BRPI0924653B1

BRPI0924653B1 - Composto de ferro-oligossacarídeo, composição e uso de deste composto

Info

Publication number: BRPI0924653B1
Application number: BRPI0924653-3A
Authority: BR
Inventors: Hans Andreasen
Original assignee: Pharmacosmos Holding A/S
Priority date: 2009-03-25
Filing date: 2009-03-25
Publication date: 2019-10-08
Also published as: PH12015500891A1; US20210130505A1; PT3156075T; US20140364598A1; HUE030866T2; HRP20170230T1; US10865255B2; BRPI0924653A2; PL2411053T3; RS61104B1; US20190135947A1; EA201190214A1; EP3821910A1; LT2411053T; US20120010166A1; AU2009342799B2; CY1123651T1; PT2411053T; JP5426010B2; SI3156075T1

Abstract

composto de ferro-oligossacarídeo, composição e uso de deste composto a invenção refere-se a um composto de ferro-oligossacarídeo com estabilidade aprimorada, compreendendo um oligossacarídeo hidrogenado em associação estável com oxihidróxido férrico, sendo o teor do sacarídeo dimérico no dito oligossacarídeo hidrogenado de 2,9% em peso ou inferior, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado. em outros aspectos, propõe-se um processo para preparação do dito composto, bem como o uso do dito composto para a preparação de uma composição para tratamento da anemia ferropriva.

Description

“COMPOSTO DE FERRO-OLIGOSSACARÍDEO, COMPOSIÇÃO E USO DE DESTE COMPOSTO” [001]A presente invenção relaciona-se, sob um primeiro aspecto, a um composto de ferro-oligossacarídeo com estabilidade aprimorada. Em um segundo aspecto, a invenção relaciona-se a um processo para preparação do composto de ferrooligossacarídeo de acordo com o primeiro aspecto da invenção. Além disso, em um terceiro aspecto, a invenção relaciona-se ao uso do dito composto para preparação de uma composição para tratamento da anemia ferropriva.

[002]Em razão de sua ocorrência predominante, a anemia ferropriva continua sendo uma questão de saúde global de grande preocupação. Em seres humanos, e do mesmo modo em animais domésticos, ela é uma das condições patológicas observadas com maior frequência.

[003]Embora a anemia ferropriva possa muitas vezes ser prevenida ou tratada por administração oral de preparações contendo ferro, em muitos casos, prefere-se o uso de preparações de ferro administráveis por via parenteral para evitar variações na biodisponibilidade das administrações orais e para assegurar a administração eficaz.

[004]Portanto, os profissionais da área médica e veterinária dispõem, há muitos anos, de preparações contendo ferro para uso parenteral, isto é, administração subcutânea, intramuscular ou intravenosa.

[005]Embora várias substâncias contendo ferro tenham sido usadas ou sugeridas como componentes em preparações injetáveis por via parental contra a anemia ferropriva, as preparações mais comuns aceitas atualmente são aquelas que incluem um produto combinado de oxihidróxido de ferro (ou hidróxido de ferro) associado a um sacarídeo, particularmente dextrano ou dextrina. O dextrano é um carboidrato polimérico produzido pelo microorganismo Leuconostoc mesenteroides, enquanto a dextrina é um produto de despolimerização de amido.

[006]Existem preparações de ferro adicionais para o tratamento de anemia fer

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 14/38

2/18 ropriva, como os compostos ferro-sucrose e ferro-gliconato. Esses compostos ligamse ao ferro com menos força, resultando em uma maior concentração de íons Fe3+ livres, o que aumenta a toxicidade dos compostos de ferro quando administrados por via parental e pode levar a um distúrbio de digestão quando administrados oralmente.

[007]Uma preparação contendo ferro para injeção parental deveria, obviamente, atender a algumas exigências, incluindo a disponibilidade imediata do ferro para síntese da hemoglobina, a ausência de efeitos colaterais locais ou gerais e a estabilidade sob estocagem, possibilitando um prazo de estocagem satisfatório à temperatura ambiente.

[008]Em alguns casos, é desejável administrar uma preparação de ferro por via oral por ser mais cômodo ao indivíduo. Uma desvantagem frequente encontrada depois da administração oral de preparações de ferro é a má digestão. As preparações de ferro ideais deveriam suprir ferro ao corpo no trato gastrintestinal de forma controlada, de modo que forneçam ferro suficiente a ser assimilado pelo epitélio intestinal e não tenham influência adversa na digestão em si.

[009]Preparações de ferro-sacarídeo para tratamento de anemia são comercializadas há décadas, e muitas variações no processo de fabricação e na seleção dos materiais iniciais foram sugeridas com o objetivo de melhorar a estabilidade de tais preparações e diminuir a gravidade dos efeitos colaterais encontrados em sua administração.

[0010]Os resultados obtidos nas investigações, nos testes e na experiência prática, indicam que os problemas acima mencionados estão relacionados à distribuição de massa molecular dos sacarídeos empregados.

