CA2754283A1 - Derives indoliques pour le traitement de maladies neurodegeneratives - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un composé de formule (I) suivante : ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, un stéréoisomère ou un mélange de stéréoisomères en toutes proportions, dans laquelle: - X1 représente un groupe CH2 ou C=O, - X2 représente une chaîne hydrocarbonée linéaire, saturée ou insaturée, comportant 8 à 24 atomes de carbone, - R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe OH ou (C1-C6)alcoxy, tel que méthoxy, et - R2 représente un groupe CH3 ou CH2OR3, avec R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C6)alkyle, CO-(C1-C6)alkyle ou NH-(C1-C6)alkyle, ainsi que son utilisation en tant que médicament, notamment pour le traitement de maladies neurodégénératives, et son procédé de préparation.

Description

DERIVES INDOLIQUES POUR LE TRAITEMENT DE MALADIES
NEURODEGENERATIVES
La présente invention concerne des composés possédant un motif indole substitué par une chaîne aliphatique utiles pour le traitement de maladies neurodégénératives, ainsi que leur procédé de préparation et leur utilisation.
Avec l'allongement de l'espérance de vie, de plus en plus de personnes sont atteintes de maladies neurodégénratives telles que la maladie d'Alzheimer ou la maladie de Parkinson.
Une maladie neurodégénérative est caractérisée par une mort apoptotique progressive de sous populations neuronales particulières, liée à un déficit fonctionnel des axes de transmission atteints. Ce type de maladie affecte le fonctionnement du système nerveux central, et en particulier du cerveau, de façon progressive, la maladie pouvant évoluer plus ou moins rapidement (quelques semaines à plusieurs années), et souvent de manière irréversible. Selon la région du système nerveux central atteint par la maladie, différentes fonctions pourront être affectées comme la motricité, le langage, la mémoire, la perception ou encore la cognition. Parmi les maladies neurodégénératives les plus fréquentes, on peut citer en particulier la maladie d'Alzheimer et la maladie de Parkinson.
La maladie d'Alzheimer, qui touche environ 24 millions de personnes dans le monde entier, est une maladie du tissu cérébral qui entraîne la perte progressive et irréversible des fonctions mentales. Le premier symptôme est la perte du souvenir des événements récents (amnésie), puis les déficits cognitifs s'étendent aux domaines du langage (aphasie), de l'organisation des mouvements (apraxie), de la reconnaissance visuelle (agnosie) et des fonctions exécutives (telles que la prise de décision et la planification).
La maladie de Parkinson, quant à elle, affecte le système nerveux central et provoque des troubles moteurs d'évolution progressive, notamment des tremblements du corps.

2 L'utilisation thérapeutique de neurotrophines, décrites dans la maintenance de diverses populations neuronales, a été proposée à des fins curatives. Bien que l'administration de neurotrophines recombinantes dans des modèles animaux lésés ait montré un effet bénéfique sur la survie neuronale, leur utilisation chez l'homme, d'abord encourageante, s'est trouvée rapidement limitée. En effet, la très forte hydrophilie de ces composés, leur interdisant le passage de la barrière hématoencéphalique ainsi que leur dégradation enzymatique rapide imposent une administration intracrânienne répétée, génératrice d'effets secondaires dramatiques.
Par ailleurs, les autres médicaments prescrits pour ces différentes maladies neurodégénératives permettent uniquement de retarder l'évolution de la maladie, aucun ne permettant de guérir la maladie, ni même d' arrêter son évolution, Il existe donc actuellement un réel besoin de trouver de nouvelles molécules plus actives et pouvant passer la barrière hématoencéphalique pour le traitement de ces maladies neurodégénératives.
Le noyau indole est un motif présent dans de nombreux composés naturels ou non présentant des activités biologiques diverses, des activités antimicrobiennes, antiparasitaires, antioxydantes, neurotrophiques, et anti-inflammatoires ayant été
reportées.
Des composés présentant une longue chaine aliphatique greffée sur un indole ont été reportés pour leurs propriétés neurotrophiques (Coowar D. et al. J. Med.
Chem.
2004, 47, 6270). Ces structures déjà décrites présentent une chaine directement couplée au cycle indolique, cependant aucune structure dérivant de la tryptamine n'a été étudiée pour ces propriétés.
Les inventeurs ont alors découverts de manière intéressante que des dérivés naturels de la tryptamine, de type N-acyltryptamine à longue chaine, extraits de certaines plantes de la famille des Annonaceae, notamment Annona atemoya, Annona reticulata et Rollinia mucosa (Wu Y.-C. et al. J. Nat. Prod. 2005, 68(3), 406-408) et d'autres analogues de synthèse dérivant de la tryptamine, possédaient une activité
protectrice et différenciatrice des neurones dopaminergiques en culture.

3 PCT/EP2010/052596 La présente invention a donc pour objet un composé de formule (I) suivante :
Ri \

N~ ~X2 I X~ R
N
N
H (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, un stéréoisomère ou un mélange de stéréoisomères en toutes proportions, en particulier un mélange d'énantiomères, et notamment un mélange racémique, dans laquelle:
- Xi représente un groupe CH2 ou C=O, - X2 représente une chaîne hydrocarbonée linéaire, saturée ou insaturée, comportant de 1 à 24, de préférence de 8 à 22, atomes de carbone, - Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe OH ou (Ci-C6)alcoxy, tel que méthoxy, et - R2 représente un groupe CH3 ou CH2OR3, avec R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe (Ci-C6)alkyle, CO-(Ci-C6)alkyle ou NH-(Ci-C6)alkyle.
pour son utilisation en tant que médicament, notamment en tant que médicament neurotrophique ou neuroprotecteur, destiné avantageusement au traitement ou à
la prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux.
Par groupement (C,-C6)alkyle , on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée saturée, linéaire ou ramifiée, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, iso-butyle, sec-butyle, tert-butyle, n-pentyle, n-hexyle. De préférence, il s'agit d'un groupe méthyle.
Par groupement (Ci-C6)alcoxy , on entend, au sens de la présente invention, un groupe (Ci-C6)alkyle tel que défini ci-dessus lié à la molécule par l'intermédiaire d'un atome d'oxygène. Il s'agit en particulier des groupes méthoxy, éthoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, iso-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy. De préférence, il s'agit d'un groupe méthoxy.

4 Par groupement CO-(Ci-C6)alkyle , on entend, au sens de la présente invention, un groupe (Ci-C6)alkyle tel que défini ci-dessus lié à la molécule par l'intermédiaire d'un groupement CO. Il peut s'agir en particulier d'un groupement acyle (-COCH3) ou enbcore éthylcarbonyle (-COCH2CH3).
Par groupement NH-(Ci-C6)alkyle , on entend, au sens de la présente invention, un groupe (Ci-C6)alkyle tel que défini ci-dessus lié à la molécule par l'intermédiaire d'un groupement NH.
Par insaturée , on entend, au sens de la présente invention, que la chaîne hydrocarbonée peut comportée une ou plusieurs insaturation(s).
Par insaturation , on entend, au sens de la présente invention, une double ou une triple liaison et de préférence une double liaison.
Dans la présente invention, on entend par pharmaceutiquement acceptable ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine.
Par sels pharmaceutiquement acceptables d'un composé, on entend désigner dans la présente invention des sels qui sont pharmaceutiquement acceptables, comme défini ici, et qui possèdent l'activité pharmacologique souhaitée du composé
parent. De tels sels comprennent :
(1) les hydrates et les solvates, (2) les sels d'addition d'acide formés avec des acides inorganiques tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide benzènesulfonique, l'acide benzoïque, l'acide camphresulfonique, l'acide citrique, l'acide éthane-sulfonique, l'acide fumarique, l'acide glucoheptonique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide glycolique, l'acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2-hydroxyéthanesulfonique, l'acide lactique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, l'acide muconique, l'acide 2-naphtalènesulfonique, l'acide propionique, l'acide salicylique, l'acide succinique, l'acide dibenzoyl-L-tartrique, l'acide tartrique, l'acide p-toluènesulfonique, l'acide triméthylacétique, l'acide trifluoroacétique et similaires ; et (3) les sels formés lorsqu'un proton acide présent dans le composé parent soit est remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin (Na-', KK
ou Li-' par exemple), un ion de métal alcalino-terreux (comme Ca 2+ ou Mg2+) ou un ion d'aluminium ; soit se coordonne avec une base organique ou inorganique. Les bases

5 organiques acceptables comprennent la diéthanolamine, l'éthanolamine, N-méthylglucamine, la triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent l'hydroxyde d'aluminium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et l'hydroxyde de sodium.
Dans la présente invention, on entend désigner par stéréoisomères , des diastéréoisomères ou des énantiomères. Il s'agit donc d'isomères optiques. Les stéréoisomères qui ne sont pas des images dans un miroir l'un de l'autre sont ainsi désignés par diastéréoisomères , et les stéréoisomères qui sont des images dans un miroir non superposables sont désignés par énantiomères .
Un atome de carbone lié à quatre substituants non identiques est appelé un centre chiral .
Un mélange équimolaire de deux énantiomères est appelé mélange racémique.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, un composé selon l'invention pourra répondre à la formule (la) suivante Ri H
1 N~ m " P
I X~ R2 N
H (la) dans laquelle:

- représente indépendamment une liaison simple ou double, - Xi, Ri et R2 sont tels que définis ci-dessus, et - m représente un nombre entier supérieur ou égal à 1, et n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier supérieur ou égal à 0 avec m+n+p+4<24 et de préférence 8 <m+n+p+4<22.

