe
                135                 140                 145
ctg cac atc ttt ggt tcc ctg ctg ccc cgg ccc tcc ttc ctc tac cgc    957
Leu His Ile Phe Gly Ser Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr Arg
            150                 155                 160
act atc caa gat ttg ggc atc ggc aca ttc cga gac ttg gct gtg gtg    1005
Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val Val
        165                 170                 175
ctg gag aca gca ccc atc ctg act gca ctg gac atc ttt gtg gac cgg    1053
Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp Arg
    180                 185                 190
cgt gtg tct gca ctg cct gtg gtc aac gaa tgt ggt cag gtc gtg ggc    1101
Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Cys Gly Gln Val Val Gly
195                 200                 205                 210
ctc tat tcc cgc ttt gat gtg att cac ctg gct gcc cag caa acc tac    1149
Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr Tyr
                215                 220                 225
aac cac ctg gac atg agt gtg gga gaa gcc ctg agg cag agg aca cta    1197
Asn His Leu Asp Met Ser Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr Leu
            230                 235                 240
tgt ctg gag gga gtc ctt tcc tgc cag ccc cac gag agc ttg ggg gaa    1245
Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Ser Leu Gly Glu
        245                 250                 255
gtg atc gac agg att gct cgg gag cag gta cac agg ctg gtg cta gtg    1293
Val Ile Asp Arg Ile Ala Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu Val
    260                 265                 270
gac gag acc cag cat ctc ttg ggc gtg gtc tcc ctc tcc gac atc ctt    1341
Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp Ile Leu
275                 280                 285                 290
cag gca ctg gtg ctc agc cct gct ggc atc gat gcc ctc ggg gcc tga    1389
Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
                295                 300                 305
gaagatctga gtcctcaatc ccaagccaac tgcacactgg aagccaatga aggaattgag  1449
aacagcttca tttccccaac cccaatttgc tggttcagct atgattcagg cttcttcagc  1509
cttccaaaat tgcctttgcc ttacttgtgc tcccagaacc cttcgggcat gcccagtgca  1569
ccatgggatg atgaaattaa ggagaacagc tgagtcaagc ttggaggtcc ctgaaccaga  1629
ggcactagga ttaccccagg gccatctgtg ctccatgccc gcccatcccc ttgccgcctg  1689
actgggtcgg atggccccag tgggtttagt cagggcttct ggattcctcg gtttctgggc  1749
tacctatggc ttcagccttc agctcctggg agtcccagct gttgttccca gcaacgtcgc  1809
cactgccctc ctactctcca ggctttgtca tttcaaggct gctgaaatgc tgcatttcag  1869
gggccaccat ggagcagccg ttatttatag aactgcctgt tggaggtggg gagtcctccc  1929
tccattcttg tccagaaaac tccttagctc tcgcagtgag ccatgttctt agtctccagg  1989
gatggatggc cttgtatatg gacccctgag aatgagcaat tgagaaaaca aaacaaaagg  2049
aacaatccat gaacttagat tttattggtt tcactcaaaa tgctgcagtc atttgacctg  2109
<210>4
<211>305
<212>PRT
<213>人
<400>4
Met Arg Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser
  1               5                  10                  15
Ser Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe
             20                  25                  30
Phe Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser
         35                  40                  45
Lys Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu
     50                  55                  60
Val Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile
 65                  70                  75                  80
Glu Gln His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys
                 85                  90                  95
Phe Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala
            100                 105                 110
Val Tyr Thr Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp
        115                 120                 125
Pro Val Ser Gly Asn Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu
    130                 135                 140
Lys Phe Leu His Ile Phe Gly Ser Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu
145                 150                 155                 160
Tyr Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala
                165                 170                 175
Val Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val
            180                 185                 190
Asp Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Cys Gly Gln Val
        195                 200                 205
Val Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln
    210                 215                 220
Thr Tyr Asn His Leu Asp Met Ser Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg
225                 230                 235                 240
Thr Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Ser Leu
                245                 250                 255
Gly Glu Val Ile Asp Arg Ile Ala Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val
            260                 265                 270
Leu Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp
        275                 280                 285
Ile Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly
    290                 295                 300
Ala
305
<210>5
<211>20
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<213>Sus scrofa
<400>5
ggaatttcaa gtcagccaac    20
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<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>6
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<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
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<212>DNA
<213>Sus scrofa
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<213>Sus scrofa
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<213>Sus scrofa
<400>10
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<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>11
gaagtatcct gggcttctga           20
<210>12
<211>26
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>12
gtttctccag gtttccagac atccac    26
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>13
gcttctgtct gcccctactt           20
<210>14
<211>26
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>14
gtttctaagt tctactgtaa gacacc    26
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>15
ccaagctgtg gtggctgaat           20
<210>16
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>16
cagcacagca gtgccaccta           20
<210>17
<211>19
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>17
caaactcttc taggcgtgt           19
<210>18
<211>26
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>18
gtttctggaa cttccatatg ccatgg   26
<210>19
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>19
agggtggatg gtaggcttca     20
<210>20
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>20
gtctcgctcc tgaaggaagt     20
<210>21
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>21
agtcacgtgg ccatgctatc     20
<210>22
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>22
ctcaactgga ttgagtcagt     20
<210>23
<211>20
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>23
ttggcgcaac tgttatttct    20
<210>24
<211>19
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>24
aggcaaagga agagcacag     19
<210>25
<211>18
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>25
agccgtgggc atcgttgg      18
<210>26
<211>21
<212>DNA
<213>Sus scrofa
<400>26
agaaggagac agacagggcga                                              21
<210>27
<211>1873
<212>ADN
<213>Sus scrofa
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1395)
<400>27
atg agc ttc cta gag caa gga gag agc cgt tca tgg cca tcc cga gct    48
Met Ser Phe Leu Glu Gln Gly Glu Ser Arg Ser Trp Pro Ser Arg Ala
  1               5                  10                  15
gta acc acc agc tca gaa aga agc cat ggg gac cag ggg aac aag gcc    96
Val Thr Thr Ser Ser Glu Arg Ser His Gly Asp Gln Gly Asn Lys Ala
             20                  25                  30
tct aga tgg aca agg cag gag gat gta gag gaa ggg ggg cct ccg ggc    144
Ser Arg Trp Thr Arg Gln Glu Asp Val Glu Glu Gly Gly Pro Pro Gly
         35                  40                  45
ccg agg gaa ggt ccc cag tcc agg cca gtt gct gag tcc acc ggg cag    192
Pro Arg Glu Gly Pro Gln Ser Arg Pro Val Ala Glu Ser Thr Gly Gln
     50                  55                  60
gag gcc aca ttc ccc aag gcc aca ccc ttg gcc caa gcc gct ccc ttg    240
Glu Ala Thr Phe Pro Lys Ala Thr Pro Leu Ala Gln Ala Ala Pro Leu
 65                  70                  75                  80
gcc gag gtg gac aac ccc cca aca gag cgg gac atc ctc ccc tct gac    288
Ala Glu Val Asp Asn Pro Pro Thr Glu Arg Asp Ile Leu Pro Ser Asp
                 85                  90                  95
tgt gca gcc tca gcc tcc gac tcc aac aca gac cat ctg gat ctg ggc    336
Cys Ala Ala Ser Ala Ser Asp Ser Asn Thr Asp His Leu Asp Leu Gly
            100                 105                 110
ata gag ttc tca gcc tcg gcg gcg tcg ggg gat gag ctt ggg ctg gtg    384
Ile Glu Phe Ser Ala Ser Ala Ala Ser Gly Asp Glu Leu Gly Leu Val
        115                 120                 125
gaa gag aag cca gcc ccg tgc cca tcc cca gag gtg ctg tta ccc agg    432
Glu Glu Lys Pro Ala Pro Cys Pro Ser Pro Glu Val Leu Leu Pro Arg
    130                 135                 140
ctg ggc tgg gat gat gag ctg cag aag ccg ggg gcc cag gtc tac atg    480
Leu Gly Trp Asp Asp Glu Leu Gln Lys Pro Gly Ala Gln Val Tyr Met
145                 150                 155                 160
cac ttc atg cag gag cac acc tgc tac gat gcc atg gcg acc agc tcc    528
His Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser
                165                 170                 175
aaa ctg gtc atc ttc gac acc atg ctg gag atc aag aag gcc ttc ttt    576
Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe
            180                 185                 190
gcc ctg gtg gcc aac ggc gtc cga gcg gca cct ttg tgg gac agc aag    624
Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys
        195                 200                 205
aag cag agc ttc gtg ggg atg ctg acc atc aca gac ttc atc ttg gtg    672
Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu Val
