BRPI0920533A2 - Antagonismo de estabilizado para o tratamento de distúrbios relacionados à trilha de porco-espinho - Google Patents

Antagonismo de estabilizado para o tratamento de distúrbios relacionados à trilha de porco-espinho Download PDF

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BRPI0920533A2
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Shifeng Pan
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Abstract

combinação para tratar um câncer relacionado à hedgehog, bem como seu kit. a presente invenção refere-se a métodos para modular, por exemplo, antagonizar, a atividade da via de sinalização de hedgehog, e para tratar distúrbios relacionados a hedgehog tais como cânceres (por exemplo, meduloblastoma). em particular, a invenção fornece métodos para inibir estados de crescimento aberrante resultando de fenótipos tais como perda de função de ptch, ganho de função de hedgehog, ganho de função smoothened ou ganho de função de gli administrando-se a um mamífero combinações de inibidores smoothened (por exemplo, um composto de fórmula j, fórmula ii, ou fórmula lll, ou qualquer um dos compostos listados aqui ou incorporados por referência) e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (pi3k).

Description

= 178 Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMBINA- ÇÃO PARA TRATAR UM CÂNCER RELACIONADO À HEDGEHOG, BEM COMO SEU KIT".
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO la 5 Sinalização de Hedgehog (Hh) foi primeiro identificada em Dro- sófila como um importante mecanismo regulatório para formação de padrão CÚ embriônico, ou o processo pelo qual células embriônicas formam disposi- ções espaciais ordenadas de tecidos diferenciados. (Nusslein-Volhard et al. (1980) Nature 287, 795-801) Em células mamíferas, três genes de Hedge- hog, Hedgehog “Sonic” (Shh), Hedgehog da Índia (Ihh) e Hedgehog do de- serto (Dhh), foram identificados. Genes de Hedgehog codificam proteínas secretadas, que passam por modificações pós-translacionais, incluindo cli- vagem autocatalítica e modificação de lipídeo (palmitoilação) no terminal N e modificação de colesterol do terminal C.
A proteina de Hedgehog de terminal N modificada de lipídeo dis- para a atividade de sinalização da via de proteína, e comunicação célula a célula é engendrada pelo despacho de proteina de Hedgehog solúvel de uma célula de sinalização e recebimento por uma célula de resposta. Em células de resposta, o receptor de transmembrana de 12 passagens Patched (Ptch) age como regulador negativo de sinalização de Hh e Smoothened de proteína de transmembrana de 7 passagens estabilizadas (Smo) age como um regulador positivo de sinalização de Hh. Em estado de repouso, Ptch livre (isto é, não ligado por Hh) subestequiometricamente suprime a ativida- de de via induzida por Smo (Taipale et al. (2002) Nature 418: 892); sob liga- ção de proteina Hh ligante, entretanto, repressão de Smo é abrandada, e a cascata de sinalização resultante leva à ativação e translocação nuclear de fatores de transcrição Gli (Gli1, GIi2 e Gli3).
Genes alvos a jusante de transcrição de sinalização de Hh inclu- em Wnts, TGFB, e Gli1, que são elementos da alça de realimentação regula- tória positiva e negativa. Diversos genes regulatórios de ciclo celular e proli- feração, tais como c-myc, ciclina D e E estão também entre os genes alvos de sinalização de Hh.
É 2178 Sinalização de Hh é conhecida regular uma faixa diversa de pro- cessos biológicos, tais como proliferação celular, diferenciação, e formação de órgão de uma maneira dependente de dose e específica de tecido. No desenvolvimento de tubos neurais, Shh é expresso na placa ventral e dirige -” 5 a diferenciação de subtipos específicos de neurônios, incluindo neurônios motores e dopaminérgicos. Hh é também conhecido regular a proliferação = de células progenitoras neuronais, tais como células granulares cerebelares e células tronco neurais. No trato intestinal em desenvolvimento, um nível baixo de sinalização de Hh é requerido para desenvolvimento pancreático, enquanto um nível elevado de sinalização de Hh bloqueia a organogênese pancreática. Hh é também conhecido por desempenhar papéis importantes em proliferação de célula tronco e organogênese na pele, próstata, testículo e medula óssea.
Normalmente, sinalização de Hh é estritamente controlada du- rante a proliferação celular, diferenciação e formação de padrão embriônico. Entretanto, atividade aberrante da via de sinalização de Hedgehog, devido a mutações que constitutivamente ativam a via, por exemplo, pode ter conse- quências patológicas. Por meio de exemplo, mutações de perda de função de Patched são encontradas em síndrome de Gorlin (uma síndrome heredi- tária com risco elevado de cânceres de pele e cérebro, também conhecida como Síndrome do Nervo Basocelular (BCNS)); e mutações de ganho de função de Smo e Gli são ligadas a carcinoma de célula basal e glioblastoma. Carcinoma de célula basal (BCC) é a forma mais comum de câncer de pele, afetando mais do que 90.000 americanos a cada ano.
Ativação constitutiva de Hh foi descoberta promover tumorigêne- se em BCC, meduloblastoma (o tumor de cérebro da infância mais comum), rabdomiossarcoma, câncer pancreático, câncer de pulmão de célula peque- na, câncer de próstata e câncer de mama. Além dos papéis em tumorigêne- se, sinalização de Hh é também implicada na metástase de câncer de prós- tata Sinalização de Hh pode estar envolvida em muitos tipos adicionais de tipos de tumor e tais ligações são esperadas continuar a serem descobertas; esta é uma área de pesquisa ativa em muitos centros de câncer ao redor do
: 378 mundo, A proliferação destas células de câncer requer ativação da via de Hh, e o bloqueio das vias de sinalização de Hh frequentemente inibe a proli- feração de célula de câncer. De fato, ciclopamina antagonista de Hh e siRNA - 5 antiGlil podem eficazmente bloquear a proliferação destas células de cân- cer, e podem reduzir o tamanho do tumor em modelos de xenoenxerto, su- CÚ gerindo que antagonistas de Hh, sozinhos ou em combinação com outros agentes, podem fornecer novos regimes quimioterapêuticos para o tratamen- to destes cânceres. Ciclopamina antagonista de Hh foi mostrada suprimr a metástase de câncer de próstata em modelos animais.
Evidência de que ativação constitutiva de Smo resulta em cânce- res (por exemplo, BCC), e que Smo pode ser oncogênico sob sua liberação de inibição por Ptch, sugere utilidade de antagonistas de Smo como agentes terapêuticos no tratamento de tais distúrbios. (Stone et al. (1996) Nature 384: 129). Consequentemente, moléculas que modulam a atividade da via de sinalização de Hedgehog, por exemplo, que modulam a atividade de Smo, são terapeuticamente úteis.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se geralmente ao diagnóstico e tra- tamento de patologias relacionadas à via de Hedgehog (definida abaixo e referida aqui como "distúrbio(s) relacionado(s) ao Hedgehog"), incluindo, porém não limitados a, formação de tumor, câncer, neoplasia, e distúrbios hiperproliferativos não malignos, e mais particularmente a métodos de inibir tumorigênese, crescimento de tumor e sobrevivência de tumor, usando a- gentes conhecidos inibir a via de sinalização de Smo e Hedgehog (por e- xemplo, inibidores Smoothened) em combinação com (i) inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); (ii) inibidores de Gli; e/ou (iii) inibidores de fosfatidilinosítol 3-cinase (PI3K). Inibidores Smoothened é uma classe definida aqui e inclui, porém não é limitada a, ciclopamina, jervi- —na,compostos de fórmula | (por exemplo, um composto de fórmulas (la), (Ib) ou (lo), compostos de fórmula Il, compostos de fórmula I!l, qualquer um dos compostos anti-Smoothened individualmente listado aqui, anticorpos anti-
' are Smo, ácidos nucleicos inibitórios anti-Smo (por exemplo, siRNAs anti-Smo), e outros agentes anti-Smoothened conhecidos na técnica e/ou incorporados aqui por referência, Inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK) é também uma classe definida aqui e inclui, porém não é limitada a, compostos de fór- .. 5 mulaA, bem como inibidores de lipídeo cinase e nucleotídeos inibitórios anti- PI3K (por exemplo, RNAi).
GC Os métodos e compostos da presente invenção referem-se à ini- bição de ativação da via de sinalização de Hedgehog, por exemplo, por inibi- ção de estados de crescimento aberrante resultando de fenótipos tais como perda de função de Ptch, ganho de função de Hedgehog, ganho de função Smoothened ou ganho de função de Gli, e compreendem contactar a célula com uma combinação de agentes conhecidos para inibir a via de sinalização de Smo e Hedgehog, por exemplo, inibidores Smoothened, e inibidores de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); inibidores de Gli; e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK) em uma quantidade suficiente para agonizar uma atividade de Ptch normal, antagonizar uma atividade de Hedgehog normal, ou antagonizar atividade Smoothened (por exemplo, para reverter ou controlar o estado de crescimento aberrante).
Um aspecto da presente invenção inclui métodos empregando compostos para inibir ativação de via dependente de Smo (por exemplo, quando Smo é ativado pela presença do ligante de Hedgehog). Outro aspec- to da presente invenção inclui métodos empregando compostos para inibir ativação de via independente de Hedgehog (ligante). Em certas modalida- des, os presentes métodos podem ser usados para neutralizar os efeitos fenotípicos de ativação indesejável da via de Hedgehog, tal como resultando de mutações de ganho de função de Hedgehog, perda de função de Ptch ou ganho de função Smoothened, se a ativação seja na presença ou ausência do ligante de Hedgehog. Por exemplo, um método da invenção pode envol- ver contactar uma célula (in vitro ou in vivo) com um antagonista de Smo, tal como um inibidor Smoothened, em combinação com inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K), em uma quantidade suficiente
. 578 para antagonizar sinalização de via de Hedgehog, dependente de Smoothe- ned ou independente de Smoothened (isto é, se a ativação ocorrer à jusante de Smoothened), na presença ou ausência do ligante de Hedgehog.
Certas modalidades da presente invenção fornecem métodos pa- e 5 rainibira síntese, expressão, produção, estabilização, fosforilação, relocali- zação dentro da célula, e/ou atividade de uma proteína Smo em uma célula CU in vitro ou in vivo, compreendendo contactar a referida célula com, ou intro- duzir na referida célula, uma combinação de inibidores Smoothened e inibi- dores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK). A combinação de inibidores Smoothened e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3- cinase (PI3K) pode ser administrada simultaneamente ou sequencialmente.
Por exemplo, os inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K) podem ser administrados em casos após tumores resistentes desen- volverem-se na presença de inibidores de Smo.
Em certas modalidades, proteínas a jusante de Smo na via de sinalização de Hedgehog (por exemplo, Gli) são também inibidas em uma célula in vitro ou in vivo.
Por exemplo, a síntese, expressão, produção, esta- bilização, fosforilação, relocalização dentro da célula, e/ou atividade de pro- teina(s) Gli podem ser inibidas, além da inibição Smoothened como descrito acima, compreendendo contactar a referida célula com, ou introduzir na refe- rida célula, uma combinação de inibidores Smoothened e inibidores da via de biossintese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinosito! 3-cinase (PI3K). Em certas modalidades, a via de Hedgehog pode ainda ser ativa em uma célula a despeito de ter sido pre- viamente submetida a um antagonista Smoothened (por exemplo, como é o caso com tumores resistentes), porque a via é ativada a jusante de Smo (por exemplo, com Gli). Em outras modalidades, uma célula não foi previamente submetida a um antagonista Smoothened.
Os métodos da presente invenção podem ser usados para regu-
õ 6178 lar a proliferação e/ou diferenciação de células in vitro e/ou in vivo, por e- xemplo, na formação de tecido de células tronco, ou para prevenir o cresci- mento de células hiperproliferativas. Em outra modalidade particular, contac- tar a célula com- ou introduzir na célula uma combinação de inibidores Smo- [e 5 —othenede inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estati- nas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K) CG resulta em inibição de proliferação celular, inibição de crescimento e/ou so- brevivência de célula de tumor, e/ou inibição de tumorigênese. Desse modo, outra modalidade particular fornece métodos para inibir e/ou antagonizar a viadeHh empregando-se métodos de combinação da invenção em células de tumor. Em certas modalidades, a referida proliferação celular, crescimen- to e/ou sobrevivência de célula de tumor, e/ou tumorigênese é associada com tumores resistentes. Em outras modalidades, a referida proliferação celular, crescimento e/ou sobrevivência de célula de tumor, e/ou tumorigê- neseé associada com tumores sensíveis.
As combinações da invenção podem ser administradas em cer- tas modalidades a um paciente afligido por tumores sensíveis. As referidas combinações podem ser administradas em certas outras modalidades a um paciente afligido por tumores resistentes.
Células de tumor como descrito aqui, as quais as combinações | da invenção podem ser empregadas para tratar, podem ser resistentes a | apoptose, podem resistir a regimes anticâncer convencionais, e/ou podem ser tumores resistentes como definidos aqui. Tumores resistentes podem, por exemplo, originar-se por meio de alterações genéticas que levam à reati- vação da via de Hedgehog a despeito da presença de inibidores de Smo. Exemplos são mutações de Smo que interferem com ligação de inibidor, elou mutações em genes a jusante de Smo que levam à reativação da via de Hedgehog (por exemplo, sufu, Gli1, Gli2). Nestes casos de tumores resisten- tes e tumores que não sucumbem a regimes anticâncer convencionais, as combinações da invenção podem induzir células de tumor a passarem por senescência, apoptose, ou necrose. À administração das referidas combina- ções pode resultar em morte de célula de tumor e prevenção de metástase.
