CN100438889C

CN100438889C - 复方中成药“二胡欢藤”

Info

Publication number: CN100438889C
Application number: CNB2004100697873A
Authority: CN
Inventors: 薛红; 王子晖
Original assignee: Naturon Ltd
Current assignee: Naturon Ltd
Priority date: 2004-07-19
Filing date: 2004-07-19
Publication date: 2008-12-03
Anticipated expiration: 2024-07-19
Also published as: CN1723990A

Abstract

本发明提供了一种新的中成药“二胡欢藤”(ErHuHuangTeng)，它可用来治疗各类焦虑症。本发明确证，在小鼠口服用药剂量范围内，“二胡欢藤”具有明显可靠的抗焦虑症的药效作用。“二胡欢藤”是由四种传统中药，柴胡、延胡索、合欢花、首乌藤混合而成的中成药，可制备成片剂、胶囊、滴丸等。含有上述中药合适比例成分的药物剂型均可显示其抗焦虑症状的最佳药效。大量实验证实：“二胡欢藤”作为中枢神经调节剂，具有可靠的抗各类焦虑症药效作用。它不仅药理作用突出，用药剂量范围明确，药效作用肯定，而且药物安全低毒，成本低廉，药源丰富.应用效果可望超过目前已有的抗焦虑症药物。

Description

复方中成药“二胡欢藤”

技术领域

本发明涉及用于治疗各类焦虑症的复方中成药“二胡欢藤”。

背景技术

传统中医药学认为，柴胡(Radix Bupleuri)的药性为：苦，微寒，归肝、胆经。其作用是和解表里，疏肝，升阳。可用于治疗感冒，发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛等。

延胡索(Rhizoma corydalis)的药性为：辛、苦、温，归肝、脾经。其作用是活血，利气，止痛。可用于治疗胸胁、脘腹疼痛，经闭，痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛。

合欢花(Flos Albiziae)的药性为：甘，平。归心、肝经。其作用是解郁安神。可用于治疗心神不安，忧郁失眠。

首乌藤(Caulis Polygoni Multiflori)的药性为：甘、平。归心、肝经。其作用是养血安神，祛风通络。可用于治疗失眠多梦，血虚虚、上身痛，风湿痹痛。

(见中国药典，第一部，2000年，pp.232；108；218；112)

中医一般认为，焦虑是由于脏腑功能失调、肝气郁滞、心神失养及气血失和而引起。临床表征为多梦、心烦、口苦、便秘、胸闷等。

截至目前为止，临床上常用的抗焦虑症药物多为化学成分药物，如：硝基安定；美沙唑仑；氟太唑仑；依替唑仑和盐酸依替福辛等[戴德银：实用新药特药手册，pp.424-434；人民军医出版社出版]。该类药物都具有较强的抑制中枢神经的作用，并会产生药物依赖，长期大量服用，可产生较严重的神经抑制和药物依赖等副作用。

发明内容

本发明的目的是研制和提供一种低毒、低药物副作用、药源丰富，并能有效治疗和减轻各类焦虑症病人症状的新的抗焦虑症中成药。

“二胡欢藤”是由上述四味中药：柴胡、延胡索、合欢花和首乌藤，以特定比例混合而成。其味甘、微苦、性平，其中的主方采用柴胡，发挥其疏肝理气，安神解郁，调理脏腑的作用。加上行气活血的延胡索，配以养脑安神的首乌藤及合欢花，令清静之气得以上升，从而达到宁心安神之功效。

在“二胡欢藤”这种中成药中，各种中草药的重量(本说明书中所说的中草药的重量，均指中草药在干燥后在中药店铺出售时的重量)比例，可在下列范围内：柴胡25.80～38.70％；延胡索18.00～27.00％；首乌藤18.00～27.00％；合欢花18.00～27.00％。