    210                 215                 220
ctg cac cgc tat tac agg tcc ccc ctg gtc cag atc tac gag att gaa    720
Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu
225                 230                 235                 240
gaa cat aag att gag acc tgg agg gag atc tac ctt caa ggc tgc ttc    768
Glu His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe
                245                 250                 255
aag cct ctg gtc tcc atc tct ccc aat gac agc ctg ttc gaa gct gtc    816
Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val
            260                 265                 270
tac gcc ctc atc aag aac cgg atc cac cgc ctg ccg gtc ctg gac cct    864
Tyr Ala Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro
        275                 280                 285
gtc tcc ggg gct gtg ctc cac atc ctc aca cat aag cgg ctt ctc aag    912
Val Ser Gly Ala Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys
    290                 295                 300
ttc ctg cac atc ttt ggc acc ctg ctg ccc cgg ccc tcc ttc ctc tac    960
Phe Leu His Ile Phe Gly Thr Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr
305                 310                 315                 320
cgc acc atc caa gat ttg ggc atc ggc aca ttc cga gac ttg gcc gtg    1008
Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val
                325                 330                 335
gtg ctg gaa acg gcg ccc atc ctg acc gca ctg gac atc ttc gtg gac    1056
Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp
            340                 345                 350
cgg cgt gtg tct gcg ctg cct gtg gtc aac gaa act gga cag gta gtg    1104
Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Thr Gly Gln Val Val
        355                 360                 365
ggc ctc tac tct cgc ttt gat gtg atc cac ctg gct gcc caa caa aca    1152
Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr
    370                 375                 380
tac aac cac ctg gac atg aat gtg gga gaa gcc ctg agg cag cgg aca    1200
Tyr Asn His Leu Asp Met Asn Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr
385                 390                 395                 400
ctg tgt ctg gaa ggc gtc ctt tcc tgc cag ccc cac gag acc ttg ggg    1248
Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Thr Leu Gly
                405                 410                 415
gaa gtc att gac cgg att gtc cgg gaa cag gtg cac cgc ctg gtg ctc    1296
Glu Val Ile Asp Arg Ile Val Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu
            420                 425                 430
gtg gat gag acc cag cac ctt ctg ggc gtg gtg tcc ctc tct gac atc    1344
Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp Ile
        435                 440                 445
ctt cag gct ctg gtg ctc agc cct gct gga att gat gcc ctc ggg gcc    1392
Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
    450                 455                 460
tga gaaccttgga acctttgctc tcaggccacc tggcacacct ggaagccagt         1445
465
gaagggagcc gtggactcag ctctcacttc ccctcagccc cacttgctgg tctggctctt  1505
gttcaggtag gctccgcccg gggcccctgg cctcagcatc agcccctcag tctccctggg  1565
cacccagatc tcagactggg gcaccctgaa gatgggagtg gcccagctta tagctgagca  1625
gccttgtgaa atctaccagc atcaagactc actgtgggac cactgctttg tcccattctc  1685
agctgaaatg atggagggcc tcataagagg ggtggacagg gcctggagta gaggccagat  1745
cagtgacgtg ccttcaggac ctccggggag ttagagctgc cctctctcag ttcagttccc  1805
ccctgctgag aatgtccctg gaaggaagcc agttaataaa ccttggttgg atggaatttg  1865
gagagtcg                                                           1873
<210>28
<211>464
<212>PRT
<213>Sus scrofa
<400>28
Met Ser Phe Leu Glu Gln Gly Glu Ser Arg Ser Trp Pro Ser Arg Ala
  1               5                  10                  15
Val Thr Thr Ser Ser Glu Arg Ser His Gly Asp Gln Gly Asn Lys Ala
             20                  25                  30
Ser Arg Trp Thr Arg Gln Glu Asp Val Glu Glu Gly Gly Pro Pro Gly
         35                  40                  45
Pro Arg Glu Gly Pro Gln Ser Arg Pro Val Ala Glu Ser Thr Gly Gln
     50                  55                  60
Glu Ala Thr Phe Pro Lys Ala Thr Pro Leu Ala Gln Ala Ala Pro Leu
65                  70                  75                  80
Ala Glu Val Asp Asn Pro Pro Thr Glu Arg Asp Ile Leu Pro Ser Asp
                 85                  90                  95
Cys Ala Ala Ser Ala Ser Asp Ser Asn Thr Asp His Leu Asp Leu Gly
            100                 105                 110
Ile Glu Phe Ser Ala Ser Ala Ala Ser Gly Asp Glu Leu Gly Leu Val
        115                 120                 125
Glu Glu Lys Pro Ala Pro Cys Pro Ser Pro Glu Val Leu Leu Pro Arg
    130                 135                 140
Leu Gly Trp Asp Asp Glu Leu Gln Lys Pro Gly Ala Gln Val Tyr Met
145                 150                 155                 160
His Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser
                165                 170                 175
Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe
            180                 185                 190
Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys
        195                 200                 205
Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu Val
    210                 215                 220
Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu
225                 230                 235                 240
Glu His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe
                245                 250                 255
Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val
            260                 265                 270
Tyr Ala Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro
        275                 280                 285
Val Ser Gly Ala Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys
    290                 295                 300
Phe Leu His Ile Phe Gly Thr Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val
                325                 330                 335
Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp
            340                 345                 350
Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Thr Gly Gln Val Val
        355                 360                 365
Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr
    370                 375                 380
Tyr Asn His Leu Asp Met Asn Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr
385                 390                 395                 400
Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Thr Leu Gly
                405                 410                 415
Glu Val Ile Asp Arg Ile Val Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu
            420                 425                 430
Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp Ile
        435                 440                 445
Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
    450                 455                 460
<210>29
<211>2115
<212>ADN
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1395)
<400>29
atg agc ttc cta gag caa gaa aac agc agc tca tgg cca tca cca gct    48
Met Ser Phe Leu Glu Gln Glu Asn Ser Ser Ser Trp Pro Ser Pro Ala
  1               5                  10                  15
gtg acc agc agc tca gaa aga atc cgt ggg aaa cgg agg gcc aaa gcc    96
Val Thr Ser Ser Ser Glu Arg Ile Arg Gly Lys Arg Arg Ala Lys Ala
             20                  25                  30
ttg aga tgg aca agg cag aag tcg gtg gag gaa ggg gag cca cca ggt    144
Leu Arg Trp Thr Arg Gln Lys Ser Val Glu Glu Gly Glu Pro Pro Gly
         35                  40                  45
cag ggg gaa ggt ccc cgg tcc agg cca act gct gag tcc acc ggg ctg    192
Gln Gly Glu Gly Pro Arg Ser Arg Pro Thr Ala Glu Ser Thr Gly Leu
     50                  55                  60
gag gcc aca ttc ccc aag acc aca ccc ttg gct caa gct gat cct gcc    240
Glu Ala Thr Phe Pro Lys Thr Thr Pro Leu Ala Gln Ala Asp Pro Ala
 65                  70                  75                  80
ggg gtg ggc act cca cca aca ggg tgg gac tgc ctc ccc tct gac tgt    288
Gly Val Gly Thr Pro Pro Thr Gly Trp Asp Cys Leu Pro Ser Asp Cys
                 85                  90                  95
aca gcc tca gct gca ggc tcc agc aca gat gat gtg gag ctg gcc acg    336
Thr Ala Ser Ala Ala Gly Ser Ser Thr Asp Asp Val Glu Leu Ala Thr
            100                 105                 110
gag ttc cca gcc aca gag gcc tgg gag tgt gag cta gaa ggc ctg ctg    384
Glu Phe Pro Ala Thr Glu Ala Trp Glu Cys Glu Leu Glu Gly Leu Leu
        115                 120                 125
gaa gag agg cct gcc ctg tgc ctg tcc ccg cag gcc cca ttt ccc aag    432
Glu Glu Arg Pro Ala Leu Cys Leu Ser Pro Gln Ala Pro Phe Pro Lys
    130                 135                 140
ctg ggc tgg gat gac gaa ctg cgg aaa ccc ggc gcc cag atc tac atg    480
Leu Gly Trp Asp Asp Glu Leu Arg Lys Pro Gly Ala Gln Ile Tyr Met
145                 150                 155                 160
cgc ttc atg cag gag cac acc tgc tac gat gcc atg gca act agc tcc    528
Arg Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser
                165                 170                 175
aag cta gtc atc ttc gac acc atg ctg gag atc aag aag gcc ttc ttt    576
Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe
            180                 185                 190
gct ctg gtg gcc aac ggt gtg cgg gca gcc cct cta tgg gac agc aag    624
Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys
        195                 200                 205
aag cag agc ttt gtg ggg atg ctg acc atc act gac ttc atc ctg gtg    672
Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp  Phe Ile Leu Val
    210                 215                 220
ctg cat cgc tac tac agg tcc ccc ctg gtc cag atc tat gag att gaa    720
Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu
225                 230                 235                 240
caa cat aag att gag acc tgg agg gag atc tac ctg caa ggc tgc ttc    768
Gln His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe
                245                 250                 255
aag cct ctg gtc tcc atc tct cct aat gat agc ctg ttt gaa gct gtc    816
Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val
