CH381357A - Procédé microbiologique d'obtention d'une substance antifongique - Google Patents

Procédé microbiologique d'obtention d'une substance antifongique

Info

Publication number
CH381357A
CH381357A CH6068758A CH6068758A CH381357A CH 381357 A CH381357 A CH 381357A CH 6068758 A CH6068758 A CH 6068758A CH 6068758 A CH6068758 A CH 6068758A CH 381357 A CH381357 A CH 381357A
Authority
CH
Switzerland
Prior art keywords
sep
antifungal
water
methanol
process according
Prior art date
Application number
CH6068758A
Other languages
English (en)
Inventor
Hagemann Guy
Nomine Gerard
Penasse Lucien
Original Assignee
Roussel Uclaf
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roussel Uclaf filed Critical Roussel Uclaf
Publication of CH381357A publication Critical patent/CH381357A/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Description


  Procédé     microbiologique    d'obtention d'une substance antifongique    La présente invention est relative à un procédé  pour l'obtention d'une nouvelle substance chimique  possédant des propriétés antifongiques remarquables.  Cette nouvelle substance sera désignée par       antifon-          gine    4915   dans le présent mémoire.  



       L'antifongine    4915 est utilisable notamment dans  l'agriculture et partout où une protection efficace con  tre les champignons et moisissures s'avère désirable.  



  Dans son brevet suisse No 345977, la titulaire a  décrit la substance antibiotique dite antibiotique 4915  et son     obtention    à partir des jus de fermentation de  Streptomyces     paucisporogenes        (ATCC    12596). Le  mycélium ainsi que le bouillon de culture dudit       micro-organisme,    débarrassé de l'antibiotique 4915,  constituent la matière première de l'extraction de     l'an-          tifongine    4915 selon le procédé de la présente in  vention.  



  Le procédé suivant l'invention visant l'obtention  d'une substance antifongique dite       Antifongine    4915    selon lequel on cultive en aérobie une souche de  Streptomyces     paucisporogenes    dans un     milieu    aqueux  contenant, à part un ou des sels minéraux, une source  d'azote et un     hydrate    de carbone, et sépare du bouil  lon de culture     l'antibiotique    4915, est caractérisé en  ce qu'on extrait du mycélium et du bouillon de cul  ture débarrassé de l'antibiotique 4915     l'antifongine     4915.  



  Dans la mise en     oeuvre    du procédé de l'invention,  il est avantageux     d'essorer    et de sécher le mycélium  de Streptomyces     paucisporogenes,    d'extraire le mycé  lium sec par le méthanol contenant du chlorure de  calcium, d'ajouter de l'eau aux extraits, d'évaporer le       méthanol,    d'essorer le précipité, de purifier ce dernier  par chromatographie et de cristalliser     l'antifongine     4915 dans un solvant approprié.

   D'autre part, il est  avantageux d'essorer à sec le jus de culture débarrassé    de l'antibiotique 4915, de reprendre le     concentrat     ainsi obtenu, dans le méthanol, de concentrer la solu  tion, de l'extraire en présence d'eau par le     butanol,     de concentrer l'extrait     butanolique,    de précipiter ce  dernier par l'acétone et l'éther de pétrole, de traiter  le précipité par des résines     échangeuses    d'ions appro  priées et de terminer l'opération par une extraction  au     butanol    tertiaire qui fournit     l'antifongine    4915  brute,

   que l'on peut     enfin    purifier et cristalliser comme  il vient d'être     indiqué.     



  Selon un mode préféré de     mise    en     ceuvre    du pro  cédé de l'invention, on purifie     l'antifongine    4915  par chromatographie sur alumine activée, le solvant       d'élution    étant le mélange     dioxane-eau-acétate    de bu  tyle (40: 52<B>:18)</B> additionné de 5 % d'acide acétique.  Selon ce même mode préféré, on cristallise l'antifon  gique de l'invention, dans un mélange     pyridine-          dioxane-eau-acétate    de butyle (30 : 40 : 52 : 18).  