“二胡欢藤”的各种成分的最佳重量比例是：

柴胡32.50％；延胡索22.50％；首乌藤22.50％；合欢花22.50％。

在将上述中成药”二胡欢藤”制成片剂、胶囊、药丸时，可将适量的纤维素加入其中，以便于使药物成形。

在将上述中成药“二胡欢藤”制成口服液或注射液时，则在其萃取液中加入适量的蒸馏水。

“二胡欢藤”是由上述四味中药柴胡、延胡索、首乌藤和合欢花以特定比例混合而成的复方中成药。实验证明：“二胡欢藤”可与脑组织中γ-氨基丁酸受体(GABA受体)功能位点竞争性结合，调节中枢神经系统功能紊乱，从而达到治疗和减轻各类焦虑症症状的药效作用。目前，GABA受体被认为是一种在哺乳动物的中枢神经系统中起主要抑制作用的氨基酸传导体。GABA通过局限于细胞体和神经末端的GABA受体传递它的许多信息活动[Tallman，JF.Gallager，DW.The GABA-ergic system：a locus ofbenzodiazepine action.Annu Rev Neurosci.1985；8：21-44]。文献指出：人脑中GABA受体有许多功能性活动范围和离子信道以及苯二氮(BDZ)，巴比妥酸盐，木防己苦毒素以及麻醉类固醇的结合位点[Smith，GB.Olsen，RW.Trends Pharmacol Sci.1995；16(5)：162-8]；[Pritchett，DB.Nature 1989；338(6216)：582-5]。

苯二氮种类包括安定(diazepam)、三唑仑(trizolam)和氟硝安定(flunitrazepam)。在哺乳动物中枢神经系统中，传统的苯二氮的主要行为功能与抗焦虑，抗惊厥，镇静和肌肉松驰作用有关。化学药品安定、硝基安定、三唑仑和苯甲二氮均为GABA受体竞争性结合物质，这类化合物竞争性地与GABA受体相应的功能位点结合，从而有效的阻断焦虑、惊厥等有关传递物质的释放。

像“二胡欢藤”这样的中成药作为抗焦虑症药的药学概念目前国内外尚未见有报导。本发明人从大量离体和整体药效学实验研究结果证实：此中成药具有与GABA受体BDZ功能位点竞争性结合的作用，是一种GABA受体BDZ功能结合位点的兴奋剂，具有明显的抗焦虑的药效特性。

“二胡欢藤”作为抗焦虑药与其它化学成分抗焦虑药比较，具有毒性低，用药后副作用小等特点。“二胡欢藤”小鼠口服半数致死量为7.145±1.155g/kg。这说明其毒性很低，且实验证明无明显的中枢神经系统抑制作用和肌肉松弛作用，在有效的抗焦虑剂量范围内，可避免其它化学成分抗焦虑症药物所引起的中枢神经抑制作用，是一种安全可靠，可长期服用的抗焦虑症的新药。

附图说明

图1是“二胡欢藤”胶囊50％安定抑制剂量(IC₅₀)和50％安定抑制常数(K_i)的关系曲线图。

具体实施方式

本发明从分析下列实验结果，推断出中成药“二胡欢藤”的抗焦虑成效。

一.γ-氨基丁酸受体(GABA)竞争性结合“二胡欢藤”测定：

应用放射免疫竞争性结合方法，测定“二胡欢藤”于GABA受体竞争性抑制50％安定结合浓度(IC₅₀)和竞争性抑制安定结合常数(K_i)。

1.受试药物制备方法：

醋提“二胡欢藤”胶囊有效药物成分在水中溶解度好。室温避光防潮保存。将“二胡欢藤”胶囊提取物按不同测定梯度浓度溶解在50mM Tris，pH7缓冲液中。加入DMSO，终浓度为10％。

2.GABA受体膜蛋白制备方法：

迅速提取ICR小鼠脑组织，在低温10mM Tris缓冲液中清洗后在-80℃低温冰箱中储存备用。将鼠脑组织放入低温0.32M蔗糖溶液中(20ml/g组织)。在低温下用组织匀浆器制备鼠脑组织匀浆。将鼠脑组织匀浆在4℃1000g(3000rpm)下离心10分钟，收集上清液在4℃20000g离心20分钟，收集离心沉淀膜蛋白，用50mM Tris-Cl，pH7.4缓冲液按0.8-1.6mg/ml浓度悬浮鼠脑膜蛋白储存在-80℃冰箱中备用。