[0011]É geralmente reconhecido que os dextranos de alta massa molecular envolvem um risco maior de reações anafiláticas do que os dextranos de baixa massa molecular, mas também foi descoberto que a presença de carboidratos de baixa

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 15/38

3/18 massa molecular, tais como monossacarídeos, resultantes de uma etapa inicial de hidrólise, pode igualmente criar dificuldades. Quando reagido com ferro por precipitação do hidróxido férrico em uma solução de um sacarídeo com uma distribuição de massa molecular ampla, os carboidratos de baixa massa molecular combinam-se com ferro para formar seus próprios complexos ou compostos de associação. Os últimos compostos são menos estáveis que o composto de ferro-oligossacarídeo desejado de massa molecular moderada, causando a precipitação do hidróxido ou oxihidróxido de ferro e/ou reações de formação de gel, possivelmente resultado em uma solidificação completa da solução dentro de dias ou meses.

[0012]Em vista da importância da questão, direcionou-se uma atenção considerável para o desenvolvimento dos compostos de ferro-oligossacarídeo, em que o componente oligossacarídeo apresenta uma distribuição de massa molecular apropriada.

[0013]O documento GB 1,076,219 revela um método para produção de um complexo contendo ferro, um dextrano ou dextrina de baixa massa molecular e sorbitol para profilaxia ou tratamento da anemia ferropriva.

[0014]O documento US 4,927,756 descreve um processo para a produção de um composto de ferro-dextrano, em que a massa molecular dos dextranos está na faixa de 2000-4000.

[0015]O documento WO 1999/48533 revela dextranos de ferro que consistem de dextranos com uma massa molecular ponderal média de 700 a 1400 e uma massa molecular em número de 400 a 1400 Daltons em associação estável com oxihidróxido férrico. Os complexos de ferro-dextrano revelados dão origem a um número reduzido de incidências de efeitos colaterais anafiláticos.

[0016]O documento WO 2003/087164 revela compostos de ferro-dextrano que consistem de dextrinas com uma massa molecular ponderal média de 3.000 Daltons ou inferior e uma massa molecular média em número de 400 Daltons ou superior em

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 16/38

4/18 associação estável com oxihidróxido de ferro. Os ditos compostos apresentam um baixo grau de toxicidade.

[0017]À luz dos métodos conhecidos e dos compostos mencionados anteriormente, no entanto, ainda há uma necessidade de melhorar ainda mais a estabilidade dos compostos de ferro-oligossacarídeo utilizáveis para a preparação das composições para o tratamento ou profilaxia da anemia ferropriva, de modo que eles possam ser armazenados por um período estendido à temperatura ambiente sem deteriorização significativa das suas propriedades mais importantes.

[0018]É, portanto, um objeto da presente invenção proporcionar um composto de ferro-oligossacarídeo com estabilidade aprimorada, próprio para inserção em composições para o tratamento ou profilaxia da anemia ferropriva. O composto deveria ainda satisfazer aos critérios usuais dentro da técnica, a saber: 1) alta disponibilidade do ferro para adsorção no intestino sem causar problemas de digestão quando administrado via oral; 2) provisão do ferro em uma forma que seja imediatamente adsorvido no intestino; 3) alta disponibilidade do ferro sem risco de toxicidade causado por grande concentração local de Fe3+ quando administrado por via parenteral; 4) risco mínimo de reação anafilática; 5) alto teor de ferro, e 6) capacidade de formar soluções compreendendo uma grande quantidade de ferro, soluções estas que satisfazem aos requisitos básicos para composições farmacêuticas, isto é, sendo suscetíveis à esterilização, preferencialmente por autoclavagem, e que são também estáveis durante a estocagem por um longo período à temperatura ambiente.

[0019]Para atender a esse objetivo, um composto de ferro-oligossacarídeo é proporcionado de acordo com o primeiro aspecto da invenção, composto este que compreende um oligossacarídeo hidrogenado em associação estável com oxihidróxido de ferro, o oligossacarídeo hidrogenado tendo uma massa molecular ponderal média (Mw) menor que 3.000 Daltons, de preferência aproximadamente 1.000 Daltons, o teor do sacarídeo dimérico no dito oligossacarídeo hidrogenado sendo de

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 17/38

5/18

2,9% em peso ou inferior, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado.

[0020]A título de exemplo, o material inicial para a produção do oligossacarídeo hidrogenado usado de acordo com a invenção pode ser Dextran 1, que está em conformidade com a Farmacopeia Europeia, entrada 01/2009:1506. Esse material inicial tem, de acordo com a Farmacopeia Europeia, as seguintes especificações: massa molecular ponderal (Mw): 850 a 1150 Daltons, fração com uma ou duas unidades de sacarídeo (isto é, dímero): menor que 15% e fração com mais de 9 unidades de sacarídeo: menor que 20% em peso. Geralmente, a quantidade de sacarídeos diméricos no Dextrano 1 está em torno de 8% em peso. Pela remoção de moléculas menores por, tal como filtração por membrana, a quantidade desejada de sacarídeos diméricos de 2,9% em peso ou inferior é obtida.

[0021]No presente contexto e no que segue, os termos “massa molecular ponderável média” e “massa molecular média em número” devem ser considerados como os respectivos pesos moleculares do oligossacarídeo no momento em que ocorre a formação dos complexos, baseado em todas as moléculas de oligossacarídeo do monômero e acima.