       L'antifongine    4915 obtenue conformément à l'in  vention est une substance organique contenant du  carbone, de l'hydrogène, de l'azote et de l'oxygène.  C'est un composé fournissant au microscope de pola  risation l'extinction caractéristique des produits cris  tallisés. Il se présente sous forme d'une poudre jaune  qui,     chauffée,    commence à se décomposer dès<B>1000</B> C.  



       L'antifongine    4915, très soluble dans certains  mélanges de solvants, est extrêmement peu soluble       dans    l'eau, les hydrocarbures, les cétones et les sol  vants chlorés, faiblement soluble dans les alcools in  férieurs et le     sulfure    de carbone, soluble dans le     pro-          pylène-glycol,        l'isoquinoléine,    la     pyridine,    la     triéthyl-          amine    et le     diméthylformamide.     



  La     microanalyse    donne les valeurs     suivantes     C 63,6 %, H 7,8 %, N 2,8  pour un produit     renfermant    1,3 % de cendres. Les      résultats de diverses réactions chimiques de caracté  risation, essayées sur     l'antifongine    4915, figurent au  tableau A.

    
EMI0002.0002     
  
    Tableau <SEP> A
<tb>  <I>Réactions <SEP> Résultat</I>
<tb>  Ninhydrine <SEP> néant
<tb>  Benzidine <SEP> néant
<tb>  Tollens <SEP> néant
<tb>  2,4-Dinitrophénylhydrazine <SEP> néant
<tb>  Chlorure <SEP> ferrique <SEP> néant
<tb>  Acide <SEP> picrique <SEP> néant
<tb>  Acide <SEP> flavianique <SEP> néant
<tb>  Sel <SEP> de <SEP> Reinecke <SEP> néant
<tb>  Nitrate <SEP> cérique <SEP> réaction <SEP> faible
<tb>  Hydroxylamine <SEP> précipité <SEP> amorphe       La substance     antifongique    obtenue suivant l'inven  tion se dissout dans les acides concentrés suivants  sulfurique, phosphorique, chlorhydrique, perchlorique,  formique, avec formation d'une intense coloration  bleue ou verte, devenant jaune par dilution à l'eau.  L'acide acétique ne fournit pas de réaction colorée.  



       L'antifongine    4915 obtenue au moyen du procédé  suivant l'invention est en outre caractérisée par ses  spectres particuliers dans     l'ultraviolet    et dans l'infra  rouge. Le spectre     (Tabsorption    dans- l'ultraviolet, dans  le méthanol     acétique        (fig.    1), présente une série de  maxima aux longueurs d'ondes suivantes  2.910 A, 3.450 A, 3.600 A, 3.800 A et 4.050 A ;  les valeurs des extinctions correspondantes sont cal  culées en
EMI0002.0009  
   140, 340, 540, 764 et 636.  



  Ces valeurs spectrales semblent indiquer la pré  sence d'une     structure        polyénique,    vraisemblablement       heptaénique    conjuguée. La     fig.    2 montre le spectre  d'absorption de     l'antifongine    4915 dans l'infrarouge.  



       L'antifongine    4915 possède un degré élevé d'acti  vité contre les diverses     levures    et moisissures. Cet an  tifongique est extrêmement actif contre des micro  organismes tels que:     Blastomyces        dermatitidis,    Can  dida     albicans,        Histoplasma        capsulatum,        Microsporum     carvis,     Sporotrichum        Schenckü,    Trichophyton inter  digitale, Trichophyton     rubrum;

      Saccharomyces     cere-          visiae,    et d'une grande valeur dans le traitement des  infections qu'ils provoquent.  



       L'antifongine    4915 se différencie de la     trichomy-          cine    et de la     candidine    parce que celles-ci sont solu  bles dans l'eau en     milieu        alcalin    faible.  