6 Plus particulièrement, le composé de l'invention pourra répondre à la formule (Ib) ou (le) suivantes :
Ri N
x, R2 N
H (Ib) ou Ri \

1 / ~ m n p N X

P.
H (le) pour lesquelles :
- Ri, R2 et Xi sont tels que définis ci-dessus, - q représente un nombre entier compris entre 1 et 24, de préférence entre 8 et 22, et - m, n et p sont tels que définis ci-dessus.
Ri représente un substituant du noyau indole, situé sur l'un quelconque des atomes de carbone du motif indole. Il s'agira avantageusement d'un atome d'hydrogène.
R2 représentera avantageusement un groupe CH3 ou CH2OH.
Avantageusement, Xi représente un groupe CH2.
Les composés de l'invention pourront être choisis en particulier parmi :
la N lb N
Q. / O N O
H

le N Id N
N O N O
H H

7 le N if N
N O N O
H H
Ig N~ ky21 li N~ 13 OH

N O N O
H H
lh q._~/ N 4 O
H
2a N 2b 9. N
N N
H H
2c N~ 2d / N,_,(,,,< _~/ ~~
_J ~~ N N
H H
2e N _IIe 2f N N

H H
2 1 / N2i 1 / Nui'~OH
g N
H H
N s _ 4 2h N
H
La présente invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus pour la fabrication d'un médicament, notamment d'un médicament neurotrophique ou neuroprotecteur, destiné avantageusement au traitement

8 ou à la prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux.
La présente invention concerne également une méthode de traitement ou de prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux, comprenant l'administration à un patient en ayant besoin d'une quantité
efficace d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus.

La présente invention a également pour objet un composé de formule (I) suivante :
Ri \

N~ ~X2 I X~ R

N
N
H (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, un stéréoisomère ou un mélange de stéréoisomères en toutes proportions, en particulier un mélange d'énantiomères, et notamment un mélange racémique, dans laquelle:
- Xi représente un groupe CH2 ou C=O, - X2 représente une chaîne hydrocarbonée linéaire, saturée ou insaturée, comportant de 1 à 24 de préférence de 8 à 22 atomes de carbone, - Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe OH ou (Ci-C6)alcoxy, tel que méthoxy, et - R2 représente un groupe CH3 ou CH2OR3, avec R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe (Ci-C6)alkyle, CO-(Ci-C6)alkyle ou NH-(Ci-C6)alkyle.

9 à l'exclusion des composés de formule :

/ N Y1u CH3 N
H , avec u = 14, 16 à 18 ou 20 à 24.

Les composés exclus sont décrits dans Wu Y.-C. et al. J. Nat. Prod. 2005, 68(3), 406-408, et Chàvez D. et al. J. Nat. Prod. 1999, 62(8), 1119-1122 en tant que nouveaux composés isolés de graines d'Annona atemoya ou de Rollinia mucosa.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, un composé selon l'invention pourra répondre à la formule (la) suivante Ri 1 / N~ m P
I X, R2 H (la) dans laquelle:

- représente indépendamment une liaison simple ou double, - Xi, Ri et R2 sont tels que définis ci-dessus, et - m représente un nombre entier supérieur ou égal à 1, et n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier supérieur ou égal à 0 avec m+n+p+4<24 et de préférence 8<ni +n+p+4<22.

Plus particulièrement, le composé de l'invention pourra répondre à l'une des formules (Ib) et (le) suivantes Ri Xi R2 H (Ib) ou \
Ri X
%. 1 R2 N
(le) pour lesquelles - R,, R2 et X, sont tels que définis ci-dessus, - q représente un nombre entier compris entre 1 et 24, de préférence entre 8 et 5 22, et - m, n et p sont tels que définis ci-dessus.

Ri représentera avantageusement un atome d'hydrogène.
R2 représentera avantageusement un groupe C113 ou CH2OH.

10 Avantageusement, Xi représente un groupe CH2.

Les composés de l'invention peuvent être choisis en particulier parmi la / N lb N
N O N O
H

Id / N li N~ ~1sOH
N ~/ ~~ O N O
H H

lh _~/ ~~
N
H
2a 1 / N 2b 1 / N
N N
H H

11 2c N 2d I I
N N
H H
2e N 2f Ç?. Y__~ N N H H

2g / N 2i N~,OH
N.
H

2h ' N
H
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) tel que décrit précédemment et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Les composés selon l'invention peuvent être administrés par voie orale, sublinguale, parentérale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, et de préférence par voie orale.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, parentérale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, l'ingrédient actif peut être administré
sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux ou aux êtres humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration parentérale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.

12 Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues.
On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs de goût ou des édulcorants.
Pour une administration rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylènes glycols.
Pour une administration parentérale, intranasale ou intraoculaire, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmaco logiquement compatibles.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports additifs.
Les composés de l'invention peuvent être utilisés à des doses comprises entre 0,01 mg et 1000 mg par jour, donnés en une seule dose une fois par jour ou administrés en plusieurs doses tout au long de la journée, par exemple deux fois par jour en doses égales. La dose administrée par jour est avantageusement comprise entre 5 mg et 500 mg, encore plus avantageusement entre 10 mg et 200 mg. Il peut être nécessaire d'utiliser des doses sortant de ces gammes ce dont l'homme du métier pourra se rendre compte lui-même.

13 Selon un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus pourra comprendre en outre un autre principe actif, utile notamment dans le traitement ou la prévention de maladies neurodégénératives, et avantageusement choisi parmi des inhibiteurs d'acétylcholinestérase tels que le donézépil, la galanthamine, la rivastigmine, la mémantine et la tacrine ; des inhibiteurs de monoamines oxydase tels que la sélégiline ; des inhibiteurs de catécholamines O-méthyltransférase tels que l'entacapone ; des inhibiteurs glutamatergiques tels que l'amantadine et le baclofène ; des agonistes cholinergiques tels que la sabcoméline ; des agonistes dopaminergiques tels que le pergolide, le cabergoline, le ropirinole et le pramipexole ; des analogues ou précurseurs de neuromédiateurs tels que la L-3,4-dihydroxyphénylalanine ; et des anticholinergiques tels que le trihexyphénidyl et la tropatépine.
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, pour son utilisation en tant que médicament, notamment en tant que médicament neurotrophique ou neuroprotecteur, destiné avantageusement au traitement ou à la prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
(a) couplage entre la tryptamine et un composé de formule (II) suivante :
Z-X2-R2 (II) pour laquelle Z représente une fonction acide carboxylique sous forme libre ou sous forme activée et R2 et X2 sont tels que définis ci-dessus, pour donner un composé de formule (I-1) suivante :
R~ \

1 / N X2, R2 P.
H (I-1) pour laquelle RI, R2 et X2 sont tels que définis précédemment,

14 (b) éventuellement réduction de la fonction carbonyle du composé de formule (I-1) obtenu à l'étape (a) précédente pour donner un composé de formule (I-2) suivante Ri N/X2. R2 N
H (I-2) pour laquelle RI, R2 et X2 sont tels que définis précédemment, et (c) séparation du milieu réactionnel du composé (I-1) ou (I-2) obtenu à
l'étape précédente.

Etatea:
Par fonction acide carboxylique sous forme libre , on entend, au sens de la présente invention, un groupe CO2H.
Par fonction acide carboxylique sous forme activée , on entend, au sens de la présente invention, une fonction acide carboxylique modifiée de manière à la rendre plus active vis-à-vis d'un nucléophile. Ces formes activées sont bien connues de l'homme du métier et peuvent être en particulier un chlorure d'acide (COCI).
Ainsi, Z représentera avantageusement un groupe CO2H ou COC1.
Le composé de formule (II) pourra être en particulier un acide gras ou analogue disponible commercialement lorsque Z = CO2H. Dans le cas où Z représente une fonction acide carboxylique activée, le composé de formule (II) pourra être obtenu facilement à partir de l'acide carboxylique correspondant, disponible dans le commerce par activation de la fonction acide carboxylique par des techniques bien connues de l'homme du métier. Ainsi, un chlorure d'acide pourra être obtenu notamment par réaction de l'acide carboxylique correspondant avec du chlorure d'oxalyle en présence de quelques gouttes de diméthylformamide (DMF). Cette réaction peut être réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, notamment à température ambiante.
Selon un premier mode de réalisation particulier de l'invention, le composé de formule (II) utilisé comporte un groupe Z = CO2H (forme acide libre). Dans ce cas, la réaction de couplage sera réalisée en présence d'un agent de couplage, tel que le diisopropylcarbodiimide (DIC), le dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (EDC), le carbonyldiimidazole (CDI), le 2-H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetraméthyluronium hexafluorophosphate (HBTU), le 2-(IH-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetraméthyluronium tetrafluoroborate (TBTU) ou encore le O-(7-azobenzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium hexafluorophosphate 5 (HATU), éventuellement associé à un auxiliaire de couplage tel que le N-hydroxy succinimide (NHS), le N-hydroxy benzotriazole (HOBt), le 3,4-dihydro-3-hydroxy-oxo-1,2,3-benzotriazole (HOOBt), le 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (HAt) ou le N-hydroxysylfosuccinimide (sulfo NHS). De préférence, le couplage sera réalisé
en présence du couple EDC/HOBt.
10 Cette réaction peut être réalisée dans un solvant tel que le dichlorométhane, notamment à température ambiante, une base telle que la triéthylamine pouvant être utilisée.
Ce premier mode de réalisation particulier est particulièrement adapté à la préparation de composés de formule (I) pour lesquels R2 = CH2OH.

