CH624124A5 - - Google Patents
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- CH624124A5 CH624124A5 CH769177A CH769177A CH624124A5 CH 624124 A5 CH624124 A5 CH 624124A5 CH 769177 A CH769177 A CH 769177A CH 769177 A CH769177 A CH 769177A CH 624124 A5 CH624124 A5 CH 624124A5
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Description
La présente invention se rapporte à un procédé pour la préparation de nouveau dérivés du muramyldipeptide. Plus particulièrement, cette invention concerne des composés représentés par la formule générale (I),
S
ìx/i
HÔV
I
- nhcoch,
10
CHjCHCO-Q
dans laquelle Y représente un groupe acyle supérieur ayant un nombre total d'atomes de carbone de 28 à 90 et ayant au moins une longue chaîne alkyle liée en position a, et Q repré-îs sente un groupe L-alanyl-D-isoglutamine, un groupe glycyl-D-isoglutamine ou un groupe L-séryl-D-isoglutamine. Cette invention se rapporte également aux sels de ces composés.
Les composés de formule (I) ont une activité immuno-adjuvante et une activité antitumeur puissantes sur des sys-20 tèmes syngéniques de tumeur de la souris tels que MH134 hepatoma dans C3H/He et melanoma B16 dans C57BL/6J et étant applicables à des agents pour l'immunothérapie du cancer chez les êtres humains et chez les animaux.
Jusqu'à maintenant, il a été révélé que la paroi cellulaire 25 bactérienne ou la cire D contenant un mucopeptide et un composant peptide gluco-lipide de la paroi cellulaire bactérienne ont des activités immunoadjuvantes. Comme résultat d'études approfondies sur ces substances connues, il a également été révélé que l'unité minimale responsable pour la 30 présence d'une activité adjuvante est la N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoghitamine (ci-après nomèe «muramyldipeptide»).
Le muramyldipeptide a montré une activité immuno-adju-vante telle qu'une stimulation des niveaux augmentés d'anticorps du sérum ainsi qu'une induction de l'hypersensibilité du 35 type retardé à un antigène protéine ovalmine. Il a en outre été rapporté par les inventeurs que le 6-O-stéaroyl-muramyldi-peptide a des propriétés immunologiques presque similaires à celles du muramyldipeptide. Ces deux adjuvants synthétiques, toutefois, n'ont présenté aucune activité adjuvante dans la 40 production de cellules à effet cytotoxique de cellule intermédiaire (cell-mediated cytotoxic effector cells) sur la rate de souris C57BL/6J par l'immunisation avec un antigène allogé-nique, la cellule mastocytoma P815-X2, in vivo. L'activité cytotoxique de cellule intermédiaire se rapporte aux réactions 45 d'immunité cellulaire et à l'activité anti-tumeur. Il a également été démontré que ces deux composés n'ont présenté aucune activité anti-tumeur sur les systèmes syngéniques de tumeur de souris tels que MH134 hepatoma dans C3H/He et melanoma B16 dans C57BL/6J.
so En conséquence, un but de cette invention était de fournir des composés ayant une activité adjuvante dans l'induction de l'hypersensibilité du type retardé et dans la production de cellules à effet cytotoxique de cellule intermédiaire sur la rate de souris C57BL/6J par l'immunisation avec antigène allogé-55 nique, cellule mastocytoma P815-X2 in vivo, et ayant en outre une activité anti-tumeur sur des systèmes syngéniques de tumeur de souris tels que MH134 hepatoma dans C3H/He et melanoma B16 dans C57BL/6J.
Un autre but de cette invention était de fournir un procédé 60 pour la préparation de tels dérivés et de leurs sels.
L'objet de cette invention consiste donc en un procédé pour la préparation de dérivés du muramyldipeptide représenté par la formule générale (I), et des sels de ceux-ci. Ce procédé est illustré par le schéma réactionnel suivant:
3
624 124
cii20i1
,/4-yï
oz nhcoch.
chj-cilcooli ch2oh
| oz nhcocii.
chjcmcoox
(II)
(III)
cii2ots nhcocii.
cil3cllcoox ch2oy oz nhcoch.
chjchcoox
(iv)
(v)
cii2'oy
0
sQ
"i oz nhcoch.
ch3chcooh
(vi)
ch2oy nhcoch.
ch3chco-q'
(vii)
y-och h-oh nhcoch,
Dans le schéma réactionnel ci-dessus, les symboles génériques qui sont utilisés ont la signification suivante:
Z peut être un groupe benzyle, pouvant avoir un atome d'halogène, un groupe nitro ou un groupe alkoxy inférieur,
X peut être un groupe protecteur pour un groupe carboxyle 6s tel qu'un groupe butyle tertiaire ou un groupe diphénylmé-thyle,
Y peut être un groupe mycoloyle et un groupe acyle supérieur synthétique ayant un nombre total d'atomes de carbone de 28 à 90 et ayant au moins une longue chaîne alkyle liée en position a,
Q peut être un groupe L-alanyl-D-isoglutamine, un groupe glycyl-D-isoglutamine ou un groupe L-séryl-isoglutamine, et Q' peut être un groupe protecteur de la L-alanyl-D-isoglutamine, un groupe protecteur de la glycyl-D-isoglutamine ou un groupe protecteur de la L-séryl-D-isoglutamine.
624124
4
Les composés de formule (I) peuvent être préparés en introduisant un groupe mycoloyle sur le groupe hydroxy en C-6 du benzyl-N-acétylmuramide, puis en couplant le dérivé mycoloyle avec un ester benzylique du dipeptide, et en éliminant les groupes de protection par hydrogénolyse.
La technique utilisée est décrite ci-après plus en détail.
Le groupe carboxyle du produit de départ, à savoir le N-acétyl-a-muramide de benzyle (II) est protégé par un groupe protecteur approprié tel qu'un groupe diphénylméthyle. Cette protection du groupe carboxyle dans le composé du formule (II) n'est pas essentielle, mais est destinée à empêcher une réaction secondaire indésirée dans les étapes suivantes. Puis, le groupe hydroxy en C-6 du composé de formule (III), si désiré, est activé par un traitement avec du chlorure de tosyle ou du chlorure de méthane-sulfonyle dans un solvant basique tel que la pyridine.