       L'antifongine    4915 se     différencie    de la nystatine,  de la     fongicidine,    de     l'amphotéricine    A et de la     fra-          dicine    par la position des maxima dans le spectre  ultraviolet:

    Elle se     différencie    en outre de la     trichomycine,     de     l'ascosine    et de. la     candicidine    par son activité sur  Candida     albicans    dont elle inhibe la     prolifératon    à la  concentration de 0,1 à 1     y/em3.     La toxicité de     l'antifongine    4915 brute
EMI0002.0048  
    _ 230 à     3.800A)    déterminée sur la souris, se situe  aux environs de - 3,5 mg/kg par voie intraveineuse,    25 mg/kg par voie sous-cutanée et 2000 mg/kg par  voie buccale.

   Cette particularité permet donc son uti  lisation en médecine humaine et     vétérinaire,    dans la  lutte contre les mycoses. Ainsi, dans     une    infection  par Candida     albicans    chez la souris, une administra  tion répétée     d'antifongine    4915 per os, atténue la  maladie et prolonge considérablement la survie des  animaux traités.  



       L'antifongine    4915 présente une activité intéres  sante contre des     fungi        phytopathogènes    ; ainsi, par  détermination de l'action, en milieu     gélosé,    sur le  développement de diverses souches provoquant des  infections chez les végétaux, on trouve les valeurs  inhibitrices minima suivantes  
EMI0002.0058     
  
    Antifongine <SEP> 4915 <SEP> brute
<tb>  Penicillium <SEP> italicum <SEP> .. <SEP> . <SEP> . <SEP> ... <SEP> 100 <SEP> y/cm3
<tb>  Fusarium <SEP> Caeruleum <SEP> ... <SEP> 100
<tb>  Ustilago <SEP> zeae <SEP> ... <SEP> ....... <SEP> 50
<tb>  Molinia <SEP> fructigena <SEP> .. <SEP> . <SEP> . <SEP> 10
<tb>  Botrytis <SEP> allii <SEP> ...-..... <SEP> ....

   <SEP> 10
<tb>  Colletotrichum <SEP> lindemuthia  num <SEP> <B>.....</B> <SEP> ...._.. <SEP> . <SEP> .... <SEP> ...___ <SEP> 10       En     outre,    le produit s'est montré actif contre       Penicillium        digitatum,    Aspergillus     fumigatus    et     Sporo-          trichum        gougerotti.     



  Par     détermination    d'action sur la germination   in  vitro   de     conidies    de       Venturia        inaequalus      (tave  lure),     l'antifongine    4915 brute s'est montrée     fongista-          tique    à la concentration de 250     ,r/cm3.     



  D'autre part, les études pratiques d'activité sur  des     fungi        phytopathogènes,    de     l'antifongine    4915  agricole ont montré  a) Une bonne activité sur les spores     d'         Alternaria          Oleracea      et de       Glomerella        cingulata     , par la  méthode de Mac     Callan    : inhibition totale à la  concentration de 100     y/cm3    ;

    b) une activité très intéressante sur Botrytis     Cinerea     (pourriture grise de la vigne) : début d'inhibition  à la     concentration    de 100     y/cm3,    et activité très  forte à 500     y/cm3    ;  c) une action fongicide très nette sur       Dothichiza          populea      (champignon spécifique de la maladie  du peuplier) à 500     y/cm3,    et sur       Colletotrichum          gramincarum    (champignon spécifique de la mala  die du maïs), à 100-500     y/cm3    ;

    d) dans des essais effectués sur     feuilles    de vigne iso  lées maintenues en survie, une bonne protection  contre l'infection par       Incinula        necator      (oïdium)  a été     réalisée    par pulvérisation de la suspension  aqueuse     d'antifongine    agricole à     1.%    .  



  Par une technique d'expérimentation sur feuilles  isolées, une activité très intéressante sur la tavelure  des arbres fruitiers, l'infection étant complètement  inhibée même après deux semaines par application  de la suspension aqueuse     d'antifongine    brute à  250     y/cm3.     