[0022]Constatou-se surpreendentemente que a quantidade de dímero no oligossacarídeo entrando em associação estável com ferro(III)-oxihidróxido é um fator crucial em relação a estabilidade do composto final e que o efeito é exercido de uma maneira altamente não-linear. Geralmente, o ferro(III)-oxihidróxido é o único componente usado na composição de sacarídeo de ferro de acordo com a invenção. No entanto, para certas aplicações, tais como agentes de contraste com capacidades magnéticas, deseja-se usar a mistura de ferro(II)-óxido e ferro(III)-oxihidróxido. O composto de ferro-oligossacarídeo da invenção inclui compostos preparados a partir de tal mistura.

[0023]De acordo com a invenção, para apresentar estabilidade satisfatória, o teor do dímero deve ser reduzido a 2,9% em peso ou menos. Sendo assim, por meio

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 18/38

6/18 do controle da quantidade de dímero no oligossacarídeo antes da reação com ferro, um composto estável de ferro-oligossacarídeo é obtido de maneira eficaz e econômica. No caso do dextrano ou da dextrina, ambos os quais são polímeros de glicose compreendendo ligações α 1,6, bem como ligações α 1,4, os dímeros em questão são isomaltose (dois monômeros de glicose unidos por uma ligação α 1,6) e maltose (dois monômeros de glicose unidos por uma ligação α 1,4).

[0024]De preferência, o teor do monômero sacarídeo no referido oligossacarídeo hidrogenado é de 0,5 % em peso ou inferior, baseado no peso total do oligossacarídeo hidrogenado. Isso serve para minimizar o risco de efeitos tóxicos devido à liberação de íons férricos livres dos compostos de monômero e ferro, especialmente quando presentes em preparações para administração parenteral. Nas referidas preparações, uma concentração elevada de monômero sacarídeo livre, tal com glicose, também pode ser indesejável per se.

[0025]De acordo com uma concretização da invenção, o oligossacarídeo hidrogenado empregado é dextrano hidrogenado com uma massa molecular ponderal média (Mw) entre 500 e 3000 daltons, uma massa molecular média em número (Mw) superior a 500 Daltons, em que 90% em peso do referido dextrano tem pesos moleculares inferiores a 3500 Daltons, e o Mw dos 10%, em fração de peso, do dextrano com os maiores pesos moleculares é inferior a 4500 Daltons. De preferência, o dextrano foi submetido a processos de membrana com um valor de corte entre 340 e 800 Daltons. Dessa forma, assegura-se que incidentes de efeitos colaterais indesejados sejam minimizados.

[0026]Em uma concretização alternativa, o oligossacarídeo hidrogenado é dextrina hidrogenada com uma massa molecular média em número (Mn) igual ou maior do que 500 Daltons, em que a fração de 10% da referida dextrina hidrogenada com a maior massa molecular tem um amassa molecular ponderal média (Mw) inferior a 4500 Daltons, e 90% das dextrinas têm uma massa molecular inferior a 3500 Dal

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 19/38

7/18 tons. A referida dextrina tem baixa toxicidade e uma viscosidade apropriada que permite a manipulação fácil e confiável das soluções da dextrina.

[0027]De preferência, o composto de ferro-oligossacarídeo de acordo com a invenção tem uma massa molecular aparente (Mp) de 120 a 180 kD. De preferência, a massa molecular aparente (Mp) está entre 130 e 160 kD.

[0028]Deduz-se que a massa molecular aparente seja medida em uma solução aquosa autoclavada preparada mediante a dissolução, em 1.000 mL de água, de 400 g de pó de oligossacarídeo hidrogenado em solução estável com oxihidróxido férrico, sendo a quantidade de ferro (Fe) do pó de 25 % em peso. Soluções compreendendo os compostos da invenção preparados por outro método ou em outra concentração podem resultar em um massa molecular aparente que diverge do presente método.

[0029]A massa molecular aparente é medida usando a cromatografia por exclusão de tamanho. As colunas são baseadas em partículas de sílica contendo grupos diol polares. A calibração é realizada usando dextrano e dextrano-ferro como padrões e azida de sódio 0,1% como eluente.

[0030]A quantidade de ferro no composto de ferro-oligossacarídeo da invenção pode variar de acordo com o uso a que a composição final se destina. Geralmente, a quantidade de ferro no composto de ferro-oligossacarídeo é de 50 % em peso ou inferior. De preferência, a quantidade de ferro-oligossacarídeo é superior a 10 % em peso.

[0031]Em uma concretização, o teor de dímero no oligossacarídeo hidrogenado é de 2,5 % em peso ou inferior, como alternativa, 2,3 % em peso ou inferior.

[0032]Sem ter a intenção de se limitar a uma teoria específica, supõe-se que o dímero, em pequenas quantidades, coordena-se com a partícula coloidal contendo o complexo entre o oligossacarídeo e FeOOH. Quando o teor de dímero excede 2,9%, o dímero aparentemente atua como “dissolvente” da partícula coloidal, tornando o

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 20/38

8/18 composto de oligossacarídeo e FeOOH instável e suscetível à gelatinização com o tempo.

