CN107737340A - 一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用 - Google Patents
一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,槐糖脂可应用于药品生产的药用辅料,该辅料天然无毒害、生物相容性好,表面活性、分散能力、乳化能力强、且可显著提高主药的稳定性及载药量,直接延长药品保存时间。所述槐糖脂包括内酯型槐糖脂、酸型槐糖脂任意一种或两者任意比例混合。本发明可用于微乳、亚微乳、脂质体、微胶囊、磁性药物制剂等剂型或其他添加表面活性剂的肌肉注射或静脉注射药剂的制备。将本发明药用辅料加入不同剂型的制备体系中,添加比例为0.05‑3%,即可制备获得满足要求的剂型,载药量和制剂的储存时间均显著优于传统表面活性剂吐温80,不良反应发生率均低于吐温80,为一类优秀的天然微生物源药用辅料。
Description
技术领域
本申请属于药用辅料领域,具体涉及到一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,可以添加到乳剂中作为乳化剂、分散剂及稳定剂的药用辅料。
背景技术
槐糖脂作为一类表面/界面/抗肿瘤活性优良的生物表面活性剂,在医药等领域有着巨大的开发潜力和应用前景,微生物天然合成的槐糖脂,是由一系列结构类似物组成的混合物,其主要分为酸型和内酯型两大类。一般来说,内酯型槐糖脂具有较高的亲脂性,具有降低液体表面张力的能力,其抑菌、抗癌等活性较高;酸型槐糖脂的水溶性较好,具有更好的水溶性和发泡能力,是优良的乳化剂、发泡剂和分散剂。作为一类生物表面活性剂,槐糖脂不仅具有渗透、润湿、乳化、增溶、消泡等化学表面活性剂所具有的特征,还有自己独特的理化特性和良好的生物活性。
依托泊苷(Etoposide,ETO)是抗肿瘤植物成分鬼臼脂的半合成衍生物,具有广谱抗癌活性和相当高的治疗指数,为国际上公认的新型抗肿瘤药物。国内外上市的依托泊苷制剂主要是非水溶液注射剂和口服胶囊,临床应用中不同程度的存在注射给药血管刺激性大,口服生物利用度低等剂型缺陷。注射依托泊苷亚微乳(Etoposide submicronemulsion,ESE)是随着新辅料、新技术、新载体的不断涌现而出现的新剂型,其是一种由油、水和表面活性剂组成的粒径在100-1,000nm之间的热力学不稳定系统。该剂型通过延长药物在血液中的迟滞时间来提高药效。
现今常用的乳化剂分为天然乳化剂和合成乳化剂。
(1)天然乳化剂:如多糖类的阿拉伯胶、西黄蓍胶及明胶、白蛋白和酪蛋白、大豆磷脂、卵磷脂及胆固醇等。这些天然乳化剂降低界面张力的能力不强,但它们易形成高分子膜而使乳滴稳定。明胶及其他蛋白质类乳化剂的带电状况受溶液pH值的影响,在其等电点时稳定性最差。天然乳化剂的优点是无毒、价廉,缺点是一般都存在批间差异,对大量生产很不利。
(2)合成乳化剂:合成的乳化剂品种较多,分为离子型和非离子型两大类。纳米乳常用非离子型乳化剂,如脂肪酸山梨坦(亲油性)、聚山梨酯(亲水性)、聚氧乙烯脂肪酸酯类(商品名Myrj,亲水性)、聚氧乙烯脂肪醇醚类(商品名Brij,为亲水性)、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类(聚醚型)、蔗糖脂肪酸酯类和单硬脂酸甘油酯等。非离子型的乳化剂口服一般认为没有毒性,静脉给药有一定的毒性,其中pluronicF68的毒性很低。这些表面活性剂一般都有轻微的溶血作用。
非离子型表面活性剂吐温80属于合成乳化剂,为一种常用药用辅料,在中药注射剂中常作为增溶剂或澄清剂提高中药有效成分的水溶。通过考察药辅成分发现,依托泊苷常规剂型和新剂型均有表面活性剂吐温80的存在。
长期临床实验证明吐温80可引发溶血和过敏等不良反应。静脉抗肿瘤药依托泊苷和多西他赛、维生素K1注射剂、麻醉药依托咪酯中均含有的吐温80所引发过敏反应发生率约为5%~40%。2006年我国发生的鱼腥草注射液中毒事件的过敏原因也是作为助溶剂的吐温80。随着中药制剂的广泛使用,患者接触吐温-80的机会增多,不良反应发生率也呈上升趋势。所以开发安全可靠的药用辅料已变得刻不容缓。