  Pour les     différents    essais d'applications de     l'anti-          fongine    4915 agricole ou brute sur les végétaux (vigne,      arbres fruitiers, pommes de terre, -tomates), il n'a pas  été observé de signes extérieurs de     phytotoxicité:          L'antifongine    4915 agricole mentionnée ci-dessus,  consiste en une poudre de mycélium séché, contenant  environ 1,5 %     antifongine        cristallisée.     



       L'antifongine    4915 brute est un produit amorphe  d'extraction, à 30 % environ     d'antifongine        cristallisée.     Les exemples suivants illustrent l'invention:  Exemple 1  <I>Obtention de</I>     l'antifongine   <I>agricole</I>  On agite 100     litres    de bouillon de culture de  Streptomyces     paucisporogenes        (ATCC    12.596) obtenu  par le procédé décrit dans le brevet suisse No 345977,  avec 1 kg de     kieselguhr,        filtre    le mélange homogène  sur un     filtre-presse:

      dont les toiles ont été préalable  ment     colmatées    avec 1 kg du même     kieselguhr    en  suspension dans de l'eau, et essore le précipité à l'air  comprimé. On obtient ainsi 18 kg de produit que  l'on répartit sur des plateaux et sèche en armoire  à vide à     plateaux    chauffants (température : 450 C,  vide<B>:</B> 25 mm de mercure), ou en étuve ventilée chauf  fée à 500 C. La durée de la dessiccation est de  15 heures.

   Le produit sec est ensuite pulvérisé dans  un broyeur à percussion (type     Forplex)    à sélecteur,  puis passé dans un     homogénéiseur    à tambour tour  nant jusqu'à obtention d'une     poudre    très homogène  dont la grosseur des grains est inférieure à 25 mi  crons. On obtient ainsi 5 kg     d'antifongine    agricole.  Exemple 2  <I>Obtention de</I>     l'antifongine   <I>4915 brute</I>  <I>à partir du mycélium d'une culture</I>  <I>. de Streptomyces</I>     paucisporogenes.     



  On extrait 100 g de mycélium sec d'une culture  de Streptomyces     paucisporogenes    obtenue par le pro  cédé décrit dans le brevet suisse No 345977, cinq fois       successives    par agitation de 1 heure avec 200     cm3    de  méthanol contenant 10 % de chlorure de calcium.  On ajoute chaque fois aux extraits 100     cm3    d'eau et  évapore sous     vide    pour     éliminer    le méthanol.

   On es  sore le précipité et obtient :  
EMI0003.0030     
  
    Extrait <SEP> No <SEP> 1 <SEP> ; <SEP> 0,96 <SEP> g
<tb>  2 <SEP> : <SEP> 2,04 <SEP> g
<tb>  3 <SEP> : <SEP> 0,99 <SEP> g
<tb>  4: <SEP> 0,68g
<tb>  5: <SEP> <U>0,479</U>
<tb>  Total <SEP> 5,14 <SEP> g       Les précipités ainsi isolés, présentent tous une  activité antifongique à la dilution de     0,1y/em,'    sur Sac  charomyces     cerevisiac    et de 0,1 à     1y/cm3    sur Candida       albicans.    On les réunit en vue de la purification ulté  rieure. Le produit brut ainsi obtenu, présente une  intensité d'absorption dans l'ultraviolet, de
EMI0003.0035  
    230, à 3800 A, le solvant étant le méthanol acé  tique.

      <I>Purification de</I>     l'antifongine   <I>4915 brute</I>  <I>et obtention de</I>     l'antifongine   <I>4915 amorphe</I>  On met 20 g     d'antifongine    4915 brute, obtenue  de la manière décrite ci-dessus, en solution dans un  mélange composé de 120     cm3    de     dioxane,    90     em3    de       pyridine;    54     cm3    d'acétate de butyle et 156     cms    d'eau,  filtre     l'insoluble    et chromatographie sur 600 g d'alu  mine activée.