[0033]Em uma concretização da invenção, o composto de ferro-oligossarídeo é um constituinte único ou parcial de um pó seco que, de preferência, tem um teor de ferro de 10 a 50 % em peso. Como alternativa, o composto de ferro-oligossacarídeo pode ser dissolvido ou disperso em um líquido aquoso, de preferência produzindo um teor de ferro na solução ou dispersão resultante de 1 a 30% p/v. Quando usado como líquidos de injeção, líquidos compreendendo quantidades elevadas de ferro oferecem a vantagem de que uma quantidade menor do líquido precisa ser injetada no indivíduo sendo tratado, o que constitui evidentemente uma vantagem para o indivíduo sendo tratado, assim como para a pessoa que realiza o tratamento.

[0034]De acordo com um aspecto adicional da invenção, propõe-se uma composição, a dita composição compreendendo uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção, assim como pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. A composição pode ser adotada para administração parenteral, oral ou qualquer outra forma de administração.

[0035]Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de ferropolissacarídeo de acordo com a invenção pode ser preparada usando procedimentos que são bem conhecidos pelos especialistas da área. Exemplos de composições para uso oral incluem comprimidos, cápsulas, xaropes, pastas e misturas.

[0036]As composições farmacêuticas compreendendo um composto de ferrooligossacarídeo de acordo com a invenção podem ser formuladas com agentes nutricionais ou farmacêuticos adicionais, tais como vitaminas, de preferência vitaminas hidrossolúveis, micronutrientes, como metais residuais, por exemplo, cobalto, cobre, zinco ou selênio, agentes bacteriostáticos, ou antibióticos, como tilosina. As vitaminas insolúveis em água podem até mesmo ser emulsificadas em uma solução aquosa compreendendo o composto de ferro-oligossacarídeo de acordo com a invenção

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 21/38

9/18 pelo uso de um emulsificante adequado.

[0037]De acordo com ainda um aspecto da invenção, propõe-se um processo para preparação de um composto de ferro-oligossacarídeo, processo este que compreende as etapa de:

(a) hidrolisar um polissacarídeo de modo a reduzir sua massa molecular, (b) hidrogenar o oligossacarídeo resultante para converter os grupos aldeído funcionais em grupos álcool, (c) fracionar o oligossacarídeo hidrogenado de acordo com a massa molecular, de modo que a fração purificada tenha uma massa molecular ponderal média igual ou inferior a 3.000 Daltons, (d) combinar o hidrogenado fracionado resultante como uma solução aquosa com pelo menos um sal férrico hidrossolúvel, (e) adicionar uma base à solução aquosa resultante para formar o hidróxido férrico, e (f) aquecer a solução básica resultante para transformar o hidróxido férrico em oxihidróxido férrico em associação com o referido oligossacarídeo.

em que a etapa (c) compreende um procedimento de purificação por um ou mais processos de membrana com um valor de corte entre 340 e 800 Daltons, procedimento que continua até que o teor do sacarídeo dimérico na fração purificada do oligossacarídeo tenha sido reduzida a 2,9 % em peso ou menos, baseado no peso total do oligossacarídeo hidrogenado. Em princípio, a purificação poderia alternativamente ser realizada usando outros procedimentos para fracionamento dos oligossacarídeos que sejam adequados para fracionamento em uma faixa reduzida de pesos moleculares, por exemplo, métodos cromatográficos. No entanto, prefere-se a purificação por processos do tipo membrana. Em todo caso, a técnica de fracionamento tradicional baseada em precipitações não é uma técnica de fracionamento adequada para a presente invenção, uma vez que a fração de oligossacarídeo obtida será extremamente difusa.

[0038]De preferência, a hidrólise inicial do polissacarídeo é realizada como uma hidrólise ácida, usando um ácido mineral forte, tal como ácido sulfúrico, ácido fosfórico ou ácido clorídrico.

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 22/38

10/18 [0039]Em uma concretização preferida, a hidrogenação do oligossacarídeo resultante é efetuada pela adição de borohidreto de sódio em solução aquosa.

[0040]De preferência, a associação obtida de oxihidróxido férrico com o oligossacarídeo é estabilizada pela adição de pelo menos um sal de um ácido hidróxi orgânico, de preferência selecionado dentre citratos.

[0041]De maneira vantajosa, a dita purificação por um ou mais processos de membrana com um valor de corte entre 340 e 800 Daltons é continuada até que o teor de monômeros na fração purificada do oligossacarídeo tenha sido reduzido a 2,9 % (p/p) ou inferior.

[0042]O termo polissacarídeo é usado no presente contexto para descrever qualquer polímero compreendendo unidades monoméricas de glicose. De acordo com uma concretização, o polissacarídeo aplicado é dextrano.

[0043]O dextrano é, de preferência, purificado na etapa (c) por um ou mais processos de membrana com um valor de corte adequado para reter o dextrano com massa molecular superior a 2.700 Daltons.

[0044]Ao adicionar a base na etapa (e) à solução aquosa resultante a fim de formar hidróxido férrico, a dita solução aquosa é preferencialmente ajustada para um pH superior a 10.

[0045]O aquecimento na etapa (f) é preferencialmente realizado a uma temperatura superior a 100oC até a solução se tornar uma solução coloidal preta ou marrom-escuro, que, após a neutralização, é filtrada, e um ou mais estabilizantes são adicionados. Um filtro útil é um filtro de 0,45 pm. Antes da adição dos referidos estabilizantes, a solução também pode ser submetida à purificação e estabilização adicional usando processos de filtração, aquecimento e membrana.