            260                 265                 270
tac acc ctc atc aag aac cgg atc cat cgc ctg cct gtt ctt gac ccg    864
Tyr Thr Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro
        275                 280                 285
gtg tca ggc aac gta ctc cac atc ctc aca cac aaa cgc ctg ctc aag    912
Val Ser Gly Asn Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys
    290                 295                 300
ttc ctg cac atc ttt ggt tcc ctg ctg ccc cgg ccc tcc ttc ctc tac    960
Phe Leu His Ile Phe Gly Ser Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr
305                 310                 315                 320
cgc act atc caa gat ttg ggc atc ggc aca ttc cga gac ttg gct gtg    1008
Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val
                325                 330                 335
gtg ctg gag aca gca ccc atc ctg act gca ctg gac atc ttt gtg gac    1056
Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp
            340                 345                 350
cgg cgt gtg tct gca ctg cct gtg gtc aac gaa tgt ggt cag gtc gtg    1104
Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Cys Gly Gln Val Val
        355                 360                 365
ggc ctc tat tcc cgc ttt gat gtg att cac ctg gct gcc cag caa acc    1152
Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr
    370                 375                 380
tac aac cac ctg gac atg agt gtg gga gaa gcc ctg agg cag agg aca    1200
Tyr Asn His Leu Asp Met Ser Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr
385                 390                 395                 400
cta tgt ctg gag gga gtc ctt tcc tgc cag ccc cac gag agc ttg ggg    1248
Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Ser Leu Gly
                405                 410                 415
gaa gtg atc gac agg att gct cgg gag cag gta cac agg ctg gtg cta    1296
Glu Val Ile Asp Arg Ile Ala Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu
            420                 425                 430
gtg gac gag acc cag cat ctc ttg ggc gtg gtc tcc ctc tcc gac atc    1344
Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser Asp Ile
        435                 440                 445
ctt cag gca ctg gtg ctc agc cct gct ggc atc gat gcc ctc ggg gcc    1392
Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
    450                 455                 460
tga gaagatctga gtcctcaatc ccaagccaac tgcacactgg aagccaatga         1445
465
aggaattgag aacagcttca tttccccaac cccaatttgc tggttcagct atgattcagg  1505
cttcttcagc cttccaaaat tgcctttgcc ttacttgtgc tcccagaacc cttcgggcat  1565
gcccagtgca ccatgggatg atgaaattaa ggagaacagc tgagtcaagc ttggaggtcc  1625
ctgaaccaga ggcactagga ttaccccagg gccatctgtg ctccatgccc gcccatcccc  1685
ttgccgcctg actgggtcgg atggccccag tgggtttagt cagggcttct ggattcctcg  1745
gtttctgggc tacctatggc ttcagccttc agctcctggg agtcccagct gttgttccca  1805
gcaacgtcgc cactgccctc ctactctcca ggctttgtca tttcaaggct gctgaaatgc  1865
tgcatttcag gggccaccat ggagcagccg ttatttatag aactgcctgt tggaggtggg  1925
gagtcctccc tccattcttg tccagaaaac tccttagctc tcgcagtgag ccatgttctt  1985
agtctccagg gatggatggc cttgtatatg gacccctgag aatgagcaat tgagaaaaca  2045
aaacaaaagg aacaatccat gaacttagat tttattggtt tcactcaaaa tgctgcagtc  2105
atttgacctg                                                         2115
<210>30
<211>464
<212>PRT
<213>人
<400>30
Met Ser Phe Leu Glu Gln Glu Asn Ser Ser Ser Trp Pro Ser Pro Ala
  1               5                  10                  15
Val Thr Ser Ser Ser Glu Arg Ile Arg Gly Lys Arg Arg Ala Lys Ala
             20                  25                  30
Leu Arg Trp Thr Arg Gln Lys Ser Val Glu Glu Gly Glu Pro Pro Gly
         35                  40                  45
Gln Gly Glu Gly Pro Arg Ser Arg Pro Thr Ala Glu Ser Thr Gly Leu
     50                  55                  60
Glu Ala Thr Phe Pro Lys Thr Thr Pro Leu Ala Gln Ala Asp Pro Ala
 65                  70                  75                  80
Gly Val Gly Thr Pro Pro Thr Gly Trp Asp Cys Leu Pro Ser Asp Cys
                 85                  90                  95
Thr Ala Ser Ala Ala Gly Ser Ser Thr Asp Asp Val Glu Leu Ala Thr
            100                 105                 110
Glu Phe Pro Ala Thr Glu Ala Trp Glu Cys Glu Leu Glu GlyLeu Leu
        115                 120                 125
Glu Glu Arg Pro Ala Leu Cys Leu Ser Pro Gln Ala Pro Phe Pro Lys
    130                 135                 140
Leu Gly Trp Asp Asp Glu Leu Arg Lys Pro Gly Ala Gln Ile Tyr Met
145                 150                 155                 160
Arg Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr Ser Ser
                165                 170                 175
Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Phe
            180                 185                 190
Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp Ser Lys
        195                 200                 205
Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile Leu Val
    210                 215                 220
Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu Ile Glu
