CN100360552C - 一种法氏囊素三肽合成方法 - Google Patents

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Abstract

一种法氏囊素三肽合成方法，合成方法按如下步骤进行：氨基酸保护→保护组氨酸-甘氨酸甲酯二肽合成→保护组氨酸-甘氨酸二肽的脱氨基保护→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的脱氨基保护→法氏囊素三肽粗品的合成→法氏囊素三肽粗品的纯化，本发明的合成方法，可以大量合成制取高纯度的法氏囊素三肽，因而使BS的产量得到了提高，生产成本降低，同时具有重大的应用价值。

Description

一种法氏囊素三肽合成方法
技术领域
本发明涉及生物制剂的合成方法，尤其是涉及一种法氏囊素三肽合成方法。
背景技术
病毒性传染病的发生是影响畜牧业发展的一个重要因素，大多数病原微生物侵入机体后，能造成免疫器官包括法氏囊素的损伤，使机体免疫功能低下，抗病力减弱，使疫病进一步发展，同时，引发继发感染及免疫失败，给养殖业造成巨大损失，实践证明，单纯依靠疫苗免疫一方面由于多种原因引起的免疫失败，另一方面由于疫苗本身保护率的限制，很难完全防止传染病的发生，因而，探求免疫增强剂，保护、提高机体免疫力和研制积极有效的病毒性疾病防治方法，已成为世界各国兽医工作者努力的热点。
目前研究较多的免疫增强剂主要有微生物、化学剂、生物剂、生物制剂和中药制剂，生物制剂的免疫增强效果好，但由于成本高而极大地限制了其在兽医临床中的应用。因此，降低成本或探求成本低廉、效果好的免疫增强剂已成为兽医工作者的一项重要任务。
法氏囊素是法氏囊组织提取物中唯一一种化学组成已被确定的生物活性分子，由T.Audhya等于1986年从鸡法氏囊组织抽提液中纯化并定名，其化学组成为三肽，即Lys-His-Gly-NH2。研究证明BS在体外具有诱导B淋巴细胞系分化的功能，并对B淋巴细胞抑制有拮抗作用，能提高人B细胞系-Duadi细胞内cGMP水平，发育生物学研究表明，BS能保护和促进法氏囊的正常发育，对鸡的促肾上腺皮质激素中枢和生物节律调节中枢的形成和发育起关键作用。
对法氏囊素的研究表明显示：BS在提高机体免疫力及作为免疫增强剂，在提高疫苗效果和疫病防治等方面具有重要的应用价值，而BS在哺乳动物及人类某些方面的免疫功能更显示了广泛的应用前景。但是由于法氏囊素其在组织内含量甚微，加之法氏囊素组织本身体积较小，因而很难获得大量纯品，限制了其研究与应用，在此情况下，建立人工合成方法，使BS的产量提到提高具有十分诱人的前景，同时具有重大的应用价值。
发明内容
针对传统方法对法氏囊素制取较难，制取量小的问题，本发明的目的是提供一种生产量大、生产成本低的法氏囊素三肽合成方法。
为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种法氏囊素三肽合成方法，其特征在于：合成方法按如下步骤进行：氨基酸保护→保护组氨酸-甘氨酸甲酯二肽合成→保护组氨酸-甘氨酸二肽的脱氨基保护→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的脱氨基保护→法氏囊素三肽粗品的合成→法氏囊素三肽粗品的纯化，其中
(1)氨基酸保护
a、将赖氨酸、组氨酸溶于NaOH中，置冰盐浴中冷却，搅拌下滴入预先用THF溶解的Z-Cl或Fmoc-Cl或(Boc)2O，同时滴入NaOH使溶液保持pH＝8～10。加完后自然升温至室温，继续搅拌0.5～2小时，然后，用乙醚洗2～3次，分去醚层，水相在搅拌下滴入盐酸使pH＝0.5～1.5，再加入乙酸乙酯，继续搅拌5～10分钟后分液，乙酸乙酯层用稀NaCl洗至中性、无水Na2SO4干燥、减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂，最后得到氨基保护赖氨酸Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys和氨基保护组氨酸Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His；
b、将甘氨酸溶于甲醇中，置冰盐浴中冷却至-5～-10℃，缓慢滴入氯化亚砜，再加入浓硫酸，15～25℃放置1.5～4小时，再在70～80℃水浴回流30～50分钟，然后，减压蒸馏除去甲醇后加入乙醚，0～4℃放置1～2小时，待结晶完全后，过滤，再用无水乙醇洗涤结晶，最后得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
取Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His溶解于水四氢呋喃中，用冰盐浴冷至-5～0℃，在搅拌过程中分别滴入预先用四氢呋喃溶解的HOSu和DCC或HOBt和DCC。滴完后在-5～0℃反应20～60分钟，然后在-5～0℃加入预先用DMF溶解的GlyOCH3及NMM，再在-5～0℃反应20～60分钟，然后室温反应2～6小时，反应结束后，过滤，将滤液旋蒸至干，加入水和乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，并用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、旋蒸出乙酸乙酯，最后得到为淡黄色粘稠液体的保护基2-His-GlyOCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成；
将上述淡黄色粘稠液体的保护基2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF中，并加入N-甲基吗啉(NMM)，然后在-5～0℃搅拌20～60分钟，得到待用化合物；
将氨基保护赖氨酸Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys，用适量THF溶解，冰盐浴冷却至0～5℃，在该温度下滴加用THF溶解的DCC，HOSu或DCC，HOBt。滴毕后，在该温度下继续搅拌反应2～4小时，然后在0～5℃滴入待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0～5℃继续搅拌反应20～60分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应24～48小时，待反应完毕后，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，再加入乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯萃取2～3次，合并有机层，分别用饱和柠檬酸、饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，洗至pH＝6～7，有机层用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、减压旋蒸出溶剂，最后得到保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌2～6小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0～5℃，通入干燥的NH3至溶液饱和，室温放置3天以上，然后将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到粗品；
(7)、纯化
将上述粗品用无水乙醇溶解，再过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得纯度达95％以上的法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl。
在所述的保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成方法中，在Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His加入预先用DMF溶解的GlyOCH3及NMM后，在反应过程中用TLC监测反应进程，该TLC的薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色。
在所述的保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成方法中，在Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys滴入待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液后，在反应过程中用TLC监测反应进程。