[0046]Finalmente, a solução básica resultante pode, em uma concretização preferida, ser seca para obter o composto de dextrano-ferro como um pó estável. Como alternativa, a operação de secagem pode ser omitida, de modo que um líquido de

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 23/38

11/18 injeção possa ser produzido a partir da solução purificada sem secagem intermediária do mesmo. O pó preferencialmente contém uma quantidade de ferro (Fe) no composto dextrano-ferro de 50% em peso ou inferior.

[0047]De acordo com uma concretização alternativa, o polissacarídeo empregado é amido ou dextrina. As dextrinas são geralmente produzidas pela despolimerização do amido usando meios de despolimerização conhecidos, como ácidos, bases ou enzimas. Dependendo de sua origem, o amido contém uma certa quantidade de ligações α 1,6-glicosídicas posicionadas em pontos de ramificação de uma cadeia de poli-glicose. Portanto, as dextrinas também podem conter uma fração similar baixa de ligações α 1,6-glicosídicas. Mediante o ajuste das condições para a despolimerização do amido, pode ser possível favorecer a ruptura de ligações α 1,4glicosídicas ou 1,6-glicosídicas, de modo que a razão entre esses tipos de ligações divirjam entre o amido original e as dextrinas preparadas.

[0048]Uma das propriedades características do amido e da dextrina são suas propriedades de gelificação. Ao contrário do dextrano, o amido e as dextrinas superiores se gelificam mesmo a concentrações modestas, o que torna a manipulação mais difícil.

[0049]As tendências de gelificação da amida e da dextrina são atenuadas quando a massa molecular é reduzida por hidrólise. No entanto, a hidrólise não deve ser tão extensa, pois as dextrinas pequenas, vide acima, podem dar origem a problemas de toxicidade quando combinadas com o ferro em um complexo de associação. De preferência, o amido é hidrolisado até ele não formar complexos coloridos fortes com iodo. As soluções de amido hidrolisado a esse grau compreendem quantidades altas de dextrinas na faixa de tamanhos moleculares desejada e apresentam uma viscosidade que é suficientemente baixa para permitir a manipulação fácil e precisa. Para a hidrólise do amido, o ácido clorídrico é um ácido preferido.

[0050]Antes de ser combinado com o ferro, a capacidade de redução das dex

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 24/38

12/18 trinas é diminuída. Isso pode ser feito mediante a hidrogenação dos grupos terminais aldeído das dextrinas em álcoois. Essa redução pode ser realizada usando procedimentos bem conhecidos. A hidrogenação usando borohidreto de sódio é preferida. Após a hidrogenação, a capacidade de redução das dextrinas deve ser inferior a 3,0 %, conforme determinado pelo método de oxidação cúprica.

[0051]Em uma concretização preferida, a dextrina na etapa (c) é purificada para obter uma massa molecular média em número (Mn) igual ou maior do que 500 Daltons, em que a fração de 10% da referida dextrina hidrogenada com a maior massa molecular tem uma massa molecular ponderal média (Mw) inferior a 4.500 Daltons, e 90% das dextrinas têm uma massa molecular inferior a 3.500 Daltons.

[0052]Em uma concretização particularmente preferida, a fração de 10% das dextrinas com os maiores pesos moleculares tem uma massa molecular média menor do que 4.000 Da, 90% das dextrinas tendo pesos moleculares menores do que 3.000 Daltons, e a fração de 10% com os menores pesos moleculares tem uma massa molecular ponderal média de 800 Daltons ou mais. Uma dextrina com tal distribuição de massa molecular apresenta uma viscosidade apropriada e oferece complexos de associação estáveis e seguros com o ferro.

[0053]Na etapa (d), a dextrina purificada e hidrogenada como uma solução aquosa é combinada com pelo menos um sal férrico hidrossolúvel, sendo um exemplo preferido do qual o cloreto férrico.

[0054]Na etapa (e), adiciona-se uma base à solução resultante para formar hidróxido férrico, de preferência para obter um pH superior a 8,5.

[0055]A solução básica resultante é aquecida na etapa (f) para transformar o hidróxido férrico em oxihidróxido férrico em associação com a dextrina, e, de preferência, o aquecimento é realizado a uma temperatura superior a 85oC até a solução se transformar em uma solução coloidal preta ou marrom-escura, que é filtrada após a neutralização, seguido da adição de um ou mais estabilizantes. Antes da adição

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 25/38

13/18 dos referidos estabilizantes, a solução também pode ser submetida à purificação e estabilização adicional usando processos de filtração, aquecimento e membrana.

[0056]Finalmente, a solução básica resultante pode, em uma concretização preferida, ser seca para obter o composto de ferro-dextrina como um pó estável. Como alternativa, a operação de secagem pode ser omitida, de modo que um líquido de injeção possa ser produzido a partir da solução purificada sem secagem intermediária do mesmo.

[0057]De acordo com um aspecto adicional da invenção, o uso de um composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção é proporcionado para a fabricação de uma composição terapêutica administrável por via parenteral ou oral para profilaxia ou tratamento da anemia ferropriva em pacientes humanos ou animais.