综上,寻找安全新型的表面活性剂开发依托泊苷新剂型以降低吐温80的不良反应,具有重要的理论意义和应用价值,值得科研工作者的关注。本发明考察了酸型/内酯型槐糖脂对依托泊苷亚微乳中吐温80的替代效果,获得了毒性低,药效高,生物相容性好,稳定性高的依托泊苷亚微乳制剂,一定程度上降低吐温80的用量和减少其带来的副作用。
发明内容
本发明的目的是提供可用于不同乳剂生产的表面活性剂类药用辅料,可显著提高主药的稳定性,延缓主药的降解速率。
本发明槐糖脂是由很多槐糖脂分子所组成的混合物。这些槐糖脂分子有一个共同的特征,分子由亲水性和疏水性两部分组成。亲水性部分是槐糖(两个葡萄糖分子以β1,2糖苷键结合),疏水性部分是饱和或不饱和的长链ω-/ω-1羟基脂肪酸,这两部分以糖苷键相连。而它们的区别在于它们所含脂肪酸碳链的长度不同、饱和或不饱和的程度不同、槐糖部分乙酰化的程度和乙酰化位置不同,以及是否存在内酯化作用。
本发明所述槐糖脂均由非致病性微生物发酵获得,槐糖脂具有降低液体表面张力,是生物表面活性剂的一种,可替代吐温80作为乳化剂。
所述槐糖脂包括内酯型槐糖脂、酸型槐糖脂中的任意一种或其混合物。
所述内酯型槐糖脂的结构式为:
其中R1为H或Ac,R2为H或Ac,R3为H或CH3。
所述酸型槐糖脂的结构式为:
其中R1为H或Ac,R2为H或Ac,R3为H或CH3。
本发明所述的一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于,槐糖脂的制备方法包括以下步骤:
(1)将产槐糖脂酵母菌在28-32℃、200-250rpm条件下发酵培养4-5d,其中发酵培养基组成为:葡萄糖5-6%,酵母粉0.3-0.4%,磷酸二氢钠0.1-0.2%,十二水和磷酸氢二钠0.1-0.2%,七水硫酸镁0.050.06%,油酸6-7%。
(2)发酵液用体积比1:2的乙酸乙酯萃取,上层萃取液于48-50℃下减压蒸馏后,正己烷洗涤2-3遍,再50-52℃减压蒸馏,45-48℃真空干燥20-24h,即为内酯型槐糖脂,为内酯型槐糖脂混合物。
(3)乙酸乙酯萃取后的水相,用体积比1:2的乙醇漩涡混合,5500-6000rpm离心15-17min后收集上清液,50-52℃减压蒸馏,正己烷洗涤2-3遍,再49-51℃减压蒸馏,45-47℃真空干燥22-24h,即为酸型槐糖脂,为酸性槐糖脂混合物。
所述酵母菌包含白色假丝酵母(Candida bombicola),葛罗氏球拟酵母(Torulopsis gropengiesseri),球拟酵母(Torulopsis bombicola),念珠菌bogoriensis(Rhodotorula bogoriensis),球拟假丝酵母(Starmerellabombicola),异常毕赤酵母(Pichia anomala),巴蒂斯塔念珠菌(Candida batistae),念珠菌riodocensis(Candidariodocensis),星形球拟酵母(Candida stellate)和球拟酵母Y-27208(Candida sp.Y-27208)等槐糖脂产生菌;优选为假丝酵母(Candida bombicola)或球拟假丝酵母(Starmerella bombicola,原为拟威克酵母(Wickerhamiella domercqiae))。
依托泊苷亚微乳制剂的制备方法包括以下步骤:
(1)称取乳化剂0.05-3%的槐糖脂和注射用0.5-6%甘油分散于适量注射用水中,加热至50-90℃,搅拌至完全溶解,调节水相pH至4-6,备用;
(2)称取药物活性物质依托泊苷0.1-4%和豆磷脂0.3-3%,加入长链脂肪酸甘油三酯(LCT)和中链脂肪酸甘油三酯(MCT)的混合溶液中,加热至50-90℃,搅拌至完全溶解,备用;