本方案改变了以前从鸡法氏囊组织抽提法氏囊素的状况，因为法氏囊素其在组织内含量甚微，加之法氏囊素组织本身体积较小，很难获得大量纯品，限制了其研究与应用，而通过本发明的合成方法，可以大量合成制取高纯度的法氏囊素三肽，因而使BS的产量得到了提高，生产成本降低，具有十分诱人的前景，而且具有重大的应用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的说明
实施例1：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的34.1克Z-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升温至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌5分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys和Z2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃温度下放置2小时，70℃温度下水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚，有大量结晶析出，2℃温度下放置1.5小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取11.73克Z2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC，用滴液漏斗加入，滴毕，于0℃温度下反应30分钟，然后在0℃温度下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Z2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Z2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用化合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入21.91克Z2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至2℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时，然后在3℃温度下用滴液漏斗滴加待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在5℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时。用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将上述Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0～5℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例2：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9。加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys和Z2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，4℃放置1小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶。得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取11.73克Z2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥14小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Z2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Z2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用化合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入21.91克Z2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.51克HOBt。滴毕后，在该温度下继续搅拌反应4小时。然后在0℃用滴液漏斗滴加待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0～5℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例3：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌6分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-Lys和Boc2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，0℃放置1小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到(His-Gly OCH3·HCl)；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用化合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入19.03克Boc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应2小时，然后在0℃用滴液漏斗滴加待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝7，有机层用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Boc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl：
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将上述Boc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例4：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9。加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时。用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH值1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌6分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys和Z2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，70℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出。4℃放置2小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶。得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)。滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3，及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，达到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入19.03克Boc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至5℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.51克HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应4小时。