Ensuite, le composé de formule (IV) est mis en réaction avec un mycolate de métal alcalin dans un solvant polaire approprié tel que le diméthylformamide ou le diméthylsulf-oxyde à une température comprise entre environ 100 et 140°C. La réaction peut se produire facilement lorsqu'elle est réalisée dans un solvent non polaire tel que le benzène en présence d'une quantité catalytique d'un composé polyéther cyclique tel que 18-crown-6.
Le groupe protecteur du groupe carboxyle du composé de formule (V) ainsi obtenu est éliminé, par exemple, avec de l'acide trifluoroacétique, et le produit de formule (VI) obtenu est mis en réaction avec un noyau dipeptide tel que l'ester benzylique de la L-alanyl-D-isoglutamine en présence d'un agent de condensation approprié tel que le dicyclohexyl-carbo-diimide ou le N-hydroxysuccinimide.
Cette réaction est généralement effectuée sous agitation dans un solvant non polaire approprié tel que l'acétate d'éthyle, le benzène, le dioxanne ou le tétrahydrofuranne, à température ambiante. Finalement, les groupes protecteurs des composés de formule (VII) sont éliminés afin d'obtenir le composé de formule (I) au moyen d'une technique convention-composé de formule (I) au moyen d'une technique convention- • nelle, par exemple, par hydrogénation en présence de noir de palladium ou de platine, ou par traitement avec une solution d'acide bromhydrique dans l'acide acétique.
Le composé de formule (I) peut également être préparé par réaction du composé de formule (II) avec un noyau dipeptide, puis par réaction du composé obtenu avec un acide mycolique ou un acide gras synthétique.
Un des produits de départ, l'acide mycolique, peut être obtenu par une méthode conventionnelle décrite ci-après.
Ainsi, l'acide mycolique peut être obtenu par hydrolyse de bacilles complets, d'une préparation de cire D(peptideglycoli-pide) ou d'une préparation de lipides étroitement liés de différentes sortes de bactéries, et en purifiant les produits hydro-Iysés par Chromatographie sur aluminium actif ou silica gel. L'acide mycolique est défini de façon fondamentale par Asseli-neau comme étant un acide gras supérieur ayant à la fois une longue chaîne alkyle liée en position a et un groupe hydroxy en position ß (Asselineau J; The bacterial Lipids Hermann Paris 1966). L'acide mycolique utilisé dans cette invention, toutefois, peut être un acide gras supérieur simple ou un mélange d'acides gras supérieurs ayant un nombre total d'atomes de carbone de 28 à 90, la position a étant substituée avec une longue chaîne alkyle et la position ß étant substituée avec un groupe hydroxy.
La préparation ainsi obtenue est généralement un mélange de diverses sortes d'acides mycoliques et, si nécessaire, un acide mycolique simple peut être isolé par une purification subséquente. Cependant, du point de vue de l'activité biologique, la purification complète jusqu'à un acide mycolique simple n'est pas essentielle, et un tel mélange de différentes sortes d'acides mycoliques est suffisant pour l'utilisation dans le procédé selon l'invention.
D'une façon générale, l'une des classes supérieures d'acide mycolique, c'est-à-dire l'acide mycomycolique, peut être obtenu à partir de mycobactérium tuberculosis, M. phlei, M. smegmatis, de type humain, de type bovin ou de type «avian», qui sont des acides gras supérieurs ayant un nombre total d'atomes de carbone d'environ 70 à 90 et ayant au moins à la fois une longue chaîne ramifiée d'un groupe alkyle (C22-C24) en position a et un groupe hydroxyde en position ß.
D'autre part, comme classe intermédiaire d'acide mycolique, les acides nocardomycolique, corynomycolique ou arthrobac-termycolique et les similaires peuvent être mentionnés, qui sont des acides gras moyens ayant un nombre total d'atomes de carbone d'environ 28 à 70 et ayant au moins à la fois une longue chaîne ramifiée d'un groupe alkyle (Cb-Ció) en position a et un groupe hydroxy en position ß.
Comme bactéries du genre Nocardia pour obtenir l'acide nocardomycolique, les Nocardia astéroïdes, N. rubra, N. brasi-liensis ou N. Polychromogenes et les similaires, peuvent être utilisés.
Comme bactéries du genre Corynobactérium et du genre Arthrobacter pour obtenir l'acide Corynomycolique, on peut utiliser les Coryno diphtheriae, C. pseudotuberculosis, C. xerosis, C. renale, Arthrobacter simplex, A. flavescens, et les similaires. Les composés de formule (I) obtenus par le procédé selon l'invention ont une activité adjuvante dans l'induction d'hypersensibilité du type retardée analogue à celle du muramyldipeptide et présentent une activité cytotoxique de cellule intermédiare et une activité antitumeur qui n'a pas été observée dans le muramyldipeptide. Par conséquent, les composés de formule (I) peuvent être envisagés pour des agents immunothérapeutiques du cancer des êtres humains et des animaux, comme attendu avec la paroi cellulaire ou le squelette de la paroi cellulaire du BCG et les autres mycobactéria ou nocardia. En outre, les composés de formule (I) obtenus par le procédé selon l'invention présentent les caractéristiques suivantes.
(a) Ils ont une strucutre simple et définie en comparaison avec la paroi cellulaire bactérienne ou le squelette de celle-ci, et peuvent être par conséquent préparés de façon synthétique sous la forme d'un composé uniforme d'une pureté élevée, comme cela est possible avec les produits chimiques.
(b) Etant donné que les composés de formule (I) peuvent être suspendus dans un tampon salin phosphaté, la suspension peut être administrée de façon intraveineuse sans effet secondaire important, alors que l'injection intradermique ou intramusculaire de suspension huile dans l'eau de squelette de paroi cellulaire de bactéries, à partir desquelles une suspension uniforme ne peut pas être préparée, peut donner des effets secondaires tels qu'une réaction des tissus importante inévitable.