225                 230                 235                 240
Gln His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly Cys Phe
                245                 250                 255
Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu Ala Val
            260                 265                 270
Tyr Thr Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu Asp Pro
        275                 280                 285
Val Ser Gly Asn Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu Leu Lys
    290                 295                 300
Phe Leu His Ile Phe Gly ser Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe Leu Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu Ala Val
                325                 330                 335
Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe Val Asp
            340                 345                 350
Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Cys Gly Gln Val Val
        355                 360                 365
Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln Gln Thr
    370                 375                 380
Tyr Asn His Leu Asp Met Ser Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln Arg Thr
385                 390                 395                 400
Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Ser Leu Gly
                405                 410                 415
Glu Val Ile Asp Arg Ile Ala Arg Glu Gln Val His Arg Leu Val Leu
            420                 425                 430
Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser A5p Ile
        435                 440                 445
Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu Gly Ala
    450                 455                 460
<210>31
<211>2022
<212>ADN
<213>Sus scrofa
<400>31
atggagcttg ccgagctaga gcaggcactg cgcagggtcc cggggtcccg ggggggctgg  60
gagctggagc aactgaggcc agagggcaga gggcccacca ctgcggatac tccctcctgg  120
agcagcctcg ggggacctaa gcatcaagag atgagcttcc tagagcaagg agagagccgt  180
tcatggccat cccgagctgt aaccaccagc tcagaaagaa gccatgggga ccaggggaac  240
aaggcctcta gatggacaag gcaggaggat gtagaggaag gggggcctcc gggcccgagg  300
gaaggtcccc agtccaggcc agttgctgag tccaccgggc aggaggccac attccccaag  360
gccacaccct tggcccaagc cgctcccttg gccgaggtgg acaacccccc aacagagcgg  420
gacatcctcc cctctgactg tgcagcctca gcctccgact ccaacacaga ccatctggat  480
ctgggcatag agttctcagc ctcggcggcg tcgggggatg agcttgggct ggtggaagag  540
aagccagccc cgtgcccatc cccagaggtg ctgttaccca ggctgggctg ggatgatgag  600
ctgcagaagc cgggggccca ggtctacatg cacttcatgc aggagcacac ctgctacgat  660
gccatggcga ccagctccaa actggtcatc ttcgacacca tgctggagat caagaaggcc  720
ttctttgccc tggtggccaa cggcgtccga gcggcacctt tgtgggacag caagaagcag  780
agcttcgtgg ggatgctgac catcacagac ttcatcttgg tgctgcaccg ctattacagg  840
tcccccctgg tccagatcta cgagattgaa gaacataaga ttgagacctg gagggagatc  900
taccttcaag gctgcttcaa gcctctggtc tccatctctc ccaatgacag cctgttcgaa  960
gctgtctacg ccctcatcaa gaaccggatc caccgcctgc cggtcctgga ccctgtctcc  1020
ggggctgtgc tccacatcct cacacataag cggcttctca agttcctgca catctttggc  1080
accctgctgc cccggccctc cttcctctac cgcaccatcc aagatttggg catcggcaca  1140
ttccgagact tggccgtggt gctggaaacg gcgcccatcc tgaccgcact ggacatcttc  1200
gtggaccggc gtgtgtctgc gctgcctgtg gtcaacgaaa ctggacaggt agtgggcctc  1260
tactctcgct ttgatgtgat ccacctggct gcccaacaaa catacaacca cctggacatg  1320
aatgtgggag aagccctgag gcagcggaca ctgtgtctgg aaggcgtcct ttcctgccag  1380
ccccacgaga ccttggggga agtcattgac cggattgtcc gggaacaggt gcaccgcctg  1440
gtgctcgtgg atgagaccca gcaccttctg ggcgtggtgt ccctctctga catccttcag  1500
gctctggtgc tcagccctgc tggaattgat gccctcgggg cctgagaacc ttggaacctt  1560
tgctctcagg ccacctggca cacctggaag ccagtgaagg gagccgtgga ctcagctctc  1620
acttcccctc agccccactt gctggtctgg ctcttgttca ggtaggctcc gcccggggcc  1680
cctggcctca gcatcagccc ctcagtctcc ctgggcaccc agatctcaga ctggggcacc  1740
ctgaagatgg gagtggccca gcttatagct gagcagcctt gtgaaatcta ccagcatcaa  1800
gactcactgt gggaccactg ctttgtccca ttctcagctg aaatgatgga gggcctcata  1860
agaggggtgg acagggcctg gagtagaggc cagatcagtg acgtgccttc aggacctccg  1920
gggagttaga gctgccctct ctcagttcag ttcccccctg ctgagaatgt ccctggaagg  1980
aagccagtta ataaaccttg gttggatgga atttggagag tc                     2022
<210>32
<211>514
<212>PRT
<213>Sus scrofa
<400>32
Met Glu Leu Ala Glu Leu Glu Gln Ala Leu Arg Arg Val Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Arg Gly Gly Trp Glu Leu Glu Gln Leu Arg Pro Glu Gly Arg Gly Pro
             20                  25                  30
Thr Thr Ala Asp Thr Pro Ser Trp Ser Ser Leu Gly Gly Pro Lys His
         35                  40                  45
Gln Glu Met Ser Phe Leu Glu Gln Gly Glu Ser Arg Ser Trp Pro Ser
     50                  55                  60
Arg Ala Val Thr Thr Ser Ser Glu Arg Ser His Gly Asp Gln Gly Asn
 65                  70                  75                  80
Lys Ala Ser Arg Trp Thr Arg Gln Glu Asp Val Glu Glu Gly Gly Pro
                 85                  90                  95
Pro Gly Pro Arg Glu Gly Pro Gln Ser Arg Pro Val Ala Glu Ser Thr
            100                 105                 110