. 778 Os métodos da presente invenção podem empregar combina- ções de inibidores Smoothened como formulados quanto preparações far- macêuticas compreendendo um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável, e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, esta- es 5 tinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK). Da mesma maneira, os referidos inibidores da via de biossíntese de coleste- CU rol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilino- sitol 3-cinase (PI3K) podem ser formulados como preparações farmacêuticas compreendendo um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável tam- bém. As referidas combinações podem ser administradas a um paciente pa- ra tratar condições envolvendo proliferação celular indesejável tais como cânceres e/ou tumores (tais como meduloblastoma, carcinoma de célula ba- sal, etc.), e distúrbios hiperproliferativos não malignos. As referidas combi- nações podem ser administradas em certas modalidades a um paciente afli- —gido por tumores sensíveis. As referidas combinações podem ser adminis- tradas em certas outras modalidades a um paciente afligido por tumores re- sistentes. Outros aspectos da invenção fornecem métodos de diagnosticar, prevenir e/ou tratar debilitações, desarranjos, e/ou disfunções celulares; es- tados de doença hiperplásicos, hiperproliferativos e/ou cancerosos; e/ou me- tástase de células de tumor, em um mamífero, caracterizados pela presença elou expressão de um gene de Smo ou produto de gene (por exemplo, uma proteina Smo), compreendendo administrar a um mamífero, combinações de inibidores Smoothened e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3- cinase (PI3K).
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS Como descrito em maiores detalhes abaixo, a figura 1 mostra a atividade antitumor de compostos 1 e 2 e resistência a compostos 1 e 2 no modelo de aloenxerto de meduloblastoma Ptch+/-p53-/- seguindo 25 dias de tratamento. Como descrito em maiores detalhes abaixo, a figura 2 mostra a
. 878 atividade antitumor de compostos 1 e 2 e resistência a compostos 1 e 2 no modelo de aloenxerto de meduloblastoma Ptch+/-Hic+/- seguindo tratamen- tos contínuos. Como descrito em maiores detalhes abaixo, a figura 3 mostra a .. 5 atividade antitumor de compostos 1 e 2 e resistência a compostos 1 e 2 no modelo de aloenxerto de meduloblastoma Ptch+/- seguindo tratamento con- CU tínuo. Como descrito em maiores detalhes abaixo, a figura 4 mostra a amplificação de Gli2, como detectado em 2 de 3 tumores resistentes.
A figura 5 é um Western blot que demonstra os resultados de um ensaio de meduloblastoma ex-vivo, os detalhes do qual são descritos abai- xo. Como observado no Westem blot, um composto inibitório de PI3SK, Composto A, inibe a fosforilação de Akt e S6 em ambas células sensíveis e resistentes.
As figuras 6A e 6B mostram os efeitos de uma combinação de composto A e composto 1 sobre o modelo de aloenxerto Ptc+/-Hic+/-, e de- monstram que a combinação previne ou retarda a resistência no referido modelo de meduloblastoma.
As figuras 7A e 7B mostram os efeitos de uma combinação de composto Be composto 1 sobre o modelo de aloenxerto Ptc+/-Hic+/-, e de- monstram que a combinação previne ou retarda a resistência no referido modelo de meduloblastoma.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Inibidores Smoothened podem incluir compostos, por exemplo, compostosde biarilearboxamida, da fórmula (1): CH, )n R3 R5 R6 R4 O) em que R2-C, R3-C, R4-C ou R5-C pode ser substituído por N; né 12o0u3; R1 é arila ou heteroarila carbocíclica;
: 9/78 R2, R3, R4 e R5 são independentemente hidrogênio, alquila in- ferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior, flúor, cloro, bromo, amino, amino subs- tituído, triflurometila, acilóxi, alquilcarbonila, trifluormetóxi ou ciano; R6 é hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, arila carboci- .. 5 clicaou heterocíclica-alquila inferior; R7 é hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, arila carbocí- CG Clica, heteroarila, arila carbocíclica-alquila inferior, heteroarila-alquila inferior, ou o o o o, o Ata Aço Aero “Re Re em que Raé alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou heterociclila; Rb é alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou heterociclila; Rc e Rd são independentemente hidrogênio, alquita substituída, cicloalquila, arila; ou heterociclila, ou Rc e Rd juntos representam alquileno inferior ou —alquileno inferior interrompido por O, S, N-(H, alquila, arilalquita); Re é alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou he- terociclila, amino ou amino substituido; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e enantiôme- ros dos mesmos. Uma modalidade preferida da invenção refere-se a compostos de fórmula (la)
R o R2. N nº (3 H R6 R3 R5 Ra (la) em que R2-C, R3-C, R4-C ou R5-C pode ser substituído por N; em que R1' é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, alquila inferior, ciano, metó-
“ 10/78 xi, trifluormetila, trifluormetóxi, dimetilamino; R2 a R7 têm o significado como definido para a fórmula |, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e enantiômeros dos mesmos. es 5 Outra modalidade preferida da invenção refere-se a compostos de fórmula (Ib) ” R O R6 (XX R3 R5 R4 (b) em que R1' é triflurometila, cloro, flúor; R2 e R3 são independentemente hidrogênio, C1-C4 alquila, C1- C4-alcóxi, trifluormetila, cloro ou flúor; R4 e R5 são hidrogênio; R6 é hidrogênio ou C1-C3 alquila; R7 é alquila opcionalmente substituída, arila carbocíclica, hete- roarila, arila carbociclica-alquila inferior, heteroarila-alquila inferior, ou o o o o, o Aga AP AR Re Re emque Ra é alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou he- terociclila; Rb é alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou heterociclila; Rc e Rd são independentemente hidrogênio, alquila substituída, cicloalquila, arila; ou heterociclila, ou Rc e Rd juntos representam alquileno inferior ou alquileno inferior interrompido por O, S, N-(H, alquila, arilalquila); Re é alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, arila ou he- terociclila, amino ou amino substituído;
: 11178 e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e enantiôme- ros dos mesmos, Outra modalidade preferida da invenção refere-se a compostos de fórmula (lb) es 5 emque R1' é triflurometila, cloro, fluor; - R2 e R3 são independentemente hidrogênio, C1-C4 alquila, C1- C4-alcóxi, trifluormetila, cloro ou flúor; R4 e R5 são hidrogênio; R6é hidrogênio; R7 é alquila opcionalmente substituída, arila carbocíclica, hete- roarila, arila carbocíclica-alquila inferior ou heteroarila-alquila inferior; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e enantiôme- ros dos mesmos.
Outra modalidade particularmente preferida da invenção refere- se a compostos de tónmula (lc) ' O, y Quo “AenIm-R (3 (lo) em que R?1' é triflurometila ou cloro; R2 é hidrogênio ou metila; méboui, Rf é arila carbocíclica ou heterocíclica; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
As combinações da invenção, dependendo da natureza dos substituintes descritos aqui, possuem um ou mais átomos de carbono assi- —métricos, e portanto, existem como racematos, e os enantiômeros R e S dos mesmos.
É preferido o enantiômero mais ativo, tipicamente designado à configuração S (no carbono com o substituinte de NR6R7).
. 12178 Os compostos inibidores Smoothened podem também incluir compostos de fórmula Il: R Rs R2 as Ré R3 Re: R7 . ht, fórmula Il em que Y, e Y2 são independentemente selecionados de N e CR; em que Ré selecionado de hidrogênio, halo, Ci salquila, -C, salquila halos- substituída, C,.salcóxi, C1.salcóxi halossubstituido e -OXNRi0aR106; em que Rai10a & Rioy São independentemente selecionados de hidrogênio e C1.6 alqui- la;
R1 é selecionado de ciano, halo, C1. alquila, C,.salquila halos-
substituída, C1.5 alcóxi, halossubstituído-C, .salcóxi, Ce.19 arila, dimetil-amino, C,.salquil-sutfanila e Cas heterocicloalquila opcionalmente substituída com até 2 radicais C1.e alquila;
R2 e Rs são independentemente selecionados de hidrogênio, ci- ano, halo, C1.6 alquila, C,.salquila halossubstituída, C1.6 alcóxi, Ci.salcóxi ha-
lossubstituído e dimetilamino;
R;3 e Ra são independentemente selecionados de hidrogênio, ha- lo, ciano, C1.6 alquila, C1.salquila halossubstituída, C1.6 alcóxi eC,.salcóxi ha- lossubstituído; ou R; e R2 ou R; e Rs juntamente com a fenila a qual eles são ambos ligados formam Cs.,9 heteroarila;
Rs e R; são independentemente selecionados de hidrogênio, C1. galquila, C,.salquila halossubstituída, C1.5 alcóxi e Ci .salcóxi halossubstituído; com a condição de que R; e R; não sejam ambos hidrogênio;
Rs é selecionado de hidrogênio, halo, C1. alquila, C1.5 alquila ha- lossubstituída, C1.5 alcóxi e C1 salcóxi halossubstituído;
Rg é selecionado de -S(O)2R11, -C(O)R1, -OR11, NRi2aR126 E
. 13178 —R11; em que R1, é selecionado de arila, heteroarila, cicloalquila e heteroci- cloalquila; R12: e R12 são independentemente selecionados de C1.s alquila e hidróxi-substituído-C, .salquila; em que a referida arila, heteroarila, cicloalquila e heterocicloal- .". 5 quilade R, pode ser opcionalmente substituída com 1 a 3 radicais indepen- dentemente selecionados de Ci.5 alquila, C,.salquila halossubstituída, Cy.
GU alcóxi, Ciesalcóxi halossubstituído, Ce ,paril-Coalquita, Cs.,oheteroaril-Co. asalquila, C3.12 cicloalquila e C3.3 heterocicloalquila; em que o referido substituinte de aril-alquila de Rg é opcional- mente substituído com 1 a 3 radicais independentemente selecionados de halo, C1.6 alquila, Ci.salquila halossubstituída, C1.6 alcóxi, C,.salcóxi halos- substituído e metil-piperazinila; e os derivados de N-óxido, derivados de pro- fármaco, derivados protegidos, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos; e os sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos (por exem- plohidratos) de tais compostos.