(c) Les composés de formule (I) ont une possibilité inférieure d'avoir des possibilités antigéniques à celles des substances immunoadjuvantes conventionnelles, comme admis dans l'adjuvant complet de Freund.
Afin de démontrer la supériorité des composés de formule (I) les propriétés pharmacologiques de plusieurs composés représentatifs de ceux-ci ont été comparés avec celles du muramyldipeptide et du muramyldipeptide de stéaroyle qui sont structurellement similaires.
Les résultats ont été résumés dans les tableaux suivants.
Dans les tableaux 1 à 3, les composés de formule (I) sont abrégés comme suit:
6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-noglut-amine obtenu dans l'exemple 1 = myco-L-al-D-isoGln.
s
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
624124
6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglut-amine obtenu dans l'exemple 2 = nocardo-L-Ala-D-isoGln. 6-O-corynomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglut-amine obtenu dans l'exemple 3 = coryno-L-Ala-D-isoGIn. 6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-glycyl-D-isoglut-amine obtenu dans l'exemple 4 = myco-Gly-D-isoGln. 6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-ser-D-isoglutamine obtenu dans l'exemple 5 = myco-L-Ser-D-isoGln.
Tableau 1
Activité adjuvante du composé (I) sur l'induction de l'hypersensibilité de type retardée vis-à-vis de AB A-Tyr.
Tableau / (suite)
Produit
Dose
Réaction de la peau avec
(|ig/souris)
100 [ig de ABA-BaA 15
à 24 hrs.
(mm ± SE)
Myco-L-Ala-D-isoGln
500
20,9±0,8
50
22,8±0,6
Muramyldipeptide
100
22,5 ±0,5 2#
Stéaroyl-muramyldipeptide
100
17,2±1,2
Contrôle (ABA-Tyr seul)
0
0
Nocardo-L-Ala-D-isoGln
400
23,0±1,5
40
24,5±0,7
Coryno-L-Ala-D-isoGln
300
22,0+0,6 25
30
21,2+1,9
Muramyldipeptide
100
24,0±0,7
Contrôle (ABA-Tyr seul)
0
0
Myco-L-Ser-D-isoGIn
500
15,0±0,5
50
18,0±0,6
Myco-L-Ala-D-isoGln
500
17,1±0,5
50
12,8+1,6
Muramyldipeptide
100
17,5+1,2
Contrôle (ABA-Tyr seul)
0
0
Myco-Gly-D-isoGln
500
15,3±0,6
50
2,7 ±0,7
Muramyldipeptide
100
22,8 ±1,5
Contrôle (ABA-Tyr seul)
0
0
Des porcs «Hartley guinea» ont été immunisés avec 50|ig d'acide N-acétyl-L-tyrosine-3-azobenzène-4'-arsonique (ABA-Tyr) dans un adjuvant de Freund incomplet avec un produit test dissous ou suspendu dans un phosphate salin tamponné. Des groupes de contrôle ont été immunisés avec du ABA-Tyr seul dans un adjuvant de Freund incomplet.
Deux semaines plus tard un test sur la peau avec 100 [xg de AB A-bactérien a-amylose (ABA-BaA) dissous dans une solution saline a été effectué et la réaction de la peau a été
test.
Tableau 2
Activité adjuvante sur l'induction de cellules cytotoxiques intermédiaires dans la rate de souris allogéniques (C57BL/6J).
Produit
Dose
(|ig/souris)
Forme de l'administration
Lyse spécifique de la cible cellu (%)
Myco-L-Ala-iso-Gln
100
Suspension
69,7
10
tamponné de
3,9
Muramyl dipeptide
100
phosphate salin
2,2
10
2,0
Stéaroyl-muramyldipeptide
100
4,2
Contrôle
100
2,5
Nocardo-L-Ala-D-isoGln
100
76,9±3,2
10
21,0±7,6
Coryno-L-Ala-D-isoGln
100
28,8± 14,4
10
16,1±5,0
Myco-Gly-isoGln
100
77,0±4,0
10
39,3±3,2
Myco-L-Ser-D-isoGln
100
30,4±14,0
10
21,8±15,2
Muramyldipeptide
100
11,1±0,5
Contrôle
100
10,3±0,7
Trois ou quatre souris C57BL/6J dans chaque groupe ont été immunisées de façon intrapéritonéale avec un mélange de cellule mastocytoma P815-X2 (1X104) et un produit test dissous ou suspendu dans un phosphate salin tamponné. Le groupe de contrôle a été immunisé avec des cellules de mastocytoma P815-X2 seules.
Onze jours après, la cytótoxicité «cell-mediated» a été déterminée par la méthode Brunner's (Immunology 18,501-515, 1970). Comme montré dans le tableau 2, le composé de ss formule (I) a présenté une activité adjuvante puissante chez les souris qui ont été immunisées avec des cellules mastocytoma P815-X2.
Tableau 3
Activité antitumeur sur la suppression de MH-134 hepatoma chez les souris C3H/He.
Produit Dose Activité antitumeur
(Hg) A/B*
Croissance de la tumeur
Myco-L-Ala-D-isoGln 100 10/10
Nocardo-L-Ala-D-isoGln 20 5/10
Coryno-L-Ala-D-isoGln 20 6/10
624124
6
Tableau 3 (suite)
Activité antitumeur sur ia suppression de MH-134 hepatoma chez les souris C3H/He.
