CN100404074C - 接种有用于治疗糖尿病的产胰岛素细胞的可植入式囊 - Google Patents

Abstract

一种可植入式囊及在哺乳动物中植入细胞或细胞材料的方法，包含加固多孔泡沫和腔。该腔包含移植前可以或不可以除去的插件。该腔中可载有至少一种表达至少一个哺乳动物胰腺β细胞特异性转录因子的细胞类型。

Description

接种有用于治疗糖尿病的产胰岛素细胞的可植入式囊

技术领域

本发明涉及接种有用于治疗糖尿病的胰岛素分泌细胞的可植入式囊。特别地，本发明提供含有用于载有治疗糖尿病的胰岛素分泌细胞的开口的可植入式多孔囊，该开口随后可被封闭，如果需要，则密封。

背景技术

胰腺组织由三部分组成：外分泌部、内分泌部和导管。内分泌胰腺包括负责分泌四种特殊激素的胰岛细胞，这样的胰岛由四种不同细胞类型组成：α、β、δ和多肽细胞，它们分别产生高血糖素、胰岛素、生长抑素和胰多肽。据涉及内分泌细胞鉴定的现有技术，已经鉴定出了数个在β细胞发育过程中很重要的关键转录因子，包括Pdx1、Ngn3、Hlxb9、Nkx6、Isl1、Pax6、Neurod、Hnfla、Hnf6及其它。例如，参见Nature Reviews Genetics，Vol3，524～632，2002。

内分泌胰腺的一种常见疾病，糖尿病(diabetes mellitus，DM)，是由β细胞破坏(I型DM)或肌肉或脂肪组织对胰岛素不敏感(II型DM)造成的。

现有治疗I型和II型DM的方法包括：饮食治疗、运动、口服型降糖剂、胰岛素注射、胰岛素泵疗法，以及完整胰腺或胰岛移植。

最常见的治疗方法包括每天注射外源胰岛素，如猪、牛或人胰岛素。病人通常遵循包括血糖水平自我监控的方案，此时，胰岛素的注射根据基于这一血液分析结果制定的计划进行。

另一种不太常见的治疗方法是移植整个胰腺器官。这样的整个成熟胰腺的移植是技术复杂的大手术，并需要大胆使用免疫抑制剂以避免对新移植器官的排斥。这些器官主要获得自死亡的人供体，尸体胰腺的有限可获得性限制了该方法的广泛使用。

移植领域中，许多人建议从残余胰腺组织中分离分泌胰岛素的胰岛将会比较有利。这些益处包括由于移植的组织块较小而需要较少的侵入性外科手术。此外，可以提高免疫操作、移植物工程化的使用。

直到近期，由于对胰岛的强烈免疫排斥胰岛移植还不成功。近期的报道(N.Eng.J.Med343：230-238，2000；Diabetes，50：710-719，2001)表明无糖皮质激素免疫抑制方案明显有益于脆弱的I型糖尿病的病人。然而，采用这种治疗方法的病人易于出现肾脏并发症、口腔溃疡，并需要大量胰岛(～9000胰岛当量/kg病人体重)以诱导血糖量正常。因此，人们已经付出大量努力来设计避免大剂量免疫抑制剂并可利用商业活性胰岛细胞的胰岛细胞移植策略。由此产生了免疫隔离的概念(Diabetologia，45：159-173，2002)，这一概念包括用选择性透性膜屏蔽胰岛。该膜允许诸如营养素、氧、葡萄糖和胰岛素的小分子通过，但限制更大的体液免疫分子和免疫细胞通过。理论上，人们可以利用免疫隔离装置和丰富的动物，例如猪，的胰岛细胞来源治疗DM。然而，实践中由于装置纤维变性、装置有限的氧供应以及导致胰岛丢失的小体液免疫分子的透过使得这一方法在大动物模型或医疗中都没有获得成功，

另一免疫隔离的备选方法是通过在哺乳动物(US5849285，US6149907，US5958404)的非睾丸部位移植支持细胞来创造免疫豁免部位。这一部位允许随后的产胰岛素胰岛的移植。免疫豁免部位允许人或动物来源的胰岛的移植。此方法的一个缺陷是，移植的支持细胞和胰岛细胞并非被物理限制于移植部位。这会导致这些细胞向不希望的组织部位迁移。如果胰岛从支持细胞迁移就可能最终导致由于丧失支持细胞免疫抑制效应而使胰岛丢失，因为当胰岛处于与之最接近的位置时支持细胞创造的免疫豁免环境才是最有效的。