(3)将上述(2)中物料加入到(1)中,搅拌至两相混合均匀,呈现乳白色的均一相,用注射用水稀释定容,备用;
(4)将上述(3)中的物料置于高压均质机中,调节压力为500-900bar,均质4-9次,再高压灭菌14-16min即得所述毒性低、药效高、生物相容性好、稳定性高的依托泊苷亚微乳制剂。
本发明所述的槐糖脂可广泛作为乳化剂和稳定剂应用于微乳、亚微乳、脂质体、微胶囊、磁性药物制剂等剂型或其它添加表面活性剂的肌肉注射或静脉注射药剂的制备。
所述槐糖脂作为乳化剂添加进乳剂时,以将槐糖脂溶解或直接添加到水相或油相中或混合相之中。
本发明的优点是:
(1)本发明的槐糖脂是微生物发酵过程所得糖脂类化合物,不同于传统的乳化剂,开创了微生物源糖脂类化合物在药用辅料上的应用;
(2)本发明所述的药用辅料槐糖脂相对于传统的药用吐温80制备的乳剂,载药率提高了112%,而且电位和Zeta电位显示其均能形成稳定的乳剂;
(3)本发明的槐糖脂来源简单且无毒无害,制备工艺简单,价格低廉,使用方便,可以减少对环保的危害,减低企业的环保成本,提高经济效益和企业核心竞争力;
(4)该类槐糖脂在乳剂中的应用使产品具有更低的毒副作用、更好的生物相容性、稳定性以及更高的载药率。
附图说明
图1:未添加槐糖脂和依托泊苷的空白乳剂
图2:依托泊苷的标准对照品溶液
图3:添加槐糖脂的依托泊苷乳剂
图4:添加吐温的依托泊苷的乳剂
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明,但附图和实施例不是对本发明技术方案的限定。
实施例1:槐糖脂的制备
(1)将产槐糖脂酵母菌在28-30℃、220rpm条件下发酵培养5d,其中发酵培养基组成为:葡萄糖6%,酵母粉0.3%,磷酸二氢钠0.1%,十二水和磷酸氢二钠0.1%,七水硫酸镁0.05%,油酸6%;(2)发酵液用体积比1:2的乙酸乙酯萃取,上层萃取液于50℃下减压蒸馏后,正己烷洗涤2遍,再50℃减压蒸馏,45℃真空干燥24h,即为内酯型槐糖脂,为内酯型槐糖脂混合物;(3)乙酸乙酯萃取后的水相,用体积比1:2的乙醇漩涡混合,6000rpm离心15min后收集上清液,50℃减压蒸馏,正己烷洗涤两遍,再50℃减压蒸馏,45℃真空干燥24h,即为酸型槐糖脂,为酸性槐糖脂混合物。
实施例2:阳性对照组
(1)称取药用吐温0.1%和注射用甘油2.5%分散于适量注射用水中,加热至70℃,搅拌至完全溶解,调节水相pH至5,备用;(2)称取依托泊苷0.1%和豆磷脂1.8%,加入长链脂肪酸甘油三酯(LCT)和中链脂肪酸甘油三酯(MCT)的混合溶液中,加热至80℃,搅拌至完全溶解,备用;(3)将上述(2)中物料加入到(1)中,搅拌至两相混合均匀,呈现乳白色的均一相,用注射用水稀释定容至50ml容量瓶,备用;(4)将上述(3)中的物料置于高压均质机中,调节压力为800bar,均质6次,再高压灭菌15min即得所述药用辅料。
实施例3,作为空白对照,与实施例2基本相同但有以下改变:将药用吐温改成不添加任何乳化剂。
实施例4,与实施例2基本相同但有以下改变:将药用吐温改为0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%添加量的酸型槐糖脂。
实施例5,与实施例2基本相同但有以下改变:将药用吐温改为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.5%添加量的内酯型槐糖脂。
实施例6,与实施例3基本相同但有以下改变:将添加依托泊苷0.1%改为不添加依托泊苷。
本发明实施例2-5制备的制剂的粒径以及Zeta电位数据如下表所示
实验例7依托泊苷载药率的考察
(1)依托泊苷含量的测定
色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相甲醇:水=70:30(v:v);检测波长285nm;流速0.7ml/min;柱温30℃;进样量20ul。
(2)依托泊苷对照品溶液配制:
