CN115737747B

CN115737747B - 一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物及其应用

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Publication number: CN115737747B
Application number: CN202211291365.5A
Authority: CN
Inventors: 何迅; 廖尚高; 熊英; 庞秀清; 张金娟; 徐国波; 廖兴江; 陈腾祥; 董莉; 朱勤凤; 关焕玉; 董永喜; 周孟; 邹淑涵
Original assignee: Guizhou Medical University
Current assignee: Guizhou Medical University
Priority date: 2022-10-19
Filing date: 2022-10-19
Publication date: 2023-10-24
Anticipated expiration: 2042-10-19
Also published as: CN115737747A

Abstract

本发明属于中药复方技术领域，具体涉及一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物及其应用，所述中药组合物是由以下组分制成：黄精5‑30g、枸杞子2‑20g、绿茶1‑20g、酸枣仁1‑20g、沙棘1‑15g、桑叶2‑25g。本发明有针对性的选择适宜药食同源类中药，以扶正补虚为原则，在改善病患营养状况的同时防治疾病，进而解除病痛。本发明的中药组合物所用原料均为药食同源中药，安全性高，可长期足量服用不会产生不良作用，且制备方法简单、原料易得，具有良好的应用前景。

Description

一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物及其应用

技术领域

本发明属于中药复方技术领域，具体涉及一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物及其应用。

背景技术

阿尔兹海默症(Alzheimer's Disease，AD)是一种神经退行性疾病，其特点是神经衰退和记忆损害。阿尔茨海默病患者早期多伴有显著情景记忆障碍，以记忆障碍、失语、失认、视空间机能损害及执行功能障碍为主要症状，患者多因神经精神症状影响社交、职业及生活功能，降低生活质量。调查发现，阿尔茨海默病患者起病较隐匿，呈慢性持续进展，患者具有的认知功能减退、精神行为症状和社会生活功能减退特征符合痴呆一般规律，早期患者可见抑郁焦虑及淡漠症状；中期患者会出现语言及理解能力下降，大小便失禁问题，精神行为症状较为突出，以激越、妄想、幻觉及攻击行为为主；重度患者各项功能均严重受损，日常生活完全依赖护理，严重影响患者生活质量。

随着人口老龄化的增加，AD也已成为全世界关注的问题。目前我国老年痴呆逐步呈现年轻化趋势，不少四五十岁的中年人就已出现记忆力障碍、方向感缺失等老年痴呆症状。阿尔兹海默症具有发病缓慢、持续时间长的特点，需要长期服药，目前上市的药物大多以改善脑血流量，促进脑认知功能恢复的作用为主，难以彻底根治老年痴呆。长期服用都有一定毒副作用。因此，科学认识和及早防治老年痴呆格外重要。

现针对AD的治疗并无特效药，治疗方法主要是通过药物作用于不同的神经递质系统，增强中枢神经系统的高级活动，减轻疾病过程中出现的各种症状，延缓痴呆的进一步发展。临床主要使用的药物有多奈哌齐、利斯的明、加兰他敏、石杉碱甲等胆碱酯酶抑制剂(AchE)、美金刚，以及氟西汀、帕罗西汀等精神药物进行辅助治疗。但基本都存在各种不同的不良反应，多奈哌齐主要有恶心、呕吐、腹泻，对于严重哮喘、心脏传导阻滞、心动过缓者应慎重；利斯的明常见胃肠道症状及昏睡、疲劳等；加兰他敏主要不良反应为恶心、心动过速、失眠等；石杉碱甲常见不良反应有口干、嗜睡、胃肠道反应、视力模糊等。精神药物的不良反应因人而异，但副作用较多，不宜长期服用。因此寻找安全有效且适合长期服用的具有改善记忆力作用，可防治老年痴呆的药物迫在眉睫。

