CN100386080C - 汉防己甲素固体脂质纳米粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种汉防己甲素固体脂质纳米粒及其制备方法，用从中药汉防己中提取的汉防己甲素作为药物有效成分，以硬脂酸等脂质材料为载体，以豆磷脂等为乳化剂，采用超声法和高压乳匀法，将汉防己甲素包载于固体脂质纳米粒中制得。本发明制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒具有粒径小、稳定性和包封率高的特点，不仅可以提高药物的生物利用度，而且可以改变药物的体内过程，增加对肝、脾的靶向性，减少用药剂量和毒副作用，提高疗效。
Description
技术领域
本发明属于纳米中药制剂领域，特别涉及一种中药汉防己的有效成分汉防己甲素的固体脂质纳米粒制剂及其制备方法。
背景技术
固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)是在20世纪90年代初发展起来的一种可替代乳剂、脂质体和聚合纳米粒的新型胶体给药系统。它所含有的固体脂质成分是机体可利用、可生物降解的，与聚合纳米粒相比，它的毒性更低。与脂质体相比，由于药物被包封在固体脂粒的骨架中，不存在药物在贮存过程中的泄漏问题。SLN还具有缓释、控释和靶向作用。静脉给药后，很快被网状内皮系统吞噬而被动进入肝脾，达到肝靶向作用。
汉防己甲素(tetrandrine，TET)是从防己科千金藤属植物汉防己干燥块根中提取的一种双苄基异喹啉生物碱，它具有广泛的药理作用。近年来研究发现其具有抗肝纤维化、降低门脉压力的作用，所以在临床上可用于大量的慢性肝炎、肝硬化患者。但汉防己甲素不溶于水，其普通制剂生物利用度不高，也无组织靶向作用，影响了该药的治疗效果；而且汉防己甲素安全范围较小，毒副作用较大，使该药在临床的使用范围受到一定的限制。
超声法是最早用于制备固体脂质纳米粒的技术，因操作简单而被广泛采用，特别适用于实验室制备少量样品。但当应用超声法时，应考虑金属粒子污染等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种汉防己甲素固体脂质纳米粒及其制备方法，以提高汉防己甲素的生物利用度，增加肝靶向作用，减少用药剂量和毒副作用，提高疗效；其含有的磷脂成分还能起到抗脂质过氧化、保护肝细胞膜的作用，从而开发出高效的保肝、抗肝纤维化中药制剂，该纳米粒的粒径达到纳米级，且稳定性和包封率均较高。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明的汉防己甲素固体脂质纳米粒制剂，用从中药汉防己中提取的汉防己甲素作为药物有效成分，以硬脂酸等脂质材料为载体，以豆磷脂等为乳化剂，采用超声法和高压乳匀法，将汉防己甲素包载于固体脂质纳米粒中制得。
上述的汉防己甲素固体脂质纳米粒制剂，从中药汉防己中提取汉防己甲素作为药物有效成分，以脂质材料为载体，以磷脂为乳化剂；汉防己甲素、脂质材料、乳化剂的重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％；脂质材料选自硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯其中之一；乳化剂选自豆磷脂、卵磷脂其中之一；以无水乙醇、乙酸乙酯有机溶剂其中之一为有机相，以蒸馏水为水相，以甘油、甘露醇其中之一为助乳化剂；有机相和水相的体积比为1∶2～6；助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5。
本发明的汉防己甲素固体脂质纳米粒的制备方法，包括超声法，适用于实验室制备少量汉防己甲素固体脂质纳米粒，包括以下步骤：
1)称取汉防己甲素、脂质材料、乳化剂，其重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有机溶剂中，汉防己甲素溶解在有机溶剂中的浓度为0.3％～1％，w/v，形成有机相溶液；所述的脂质材料是硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化剂是豆磷脂或卵磷脂；所述的有机溶剂是指无水乙醇或乙酸乙酯；
2)将助乳化剂分散于蒸馏水中形成水相，助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5，置于恒温磁力搅拌器上，温度为75℃～85℃，搅拌速度为800～1500rpm；所述的助乳化剂是指甘油或甘露醇；
3)将步骤1)制得的有机相溶液注入步骤2)制得的水相，有机相和水相的体积比为1∶2～6中，搅拌1～2h，使其成乳白色混悬液，形成初乳；
4)将步骤3)制得的初乳超声处理200～600秒，冷却至室温，用0.45μm以下微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，3℃-5℃密封保存。
本发明的汉防己甲素固体脂质纳米粒的制备方法，还包括高压乳匀法，可用于工业化生产大量汉防己甲素固体脂质纳米粒，包括以下步骤：
1)称取汉防己甲素、脂质材料、乳化剂的重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有机溶剂中，汉防己甲素溶解在有机溶剂中浓度为0.3％～1％，w/v，形成有机相溶液；所述的脂质材料是硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化剂是豆磷脂或卵磷脂；所述的有机溶剂是指无水乙醇或乙酸乙酯；
2)将助乳化剂分散于蒸馏水中形成水相，助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5，置于恒温磁力搅拌器上，温度为75℃～85℃，搅拌速度为800～1500rpm；所述的助乳化剂是甘油或甘露醇；
3)将1)制得的有机相溶液注入2)制得的水相，有机相和水相的体积比为1∶2～6中，搅拌1～2h，使成乳白色混悬液，形成初乳；
4)将3)制得的初乳在高压乳匀机上50～80MPa乳匀4～5次，制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，3℃-5℃密封保存。
本发明用0.45μm以下微孔滤膜过滤，可有效除去超声探头释放的钛颗粒等杂质。高压乳匀法是制备固体脂质纳米粒可靠而有效的技术。其原理是用高压推动液体通过狭缝(只有几个微米宽)，流体在短距离内加速到很高的速率(大于1000 km·h-1)，非常高的剪切力和空穴力撕开颗粒至纳米尺度。高压乳匀法发明可用于工业化生产，且制备的纳米粒粒径更小、更稳定。同时，经过大量试验，对制备工艺(搅拌时间、超声时间等)、处方都进行了优化，所以制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒具有较高的包封率。
本发明采用超声法和高压乳匀法，将汉防己甲素包载于固体脂质纳米粒中，通过处方和工艺条件控制纳米粒的粒径，得到符合要求的制剂。
附图说明