Compostos preferidos de fórmula Il são selecionados de [4-(morfolina-4-sulfonil)-fenilramida “de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3- carboxílico, [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de áci- do 4'-ciano-2-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-2-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-ciclo-hexil-fenil)-amida de áci- do 4'-metóxi-2-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(2-metil-morfolin-4-il)-pirídin-3-il])- amida de ácido 4'-metóxi-2-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-ciclo-hexil-fenil-amida = de ácido — 4'-dimetilamino-2-metil-bifenil-3- carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4'-dimetilamíno-2-metil- bifenil-3-carboxílico, (6-[1,4]oxazepan-4-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-cloro- 4'-dimetilamino-bifenil-3-carboxílico, (6-morfolin4-il-piridin-3-11)-amida de áci- do 6-cloro4'-dimetilamino-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-aemida de ácido 6-cloro-4'-dimetilamino-bifenil-3- — carboxílico, [6-(2-metil-morfolin-4-i)-piridin-3-il--amida de ácido 6-cloro4- metóxi-bifenil-3-carboxílico, (6-[1,4]Joxazepan-4-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-cloro-4'-metóxi-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida — de
. 14/78 ácido 6-cloro4'-metóxi-bifenil-3-carboxílico, (6-morfolin-4-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-cloro-4'-metóxi-bifenil-3-carboxílico, (6-morfolin-4-il-piridin-3-il)- amida de ácido 4'-metóxi-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[1,4Joxazepan-4-il- piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-6-metil-bifenil-3-carboxílico, es 5 [6-(2-metil-morfolin-4-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-6-metil-bifenil- 3-carboxílico, —[6-(2-metil-morfolin-4-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4- CÚ dimetilamino-6-metil-bifenil-3-carboxílico, — (6-[1,4]oxazepan-4-il-piridin-3-il)- amida de ácido 4'-dimetilamino-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-morfolin-4-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-dimetilamino-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-6-metil- bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-etóxi-6- metil-bifenil-3-carboxí-lico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-metil- 4'-metilsulfanil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-dimetilamino-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-metil-[1,1'4',1"Jterfenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)- amida de ácido 3'-cloro-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3- il)-amida de ácido 2' 4'-dicloro-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido — 2'-cloro-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 3'-cloro-6-metil-bifenit- 3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 3',4'-dicloro-6-metil- bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-aemida de ácido 3'-cloro-6- metil-4'-trifluormetil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6,4'-dimetil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-etil-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido A4terc-butil-6-metil-bifenil-3-carboxílico, —(6-azepan-1-il-piridin-3-il)- amida de ácido 6-metil-4'-propil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3- il)-camida de ácido 4'isobutil-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il))--amida = de ácido 4"isopropil-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6,2',6-trimetil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6,2',3-trimetil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-metil-4'-trifluormetil- bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amída de ácido 6-metil-3"-
, 15/78 trifluormetil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6- metil-3',5'-bistrifluormetil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)- amida de ácido 3-isopropóxi-B-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 3 -etóxi-6-metil-bifenil-3- -— 5 carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 2',6-dimetóxi-6-metil- bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 6-metil4"- CG trifluormetóxi-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-ikpiridin-3-il)-amida de ácido 6-metil-3'-trifluormetóxi-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 6-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4- metóxi-G-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 3"- metóxi-S6-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4- (2-dimetilamino-etóxi)-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)- amida de ácido 3'-dimetilamino-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin4-il-fenil)-amida de ácido 4'-fluor-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfoliná-il-fenil)--amida de ácido 3-fluor-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 2'-fluor-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 4-metil-N-(4-morfolin-<4-il-fenil)-3-quinoxalin-S-il-benzamida, = (A-morfolin-4-il- fenil)-amida de ácido 6-metil-4'-(4-metil-piperazin-1-il)-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 2'-ciano-S-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfoliná-il-fenil)-amida de ácido 3'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[1,AJoxazepan-4-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil- 3-carboxílico, [6-(2-metil-morfolin-4-il)-piridin-3-il--amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, (3,4,5,6-tetraidro-2H-[1,2'Jbipiridinil-5'-il)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-morfolin-4-il-piridin-3-iI)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-&3-carboxílico, [6-(4-metil-piperazin-1-il)- piridin-3-il--amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (3-fluor-4-morfolin-4-il-fenil)-amida = de ácido —4'-ciano-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (3-cloro-4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil- bifenil-3-carboxílico, (3-bromo-4-morfolin-4-il-fenil)-amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, (3-metil-4-morfolin4-il-fenil)-amida de ácido 4-
. 16/78 ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, = (A-morfolin-4-il-3-trifluormetil-fenil)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (4-ciclo-hexil-fenil)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, bifenil-4-ilamida de ácido 4'-ciano- 6-metil-bifenil-3-carboxílico, (4'-metóxi-bifenil-4-il)-amida de ácido 4'-ciano-6- e 5 metil-bifenil-3-carboxílico, [4-(4-benzil-piperazin-1-1I)-fenil)-amida de ácido 4'- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1-sulfonil)-fenil|-amida = de CC ácido —4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, = [4-(pirrolidina-1-sulfonil)-fenil]- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-i))-amida = de ácido 4'-ciano-S6-metóxi-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-2-metóxi- bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-2- metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 3'-fluor- 4 -metóxi-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-i)-amida = de ácido 4'isopropóxi-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)- amida de ácido 4'-butóxi-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-i)-amida de ácido 3'-cloro-4'-metóxi-6-metil-bifenil-3- carboxílico, (6-azepan-1-il-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-6,3'-dimetil- bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1-sulfonil)-fenil--amida de ácido 4'-ciano-2- metil-bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1-sulfonil)-fenill-amida de ácido 4"- ciano-6-fluor-bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1-sulfonil)-fenil-amida — de ácido 6-bromo-4'-ciano-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-benzil[1 A)diazepan-1-il)- piridin-3-il--amida de ácido 4'-ciano-B-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-tiofen-3-ilmetil-[1 4)diazepan-1-il)-piridin-3-il--amida de ácido 4-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il--amida de ácido 4-ciano-2-metil-bifenil-3-carboxílico, — [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)- piridin-3-il)-amida de ácido 4'-metóxi-2-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il- -amida de ácido 2-metil-4'-trifluormetil- bifenil-3-carboxílico, [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-i)-amida de ácido 2-metil-4'-trifluormetóxi-bifenil-3-carboxílico, [6-(2-metil-morfolin-4-il)-piridin-3- il-amida de ácido 4'-ciano-2-metil-bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1- sulfonil)-fenil-amida de ácido 4'-ciano-2-fluor-bifenil-3-carboxílico, [4 (piperidina-1-sulfonil)-fenil--amida de ácido 4'-ciano-6-trifluormetil-bifenil-3-
. 17/78 carboxílico, [6-(4-piridin-4-ilmetil-[1 4Jdiazepan-1-iI)-piridin-3-il--amida de áci- do 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-piridin-3-ilmetil-[1, A]diazepan-1-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2 6-dimetóxi-benzil)-[1 ,AJdiazepan-1-il]- és 5 piridin3il-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(2- etóxi-benzil)-[1 4]diazepan-1-il]-piridin-3-il-amida de ácido 4'-ciano-6-metil- GC bifenil-3-carboxílico, = (6-[4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-benzil]-[1,4Jdiazepan-1- il-piridin-3-il)-amída de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(4- metóxi-2,3-dimetil-benzil)-[1 A4]diazepan-1-il)-piridin-3-il--amída de ácido 4- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2,3-di-hidro-benzo[1,4J)dioxin-6- ilmetil)-[1 AJdiazepan-1-il]-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil- 3-carboxílico, [6-(4-piridin-2-ilmetil-[1 4]diazepan-1-i)-piridin-3-il--amida —- de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-benzo[1,3]dioxol-4-ilmetil- [1 A]diazepan-1-il)-piridin-3-il-amida de ácido, (6-[4-(2-trifluormetóxi-benzil)- [1,A]diazepan-1-il]-piridin-3-il-amida “de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3- carboxílico, 16-[4-(2-dimetilamino-benzil)-[1 A4Jdiaze-pan-1-il]-piridin-3-il)- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2-cloro-5-trifluormetil-benzil)-[1 4]diazepan-1-il]-piridin-3-il--amida — de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(2,3-difluor-benzil)-[1,4] dia- zepan-1-ill-piridin-3-il--amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2-cloro-4-fluor-benzil)-[1 A4Jdiazepan-1-il]-piridin-3-il-amida de ácido 4'- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2,6-difluor-benzil)-[1 AJdiazepan-1-i1)-piridin-3-il-amida de ácido 4- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [4-(piperidina-1-sulfonil)-fenil|-amida de ácido 2-cloro-4'-ciano-bifenil-3-carboxí-lico, — [6-(2,6-dimetil-morfolin<4-il)- piridin-3-il--amida de ácido 4'-ciano-S-trifluormetil-bifenil-3-carboxílico, [6- (2,6-dimetit-morfolin-4-i)-piridin-3-)-amida de ácido 2-cloro4'-ciano-bifenil-3- carboxílico, [6-(2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4'-ciano- 6-etil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(3-fluor-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-3-i)- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(2-trifluormetóxi-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-3-il-amida de ácido 4- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(3-cloro-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-
. 18/78 3-il)--amida de ácido 4'-ciano-B6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(4-isobutil-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-3-il-amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(4-terc-butil-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-3-i1)- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, e. 5 (64 (7-metóxi-benzo[1,3Jdioxol-5S-ilmetil)-piperazin-1-il)-piridin-3-i0-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-benzil-piperazin-1-il)-piridin- CGU 3il--amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-piridin-3-ilmetil-piperazin-1-i)-piridin-3-il-amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxí-lico, (6-[4-(4-difluormetóxi-benzil)-piperazin-1-il)-piridin- 3i-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, 16-[4-(4-ciano-benzil)-piperazin-1-il)-piri-din-3-il)--amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, — [6-(4-quinolin-S-ilmetil-piperazin-1-iI)-piridin-3-il)- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-car-boxílico, [6-(4-piridin-4-ilmetil- piperazin-1-il)-piridin-3-il)-amida de ácido —4'-ciano-6-metil-bifenil-3- — carboxílico, [6-(4-piridin-2-ilmetil-piperazin-1-il)-piridin-3-il)-amida de ácido 4'- ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(4-imidazol-1-il-benzil)-piperazin-1-i1]- piridin-3-il-amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (6-[4-(3-ciano-benzil)-piperazin-1-il]-piridin-3-il-amida de ácido 4'-ciano-6- metil-bifenil-3-carboxílico, [6-(4-isoquinolin-5-ilmetil-piperazin-1-i)-piridin-3-il]- amida de ácido 4'-ciano-6-metil-bifenil-3-carboxílico, (R)-2-metil-N-(6-(2- metilmorfolino)piridin-3-il)-4'-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, 4'-ciano-2- mMetil-N-(6-sulfonilmorfolinopiridin-3-i)bifenil-3-carboxamida, — (S)4'-ciano-2- mMetil-N-(6-(2-metilmorfolino)piridin-3-iN)bifenil-3-carboxamida, (R)-6-cloro-N- (6-(2-metilmorfolino)piridin-3-il) A-(trifluometóxi)bifenil-3-carboxa-mida, — 4- ciano-2-metil-N-(6-sulfinilmorfolinopiridin-3-iN)bifenil-3-carboxamida, 4'-ciano- N(6-(diisobutilamino)piridin-3-il)-2-metilbifenil-3-carboxamida, 4'-cia-no-N-(2- ((28,6R)-2,6-dimetilmorfolino)pirimídin-S-il)-2-metilbifenil-3-carboxa-mida, N- (2-((28,6R)-2,6-dimetilmorfolino)pirimidin-5-il)-2-metil-4'-(trifluorme-til) bifenil- 3-carboxamida, — N-(2-((28,6R)-2,6-dimetilmorfolino)pirimidin-S-il)-2-metil-4"- (trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, N-(2-(bis(2-hidroxietil) amino)pirimidin- 5-iI)-2-metil-4'-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, — 2-metil-N-(6-(tetraidro- 2H-piran-4ilóxi)piridin-3-i1)-4'-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxa-mida, N-(5-
. 19/78 cloro-6-((2S,6R)-2,6-dimetilmorfolino)piridin-3-il)-2-metil-4'-(triflu- orometóxi)bifenil-3-carboxamida, N-(6-((2R,6S)-2,6-dimetiltetraidro-2H-piran- 4-i)piridin-3-i1)-2-metil-4'-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida.
N-(6-(4-etilpiperazina-1-carbonil)piridin-3-il)-2-metil-4'-(trifluor- e. 5 metóxi)bifenilt-3-carboxamida, 2-metil-N-(6-(2-o0xopiperazin-1-il)piridin-3-i1)-4"- (trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, — 2-metil-N-(6-(1-(piridin-4-ilmetil)piperi- CG din4il)piridin-3-11) 4"-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, — 2-metil-N-(6-(2- ox0-4-(piridin4-ilmetil)piperazin-1-il)piridin-3-il)-4'-(trifluormetóxi)bifenil-3- carboxamida, 2-metil-N-(6-(1-(piridin-4-ilmetil)piperidin-3-il)piridin-3-il)-4'-(tri- fluormetóxi)bifenil-3-carboxamida, N-(6-(1-etilpiperidin-3-il)piridin-3-il)-2-me- til4'-(trifluormetóxi)bifenil-3-carboxamida e N-(6-((2R,68)-2,6-dimetilmor- folino) piridin-3-il)-2-metil-4'-(triluormetóxi)bifenil-3-carboxamida e [6-(cis-2,6- dimetil-morfolin-4-i)-piridin-3-il)--amida de ácido 2-metil4'-trifluormetóxi- bifenil-3-carboxílico, (também identificado como o composto 1 neste docu- mento), os quais têm a ais.
r ' Composto1 Os compostos de fórmula Il acima são também descritos no WO 2007/131201. Os compostos inibidores Smoothened podem também incluir compostos de fórmula Ill: RD)
PP
Y | zm) x POA,
LC R3 CÁ bx
RO fórmula Il
. 20/78 em que
R1 é um grupo Ce14 arila, ou um grupo heteroarila de 5 a 14 membros o qual pode ser não substituído ou substituído;
R2 e R3 são independentemente C,.; alquila, C16 alquilOH, ou es 5 R2eR3formam um grupo C314 cicloalquila fundido;
L é uma ligação, C1.8 alquileno, -C(0)O-, -C(O)NR9-, -C 1.3 alqui-
CÚ 1IOH-, -C1.8 haloalquil-, -C(O)-, -NH- ou -O-;
X e W são independentemente N ou CRS5, e pelo menos um de XouWéN;
R7 é um grupo Cs.14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 mem- bros, ou um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros;
R4 é C1.6 alquila, C2.5 alquenila, C3.,4 cicloalquila, um grupo Ce 14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 membros, um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros, C;1.; alcóxi, halo, NR6R8, C(0)OR6, C(O)NR6R8, C1.s
— haloalquila, formila, carbalcóxi, C,.salquilOH, C(O)R6, SO2R6, C(O)NHC1. salquilR6, NR6R8, SO-NR6R8, OCF3, NHC(O)R6, CHzOC(O)NR6R8, CHINR6R8, NHC(O0)OR6, NHC(O)NR6R8, CHANHSO2R6, CHANHC(0)ORS6, OC(O)R6, ou NHC(O)R6, o qual pode ser substituído ou não substituído;
Z é Ci.8 alquila, CN, OH, ou halogênio;
m e p são independentemente 0-3;
Y é uma ligação, C,1.5 alquileno, -C(0)-, -C(0)O-,-CH(OH)-, ou - C(O)NR10;
R5 é H, halogênio, CN, alquita inferior, OH, OCH; ou OCF3;
Em que R1 pode ser substituído por um ou mais de C;.; alquila,
um grupo Cs, arila, C;g haloalquila, C1.5 alcóxi, halo, NH2, CN, OCF3, OH, C(O)NR6R8, C(O)R6, NR6R8, NHC(O)R6, SO-R6, SONR6R8;
R9 e R10 são independentemente C,.; alquila ou H;
R6 e R8 são independentemente H, C,.; alquila, C2.5 alquenila, C3-14 Cicloalquila, um grupo Ce.14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 mem-
bros, um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros, C;.6 haloalquila, C1.s alquilOH, C1.; alcóxi, ou dois R6 sobre um átomo podem formar um anel con- tendo heteroátomo; e
. 21/78 em que R4, R6, e R8 podem ser não substituídos ou substituí- dos por um ou mais de C1.3 alquila, Ca.14 cicloalquila, um grupo Cs.14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 membros, um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros, C;1.5 alquilOH, OH, oxo, C1.+ haloalquila, carboxC;.6 alquila, e. 5 ouSO-Crgalquila, halo, -OCH3, -OCF3, -OH, -NH>. Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de CÚ fórmula Ill em que R7 é ny Ns NS (O Es CALA ua
N
VN T+, o , n , ou o. Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill de acordo com a reivindicação 1 em que R1 é
CA CU A PÁ AF =! No CS Á>» JA NN ou : Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill em que R7 é é N (x A)
AO n , Ou e
CNA R1é ' CÁ Ê , OU Ê * Em ainda outra modalidade, a presente invenção inclui compos- tos de fórmula Ill em que R4 é C(0)OC:s alquila, CF3, C(O)JOR6, C(O)NR6R8, C1+ haloalquila, C1.6 alquilOH, C(O)R6, SO2R6, C(O)NHC1.s alquilR6, C(CHs(CH;)(OH), C(O)CH3, C(CH2)CHs3, ou CICH3)(CH20H)OH; e
: 22178 R6 e R8 são independentemente H, C1.5 alquila, C1.5 alquenila, C3-14 Cicloalquila, um grupo Ce-14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 mem- bros, ou um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros.
Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de es 5 fórmulalilemqueR4é o o o Cod AA AA O UOL, O , ' ou , o qual pode ser não substituído ou substituído.
Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill em que R2 e R3 são C;1.; alquila.
E ainda outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill em que R2 e R3 são CH;s.
Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill em que L é -O-, -NH-, -C(O)-, -CH(OH)-, -CH2-, -CF2-, -CHF-, - COH-, ou uma ligação. Em outra modalidade, a presente invenção inclui compostos de fórmula Ill em que L é -CH27-. Em outra modalidade, a presen- te invenção inclui compostos de fórmula Ill em que ambos X são N, e Z é CH. Em outra modalidade, a presente invenção incluí um composto de fórmula (lila): E AN N=N N DD xN NA Z w Da (Na) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R11 é Cie alquila, Cas alquenila, C3.,4 cicloalquila, um grupo Cs. 14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 membros, um grupo ciclo- heteroalquila de 3 a 14 membros, C1.5 alcóxi, halo, NR13R14, C(O0)OR13, C(OINRI3R14, C1.8 haloalquila, formila, carbalcóxi, C,.salquilOH, C(O)R13, SORI13, C(O)NHC;isalquilRi3, NRISRI4, SONRISRI4, OCF;3,
. 23/78 NHC(O)R13, CHOC(O)NR1I3R14, CHINR13R14, NHC(O0)OR13, NHC(OINR1I3R14, CHANHSO.R13, CHANHC(O)OR13, OC(OJ)R13, ou NHC(O)R13, o qual pode ser substituído ou não substituído; R12 é C1.8 alquila, um grupo Cçe.14 arila, Cy.8 haloalquila, C16 al- o 5 cóxi, halo, NH, CN, OCF3, OH, C(OINR1I3R14, C(O)R13, NRI3R14, NHC(O)R13, SO2R13, SONR13R14; CÚ R13 e R14 são independentemente H, Cs alquila, C2.6 alquenila, Ca14 Cicloalguila, um grupo Cs.14 arila, um grupo heteroarila de 5 a 14 mem- bros, um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a 14 membros, C;1.6 haloalquila, C16 alquilOH, Ci salcóxi, ou R13 e R14 sobre um átomo podem formar um anel contendo heteroátomo; e em que R11, R13, e R14 podem ser não substituídos ou substi- tuídos por um ou mais de C1.5 alquila, Ca.14 cicloalquila, um grupo Cs-14 aríla, um grupo heteroarila de 5 a 14 membros, um grupo ciclo-heteroalquila de 3 a1i4 membros, C1.5 alquilOH, OH, oxo, C1.6 haloalquila, carboxC;.+ alquila, ou SOC, .salquila, halo, -OCH3, -OCF3, -OH, -NH>.
Inibidores Smoothened podem incluir os compostos descritos na publicação PCT WO 2003/011219 (por exemplo, o composto N-[4-cloro-3-(5- dimetilamino-1H-benzoimidazo|-2-i1)-fenil)-3,5-dimetóxi-benzamida (referido aqui comoo composto 2)), os conteúdos dos quais são por meio deste incorporados. por referência. Inibidores Smoothened podem também incluir os compostos descritos na publicação PCT WO 2003/011219, os conteúdos dos quais são por meio deste incorporados por referência. Inibidores Smoothened podem também incluir os compostos descritos nas publicações PCT WO 2006/028958 (por exemplo, o composto 2-cloro-N-(4-cloro-3-(piridin-2-i)fenil)-A4- (metilsulfonil)benzamida), WO 2008/14291, WO 07/120827, e WO 06/50351, os conteúdos de todos dos quais são por meio deste incorporados por referência.
Os métodos da presente invenção compreendem o uso de com- posições farmacêuticas que contêm inibidores Smoothened, por exemplo, compostos de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula IIl, ou qualquer um dos com- postos listados aqui ou incorporados por referência, ou um derivado de N- óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos; ou um sal
Pr 24/78 farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em mistura com um ou mais ex- cipientes adequados. Inibidores Smoothened utilizados nos métodos da invenção podem ser preparados como descrito nas publicações de patente PCT WO .s 5 01/05767 e WO 00/05201,e em Ksander, et al. (2001) Journal of Medicinal Chemistry, 44:4677, os conteúdos de todos dos quais são aqui incorporados CÚ por referência.
Os compostos de fórmula Il e Ila são também descritos nos con- teúdos de Pedido de Patente U.S.nº 12/503.565, que tem como contraparte Pedido Internacional nº PCT/EP09/059138.
Um composto preferido de fórmula (II) é 2-[(R)-4-(6-benzil-4,5- dimetil-piridazin-3-i1)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-S-il]- propan-2-ol, (também identificado como o composto 3 neste documento), da fórmula abaixo:
HOR A Composto 3. 2-[(R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra- hidro-2H-[1,2']bipirazinil-S'-il]-propan-2-ol pode ser feito de acordo com o es- quema 1: hm N N x o a xD MV %n PhCh,ZnBrOsMinTHF Sy H *N DO PA(Pha)., THF, 65C DO EN, dioxano, NMP, x & mícro-onda, 100
E | Prá
TT Co, Me
NÓS ÇO,Me nã 2
ES É VT N “O Í x 7 MeMgl 3M em éter N EN, dioxano. b THF, -78C -> 0C (í qN Refluxo És 2N 2N | AZ a.
' 25/78 Primeira etapa: A mistura de 4,5-dimetil-1,4-dicloro-piridazina (10 9, 56,5 mmols), tetracis(trifenilfosfina)paládio(0) (3,3 g, 2,80 mmols) e THF (200 mL) é desgaseificada e em seguida brometo de benzilzinco (147 mL, 0,5 M em THF, 73,40 mmolis) é adicionado. A solução reacional é aquecida para .. 5 65ºC durante a noite. O solvente é removido. Água é adicionada e a camada de água é extraída com EtOAc. A camada aquosa é concentrada para forne- CGU cer um produto bruto que é purificado por cromatografia sobre sílica gel (E- toAc/Heptano: 0% - 50%) para fornecer 3-benzil-6-cloro-4,5-dimetil- piridazina (9,5 g, 67%).
Segunda etapa: 3-Cloro-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-1-il)- piridazina (400 mg, 1,66 mmol, 1 eq) é adicionado a uma solução de brome- to de benzilzinco (12,3 mL 0,5 M em THF, 6,64 mmols, 4 eq) e tetra- cis(trifenilfosfina)paládio (100 mg, 0,08 mmol, 0,05 eq) em um frasconete de micro-ondas. O frasconete é selado e irradiado no micro-ondas a 100 “C (fi- xaçãode alta absorção) durante 40 min. A mistura reacional é concentrada e purificada por cromatografia de sílica gel (5 - 20% de EtOAc/heptano) para 3-benzil-4,5-dimetil-6-((R)-3-metil-piperazin-1-il)-piridazina (324 mg, 66%).
Terceira etapa: A mistura do composto acima (6,0 9, 20,27 mmois), metil éster de ácido 5-cloropirazina-2-carboxílico (5,3 g, 30,30 mmolis), Et;N (6,2g,60,60mmolis)e dioxano (100 mL) é aquecida até o refluxo durante à noite. O solvente é removido. Solução de NH.CI saturada é adicionada e extraída com EtOAc. A camada aquosa é concentrada para fornecer o pro- duto bruto que é purificado por cromatografia sobre sílica gel (EtO- Ac/heptano: 50% —- 100%) para metil éster de ácido (R)-4-(6-benzil-4,5- dimetil-piridazin-3-iI)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-S"- carboxílico (6,6 g, 76%) como um sólido amarelo.
Etapa final: a uma solução de metil éster de ácido (R)-4-(6-benzil- 4,5-dimetil-piridazin-3-i1)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinil-5"- carboxílico (840 mg, 1,85 mmol) em THF (12 mL) é adicionado brometo de —metil magnésio (5 mL, 15 mmol, 3M em éter) a -78 'C. A mistura reacional é agitada a O “C durante 2 h em seguida diluída com DCM e lavada com NH,CI e água. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água,
- 26/78 - salmoura, secadas sobre NasSO;, filtradas e concentradas novamente. Puri- ficação por HPLC do produto bruto com acetonitrilio em água (de 10% para 95% com 3% de 1-propanol) em detecção de comprimento de onda de 220 nm fornece o composto desejado 3 (400 mg, 50%) próximo a pequenas e. 5 quantidades da metil cetona correspondente. Os solventes são removidos com um liofilizador para fornecer os produtos como pós brancos. CU Compostos inibidores de fosfoinositídeo 3-cinase (PI3K), co- mo também definido aqui, podem incluir compostos de fórmula À no R3 Re
RIA Ra ne
Q o (Fórmula A), ou um estereoisômero, tautômero, ou sal farmaceuticamente a- ceitável dos mesmos, em que, W é CRw ou N, em que Rw é selecionado do grupo consistindo em W é CR, ou N, em que R, é selecionado do grupo consistindo em (1) hidrogênio, (2) ciano, (3) halogênio, (4) metila, (5) trifluormetila, (6) sulfonamido; R1 é selecionado do grupo consistindo em (1) hidrogênio, (2) ciano, (3) nitro, (4) halogênio, (5) alquila substituída e não substituída, (6) alquenila substituída e não substituída, (7) alquinila substituída e não substituída,
. 27/78 - (8) arila substituída e não substituída, (9) heteroarila substituída e não substituída, (10)heterociclila substituída e não substituída, (11)cicloalquila substituída e não substituída, .. 5 (12)-COR1a, (13)-CO2R1a, CG (14)-CONR1aR1b, (15)-NR1aR1b, (16)-NR1aCOR1b, (17)-NR1aSO02R1b, (18)-OCOR1a, (19)-OR1a, (20)-SR1a, (21)-SOR1a, (22)-SO2R1a, e (23)-SO2NR1aR1b, em que Ria, e Rib são independentemente selecionados do grupo consistindo em (a) hidrogênio, (b) alquila substituída ou não substituída, (c) arila substituída e não substituída, (d) heteroarila substituída e não substituída, (e) heterociclila substituída e não substituída, e (f) cicloalquila substituída e não substituída; R2 é selecionado do grupo consistindo em (1) hidrogênio, (2) ciano, (3) nitro, (4) halogênio, (5) hidróxi, (6) amino, (7) alquila substituída e não substituída,
. 28/78 - (8) -COR2a, e (8) -NR2aCOR?2b, em que R2a, e R2b são independentemente selecionados do grupo consistindo em o 5 (a) hidrogênio, e (b) alquila substituída ou não substituída; VU R3 é selecionado do grupo consistindo em (1) hidrogênio, (2) ciano, (3) nitro, (4) halogênio, (5) alquila substituída e não substituída, (6) alquenila substituída e não substituída, (7) alquínila substituída e não substituída, (8) arila substituída e não substituída, (9) heteroarila substituída e não substituída, (10)heterociclila substituída e não substituída, (11)cicloalquila substituída e não substituída, (12)-COR3a, (13)-NR3aR3b, (14)-NR3aCOR3b, (15)-NR3aSO2R3b, (16)-OR3a, (17)-SR3a, (18)-SOR3a, (19)-SO2R3a, e (20)-SO2NR3aR3b, em que R3a, e R3b são independentemente selecionados do grupo consistindo em (a) hidrogênio, (b) alquila substituída ou não substituída, (c) arila substituída e não substituída,
: 29/78 ' (d) heteroarila substituída e não substituída, (e) heterociíclila substituída e não substituída, e (f) cicloalquila substituída e não substituída; e R4 é selecionado do grupo consistindo em e. 5 (1) hidrogênio, e (2) halogênio.
GU Os radicais e símbolos usados na definição de um composto de fórmula | têm os significados como descrito na publicação PCT WO07/084786, que é por meio deste incorporada por referência.
WO07/084786 descreve derivados de pirimidina, que foram descobertos modular a atividade de lipídeo cinases, tais como Pl3-cinases. Derivados de pirimidina específicos que são adequados para a presente invenção, sua preparação e formulações farmacêuticas adequadas contendo os mesmos são descritos no WO07/0847886.
Um composto preferido da presente invenção é 5-(2,6-i- morfolin-4-il-pirimidin-4-11)-4-trifluormetil-piridin-2-ilamina (referido aqui como o composto A), a síntese que é descrita no WOO07/084786 como o exemplo
10.