药食同源中药的安全性是确定的，适合长期服用。因时因地因人合理搭配药食，进而形成规范化药食使用指导，最大程度发挥药食疾病改善、病后调理及养生保健的功效是当今研究热点。

现如今也有一些针对记忆力改善的相关中药组方研究，如公开号为CN114028514A的专利文件公开了一种具有改善记忆作用的组合物，及其制备方法，它由枸杞子5-15份，人参2-8份，茯苓15-25份，黄精5-15份，百合5-15份，沙棘5-15份，佛手5-12份，忘忧草8-16份，酸枣仁10-20份，槐米5-8份，益智仁2-5，牛磺酸0.1-0.4份，大豆异黄酮0.1-0.4份，富硒酵母0.05-0.15份，青春双歧杆菌0.05-0.15份制成。众所周知，中药组方应合理配伍，提倡用药专精，组方药味不宜过多。但这个组方药味庞杂，同时还加入酵母和双歧杆菌，药物之间易发生相互作用，影响疗效，也可能导致药物不良反应的发生。

《复方二精灵多糖抗老年痴呆的作用及其机制研究》(中南民族大学,徐玲玲,2008.06)一文中研究了复方二精灵(黄精+枸杞)多糖对海马神经元细胞凋亡的保护作用及分子机理，通过行为学研究表明，复方二精灵多糖具有提高记忆力预防AD的作用。

我们在此基础上，优化筛选出了一种用于改善记忆力，可防治老年痴呆的药食同源中药复方，以扶正补虚为原则，在改善病患营养状况的同时防治疾病，进而解除病痛。

发明内容

为解决上述问题，本发明的第一个目的是提供一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的药食同源中药组合物。

本发明的第二个目的是提供一种所述中药组合物在制备改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂中的应用，以及在制备辅助改善记忆力的食品中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面提供了一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物，是由以下组分制成：黄精5-30g、枸杞子2-20g、绿茶1-20g、酸枣仁3-20g、沙棘1-15g、桑叶2-25g。

优选的，所述中药组合物的最佳配比是由以下组分制成：黄精9g、枸杞子6g、绿茶3g、酸枣仁3g、沙棘3g、桑叶5g。

本发明还提供了上述中药组合物作为药物的制剂和作为食品的形式。作为药物的制剂是将组合物中的组分混合后粉碎成粗粉，加入组合物质量5-10倍的水，煎煮1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩成清膏，与药学中可接受的辅料相结合制成固体制剂。

所述固体制剂包括但不限于颗粒剂、片剂、胶囊剂等常用药物剂型。

作为食品形式可以采用本领域常规制备方法制备成的袋泡茶、液体或固体饮料、特殊营养食品等常规食品形式。

本发明的第二个方面提供了一种所述中药组合物在制备改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂中的应用，以及在制备辅助改善记忆力的食品中的应用。

本发明的第三个方面提供了一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂和一种用于辅助改善记忆力的食品，是由上述中药组合物制成。

综上所述，本发明的有益效果在于：本发明提供的中药组合物由黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶六味药食同源中药组成。组方的形成系在中药性味归经和功效应用的基础上，根据现代药理和临床研究结果，辨证分析，精心选药组方，并经组方优化和药效验证而成。方中黄精性甘，平，归脾、肺、肾经；具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功能；常用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴。现代药理研究表明，黄精具有免疫调节、保护肾脏、抗肿瘤、血糖调节、抗菌消炎、预防心脑血管疾病、抗衰老、改善认知障碍、预防骨质酥松、保肝护肝等作用，也具有黄嘌呤氧化酶的抑制作用。枸杞子性甘、平，归肝、肾经，功能主治：滋补肝肾，益精明目。用于虚劳精亏，腰膝酸痛，眩晕耳鸣，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。绿茶性苦甘、凉，入心、肺、胃经，功能主治：清头目，除烦渴，化痰，消食，利尿，解毒。治头痛，目昏，多睡善寐，心烦口渴，食积痰滞，疟，痢。酸枣仁性甘、酸，平，归肝、胆、心经，具有补肝，宁心，敛汗，生津的功效，多用于虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴。沙棘味酸，涩，性温，具有止咳化痰，健胃消食，活血散瘀的功效。主治咳嗽痰多，肺脓肿，消化不良，食积腹痛，胃痛，肠炎，闭经，跌打瘀肿。桑叶性甘、苦，寒，归肺、肝经，具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目的功效；常用于风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花，具有降血糖、抗炎、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗癌、降血压、降血脂、通便利尿等生物活性，同时具有黄嘌呤氧化酶的抑制活性。