Produit
Dose (t'g)
Activité antitumeur A/B*
Croissance de la tumeur
Myco-L-Ser-isoGln
100
10/10
Myco-Gly-D-isoGln
100
7/10
Muramyldipeptide
20
0/10
100
0/10
Stéaroyl-muramyldipeptide
20
0/10
100
0/10
Contrôle (phosphate
salin tamponné seul)
0/10
NB. A = nombre de souris dont la croissance de la tumeur a été complètement supprimée B = nombre de souris testées
L'activité antitumeur des composés de formule (I) a été examinée en utilisant hepatoma MH134 chez des souris syngéniques C3H/He. Un mélange de cellules de tumeur de MH134 (1X105) et des produits (100 ou 20 [xg) ont été dissous ou suspendu dans un phosphate salin tamponné et transplanté de façon intradermique chez des souris C3H/He, et la croissance de la tumeur a été mesurée.
Comme montré dans le tableau 3, la solution ou suspension saline de phosphate tamponné des composés de formule (I) obtenus par le procédé selon l'invention ont supprimé de façon efficace la croissance de la tumeur chez des souris syngéniques en comparaison avec le muramyldipeptide et le 6-O-stéaroyl-muramyldipeptide.
Préparation de différentes sortes d'acide mycolique (produit de départ pour la synthèse des composés de formule [I]).
1. De la cire D, la totalité des bacilles, la paroi cellulaire et le squelette de la paroi cellulaire de la souche de mycobacté-rium tuberculosis Aoyama B ont été hydrolisés avec un alcali et soumis à ime Chromatographie sur colonne d'alumine activée afin d'obtenir un acide mycolique.
A 5 ml de chloroforme contenant à l'état dissous 0,50 g d'acide mycolique a été ajouté une goutte d'une solution de phénolphtaléine 1 % et le mélange a été titré avec une solution méthanolique de KOH 0,2 N, qui a été requise en une quantité de 2,405 ml. Il ressort de ceci que le poids moléculaire moyen de l'acide mycolique sous la forme d'un acide monobasique était de 1186.
Après concentration sous pression réduite, du méthanol a été ajouté au résidu ci-dessus et les substances insolubles ont été éliminées afin d'obtenir 0,51 g de mycolate de potassium, ayant un point de fusion de 71 à 83°C, et avec un rendement de 98%.
Les résultats de l'analyse élémentaire de l'acide mycolique étaient les suivants:
(1)C 81,57% H 13,48%
(2) C 81,33% H 13,62%
moyenne C 81,45% H 13,55%
A partir du poids moléculaire moyen obtenu par filtration et de celui obtenu par analyse élémentaire, la formule moléculaire moyenne de l'acide mycolique a été déterminée comme étant C8oHi5803,5 = 1176.
2. Un ensemble de bacilles do Nocardia stéroides 131 a été hydrolysé avec un alkali, estérifié (estérification méthylique), purifié par Chromatographie sur colonne de silica gel, puis hydrolysé afin d'obtenir un acide mycolique moyen.
Un mélange de 1,24 g de l'acide mycolique moyen (acide nocardo-mycolique) et 2 ml d'une solution méthanolique de KOH 3N ont été chauffés au reflux pendant 2,5 heures. Après concentration sous pression réduite, le résidu a été dissous dans 100 ml de diéthyl-éther et lavé avec une solution d'acide chlorhydrique aqueux IN puis avec de l'eau. La solution a été séchée sur du MgSO déhydraté puis concentrée sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu a été lavé avec de l'éthanol refroidi à la glace et séché sur du pentoxyde de phosphore sous pression réduite afin d'obtenir 0,89 g (rendement = 73%) d'un produit cireux.
Analyse élémentaire: C = 79,69%, H = 12,76%
A 10 ml de chloroforme contenant à l'état dissous 870 ml de l'acide nocardomycolique ainsi obtenu a été ajoutée une goutte d'une solution de phénolphtaléine 1 %, et le mélange a été titré avec une solution méthanolique de KOH 0,5 N (f = 0,92) qui a été requise dans une quantité de 2,465 ml. A partir de ceci, le poids moléculaire moyen de l'acide nocardomycolique sous la forme d'un acide monobasique a été calculé comme étant de
767.
La solution ci-dessus a été concentrée sous pression réduite et dissoute dans du diéthyl-éther, puis filtrée par succion. Ensuite, le filtrat a été concentré sous pression réduite afin d'obtenir 0,88 g (rendement = 98%) d'un produit cireux.
A partir de l'analyse élémentaire et du poids moléculaire moyen obtenu ci-dessus, la formule moléculaire de l'acide nocarbonycolique a été déterminée comme étant CsiH9703,6 =
768.
3. Un ensemble de bacilles de Corynobactérium diphteriae PW8 a été traité de la même manière que les Nocardia astéroïdes 131 afin d'obtenir un acide mycolique moyen.
Un mélange de 0,53 g de l'ester méthylique de l'acide mycolique moyen (acide Corynomycolique) et 2 ml d'une solution méthanolique KOH 3N ont été chauffés au reflux pendant 2,5 heures. Après concentration sous pression réduite, le résidu a été dissous dans 15 ml de diéthyl-éther, lavé avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique IN puis avec de l'eau. La solution a été séchée ensuite et concentrée sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu a été dissous dans une petite quantité de méthanol. Après refroidissement, un produit cireux a précipité, et a été éliminé par décantation. Ensuite, ce produit cireux a été lavé avec du méthanol froid et séché sous pression réduite, afin d'obtenir 0,41 g (rendement = 80%) de produits cireux.
Analyse élémentaire: C = 76,48%, H = 12,69%
A 5 ml de chloroforme contenant a l'état dissous 385 mg d'acide corynomycolique a été ajouté une goutte de phénolphtaléine, et le mélange a été titré avec une solution de méthanolique de KOH de 0,50 N (f = 1,00) qui a été requise en une quantité de 1,47 ml. A partir de ceci, le poids moléculaire moyen de l'acide corynomycolyque sous forme d'un acide monobasique a été calculé comme étant de 524. En outre, la solution ci-dessus a été concentrée sous pression réduite et dissoute dans du diéthyl-éther, puis filtrée par succion.
Enuitre, le filtrat a été concentré sous pression réduite afin d'obtenir 412 mg de produits cireux, avec un rendement de 99%.