Compostos inibidores de fosfatidilinosítol 3-cinase (PISK), como também definido aqui, podem também incluir compostos de fórmula B R, R2 »
N sc) R$ v R; — (FórmulaB), (Rs), em que R: é naftila ou fenila em que a referida fenila é substituída por um ou dois substituíntes independentemente selecionados do grupo consis- tindo em halogênio;
' 30/78 . alquila inferior não substituída ou substituída por halogênio, cia- no, imidazolila ou triazolila; cicloalquila; amino substituído por um ou dois substituintes independente- é 5 mente selecionados do grupo consistindo em alquila inferior, alquil sulfonila inferior, alcóxi inferior e alquilamino inferior de alcóxi inferior; CG piperazinila não substituída ou substituída por um ou dois substi- tuintes independentemente selecionados do grupo consistindo em alquila inferior e alquil sulfonila inferior; 2-oxo-pirrolidinila; alquila inferior de alcóxi inferior; imidazolila; pirazolila; e triazolila; R2éOousS; Rs; é alquila inferior; R, é piridila não substituída ou substituída por halogênio, ciano, alquila inferior, alcóxi inferior ou piperazinila não substituída ou substituída por alquila inferior; pirimidinila não substituída ou substituída por alcóxi inferior; quinolinila não substituída ou substituída por halogênio; quinoxalinila; ou fenila substituída com alcóxi; Rs é hidrogênio ou halogênio; néOoui; Rs é óxido; com a condição de que se n = 1, o átomo de N transportando o radical Rg tenha uma carga positiva; R7 é hidrogênio ou amino; ou um tautômero do mesmo, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, ou um hidrato ou solvato do mesmo.
Os compostos B e C, referidos aqui, são compostos de fórmula
. 31/78 . B.
Os métodos e combinações da presente invenção compreendem o uso de composições farmacêuticas que contêm inibidores Smoothened, por exemplo, compostos de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qualquer ””. 5 umdos compostos listados aqui ou incorporados por referência, ou um deri- vado de N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos; GC ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em mistura com um ou mais excipientes adequados.
Inibidores de PI3K podem incluir os compostos descritos na publicação PCT WOZ2006/122806 (por exemplo, o composto 2-metil-2-[4-(3- metil-2-0x0-8-quinolin-3-il-2,3-di-hidro-imidazo[4,5-c]quinolin-1-iN)-fenil]- propionitrila (Composto B); e por exemplo, o composto 8-(6-metóxi-piridin-3- i)-3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluormetil-fenil)-1,3-di-hidro-imidazo([4,5- clquinolin-2-ona) (Composto C), os conteúdos dos quais são por meio deste incorporados por referência.
Inibidores de PI3K podem também incluir os compostos descritos na publicação PCT WO 07/084786 (por exemplo, o composto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluormetil-piridin-2-ilamina, composto A), os conteúdos dos quais são por meio deste incorporados por referência.
Inibidores de PI3K podem também incluir os compostos descri- tos nas publiaçõões PCT WO 07/12775, WO 07/129005, WO 07/129048, WO 07/129052, WO 07/129161, WO 07/13271, WO 07/122410, WO 07/080382, WO 07/087395, US 07,238,730, US 072,387,646, e WO 07/082956, os conteúdos dos quais são por meio desteincorporados por referência.
Inibidores de PI3K podem também incluir inibidores tais como XL-147 e XL-765 (Exelixis?), bem como SF-1126 (Semaphore Pharmaceuti- calsº), PX-866 (Oncothyreon), e GDC0941 (Roche). Definições A menos que definido de outra maneira, todos os termos técni- cos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por aqueles versados na técnica ao quai esta invenção pertence.
. As seguintes referências provêm alguém de experiência com uma definição geral de muitos dos termos usados nesta invenção: Oxford Dictionary of Bio- chemistry and Molecular Biology, Smith et al. (eds.), Oxford University Press (edição revisada, 2000); Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, .- 5 Singletonetal (Eds.), John Wiley & Sons (3P"*P ed., 2002); e A Dictionary of Biology (Oxford Paperback Reference), Martin e Hine (Eds.), Oxford Univer- CG sity Press (4a. ed., 2000). Além disso, as seguintes definições são forneci- das para ajudar o leitor na prática da invenção.
Por "suprimir e/ou reverter", por exemplo, um distúrbio relaciona- doa Hedgehog (por exemplo, câncer), requerentes pretendem abolir o refe- rido distúrbio relacionado a Hedgehog (por exemplo, câncer), ou tornar a referida condição menos severa do que antes ou sem o tratamento.
"Cura" como usado aqui significa levar à remissão do distúrbio relacionado a Hedgehog (por exemplo, câncer) em um paciente, ou de epi- —sódios contínuos do mesmo, através de tratamento.
Os termos "profilaxia" ou "prevenção" significam impedir o início ou recorrência de um distúrbio relacionado a Hedgehog (por exemplo, cân- cer).
"Diagnóstico" refere-se a diagnosticar, prognosticar, monitorar, caracterizar, selecionar pacientes, incluindo participantes em experiências clínicas, e identificar pacientes em risco para ou tendo um distúrbio particular ou evento clínico ou aqueles mais prováveis de responder a um tratamento terapêutico particular, ou avaliar ou para indicar proteina ou gene. O termo é também usado para descrever sequências homólogas/ortólogas em diferen- tes espécies animais monitorar uma resposta do paciente a um tratamento terapêutico particular.
"Indivíduo" ou "paciente" refere-se a um mamífero, preferivel- mente um humano, em necessidade de tratamento para uma condição, dis- túrbio ou doença.
"Retardo de progressão" como usado aqui significa que a admi- nistração de inibidores Smoothened (por exemplo, um composto de fórmula 1, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qualguer um dos compostos listados aqui ou
. 33/78 * incorporados por referência) a pacientes em um pré-estágio ou em uma fase precoce de um distúrbio relacionado a Hedgehog (por exemplo, câncer) pre- vine a doença de evoluir adiante, ou diminue a evolução da doença em comparação à evolução da doença sem administração do composto ativo.
e” 5 O termo "combinações da invenção," ou frases similares, refere- se a antagonistas ou inibidores da via de sinalização de Smo (por exemplo, CG inibidores Smoothened) em combinação com um ou mais dos seguintes: (i) inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); e (ii) inibidores de Gli, O termo "Hedgehog" é usado para referir-se genericamente a qualquer membro da família de Hedgehog, incluindo “Sonic”, indiano, deser- to e tiggy winkle . O termo pode ser usado.
Os termos "via de sinalização de Hedgehog (Hh)" e "sinalização de Hedgehog (Hh)" são usados alternadamente e referem-se à cadeia de eventos normalmente mediados por vários membros da cascata de sinaliza- ção tais como Hedgehog, patched (Ptch), Smoothened (Smo), e Gli. A via de Hedgehog pode ser ativada mesmo na ausência de uma proteina de Hedge- hog por ativação de um componente a jusante. Por exemplo, superexpres- são de Smo ativará a via na ausência de Hedgehog.
Componentes de sinalização de Hh ou membros da via de sinali- zação de Hh referem-se a produtos de gene que participam na via de sinali- zação de Hh. Um componente de sinalização de Hh frequentemente materi- almente ou substancialmente afeta a transmissão do sinal de Hh em célu- las/tecidos, tipicamente resultando em alterações em grau de nível de ex- pressão de gene a jusante e/ou alterações fenotípicas. Componentes de si- nalização de Hh, dependendo de sua função biológica e efeitos sobre o re- sultado final da ativação/expressão de gene a jusante, podem ser divididos em reguladores positivos e negativos. Um regulador positivo é um compo- nente de sinalização de Hh que positivamente afeta a transmissão do sinal de Hh,istoé, estimula eventos biológicos a jusante quando Hh está presen- te. Exemplos incluem Hedgehog, Smo, e Gli. Um regulador negativo é um componente de sinalização de Hh que negativamente afeta a transmissão do
- 34/78 * sinal de Hh, isto é, inibe eventos biológicos a jusante quando Hh está pre- sente. Exemplos incluem (porém não são limitados a) Ptch e SuFu.
"Ganho de função de Hedgehog" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene ou proteína de Ptc, Hedgehog, ou Smo, ou .. 5 uma diminuição (ou perda) no nível de expressão de um tal gene, que resul- ta em um fenótipo que parece contactar uma célula com uma proteina de VU Hedgehog, por exemplo, ativação aberrante de uma via de Hedgehog. "Ga- nho de função de Hedgehog" pode também referir-se à ativação aberrante de uma via de Hedgehog resultando de um aumento em expressão de ligan- tes naturais de via de Hedgehog, e/ou um aumento em expressão de Smo. O ganho de função pode incluir uma perda da capacidade do produto de ge- ne Ptch regular o nível de expressão de genes Gli, por exemplo, Gli1, Gli2, e Gli3. O termo "ganho de função de Hedgehog" é também usado aqui para referir-se a qualquer fenótipo celular similar (por exemplo, exibindo prolifera- çãoem excesso) que ocorre devido a uma alteração em qualquer lugar na via de transdução de sinal de Hedgehog, incluindo, porém não limitada a, uma modificação ou mutação de Hedgehog por si só. Por exemplo, uma cé- lula de tumor com uma taxa de proliferação anormalmente alta devido à ati- vação da via de sinalização de Hedgehog teria um fenótipo de "ganho de funçãode Hedgehog", mesmo se o Hedgehog não for mutado naquela célu- la.
"Perda de função de Patched" refere-se a uma modificação, am- plificação, ou mutação aberrante de um gene ou proteina Ptch, ou um nível diminuído de expressão do gene, que resulta em um fenótipo que parece contactar uma célula com uma proteina de Hedgehog, por exemplo, ativação aberrante de uma via de Hedgehog. A perda de função pode incluir uma perda da capacidade do produto de gene Ptch regular o nível de expressão de genes Gli, por exemplo, Gli1, Gli2 e Gli3.
"Ganho de função de Gli" refere-se a uma modificação, amplifi- cação, ou mutação aberrante de um gene ou proteína Gli, ou um nível au- mentado de expressão do gene, que resulta em um fenótipo que parece con- tactar uma célula com uma proteina de Hedgehog, por exemplo, ativação
- 35/78 x aberrante de uma via de Hedgehog.
O termo "inibir" ou "inibição," no contexto de crescimento de tu- mor ou crescimento de célula de tumor, refere-se ao aparecimento retardado de tumores primários ou secundários, desenvolvimento lentificado de tumo- = 5 res primários ou secundários, ocorrência diminuída de tumores primários ou secundários, severidade lentificada ou diminuída de efeitos secundários de CG doença, ou crescimento de tumor interrompido e regressão de tumores. O termo "prevenir" ou "prevenção" refere-se a uma inibição completa de de- senvolvimento de tumores primários ou secundários ou quaisquer efeitos secundários de doença. No contexto de modulação de atividades enzimáti- cas, inibição refere-se à supressão ou redução reversível de uma atividade enzimática incluindo inibição competitiva, incompetitiva, e não competitiva. Isto pode ser experimentalmente distinguido pelos efeitos do inibidor sobre as cinéticas de reação da enzima, que podem ser analisadas em termos da equação de taxa de Michaelis-Menten básica. Inibição competitiva ocorre quando o inibidor pode combinar-se com a enzima livre de tal modo que ele compete com o substrato normal para ligar-se ao sítio ativo. Um inibidor competitivo reage reversivelmente com a enzima para formar um complexo inibidor de enzima [El], análogo a um complexo de enzima-substrato.
"Ganho de função Smoothened" refere-se a uma modificação ou mutação aberrante de um gene de Smo, ou um nível aumentado de expres- são do gene, que resulta em um fenótipo que parece contactar uma célula com uma proteina de Hedgehog, por exemplo, ativação aberrante de uma via de Hedgehog.
"Inibidor Smoothened" (ou "antagonistas Smoothened" ou ex- pressões similares) como usado aqui descreve agentes capazes de inibir, antagonizar, ou interromper Smoothened, desse modo inibindo, antagoni- zando, ou interrompendo a sinalização de via de Hedgehog. Inibidores Smo- othened incluem, porém não são limitados a ciclopamina, jervina, compostos de fórmulal (por exemplo, um composto de fórmulas (la), (Ib) ou (lIc)), com- postos de fórmula Il, compostos de fórmula Ill, qualquer um dos compostos anti-Smoothened individualmente listados aqui, anticorpos anti-Smo, e áci-
. 36/78 . dos nucleicos inibitórios anti-Smo (por exemplo, siRNAs anti-Smo). Inibido- res Smoothened também incluem outros agentes anti-Smoothened conheci- dos na técnica e/ou incorporados aqui por referência. "Inibidor de PI3K" como usado aqui descreve agentes capazes es. 5 deinibir, antagonizar, ou interromper atividade biológica relacionada a PISK e efetores a jusante, por exemplo, ativação da via de PI3K. Para propósitos CG do presente pedido, inibidores de PI3BK podem também incluir agentes que inibem alvos a jusante de PI3Ks, tais como PDK1, Akt e mMTOR (alvo mamí- fero de rapamicina).
Inibidores de PI3K podem incluir os compostos listados aqui como parte das fórmulas A e B. Inibidores de PI3K podem também incluir inibidores de lipídeo cinase e nucleotídeos inibitórios contra PI3K tais como SIRNAs. Inibidores de PI3K podem também incluir compostos descritos em publicação de PCT WO 2006/122806 (por exemplo, composto 2-metil-2-[4- (3-metil-2-0x0-8-quinolin-3-il-2,3-di-hidro-imidazo(4,5-c]quinolin-1-i)-fenil]- propionitrila, composto B; e por exemplo, composto 8-(&-metóxi-piridin-3-il)- 3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluormetil-fenil)-1,3-di-hidro-imidazo[4,5- clquinolin-2-ona), composto C, os conteúdos dos quais são pelo presente incorporados por referência. Inibidores de PI3K podem também incluir os compostos descritos em publicação de PCT WO 07/084786 (por exemplo, composto 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-trifluormetil-piridin-2-ilamina, composto A), os conteúdos dos quais são pelo presente incorporados por referência.