本发明以药食同源的药材为原料进行科学配方，通过药食补益肝肾、健脾舒肺、补虚扶弱，改善病患机体内环境，干预炎细胞因子释放，进而帮助患者改善身体机能，增强体质。抵抗代谢能力下降，增强患者注意力发育及与工作记忆力相关区域代谢增强，改善其神经精神症状等。有针对性的选择适宜药食同源类中药，以扶正补虚为原则，在改善病患营养状况的同时防治疾病，进而解除病痛。本发明的中药组合物所用原料均为药食同源中药，安全性高，可长期足量服用不会产生不良作用，且制备方法简单、原料易得，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为中药组合物对小鼠水迷宫定位航行成绩的影响。

图2为中药组合物对亚急性衰老小鼠脑组织SOD活力的影响。

图3为中药组合物对亚急性衰老小鼠脑组织GSH-PX活力的影响。

图4为中药组合物对亚急性衰老小鼠脑组织GSH含量的影响。

图5为中药组合物对亚急性衰老小鼠脑内MDA含量的影响。

图6为中药组合物对亚急性衰老小鼠脑内MAO活力的影响。

图7为中药组合物对亚急性衰老小鼠海马组织病理变化的影响。其中，A为左侧CA1区，对照组，C00号；B为左侧CA2区，对照组，C00号；C为左侧CA1区，模型组，M05号；D为左侧CA2区，模型组，M05号；E为左侧CA1区，阳性组，Y14号；F为左侧CA2区，阳性组，Y14号；G为左侧CA1区，高剂量组，G13号；H为左侧CA2区，高剂量组，G13号；I为左侧CA1区，中剂量组，Z16号；J为左侧CA2区，中剂量组，Z16号；K为左侧CA2区，低剂量组，G13号；L为左侧CA1区，低剂量组，D16号。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1

按黄精5-30g、枸杞子2-20g、绿茶1-20g、酸枣仁3-20g、沙棘1-15g、桑叶2-25g称取药材，加入10倍水量煎煮1h，过滤，再加入同样的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得提取物。此提取物直接可以包装、冲服或制成各种中药制剂或食品。

实施例2

按黄精5g、枸杞子2g、绿茶1g、酸枣仁3g、沙棘1g、桑叶2g称取药材，加入10倍水量煎煮1h，过滤，再加入同样的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液,浓缩，烘干，粉碎，得提取物。此提取物直接可以包装、冲服或制成各种中药制剂或食品。

实施例3

按黄精30g、枸杞子20g、绿茶20g、酸枣仁20g、沙棘15g、桑叶25g称取药材，加入10倍水量煎煮1h，过滤，再加入同样的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液,浓缩，烘干，粉碎，得提取物。此提取物直接可以包装、冲服或制成各种中药制剂或食品。

实施例4(颗粒剂的制作)

将实施例1方法制备的提取物100g，加糊精200g，混匀，加入适量60％乙醇制成软材，过24目筛制粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，分装，得到颗粒剂。

实施例5(袋泡茶的制作)

按实施例1的组方，称取黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶，混合后粉碎成粗粉，装入包装袋，制成袋泡茶，即可。