近来出现的组织工程为糖尿病的治疗提供了备选方法。为开发最终可以恢复或者提高组织功能的生物替代物，组织工程策略已经开发了对不同生物材料与细胞和/或生长因子组合的利用。例如，支架材料已经被广泛研究用作可用于组织修复的组织导板、导管、阻挡物和储器。尤其，泡沫、海绵、胶、水凝胶、纺织和非纺织形式的合成和天然材料已经被用于体外和体内重建和/或再生生物组织，以及运送诱导组织生长的趋化剂(US5770417，US6022743，US5567612，US5759830)。

对支架的一个关键要求是在接种到支架上后细胞的保持。迄今为止，支架已经被构建成为在其上接种细胞，例如胰岛，的替代物质。尽管传统的多孔基质，如聚乙醇酸非纺织或聚乳酸泡沫，具有不太大或不太小的孔大小以充分保持胰岛或胰岛类似结构。

对载有胰岛素分泌细胞支架的另一个关键要求是可以获得允许重要营养物交换和高氧压维持的功能性微血管床。因此，仍需要可以接种大量胰岛素生产细胞、植入后保持大多数细胞并为细胞存活提供血管环境的三维结构。本发明中的可生物降解结构提供了这样一种三维多孔基质。

发明内容

本发明涉及可植入式囊，其适于在包含胰岛素生产细胞的多种哺乳动物细胞的接种及随后的植入中使用。在一个优选方式中，囊壁是生物相容的，由用生物相容性网加固的泡沫基质组成。使用中，囊内腔载有胰岛素分泌细胞悬浮液。包埋网的生物相容性基质优选为多孔、聚合泡沫，优选由冻干法制成。该结构也可在导入胰岛素分泌细胞前提供血管床。囊内腔可用生物相容性塞(plug)填充以限制组织向内腔生长，植入临床相关位点稍晚时间后去除该塞并向囊内腔注射胰岛素分泌细胞。该囊任选地载有一种或多种生物活性化合物或水凝胶。囊壁优选由玻璃化温度低于生理温度的聚合物制成，以使囊植入软组织中时将刺激最小化。

本发明的结构也可用作运送细胞分泌的生物因子或合成药物分子的载体。这些药剂能指导生长因子、蛋白质、细胞因子的上调或下调，或其它细胞类型的增殖。将囊植入患病哺乳动物之前或之后，可将大量细胞接种在这样的囊上。

附图说明

图1显示本发明的可植入式囊的一个实施方式的透视图。

图2是根据实施例1所述方法制备的本发明囊支架的一个实施方式的扫描电镜图。

图3是此处所述可植入式囊的制备方法的一个实施方式的透视图。

在此公开用于糖尿病治疗的可植入式组织支架囊。图1提供了该可植入组织支架囊的透视图。可植入式囊1由环绕内腔5的壁2组成。壁2优选由多孔泡沫基质3组成，更优选基质3由网4加固。内腔具有至少1×10^-3cm³的容量。优选至少0.1cm³。除了植入部位外，胰岛素生成细胞的数量和大小支配囊1的大小。多孔囊1一般具有纵轴，横界面可以是圆形、椭圆或多边形。优选便于制备的是椭圆形横截面。

图1显示一个由两个矩形片组成的、三边密封一端开口的囊。显然，根据图1所示，由壁2构成一个腔以形成一个足够放置胰岛或胰岛样细胞的空腔。因此，囊可以由一片或者多片构成并以适合的方式密封在一起。

囊1的壁2包含约0.1至约500微米，优选约5至约400微米的孔6。可植入式囊1的腔5用水凝胶，或包含细胞悬浮液的基质，或在移植后稍晚可以用细胞悬浮液替换的、由非降解材料的非多孔密实片填充。

壁2的泡沫组分3优选为具弹性的，孔大小为5～400μm。泡沫3可以载有生物活性或药学活性化合物(例如，细胞因子(例如，白细胞介素1-18；干扰素α、β和γ；生长因子；菌落刺激因子，趋化因子等)、非细胞因子白细胞趋化剂(chemotactic agent)(例如，C5a，LTB₄，等)、吸附因子、基因、肽、蛋白质、核苷酸、抗炎剂、抗凋亡剂、碳水化合物或合成分子。

在优选实施方式中，壁2的加固组分4可由任何可吸收或不可吸收的生物相容性材料组成，包括纺织、针织、卷曲编织(即，花边状)、非纺织和编成麻花状的结构。在示例实施方式中，加固组分4具网状结构。