A partir de l'analyse élémentaire et du poids moléculaire moyen obtenu ci-dessus, la formule moléculaire de l'acide corynomycolique a été déterminée comme étant C33H6603,s = 519.
Exemple 1
A 1,0 g de benzyl-N-acétyl-a-muramide dissous dans 10 ml de tétrahydrofurane a été ajouté 0,8 g de diphényldiazomé-thane. Le mélange a été agité à température ambiante pendant 30 minutes. Et, après élimination du solvant, le résidu a été cristallisé par trituration avec de l'hexane.
Une recristallisation a été effectuée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'hexane, afin de donner 1,3 g de l'ester diphé-
s
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
7
624124
nylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-N-acétylmuramique. Les cristaux ont été à nouveau recristallisés dans le même solvant pour donner des cristaux purs ayant un point de fusion de 155 à 156°C; [a]è2 + 122° (c 1,0, CHCb)
s
Analyse élémentaire comme C31H35O8N:
C H N
Calculé: 67,74% 6,42% 2,55% w
Trouvé: 67,62% 6,50% 2,52%
Dans 3 ml de pyridine a été dissous 0,3 g de l'ester diphé-nylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-N-acétylmuramique. A cette solution, ont été ajoutés 1,2 g de chlorure de tosyle, et la 15 solution a été agitée pendant 1 heure. La solution a été versée dans de l'eau et extraite avec de l'acétate d'éthyle, et la solution d'acétate d'éthyle a été lavée successivement avec une solution d'hydroxyde de sodium 0,3 N, avec de l'eau, avec une solution d'acide chlorhydrique IN et avec de l'eau, puis séchée 20 sur du sulfate de magnésium. Après distillation du solvant sous vide, le résidu a été purifié par Chromatographie sur colonne de silica gel (10 g).
L'élution avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (5:1) a donné une fraction contenant 0,34 g d'ester diphényl- 25 méthylique de l'acide l-a-O-benzyl-6-tosyl-N-acétylmura-mique pur ayant un point de fusion de 68-73°C;
[a]*2 + 84,4° (c0,5, CHCb).
.30
Analyse élémentaire pour C 38H41O10NS:
C H N S
Calculé: 64,85% 5,87% 1,99% 4,56% 35
Trouvé: 64,68% 5,92% 1,93% 4,31%
Du mycomycolate de potassium (0,38 g) a été ajouté à une solution de 0,33 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1- 40 a-O-benzyl-6-O-tosyl-N-acétylmuramique et 0,02 g de 18-crown-6 dans 10 ml de benzène et le mélange a été chauffé au reflux pendant 3 heures.
Après élimination du solvant sous vide, le résidu a été lavé avec de l'acétone, et les produits insolubles ont été soumis à 45 une Chromatographie sur colonne de silicagel.
L'éluat avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (10:1 en volume) a été traité avec une solution éthérée du diazo-méthane à température ambiante. L'estérificatin méthylique de l'excès d'acide de mycolique a facilité la purification chromato- so graphique du composé désiré. Après élimination du solvant sous vide, le résidu a été à nouveau soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel. Après élution du mycolate de méthyle avec du benzène, l'éluat avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (10:1) a été recueilli. Après élimination ss du solvant, le résidu a été recristallisé dans de l'acétone pour donner 0,32 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétylmycomuranique ayant un point de fusion de 54-57°C.
«0
[a]*2 +32,6 (C = 0,5, CHCb):
Analyse élémentaire comme Ci nHimOio.sN:
C H N 6s
Calculé: 78,07% 11,27% 0,82%
Trouvé: 78,34% 11,48% 0,85%
Un mélange de 0,3 g d'ester diphénylméthylique de l'acide l-a-O-benzyl-6-O-mycomycoIoyl-N-acétylmuramique et 1 ml anisole ont été dissous dans 20 ml de chloroforme.
A la solution refroidie à la glace, ont été ajouté 3"ml d'acide trifluoroacétique. Après agitation pendant 30 minutes, de l'acétone a été ajouté au mélange réactionnel et le solvant a été éliminé sous vide. Puis le résidu a été lavé avec de l'éthanol et dissous dans 10 ml de tétrahydrofurane.
A cette solution, ont été ajoutés 75 mg de N-hydroxysucci-nimide, 65 mg de chlorhydrate de l'ester benzylique la L-alanyl-D-isoglutamine, 24 g de triéthylamine dissous dans 0,2 ml de tétrahydrofurane et 37 mg de dicyclohéxylcarbodii-mide, sous agitation dans un bain de glace. L'agitation a été poursuivie pendant une nuit, la température du mélange atteignant la température ambiante.
Le chlorhydrate de triéthylamine et la N,N'-di-cyclohexy-lurée formée ont été éliminés par filtration. Après évaporation du solvant sous vide, des produits insolubles dans l'éthanol ont été éliminés, et le résidu a été soumis à une Chromatographie sur silica-gel.
L'éluat avec un mélange de benzène et d'acétone (3:1) a été recueilli et le solvant a été évaporé.
La résidu a été recristallisé dans un mélange de benzène et de méthanol pour donner 0,124 g d'ester benzylique de la 1-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point du fusion de 171-172°C. [ajg2 + 30,2 (c 0,5, CHCb)
Analyse élémentaire comme Cn3H200Ni3,5 N4:
C H N
Calculé: 74,13% 11,01% 3,06%
Trouvé: 73,63% 11,05% 3,18%
L'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (76 mg) a été dissous dans 20 ml de tétrahydrofurane et hydrogénolysé en présence de noir de palladium à température ambiante. Après la réaction, le solvant a été éliminé sous vide. Le résidu a été recristallisé dans un mélange d'éther et d'éthanol pour donner 64 ml de 6-O-mycomycoIoyl-N-acétyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 137-160°C.