为了验证该组方功效，本申请人以抑制乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的活性为评价指标，采用Ellman法对单味药材、组方以及组方比例进行了系列筛选实验，优选最佳组方比例。并选择阿尔兹海默症成熟体内模型对组方进行详细药理学研究，结果显示本发明的药食同源组方对亚急性衰老模型动物学习记忆能力具有显著的改善作用。

一、中药复方配伍优化实验

本发明以药食同源的药材为原料进行科学配方，为验证组方的合理性及有效性，对单味药材及本组方加水煎煮提取，采用Ellman法，考察单味药材水提取物及组方水提取物对乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制作用，评价组方合理性。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验仪器

Varioskan LUK型全波长扫描式多功能读数仪；-20℃冰箱；SW-CJ-2D型超净工作台(苏州净化设备有限公司)；MS105DC型天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；冷冻干燥器(北京博医康实验仪器有限公司)。

1.1.2实验试剂

乙酰胆碱酯酶(AChE)；石杉碱甲(HuperzineA)；5,5一二硫代双(2-硝基苯甲酸,Dithiobisnitrobenzoicacid,DTNB)；碘化硫代乙酰胆碱(Acetylthiocho-lineiodide,ATCI)，均购于sigma公司；磷酸盐缓冲溶液颗粒(PBS)，无锡傲锐东源生物科技有限公司，乙醇、二甲基亚砜(DMSO)等试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.2单味药材及组方对乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制作用

1.2.1样本溶液的制备

水提取物制备：以料液比为1:10加入水、煎煮1h、提取2次，滤过，合并滤液后浓缩成浸膏，冷冻干燥后获得水提物。分别将水提物以含6％ DMSO的PBS制成2000μg/mL的溶液，再分别稀释为500、31.25μg/mL的样本溶液。

1.2.2Ellman法检测各提取物对AChE的抑制活性

采用改良的Ellman法，检测各提取物对AChE活性的抑制。具体操作如下：在96孔板中依次加入140μL PBS，20μL样品溶液，15μL 0.6U/L AChE。4℃孵育10min后，加10μL8mmol/L DTNB及10μL 15mmol/L ATCI，设3个复孔。37℃孵育20min后，在405nm下测定其吸光度值(OD值)。另外，空白组以PBS代替样品溶液；阳性组用石杉碱甲代替样品溶液。样品空白组用PBS代替AChE。根据下列公式计算抑制率。

抑制率(％)＝[(OD对照-(OD样品-OD样品空白)]/OD空白×100％

1.2.3统计学分析

采用SPSS26.0软件进行数据分析。

1.2.4结果

根据测定吸光度，按照1.2.2所述计算公式进行计算，得到6种中药材和组方药在三个浓度下(2000、500、31.25μg/mL)在反应体系中对AChE的抑制活性。结果见表1。

表1各药材及组方对AChE的抑制率(n＝3)Table 1Inhibition rates ofAChE by various herbs and prescriptions(/>n＝3)

以表1中数据，采用SPSS26.0分析。以乙酰胆碱酯酶抑制率为因变量，中药、药物浓度为自变量，进行一般线性单变量方差分析建模。结果(见表2)显示，单变量方差分析中，不同中药、不同浓度对乙酰胆碱酯酶抑制率均有显著差异(P<0.05)。在三个药物浓度下，组方药对乙酰胆碱酯酶的抑制作用大于单味药。

表2一般线性模型单变量方差分析结果

Tab 2Univariate analysis of variance results of general linear model

1.3组方比例筛选

参考各药味的药典用量及预实验结果，采用AChE抑制率为评价指标，对药材的组方比例进行L 25(46)正交设计试验。实验因素水平表见表3。

表3.因素水平表

按表4进行实验安排，结果如下。

表4正交实验结果

表5方差分析表因变量:AChE抑制率

R²＝.685(调整后R²＝-.261)