15 Selon un second mode de réalisation particulier de l'invention, le composé
de formule (II) utilisé comporte un groupe Z sous forme d'une fonction acide carboxylique activée, et plus particulièrement sous forme d'un chlorure d'acide. Dans ce cas, la réaction de couplage sera avantageusement réalisée en présence d'une base telle que la triéthylamine.
Cette réaction pourra être mise en oeuvre dans un solvant tel que le dichlorométhane, notamment à température ambiante.
Ce second mode de réalisation particulier sera avantageusement utilisé lorsque R2 :~ CH2OH, et en particulier lorsque R2 = CH3, car les groupements hydroxyles (OH) réagissent avec le chlorure d'oxalyle.
Etat e b :
Cette étape de réduction permet de réduire l'amide en amine pour passer d'un composé de formule (I) pour lequel Xi = C=O à un composé de formule (I) pour lequel Xi = CH2.
Cette étape sera avantageusement réalisée en présence d'un hydrure tel que LiA1H4. Elle pourra être mise en oeuvre dans un solvant tel que le tétrahydrofurane.

16 Par hydrure , on entend, au sens de la présente invention, un composé
chimique capable de libérer des ions hydrures H-, permettant d'effectuer une réaction de réduction.

Etat e c :
La séparation du produit final du milieu réactionnel pourra être réalisée par des techniques bien connue de l'homme du métier, comme par exemple par extraction, évaporation du solvant ou encore par précipitation et filtration.
Le composé de formule (I) ainsi obtenu pourra par ailleurs être purifié si nécessaire par des méthodes bien connues de l'homme du métier, comme par recristallisation si le composé est cristallin, par distillation, par chromatographie sur colonne sur gel de silice ou encore par chromatographie liquide haute performance (HPLC).
La présente invention sera mieux comprise à la lumière des exemples non limitatifs qui suivent.

FIGURE :
La Figure 1 représente des photographies de neurones fluorescents obtenus dans les conditions du test à la DHR-123 sans traitement (contrôle) ou après traitement avec du TroloX à 10 gM ou avec le composé lh à 10 nM.
La Figure 2 représente la coupe du cerveau en 3 parties réalisées dans l'exemple 2.3.
Les Figures 3 et 4 représentent les chromatogrammes (abscisses : temps en minutes , ordonnées : intensité relative en pourcent) obtenus par HPLC-MS/MS à partir d'extraits de cerveaux des souris utilisées dans les expériences de l'exemple 2.3.
mettant en évidence la présence ou non du composé selon l'invention 2c. La Figure 4 correspond aux chromatogrammes obtenus dans le cadre du traitement per os tandis que la Figure 5 correspond aux chromatogrammes obtenus dans le cadre du traitement intra-péritonéal.

17 EXEMPLES :
1. Synthèse des composés de l'invention 1.1. Synthèse des composés de formule (I) pour lesquels X1 = C=O
= Procédure générale de synthèse à partir d'un chlorure d'acide :
A une solution d'acide gras (2 mmol) dans le dichlorométhane (10 mL) placée à

sous atmosphère inerte sont ajoutés trois gouttes de diméthylformamide sec et du chlorure d'oxalyle (1,04 mL, 12 mmol). Le mélange est agité à 0 C pendant 1h.
Le dichlorométhane et l'excès de chlorure d'oxalyle sont évaporés sous vide. Le chlorure d'acide ainsi obtenu est dissous dans 5 mL de dichlorométhane sec.
A une solution de tryptamine (160 mg, 1 mmol) dans le dichlorométhane (10 mL) à 0 C
sous atmosphère inerte d'azote, sont ajoutés de la triéthylamine (0,55 mL, 2 mmol) et lentement le chlorure d'acide en solution dans le dichlorométhane (5 mL). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 2h. La réaction est hydrolysée, puis extraite au dichlorométhane. La phase organique est séchée sur MgSO4 anhydre puis concentrée sous vide. Les produits sont purifiés sur colonne de silice dans un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle en proportions 8:2.

N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)tridécanamide (la) Rendement : 95%
RMN1H (400MHz, CDC13) 8 ppm: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m, 17H); 1.58 (m, 5H); 2.09 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 3.59 (t, J= 6.8 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
6.8 Hz, I H), 5.48 (s, I H), 7.04 (d, J= 1.6 Hz, I H), 7.13 (t, J= 7.2 Hz, I
H), 7.22 (t, J=
7.2 Hz, 1H); 7.38 (d, J= 8.0 Hz, IH); 7.61 (d, J= 8.0 Hz, 1H,); 8.05 (s, 1H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.5, 25.2, 29.2, 29.3, 29.5, 31.8, 36.8, 39.5, 111.1, 113.1, 118.6, 119.4, 121.8, 122.1, 127.4, 136.4, 173Ø
ESI-MS m/z: 379 ( [M+Na]+, 100).
IR cm-': 608, 671, 719, 739, 801, 847, 913, 1009, 1068, 1094, 1130, 1222, 1246, 1271, 1294, 1340, 1377, 1424, 1456, 1470, 1554, 1629, 1650, 2851, 2918, 2955, 3089, 3264, 3387.

18 N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)pentadécanamide (1b) Rendement : 77%
RMNiH (400MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m, 22H); 1.61 (m, 4H); 2.10 (t, J= 7.0 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 3.58 (t, J= 6.4 Hz, 1H); 3.65 (t, J=
6.4 Hz, I H); 5.49 (s, I H); 7.04 (s, I H); 7.12 (t, J= 7.0 Hz, I H); 7.22 (t, J= 7.8 Hz, I H);
7.38 (d, J= 7.6 Hz, 1 H); 7.61 (d, J= 8.2 Hz, 1 H); 8.04 (s, 1 H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.6, 22.9, 23.7, 25.3, 28.9, 29.2, 29.4, 29.6, 31.8, 36.8, 39.6, 111.2, 112.9, 118.6, 119.3, 122.0, 127.3, 128.7, 130.8, 136.4, 173.1.
ESI-MS m/z: 407 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 607, 718, 739, 801, 931, 1010, 1069, 1094, 1130, 1225, 1297, 1340, 1377, 1425, 1456, 1470, 1555, 1630, 1650, 2850, 2918, 2955, 3267, 3387.
N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)hexadécanamide (1c) Rendement : 87%
RMN'H (400MHz, CDC13) 8 ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 30H); 1.57 (m, 4H); 2.09 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.9 Hz, 2H); 3.60 (t, J= 6.6 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
6.6 Hz, I H), 5.56 (s, I H), 7.04 (d, J= 2.1 Hz, I H), 7.13 (t, J=.8 Hz, I H), 7.22 (t, J= 6.9 Hz, 1H); 7.37 (d, J= 8.1 Hz, 1H); 7.61 (d, J= 7.2 Hz, 1H); 8.06 (s, 1H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.2, 25.3, 25.7, 26.9, 29.1, 29.3, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 31.9, 33.4, 36.9, 39.7, 111.2, 113.0, 118.7, 119.4, 122.0, 122.1, 127.4, 136.4, 173.1.
ESI-MS m/z: 421 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 608, 718, 739, 801, 1011, 1094, 1225, 1293, 1340, 1377, 1456, 1553, 1630, 2850, 2918, 3267, 3387.
N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)heptadécanamide (Id) Rendement : 93%
RMN1H (400MHz, CDC13) 8 ppm: 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H); 1.25 (m, 26H); 1.57 (m, 2H); 2.09 (t, J= 7.6 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 3.60 (t, J= 6.6 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
6.6 Hz, 1H); 5.49 (s, 1H); 7.04 (d, J= 2.1 Hz, 1H); 7.13 (t, J= 7.6 Hz, 1H);
7.21 (t, J=
7.6 Hz, I H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, I H); 7.61 (d, J= 8 Hz, I H); 8.09 (s, I H).

19 RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.4, 25.7, 29.3, 29.4, 29.6, 29.7, 31.9, 36.9, 39.6, 111.2, 113.1, 118.7, 119.5, 121.9, 122.2, 127.3, 136.4, 173.1.
ESI-MS m/z: 435 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 717, 739, 800, 1010, 1067, 1094, 1225, 1300, 1339, 1377, 1423, 1456, 1471, 1552, 1629, 1649, 2850, 2918, 3267, 3393.

N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)octadécanamide (le) Rendement : 95%
RMN'H (400MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 27H); 1.57 (m, 2H); 2.09 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.6 Hz, 2H); 3.60 (t, J= 6.3 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
6.3 Hz, I H), 5.45 (s, I H), 7.03 (d, J= 2.1 Hz, I H), 7.13 (t, J= 7.8 Hz, I
H), 7.21 (t, J=
7.8 Hz, 1 H); 7.38 (d, J= 8.1 Hz, 1 H); 7.61 (d, J= 7.2 Hz, 1H); 8.07 (s, 1 H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.4, 25.7, 29.3, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 31.9, 36.9, 39.6, 111.2, 113.2, 118.8, 119.5, 121.9, 122.2, 127.4, 136.4, 173.1.
ESI-MS m/z: 449 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 609, 718, 739, 800, 1013, 1094, 1224, 1298, 1339, 1377, 1424, 1456, 1553, 1629, 1649, 2850, 2918, 3267, 3392.

N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)icosanamide (If) Rendement : 50%
RMN'H (400MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m, 30H); 1.57 (m, 2H); 2.09 (t, J= 7.6 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 3.60 (t, J= 6.4 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
6.4 Hz, I H), 5.05 (s, I H), 7.04 (s, I H), 7.13 (t, J= 8.0 Hz, I H), 7.21 (t, J= 7.6 Hz, I H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, 1H); 7.61 (d, J= 7.6 Hz, 1H); 8.10 (s, 1H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.4, 25.7, 29.3, 29.4, 29.5, 29.7, 31.9, 33.7, 36.9, 39.6, 111.2, 113.1, 118.7, 119.5, 121.9, 122.2, 136.6, 173.1.
ESI-MS m/z: 477 ([M+Na]+, 100).
IR cm-': 669, 718, 739, 799, 913, 1012, 1066, 1095, 1222, 1299, 1339, 1377, 1424, 1456, 1472, 1552, 1629, 1649, 2850, 2917, 3269, 3394.