Inibidores de PI3SK podem também incluir os compostos descritos em publicações de PCT WO 07/12775, WO 07/129005, WO 07/129048, WO 07/1290052, WO 07/129161, WO 07/13271, WO 07/122410, WO 07/080382, WO 07/087395, US 07,238,730, US 072,387,646, e WO 07/0829586, os conteúdos dos quais são pelo presente incorporados por referência.
Inibidores de PISK podem também incluir inibidores tais como XL-147 e XL-765 (Exelixisº), bem como SF-1126 (Semaphore Pharmaceuti- calsº ), PX-866 (Oncothyreon), e GDC0941 (Roche).
« 37/78 . "Inibidor de Gli" como usado aqui descreve agentes capazes de inibir, antagonizar, ou interromper a atividade relacionada a Gli, por exemplo, transativação de gene. Inibidores de Gli incluem agentes que são capazes de inibir a atividade relacionada à via de Hedgehog (por exemplo, atividade .. 5 —aberrante que resulta em distúrbios relacionados a Hedgehog) associada com ativação a jusante Smoothened. Exemplos não limitantes de inibidores VU de Gli incluem GANT61 (GIi-ANTagonista 61), GANTS8, zerumbona, epóxido de zerumbona, estaurosporinona, 6-hidroxiestaurosporinona, arciriaflavina C, 5,6-di-hidroxiarciriaflavina A, e fisalinas Fe B.
Na presente descrição, o termo "tratamento" pode incluir ambos os tratamentos profilático ou preventivo bem como tratamento supressor de doença ou curativo, incluindo tratamento de pacientes em risco para um dis- túrbio da invenção (por exemplo, um distúrbio relacionado a Hedgehog (por exemplo, câncer)) bem como pacientes enfermos. Este termo também inclui otratamento para o retardo de progressão da doença.
"Tratamento" ou "tratar" inclui a administração de compostos ou agentes para prevenir ou retardar o início dos sintomas, complicações, ou indícios bioquímicos de uma doença (por exemplo, leucemia), aliviar os sin- tomas ou interromper ou inibir também o desenvolvimento da doença, condi- ção, ou distúrbio. O tratamento pode ser profilático (para prevenir ou retardar O início da doença, ou para prevenir a manifestação de sintomas clínicos ou subclínicos da mesma) ou supressão ou alívio terapêutico de sintomas após a manifestação da doença.
O termo "tratar" ou "tratamento" também se refere ao cresci- mento de tumor interrompido, e à regressão parcial ou completa de tumores, e inclui a administração de compostos ou agentes para prevenir ou retardar O início dos sintomas, complicações, ou indícios bioquímicos de uma doença (por exemplo, câncer), aliviar os sintomas ou interromper ou inibir também o desenvolvimento da doença, condição, ou distúrbio.
Como usado aqui uma "molécula orgânica pequena" é um com- posto orgânico (ou composto orgânico complexado com um composto inor- gânico (por exemplo, metal)) que tem um peso molecular de menos do que 3
. 38/78 * quilodaltons, e preferivelmente menos do que 1,5 quilodaltons.
A frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades moleculares e composições que são fisiologicamente toleráveis e tipicamen- te não produzem uma reação desagradável alérgica ou similar, tais como eo 5 indisposição gástrica, tonteira e similares, quando administradas a um hu- mano. Preferivelmente, como usado aqui, o termo "farmaceuticamente acei- CG tável" significa aprovado por uma agência regulatória do governo federal ou um governo do estado ou listado na Farmacopeia dos Estados Unidos ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais, e mais par- ticularmente em humanos.
O termo "carreador" refere-se a um diluente, adjuvante, excipi- ente, ou veículo com o qual o composto é administrado. Tais veículos farma- cêuticos podem ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo a- queles de origem de petróleo, animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e similares. Água ou soluções salinas de solução aquosa e dextrose aquosa e soluções de glice- rol são preferivelmente empregadas como veículos, particularmente para soluções injetáveis. Veículos farmacêuticos adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E. W. Martin.
A frase "quantidade terapeuticamente eficaz" é usada aqui pa- ra significar uma quantidade suficiente para reduzir em pelo menos cerca de 15 por cento, preferivelmente em pelo menos 50 por cento, mais preferivel- mente em pelo menos 90 por cento, e mais preferivelmente prevenir, um déficit clinicamente significante na atividade, função e resposta do hospedei- ro. Altevnativamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz é suficiente para causar uma melhora em uma condição clinicamente significan- te/sintoma no hospedeiro.
O termo "agente" ou "agente de teste" inclui qualquer substân- cia, molécula, elemento, composto, entidade, ou uma combinação dos mes- mos. Ele inclui, porém não é limitado a, por exemplo, proteína, polipeptídeo, molécula orgânica pequena, polissacarídeo, polinucleotídeo, e similares. Ele pode ser um produto natural, um composto sintético, ou um composto quími-
. 39/78 ' Co, ou uma combinação de duas ou mais substâncias. A menos que de outra maneira especificado, os termos "agente", "substância", e "composto" podem ser usados alternadamente.
"Análogo", como usado aqui, refere-se a um composto orgânico es 5 pequeno, um nucleotídeo, uma proteína, ou um polipeptídeo que possui ati- vidade ou função (ões) similar ou idêntica como o composto, nucleotideo, VU proteína ou polipeptídeo ou composto tendo a atividade desejada e efeito terapêutico da presente invenção (por exemplo, inibição de crescimento de tumor), porém não necessita necessariamente compreender uma sequência ou estrutura que é similar ou idêntica à sequência ou estrutura da modalida- de preferida.
"Apoptose" refere-se à morte celular programada e é caracteri- zada por certas características celulares tais como flictema de membrana, condensação e fragmentação de cromatina, formação de corpos apoptóticos eum padrão de coloração "TUNEL" positivo. Degradação de DNA genômico durante a apoptose resulta em formação de fragmentos de DNA de tamanho de nucleossoma característicos; esta degradação produz um padrão de es- calonamento de (cerca de) 180 bp diagnóstico quando analisada por eletro- forese de gel. Uma etapa posterior no processo apoptótico é a degradação da membrana plasmática, tornando células apoptóticas permeáveis a vários Pigmentos (por exemplo, azul tripano e iodeto de propídio).
"Derivado" refere-se a um composto, uma proteína ou polipepti- deo que compreende uma sequência de aminoácido de uma proteína ou polipeptídeo origem que foi alterada pela introdução de substituições, dele- ções ou adições de resíduo de aminoácido, ou um ácido nucleico ou nucleo- tídeo que foi modificado por introdução de substituições ou deleções, adi- ções ou mutações de nucleotídeo. O derivado ácido nucleico, nucleotídeo, proteína ou polipeptídeo possui uma função similar ou idêntica como o poli- peptídeo origem.
"Inibidores," ou “antagonistas” referem-se a moléculas inibitó- rias identificadas usando ensaios in vitro e in vivo para função da via de Hh, por exemplo, antagonistas de Smo. Em particular, inibidores e antagonistas
- 40/78 . referem-se a compostos ou agentes que diminuem a sinalização que ocorre por meio da via de Hh.
Inibidores podem ser compostos que diminuem, blo- queiam, ou previnem a sinalização por meio desta via. "Distúrbio(s) relacionado(s) ao Hedgehog" como usado aqui es 5 inclui distúrbios associados com rompimento ou aberrância da via de Hed- gehog, bem como distúrbios associados com estados de crescimento nor- Ú mais, porém indesejados relacionados à ativação da via de Hedgehog. "Dis- túrbio(s) relacionado(s) ao Hedgehog" incluem, porém não são limitados à formação de tumor, câncer, neoplasia, distúrbios hiperproliferativos malig- nos, e distúrbios hiperproliferativos não malignos. "Distúrbio(s) relaciona- do(s) ao Hedgehog" também incluem hiperplasia de próstata benigna, psorí- ase, degeneração macular úmida, osteopetrose e crescimento de cabelo indesejável.
Como usado aqui, o termo "câncer" inclui tumores mamíferos sólidos bem como malignidades hematológicas. "Tumores mamíferos sóli- dos" incluem cânceres da cabeça e pescoço, pulmão, mesotelioma, medias- tino, esôfago, estômago, pâncreas, sistema hepatobiliar, intestino delgado, cólon, colorretal, reto, ânus, rim, uretra, bexiga, próstata, uretra, pênis, testi- culo, órgãos ginecológicos, ovários, mama, sistema endócrino, pele, sistema nervoso central incluindo cérebro; sarcomas do tecido Mole e osso; e mela- noma de origem cutânea e intraocular.
O termo "malignidades hematológi- cas" inclui leucemia e linfomas da infância, doença de Hodgkin, linfomas de origem linfocítica e cutânea, leucemia aguda e crônica, neoplasma de célula plasmática e cânceres associados com AIDS.
Além disso, um câncer em qualquer estágio de progressão pode ser tratado, tais como cânceres primá- rios, metastáticos, e recorrentes.
Informação quanto aos numerosos tipos de câncer pode ser encontrada, por exemplo, a partir da American Cancer So- ciety, ou de, por exemplo, Wilson et al. (1991) Harrison's Principles of Inter- nal Medicine, 12º Edição, McGraw-Hill, Inc.
Ambos usos humano e veteriná- riosão contemplados.
Cânceres que são particularmente receptivos ao tratamento pe- los métodos da invenção incluem, porém não são limitados a gliomas, medu-
. 41/78 - loblastomas (por exemplo, meduloblastomas cerebelares), pericitoma, tumo- res neuroectodérmicos primitivos (PNETS), carcinoma de célula basal (BCC), cânceres de pulmão de célula pequena, cânceres de pulmão de célu- la grande, tumores do trato gastrointestinal, rabdomiossarcomas, câncer de e. 5 —mama,sarcomas de tecido mole, tumores pancreáticos, tumores de bexiga e tumores de próstata.
VC Como usado aqui, "tumores sensíveis" significam tumores (por exemplo, meduloblastomas) que, devido à ativação da via de Hedgehog, respondem ao tratamento com um regime anticâncer inibidor Smoothened.
Como usado aqui, "tumores resistentes” significam anterior- mente tumores sensíveis (por exemplo, meduloblastomas) que, na presença contínua de um inibidor de smo, desenvolveram-se novamente após redução devido ao tratamento, ou reapareceram após serem temporariamente elimi- nados devido ao tratamento. Tumores resistentes mostram uma sensibili- dade diminuída ou nenhuma resposta à inibição Smoothened. Tratamento bem-sucedido de tumores resistentes pode engendrar, por exemplo, sensibi- lidade aumentada de uma célula de tumor a novo regime anticâncer ou pre- viamente experimentado e/ou agentes quimioterapêuticos, e pode resultar em, por exemplo, morte de célula de tumor subsequente e prevenção de metástase.
Como usado aqui, "estatina” significa qualquer um de uma clas- se de fármacos que inibem uma enzima chave envolvida na síntese de co- lesterol e promovem ligação de receptor de colesterol LDL, resultando em níveis diminuídos de colesterol do soro e colesterol! LDL e níveis aumenta- dos de colesterol HDL. Estes são frequentemente referidos como um sub- grupo de inibidores da via sintética de esterol (SSPIs), e reduzem os níveis de colesterol do soro por inibição de HMG-CoA redutase, uma enzima chave envolvida na biossintese de colesterol. Estatinas incluem pravastatina, sin- vastatina, lovastatina, fluvastatina, atorvastatina, cerivastatina, rosuvastatina, epitavastatina Como usado aqui, o termo "distúrbio(s) hiperproliferativo(s) ma- ligno(s)" inclui porém não é limitado a cânceres, distúrbios proliferativos neu-
" 42/78 ronais, doenças proliferativas de medula óssea e leucemias.
' Como usado aqui, o termo "distúrbio(s) hiperproliferativo(s) não maligno(s)" inclui, porém não é limitado a distúrbios proliferativos não malig- nos e não neoplásicos, tais como hiperplasia de músculo liso em vasos san- es 5 — guíineos, cicatrização cutânea, e fibrose pulmonar.
Como usado aqui, "inibidor de via de biossíntese de coleste- CU rol" significa agentes que são capazes de inibir ou interromper a geração ou síntese de colesterol, que, por exemplo, começa no citoplasma e microsso- mas com a conversão do grupo acetato de dois carbonos de aceti-CoA. À —biossíntese de colesterol é estritamente regulada a fim de prevenir supera- cúmulo e deposição anormal de colesterol dentro do corpo (que pode, inter alia, levar à doença cardiovascular). Inibidores desta via incluem a classe de inibidores da via sintética de esterol (SSPIs), que inclui, porém não é limitada a, (i) estatinas; (ii) ácido zaragózico A (ZGA), um inibidor de síntese de es- qualeno que bloqueia a conversão de isoprenoides em esteróis, deixando apenas a síntese de isoprenoide intacta; cetoconazol, que permite a síntese de um esterol precoce, lanosterol, porém previne a síntese de esteróis a ju- sante; (iv) triparanol (TPL), que bloqueia a etapa final de síntese de coleste- rol, permitindo a produção de esteróis exceto colesterol e seus derivados; e (v) aminoglutetimída, que bloqueia a conversão de colesterol em pregnene- lona e outros esteroides, deixando a síntese de estero! não afetada.
O termo "alquila" refere-se a grupos hidrocarboneto de cadeia li- near ou ramíificada tendo 1 a 20 átomos de carbono, preferivelmente alquila inferior de 1 a 7 átomos de carbono. Grupos alquila exemplares incluem me- tila, etila, propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, pentila, hexila, isoexi- la, heptila, 4,4-dimetilpentila, octila e similares. Preferido é Cr-C,-alquila.