根据表5方差分析表中P大小可见各因素主次顺序为：A(黄精)>E(沙棘)>B(枸杞子)>C(绿茶)>F(桑叶)>D(酸枣仁)，综合比较后，确定最佳组方为：A4B3C3D2E2F3。因此，最佳配方是：黄精9g、枸杞子6g、绿茶3g、酸枣仁3g、沙棘3g、桑叶5g。

1.4最佳组方与“二精方”(枸杞、黄精)对乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制作用

根据前期试验确定本组方由6味药味组成，最佳配方组成为：黄精9g、枸杞子6g、绿茶3g、酸枣仁3g、沙棘3g、桑叶5g。为进一步验证组方的攻效，选用报道较多的“二精方”(有的文献称“二精丸”)做对比试验，“二精方”由等量的枸杞子和黄精组成，最早收载于《圣济总录》具有“助气固精，补填丹田，活血驻颜，长生不老”之功效，有研究证实其具有提高记忆力预防阿尔茨海默症的作用。试验采用枸杞子、黄精按1:1的比例，水煎煮提取，按照1.2的方法进行试验，结果如下：

表6各药材及组方对AChE的抑制率(n＝3)Table 6Inhibition rates ofAChE by various herbs and prescriptions(/>n＝3)

以表6中数据，采用SPSS26.0分析。以乙酰胆碱酯酶抑制率为因变量，中药、药物浓度为自变量，进行一般线性单变量方差分析建模(见表7)。

表7一般线性模型单变量方差分析结果Tab 7Univariate analysis of varianceresults of general linear model

结果显示，单变量方差分析中，不同中药、不同浓度对乙酰胆碱酯酶抑制率均有显著差异(P<0.05)。在三个药物浓度下，本组方对乙酰胆碱酯酶的抑制作用显著优于二精方(二精丸)。上述实验证明黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶组方具有较大的开发价值。

二、黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶组方改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习记忆能力的实验研究

为进一步验证前期酶学试验筛选出的组方，采用阿尔兹海默症(老年痴呆症)成熟动物模型对组方进行详细药效学研究，综合评价组方的功效。

1研究方案

采用D-半乳糖连续皮下注射的方法建立亚急性衰老小鼠模型，同时以等体积生理盐水皮下注射小鼠为对照组。连续造模70天，从第43天起阳性药组[石杉碱甲0.54g/(kg·d)]和中药组合物低、中、高剂量组[分别予复方制剂0.75、1.5、3.0g/(kg·d)]分别分别灌胃给药，连续28天；对照组和模型组则灌胃等体积蒸馏水。给药结束后才用Morris水迷宫行为学实验，评估动物学习记忆能力。行为学实验结束后，麻醉下取材，进行酶学指标检测。

2 材料与研究方法

2.1 样品与试剂

中药组合物样品制备：按配方比例将黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶粉碎成粗粉，加水煎煮两次，每次一小时，收集煎煮液，浓缩成适宜浓度，备用；石杉碱甲片，河南太龙药业股份有限公司(批号：190101)；D-半乳糖，美国sigma公司(批号：101888658)；0.9％氯化钠注射液，贵州科伦药业有限公司(批号：E118112701)；总蛋白测定试剂盒，北京索莱宝科技有限公司(批号：20191115)；超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(批号：20191215)；丙二醛(MDA)测定试剂盒(批号：20191207,20211124)；还原型谷胱甘肽(GSH-SH)测定试剂盒(批号：20191213)；单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(批号：20191129)；谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒(批号：20191220,20191129)；上述试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

2.2主要仪器

TGL-16G台式高速离心机，上海安亭科学仪器厂；Morris水迷宫视频分析系统，成都泰盟软件有限公司，型号：WMT-100；酶标仪(Epoch，美国Bio Tek)；组织细胞破碎仪(bullet blender，美国基因公司)，显微镜，可见分光光度计(V-1100型，上海美析仪器有限公司)。

2.3动物及造模方法

动物：昆明种小鼠，体质量(20±2)g，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供[SCXK(军)2012-0011]。适应性饲养1周后用于实验，环境温度18～25℃，通风良好。