3.3H-flunitazepam抑制结合测定：

按不同测定药物浓度中加入4μl～1mg/ml鼠脑膜蛋白；1nM[³H]-flunitazepam，总溶量为200μl。非特异性结合采用20mM安定。样品放入冰水中反应90分钟后用Whatman GF/B filters滤纸抽滤吸附结合膜蛋白。Whatman GF/B filters滤纸在4ml scintillationcocktail液中漂洗后用液闪记录仪记录药物结合CPM数。采用下列计算公式计算“二胡欢藤”胶囊50％安定抑制常数(K_I)和50％安定抑制剂量(IC₅₀)。

实验测定结果：(见图1)

“二胡欢藤”胶囊50％安定抑制剂量(IC₅₀)：70.12ng/ml。

“二胡欢藤”胶囊50％安定抑制常数(K_i)：35.10ng/ml。

“二胡欢藤”对GABA受体50％竞争性抑制浓度和抑制常数的研究结论，提供了该药物有效成分作为治疗各类精神焦虑症的实验理论依据。

二.口服不同剂量“二胡欢藤”对小鼠抗焦虑药效作用的实验观察

1动物：

采用ICR小鼠；雄性；体重16-18g。常规动物房饲养。动物房温度：24±2℃湿度：60％；光照时间：12小时。

2.受试药物：

1)“二胡欢藤”胶囊，深棕色粉剂；为5％醋酸水剂提取成分，在水中溶解度好，常温干燥避光保存。

2)化学药安定：白色粉剂；市购。由Sigma化学品公司提供。该化合物在水溶剂中溶解度差。

3.试验分组及给药剂量：

实验动物随机设“二胡欢藤”胶囊高剂量组(62.5mg/kg)；“二胡欢藤”胶囊中剂量组(31.3mg/kg)和“二胡欢藤”胶囊低剂量组(15.7mg/kg)。另设已知阳性药硝基安定对照组(1mg/kg)；和空白对照组。每组10只小鼠。

各类受试药物按单位体重剂量用双蒸水溶解配制，采用灌胃方法给药。每只小鼠给药体积为0.2ml，于实验开始前60分钟给药，正常对照组按等体积双蒸水灌胃。灌胃后60分钟开始各项指标测定。

4.实验设备：

(1)十字台迷宫：十字台迷宫由直径0.5cm的木板自制，其底部形状呈十字交叉形，共分四个区，即二个对称的开放区，其底部面积为25×5cm；二个对称的封闭区，其底部面积为25×25cm，该区外周由高10cm的木板包围封闭。四区连接处中心面积为5×5cm。该装置放置于高于地面40cm的支架上。试验中将试验小鼠放入中心区内，同时记录300秒内试验动物进入开放区或封闭区的时间和次数。

实验记录方法：当实验小鼠身体进入开放区或封闭区时，记录该动物在该区进入的次数和停留的时间。

(2)四孔箱：四孔箱由直径0.5cm的木版自制。其箱体规格为60×60×30cm。箱体底部距四角5cm处有四个直径4cm的圆孔。试验开始时将试验动物放入四孔箱中心区，允许试验动物在箱体内自由活动。同时记录300秒内试验小鼠在四孔箱内的探头和竖身的次数。

实验记录方法：当小鼠鼻部至眼眶下缘接触圆孔边缘时，记录试验小鼠探头一次；当小鼠双前足离开地面时，记录小鼠竖身一次。

[见File，SE.The effects of trizolobenzodiapines in two animaltests of anxiety and in the holeboard.British Journal of Pharmacology1985；86(3)：P.729-735]

(3)光电感应活动量测定箱悬挂架：由四个直径25cm，高15cm的透明圆形桶组成，在桶壁上等份固定6个光电感应探头，当实验小鼠在桶内活动时，光电感应探头自动记录小鼠经过光电感应探头的次数，计算机控制记录300秒测定时间和活动次数。