N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)tricosanamide (1g) Rendement : 88%
RMN1H (400MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.6 Hz, 3H); 1.25 (m, 38H); 1.57 (m, 2H); 2.09 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.4 Hz, 2H); 3.60 (t, J= 6.4 Hz, 1H); 3.62 (t, J=
5 6.4 Hz, I H); 5.47 (s, I H); 7.04 (d, J= 2,0 Hz, I H); 7.13 (t, J= 7.6 Hz, I
H); 7.21 (t, J=
7.6 Hz, 1 H); 7.3 8 (d, J= 8.4 Hz, 1 H); 7.61 (d, J= 8,0 Hz, 1 H); 8.02 (s, 1 H).
RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.4, 25.7, 29.3, 29.4, 29.5, 29.7, 31.9, 33.7, 36.9, 39.6, 111.2, 113.1, 118.7, 119.5, 121.9, 122.2, 136.6, 173.1.
ESI-MS m/z: 497 ([M+Na]+, 100).
10 IR cm-': 560, 580, 612, 719, 738, 800, 983, 1093, 1225, 1342, 1377, 1462, 1472, 1564, 1628, 2848, 2917, 2959, 3258, 3396.

(8Z, IIZ)-N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)heptadéca-8, 11-diènamide (1h) Rendement : 81%
15 RMN1H (400MHz, CDC13) 8 ppm: 0.90 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m, 14H); 1.59 (t, J=
6.8 Hz, 2H); 2.06 (m, 4H); 2.10 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.79 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.98 (t, J=
6.4 Hz, 2H); 3.59 (t, J= 6.4 Hz, 1H); 3.62 (t, J= 6.4 Hz, 1H); 5.37 (m, 4H), 5.63 (s, 1H);
7.00 (d, J= 1.6 Hz, I H); 7.12 (t, J= 7.6 Hz, I H); 7.21 (t, J= 7.6 Hz, I H);
7.37 (d, J= 8.0 Hz, 1H); 7.60 (d, J= 7.6 Hz, 1H); 8.47 (s, 1H).

20 RMN13C (100MHz, CDC13) 8 ppm: 14.0, 22.5, 25.3, 25.6, 25.7, 27.1, 29.1, 29.2, 29.3, 29.4, 29.6, 31.5, 36.8, 39.7, 111.3, 112.8, 118.6, 119.3, 122.0, 127.3, 127.8, 128.0, 130.0, 130.2, 136.4, 173.2.
ESI-MS m/z: 445 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 560, 580, 608, 719, 739, 801, 931, 1011, 1069, 1094, 1126, 1225, 1269, 1299, 1340, 1377, 1425, 1456, 1555, 1629, 1650, 2851, 2920, 3010, 3264, 3386.

= Procédure générale de synthèse à partir d'un acide carboxque libre :
A une solution de tryptamine (320 mg, 2 mmol) et d'acide carboxylique (518 mg, mmol) dans le dichlorométhane (40 mL) sont ajoutés de la triéthylamine (0,83 mL, 6 mmol), de 1'EDC (768 mg, 4 mmol) et de 1'HOBt (405 mg, 3 mmol). Le mélange est agité une nuit à température ambiante sous atmosphère inerte d'azote. La réaction est hydrolysée, puis extraite au dichlorométhane et lavée avec une solution aqueuse saturée

21 en NH4C1. La phase organique est séchée sur MgSO4 anhydre et concentrée sous vide.
Le produit est purifié sur colonne de silice dans un mélange de dichlorométhane et de méthanol en proportions 95 : 5.

N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)-15-hydroxypentadécanamide (Ii) Rendement : 60%
RMN1H (400MHz, CDC13) I ppm: 1.25 (m, 22H); 1.57 (m, 4H); 2.09 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 3.59-3.65 (m, 4H); 5.48 (s, 1H); 7.04 (d, J= 1.6 Hz, 1H);
7.13 (t, J= 7.6 Hz, I H); 7.22 (t, J= 8.0 Hz, I H); 7.38 (d, J= 8.0 Hz, I H);
7.61 (d, J= 8.0 Hz, 1H); 8.06 (s, 1H).
RMN13C (100MHz, CDC13) ô ppm: 24.8, 25.4, 25.7, 26.3, 29.3, 29.4, 29.5, 30.4, 39.6, 63.1, 105.1, 111.2, 118.5, 118.8, 119.5, 121.9, 122.3, 127.4, 183.4.
ESI-MS m/z: 423 ([M+Na]+, 100).
IR cm': 606, 704, 727, 741, 758, 974, 1012, 1026, 1057, 1109, 1166, 1224, 1267, 1357, 1375, 1457, 1556, 1629, 1669, 1982, 2037, 2849, 2917, 3275, 3394.
1.2. Synthèse des composés de formule (I) pour lesquels X = CH2 Procédure générale :
A une solution d'amide (tel que préparé précédemment) (1 mmol) dans le THF (10 mL) placée à 0 C sous atmosphère inerte d'azote est ajouté lentement du LiA1H4 (304 mg, 8 mmol) par petites portions. Le mélange est ensuite chauffé au reflux pendant 2h. Après refroidissement, la réaction est hydrolysée doucement par 1 mL d'eau, puis une solution de NaOH 1M est ajoutée goutte à goutte jusqu'à obtention d'un précipité blanc.
Le mélange est filtré sur célite, lavé à l'acétate d'éthyle puis séché sur MgSO4 anhydre et concentrée sous pression réduite.
N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)tridécan-1-amine (2a) Rendement : 84%
RMN1H (300MHz, CDC13) 8 ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 21H); 1.46 (m, 2H); 2.62 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 7.04 (d, J= 2.1 Hz, 1H); 7.12 (td, J= 0.9 Hz, J= 7.8 Hz, 1H); 7.20 (td, J= 1.2 Hz, J= 7.2 Hz, 1H); 7.36 (d, J= 7.8 Hz, IH);
7.64 (d, J=
7.8 Hz, 1 H); 8.10 (s, 1 H).

22 RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.8, 27.4, 29.3, 29.6, 29.7, 30.1, 32.0, 50.0, 111.1, 114.2, 118.9, 119.2, 121.8, 122.0, 127.5, 136.4.
ESI-MS m/z: 343 ([M+H]+, 100).
IR cm': 565, 592, 611, 722, 739, 804, 842, 886, 914, 1010, 1078, 1104, 1221, 1309, 1341, 1358, 1376, 1453, 1467, 1504, 1553, 1622, 2849, 2916, 3063, 3139, 3275, 3387.
N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)pentadécan-1-amine (2b) Rendement : 83%
RMNiH (300MHz, CDC13) S ppm: 0.89 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.26 (m, 24H); 1.46 (m, 2H); 2.62 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 7.04 (d, J= 1.8 Hz, 1H); 7.12 (td, J= 1.2 Hz, J= 7.8 Hz, 1H); 7.20 (td, J= 1.2 Hz, J= 8.1 Hz, 1H); 7.36 (d, J= 7.8 Hz, 1H);
7.64 (d, J=
7.5 Hz, 1H); 8.18 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.8, 27.4, 27.5, 29.4, 29.6, 29.7, 30.1, 31.9, 50.0, 111.1, 114.1, 117.4, 118.9, 119.2, 121.8, 122.0, 128.4, 133.4.
ESI-MS m/z: 371 ([M+H]+, 100).
IR cm-': 592, 611, 721, 739, 805, 874, 1011, 1104, 1222, 1341, 1454, 1630, 2649, 2916, 3387.

N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)hexadécan-1-amine (2c) Rendement : 50%
RMNiH (300MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 26H); 1.47 (m, 2H); 2.61 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 7.04 (d, J= 1.8 Hz, 1H); 7.11 (td, J= 1.2 Hz, J= 8.1 Hz, I H), 7.19 (td, J= 1.2 Hz, J= 8.1 Hz, I H), 7.36 (d, J= 8.1 Hz, I
H), 7.62 (d, J=
7.8 Hz, 1H); 8.21 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.6, 27.3, 29.3, 29.5, 29.6, 29.7, 29.8, 30.0, 31.9, 50.0, 111.1, 113.8, 118.8, 119.2, 122.0, 127.4, 136.4.
ESI-MS m/z: 385 ([M+H]+, 100).
IR cm-': 565, 592, 611, 721, 739, 784, 803, 842, 886, 910, 1011, 1105, 1222, 1341, 1376, 1454, 1467, 1621, 2849, 2916, 3053, 3139.