Gly Gln Glu Ala Thr Phe Pro Lys Ala Thr Pro Leu Ala Gln Ala Ala
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Glu Val Asp Asn Pro Pro Thr Glu Arg Asp Ile Leu Pro
    130                 135                 140
Ser Asp Cys Ala Ala Ser Ala Ser Asp Ser Asn Thr Asp His Leu Asp
145                 150                 155                 160
Leu Gly Ile Glu Phe Ser Ala Ser Ala Ala Ser Gly Asp Glu Leu Gly
                165                 170                 175
Leu Val Glu Glu Lys Pro Ala Pro Cys Pro Ser Pro Glu Val Leu Leu
            180                 185                 190
Pro Arg Leu Gly Trp Asp Asp Glu Leu Gln Lys Pro Gly Ala Gln Val
        195                 200                 205
Tyr Met His Phe Met Gln Glu His Thr Cys Tyr Asp Ala Met Ala Thr
    210                 215                 220
Ser Ser Lys Leu Val Ile Phe Asp Thr Met Leu Glu Ile Lys Lys Ala
225                 230                 235                 240
Phe Phe Ala Leu Val Ala Asn Gly Val Arg Ala Ala Pro Leu Trp Asp
                245                 250                 255
Ser Lys Lys Gln Ser Phe Val Gly Met Leu Thr Ile Thr Asp Phe Ile
            260                 265                 270
Leu Val Leu His Arg Tyr Tyr Arg Ser Pro Leu Val Gln Ile Tyr Glu
        275                 280                 285
Ile Glu Glu His Lys Ile Glu Thr Trp Arg Glu Ile Tyr Leu Gln Gly
    290                 295                 300
Cys Phe Lys Pro Leu Val Ser Ile Ser Pro Asn Asp Ser Leu Phe Glu
305                 310                 315                 320
Ala Val Tyr Ala Leu Ile Lys Asn Arg Ile His Arg Leu Pro Val Leu
                325                 330                 335
Asp Pro Val Ser Gly Ala Val Leu His Ile Leu Thr His Lys Arg Leu
            340                 345                 350
Leu Lys Phe Leu His Ile Phe Gly Thr Leu Leu Pro Arg Pro Ser Phe
        355                 360                 365
Leu Tyr Arg Thr Ile Gln Asp Leu Gly Ile Gly Thr Phe Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Ala Val Val Leu Glu Thr Ala Pro Ile Leu Thr Ala Leu Asp Ile Phe
385                 390                 395                 400
Val Asp Arg Arg Val Ser Ala Leu Pro Val Val Asn Glu Thr Gly Gln
                405                 410                 415
Val Val Gly Leu Tyr Ser Arg Phe Asp Val Ile His Leu Ala Ala Gln
            420                 425                 430
Gln Thr Tyr Asn His Leu Asp Met Asn Val Gly Glu Ala Leu Arg Gln
        435                 440                 445
Arg Thr Leu Cys Leu Glu Gly Val Leu Ser Cys Gln Pro His Glu Thr
    450                 455                 460
Leu Gly Glu Val Ile Asp Arg Ile Val Arg Glu Gln Val His Arg Leu
465                 470                 475                 480
Val Leu Val Asp Glu Thr Gln His Leu Leu Gly Val Val Ser Leu Ser
                485                 490                 495
Asp Ile Leu Gln Ala Leu Val Leu Ser Pro Ala Gly Ile Asp Ala Leu
            500                 505                 510
Gly Ala

Claims (26)

1.AMP-激活激酶(AMPK)的γ亚基，其中所说的γ亚基是选自下列的多肽：
-由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：32的序列组成的猪AMPK的γ亚基；
-由SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：30的序列组成的人AMPK的γ亚基。
2.权利要求1的AMPK的γ亚基的功能改变型突变体多肽，其中所述多肽选自：
-由因SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第41位的R→Q取代而产生的序列组成的多肽；
-由因相当于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4第40位的位置处发生的V→I取代而产生的序列组成的多肽。
3.权利要求1的AMPK的γ亚基的功能改变型突变体多肽，其中所述多肽具有造成所述功能改变的缺失，所述缺失位于相应于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的残基30-50的区域。
4.编码权利要求1至3中任一项的多肽的核酸序列。
5.核酸序列，其是权利要求4的核酸序列的全长互补序列。
6.权利要求4的核酸序列，其由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：31的序列组成。
7.核酸序列，其是权利要求6的核酸序列的全长互补序列。
8.核酸序列，其由权利要求4-7任一项的核酸序列和最多500kb的3’和5’邻近基因组DNA序列中至少之一组成。
9.核酸序列，其是权利要求8的核酸序列的全长互补序列。
10.包含权利要求4至9任一项之核酸序列的重组载体。
11.用权利要求4至9任一项之核酸序列转化的宿主细胞。
12.一种用于制备非人转基因动物的方法，其中所述方法包括在所述动物的基因组中引入编码权利要求1-3任一项的多肽的核酸序列。
13.一种制备基因敲除的非人动物的方法，其中所述方法包括在所述动物中失活编码权利要求1-3任一项的多肽的基因。
14.异型三聚体AMPK，其中的γ亚基由权利要求1至3任一项的多肽组成。
15.权利要求2或3的多肽或者编码所述多肽的核酸分子在制备用于诊断人或猪中的代谢失调的诊断剂中的用途。
16.权利要求15的用途，其中所述代谢失调与肌肉细胞中糖原积累的改变相关，且因权利要求2或3的多肽的功能改变型等位基因的表达所致。
17.权利要求15或16的用途，其中所述对代谢失调的诊断如下进行：在所述探针与待检测突变序列特异杂交的条件下，将核酸样品与源自编码权利要求2或3的突变体多肽的核酸并跨越所述突变的核酸探针接触，并检测杂交复合物。
18.获得可用于检测遗传多态性标记的引物对的方法，所述标记与编码权利要求1至3任一项之多肽的核酸序列连锁，其中所述方法包括：
-用特异于权利要求4至9任一项的核酸序列的探针筛选选自人和猪的哺乳动物的基因组DNA文库，以便选择出含所述核酸序列及侧翼染色体序列的克隆；
-在所述侧翼染色体序列中鉴定多态性位点，并对含所述多态性位点的DNA区段进行测序；
-设计所述多态性位点两侧的引物对。
19.权利要求18的方法，其中选择出的克隆由权利要求4至9任一项的核酸序列以及至多500kb的3’和5’邻近序列中至少之一组成。
20.权利要求18的方法，其中所述哺乳动物是猪。
21.可用权利要求20的方法获得的引物对，其中所述引物对选自：
-由SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6组成的引物对；
-由SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的引物对；
-由SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10组成的引物对；
-由SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12组成的引物对；
-由SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14组成的引物对；
-由SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16组成的引物对；
-由SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18组成的引物对；
-由SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20组成的引物对；