上述实验设备放入固定实验室中，实验开始后力求安静，尽量避免杂音和其它干扰因素影响实验结果。

5.观测指标：

1)300秒内小鼠在活动箱中的活动量光电记录次数。

2)300秒内小鼠进入高台十字台迷宫开放侧次数及百分率。

3)300秒内小鼠进入高台十字台迷宫封闭侧次数及百分率。

4)300秒内小鼠进入十字台迷宫开放侧总时间及百分率。

5)300秒内小鼠在四孔箱中探头次数。

6)300秒内小鼠在四孔箱中竖身次数

6.统计学分析：

全部实验数据采用平均数数±标准差(X±S)表示。采用T检验和X²检验对各组数据进行组间统计学比较。

7.实验结果：

1)口服“二胡欢藤”胶囊后各剂量组小鼠一般药理学变化的观察结果：

各剂量组动物服药后一般情况与空白对照组动物比较未见明显改变，活动量，肌力；精神神经系统和呼吸循环系统无异常发现，全部服药动物无死亡。

2)口服“二胡欢藤”胶囊后各剂量组小鼠进入开放侧/封闭侧次数观察结果

表1.300秒内实验小鼠进入十字台迷宫开放侧/封闭侧次数及百分率比较(n＝10)

与空白对照组比较：^*p＜0.05；^**p＜0.01

3)口服“二胡欢藤”胶囊后各剂量组小鼠进入开放侧/封闭侧时间观察

表2.300秒内实验小鼠进入十字台迷宫开放侧/封闭侧时间及百分率比较(n＝10)

与空白对照组比较：^*p＜0.05；^**p＜0.01

4)口服“二胡欢藤”胶囊后各剂量组小鼠探头竖身次数及活动量变化

表3.300秒内实验小鼠探头，竖身次数及活动量变化比较(n＝10)

与空白对照组比较：^*p＜0.05；^**p＜0.01

从表1-3的实验结果可见：

1)口服各剂量“二胡欢藤”胶囊小鼠在高台十字迷宫中进入开放侧次数和进入封闭侧次数的百分率均较正常空白对照组明显增加，其中以口服“二胡欢藤”胶囊中剂量组(31.3mg/kg)增加最为明显。但“二胡欢藤”胶囊三个剂量组动物进入开放侧次数和百分率均未超过安定对照组水平。“二胡欢藤”胶囊组动物除中剂量组外其它组动物服药后进入封闭侧次数和百分率与空白对照组数据比较无明显差异。

2)口服各剂量组“二胡欢藤”胶囊小鼠在高台十字迷宫中进入开放侧时间和进入开放侧时间的百分率均较空白对照组数据有明显增加，其中以口服“二胡欢藤”胶囊中剂量组(31.3mg/kg)和高剂量组(62.5mg/kg)增加最为明显，p＜0.01。但口服“二胡欢藤”胶囊三个剂量组动物进入开放侧时间和百分率未超过安定药对照组水平。“二胡欢藤”胶囊高剂量组和中剂量组动物滞留封闭侧时间和百分率与空白对照组数据比较，p＜0.05。

3)口服“二胡欢藤”胶囊各剂量组小鼠在四孔箱中测试结果显示，口服“二胡欢藤”胶囊各剂量组动物总探头和竖身次数明显高于空白对照组水平。其中小鼠探头次数明显高于空白对照组，(p＞0.05)，而各剂量组动物竖身次数较空白对照组明显减少(p＜0.05)。

4)口服“二胡欢藤”胶囊各剂量组小鼠均未发现有药物引起的活动量明显变化现象，服药动物活动量测定与空白对照组比较均无明显差异。

8.结论：

中成药“二胡欢藤”胶囊可明显改变实验小鼠在测试装置上的行为特性，主要表现为进入高台十字迷宫开放侧次数、滞留开放侧时间及各自的百分率均较空白对照组增加，在四孔箱中口服“二胡欢藤”胶囊动物探头次数与空白对照组比较明显增加，而竖身次数明显减少。在实验应用剂量范围内，该药对实验动物活动量无明显影响。