精密称取依托泊苷对照品50mg置于50ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,得到质量浓度为1mg/ml的储备液,精密吸取储备溶液1ml置于25ml量瓶中以甲醇稀释至刻度后即得。
取实施例2、实施例6、实施例4中添加量为0.8%的乳剂1ml以甲醇溶解,涡旋3min后用甲醇稀释至25ml,0.22μm微孔滤膜过滤即得,备用。
各样品进样量均为20ul,记录色谱图(见图1、图2、图3、图4),以外标法计算样品含量,按标示百分含量计。
通过高效液相图谱,我们可以看到,空白亚微乳图1没有明显的峰且峰面积较低,没有依托泊苷特征峰出现,而图2在2.8min有一个很强的特征峰,这个就是依托泊苷的特征峰。而在图3和图4中,在2.69min有一个很明显的特征峰,因此我们认为这个峰就是依托泊苷的特征峰。通过外标法计算可得,图3中的依托泊苷含量为62.74%,图4中依托泊苷含量仅为29.51%。因此依托泊苷-槐糖脂的亚微乳溶液不仅可以形成稳定的亚微乳溶液,而且载药量也比传统依托泊苷亚微乳溶液提高了112.6%,表明其具有一定的市场应用前景。
以上仅是本发明的部分实施例,上述实施例不应视为对本发明的限制,本发明的保护范围应该以权利要求限定范围为准。对于本技术领域的普通技术人员而言,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改进,这些改进也应当视作本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于:所述槐糖脂作为微乳、亚微乳、脂质体、微胶囊、磁性药物制剂的乳化剂,不仅具有乳化效果,还具有较好的分散作用以及稳定作用。
2.根据权利要求1所述的一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于:所述槐糖脂包括内酯型槐糖脂、酸型槐糖脂中的任意一种或其任意比例的复配物。
3.根据权利要求2所述的药用辅料槐糖脂,其特征在于:所述内酯型槐糖脂的结构式为:
其中R1为H或Ac,R2为H或Ac,R3为H或CH3。
4.根据权利要求2所述的药用辅料槐糖脂,其特征在于:所述酸型槐糖脂的结构式为:
其中R1为H或Ac,R2为H或Ac,R3为H或CH3。
5.如权利要求1-2所述的一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于,依托泊苷亚微乳制剂的制备方法包括以下步骤:
(1)称取乳化剂0.05-3%的槐糖脂和注射用0.5-6%甘油分散于适量注射用水中,加热至50-90℃,搅拌至完全溶解,调节水相pH至4-6,备用;
(2)称取药物活性物质依托泊苷0.1-4%和豆磷脂0.3-3%,加入长链脂肪酸甘油三酯(LCT)和中链脂肪酸甘油三酯(MCT)的混合溶液中,加热至50-90℃,搅拌至完全溶解,备用;
(3)将上述(2)中物料加入到(1)中,搅拌至两相混合均匀,呈现乳白色的均一相,用注射用水稀释定容,备用;
(4)将上述(3)中的物料置于高压均质机中,调节压力为500-900bar,均质4-9次,再高压灭菌14-16min即得所述毒性低、药效高、生物相容性好、稳定性高的依托泊苷亚微乳制剂。
6.根据权利要求1所述的一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于:其所应用的剂型为微乳、亚微乳、脂质体、微胶囊、磁性药物制剂等剂型或其它添加表面活性剂的肌肉注射或静脉注射药剂的制备。
7.根据权利要求1所述的一种药用辅料槐糖脂在医药领域的应用,其特征在于:所述槐糖脂作为乳化剂添加进乳剂时,将槐糖脂溶解或直接添加到水相或油相中或混合相之中。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180227 |
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