[ajg2 +24,3° (après 9 minutes c 0,4, THF-H2O 50:1): + 25,8 (après 20 heures c 0,4, THF-H2O 50:1)
Analyse élémentaire comme C99H188N13.5N4 -H20:
C H N
Calculé: 71,26% 11,48% 3,36%
Trouvé: 71,08% 11,40% 3,26%
Exemple 2
0,48 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-N-acétylmuramique et 0,03 g de 18-crown-6 ont été ajouté à 15 ml de benzène. A cette solution a été ajouté 0,31 g de corynomycolate de potassium, et la solution a été chauffée au reflux pendant 3 heures.
Après refroidissement, le mélange réactionnel a été lavé avec de l'acide chlorhydrique 0,1 N et de l'eau, puis séché. Après évaporation du solvant sous vide, le résidu a été soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel. L'éluat avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (5:1) a été concentré pour donner 0,30 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide l-a-O-benzyl-6-O-corynomycoloyl-N-acétylmura-mique.
624124
8
[a]j* +58,4° (c, 1,0, CHCb)
Analyse élémentaire comme C64H99O10.5N:
C H N
Calculé: 73,17% 9,50% 1,33%
Trouvé: 72,85% 9,27% 1,40%
0,22 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-6-O-corynomycoloyl-N-acéthylmuramique et 0,1 ml d'anisole ont été dissous dans 10 ml de dichlorométhane.
A la solution refroidie à la glace, ont été ajoutés 1,6 ml d'acide trifluoroacetique. Après agitation pendant 30 minutes, le solvant a été éliminé sous vide, et le résidu a été soumis à une Chromatographie sur colonne de siliga-gel. Après élution de l'anisole et du diphénylméthanol obtenus comme sous-produits avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (5:1), l'éluat avec un mélange de chloroforme et de méthanol (5:1) a été recueilli et le solvant a été éliminé sous vide pour obtenir de l'acide l-a-O-benzyl-6-O-corynomycoloyl-N-acétylmura-mique. A ce produit ont été ajoutés 89 mg du chlorhydrate de l'ester benzylique de la L-alanyl-D-isoglutamine et 0,036 ml de triéthylamine dans 5 ml de tétrahydrofurane. Le mélange a été refroidi dans un bain glace-sel ( — 15°C), et 42 mg de N-hydroxysuccinimide et 46 mg de dicyclohexylcarbodiimide ont été ajoutés. Le mélange a été agité pendant 1 heure à la même température et l'agitation a été poursuivie pendant une nuit à température ambiante.
Le chlorhydrate de triéthylamine et la N,N'-dicyclohexy-lurée formés ont été éliminés par filtration. Après évaporation du solvant, le résidu a été lavé avec un mélange de méthanol et d'eau (1:1) et avec de l'éther.
Une recristallisation dans un mélange de méthanol et d'eau a donné 0,13 g de l'ester benzylique de la lcc-O-benzyl-6-O-corynomycoIoyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 172—174°C.
[a]J,4 +53,7°C (c 1,0, CHCb)
Analyse élémentaire comme C66H10SO13.5N4:
C H N
Calculé: 67,54% 9,28% 4,77%
Trouvé: 67,50% 9,10% 5,01%
105 mg de l'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-6-O-corynomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ont été dissous dans 8 ml de tétrahydrofurane, et la solution a été soumise a une hydrogénolyse en présence du noir de palladium, à 28°C.
Après la réaction, le solvant a été éliminé sous vide, et le résidu a été recristallisé dans un mélange de méthanol, d'éther et d'acétone afin d'obtenir 59 mg de la 6-O-corynomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 152 à 155°C.
[a]y +31,9°C(c0,89, tétrahydrofurane-H20= 50:1,
après 46 heures).
Analyse élémentaire comme C52H960i3,5Ni • 2,5H20:
C H N
Calculé: 60,14% 9,80% 5,40%
Trouvé: 59,81% 9,60% 5,29%
Exemple 3
A partir de 0,35 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-N-acétylmuramique et 0,31 g de nocardomyco-late de potassium, 0,34 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide l-a-O-benzyl-6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmura-mique a été obtenu de la même manière que dans l'exemple 2.
[aß7 +46,7° (c 1,0, CHCb):
Analyse élémentaire comme C82H130O10.6N1:
C H N
Calculé: 75,79% 10,08% 1,08%
Trouvé: 75,38% 10,15% 1,03%
Après traitement de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramique (0,24 g) avec de l'acide trifluoroacétique, l'acide carboxylique libre a été couplé avec 75 mg du chlorhydrate de l'ester benzylique de la L-alanyl-D-isoglutamine de la même manière que dans l'exemple 2, afin d'obtenir 0,14 g de l'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 164-167°C.
[a]*7 +44,7 (c, 1,0, CHCb)
Analyse élémentaire comme C84H139O13.0N4: C H N
Calculé: 70,91% 9,85% 3,94%
Trouvé: 70,99% 9,92% 3,92%
Le composé ci-dessus (84 mg) a été soumis à une hydrogénolyse de la même manière que dans l'exemple 2, afin d'obtenir 51 mg de la 6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 154-157°C (avec décomposition).
[a]^° +30,0° (c 1,03, tétrahydrofurane-HîO = 50:1 après 24 heures)
Analyse élémentaire comme C70H127O13.6N 4 • 1,5H20:
C H N
Calculé: 66,22% 10,32% 4,41%
Trouvé: 66,07% 10,58% 4,26%
Exemple 4
Un mélange de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramique et de 0,2 ml d'anisole a été dissous dans 20 ml de dichloromethane. A la solution ont été ajoutés 3 ml d'acide trifluoroacétique, et après agitation de la solution pendant 30 minutes, le solvant a été éliminé sous vide. Le résidu a été alors soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel, et après élution de l'anisol et du diphénylméthanol obtenus comme sous-produits avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (5:1), l'éluat avec un mélange de chloroforme et de méthanol (5:1) a été recueilli et le solvant a été éliminé sous vide afin d'obtenir l'acide 1-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acéthylmuramique.
A ce produit ont été ajoutés 0,15 g du chlorhydrate de l'ester benzylique de la O-benzyl-L-séry-D-isoglutamine et 0,05 ml de triéthylamine dissous dans 10 ml de tétrahydrofurane, et la solution a été refroidie jusqu'à — 10°C.