O termo "inferior" referido aqui com relação a radicais ou com- postos orgânicos respectivamente geralmente define, se não definido dife- rentemente, tal como com até e incluindo 7, preferivelmente até e incluindo 4 e vantajosamente um ou dois átomos de carbono. Tal pode ser de cadeia linear ou ramificado.
O termo "alquila opcionalmente substituída" refere-se a grupos
- 43/78 si hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada não substituídos ou substituí- . dos tendo 1 a 20 átomos de carbono, preferivelmente alquita inferior de 1 a 7 átomos de carbono.
Grupos alquila não substituídos exemplares incluem metila, etila, propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, pentila, hexila, iso- -. 5 exila, heptila, 4,4-dimetilpentila, octila e similares.
O termo "alquila substituída" refere-se a grupos alquila substituí- CU dos por um ou mais dos seguintes grupos: halo (tais como F, Cl, Brel), hi- dróxi, alcóxi, alcoxialcóxi, arilóxi, cicloalquila, alcanoila, alcanoilóxi, amino, amino substituído, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ariltio, alquiltiono, alquilsulfo- nila, arilsulfonila, heteroarilsulfonila, aminossulfonila, nitro, ciano, carbóxi, carbamila, alcoxicarbonila, arila, aralcóxi, guanidino, heterociclila (por exem- plo, indolila, imidazolila, furia, tienila, tiazolila, pirrolidila, pirídila, pirimidila), e similares.
O termo "halogênio" ou "halo" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.
O termo "alcóxi” ou "alquilóxi" refere-se a alquil-O-. O termo "arila" ou "ar" refere-se a grupos hidrocarboneto aromá- ticos monocíclicos ou bicíclicos carbocíclicos tendo 6 a 12 átomos de carbo- no na porção do anel, tais como grupos fenila, naftila, tetra-hidronaftila, e bifenila, cada dos quais pode opcionalmente ser substituído por um a quatro, por exemplo, um ou dois, substituintes tais como alquila, halo, trifluormetila, hidróxi, alcóxi, alcanoíla, alcanoilóxi, amino, amino substituído, alcanoilami- no, tiol, alquiltio, nitro, ciano, carbóxi, carboxialquila, carbamila, alcoxicarbo- nila, alquiltiono, alquilsulfonila, aminossulfonila, e similares. "Arileno" significa um radical divalente derivado de um grupo arila.
O termo "aralquila" refere-se a um grupo arila ligado a um grupo alquila, tal como benzila.
O termo "haloalquila" refere-se a alquila que é mono- ou polis- substituída por halo, tal como trifluormetóxi.
O termo "alquileno" refere-se a uma ponte de cadeia linear de 1 a 6 átomos de carbono conectados por ligações únicas (por exemplo, - (CH2)x- em que x é 1 a 6) que podem ser substituídos com 1 a 3 grupos al-
. 44/78 . quila inferior.
O termo "alquileno interrompido por O, S, N-(H, alquila ou aral- quila)" refere-se a uma cadeia linear de 2 a 6 átomos de carbono que é inter- rompida por O, S, N-(H, alquila ou aralquila), tal como (m)etilenooxi(m) etile- es 5 no, (m)etilenotio(m)etileno, ou (m)etilenoimino(m)etileno.
"Cicloalquila" significa uma construção de anel monocíclico, bicí- CÚ clico fundido ou policícico em ponte, saturado ou parcialmente insaturado contendo o número de átomos de anel indicado. Por exemplo, Cz.15 cicloal- quila inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, etc.
O termo "alcanoilóxi refere-se a algui-C(0)-O-.
Os termos "alquilamino" e "dialquilamino" referem-se a (al- quil)NH- e (alquil)2N-, respectivamente.
O termo "alcanoilamino" refere-se a alquil-C(O)-NH-.
O termo "alquiltio" refere-se a alquil-S-.
O termo "alquiltiono" refere-se a alquil-S(O)-.
O termo "alquilsulfonila" refere-se a alquil-S(0)2- O termo "carbamila" refere-se a -C(O)-amino ou -C(O)-amino substituído.
O termo "alcoxicarbonila" refere-se a alquil-O-C(O0)-.
O termo "acila" refere-se à alcanoila, aroíla, heteroaroíla, aril- alcanoíla, heteroarilalcanoíla, e similares.
O termo "heteroarila" ou "heteroar" refere-se a um heterociclo aromático, por exemplo arila heterocíclica monocíclica ou bicíclica, tais como pirrolila, pirazolila, imidazolila, oxazolila, tiazolila, isoxazolila, tiazolila, isotia- zolila,furila, tienila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, indolila, benzo- tiazolila, benzoxazolila, benzotienila, quinolínila, isoquinolinita, benzimidazoli- la, benzofurila, e similares, opcionalmente substituído por um a quatro, por exemplo, um ou dois, substituintes, tais como alquila inferior, alcóxi inferior ou halo, o ponto de ligação do referido heterociclo sendo em um átomo de carbono do anel heterocíclico. Resíduos de heteroarila preferidos são 1- metil-2-pirrolila, 2-, 3-tienila, 2-tiazolila, 2-imidazolila, 1-metil-2-imidazolita, 2- ,3-,4- piridila, ou 2-quinolila.
- 45/78 * "Heterocicloalquila" significa cicloalguila, como definido neste . pedido, contanto que um ou mais dos carbonos de anel indicados, sejam substituídos por uma porção selecionada de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, 7 -S(O) - ou -S(0)>-, em que R é hidrogênio, C14 alqguila ou um grupo de prote- es 5 ção de nitrogênio. Por exemplo, C36 heterocicloalquila como usado neste pedido para descrever combinações da invenção inclui morfolino, pirrolidini- VU la, pirrolidinil-2-ona, piperazinila, piperidinila, piperidinilona, 1,4-dioxa-8-aza- espiro[4.5]dec-8-ila, tiomorfolino, sutfanomorfolino, sulfonomorfolino, etc. O termo "alcanoíla" refere-se, por exemplo, a C2-C;-alcanoíla, especialmente C7-Cs-alcanoíla, tais como acetila, propionila ou pivaloíila.
O termo "aralcóxi" refere-se a um grupo arila ligado a um grupo alcóxi.
O termo "arilsulfonila" refere-se a aril-SO>-.
O termo "aroíla" refere-se a ari-CO-, O termo "heterociclila" refere-se a um grupo cíclico aromático ou não aromático, totalmente saturado ou insaturado, opcionalmente substituí- do, por exemplo, que é um sistema de anel monocíclico de 4 a 7 membros, bicíclico de 7 a 11 membros, ou tricíclico de 10 a 15 membros, que tem pelo menos um heteroátomo em pelo menos um anel contendo átomo de carbo- no Cada anel do grupo heterocíclico contendo um heteroátomo pode ter 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de átomos de nitrogênio, átomos de oxigê- nio e átomos de enxofre, onde os heteroátomos de nitrogênio e enxofre po- dem também opcionalmente ser oxidados e os heteroátomos de nitrogênio podem também opcionalmente ser quaternizados. O grupo heterocíclico po- deserunidoem qualquer heteroátomo ou átomo de carbono.
Grupos heterocíclicos monocíclicos exemplares incluem pirrolidi- nila, pirrolila, pirazolila, oxetanila, pirazolinila, imidazolila, imidazo-linila, imi- dazolidinila, oxazolila, oxazolidinila, isoxazolinila, isoxazolila, tiazoli-la, tiadia- zolila, tiazolidinila, isotiazolila, isotiazoliclinita, furita, tetra-hidrofurila, tienila, —oxadiazolila, piperidinila, piperazinila, 2-oxopiperazinila, 2-oxopiperi-dinila, 2- oxopirrolodinila, 2-oxoazepinila, azepinila, 4-piperidonila, pirídila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, tetra-hidropiranila, morfolinila, tiamorfolí-nila, sulfóxi-
' do de tiamorfolinila, sutfona de tiamorfolinila, 1,3-dioxolano e tetra-hidro-1,1- . dioxotienila, e similares. Grupos heterocíclicos bicíclicos exemplares incluem indolila, ' benzotiazolila, benzoxazolita, benzotienita, quinuclidinila, quinolinila, tetra- es 5 hidroisoquinolínila, isoquinolinila, benzimidazolila, benzopiranita, indolizinila, benzofurila, cromonila, cumarinila, enzopiranila, cinolinila, quinoxalinila, inda- CÚ zolila, pirrolopirídila, furopiridinila (tais como furo[2,3-cJpiridinila, furo(3,2- blpirídinila) ou furo(2,3-b]piridinila), di-hidroisoindolila, di-hidroquinazolinila (tal como 3,4-di-hidro-4-0xo-quinazolinila) e similares. Grupos heterocíclicos tricíclicos exemplares incluem carbazolila, benzidolila, fenantrolinila, acridinila, fenantridinila, xantenila e similares.
O termo "heterociclila" também incluí grupos heterocíclicos subs- tituídos. Grupos heterocíclicos substituídos referem-se a grupos heterocícli- cos substituídos com 1, 2 ou 3 dos seguintes: (a) alquila; (b) hidróxi (ou hidróxi protegido); (c) halo; (d) oxo (isto é = O); (e) amino ou amino substituído; (P) alcóxi; (g) cicloalquila; (h) carbóxi; (1) heterocicloóxi; (1) alcoxicarbonila, tal como alcoxicarbonila inferior não substituí- da (k) carbamila, alquilcarbamila, arilcarbamila, dialquilcarbamila; (1) mercapto; (m) nitro; (n) ciano; (o) sultfonamido, sulfonamidoalquila ou sulfonamidodialquila; (p) arila; (q) alquilcarbonilóxi;
: (1) arilcarbonilóxi; . (s) ariltio; (1) arilóxi; O (u) alquiltio; e. 5 (v) formila; (w) arilalquila; ou VU (x) arila substituída com alquila, cicloalquila, alcóxi, hidróxi, ami- no, alquilamino, dialquilamino ou halo.
O termo "heterocicloóxi" denota um grupo heterocíclico ligado a- travésde uma ponte de oxigênio.
O termo "heteroarilsulfonila" refere-se a heteroaril-SOz-. O termo "heteroaroíla" refere-se a heteroaril-CO-. O termo "acilamino" refere-se a acil-NH-. O termo "amino substituído" refere-se a amino mono- ou, inde- pendentemente, dissubstituído por alquila, aralquila, arila, heteroarila, ciclo- alquila, cicloalquilalquila, heteroaralquila, ou dissubstituído por alquileno infe- rior ou alquileno inferior interrompido por O, S, N-(H, alquila, aralquila) e si- milares.
Como usado aqui, "contactar" tem seu significado normal e refe- re-sea combinar duas ou mais moléculas (por exemplo, um composto orgâ- nico de molécula pequena e um polipeptídeo) ou combinar moléculas e célu- las (por exemplo, um composto e uma célula). Contactar pode ocorrer in vi- tro, por exemplo, combinar dois ou mais agentes ou combinar um composto e uma célula ou um lisado celular em um tubo de teste ou outro recipiente.
Contactar pode também ocorrer em uma célula ou in situ, por exemplo, con- tactar dois polipeptídeos em uma célula por coexpressão na célula de poli- nucleotídeos recombinantes codificando os dois polipeptídeos, ou em um lisado celular.
Sais farmaceuticamente aceitáveis de quaisquer compostos ini- —bidores Smoothened acídicos usados com os métodos da invenção são sais formados com bases, a saber, sais catiônicos tais como sais de metal de álcali e alcalino terroso, tais como sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio,
r 48/78 ' bem como sais de amônio, tais como sais de amônio, trimetilamônio, dieti- . lamônio, e tris-(hidroximetil)- metilamônio. Similarmente, sais de adição de ácido, tais como de ácidos mine- O rais, ácidos carboxílicos orgânicos, e sulfônicos orgânicos, por exemplo, áci- .”. 5 do hidroclórico, ácido metanossulfônico, ácido maleico, são possíveis con- tanto que um grupo básico, tal como amino ou pirídila, constitua parte da CU estrutura.
Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos inibidores Smoothened usados com os métodos da invenção são particularmente sais de adição de ácido, tais como de ácidos minerais, ácidos carboxílicos orgã- nicos, e sulfônicos orgânicos, por exemplo, ácido hidroclórico, ácido meta- nossulfônico, ácido maleico, e similares contanto que um grupo básico, tal como pirídila, constitua parte da estrutura.
Os compostos inibidores Smoothened usados com os métodos da invenção, dependendo da natureza dos substituintes, possuem um ou mais átomos de carbono assimétricos e, portanto, existem como racematos e os enantiômeros (R) e (S) dos mesmos. Preferido é o enantiômero mais ativo tipicamente designado a configuração S (ao carbono sendo o substitu- inte NRsR;7).