造模方法：雄性昆明种小鼠90只适应性饲养1周后，以体质量为指标，随机分为对照组、模型组、石杉碱甲[0.54g/(kg·d)]组和中药组合物组低、中、高剂量[0.75、1.5、3.0g/(kg·d)]组，每组15只。除对照组外，其余各组按0.5g/(kg·d)颈背部皮下注射D-半乳糖造模，连续70天，对照组皮下注射等体积生理盐水。从第43天开始石杉碱甲组和组方组分别灌胃给药，连续28天，给药体积均为0.1mL/10g体质量。对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。

雌性小鼠60只，先进行跳台实验筛选出不合格小鼠，余下合格小鼠42只，每组7只，上述同样造模、给药，用于跳台实验。

2.4Morris水迷宫法实验

2.4.1定位航行实验

历时5天，实验时将平台固定在三象限，位于水面下1cm，水温稳定在(25±0.5)℃。实验时中的物品和人员的位置在实验期间固定不变，作为动物的空间参照物。每天训练2次，每次从不同的入水点将动物面向池壁放入水中(入水点顺序以半随机的方法安排)，训练时间为60s，在平台上停留超过2s则判为寻台成功，将动物从入水到寻台成功所需的时间记作逃避潜伏期，若60s内未找到平台则潜伏期记为60s。每次训练前先将动物置于平台上停留15s(称为适应)，测试完毕不论寻台是否成功均适应10s。计算每天潜伏期平均值，以评价动物空间记忆的获得能力。

2.4.2空间探索实验

定位航行实验结束次日，拆除平台，选择一象限作为入水象限，通过动物在60s内穿过原平台位置的次数、原平台象限游程比率及时间比率(即动物在原平台象限的游程及时间占总游程及总时间的比率)来评价动物的空间记忆能力。

2.5小鼠跳台实验

(1)筛选：实验前对小鼠进行筛选。将小鼠逐一放入跳台仪，适应1min后通36v交流电1min，观察小鼠对电击的反应情况。剔除对电击过于敏感和过于迟钝的小鼠，取对电击反应适中的小鼠为合格小鼠。

(2)训练：给药后30min，将小鼠放入跳台仪中先适应3min，然后将变压器调至36v并通电，当动物受到电击，其正常反应是跳上箱内的绝缘平台上以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台。判断标准：小鼠受到电击后若跳上绝缘平台为正确，如从台上跳下，双足接触铜栅为错误，记录3min内小鼠受到电击的次数(错误次数)，以此作为学习成绩。

(3)测试：先将跳台仪通36v交流电，再将小鼠放入跳台仪的绝缘台上，记录小鼠第一次跳下平台的时间(错误潜伏期)和3min内的错误次数以及每组小鼠受电击的只数，并以此作为测试成绩。

(4)评价指标：跳下平台的潜伏期、错误次数、栅极半分比。

2.6小鼠脑组织SOD、MDA、GSH、MAO和GSH-PX含量的测定

小鼠用0.4％戊巴比妥钠0.1mL/10g体质量腹腔注射麻醉，眼眶采血带动物死亡后，在冰盘上迅速取出脑组织，以冰冷生理盐水漂洗，除去血液，用滤纸擦干，准确称取脑组织重量，按重量(g)：体积(ml)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰浴条件下机械匀浆，制成10％的组织匀浆液，迅速放入低温离心机(2-4℃)，3000r/min离心15min，取上清液，-20℃冻存。依据试剂盒说明书，检测脑组织SOD、MDA、GSH、MAO和GSH-PX含量。

2.7对海马细胞形态学观察

小鼠水迷宫实验结束后次日，每组选取2-4例行病理组织学检查。0.4％戊巴比妥钠0.1mL/10g体质量腹腔注射麻醉后，用0.9％NaCl和4％多聚甲醛心脏灌注，取出完整脑组织，用4％多聚甲醛定48小时，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察海马细胞形态变化。