图1是超声法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的透射电镜图，×60000
图2是超声法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体的Zeta电位图；
图3是高压乳匀法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的透射电镜图，×60000；
图4是高压乳匀法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体的Zeta电位图。
具体实施方式
本发明是将从中药汉防己中提取的有效成分汉防己甲素包载于固体脂质纳米粒中，制成中药的纳米剂型。汉防己甲素是一种双苄基异喹啉生物碱，不溶于水，溶解于多种有机溶剂，特别适合于制备成固体脂质纳米粒的剂型。
本发明所用药用制剂辅料均为市售且符合药典标准，如：汉防己甲素(98％，西安山川生物技术有限公司)，豆磷脂(北京奥博星生物技术责任有限公司)，硬脂酸(天津市天大化学试剂厂)，单硬脂酸甘油酯(上海三浦化工仪器有限公司)、胆固醇(上海政翔化学试剂研究所)、无水乙醇(西安化学试剂厂)，乙酸乙酯(西安化学试剂厂)，甘油(厦门鱼肝油厂)。
汉防己甲素固体脂质纳米粒的制备方法，较好的选择为：汉防己甲素纯度98％以上，脂质材料选择硬脂酸，乳化剂选择豆磷脂，有机相选择无水乙醇，助乳化剂选择甘油，有机相和水相的体积比为1∶4～5，助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶2～3。
实施例1
(1)称取汉防己甲素70mg、硬脂酸60mg和豆磷脂150mg，在70℃水浴中溶解于10ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取15ml甘油分散于30ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1000rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌1.5h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理300秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为92nm(图1：超声法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的透射电镜照片，×60000)，Zeta电位为-21.11mv(图2：超声法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体的Zeta电位)，包封率为95.27％。
实施例2
(1)称取汉防己甲素65mg、胆固醇45mg和卵磷脂120mg，在70℃水浴中溶解于9.5ml乙酸乙酯中，形成有机相溶液。
(2)量取15ml甘露醇分散于30ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为75℃，搅拌速度为800rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌1h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理400秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为97nm，Zeta电位为-20.74mv，包封率为94.88％。
实施例3
(1)称取汉防己甲素250mg、硬脂酸150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理600秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为95nm，Zeta电位为-22.50mv，包封率为92.34％。
实施例4
(1)称取汉防己甲素250mg、单硬脂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml乙酸乙酯中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘露醇分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理600秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为96nm，Zeta电位为-20.26mv，包封率为91.23％。
实施例5
(1)称取汉防己甲素250mg、三硬脂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理600秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为94nm，Zeta电位为-20.87mv，包封率为92.65％。
实施例6
(1)称取汉防己甲素250mg、三月桂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml乙酸乙酯中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘露醇分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳超声处理600秒，搅拌至室温，用0.45μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为91nm，Zeta电位为-21.85mv，包封率为94.14％。
实施例7
(1)称取汉防己甲素250mg、硬脂酸150mg和卵磷脂450mg，在65℃水浴中溶解于30ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上55MPa乳匀5次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为47nm(图3：高压乳匀法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的透射电镜照片×60000)，Zeta电位为-32.99mv(图4：高压乳匀法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体的Zeta电位)，包封率为97.82％。
实施例8
(1)称取汉防己甲素700mg、三硬脂酸甘油酯600mg和豆磷脂1.5g，在70℃水浴中溶解于100ml乙酸乙酯中，形成有机相溶液。
(2)量取150ml甘露醇分散于350ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为85℃，搅拌速度为1500rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上50MPa乳匀4次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为52nm，Zeta电位为-30.64mv，包封率为96.78％。