上述任一结构中，材料的机械性质可通过改变材料的密度或纹理、或在材料中包埋颗粒来改变。用于制造加固组分4的纤维可以是纤维的单丝、纱、线、辫或束。这些纤维可由生物相容性材料，包括可生物吸收的材料例如聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己内酯(PCL)、聚二噁烷酮(PDO)、三亚甲基碳酸酯(TMC)、聚乙烯基醇(PVA)、共聚物或其混合物。在一个实施方式中，纤维是由聚乙醇酸和聚乳酸以95∶5的摩尔比的共聚物制成。在另一个实施方式中，纤维由100％的PDO聚合物形成。

可植入式囊1的壁2由可吸收或不可吸收的生物相容性材料制成。壁2优选由柔韧的生物相容性材料制成，从而将对病人的刺激最小化。优选壁2由玻化温度低于生理温度的聚合物或聚合物混合物制成。可选的是，囊可以由混合了能使其柔韧的增塑剂的聚合物制成。

多种生物相容性可吸收或不可吸收材料可用于制备泡沫组分3。适合的不可吸收材料包括但不限于，聚酰胺，聚酯(如，聚对苯二甲酸乙二酯，聚苯二甲酸丁酯，共聚物及其混合物)，含氟聚合物(如，聚四氟乙烯，聚偏1，1-二氟乙烯，共聚物及其混合物)，聚烯烃，聚乙烯基树脂(如，聚苯乙烯，聚乙烯基吡咯烷酮，等)及其混合物。

多种可生物吸收性聚合物可以被用于制备本发明的壁2。适合的生物相容性和可生物吸收性聚合物的例子包括但不限于选自以下的聚合物：脂肪族聚酯、聚(氨基酸)、共聚(醚-酯)、聚亚烷草酸盐、聚酰胺、酪氨酸衍生的聚碳酸酯、聚(亚氨基碳酸盐)、聚原酸酯、polyoxaesters、聚酰胺酯、含胺基团的polyoxaesters、聚酐、聚磷腈、生物分子(即，生物聚合物例如胶原、弹性蛋白、生物吸收的淀粉，等)及其混合物。

本发明中特别适用的生物相容性可吸收聚合物选自下列物质：脂肪族聚酯、共聚物和混合物，它们包括但不限于交酯均聚物和共聚物(包括D-、L-乳酸和D-、L-内消旋丙交酯)、乙交酯(包括乙醇酸)、oxaesters、ε-己内酯、p-二噁烷酮、烷基取代衍生的p-二噁烷酮(即，6，6-二甲基-1，4-二噁烷-2-酮、三亚甲基碳酸酯(1，3-二噁烷-2-酮)、烷基取代衍生的1，3-二噁烷酮、δ-戊内酯、β-丁内酯、γ-丁内酯、ε-癸内酯、羟丁酸(hydroxybutyrate)、羟戊酸(hydroxyvalerate)、1，4-二氧杂环庚-2-酮(1，4-dioxepan-2-one)及其二聚体1，5，8，12-四氧杂环十四烷-7，14-二酮、1，5-二氧杂环庚-2-酮(1，5-dioxepan-2-one)、及其聚合物混合物。

壁2的加固成分4优选由丙交酯和乙交酯组成，此处有时候单纯指丙交酯和乙交酯的均聚物和共聚物，以及乙交酯和ε-己内酯的共聚物，最优选用作网的是约80至约100重量％乙交酯和剩余为丙交酯形成的共聚物。更优选的是约85至约95重量％乙交酯和剩余为丙交酯形成的共聚物。另一优选聚合物是100％PDO。

优选的泡沫组分3为乙交酯、丙交酯、聚二噁烷酮和ε-己内酯的均聚物、共聚物或混合物。更优选的是乙交酯和己内酯的共聚物。最优选的是乙交酯∶己内酯为65∶35的共聚物。

此处，所用术语“乙交酯”应理解为包括聚乙醇酸。进一步，术语“丙交酯”应理解为包括L-丙交酯、D-丙交酯，及其混合物，以及乳酸聚合物和共聚物。

特别理想的组合物包括一种由约35至约45重量％的ε-己内酯和约55至约65重量％的乙交酯、丙交酯(或乳酸)及其混合物形成的弹性共聚物。另一特别理想的组合物包括p-二噁烷酮均聚物，或包含约0至约80重量％p-二噁烷酮和约0至约20重量％丙交酯或乙交酯及其组合形成的共聚物。膜在体内的降解时间优选长于1个月但短于6个月，且更优选长于1个月但短于4个月。