2.8统计分析

应用统计软件SPSS19.0进行统计分析，实验数据以表示，多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行显著差异性检验，组间两两比较使用LSD-t法，检验水准α＝0.05。

3结果

3.1黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶组成的中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习、记忆功能的影响

3.1.1定位航行实验

与模型组相比，对照组小鼠水迷宫实验中的第4、5天潜伏期显著缩短(P＜0.05)。与对照组比较从第2天开始，模型组潜伏期显著延长(P＜0.05)，提示模型鼠空间学习记忆能力出现障碍。石杉碱甲组小鼠从第2天开始潜伏期均有缩短的趋势，但无统计学意义；中药组合物低剂量组小鼠第4、5天潜伏期均缩短，具有统计学意义(P＜0.05)；中剂量小鼠第5天潜伏期缩短，但无统计学意义；高剂量组第4、5天潜伏期缩短，但仅第5天具有统计学意义(P＜0.05)，结果见表8，图1。

表8中药组合物对小鼠的水迷宫定位航行成绩的影响

注：与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

3.1.2空间探索实验

与对照组相比，模型组小鼠水迷宫实验中的潜伏期显著延长(P＜0.05)，穿越平台次数显著减少(P＜0.05)，在原平台所在象限的游泳时间占总时间的百分比及游泳路程占总路程的百分比均显著缩短(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、中药组合物组低、中、高剂量组潜伏期显著缩短(P＜0.05)，穿越平台次数显著增加(P＜0.05)，在原平台所在象限的游泳时间占总时间的百分比及游泳路程占总路程的百分比均显著增加(P＜0.05)，结果见表9。

表9中药组合物对小鼠水迷宫空间探索成绩的影响/>

3.2中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑SOD、MDA、GSH、MAO和GSH-PX含量的影响

3.2.1中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑内SOD活力的影响

与对照组相比，模型组小鼠脑组织内SOD活力明显降低(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、高剂量、中剂量组SOD活力表现出升高的趋势，但与模型组比较无统计学意义，低剂量SOD活力显著升高(P＜0.05)，结果见图2，表10。图2中，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3.2.2中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑内GSH-PX活力的影响

与对照组相比，模型组小鼠脑组织中GSH-PX活力明显降低(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、高剂量组GSH-PX活力明显升高(P＜0.05)，中、低剂量组GSH-PX活力出现升高的趋势，但无统计学意义，结果见图3，表10。图3中，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3.2.3中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑内GSH含量的影响

与对照组相比，模型组小鼠脑组织中GSH含量明显降低(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、高剂量组GSH含量明显升高(P＜0.05)，中剂量、低剂量组GSH含量出现升高的趋势，但与模型组比较无统计学意义，结果见图4，表10。图4中，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表10中药组合物对亚急性衰老小鼠脑组织内SOD、GSH-PX活力和GSH含量的影响

3.2.4中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑内MDA含量的影响

与对照组相比，模型组小鼠脑组织中MDA含量明显升高(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、高、中、低各剂量组均能明显降低MDA含量(P＜0.05)，结果见图5，表11。图5中，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3.2.5中药组合物对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑内MAO活力的影响

与对照组相比，模型组小鼠脑组织中MAO活力明显升高(P＜0.05)。与模型组相比，石杉碱甲组、高、中、低剂量组MAO活力均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，结果见图6，表11。图6中，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表11中药组合物对亚急性衰老小鼠脑组织内MDA含量和MAO活力的影响

3.3小鼠海马组织病理学结果

行为学测试后次日每组选取2-4例行病理组织学检查。用0.4％戊巴比妥钠0.1mL/10g腹腔注射麻醉，用生理盐水和4％多聚甲醛心脏灌注，取出完整脑组织，置于4％多聚甲醛内定48小时，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察海马细胞形态变化，结果如图7所示。