Ensuite, 50 ml de N-hydroxysuccinimide et 69 mg de dicy-
s
10
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clohéxylcarbodiimide ont été ajoutés sous agitation pendant 1 heure à la même température, puis agités encore pendant une nuit à température ambiante. Le chlorhydrate de triéthylamine et la N,N-dicyclohexylurée formés comme sous-produits ont été éliminés par filtration et le solvant a été éliminé par distillation. Le résidu a été soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel.
L'éluat avec un mélange de chloroforme et de méthanol (30:1) a été recueilli et le solvant a été éliminé. Le résidu a été recristallisé dans un mélange de benzène et de méthanol afin de donner 0,35 g de l'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétyl-muramyl-O-benzyl-L-séryl-D-iso-glutamine ayant un point de fusion de 164-166°C.
[a]-5 +32,1 (c 0,5, CHCb)
Analyse élémentaire comme C120H206O14.5N4 :
C H N
Calculé: 74,39% 10,74% 2,89%
Trouvé: 74,41% 10,59% 2,87%
0,2 g de l'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-6-O-myco-mycoloyl-N-acétylmuramyl-O-benzyl-L-séryl-D-isoglutamine ainsi obtenu a été dissous dans 20 ml de tétrahydrofurane, et la solution a été hydrogénolysée en présence de noir de palladium et à température ambiante.
Après la réaction, le solvant a été éliminé sous vide, et le résidu a été recristallisé dans un mélange de tétrahydrofurane et de méthanol afin de donner 0,14 g de la 6-O-mycomyco-loyl-N-acétylmuramyl-L-séryl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 114-120°C (avec des compositions).
[a]25 + 35,2° (c 1,0, tétrahydrofuraneH2O = 50:1 après 48 heures).
Analyse élémentaire comme C99H188O14.5N4:
C H N
Calculé: 71,33% 11,39% 3,36%
Trouvé: 71,03% 11,33% 3,42%
Exemple 5
En partant de 0,5 g de l'ester diphénylméthylique de l'acide 1 a-O-benzyl-6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramique, la même technique que celle dans l'exemple 4 a été suivie afin d'obtenir de la 6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-séryl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 125-130°C (avec décomposition).
[a]£f +32,2 (c 1,0, tétrahydrofurane-H20 = 50:1 après 48 heures).
Analyse élémentaire comme C70 Hi270i4,6N4 -H20:
C H N
Calculé: 65,85% 10,21% 4,39%
Trouvé: 65,62% 10,33% 4,48%
Exemple 6
A une solution de 0,5 g de sodium dans 15 ml de méthanol anhydre ont été ajoutés 3,6 g de malonate de diéthyle. Après que la solution a été agitée à 50°C pendant 20 minutes, 6,0 g de bromure de tétradécyle ont été ajoutés à la solution à la même température, et chauffés au reflux pendant 5 heures. Après refroidissement, de l'éther a été ajouté à la solution, et le bromure de sodium obtenu a été éliminé par filtration et le solvant par distillation. L'huile obtenue a été ajoutée à 15 ml de méthanol anhydre contenant 0,5 g de sodium. A la solution ont en outre été ajoutés 6,0 g de bromure de tétradécyle, et la solutin a été chauffée au reflux pendant 5 heures. Après refroidissement, la solution a été diluée avec de l'eau et extraite avec de l'éther. La solution éthérée a été lavée avec de l'eau et séchée. Après évaiiporation du solvant, les résidu a été recristallisé dans de l'éthanol afin d'obtenir 6,7 g de 2,2-bistétradé cylmalonate de diéthyle ayant un point de fusion de 30-32 °C.
A une solution de 2,7 g d'hydroxyde de potassium dans un mélange de 10 ml d'eau et de 20 ml d'éthanol, ont été ajoutés 6,5 g de 2,2-bistétradécylmalonate de diéthyle. La solution a été chauffée au reflux pendant 10 minutes, et après refroidissement la solution a été acidifiée avec de l'acide sulfurique 3M, et extraite avec de l'éther.
La solution éthérée a été lavée avec de l'eau et séchée.
Après évaporation du solvant, le résidu a été chauffé à 190-200°C pendant 1 heure, puis recristallisé dans du méthanol pour obtenir 4,9 g de l'acide 2-tétradécylhexadécanoique ayant un point de fusion de 73,5-75°C.
Analyse élémentaire comme C30H60O2:
C H
Calculé: 79,57% 13,36%
Trouvé: 79,57% 13,35%
Une solution de 1,0 g d'acide 2-tétradécylhexadécanoique et 0,79 g de chlorure de thionyle dans 5 ml de benzène a été chauffée au reflux pendant 7 heures. Après élimination du benzène et du chlorure de thionyle, du benzène anhydre a été ajouté au résidu, puis ce benzène a été éliminé par distillation. Cette technique a été répétée trois fois, afin d'éliminer complètement le chlorure de thionyle. Le résidu a ensuite été recristallisé dans de l'hexane anhydre afin d'obtenir 0,75 g de chlorure de 2-tétradécylhexadécanoyle ayant un point de fusion de 51-53°C. A la solution de 0,85 g de l'ester benzylique de la l-a-O-benzyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglu-tamine dans 35 ml de pyridine anhydre ont été ajoutés 4,9 g de chlorure de 2-tétradécylhexadécanoyle dissous dans 35 ml de tétrahydrofurane anhydre, à 17-18°C. Après 45 minutes, 20 ml d'eau ont été ajoutés et la solution a été agitée pendant 35 minutes à température ambiante. La solution a été ajustée a un pH de 3 avec de l'acide chlorhydrique 1M et extraite avec du chloroforme. La solution chloroformique a été lavée avec une saumure saturée, et séchée. Après élimination du solvant, le résidu a été soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel. L'éluat avec un mélange de chloroforme et de méthanol (20:1) a été concentré, et le résidu a été recristallisé dans du méthanol pour obtenir 0,75 g de l'ester benzylique de la 6-0-(2-tétradécylhexadécanoyle)-l-a-0-benzyl-N-acétyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 173-174°C.