23 N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)heptadécan-1-amine (2d) Rendement : 90%
RMNiH (200MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 28H); 1.46 (m, 2H); 2.61 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 7.05 (d, J= 2.1 Hz, I H); 7.12 (t, J= 7.8 Hz, I H); 7.20 (t, J= 7.5 Hz, I H); 7.37 (d, J= 8.1 Hz, I H); 7.64 (d, J= 7.8 Hz, I H); 8.05 (s, 1H).
RMN13C (50MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.9, 27.4, 29.3, 29.6, 29.7, 30.2, 31.9, 50.0, 111.1, 114.2, 118.9, 119.2, 121.8, 122.0, 127.5, 136.4.
ESI-MS m/z: 399 ([M+H]+, 100).
IR cm': 565, 592, 612, 721, 739, 805, 841, 871, 891, 1011, 1074, 1105, 1223, 1342, 1358, 1376, 1454, 1466, 1505, 1622, 2849, 2916, 3064, 3141.
N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)octadécan-1-amine (2e) Rendement : 52%
RMNiH (300MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 30H); 1.46 (m, 2H); 2.62 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.98 (m, 4H); 7.04 (d, J= 1.8 Hz, I H); 7.12 (t, J= 7.8 Hz, I H), 7.20 (t, J= 7.8 Hz, I H), 7.36 (d, J= 8.1 Hz, I H), 7.63 (d, J= 7.8 Hz, I H), 8.11 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.4, 27.4, 29.4, 29.7, 30.0, 32.0, 49.9, 111.1, 114.0, 118.9, 119.2, 121.8, 121.9, 122.0, 136.4.
ESI-MS m/z: 413 ([M+H]+, 100).
IR cm-': 563, 577, 600, 735, 805, 1010, 1125, 1223, 1339, 1455, 1619, 2848, 2916, 3417.

N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)icosan-1-amine (2f) Rendement : 74%
RMN'H (300MHz, CDC13) S ppm: 0.88 (t, J= 6.9 Hz, 3H); 1.25 (m, 34H); 1.54 (m, 2H); 2.62 (t, J= 7.2 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 7.04 (d, J= 2.1 Hz, I H); 7.11 (t, J= 7.8 Hz, I H), 7.19 (t, J= 7.8 Hz, I H), 7.36 (d, J= 7.8 Hz, I H), 7.63 (d, J= 8.1 Hz, I H), 7.98 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.8, 27.4, 29.4, 29.7, 30.1, 31.9, 49.9, 111.1, 114.1, 119.1, 119.6,121.8,122.0,127.4,136.4.

24 ESI-MS m/z: 441 ([M+H]+, 100).
IR cm': 562, 572, 592, 609, 720, 740, 806, 868, 1011, 1104, 1221, 1341, 1455, 1626, 2849, 2916, 3244.

N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)tricosan-1-amine (2g) Rendement : 52%
RMN1H (300MHz, CDC13) 8 ppm: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m, 40H); 1.47 (m, 2H); 2.63 (t, J= 7.6 Hz, 2H); 2.99 (m, 4H); 7.06 (s, 1H); 7.12 (t, J= 7.6 Hz, 1H); 7.20 (t, J= 7.6 Hz, 1H); 7.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H); 7.62 (d, J= 8,0 Hz, 1H); 8.03 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) 8 ppm: 14.1, 22.7, 25.6, 27.3, 29.2, 29.3, 29.4, 29.5, 29.7, 31.9, 49.8, 111.1, 113.9, 118.9, 119.3, 122.0, 127.4, 136.4.
ESI-MS m/z: 483 ([M+H]+, 100).
IR cm': 577, 668, 720, 735, 746, 805, 1091, 1215, 1463, 1619, 2849, 2916, 3418.
(8Z, IIZ)-N-(2-(IH-indol-3 yl)éthyl)heptadéca-8,11-diènamine (2h) Rendement : 52%
RMN'H (300MHz, CDC13) ô ppm: 0.89 (t, J= 6.8 Hz, 3H); 1.25 (m,14H); 1.49 (m, 2H); 2.04(m, 4H); 2.64 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (m, 4H); 5.34 (m, 4H); 7.04 (s, 1H); 7.11 (t, J= 7.6 Hz, 1H); 7.19 (t, J= 7.2 Hz, 1H); 7.36 (d, J= 8.0 Hz, 1H); 7.63 (d, J= 7.6 Hz, 1H); 8.10 (s, 1H).
RMN13C (75MHz, CDC13) b ppm: 14.1, 22.6, 25.5, 25.6, 27.2, 27.3, 29.2, 29.3, 29.5, 29.6, 29.7, 31.5, 49.8, 111.1, 113.8, 118.9, 119.3, 121.9, 122.0, 127.4, 127.9, 128.0, 130.1, 130.2, 136.4.
ESI-MS m/z: 409 ([M+H]+, 100).
IR cm': 625, 738, 803, 1010, 1108, 1231, 1354, 1456, 1620, 2853, 2923, 3009, 3415.
N-(2-(IH-indol-3yl)éthyl)-15-hydroxypentadécanamine (2i) Rendement : 71%
RMN'H (300MHz, CDC13) 8 ppm: 1.24 (m, 24H); 1.47 (m, 4H); 2.62 (t, J= 7.6 Hz, 2H); 2.97 (m, 4H); 3.64 (t, J= 6.8 Hz, 2H); 7.04 (d, J= 1.6 Hz, 1H); 7.11 (t, J= 7.6 Hz, I H), 7.20 (t, J= 7.6 Hz, I H); 7.36 (d, J= 8.0 Hz, I H); 7.63 (d, J= 8.0 Hz, I H); 8.03 (s, 1H).

RMN13C (75MHz, CDC13) ô ppm: 25.7, 25.8, 27.4, 29.4, 29.5, 30.1, 32.8, 50.0, 63.0, 111.1, 114.2, 118.9, 119.3, 121.8, 122.0, 124.5, 136.4.
ESI-MS m/z: 387 ([M+H]+, 100).
IR cm': 587, 669, 727, 740, 760, 974, 1010, 1024, 1044, 1108, 1149, 1216, 1355, 5 1374, 1457, 1466, 1668, 2848, 2923, 3299, 3425.

2. Résultats biologiques Comme indiqué dans le préambule, il existe un réel besoin de trouver de nouvelles molécules petites et peu hydrophiles pour pouvoir passer la barrière 10 hématoencéphalique, et capables de mimer l'effet des neurotrophines.
In vitro, l'activité neurotrophique des facteurs de croissance neuronaux est caractérisée par leur capacité d'une part à promouvoir la survie neuronale et d'autre part à stimuler leur maturation.
Dans le cadre de la recherche de petites molécules mimant des activités 15 neurotrophiques, une approche originale consiste à étudier séparément les propriétés neuroprotectrices et neuritogéniques des composés étudiés, les composés d'intérêt devant présenter les deux activités. La mesure de la neuritogénèse constitue un critère morphologique représentatif de l'état de maturation neuronale.
Par ailleurs, des composés antioxydants possèdent également une capacité
20 neuroprotectrice. C'est pourquoi il est également intéressant d'évaluer la capacité
antioxydante des composés de l'invention.

2.1. Activités neuroprotectrice et neuritogénique des composés de l'invention = Mode opératoire

25 Dissection. La dissection consiste à extraire les embryons de l'utérus d'une ratte à
quinze jours de gestation. Le cerveau de chaque embryon est ensuite disséqué
sous une loupe binoculaire afin d'en extraire le mésencéphale ventral.
Ensemencement. Les mésencéphales sont regroupés dans un falcon contenant 2 mL
de milieu L15 puis dissociés mécaniquement (30 aller-retours), 5 mL de milieu L15 sont ajoutés. La suspension est laissée reposer 8 minutes. Les 5 mL de surnageant sont récupérés dans un nouveau falcon et les cellules sont dissociées à nouveau (30 aller-retours). 5 mL de L15 sont de nouveau ajoutés et la suspension est laissée à

26 reposer 8 minutes. Les 5 mL de surnageant sont ajoutés aux précédents. Les cellules ainsi extraites sont alors centrifugées 5 minutes à 1000 tr.min-'. Le culot cellulaire est repris dans du milieu Neurobasal supplémenté de 1% de B27, 1% de glutamine et 1%
d'un mélange de pénicilline/ streptomycine. Les cellules sont ensuite ensemencées à la dilution appropriée (0,6 embryon par puit de plaque 24 puits et 0,4 par puits de plaque de 48 puits). Les cultures sont incubées à 37 C dans une atmosphère humide enrichie de 5% en C02 en plaque 24 puits ou 48 puits.
Traitement. Après 24 heures les deux tiers du milieu de chaque puits sont remplacés par du milieu neuf enrichi en produit à tester à la dilution appropriée. Le milieu est remplacé de la même façon après 4 jours de culture.
Immunohistochimie. A 8 jours de culture, les cellules sont fixées par une solution de formaldéhyde à 4% puis lavées trois fois au PBS. Les cellules sont ensuite soumises à
l'immunohistochimie anti-tyrosine hydroxylase (TH) révélée par un anticorps secondaire couplé à un fluorochrome émettant dans le rouge (Cy3).
Analyses. La neuroprotection est évaluée par comptage des neurones TH positifs de 10 champs par puits directement sous microscope à fluorescence inversée, rapporté
en pourcentage du contrôle non traité. Les expériences sont réalisées à raison de trois puits par condition. Trois expériences indépendantes sont réalisées dans ces conditions. La longueur neuritique totale par cellule est calculée par le logiciel Neurite Outgrowth par Explora Nova sur 60 à 100 neurones photographiés indépendamment par condition.
= Résultats Le mésencéphale ventral contient les neurones dopaminergiques provenant de la substance noire qui dégénèrent dans la maladie de Parkinson, ainsi que ceux présents dans l'aire tegmentale ventrale.
Des cultures primaires de mésencéphale ventral embryonnaire peuvent être réalisées après extraction et dissection des embryons, collection et dissociation des mésencéphales ventraux et ensemencement de la suspension cellulaire dans des plaques multi-puits.
Les cultures primaires de mésencéphale ventral sont des cultures mixtes. Deux populations neurales y sont représentées, les neurones et la glie. Les neurones présents en culture sont essentiellement GABAergiques (~94%), accompagnés de neurones dopaminergiques (z3%) et sérotoninergiques (z3%). La glie est essentiellement