   On lave par 1045     cm8    du- même mé  lange jusqu'à disparition d'une première     bande    colo  rée en jaune, inactive, qui se déplace assez rapidement  et élue la fraction principale par 1060     cm3    du mélange       dioxane-eau-acétate    de butyle (40:52:18),     additionné     de 5%     d'acite    acétique.     L'éluat    ainsi obtenu est versé  dans -un mélange constitué de 1-0 litres d'éther et 1 li  tre de méthanol<B>;</B> on     filtre    le précipité et obtient 6;5 g  d'un produit jaune amorphe qui présente une inten  sité d'absorption dans l'ultraviolet de
EMI0003.0054  
   = 585 à  3800 A.

      <I>Purification de</I>     l'antifongine   <I>4915 amorphe</I>  <I>et -obtention de</I>     l'antifongine   <I>4915 cristallisée</I>  On     dissout    à 800 C, 20 g     d'antifongine    4915  amorphe dans 200     cm3    -d'un mélange de solvants  constitués de     pyridine,        dioxane,:    eau et acétate de  butyle<B>(30:</B> 40: 52 : 18) et     abandonne'    en glacière  pour obtenir 10,05g d'un produit cristallisé présen  tant une intensité d'absorption dans l'ultraviolet, en  méthanol acétique, de = 736 à 3800 A.

   On       recristallise    ce produit- deux
EMI0003.0064  
   autres fois dans ce même  mélange de solvants et obtient     finalement    8,4 g     d'anti-          fongine    4915     cristallisée,    = 764 à     3800A.    Cette  substance qui n'a pas encore
EMI0003.0070  
   été décrite se présente  sous forme d'une poudre jaune qui fournit, au micro  scope de polarisation l'extinction caractéristique des  produits     cristallisés.    Elle est extrêmement peu soluble  dans l'eau, les hydrocarbures, les cétones et les sol  vants-chlorés, faiblement soluble dans les alcools infé  rieurs et le sulfure de carbone,

   soluble     dans    le pro  pylène glycol;     l'isoquinoléine,    la     pyridine,    la     triéthyl-          amine    et le     diméthylformamide.     
EMI0003.0078     
  
    Analyse:

   <SEP> C <SEP> = <SEP> 63,6
<tb>  H <SEP> = <SEP> 7,8
<tb>  N <SEP> = <SEP> 2;8 <SEP> %
<tb>  Cendres<B>=</B> <SEP> 1,3       Exemple 3  <I>Obtention de</I>     l'antifongine   <I>4915</I>     d   <I>partir</I>  <I>du jus de fermentation</I>  <I>de Streptomyces</I>     paucisporogenes     On évapore à sec sous vide 130     litres    d'un jus de  fermentation de Streptomyces     paucisporogenes    obtenu  par le procédé décrit dans le brevet suisse No 345977  et débarrassé du mycélium et des impuretés insolubles  par filtration ou     centrifugation    ainsi que de l'antibio  tique 4915, extrait le résidu à trois reprises avec cha  que fois 10     litres    de méthanol.

   On concentre la solu  tion     méthanolique    sous pression réduite,, à 500     em3     et ajoute deux     litres    d'eau. On extrait à quatre repri-      ses avec chaque fois 1     litre    de     n-butanol,    concentre  les extraits rassemblés, sous pression     réduite    à  300     cm3,        filtre,    additionne le filtrat de 10 volumes  du mélange acétone-éther de -pétrole (1 : 2) à 30  60o C et essore. On obtient ainsi 11,3 g     d'antifongine     4915 brute.