然后在0℃用滴液漏斗滴加待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在5℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝7，有机层用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Boc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Boc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例5：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的52克Fmoc-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Fmoc2-Lys和Fmoc2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升。20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，0℃放置2小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶。得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取16.81克Fmoc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3，及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)。合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Fmoc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Fmoc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成。
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入31.61克Fmoc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时，然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝7，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天。将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化。
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例6：
(1)、氨基酸保护
a、将13.1克赖氨酸、13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的52克Fmoc-Cl，同时滴加入2mol·l -1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时。用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Fmoc2-Lys和Fmoc2-His；
b、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，75℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，0℃放置2小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取16.81克Fmoc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)。滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3，及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Fmoc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Fmoc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入31.61克Fmoc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.51克HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时，然后在3℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在3℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH值6～7，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例7：
(1)、氨基酸保护
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌5～10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的52克Fmoc-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌6分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Fmoc2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升。20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，0℃放置2小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)。反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)。合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入31.61克Fmoc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应4小时，然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝7，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例8：
(1)、氨基酸保护
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6 mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的52克Fmoc-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时。用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Fmoc2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，4℃放置1小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3，及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入31.61克Fmoc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应4小时，然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应完毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥14小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例9：
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的34.1克Z-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌10分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，70℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，4℃放置1小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴完，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入21.91克Z2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时。然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例10：