27 astrocytaire, on trouve également des oligodendrocytes et des microglies (~3%) en proportions plus faibles. D'autres types cellulaires non neuraux sont également présents en très faibles proportions comme des érythrocytes, fibroblastes et cellules endothéliales.
Les différentes populations cellulaires peuvent être identifiées par immunocytochimie de marqueurs spécifiques. Les neurones dopaminergiques sont identifiés par marquage de la tyrosine hydroxylase.
Des études antérieures décrivent une dégénérescence spontanée, progressive et spécifique des neurones dopaminergiques dans les cultures primaires de mésencéphale ventral (Guerreiro S. et al. Mol. Pharmacol. 2008, 74, 980-989).
Au cours du temps, le nombre de neurones dopaminergiques (Neurones TH+) diminue progressivement tandis que le nombre total de neurones n'est pas affecté. Cette observation a pu être exploitée comme modèle in vitro de la mort neuronale dans la maladie de Parkinson pour la recherche de composés neuroprotecteurs.
Dans ces mêmes conditions, les fibres des neurones restant ne sont pas altérées et la neuritogénèse peut être observée et quantifiée. Ce modèle est donc particulièrement intéressant dans notre étude puisqu'il permet en une même expérience d'obtenir les deux résultats attendus à savoir la quantification de la neuroprotection et de la neuritogénèse.
Le potentiel neurotrophique de nos composés a pu être évalué par la réalisation d'un double criblage incluant l'estimation du potentiel neuroprotecteur et la capacité à
stimuler la croissance neuritique.
Les cultures primaires de mésencéphale ventral d'embryons de rattes à 15,5 jours de gestation, dans des conditions occasionnant la mort spontanée des neurones dopaminergiques, sont maintenues en présence ou en absence des composés à
tester pendant 8 jours. Après fixation, les cultures sont soumises à
l'immunocytochimie dirigée contre la tyrosine hydroxylase, un marqueur spécifique des neurones dopaminergiques.
Le potentiel neuroprotecteur de chaque composé est ensuite estimé par comptage du nombre de neurones restant (Neurones TH-) sous microscope à fluorescence.
Les résultats pour les différents traitements sont exprimés en pourcentage du nombre de neurones restant par rapport aux cultures non traitées (Contrôle).

28 La neuritogénèse est quantifiée par mesure de la longueur neuritique totale rapportée par neurone dopaminergique (Longueur neuritique/neurone TH-) à
l'aide d'un analyseur d'images sur au minimum soixante neurones photographiés par condition (10-30% des neurones dopaminergiques totaux).
Toutes les expériences ont été réalisées par comparaison à un témoin positif, la dibutyryl-AMPcyclique (db-AMPc) (Mourlevat S. et al. Mol. Pharmacol. 2003, 64(3), 578-586).
Des tests de significativité ont été effectués pour comparer les données entre elles, afin de différencier les probabilités obtenues pour les deux types d'activités, nous utiliserons les notations Pp et PN respectivement pour les probabilités concernant l'activité protectrice et l'activité neuritogénique. Pp/N sera utilisé lorsque la probabilité
donnée concerne les deux activités.
Les composés de l'invention ont été testés à 1, 10, 100 et 1000 nM, avec un effet observé à 10 nM, les composés de cette série étant respectivement inactif ou toxiques aux concentrations inférieures et supérieures. Les résultats obtenus sont présentés sur la Tableau 1 qui suit.
Tableau 1 % relatif au contrôle SEM' Produit + Longueur neuritique/
X1 X2 R2 Neurones TH
(10 nM) neurone TH+
Contrôle - - - 100 f 1,9 100 2,9 db-- - - 149,9 3,6 333,1 8,7**
AMPc le C=O (CH2)14 CH3 121,3 3,2** 168,6 11,5**
1f C-0 (CH2)18 CH3 121,8 2,0** 147,4 f 7,0**
2c CH2 (CH2)14 CH3 131,9 4,7** 197,0 f 14,0**
2e CH2 (CH2)16 CH3 129,9 3,5** 157,3 t 10,3**
2f CH2 (CH2)1a CH3 128,9 3,4** 132,6 6,2*
2g CH2 (CH2)21 CH3 129,6 3,5** 141,2 f 5,0**
2h CH2 Ab CH3 137,5 8,0** 156,7 f 6,7**
2i CH2 (CH2)13 CH2OH 129,4 5,0** 160,8 t 13,8**

29 SEM = Ecart standard à la moyenne obtenu sur trois expériences indépendantes dont les conditions sont répliquées trois fois b A= [CH=CH-CH2-CH=CH-(CH2)4-CH3]
* P<0,05 vs contrôle, One-way ANOVA, analyse post-hoc de Dunnett ou t-test **P<0,001 vs contrôle, One-way ANOVA, analyse post-hoc de Bonferroni.

Tous les composés de cette série possèdent une capacité à induire une neuritogénèse à des concentrations de l'ordre du nanomolaire. Le potentiel neuroprotecteur de ces composés semble meilleur pour les composés ayant une fonction amine au lieu d'une fonction amide (voir le vs 2c), les meilleures activités étant observées pour le composé 2c. Les variations en fonction de la longueur de la chaîne sont minimes, on observe toutefois que les composés les plus courts sont un peu moins actifs. Concernant la présence d'insaturations, aucune variation pour les deux activités n'a été observée (voir 2h vs 2e). La fonction hydroxyle terminale quant à elle améliore les deux activités uniquement en série amine.
Ces résultats montrent un rôle important de l'amine intrachaîne qui confère à
cette série la double activité recherchée. Néanmoins les meilleurs potentiels neuroprotecteurs sont observés pour des longueurs de chaîne après l'atome d'azote (c'est-à-dire Xi-X2-R2) supérieures ou égales à 15 atomes de carbone (soit une longueur de chaîne X2 supérieure ou égale à 13 atomes de carbone), porteuses éventuellement d'un hydroxyle terminal. Les meilleures activités combinées ont été obtenues avec les composés 2c et 2i.

2.2. Capacité antioxydante des composés de l'invention Deux tests ont été utilisés afin d'évaluer la capacité antioxydante des composés de l'invention, c'est-à-dire leur capacité à neutraliser des radicaux libres.

= Test à lABTS
L'ABTS, ou acide 2,2'-azino-bis-(3-éthylbenzthiazoline-6-sulfonique), est un indicateur coloré de la présence de radicaux hydroxyles en solution. En effet, l'attaque d'un radical hydroxyle sur lABTS génère la formation d'un radical cation ATBS+' (Équation 1). Cette entité colorée confère à la solution une absorbance (Abs) à 450 nm.

ABTS + HO" s ABTS+' + HO

Équation 1 5 Au cours du test, les radicaux hydroxyles sont générés par la réaction de Fenton en présence de fer et de peroxyde d'hydrogène (Équation 2).

H202 + Fe2+ HO' + HO + Fe3+
Équation 2 Lorsqu'un piégeur de radicaux ou antioxydant est présent en solution, une compétition avec dABTS s'installe pour la réduction des radicaux hydroxyles, ce qui se traduit par une diminution de l'absorbance (Abs) à 450 nm.
Le pourcentage de radicaux hydroxyles converti en ions hydroxyles (%
conversion) par le composé d'intérêt peut être calculé selon la Formule 1 AbsABTS - AbsABTS + Produit) conversion = x 100 AbSABTS
Formule 1 La capacité antioxydante d'un composé peut alors être exprimée sous forme d'IC50, reflétant la concentration à laquelle 50% des radicaux hydroxyles ont été réduits par le composé testé.
Ainsi, les composés à tester, ainsi que le Trolox , ont été solubilisés dans l'éthanol de manière à obtenir des solutions à 1 mM. Par des dilutions en cascades, nous avons obtenu une gamme de concentrations allant de 1 mM à 10 nM. Ensuite, 90 L
d'un mélange eau-éthanol 1-1 ont été ajoutés sur une plaque ELISA 96 puits, suivis de 15 L d'une solution aqueuse d'ABTS à 1 mM, 15 L d'une solution aqueuse de Fe2SO4 à 0,5 mM, 15 .tL de chaque composé à tester à des concentrations différentes puis 15 L d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 100 mM. Les mélanges ainsi obtenus ont été agités à température ambiante, à l'abri de l'air pendant

30 minutes, puis la valeur de l'absorbance à 405 nm a été mesurée. La capacité à réduire les

31 radicaux hydroxyles de chacun des composés est déterminée par la diminution de l'absorbance à 450 nm, la solution contrôle étant composée d'éthanol pur.
Le test à l'ABTS a donc été effectué par comparaison avec le Trolox . Les mêmes gammes de 10 nm à 1 mM des indoles la, lc, lg, li, 2a, 4c, 2g, 2h, et 2i ont été
testées. Les résultats sont présentés sur le Tableau 2 suivant.
Tableau 2 Composé IC50 SEMa (mM) Trolox 0,55 0,02 (n=9)2a 0,81 0,14 (n= 12) 2c 0,62 0,05 HN (n= 19) 2g 0,67 0,01 N
I s- - 4 2h 0,34 0,01 HN

~_ N oH 2i 0,73 0,01 HN
a SEM : Ecart standard à la moyenne obtenu sur trois expériences indépendantes.

De façon intéressante, les composés aminés de l'invention testés 2a, 2c, 2g, 2h et 2i, possèdent des IC50 proches de celle du TroloX mettant en évidence l'intérêt de la fonction amine dans l'activité antioxydante de ces composés. La présence de doubles liaisons intrachaîne améliore l'activité antioxydante conduisant à une IC50 inférieure à
celle du TroloX (voir 2h).