本发明使用的聚合物的分子量可以在本领域公知的范围内变化以提供令人满意的特性。然而，优选脂肪族聚酯具有可以使得25℃下在0.1g/dl六氟异丙醇溶液中测量时特性粘度介于约0.5至约5.0分升每克(dl/g)，优选约0.7和3.5分升每克(dl/g)，的分子量。

或者，壁2的加固组分4可以是非纺织支架。该非纺织支架可由湿涂(wet-lay)或干涂(dry-lay)技术制成。用另一可生物降解的聚合物及使用热处理方法将组织支架囊1的非纺织支架的纤维融熔，可以进一步增强组织支架囊1的纤维非纺织支架的结构完整性。例如，可以将可生物吸收的热塑性聚合物或共聚物，例如粉末状的聚己内酯(PCL)，加入非纺织支架之后进行温和的热处理，熔化PCL颗粒但不影响纤维结构。该粉末具有低熔点，且在随后的过程中作为粘合剂起作用，以提高非纺织支架抗张强度和剪切强度。优选PCL颗粒化粉末大小的直径范围在10～500μm，更优选直径为10～150μm。附加的粘合剂包括可生物降解的聚合粘合剂，选自聚乳酸、聚二噁烷酮和聚乙醇酸或其组合物。

或者，非纺织支架中的纤维可通过喷雾或将该非纺织支架用另一种可生物降解的聚合物浸涂融在一起。

包绕本发明囊1的腔5的泡沫3可由本领域普通技术人员通过各种公知技术制备。例如，聚合起始材料可由冻干法形成泡沫、超临界溶剂发泡、注气挤压、用可抽提的材料注气成型或铸造(如，盐、糖或类似的合适材料)。

一种实施方式中，囊1的泡沫部分3可经由聚合物-溶剂相分离技术制备，例如冻干法制备。然而一般地，聚合物溶液可由下列四种技术中的任一种分离为两相：(a)热诱导的凝胶化/结晶化；(b)非溶剂诱导的溶剂相与聚合物相的分离；(c)化学诱导的相分离；和(d)热诱导的旋节线分解。聚合物溶液以两个清晰相或两个双连续相的控制方式进行分离。随后溶剂相的去除通常留下密度小于本体聚合物的多孔结构，孔径在微米范围内。

制备壁2的泡沫成分3所涉及的步骤包括，为用于待冻干的聚合物选择合适的溶剂以及制备在溶液中的聚合物的均质溶液。然后对聚合物溶液实施冷冻和真空干燥循环。冷冻步骤相-分离聚合物溶液，真空干燥步骤通过升华和/或干燥去除溶剂，这样就留下多孔聚合物结构，或互相连接的开放细胞多孔泡沫。

可以用作制备泡沫支架组分3的适宜溶剂包括但不限于，四氢呋喃(THF)、二亚甲基氟化物(DMF)、和聚二噁烷酮(PDO)、p-二甲苯、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺、氯仿、1，2-二氯甲烷、二甲亚砜及其混合物。这些溶剂中，一种优选溶剂是1，4-二噁烷酮。用常规技术制备聚合物在溶剂中的均质溶液。

适用的聚合物浓度或使用的溶剂量随各系统而不同。通常，溶液中聚合物量取决于一些因素，如聚合物在给定溶剂中的溶解度及在泡沫支架中的最终特性，其范围从约0.01％至约90重量％，优选地，从重量范围从约0.05％至约30重量％。

如果使用了网状加固材料4，其将被置于两个薄(如，0.4mm)垫片(shims)之间；其应当以水平方向被置于模具中的合适深度处。在两张展开的网层之间放置具有与囊1所需相同横截面区域的金属或Teflon插片。以允许气泡从网状部分之间溢出的方式灌注聚合物溶液。优选地，模具以合适的角度倾斜且应当以最能阻止气泡形成的控制速率进行灌注。本领域普通技术人员知道许多变量控制倾斜角度和灌注速率。通常，模具应当以大于约1度的角度倾斜以避免气泡形成。此外，灌注速率应当慢到使任何气泡能从模具中溢出，而不是困在模具中。