对照组海马CA1、CA2区锥体细胞排列整齐，相对稠密，未见炎细胞浸润，未见细胞空泡变性和细胞坏死。模型组海马CA1、CA2区锥体细胞排列紊乱，明显变稀疏，部分细胞出现空泡变性，许多细胞出现固缩坏死。与模型组比较，石杉碱甲组海马CA1区锥体细胞排列整齐，相对稠密，偶见细胞空泡、固缩坏死。黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶组方低、中、高剂量组海马CA1区锥体细胞排列整齐，相对比较稠密，偶见细胞空泡、固缩坏死。鼠脑组织细胞的数量和排列均得到明显改善。

结果：小鼠行为学实验结果表明，对照组与模型组比较定位航行和空间探索成绩差异显著，从实验第4天开始，组方高、低剂量组定位航行成绩改善有统计学意义，说明该组方能一定程度上改善模型小鼠的学习记忆障碍。

三、酶学相关检测

该部分进行了SOD(超氧化物歧化酶)、GSH(还原型谷胱甘肽)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)、MDA(丙二醛)、MAO(单胺氧化酶)五项指标的检测。其中SOD和GSH-PX属于抗氧化酶；MDA属于脂质氧化产物；GSH属于抗氧化物质。按照国家食品药品监督颁布的《保健食品实验指导原则》中抗氧化功能评价方法“动物实验中：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。”本次实验结果中GSH-PX、MDA、GSH结果提示：与对照组比较模型组GSH-PX活力、GSH含量显著降低，MDA含量升高；与模型组比较，石杉碱甲组和中药组合物高剂量组GSH-PX活力升高有统计学意义，判定该受试样品有升高抗氧化酶活力作用，该项指标结果阳性；、GSH含量显著升高有统计学意义，判定该受试样品有升高抗氧化物质GSH作用，该项指标结果阳性；MDA含量下降有统计学意义，判定该受试样品有降低脂质过氧化作用，该项指标结果阳性。因此认为该组方药高剂量组达到三项指标为阳性的标准，据此推测该中药组合物改善学习记忆障碍作用机制与其抗脑组织氧化损伤化作用相关。

此外，我们加测了单胺氧化酶(MAO)，MAO是单胺类神经递质的主要灭活酶，研究表明慢性脑损伤可提高MAO活性，从而使脑内单胺类神经递质含量降低，造成动物的学习、记忆功能障碍。实验结果表明模型组与对照组比较MAO活力升高差异显著，阳性药和各剂量组与模型组比较MAO活力显著下降。提示该药物作用机制与其能改善慢性脑损伤引起的MAO活力增高，防止单胺类神经递质含量下降相关。

结论：黄精、枸杞子、绿茶、酸枣仁、沙棘、桑叶组方而成的中药组合物能够提高D－半乳糖致衰小鼠的空间学习、记忆能力，其机制可能与提高衰老小鼠脑组织中SOD、GSH、GSH-PX活性、降低MDA、MAO含量有关。

Claims

1.一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的中药组合物，其特征在于，是由以下组分制成：黄精9g、枸杞子6g、绿茶3g、酸枣仁3g、沙棘3g、桑叶5g。

2.如权利要求1所述的中药组合物在制备改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂中的应用。

3.如权利要求2所述的中药组合物在制备改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂中的应用，其特征在于，所述的药物制剂是将组合物中的组分混合后粉碎成粗粉，加入组合物质量5-10倍的水，煎煮1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩成清膏，与药学中可接受的辅料相结合制成固体制剂。

4.如权利要求1所述的中药组合物在制备辅助改善记忆力的食品中的应用。

5.一种用于改善记忆力、防治老年痴呆的药物制剂，其特征在于，是由权利要求1所述的中药组合物制成。

6.一种用于辅助改善记忆力的食品，其特征在于，是由权利要求1所述的中药组合物制成。