= Test cellulaire à la Dihydrorhodamine 123 La dihydrorhodamine 123 ou DHR123 est utilisée comme indicateur d'espèces réactives de l'oxygène (ROS). Non chargée et non fluorescente, elle traverse passivement la membrane cellulaire avant d'être oxydée, au contact de radicaux libres, en rhodamine 123 émettant une fluorescence verte.

32 / Radicaux libres / \ \

Dihydrorhodamine 123 Rhodamine 123 Lorsque les cellules sont traitées par un antioxydant, la quantité de ROS
intracellulaire se voit diminuée. Cette diminution se traduit, en présence de DHR123, par une décroissance quantifiable de la fluorescence émise.
Afin de pouvoir conclure quant au rôle de la capacité antioxydante des composés de l'invention dans l'activité neuroprotectrice observée, les cultures ont été
placées strictement dans les mêmes conditions que pour le test de neuroprotection/neuritogénèse. Ainsi les cultures ont été maintenues pendant huit jours en présence d'une concentration de 10 nM de chacun des dérivés tryptaminiques testés.
Au Sème jour in vitro (DIV 8), 50 M de DHR-123 (Sigma) ont été ajoutés et les cellules ont été incubées 30 minutes à 37 C. Elles ont ensuite été lavées trois fois, traitées à
nouveau par les composés de l'invention et placées dans un milieu dépourvu de rouge phénol. L'observation de neurones fluorescents vivants aussitôt photographiés peut ainsi être réalisée, la densité de fluorescence par neurone étant quantifiée sous microscope à fluorescence inversée par logiciel d'analyse d'images. Les résultats obtenus sont présentés sur le Tableau 3 suivant.
Tableau 3 Composé IF/ neurone (%) Contrôle 100,0 3,3 TroloX 44,0 2,8**
/ \ H
12 le 55,9 3,0**

N 11 OH li 56,5 2,7**

HN
J

4 lh 60,9 + 6,4**
HN I0 lv

33 PCT/EP2010/052596 / \ N 2 2c 47,8 + 4,7**
HN

N ,OH 2i 44,0 3,6**
HN

6 2h 43,7 + 5,2**
Q i - H
HN
H
H
92 le 55,9 + 3,0**

a Ecart standard à la moyenne obtenu sur trois expériences indépendantes.
**P<0,001 vs contrôle, One-way ANOVA, analyse post-hoc de Bonferronni Les neurones des cultures traitées par les dérivés tryptaminiques à 10 nM
possèdent une quantité cytoplasmique de ROS significativement diminuée par comparaison aux cultures non traitées, traduite par une diminution de 40-60%
de la fluorescence émise. Ces composés ont donc une activité antioxydante importante, de l'ordre de celle observée pour le composé de référence, avec toujours une meilleure activité des dérivés amines comparativement aux dérivés amides (voir li vs 2i, et lh vs 2h). Par ailleurs, la Figure 1 illustre la diminution de l'intensité de fluorescence émise dans les neurones après traitement par le composé lh à 10 nM, composé montrant la meilleure activité antioxydante, par comparaison au TroloX et au contrôle non traité.

La forte capacité antioxydante observée pour les dérivés tryptaminiques dans les conditions et aux concentrations permettant d'observer leur activité
neuroprotectrice, pourrait être un élément de réponse quant au mécanisme d'action de ces composés dans la composante neuroprotectrice.
Ces composés sont donc très intéressants puisqu'ils combinent à la fois un effet protecteur et régénératif, applicable dans le traitement de maladies neurodégénératives.

34 2.3. Etude du passage de la barrière hémato-encéphalique (BHE) Cette étude a été réalisée en utilisant le composé 2c comme composé selon l'invention.
Le but de cette étude est de vérifier par HPLC couplée à une spectrométrie de masse, la présence de la molécule 2c selon l'invention dans le parenchyme cérébral après un traitement sub-chronique du chlorhydrate de la molécule 2c (2c/HC1) par voie orale ou intra-péritonéale (IP).

= Matériels et méthodes Animaux : Des souris mâles RjOrl:SWISS, âgées approximativement de 5 semaines et pesant entre 20 et 24 g à leur arrivée (Centre d'élevage R Janvier, France) sont maintenues dans l'animalerie, à température constante (22 1 C) et sous hygrométrie contrôlée (55 + 20%), avec un cycle lumière/obscurité de 12 heures (8h00-20h00).
Durant la période d'acclimatation et de l'étude, les souris ont libre accès à
la nourriture et à la boisson. Toutes les expérimentations se sont déroulées en accord avec les conditions du décret n 2001-464 du 29 mai 2001 relatif aux expériences pratiquées sur les animaux.
Traitements : Deux traitements (par voie orale ou intra-péritonéale) sub-chroniques de 5 jours ont été réalisés :
- Traitement par voie intra-péritonéale (IP) :
La solution de chlorhydrate de 2c/HC1 à injecter est préparée dans le véhicule (10 %
Tween20 + 20 % DMSO + 70 % NaCI à 0,9% dans l'eau) à la concentration de 2,0 g/L.
Trois groupes ont été constitués :
(1) des souris qui ont reçu le véhicule par voie IP, à lOmL/kg (groupe N, n=4), (2) des souris traitées avec le 2c/HC1 par voie IP, à 20mg/kg et à 10mL/kg (groupe R, n=6), et (3) des souris contrôles qui n'ont reçu aucun traitement (n=2).

Les souris traitées R4, R5 et R6 ainsi que les souris véhicules Ni, N2, N3 et N4 ont reçu les traitements suivants :

Lundi Mardi Mercredi Jeudi Vendredi 15h20 12h10 13h45 12h45 17h30 :i 11h20 Euthanasie entre 15h20 et 17h40 Les souris traitées RI, R2 et R3 ont reçu les mêmes traitements que les souris précédentes sauf pour le jeudi où elles n'ont pas reçu le deuxième traitement :

Lundi Mardi Mercredi Jeudi Vendredi 15h20 12h10 13h45 12h45 11h20 Euthanasie entre 13h25 et 14h55 5 - Traitement par voie orale (per os) La solution de chlorhydrate de 2c à administrer est préparée dans le véhicule (0,5 %
Tween80 + 99,5 % carboxy-methyl cellulose à 1%, dans NaC1 à 0,9% dans l'eau) à
la concentration de 15,0 g/L.
10 Trois groupes ont été constitués :
(1) des souris qui ont reçu par voie orale le véhicule à lOmL/kg (Groupe V, n=4), (2) des souris traitées avec le 2c/HC1 par voie orale à 150mg/kg et à lOmL/kg (Groupe B, n=6), et (3) des souris contrôles qui n'ont reçu aucun traitement (n=2).
Toutes les souris sont traitées 2 fois par jour pendant 4 jours. Le 5ème jour elles reçoivent un dernier traitement et sont euthanasiées entre 3h00 et 7h30 après ce dernier traitement selon le schéma suivant :

Lundi Mardi Mercredi Jeudi Vendredi t 13h00 17h20 10h50 16h10 10h50 17h05 10h40 17h10 10h30 Euthanasie entre 13h30 et 18h00 Euthanasie : Les souris sont anesthésiées par une injection de 0,1 mL d'une solution de pentobarbital sodique à 6 % puis les souris sont perfusées, afin d'enlever les traces de sang du cerveau, avec une solution de NaC1 à 0,9 % qui contient de l'héparine (200 L
d'héparine choay à 5000 UI/mL dans un litre de NaC1 à 0,9 %). Chaque animal est perfusé avec au minimum 50 mL de cette solution. La souris est décérébrée. Le cervelet, le tronc cérébral et les bulbes olfactifs sont éliminés.
Le cerveau est disséqué en 3 parties selon le schéma présenté sur la Figure 2.
Les 3 parties du cerveau sont congelées dans l'isopentane à - 30 C pendant une minute, puis conservées séparément à - 80 C.
Méthode d'extraction : Chaque échantillon de cerveau est pesé, homogénéisé
dans le MeOH (100 gL de McOH pour 10 mg de tissu cérébral) puis mélangé par sonication.
Les suspensions ainsi obtenues sont centrifugées à 27 000 g pendant 10 minutes, à 4 C.
Les surnageants, dilués au demi dans le MeOH, sont transférés dans des vials HPLC
pour l'analyse du composé 2c par HPLC-MS/MS.
Cependant, afin de conserver des échantillons pour de futures analyses, seules les parties 1 des cerveaux de souris ont été extraites et analysées. Les 3 parties de cerveaux d'une souris de chaque groupe (IP et per os) ont néanmoins été extraites afin de vérifier que le composé 2c ne se distribue pas préférentiellement dans l'une de ces 3 parties.
Tous les échantillons sont stockés à - 4 C avant et pendant la durée des analyses. Toutes les analyses de tous les échantillons sont réalisées le même jour, dans les mêmes conditions.
Contrôles positifs et négatifs : Les cerveaux des souris véhicules sont utilisés pour les contrôles positifs et négatifs. Pour le contrôle positif, 10 gl d'une solution de chlorhydrate de 2c à 1 g/mL sont ajoutés au surnageant et dilués au demi dans le McOH avant transfert dans un vial HPLC.