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的34.1克Z-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升。20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，0℃放置2小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)。滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)。合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)。合并有机层，并用无水Na2SO4干燥过夜，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体(Boc2-His-Gly OCH3·HCl)加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入21.91克Z2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至2℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.27克HOSu，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时，然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天。将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例11：
(1)、氨基酸保护
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l -1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的52克Fmoc-Cl，同时滴加入2mol·l -1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌8分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Fmoc2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，80℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解。减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，3℃放置1小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的0.87克HOSu和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)，合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入31.61克Fmoc2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至3℃，在该温度下滴加用THF溶解的1.81克DCC，1.51克HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时，然后在4℃用滴液漏斗滴加待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在3℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝6，有机层用无水Na2SO4干燥13小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Fmoc2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-Gly OCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至2℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
实施例12：
a、将13.9克组氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的22克(Boc)2O，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌7分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Boc2-His；
b、将13.1克赖氨酸溶于50毫升2mol·l-1NaOH中，冰盐浴，搅拌下滴加入预先用THF溶解的34.1克Z-Cl，同时滴加入2mol·l-1NaOH使溶液保持pH＝9，加毕，自然升至室温，继续搅拌1小时，用50毫升乙醚洗两次，分去醚层，水相在搅拌下滴加入6mol·l-1盐酸至pH＝1，加入75毫升乙酸乙酯，继续搅拌7分钟，分液，乙酸乙酯层用5％NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z2-Lys；
c、将5.9克甘氨酸溶于50毫升甲醇中，置冰盐浴中冷却至-10℃，缓慢滴加氯化亚砜20毫升，再加入98％浓硫酸10毫升，20℃放置2小时，75℃水浴回流30分钟，使甘氨酸全部溶解，减压蒸馏除去甲醇后加入50毫升乙醚.有大量结晶析出，2℃放置1.5小时，待结晶完全后，过滤，再用25毫升无水乙醇洗涤结晶，得到GlyOCH3。
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
称取10.0克Boc2-His溶解于50毫升无水THF中，用冰盐浴冷至0℃，于搅拌下，分别加入预先用四氢呋喃溶解的1.03克HOBt和6.16克DCC(用滴液漏斗加入)，滴毕，于0℃下反应30分钟，然后在0℃下加入预先用DMF溶解的3.54克GlyOCH3及1.2克NMM，再在0℃下反应30分钟，然后室温反应4小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应结束后，过滤，将滤液旋转蒸发至干，加入水30毫升，乙酸乙酯50毫升，转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取(2×40毫升)。合并有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(2×30毫升)，合并有机层，并用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，旋蒸出乙酸乙酯，得淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成
将上述淡黄色粘稠液体Boc2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止(大约2～4小时)，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将14.4g的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF(10～15ml)中，并加入5.7克N-甲基吗啉(NMM)，然后0℃下搅拌30分钟，得到待用混合物；