-由SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22组成的引物对；
-由SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24组成的引物对；
-由SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26组成的引物对。
22.权利要求21的引物对在制备用于诊断人或猪中的代谢失调的诊断剂中的用途。
23.权利要求22的用途，其中所述诊断检测SEQ ID NO：2中的R41Q取代。
24.权利要求11的转化细胞在筛选能调节AMPK活性的化合物中的用途。
25.权利要求12的方法获得的非人转基因动物在筛选能调节AMPK活性的化合物中的用途。
26.权利要求13的方法获得的基因敲除的非人动物在筛选于缺少权利要求1的功能多肽的条件下能调节能量代谢的化合物中的用途。
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020142310A1 (en) * 2000-04-07 2002-10-03 Leif Andersson Variants of the human AMP-activated protein kinase gamma 3 subunit
WO2002020850A2 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Iowa State Universtiy Research Foundation, Inc. Novel prkag3 alleles and use of the same as genetic markers for reproductive and meat quality traits
WO2003065795A2 (en) 2002-01-18 2003-08-14 Evotec Neurosciences Gmbh An invertebrate animal model with neurodegenerative phenotype for screening and testing substances
WO2003063586A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Arexis Ab Transgenic animals expressing prkag3
US7208305B2 (en) 2002-02-01 2007-04-24 Arexis Ab Variants of the α1 subunit of human AMPK
US20050155091A1 (en) * 2002-02-01 2005-07-14 Thomas Svensson Prkag3 gene promoter and uses thereof
GB0221148D0 (en) * 2002-09-12 2002-10-23 Univ Dundee Kinase inhibitor screening assay
US8688385B2 (en) * 2003-02-20 2014-04-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for selecting initial doses of psychotropic medications based on a CYP2D6 genotype
CN104894239B (zh) * 2015-05-11 2017-12-19 中国农业科学院植物保护研究所 一种用AMPKγ基因评价昆虫发育速率的方法
CN113207808B (zh) * 2021-06-03 2023-09-29 贵州大学 一种柯乐猪的选育方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997025341A1 (en) * 1996-01-08 1997-07-17 St. Vincent's Institute Of Medical Research Novel amp activated protein kinase
WO1998058052A2 (en) * 1997-06-19 1998-12-23 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Disease associated protein kinases

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4104392A (en) * 1974-11-08 1978-08-01 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof, and antithrombotic compositions and methods employing them
US4046876A (en) * 1974-11-08 1977-09-06 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4070457A (en) * 1974-11-08 1978-01-24 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4041156A (en) * 1974-11-08 1977-08-09 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055651A (en) * 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4018915A (en) * 1976-01-05 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4055636A (en) * 1974-11-08 1977-10-25 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4096255A (en) * 1974-11-08 1978-06-20 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides, and pharmaceutical salts, compositions and methods
US4073914A (en) * 1974-11-08 1978-02-14 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4036955A (en) * 1976-07-22 1977-07-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -naphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4018913A (en) * 1976-01-14 1977-04-19 Mitsubishi Chemical Industries Ltd. N2 -alkoxynaphthalenesulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US20020142310A1 (en) 2000-04-07 2002-10-03 Leif Andersson Variants of the human AMP-activated protein kinase gamma 3 subunit
WO2002020850A2 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Iowa State Universtiy Research Foundation, Inc. Novel prkag3 alleles and use of the same as genetic markers for reproductive and meat quality traits
WO2003063586A1 (en) 2002-02-01 2003-08-07 Arexis Ab Transgenic animals expressing prkag3
US7208305B2 (en) 2002-02-01 2007-04-24 Arexis Ab Variants of the α1 subunit of human AMPK
US20050155091A1 (en) 2002-02-01 2005-07-14 Thomas Svensson Prkag3 gene promoter and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997025341A1 (en) * 1996-01-08 1997-07-17 St. Vincent's Institute Of Medical Research Novel amp activated protein kinase
WO1998058052A2 (en) * 1997-06-19 1998-12-23 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Disease associated protein kinases

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A RADIATION HYBRID MAP OF THE RN REGION IN PIGSDEMONSTRATES CONSERVED GENE ORDERCOMPARED WITH THE HUMAN AND MOUSE GENOMES. robic et la.MAMMALIAN GENOME,Vol.10 No.6. 1999
A RADIATION HYBRID MAP OF THE RN REGION IN PIGSDEMONSTRATES CONSERVED GENE ORDERCOMPARED WITH THE HUMAN AND MOUSE GENOMES. robic et la.MAMMALIAN GENOME,Vol.10 No.6. 1999 *
accurate mapping of the acid meat rn geneon genetic and physical maps of pigcheronsome 15. mila n et al.MAMMALIAN GENOME,Vol.7 No.1. 1996
accurate mapping of the acid meat rn geneon genetic and physical maps of pigcheronsome 15. mila n et al.MAMMALIAN GENOME,Vol.7 No.1. 1996 *

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CA2384313A1 (en) 2001-03-22
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WO2001020003A2 (en) 2001-03-22
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DE00967845T1 (de) 2004-07-08
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