Préparation de la gamme de composé 2c : Une solution mère de chlorhydrate de 2c est préparée extemporanément dans le McOH à une concentration de 1,0 mg/mL.
Toutes les autres solutions sont préparées par dilution de cette solution mère dans le McOH puis stockées à - 4 C.
Instrumentation et conditions pour l'analyse du composé 2c : La détection et la quantification, basée sur l'aire des pics, sont réalisées par HPLC-MS/MS, en mode MRM.
Le système HPLC est composé d'une pompe Dionex Ultimate 3000 équipée d'un injecteur automatique d'échantillon Dionex WPS-3000PL. Le spectromètre de masse utilisé est un Water-Micromass Quattro Ultima équipé d'une source d'ionisation à
electrospray et d'un analyseur triple quadrupole. L'acquisition des données et des analyses est effectuée via Masslynx 3.5.
La chromatographie liquide est réalisée en mode isocratique avec une colonne XBridgeTM (Waters) C18, 150 x 2,1 mm, possédant une taille de particule de 3,5 m. La phase mobile est composée d'un mélange de deux phases A et B, en proportions 3/97.
La phase A est composée de 0,2 % de triéthylamine dans l'eau (v/v) (pH=11,5).
La phase B est composée de 0,2 % de triéthylamine dans le McOH (v/v). Le débit est fixé à
0,2 mL/min et le volume d'injection est de 10 L.
Le spectromètre de masse est relié au système HPLC en utilisant une source d'ionisation à electrospray. Une vanne de commutation est programmée pour envoyer les trois premières minutes de la chromatographie à la poubelle dans le but d'éviter l'accumulation de sel au niveau du capillaire de la source. Le voltage du capillaire est réglé à 3000 V et le voltage du cône à 50 V, la température de la source est réglée à
120 C, le gaz de désolvatation (N2) est réglé à un débit de 463 L/h et la température à
350 C. Les spectres de masses sont obtenus en mode positif. Les paramètres sont optimisés pour obtenir le maximum d'ion moléculaire à m/z 385,66, correspondant au composé 2c. La collision est obtenue avec un gaz inerte (argon) et l'énergie est fixé à
22eV en mode MS/MS pour détecter les transitions de masse : m/z 385,66 -*
254,23 et 385,66 -* 144,17.
La droite d'étalonnage est réalisée à partir d'une gamme de standard comportant 7 concentrations (0,5 gg/mL; 0,1 gg/mL; 20 ng/mL; 4 ng/mL; 0,8 ng/mL; 0,16 ng/mL
et 0,08 ng/mL).

= Résultats Validation de la méthode HPLC-MS/MS : L'aire des pics HPLC est fonction de la concentration du composé 2c dans la gamme de 0,16 à 500,00 ng/mL avec un R2 de 0,9997. La limite de détection est de 0,08 ng/mL avec un rapport S/B
(signal/bruit) de 3 :1. Le temps de rétention du composé 2c est de 5,3 minutes et le temps d'acquisition est de 8 minutes.
Concentration du composé 2c dans les extraits de cerveaux :
- Voie per os :
Les chromatogrammes obtenus sont représentés dans la Figure 3. Le composé 2c n'est pas détectable dans l'extrait de cerveaux de souris traitées par du véhicule et est quantifié à 20,31 ng/mL dans le contrôle positif. Le composé 2c est quantifié
dans les extraits de cerveaux de souris traitées per os à la concentration moyenne de 21,25 ng/mL 0,82 SEM (n=8).

- Voie IP :
Les chromatogrammes obtenus sont représentés dans la Figure 4. Le composé 2c n'est pas détectable dans l'extrait de cerveaux de souris traitées par du véhicule et est quantifié à 19,48 ng/mL dans le contrôle positif. Le composé 2c est quantifié
dans les extraits de cerveaux de souris traitées IP à la concentration moyenne de 14,73 ng/mL f 0,58 SEM (n=8).

= Discussion et conclusion Le composé 2c est capable de traverser in vivo la BHE après administration IP
et per os de 2c/HC1. Le traitement par voie per os à 300 mg/kg/j permet d'obtenir des concentrations environ 1,5 fois plus élevées que celle obtenues après un traitement IP à
20 mg/kg/j.

ABREVIATIONS UTILISEES :

EDC Chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide ESI-MS Spectroscopie de Masse en mode électrospray GC Chromatographie en phase gazeuse HOBt N-Hydroxy benzotriazole HPLC Chromatographie Liquide Haute Performance HPLC-MS/MS Chromatographie Liquide Haute Performance couplé à un spectromètre de masse en tandem IR Absorption Infra Rouge MRM Acquisition de transitions multiples RMN 'H Résonnance Magnétique Nucléaire du proton RMN 13 C Résonnance Magnétique Nucléaire du carbone

Claims (15)

1. Composé de formule (I) suivante :

ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, un stéréoisomère ou un mélange de stéréoisomères en toutes proportions, en particulier un mélange d'énantiomères, et notamment un mélange racémique, dans laquelle:
- X1 représente un groupe CH2 ou C=O, - X2 représente une chaîne hydrocarbonée linéaire, saturée ou insaturée, comportant de 8 à 24 atomes de carbone, - R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe OH ou (C1-C6)alcoxy, tel que méthoxy, et - R2 représente un groupe CH3 ou CH2OR3, avec R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C6)alkyle, CO-(C1-C6)alkyle ou NH-(C1-C6)alkyle.
pour son utilisation en tant que médicament, notamment en tant que médicament neurotrophique ou neuroprotecteur, destiné avantageusement au traitement ou à
la prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux.

2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (Ia) suivante:

dans laquelle:

- représente indépendamment une liaison simple ou double, - X1, R1 et R2 sont tels que définis à la revendication 1, et - m représente un nombre entier supérieur ou égal à 1, et n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier supérieur ou égal à 0 avec 8 <m+n+p+4<=24.

3. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (Ib) ou (Ic) suivantes :

pour lesquelles - R1, R2 et X1 sont tels que définis à la revendication 1, - q représente un nombre entier compris entre 8 et 24, et - m, n et p sont tels que définis à la revendication 2.

4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi :

5. Composé de formule (I) suivante :

ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, un stéréoisomère ou un mélange de stéréoisomères en toutes proportions, en particulier un mélange d'énantiomères, et notamment un mélange racémique, dans laquelle:
- X1 représente un groupe CH2 ou C=O, - X2 représente une chaîne hydrocarbonée linéaire, saturée ou insaturée, comportant de 8 à 24 atomes de carbone, - R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe OH ou (C1-C6)alcoxy, tel que méthoxy, et - R2 représente un groupe CH3 ou CH2OR3, avec R3 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C6)alkyle, CO-(C1-C6)alkyle ou NH-(C1-C6)alkyle.

à l'exclusion des composés de formule :

, avec u = 14,16 à 18 ou 20 à 24.

6. Composé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (Ia) suivante :

dans laquelle:

représente indépendamment une liaison simple ou double, - X1, R1 et R2 sont tels que définis à la revendication 1, et - m représente un nombre entier supérieur ou égal à 1, et n et p représentent, indépendamment l'un de l'autre, un nombre entier supérieur ou égal à 0 avec 8 <= m + n + p + 4 <= 24.

7. Composé selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (Ib) ou (Ic) suivantes :

pour lesquelles - R1, R2 et X1 sont tels que définis à la revendication 1, - q représente un nombre entier compris entre 8 et 24, et - m, n et p sont tels que définis à la revendication 2.

8. Composé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi :

9. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

10. Composition pharmaceutique selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend un autre principe actif, utile notamment dans le traitement ou la prévention de maladies neurodégénératives, et avantageusement choisi parmi des inhibiteurs d'acétylcholinestérase tels que le donézépil, la galanthamine, la rivastigmine, la mémantine et la tacrine ; des inhibiteurs de monoamines oxydase tels que la sélégiline ;
des inhibiteurs de catécholamines O-méthyltransférase tels que l'entacapone ;
des inhibiteurs glutamatergiques tels que l'amantadine et le baclofène ; des agonistes cholinergiques tels que la sabcoméline ; des agonistes dopaminergiques tels que le pergolide, le cabergoline, le ropirinole et le pramipexole ; des analogues ou précurseurs de neuromédiateurs tels que la L-3,4-dihydroxyphénylalanine ; et des anticholinergiques tels que le trihexyphénidyl et la tropatépine.

11. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 ou 10, pour son utilisation en tant que médicament, notamment en tant que médicament neurotrophique ou neuroprotecteur, destiné avantageusement au traitement ou à la prévention de maladies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux.

12. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
(b) couplage entre la tryptamine et un composé de formule (II) suivante :
Z-X2-R2 (II) pour laquelle Z représente une fonction acide carboxylique sous forme libre ou sous forme activée et R2 et X2 sont tels que définis à la revendication 1, pour donner un composé de formule (I-1) suivante :
pour laquelle R1, R2 et X2 sont tels que définis à la revendication 1, (d) éventuellement réduction de la fonction carbonyle du composé de formule (I-1) obtenu à l'étape (a) précédente pour donner un composé de formule (I-2) suivante pour laquelle R1, R2 et X2 sont tels que définis à la revendication 1, et (e) séparation du milieu réactionnel du composé (I-1) ou (I-2) obtenu à
l'étape précédente.

13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'étape (a) est réalisée avec un composé de structure (II) pour lequel Z = CO2H en présence d'un agent de couplage, tel que le diisopropylcarbodiimide, le dicyclohexylcarbodiimide, le chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide, le carbonyldiimidazole, le 2-H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetraméthyluronium hexafluorophosphate, le 2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetraméthyluronium tetrafluoroborate ou encore le O-(7-azobenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium hexafluorophosphate, éventuellement associé à un auxiliaire de couplage tel que le N-hydroxy succinimide, le N-hydroxy benzotriazole, le 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazole, le 1-hydroxy-7-azabenzotriazole ou le N-hydroxysylfosuccinimide.

14. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'étape (a) est réalisée avec un composé de structure (II) pour lequel Z = COCI, éventuellement en présence d'une base telle que la triéthylamine.

15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que l'étape (b) est réalisée en présence d'un hydrure tel que LiAIH4.