在250毫升圆底烧瓶中加入21.91克Z2-Lys，用适量THF溶解(约50毫升)，冰盐浴冷却至0℃，在该温度下滴加用THF溶解的11.81克DCC，1.51克HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应3小时。然后在0℃用滴液漏斗滴加待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，在0℃继续搅拌反应30分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应36小时，用TLC监测反应进程(薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色)，反应毕，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，加入60ml乙酸乙酯，转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层再用乙酸乙酯萃取2次(2×60毫升)，合并有机层，分别用饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤(3×30毫升)，洗至pH＝7，有机层用无水Na2SO4干燥12小时，过滤，减压旋蒸出溶剂，得到Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将Z2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入大约150ml饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌约3小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至4℃，通入干燥的NH3至溶液饱和(约4～6小时)，室温放置3天，将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂得到粗品；
(7)、纯化
将粗品用无水乙醇溶解，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl，纯度达95％以上。
本发明中的分子式均采用国际通用的化学分子式，各分子式代表的化学名为如下所示：
Boc：叔丁氧羰基
(Boc)2O：叔丁氧羰基醚
DCC：二环己基碳二亚胺
DMF：二甲基亚砜
Fmoc：N-芴甲氧羰基
Fmoc-Cl：N-芴甲氧羰基氯
Gly：甘氨酸
GlyOCH3：甘氨酸甲酯
HOSu：N-羟基琥珀酰亚胺
HOBt：N-羟基苯并三唑
HCl：氯化氢
His：组氨酸
L-His：左旋组氨酸
L-Gly：左旋甘氨酸
L-Lys：左旋赖氨酸
Lys：赖氨酸
NMM：N-甲基吗啉
NaCl：氯化钠
NaOH：氢氧化钠
THF：四氢呋喃
TLC：薄层色谱
Z：苄氧羰酰基
Z-Cl：苄氧羰酰基氯
-OCH3：甲氧基

Claims (3)

1、一种法氏囊素三肽合成方法，其特征在于：合成方法按如下步骤进行：氨基酸保护→保护组氨酸-甘氨酸甲酯二肽合成→保护组氨酸-甘氨酸二肽的脱氨基保护→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成→保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的脱氨基保护→法氏囊素三肽粗品的合成→法氏囊素三肽粗品的纯化，其中
(1)氨基酸保护
a、将0.09mol赖氨酸、0.09mol组氨酸溶于NaOH中，置冰盐浴中冷却，搅拌下滴入预先用THF溶解的0.2molZ-Cl或0.2mol Fmoc-Cl或0.1mol(Boc)2O，同时滴入NaOH使溶液保持pH＝8～10，加完后自然升温至室温，继续搅拌0.5～2小时，然后，用乙醚洗2～3次，分去醚层，水相在搅拌下滴入盐酸使pH＝0.5～1.5，再加入乙酸乙酯，继续搅拌5～10分钟后分液，乙酸乙酯层用稀NaCl洗至中性、无水Na2SO4干燥、减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂，最后得到氨基保护赖氨酸Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys和氨基保护组氨酸Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His；
b、将0.08mol甘氨酸溶于甲醇中，置冰盐浴中冷却至-5～-10℃，缓慢滴入氯化亚砜，再加入浓硫酸，15～25℃温度下放置1.5～4小时，再在70～80℃水浴回流30～50分钟，然后，减压蒸馏除去甲醇后加入乙醚，0～4℃温度下放置1～2小时，待结晶完全后，过滤，再用无水乙醇洗涤结晶，最后得到GlyOCH3；
(2)、保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成
取0.028molBoc2-His或0.028mol Fmoc2-His或0.028mol Z2-His溶解于四氢呋喃中，用冰盐浴冷至-5～0℃，在搅拌过程中分别滴入预先用四氢呋喃溶解的0.0076molHOSu或0.0076mol HOBt和0.03molDCC，滴完后在-5～0℃温度下反应20～60分钟，然后在-5～0℃温度下加入预先用DMF溶解的0.04molGlyOCH3及0.012molNMM，再在-5～0℃温度下反应20～60分钟，然后室温反应2～6小时，反应结束后，过滤，将滤液旋蒸至干，加入水和乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗分液，水相用适量的乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯有机层，分别用蒸馏水，饱和柠檬酸，饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，并用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、旋蒸出乙酸乙酯，最后得到为淡黄色粘稠液体的保护基2-His-Gly OCH3·HCl；
(3)、脱氨基保护的组氨酸-甘氨酸二肽的合成；
将上述淡黄色粘稠液体的保护基2-His-Gly OCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，直至不再析出大量白色沉淀为止，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到His-Gly OCH3·HCl；
(4)、保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成
将0.055mol的His-Gly OCH3·HCl溶于适量的DMF中，并加入0.056molNMM，然后在-5～0℃温度下搅拌20～60分钟，得到待用化合物；
将氨基保护赖氨酸0.055molBoc2-Lys或0.054mol Fmoc2-Lys或0.053molZ2-Lys，用适量THF溶解，冰盐浴冷却至0～5℃，在该温度下滴加用THF溶解的0.057molDCC，0.011molHOSu或0.011mol HOBt，滴毕后，在该温度下继续搅拌反应2～4小时，然后滴入上述待用化合物和N-甲基吗啉DMF溶液，滴毕，继续搅拌反应20～60分钟，然后升温至室温，继续搅拌反应24～48小时，待反应完毕后，将反应液过滤，滤液旋蒸至干，再加入乙酸乙酯，然后转移至分液漏斗，加入蒸馏水，分液，水层用乙酸乙酯萃取2～3次，合并有机层，分别用饱和柠檬酸、饱和NaHCO3液和饱和NaCl液洗涤，洗至pH＝6～7，有机层用无水Na2SO4干燥8～16小时、过滤、减压旋蒸出溶剂，最后得到保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(5)、脱氨基保护的赖氨酸-组氨酸-甘氨酸三肽的合成
将保护基2-Lys-His-GlyOCH3·HCl加入饱和的无水HCl-乙酸乙酯溶液，室温搅拌2～6小时，反应完毕后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得到Lys-His-GlyOCH3·HCl；
(6)、法氏囊素三肽粗品的合成
将Lys-His-Gly OCH3·HCl用无水乙醇溶解，用冰盐浴冷却至0～5℃，通入干燥的NH3至溶液饱和，室温放置3天以上，然后将溶液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得到粗品；
(7)、纯化
将上述粗品用无水乙醇溶解，再过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，最后得纯度达95％以上的法氏囊素三肽纯品Lys-His-Gly-NH2·HCl。
2、根据权利要求1所述的一种法氏囊素三肽合成方法，其特征在于：在所述的保护组氨酸-甘氨酸二肽的合成方法中，在Boc2-His或Fmoc2-His或Z2-His加入预先用DMF溶解的GlyOCH3及NMM后，在反应过程中用TLC监测反应进程，该TLC的薄层板为市售硅胶G板，展开剂为石油醚∶丙酮＝4∶1，2％茚三酮乙醇溶液显色。
3、根据权利要求1所述的一种法氏囊素三肽合成方法，其特征在于：在所述的保护赖氨酸-组氨酸-甘氨酸的合成方法中，在Boc2-Lys或Fmoc2-Lys或Z2-Lys滴入待用的化合物和N-甲基吗啉DMF溶液后，在反应过程中用TLC监测反应进程。
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