   Activité (concentration     minimum    inhibi  trice, en     milieu        gélosé)     - Sur Saccharomyces     cerevisiae    : 0,1     y/cm3    ;  - sur Candida     albicans    0;1 à 1     y/cm3.       <I>Purification de</I>     l'antifongine   <I>4915 brute</I>  On     dissout    5 g de la poudre     antifongique    obtenue  de la manière décrite ci-dessus, dans un     mélange     constitué par 250     cm8    de méthanol et 125     cm3    d'eau.

    On passe la solution sur une colonne de 10 g de ré  sine     sulfonique        échangeuse    de cations,     Amberlite    I R  120, forme acide; puis sur une colonne de 20 g de  résine     échangeusë        d'anions,        Amberlite    I R 4 B forme       hydroxylée.    On concentre sous     pression    réduite, re  prend dans 100     cm3    de     t-butanol    à     351,    C et évapore  à sec par     lyophylisation.    On obtient ainsi 3,

  5 g     d'anti-          fongine    4915 purifiée.    Exemple 4  <I>Préparation d'un concentré</I>     émulsifiable     <I>pour application agricole</I>  On mélange:  
EMI0004.0035     
  
    Antifongine <SEP> 4915 <SEP> brute <SEP> . <SEP> <B>.....</B> <SEP> 1 <SEP> g
<tb>  Ethoxyéthanol <SEP> <B>....</B> <SEP> -_.<B>.....</B> <SEP> ........._.......<B>....</B> <SEP> ...... <SEP> 10 <SEP> g
<tb>  Chlorure <SEP> de <SEP> calcium <SEP> .<B>....</B> <SEP> -<B>....</B> <SEP> ..<B>..........</B> <SEP> ..<B>----</B> <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>  2,6-ditert <SEP> butyl-p-crésol <SEP> ,........... <SEP> ....<B>....</B> <SEP> ...

   <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>  Alcoylphénol <SEP> polyoxyéthylé <SEP> ......._<B>__</B> <SEP> 100 <SEP> mg       Cette     préparation,        diluée    dans 5 à 10 litres d'eau,  fournit-une suspension stable, utilisable par épandage  et active contre la tavelure, le     botrytis,        l'oïdium,    etc.

    Exemple     S     <I>Préparation d'une poudre pour application agricole</I>  On dissout     l'antifongine    4915 brute dans un al  cool contenant éventuellement du chlorure de     cal-          cium,_    ajoute un     antioxygène    du type     tert-butyl-phénol,     par exemple le     2,6-ditert        butyl-p-crésol,    à raison de  0,01 à -1 %, et disperse la solution obtenue sur une  poudre inerte,- telle que carbonate de calcium, talc,  argile ou- silice colloïdale.

   On sèche sous vide à basse       température,    et broie mécaniquement pour obtenir       des    grains de dimension voisine de 10 microns. On    dilue par brassage avec un support     inerte    finement  pulvérisé, de densité apparente identique, de façon à  obtenir un mélange renfermant environ 20 g     d'anti-          fongine    4915 brute par kg. Cette poudre est     utilisée     à raison de 25 kg par hectare, environ.

Claims (1)