三.GABA受体阻断剂Flumazenil对“二胡欢藤”胶囊抗焦虑药效作用影响的实验观察

1.摘要

本实验采用ICR纯种小鼠，雄性，体重16-18g。受试药物为Flumazenil和“二胡欢藤”胶囊。采用高台十字台迷宫；四孔箱和活动量测定像作为实验设备。观察；记录实验小鼠口服Flumazenil和“二胡欢藤”胶囊药物后行为改变。实验目的是观察和了解GABA受体阻断剂对“二胡欢藤”胶囊抗焦虑药效作用的影响，探讨“二胡欢藤”胶囊抗焦虑的药理学作用机制。

实验设口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg+Flumazenil 1.25mg/kg组和单纯口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg对照组；同时另设空白对照组和阳性药安定对照组。每组10只试验小鼠。采用灌胃方法给“二胡欢藤”胶囊药物，腹腔注射法给Flumazenil药物。给药后60分钟开始试验观测。

实验结果表明：

GABA受体阻断剂Flumazenil具有阻抗“二胡欢藤”胶囊的药效作用。表现为：

1)GABA受体阻断剂Flumazenil可降低口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg组动物进入高台十字迷宫开放侧次数和滞留时间，使其接近空白对照组水平。

2)GABA受体阻断剂Flumazenil可减少口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg组动物在四孔箱中探头次数。

以上述动物实验结果为依据，推测“二胡欢藤”胶囊抗焦虑的药效作用可能与该药作用于GABA受体有关。

2.实验目的：

观察和了解GABA受体阻断剂Flumazenil对“二胡欢藤”胶囊药效作用的影响，探讨“二胡欢藤”胶囊抗焦虑作用的机理。

3.材料与方法：

(1)动物：采用纯种ICR小鼠；雄性；体重15-17g。二级动物房常规饲养。动物房温度：24±2℃；湿度：60％；光照时间：12小时。

(2)受试药物：

1)“二胡欢藤”胶囊：棕色粉剂；有效药物成分为10％醋酸中草药水提成分，该药在水中溶解度好。常温避光干燥下保存。

2)Flumazenil注射液，规格：0.5mg/5ml，室温保存。纯度＞99％；由Switzerland，F.Hoffmann-La Roche，Ltd，Basel提供，见药品说明书。

(3)试验分组及给药剂量：

1)单纯“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg组；

2)“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg+Flumazenil 1.25mg/kg组；

3)空白对照组；

4)阳性药安定1mg/kg组。每组10只试验小鼠。

“二胡欢藤”胶囊药物按单位体重剂量用双蒸水溶解配制，在腹腔注射Flumazenil药物后5分钟采用灌胃方法给药。每只小鼠灌胃体积为0.2ml。于实验开始前60分钟给药。空白对照组按等体积双蒸水灌胃。

4.实验设备：

(1)高台十字台迷宫：十字台迷宫由厚度为0.5cm的木板自制，其底部形状呈十字交叉形，共分四个区，即二个对称的开放区，其底部面积分别为25×5cm；二个对称的封闭区，其底部面积分别为25×5cm，封闭区外周由高10cm的木板包围封闭。四区连接处中心面积为5×5cm。该装置放置于高于地面40cm的支架上。试验中将试验小鼠放入中心区内，同时记录300秒内试验动物进入开放区或封闭区的时间和次数。

实验记录方法：当实验小鼠身体进入开放区或封闭区时，记录该动物进入的次数和停留的时间。

(2)四孔箱：由厚度为0.5cm的木版自制。其箱体规格为60×60×30cm。箱体底部距四角5cm处有四个直径4cm的圆孔。试验开始时将试验动物放入四孔箱中心区，允许试验动物在箱体内自由活动。同时记录300秒内试验小鼠在四孔箱内的探头和竖身次数。

实验记录方法：当试验小鼠鼻前部接触圆孔边缘时，记录试验小鼠探头一次；当试验小鼠双足抬起离地时，记录小鼠竖身一次。

5.观测指标：

1)300秒内小鼠进入十字台迷宫开放侧次数及百分率。

2)300秒内小鼠进入十字台迷宫封闭侧次数及百分率。

3)300秒内小鼠进入十字台迷宫开放侧时间及百分率。

4)300秒内小鼠进入十字台迷宫封闭侧时间及百分率。

5)300秒内小鼠在四孔箱中探头次数。

6)300秒内小鼠在四孔箱中竖身次数。

7)300秒内小鼠活动量光电感应次数。

6.统计学分析：

全部实验数据采用平均数±标准差(X±S)表示。各给药组数据与空白对照组进行百分率分析。T检验对组间数据进行统计学比较。

7.实验结果：

表4.动物进入高台十字迷宫开放侧和封闭侧次数及百分率比较(n＝10)