Analyse élémentaire comme C68H101O12N 4:
C H N
Calculé: 68,39% 9,20% 5,06%
Trouvé: 68,04% 9,29% 5,03%
Une solution de 0,70 g de l'ester benzylique de la 6-0-(2-tétradécylhexadécanoyl)-l-a-0-benzyl-N-acétyl-muramyl-L-al-anyl-D-isoglutamine ainsi obtenus dans 15 ml de tétrahydrofu-
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rane a été agitée en présence de noir de palladium et sous une atmosphère hydrogène à 30°C pendant 15 jours. Le produit obtenu a été soumis à une Chromatographie sur colonne de silica-gel, et élué avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'acide acétique (95:5:3). L'éluat a été concentré et le résidu a été dissous dans un mélange de dioxane et d'eau (1:1), puis la solution a été lyophilisée afin d'obtenir 0,50 g de la 6-0-(2-tétradécylhexadécanoyl)-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ayant ün point de fusion de 152-155°C.
Analyse élémentaire comme C49H87O12N4 • 2H2O:
premier) ont été recueillis e le solvant a été éliminé par distillation. Le résidu a été recristallisé dans un mélange de benzène et d'éthanol pour donner 0,284 g d'ester benzylique de la 1-a-O-benzyl-6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-glycyl-D-iso-s glutamine ayant un point de fusion de 148-150°C.
[a]2^ +36,7° (c = 0,5; chloroforme)
Analyse élémentaire pour Cii2Hi980i3,5N4CH30H:
10
C H N
C H N
Calculé: 61,16% 9,74% 5,82% is
Trouvé: 61,10% 9,60% 5,83%
Exemple 7
On a dissous dans 20 ml de chloroforme 0,65 g d'ester diphénylméthylique de l'acide l-a-O-benzyl-6-O-mycomyco- 20 loyl-N-acétylmuramique et 1 ml d'anisole, puis 3,0 ml d'acide trifluoroacétique ont été ajoutés à la solution en refroidissant à la glace. Après agitation pendant 30 minutes, de l'acétone a été ajoutée au mélange réactionnel, le solvant étant ensuite éliminé sous vide. Le résidu a été lavé avec de l'éthanol, puis 25 dissous dans 10 ml de tétrahydrofurane. A la solution sous agitation et refroidissement à la glace, ont été ajoutés 78 mg de N-hydroxysuccinimide, 72 mg de dicyclohexylcarbodiimide et 1,2 mmole de triéthyl-amine dans 0,2 ml de tétrahydrofurane et 237 mg de chlorhydrate de benzyl-glycyl-D-isoglutamate. 30 Le mélange réactionnel a alors été laissé sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Le chlorhydrate de triéthyl-amine et la N,N'-dicyclohexyl-urée formés ont été éliminés par filtration.
Après évaporation du solvant sous vide, le résidu a été 35 analysé par Chromatographie sur silicagel. Les éluats avec un mélange benzène-acétone (3:1) (sauf la fraction éluée en
Calculé: 73,79% 11,03% 3,03%
Trouvé: 73,27% 10,83% 2,87%
Une solution de 0,23 g du produit obtenu ci-dessus dans 40 ml de tétrahydrofurane a été hydrogénée en présence de palladium-carbone à température ambiante. Le solvant a été éliminé sous vide, et les produits insolubles dans l'éthanol résiduel ont été éliminés. Le résidu a été analysé par Chromatographie sur silicagel, et les éluats avec un mélange chloro-forme-méthanol (10:1) (sauf la fraction initiale) ont été recueillis. Le solvant a été éliminé par distillation et le résidu a été recristallisé dans un mélange éther-éthanol pour donner 0,135 g de 6-O-mycomycoloyl-N-acétyl-muramylglycyl-D-isoglutamine ayant un point de fusion de 206-207°C.
[aß5 +37,1° (après 9 minutes)
+39,1° (après 20 heures)
(c = 0,4; tétrahydrofurane-eau = 50:1)
Analyse élémentaire pour C98H186O13.5N4:
C H N
Calculé: 71,90% 11,48% 3,42%
Trouvé: 71,81% 11,23% 3,40%
B
Claims (7)
- 624124
- 2. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isogluta-mine.2REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation de dérivés du muramyldipep-tide représentés par la formule générale (I),'CH2OYY-OHj-Ch<£\Ït(I)ch3chco-q,dans laquelle Y représente un groupe acyle supérieur ayant un nombre total d'atomes de carbone de 28 à 90 et ayant au moins une longue chaîne alkyle ramifiée liée en position a, et Q représente un groupe -L-alanyl-D-isoglutamine, un groupe -glycyl-D-isoglutamine ou un grtoupe -L-séryl-D-isoglutamine, caractérisé par le fait qu'on fait réagir un N-acétyl-a-mura-mide de benzyle avec un acide gras supérieur, puis qu'on couple le dérivé obtenu avec un dipeptide choisi parmi le groupe comprenant la L-alanyl-D-isoglutamine, la glycyl-D-isoglutamine et la L-séryl-D-isoglutamine, ou bien inversé-ment qu'on fait réagir le N-acétyl-a-muramide de benzyle avec un dipeptide choisi parmi le groupe comprenant la L-alanyl-D-isoglutamine, la glycyl-D-isoglutamine et la L-séryl-D-isoglutamine, puis qu'on fait réagir le composé obtenu avec un acide gras supérieur.
- 3. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-O-corynomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isogluta-mine.
- 4. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isogluta-mine.
- 5. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-O-mycomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-séryl-D-isoglutamine.
- 6. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-O-nocardomycoloyl-N-acétylmuramyl-L-séryl-D-isogluta-mine.
- 7. Procédé selon la revendication 1 pour la préparation de la 6-0-(2-tétradécylhexadécanoyl)-N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine.
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