[0058]De acordo com outro aspecto da invenção, um oligossacarídeo hidrogenado é proporcionado, com uma massa molecular ponderal média (Mw) de menos de 3.000 Daltons e um teor de sacarídeo dimérico de 2,9 % em peso ou inferior, e, de preferência, um teor de monômeros de 0,5 % em peso ou inferior. O dito oligossacarídeo é um intermediário na produção do composto de ferro-oligossacarídeo de acordo com o primeiro aspecto da invenção.

[0059]De acordo com um aspecto adicional da invenção, propõe-se um processo para a preparação do referido oligossacarídeo hidrogenado intermediário de acordo com o último aspecto da invenção, processo este que compreende as etapas de:

(a) hidrolisar um polissacarídeo de modo a reduzir sua massa molecular, (b) hidrogenar o oligossacarídeo resultante para converter os grupos aldeído funcionais em grupos álcool, e (c) fracionar o oligossacarídeo hidrogenado de acordo com a massa molecular, de modo que a fração purificada tenha uma massa molecular ponderal média igual ou inferior a 3.000 Daltons, em que a etapa (c) compreende um procedimento de purificação por um ou mais processos de membrana com um valor de corte entre 340 e 800 Daltons, pro

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 26/38

14/18 cedimento que continua até que o teor do sacarídeo dimérico na fração purificada do oligossacarídeo tenha sido reduzida a 2,9 % em peso ou menos, baseado no peso total do oligossacarídeo hidrogenado. De preferência, a dita purificação é continuada até que o teor do monômero na fração purificada do oligossacarídeo tenha sido reduzido a 0,5 % em peso ou menos.

[0060]De acordo com um aspecto adicional da invenção, propõe-se um processo para a produção de um líquido de injeção contendo um composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção, processo este em que o composto de ferrooligossacarídeo na forma de um pó seco é dissolvido em um meio aquoso, o pH é ajustado, se necessário, adiciona-se opcionalmente um estabilizante, e o líquido é esterilizado por filtração antes de ser carregado em ampolas ou frascos, ou por tratamento em autoclave após ser carregado em tais ampolas ou frascos.

[0061]Como alternativa, um líquido contendo o referido composto é purificado, ajustado em relação ao teor de ferro e pH, estabilizado e esterilizado por filtração antes de ser carregado em ampolas ou frascos, ou por tratamento em autoclave após ser carregado nas referidas ampolas ou frascos.

[0062]Os compostos de ferro-oligossacarídeo de acordo com a invenção são altamente solúveis em água, o que torna possível preparar líquidos de injeção contendo uma quantidade elevada de ferro. De acordo com uma concretização da invenção, um líquido de injeção adaptado para administração em um humano é proporcionado, compreendendo 1 a 20 % (p/v) de ferro. Outra concretização da invenção proporciona um líquido de injeção adaptado para administração em um animal compreendendo 10 a 30 % (p/v) de ferro.

[0063]As soluções dos compostos de ferro-oligossacarídeo de acordo com a invenção podem ser esterilizadas por autoclavagem sem alterações físicas substanciais das soluções. Assim, as soluções podem ser autoclavadas sem alterações significativas aos pesos moleculares dos complexos ou à viscosidade da solução.

[0064]As soluções aquosas do composto de ferro-oligossacarídeo podem ser

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 27/38

15/18 conservadas usando quaisquer técnicas de conservação reconhecidas, tal como autoclavagem, filtração através de um filtro de 0,2 a 0,5 mícron sob condições estéreis ou pela adição de um agente conservante. Como exemplo de um agente conservante, pode-se mencionar o fenol a 0,5%.

[0065]No entanto, a autoclavagem é um método preferido para preservação das soluções aquosas do composto de acordo com a invenção. Prefere-se, particularmente, a autoclavagem a uma temperatura de 121 a 135oC por um período de 5 a 40 minutos.

[0066]As soluções aquosas do composto de ferro-oligossacarídeo de acordo com a invenção apresentam excelente estabilidade e não são sujeitas à deterioração por estocagem, tal como por gelificação ou precipitação.

[0067]De agora em diante, a presente invenção será ilustrada em detalhes pelos exemplos não limitantes a seguir.

EXEMPLOS

Hidrólise e hidrogenação do dextrano [0068]Uma quantidade de dextrano pré-hidrolisado coletado como permeado a partir de uma membrana com um valor de corte < 5.000 Daltons é adicionalmente hidrolisada ao pH de 1,5 a uma temperatura de 95oC.

[0069]A hidrólise é monitorada usando cromatografia de permeação em gel (GPC) e é terminada por resfriamento quando a massa molecular do material sendo hidrolisado é estimada como tendo alcançado o valor desejado, isto é, uma massa molecular ponderal média de 700 a 1.400 Daltons.

[0070]Na hidrólise, produz-se dextrano de baixo massa molecular, mas também glicose e iso-maltose. Após a hidrólise, o teor de dissacarídeos é de 7 a 8 % em peso.

[0071]Após o resfriamento e a neutralização, a quantidade de monômeros e dímeros é reduzida por processos de membrana com um valor de corte de 340 a 800 Daltons. A concentração de monossacarídeo e dissacarídeo na solução é moni

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 28/38

16/18 torada por cromatografia de permeação em gel, e o fracionamento continua até que uma concentração de dímeros de 2,9 % em peso, ou inferior, e uma concentração de monômeros de 0,5 % em peso, ou inferior, seja alcançada.