如果网状材料被用于加固组分4，网状开孔的密度是一个最终具有令人满意机械性质的组织移植物形成过程中的重要因素。优选低密度或开放编结的网状材料。一个特别优选的材料是PGA/PLA为90/10的共聚物，出售商标名为VICRYL(Ethicon，Inc.Somerville，NJ)。作为示例的一个低密度、开放编织网是编织的VICRYL VKM-M，可从Ethicon Inc.Somerville，NJ购得。其它的适于用在囊中的编织或纺织网状材料是PLA/PGA为95/5的共聚物，以商品名称PANACRYL出售(Ethicon，Inc.Somerville，NJ)，或100％PDO聚合物。

载入囊1的腔5的哺乳动物细胞可从包括胰腺的外分泌部、内分泌部和导管成分的胰腺组织中分离。或者，切碎的胰腺组织或导管片段也可以被载入囊1的腔5。此外，细胞可以在常规培养条件中培养以扩增细胞数量，之后从培养平板上除去细胞并在植入前将其给予装置中。或者，分离的细胞可以直接注入囊1然后于体内植入前在具适宜生物基质的促进增殖及沉积的条件下培养。在优选实施方式中，分离的细胞直接注入囊1，在体内植入前不经进一步体外培养。另一个实施方式中，细胞被接种于另一个多孔生物相容性基质，例如非纺织垫、水凝胶或其组合，随后置于囊的腔5中。

可用在本发明的结构上接种或培养的细胞包括但不限于表达至少一种胰腺β细胞特征标记物(characteristic marker)的细胞。细胞可于植入前接种于如本发明的囊的腔5中一小段时间(＜1天)，或在植入前培养更长时间(＞1天)以允许在囊1发生细胞增殖和基质合成。

为治疗疾病，如糖尿病(DM)，可将接种了细胞的支架囊1置于临床便利的部位，例如皮下空隙、肠系膜、网膜。在此特定病例中，本发明的囊1于体内移植至异位后将作为载体以将处理细胞限制于适当的位置。

以往通过注射至门脉循环来直接移植胰岛的尝试在对糖尿病的长期治疗上已经显示出不足。此外，用可降解或不可降解微球包埋异源或异种β细胞的诸多方法也未能保持对血糖水平的长期控制。这些失败都归因于脉管系统不足和/或对移植胰岛的免疫排斥。

这些失败可以通过将异种或异源胰岛素生产细胞与异源或异种支持细胞(Sertoli cells)，这些支持细胞有助于胰岛存活及阻止对移植胰岛的免疫反应，组合给予来避免。异种、异源、或转化的支持细胞可以在肾膜中自我保护同时免疫保护异源或异种胰岛。

本发明的另一实施方式中，囊1的壁2可以通过物理或化学方法修饰以包含促进附着、增殖、分化、和锚定细胞(targeted cell)类型的基质合成的生物或合成因子。此外，生物活性因子也可包含部分基质，其用于因子的受控释放以产生理想的生物功能。另一实施方式包括影响内源生长因子上或下调的小分子的运送。可与本发明基质一起使用的生长因子、胞外基质蛋白、及生物相关肽片段包括但不限于，TGF-β族成员，包括TGF-β1、2和3，骨形态发生蛋白(BMP-2、-4、6、-12、-13和-14)，成纤维细胞生长因于-1和-2，血小板衍生生长因子-AA和-BB，血小板富集血浆，胰岛素生长因子(IGF-I、II)生长分化因子(GDF-5、-6、-8、-10)，血管生长素(angiogen)，促红细胞生成素(erythropoiethin)，胎盘生长因子，血管生成因子如血管内皮细胞衍生生长因子(VEGF)，cathelicidins，防御素，高血糖素样肽I(glucacgon-like peptide I)，exendin-4，多效素，内皮素，甲状旁腺激素，干细胞因子，集落刺激因子，结合腕蛋白-C，弹性蛋白原，凝血酶衍生肽，抗排斥剂，止痛剂，抗炎剂如对乙酰氨基酚(acetoaminophen)，抗凋亡剂，statins，细胞生长抑制剂如雷帕霉素和包含胞外基质粘着蛋白，如纤连蛋白和玻璃粘连蛋白的细胞-和肝素-结合结构域的生物肽。生物因子可通过商业途径、从组织分离和纯化或化学合成获得。

具体实施方式

实施例

以下实施例举例说明用于向哺乳动物中植入细胞或细胞材料的囊的构建。本领域普通技术人员能意识到，这些特定实施例不限制本发明的范围，而且也可以在本发明范围内产生多种囊1的其它形式。