  1. REVENDICATION I Procédé d'obtention d'une substance antifongi que selon lequel on cultive en aérobie une souche de Streptomyces paucisporogenes dans un milieu aqueux contenant, à part un ou des sels minéraux, une source d'azote et un hydrate de carbone, et sépare du bouil lon de culture l'antibiotique formé, caractérisé en ce qu'on extrait du mycélium et du bouillon de culture débarrassé de l'antibiotique l'antifongique.
    SOUS-REVENDICATIONS 1: Procédé suivant la revendication I, caractérisé en ce qu'on essore et sèche le mycélium de Strepto myces paucisporogenes, extrait le mycélium sec par le méthanol contenant du chlorure de calcium, ajoute de l'eau aux extraits, élimine le méthanol et isole le précipité. 2.
    Procédé suivant la revendication I, caractérisé en ce qu'on évapore à sec le jus de culture débarrassé de l'antibiotique, reprend le concentrat ainsi obtenu, dans le méthanol, concentre la solution, l'extrait en présence d'eau par le butanol, concentre l'extrait buta- nolique, précipite ce dernier par l'acétone et l'éther de pétrole, traite le précipité par des résines échan- geuses d'ions et effectue une extraction au butanol tertiaire qui fournit l'antifongine 4915 brute. 3.
    Procédé suivant la revendication I, caractérisé en ce qu'on purifie l'antifongique par chromatogra phie sur alumine activée, le solvant d'élution étant le mélange dioxane-eau-acétate de butyle (40: 52 : 18) additionné de 5 % d'acide acétique. 4. Procédé suivant la revendication I et la sous- revendication 3, caractérisé en ce qu'on cristallise l'antifongique dans un mélange pyridine-dioxane-eau- acétate de butyle<B>(30:</B> 40. 52 : 18).
    REVENDICATION II Utilisation de l'antifongique, obtenu par le pro cédé suivant la revendication I, dans l'agriculture pour la protection -contre les champignons et moisissures.
CH6068758A 1957-07-09 1958-06-17 Procédé microbiologique d'obtention d'une substance antifongique CH381357A (fr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR742793A FR1330705A (fr) 1957-07-09 1957-07-09 Nouvel antifongique et son procédé d'obtention

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CH381357A true CH381357A (fr) 1964-08-31

Family

ID=8704575

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CH6068758A CH381357A (fr) 1957-07-09 1958-06-17 Procédé microbiologique d'obtention d'une substance antifongique

Country Status (2)

Country Link
CH (1) CH381357A (fr)
FR (1) FR1330705A (fr)

Also Published As

Publication number Publication date
FR1330705A (fr) 1963-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FR2528050A1 (fr) Facteurs 1, 2, 3, 4 et 5 isoles purs de la teichomycine a2 utiles notamment comme medicaments antibiotiques et procede pour leur preparation
CN112645857A (zh) 一种消旋羟蛋氨酸钙的制备方法
CA2334656C (fr) Procede de preparation d&#39;aloine par extraction
CH381357A (fr) Procédé microbiologique d&#39;obtention d&#39;une substance antifongique
FR1465395A (fr) Composé nouveau, la décoyinine et son procédé de fabrication
FR2474503A1 (fr) Composes intermediaires utiles pour l&#39;obtention de la spectinomycine et de ses analogues ainsi que l&#39;utilisation de ces produits
FR2472611A1 (fr) Antibiotiques, procedes pour leur production et agent antimycotique en contenant
BE569246A (fr)
CH641751A5 (fr) Nouveau procede de dedoublement de l&#39;acide dl-cis et dl-trans chrysanthemique.
Dj et al. Obtaining Gossypol Acetic Acid (Gsk) From Gossypol
SU685290A1 (ru) Способ получени инулина
CH439271A (fr) Procédé de préparation de nouvelles 4-dédiméthylamino-4-amino substitué-6-déméthyl-tétracyclines
RU2176998C2 (ru) Способ получения левулиновой кислоты
Islamov et al. Getting of gossipol acic acid (GSK)
US2078237A (en) Processes for the production of ascorbic acid
BE827051Q (fr) Procede de production de parvulines
SU1637713A1 (ru) @ -Моно-2-фторфениловый эфир глицерина, обладающий гаметоцидной активностью дл ржи
BE568604A (fr)
CH348158A (fr) Procédé pour transformer un 11-désoxy-stéroïde en 11-oxy-stéroïde correspondant
JPH06253869A (ja) 天然型アブシジン酸の精製法
BE572450A (fr)
JPS62207294A (ja) 新規物質アロサミジン、その製法および用途
CH314151A (fr) Procédé de fabrication d&#39;un antibiotique
CH417851A (fr) Procédé de préparation d&#39;un sel d&#39;addition de la blasticidine-S
CH405269A (fr) Procédé de préparation de thiocarbanilides