[0072]Em seguida, o teor do dextrano é determinado pela rotação óptica e a quantidade de açúcar redutor é determinada pelo uso do reagente de Somogyi. Para diminuir a capacidade de redução para menos de 3%, adiciona-se boroidreto de sódio à solução a um pH básico. A razão aplicada de boroidreto de sódio : dextrano fracionado é de 1 : 34,7.

[0073]A solução é neutralizada ao pH < 7,0 e subsequentemente deionizada. Os pesos moleculares médios e a distribuição de massa molecular são determinados cromatograficamente. A cromatografia revela que as condições desejadas, a saber, que 90% em peso do dextrano tem uma massa molecular menor do que 2.700 Daltons e que a massa molecular ponderal média (Mw) dos 10% em fração de peso do dextrano com a maior massa molecular é inferior a 3.200 Daltons, são satisfeitas. O rendimento final do dextrano após a deionização é de aproximadamente 50% em relação á quantidade inicial do dextrano pré-hidrolisado.

Síntese do dextrano-ferro [0074]120 kg de dextrano, conforme produzido acima, são misturados como uma solução de 18% com 150 kg de FeCb, 6H2O. À mistura agitada, 93 kg de Na2CO3 como uma solução aquosa saturada foram são adicionados, após o que o pH é elevado a 10,5 usando 24 litros de NaOH aquoso concentrado (27 % (p/v)).

[0075]A mistura assim obtida é aquecida a mais de 100oC até se transformar em uma solução coloidal preta ou marrom-escura. Após o resfriamento, a solução é neutralizada usando 12 litros de ácido clorídrico concentrado para obter um pH de 5,8. Após a filtração, a solução é purificada usando processos de membrana até o teor de cloreto na solução ficar menor do que 0,55 %, calculado com base em uma solução contendo 5 % (p/v) de ferro.

[0076]Se o teor de cloreto da solução for menor do que o desejado para obter

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 29/38

17/18 uma solução isotônica, adiciona-se cloreto de sódio e o pH é finalmente ajustado para 5,6, e a solução é filtrada através de um filtro de membrana de 0,45 pm (ou, como alternativa, de 0,2 pm).

[0077]A solução é seca por atomização e o pós de dextrano-ferro está pronto para comercialização ou para processamento adicional.

[0078]Como uma alternativa à secagem por atomização, a solução pode ser usada para produção direta de líquidos de injeção com um teor de ferro de, por exemplo, 10 % (p/v), como descrito acima.

[0079]Ao usar o pó de dextrano-ferro para produzir líquidos de injeção ou infusão, o pó é redissolvido em um meio aquoso, o pH é verificado, e, se necessário, ajustado, e a solução é carregada em ampolas ou frascos após ser esterilizada por filtração. Como alternativa, a esterilização pode ocorrer por autoclavagem após carregamento em ampolas ou frascos.

Análise da estabilidade dos compostos de ferro-oligossacarídeo em relação a seu teor de dímeros [0080]Uma variedade de compostos de ferro-oligossacarídeo com diferentes teores de dissacarídeos foram analisados com relação a sua taxa de hidrolise e a massa molecular aparente, ambos os quais indicam a qualidade dos respectivos compostos.

[0081]Presume-se que a taxa de hidrólise de Fe3+ a partir do composto de FeOOH e oligossacarídeo em solução ácida (0,24 M HCl; 0,9% NaCl) esteja correlacionada à taxa de depuração fisiológica do ferro. Portanto, a taxa de hidrólise, conforme expressa pela meia-vida (t1/2), é um parâmetro importante dos compostos investigados.

[0082]A hidrólise de Fe3+ foi medida por absorvência óptica a 287,3 nm.

[0083]Além disso, foi descoberto que a termoestabilidade dos oligossacarídeos de ferro é em função de sua massa molecular aparente (Mp). Dessa forma, tais compostos são instáveis em grau insatisfatório, se a massa molecular aparente ex

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 30/38

18/18 ceder acentuadamente um valor de 160.000 Daltons sob estocagem a uma temperatura elevada por três meses como soluções de teste.

Os resultados são apresentados na Tabela 1	. Tabela 1.
Composto de ferrooligossacarídeo n^o	Quantidade de dímero no oligossacaríde o	t1/2/horas	MP/Daltons	Avaliação após manter sob temperatura elevada por 3 meses
1	0,5%	25,5	133.490	estável
2	0,75%	21,7	149.532	estável
3	0,75%	22,5	146.353	estável
4	1,6%	21,6	138.053	estável
6	1,6%	18,3	145.250	estável
7	2,0%	20,9	150.983	estável
8	2,0%	20,3	142.664	estável
9	3,0%	12,1	152.516	instável
10	5,0%	12,2	185.433	instável
11	8,0%	9,7	215.143	instável

[0084]Como demonstra a Tabela 1, a massa molecular aparente está em uma faixa desejável, a saber, cerca de 130 kD a cerca de 160 kD, quando a quantidade de dímero no oligossacarídeo for menor do que 3 %. O mesmo é verdadeiro para a taxa de hidrólise, conforme expresso pela meia-vida. A meia-vida (T1/2) é definida como o tempo em que a absorvência é igual a metade do valor comparado com a absorvência em t=0.