实施例1：一种可植入式囊的制备

制备待冻干于囊中的聚合物溶液。用于生成泡沫组分的聚合物是Birmingham Polymers Inc.(Birmingham，AL)公司生产的由35％PCL和65％PGA(35/65PCL/PGA)形成的共聚物，30℃下于HFIP中测定该聚合物的I.V.为1.79dL/g。以95/5的重量比称量1，4-二噁烷/(35/65PCL/PGA)。将聚合物与溶剂置于长颈瓶中，依次于70℃下水浴并搅拌5小时。用抽提套管(超大孔径，型号ASTM170-220(EC))过滤溶液并于长颈瓶中保存。

用压铸模于80℃下2分钟，将由聚乙醇酸/聚乳酸(PGA/PLA)为90/10的共聚物形成的加固网状材料编结(代码VKM-M)制成的网熨平。制备该网后，将0.4mm的垫片置于15.3×15.3cm的铝模每端，并调整两个网的大小以制备合适的囊大小。如图3所示在框架A和框架B之间拉伸两个网层彼此的顶端，然后将该复合体置于垫片上以使网能够悬浮于将要加入的溶液中。将具有与所需囊的开口(0.4×8.0或0.4×4.0mm²)对应横截面区域的金属或Teflon插件置于两片展开的网层之间。将加热至50℃的聚合物溶液从侧面缓慢注入直至上层网已经被全部覆盖。约有60ml聚合物被缓慢倒入模具中，确保溶液在模具中得到良好分散。随后将模具置于Virtis，Freeze Mobile G冻干仪的搁架上。本实施例中的冻干程序是：(1)-17℃ 60分钟；(2)-5℃，100mT真空，60分钟；(3)5℃，20mT真空，60分钟；(4)20℃，20mT真空，60分钟。

图1显示去除插件后最终获得的囊，包含包绕囊内腔的加固泡沫3，然后除去插件。图2描绘的是囊横截面的电镜扫描图(SEMs)。SEM清楚的显示了囊内部冻干的加固泡沫支架。之后将装配模具从冷冻机中取出置于氮盒中过夜。完成这一过程后，将包含可去除插件的泡沫/网片的形式的模具中小心剥出。插件可以在载入细胞及体内植入前去除或在移植后稍晚时去除。后一种情况下，细胞紧接着插件的去除载入囊内腔。

实施例2：一种可植入式囊的制备

如实施例1所述方法制备一种可生物降解的囊，除了纺织Vicryl(代码VWM-M)，使用由聚乙醇酸/聚乳酸(PGA/PLA)为90/10的共聚物形成的加固网状材料。

实施例3：一种可植入式囊的制备

如实施例1所述方法制备一种可生物降解的囊，除了使用编织加固网状材料，该材料由100％PDS形成。

实施例4：带有哺乳动物细胞的可植入式组织支架

本实施例举例说明本发明所述囊内腔中鼠科动物胰岛的接种。

经胶原酶消化胰腺、Ficoll密度梯度离心及之后人工收集胰岛自Balb/c小鼠分离获得鼠科动物胰岛。

如实施例1所述制备囊，并接种入500个新鲜胰岛，于添加了牛血清蛋白(0.5％)、烟酰胺(10mM)、D-葡萄糖(10mM)、L-谷氨酰胺(2mM)、IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，50mM)和青霉素/链霉素的Hams-F10(Gibco LifeTechnologies，Rockville，MD)中培养1周。一周后，用钙黄绿素和乙啡啶二聚体(Molecular Probes，Oregon)对囊中定植的胰岛染色以检测接种细胞的活力。大部分胰岛对钙黄绿素染色呈阳性表明囊内腔中存在活性细胞。

Claims (7)

1.适于植入并适于用于疾病治疗的囊，包含生物相容性壁，具有由聚乙醇酸和聚乳酸的90％/10％共聚物组成的加固网，并包含腔，其中，所述壁由35％的聚己内酯和65％的聚乙醇酸组成并具有多个5-400微米的孔以允许特定大小的细胞和营养物质进和出而不允许大于该特定大小的细胞进和出。

2.权利要求1的囊，其中的疾病是糖尿病。

3.权利要求1的囊，其中所述腔具有至少1×10^-3cm³的容量。

4.权利要求3的囊，其中所述腔具有至少0.1cm³的容量。

5.权利要求1的囊，其中所述腔由含有胰岛的材料填充。

6.权利要求5的囊，其中所述腔由含有支持细胞的材料填充。

7.权利要求1的囊，多个孔阻止胰岛从腔出去。

Images