实施例9
(1)称取汉防己甲素2.5g、三月桂酸甘油酯1.5g和豆磷脂4.5g，在75℃水浴中溶解于300ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取450ml甘油分散于950ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为76℃，搅拌速度为1500rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上80MPa乳匀5次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为59nm，Zeta电位为-28.71mv，包封率为96.54％。
实施例10
(1)称取汉防己甲素2.5g、硬脂酸1.5g和豆磷脂4.5g，在70℃水浴中溶解于300ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取450ml甘露醇分散于950ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1500rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上80MPa乳匀5次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为52nm，Zeta电位为-26.33mv，包封率为95.22％。
实施例11
(1)称取汉防己甲素2.5g、胆固醇1.5g和卵磷脂4.5g，在75℃水浴中溶解于300ml乙酸乙酯中，形成有机相溶液。
(2)量取450ml甘露醇分散于950ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1500rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上70MPa乳匀5次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为56nm，Zeta电位为-29.17mv，包封率为94.52％。
实施例12
(1)称取汉防己甲素250mg、单硬脂酸甘油酯150mg和卵磷脂450mg，在65℃水浴中溶解于30ml无水乙醇中，形成有机相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸馏水中形成水相，置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，搅拌速度为1300rpm。
(3)将步骤(1)制得的有机相注入步骤(2)制得的水相中，搅拌2h，使成乳白色混悬液，形成初乳。
(4)将步骤(3)制得的初乳在高压乳匀机上55MPa乳匀5次。制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，4℃密封保存。
检测：该法制备的汉防己甲素固体脂质纳米粒的平均粒径为49nm，Zeta电位为-31.68mv，包封率为96.33％。
Claims (3)
1.一种汉防己甲素固体脂质纳米粒制剂，其特征在于：从中药汉防己中提取汉防己甲素作为药物有效成分，以脂质材料为载体，以磷脂为乳化剂；汉防己甲素、脂质材料、乳化剂的重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％；脂质材料选自硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯其中之一；乳化剂选自豆磷脂、卵磷脂其中之一；以无水乙醇、乙酸乙酯有机溶剂其中之一为有机相，以蒸馏水为水相，以甘油、甘露醇其中之一为助乳化剂；有机相和水相的体积比为1∶2～6；助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5；汉防己甲素、脂质材料和乳化剂这三种原料用量之和为100％。
2.一种汉防己甲素固体脂质纳米粒的制备方法，用于制备汉防己甲素固体脂质纳米粒，其特征在于，包括以下步骤：
1)称取汉防己甲素、脂质材料、乳化剂，其重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有机溶剂中，汉防己甲素溶解在有机溶剂中的浓度为0.3％～1％，w/v，形成有机相溶液；所述的脂质材料是硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化剂是豆磷脂或卵磷脂；所述的有机溶剂是指无水乙醇或乙酸乙酯；汉防己甲素、脂质材料和乳化剂这三种原料用量之和为100％；
2)将助乳化剂分散于蒸馏水中形成水相，助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5，置于恒温磁力搅拌器上，温度为75℃～85℃，搅拌速度为800～1500rpm；所述的助乳化剂是指甘油或甘露醇；
3)将步骤1)制得的有机相溶液注入步骤2)制得的水相，有机相和水相的体积比为1∶2～6中，搅拌1～2h，使其成乳白色混悬液，形成初乳；
4)将步骤3)制得的初乳超声处理200～60C秒，冷却至室温，用0.45μm以下微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒杂质，得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，3℃-5℃密封保存。
3.一种汉防己甲素固体脂质纳米粒的制备方法，制备汉防己甲素固体脂质纳米粒，其特征在于，包括以下步骤：
1)称取汉防己甲素、脂质材料、乳化剂的重量百分比为10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有机溶剂中，汉防己甲素溶解在有机溶剂中浓度为0.3％～1％，w/v，形成有机相溶液；所述的脂质材料是硬脂酸、胆固醇、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化剂是豆磷脂或卵磷脂；所述的有机溶剂是指无水乙醇或乙酸乙酯；汉防己甲素、脂质材料和乳化剂这三种原料用量之和为100％；
2)将助乳化剂分散于蒸馏水中形成水相，助乳化剂和蒸馏水的体积比为1∶1.5～5，置于恒温磁力搅拌器上，温度为75℃～85℃，搅拌速度为800～1500rpm；所述的助乳化剂是甘油或甘露醇；
3)将1)制得的有机相溶液注入2)制得的水相，有机相和水相的体积比为1∶2～6中，搅拌1～2h，使成乳白色混悬液，形成初乳；
4)将3)制得的初乳在高压乳匀机上50～80MPa乳匀4～5次，制得汉防己甲素固体脂质纳米粒水分散体，3℃-5℃密封保存。
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