[0085]O resultado ilustrado na Tabela 1 acima pode ser reorganizado em duas séries. Quando os resultados são traçados em um diagrama de t1/2 versus o teor de dímeros, a Fig. 1 aparece. As duas linhas retas dispostas nas duas séries mostram uma interceptação a um teor dimérico de 3,5 % em peso e t1/2 de 12,6 horas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de ferro-oligossacarídeo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende um oligossacarídeo hidrogenado em associação estável com oxihidróxido férrico, em que o dito oligossacarídeo hidrogenado compreende uma mistura de oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tendo a seguinte distribuição de massa molecular:

(i) uma massa molecular ponderal média (Mw) entre 500 e 3.000 Daltons;

(ii) uma massa molecular média em número (Mn) acima de 500 Daltons;

(iii) 90% em peso do dito oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tem massa molecular menor que 3.500 Daltons; e (iv) a Mw da fração 10% em peso contendo oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tendo maiores massas moleculares é inferior a 4.500 Daltons; e (v) um teor de sacarídeo dimérico de 2,9% em peso ou inferior, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado.
2. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que:

(i) uma massa molecular ponderal média (Mw) entre 500 e 1.600 Daltons;

(ii) 90% em peso do dito oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tem massa molecular menor que 2.700 Daltons;

(iii) a Mw da fração 10% em peso contendo oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tendo maiores massas moleculares é inferior a 3.200 Daltons; e (iv) um teor de sacarídeo dimérico de 2,3% em peso ou inferior, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado;

(v) o teor de sacarídeo monomérico no dito oligossacarídeo hidrogenado é 0,5% em peso ou inferior, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado, e em que a massa molecular aparente (Mp) do composto de ferro-oligossacarídeo é 130.000 a 160.000 Daltons.

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 32/38

2/5
3. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mw do dito oligossacarídeo hidrogenado é de 1.600 Daltons ou menos.
4. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que a MW do dito oligossacarídeo hidrogenado é aproximadamente 1.000 Daltons.
5. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mn do dito oligossacarídeo hidrogenado é de 1.600 Daltons ou menos.
6. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que 90% em peso do dito oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tem massa molecular menor do que 2.700 Daltons.
7. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mw da fração 10% em peso contendo oligossacarídeo hidrogenado de dextrano tendo maiores massas moleculares é inferior a 3.200 Daltons
8. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o teor do sacarídeo dimérico no oligossacarídeo hidrogenado é 2,5% em peso ou menos, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado.
9. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o teor do sacarídeo dimérico no oligossacarídeo hidrogenado é 2,3% em peso ou menos, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado.
10. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 9, CARACTERIZADO pelo fato de que o teor de sacarídeo

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 33/38

3/5 monomérico no dito oligossacarídeo hidrogenado é 0,5% em peso ou menos, com base no peso total do oligossacarídeo hidrogenado.
11. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que a quantidade de ferro (Fe) no composto de ferro-oligossacarídeo é maior que 10% em peso.
12. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a quantidade de ferro (Fe) no composto de ferro-oligossacarídeo é 50% em peso ou menos.
13. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que a quantidade de ferro (Fe) no composto de ferro-oligossacarídeo é 25% em peso ou menos.
14. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda um sal de um ácido hidróxi orgânico.
15. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o ácido hidróxi orgânico é ácido cítrico.
16. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que a massa molecular aparente (Mp) do composto de ferro-oligossacarídeo é entre 120.000 e 180.000 Daltons.
17. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 16, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mp do composto de ferro-oligossacarídeo é entre 130.000 e 180.000 Daltons.
18. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 17, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mp do composto de ferro-oligossacarídeo é entre 130.000 e 160.000 Daltons.
19. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 2, 16,

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 34/38

4/5

17 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de que a Mp do composto de ferrooligossacarídeo é medida por cromatografia de exclusão de tamanho.
20. Composto de ferro-oligossacarídeo, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto de ferro-oligossacarídeo é esterilizado por autoclavagem.
21. Composição CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma quantidade farmaceuticamente efetiva de composto de ferro-oligossacarídeo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 20, e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.
22. Composição, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que a dita composição tem um teor de ferro de 1 a 20% em peso por volume.
23. Composição, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que a dita composição tem um teor de ferro de 10% em peso por volume.
24. Composição, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, CARACTERIZADA pelo fato de que é uma injeção líquida adaptada para administração em um humano.
25. Composição, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADA pelo fato de que é um líquido aquoso compreendendo o composto de ferrooligossacarídeo na forma dissolvida ou na forma dispersa.
26. Composição, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADA pelo fato de que é um líquido aquoso em que o composto de ferro-oligossacarídeo está na forma dissolvida ou na forma dispersa.
27. Uso de um composto de ferro-oligossacarídeo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de uma composição terapêutica para prevenir ou tratar a anemia ferropriva em humanos ou animais, em que a dita composição terapêutica é formulada para ser administrada por via oral ou parental.

Petição 870190061501, de 01/07/2019, pág. 35/38

5/5
28. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que é para prevenir ou tratar a anemia ferropriva em humanos.