统计学比较：与单纯“二胡欢藤”胶囊组比较^**：p＜0.01；^*：p＜0.05

表5.动物在高台十字迷宫中开放侧和封闭侧滞留时间及百分率比较(n＝10)

统计学比较：与单纯“二胡欢藤”胶囊组比较^**：p＜0.01；^**：p＜0.05

表6.各组服药小鼠探头，竖身和活动量变化的比较n＝10

统计学比较：与单纯“二胡欢藤”胶囊组比较^*：p＜0.05；^**：p＜0.01

表4-6的实验结果显示；

1)与单纯口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg组动物比较，同时口服“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg和GABA受体阻断剂Flumazenil1.25mg/kg组实验动物进入高台十字迷宫开放侧次数和滞留在开放侧时间明显减少，P＜0.05-0.01。该组小鼠进入高台十字迷宫开放侧次数和滞留在开放侧时间均值与空白对照组均值接近，P＞0.05。

2)与单纯“二胡欢藤”胶囊31.3mg/kg组动物比较，同时口服“二胡欢藤”胶囊和GABA受体阻断剂Flumazenil组实验动物在四孔箱中探头次数低于单纯口服“二胡欢藤”胶囊组，统计学比较，p＜0.05。

3)所有服药动物光电活动量测定与空白对照组比较均未发现明显降低。

结论：GABA受体阻断剂Flumazenil具有阻抗“二胡欢藤”胶囊抗焦虑的药效作用。以上述动物实验结果为依据，可以推测“二胡欢藤”胶囊抗焦虑的药效作用可能与GABA受体有关。

总结：

(1)“二胡欢藤”胶囊50％安定抑制剂量(IC₅₀)：70.12ng/ml.。

(2)高台迷宫、四孔箱和光电活动箱测量设备实验结果表明：口服”二胡欢藤”胶囊可明显改变实验小鼠在测试装置上的行为特性，主要表现为进入高台十字迷宫开放侧次数和时间及百分率均较空白对照组明显增加，在四孔箱中探头和竖身次数增多。上述行为改变与已知抗焦虑药安定的药效作用相一致。该药对实验小鼠行为影响的量效关系以口服30mg/kg剂量最为显着。“二胡欢藤”胶囊对实验动物的神经系统和肌力无明显影响。

(3)GABA受体阻断剂Flumazenil

这些实验结果说明：GABA受体阻断剂Flumazenil具有阻抗”二胡欢藤”胶囊抗焦虑的药效作用。

综合各项测试结果显示“二胡欢藤”胶囊对抗焦虑有药效作用。

Claims

1.一种用于治疗各类精神焦虑症的复方中成药，其特征在于，它是由中药柴胡、延胡索、合欢花和首乌藤组合而制成的，并且，上述复方中成药中的各种中药：柴胡、延胡索、合欢花、首乌藤的配方的重量比在下列范围内：

柴胡25.80～38.7％；延胡索18.00～27.00％；合欢花18.00～27.00％；首乌藤18.00～27.00％。

2.如权利要求1所述的用于治疗各类精神焦虑症的复方中成药，其特征在于，上述复方中成药中的各种中药：柴胡、延胡索、合欢花、首乌藤的配方的重量比为：

柴胡32.50％；延胡索22.50％；合欢花22.50％；首乌藤22.50％。

3.如权利要求1或2所述的用于治疗各类精神焦虑症的复方中成药，其特征在于，这种复方中成药制成下列各种剂型：片剂、胶囊、药丸。

4.如权利要求1或2所述的用于治疗各类精神焦虑症的复方中成药，其特征在于，这种复方中成药制成下列各种剂型：口服液、注射液。