A presente invenção refere-se à descoberta de que as vias de transdução de sinal reguladas por Hh e/ou Smo podem ser moduladas por uma combinação de inibidores Smoothened (por exemplo, ciclopamina, jer- vina, compostos de fórmula | (por exemplo, um composto de fórmulas (la), (Ib) ou (Ic)), compostos de fórmula 1l, compostos de fórmula Ill, qualquer um dos compostos anti-Smoothened individualmente listados aqui, anticorpos anti-Smo, e ácidos nucleicos inibitórios anti-Smo (por exemplo, siRNAs anti- Smo)) e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estati- nas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K). À referida modulação pode ocorrer quando a via de Hh/Smo é ativa a despeito de ter sido previamente submetida a um antagonista Smoothened (por e- xembplo, como é o caso com tumores resistentes). A referida modulação po- de também ocorrer quando a via de Hh/Smo é ativa a despeito de não ter
« 49/78 . sido previamente submetida a um antagonista Smoothened (por exemplo, . como é o caso com tumores sensíveis). A presente invenção refere-se geralmente ao diagnóstico e tra- ' tamento de patologias relacionadas à via de Hedgehog (definida abaixo e .s 5 referida aqui como "distúrbio(s) relacionado(s) ao Hedgehog"), incluindo, porém não limitadas a, formação de tumor, câncer, neoplasia, e distúrbios - hiperproliferativos não malignos, e mais particularmente a métodos de inibir tumorigênese, crescimento de tumor e sobrevivência de tumor usando agen- tes conhecidos inibir a via de sinalização de Smo e Hedgehog, por exemplo, inibidores Smoothened em combinação com um ou mais dos seguintes: (1) inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); (il) inibidores de Gli; e/ou (iii) inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK). Ini- bidores Smoothened são uma classe definida aqui e incluem, porém não são limitados a, anticorpos anti-Smoothened ou nucleotídeos inibitórios (por e- xemplo, RNAi), compostos de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qual- quer um dos compostos listados aqui ou incorporados por referência, e ou- tros agentes anti-Smoothened conhecidos na técnica e/ou incorporados aqui por referência.
Inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K) são também uma classe definida aqui e incluem, porém não são limitados a, compostos de fórmula A, bem como inibidores de lipídeo cinase e nucleotídeos inibitó- rios anti-PI3K (por exemplo, RNAÍ). Os métodos e compostos da presente invenção referem-se à ini- bição de ativação da via de sinalização de Hedgehog, por exemplo, por inibi- çãode estados de crescimento aberrante resultando de fenótipos tais como perda de função de Ptch, ganho de função de Hedgehog, ganho de função Smoothened ou ganho de função de Gli, e compreendem contactar a célula com uma combinação de agentes conhecidos inibir a via de sinalização de Smo e Hedgehog, por exemplo, inibidores Smoothened, e inibidores de bi- ossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); inibidores de Gli; e/ou inibi- dores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K) em uma quantidade suficiente para agonizar uma atividade de Ptch normal, antagonizar uma atividade de Hed-
. 50/78 ' gehog normal, ou antagonizar a atividade Smoothened (por exemplo, rever- . ter ou controlar o estado de crescimento aberrante). Um aspecto da presente invenção inclui métodos empregando O compostos para inibir a ativação de via dependente de Smo (por exemplo, es 5 quando Smo é ativado pela presença do ligante de Hedgehog). Outro aspec- . to da presente invenção inclui métodos empregando compostos para inibir a À ativação de via independente de Hedgehog (ligante). Em certas modalida- des, os presentes métodos podem ser usados para neutralizar os efeitos fenotípicos de ativação indesejável da via de Hedgehog, tal como resultando demutações de ganho de função de Hedgehog, perda de função de Ptch ou ganho de função Smoothened, quer a ativação seja na presença ou ausên- cia do ligante de Hedgehog. Por exemplo, um método da invenção pode en- volver contactar uma célula (in vitro ou in vivo) com um antagonista de Smo, tal como um inibidor Smoothened, em combinação com inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3SK), em uma quantidade suficiente para antagonizar sinalização de via de Hedgehog dependente Smoothened ou independente Smoothened (isto é, se a ativação ocorrer a jusante Smoo- thened), na presença ou ausência do ligante de Hedgehog.
Certas modalidades da presente invenção fornecem métodos pa- ra inibir a síntese, expressão, produção, estabilização, fosforilação, relocali- zação dentro da célula, e/ou atividade de uma proteína Smo em uma célula in vitro ou in vivo, compreendendo contactar a referida céluta com, ou intro- duzir na referida célula, uma combinação de inibidores Smoothened e inibi- doresdaviade biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K). Em certas modali- dades, proteínas a jusante de Smo na via de sinalização de Hedgehog (por exemplo, Gli) são também inibidas em uma célula in vitro ou in vivo. Por e- xemplo, a síntese, expressão, produção, estabilização, fosforilação, relocali- zação dentro da célula, e/ou atividade de proteina(s) Gli podem ser inibidas, além da inibição Smoothened como descrito acima, compreendendo contac- tar a referida célula com, ou introduzir na referida célula, uma combinação z 51/78 ' de inibidores Smoothened e inibidores da via de biossíntese de colesterol . (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinosito! 3-cinase (PISK). Em certas modalidades, a referida proteina Smo é ativa a 2 despeito de ter sido previamente submetida a um antagonista Smoothened es 5 (por exemplo, como é o caso com tumores resistentes). Em outras modali- dades, a referida proteína Smo não foi previamente submetida a um antago- " nista Smoothened.
Os métodos da presente invenção podem ser usados para regu- lar a proliferação e/ou diferenciação de células in vitro e/ou in vivo, por e- xemplo,na formação de tecido de células tronco, ou para prevenir o cresci- mento de células hiperproliferativas.
Em outra modalidade particular, contac- tar a célula com- ou introduzir na célula uma combinação de inibidores Smo- othened e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estati- nas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK) resulta em inibição de proliferação celular, inibição de crescimento e/ou so- brevivência de célula de tumor, e/ou inibição de tumorigênese.
Desse modo, outra modalidade particular fornece métodos para inibir e/ou antagonizar a via de Hh empregando-se métodos de combinação da invenção em células de tumor.
Em certas modalidades, a referida proliferação celular, crescimen- to e/ou sobrevivência de célula de tumor, e/ou tumorigênese é associada com tumores resistentes.
Em outras modalidades, a referida proliferação celular, crescimento e/ou sobrevivência de célula de tumor, e/ou tumorigê- nese é associada com tumores sensíveis.
As combinações da invenção podem ser administradas em cer- tas modalidades a um paciente afligido por tumores sensíveis.
As referidas combinações podem ser administradas em certas outras modalidades a um paciente afligido por tumores resistentes.
Células de tumor como descrito aqui, as quais as combinações da invenção podem ser empregadas para tratar, podem ser resistentes à apoptose, podem resistir regimes anticâncer convencionais, e/ou podem ser tumores resistentes como definido aqui.
Tumores resistentes podem, por exemplo, originar-se por meio de alterações genéticas que levam à reativa-
z 52/78 ] ção da via de Hedgehog a despeito da presença de inibidores de Smo. E- ' xemplos são mutações de Smo que interferem com a ligação de inibidor, e/ou mutações em genes a jusante de Smo que levam à reativação da via de O Hedgehog (por exemplo, sufu, Gli1, Gli2). Nestes casos de tumores resisten- .”. 5 tese tumores que não sucumbem a regimes anticâncer convencionais, as " combinações da invenção podem induzir células de tumor a passarem por CU senescência, apoptose, ou necrose. A administração das referidas combina- ções pode resultar em morte de célula de tumor e prevenção de metástase.
Os métodos da presente invenção podem empregar combina- ções de inibidores Smoothened como formulados, quanto preparações far- macêuticas compreendendo um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável, e inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, esta- tinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K). Da mesma maneira, os referidos inibidores da via de biossíntese de coleste- rol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilino- sitol 3-cinase (PI3K) podem ser formulados como preparações farmacêuticas compreendendo um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável tam- bém. As referidas combinações podem ser administradas a um paciente pa- ra tratar condições envolvendo proliferação celular indesejável tais como cânceres e/ou tumores (tais como meduloblastoma, carcinoma de célula ba- sal, etc.), e distúrbios hiperproliferativos não malignos. As referidas combi- nações podem ser administradas em certas modalidades a um paciente afli- gido por tumores sensíveis. As referidas combinações podem ser admiínis- tradas em certas outras modalidades a um paciente afligido por tumores re- sistentes, ou para prevenir tumores resistentes.
Outros aspectos da invenção fornecem métodos de diagnosticar, prevenir e/ou tratar debilitações, desarranjos, e/ou disfunções celulares; es- tados de doença hiperplásicos, hiperproliferativos e/ou cancerosos; e/ou me- tástase de células de tumor, em um mamífero caracterizado pela presença e/ouexpressão de um gene de Smo ou produto de gene (por exemplo, uma proteína Smo), compreendendo administrar a um mamífero combinações de inibidores Smoothened e inibidores da via de biossíntese de colesterol! (por
+ 53/78 7 exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3- . cinase (PI3SK). Via de sinalização de Hedgehog O Membros da família de Hedgehog de moléculas de sinalização es 5 medeiam muitos processos de padronização de faixa curta e longa importan- ' tes durante o desenvolvimento de vertebrado.
Formação de padrão é a ativi- VU dade pela qual as células embriônicas formam disposições espaciais orde- nadas de tecidos diferenciados.
A complexidade física de organismos maio- res aparece durante a embriogênese através da ação de sinalização extrin- seca da célula e linhagem intrínseca da célula.
Interações indutivas são es- senciais para a padronização embriônica no desenvolvimento de vertebrado a partir do estabelecimento mais precoce do plano do corpo, para a padroni- zação dos sistemas de órgão, para a geração de diversos tipos de célula durante a diferenciação de tecido.
Os efeitos de interações celulares do de- senvolvimento são variados: células de resposta são desviadas de uma roti- na de diferenciação celular para outra por indução de células que se diferem de ambos estados não induzidos e induzidos das células de resposta (indu- ções). Às vezes as células induzem suas vizinhas a diferenciarem-se como por si próprias (indução homeogenética); em outros casos uma célula inibe suas vizinhas de diferenciarem-se como por si só.
Interações celulares em desenvolvimento precoce podem ser sequenciais, de modo que uma indu- ção inicial entre dois tipos de célula resulte em uma amplificação progressiva de diversidade.
Além disso, interações indutivas ocorrem não apenas em embriões, porém em células adultas também, e podem agir para estabelecer emanter padrões morfogenéticos bem como induzir diferenciação.
A família de vertebrado de genes de Hedgehog incluí três mem- bros que existem em mamíferos, conhecidos como Hedgehogs do Deserto (Dhh), “Sonic” (Shh) e Indiano (Ihh), todos dos quais codificam proteínas se- cretadas.
Estas várias proteínas de Hedgehog consistem em um peptídeo de sinal, uma região de terminal N altamente conservada, e um domínio de ter- minal C mais divergente.
Estudos bioquímicos têm mostrado que clivagem autoproteolítica da proteína precursora Hh prossegue através de um inter-
. 54/78 " mediário de tioéster interno que subsequentemente é clivado em uma substi- . tuição nucleofílica. É provável que o nucleófilo seja uma molécula lipofílica pequena que se torna covalentemente ligada à extremidade de terminal C do O peptídeo N, amarrando-o à superfície celular. As implicações biológicas são es 5 profundas. Como um resultado da amarração, uma concentração local ele- ' vada de peptídeo de Hedgehog de terminal N é gerada sobre a superfície GC das células de produção de Hedgehog. Ele é este peptídeo de terminal N que é tão necessário quanto suficiente para as atividades de sinalização de Hedgehog de faixa curta e longa. Smoothened (Smo) codifica uma proteína de transmembrana de 1024 aminoácidos que age como um transdutor do sinal de Hedgehog (Hh). A proteina Smo tem 7 domínios que atravessam a membrana hidrofóbica, uma região de terminal amino extracelular, e uma região de terminal carbóxi intracelular. Smo carrega alguma similaridade a receptores acoplados à pro- teina Ge é mais homóloga à família Frizzled (Fz) de proteínas serpentinas.
(Alcedo et al. (1996) Cell 86: 221) Uma via de sinalização de Hedgehog inativa está onde o recep- tor de proteina de transmembrana Patched (Ptc) inibe a estabilização, fosfo- rilação, e atividade Smoothened (Smo). O fator de transcrição Gli, um com- ponente a jusante de sinalização de Hh, é prevenido de entrar no núcleo a- través de interações com proteínas citoplasmáticas, incluindo fundidas (Fu) e supressoras de fundidas (Sufu). Como uma consequência, ativação transcri- cional de genes alvos de Hedgehog é reprimida. Ativação da via é iniciada através da ligação de qualquer um dos três ligantes mamíferos (Dhh, Shh ou lhh)aPtc.
Ligação de ligante por Hh altera a interação de Smo e Ptc, rever- tendo a repressão de Smo, e então Smo desloca-se de estruturas internas dentro da célula para a membrana plasmática. A localização de Smo à membrana plasmática dispara a ativação de genes alvos da via de Hh de uma maneira independente de Hh. (Zhu et al. (2003) Genes Dev. 17(10):1240) A cascata ativada por Smo leva à translocação da forma ativa do fator de transcrição Gli para o núcleo. A ativação de Smo, através de Gli
- 55/78 ' nuclear translocado, ativa a expressão de gene alvo da via de Hh, incluindo . de Wnts, TGFB, e Ptch e Gli por si próprios.
Distúrbios relacionados a Hedgehog O De acordo com o precedente, a presente invenção também for- e 5 neceum método para prevenir ou tratar qualquer uma das doenças ou dis- * túrbios descritos aqui (também referidos aqui como "distúrbios relacionados Ú a Hedgehog,” individualmente ou coletivamente) em um indivíduo em neces- sidade de tal tratamento, cujo método compreende administrar ao referido indivíduo uma combinação de inibidores Smoothened (ciclopamina, jervina, compostos de fórmula | (por exemplo, um composto de fórmulas (la), (Ib) ou (lo)), compostos de fórmula Il, compostos de fórmula Ill, qualquer um dos compostos anti-Smoothened individualmente listados aqui, anticorpos anti- Smo, e ácidos nucleicos inibitórios anti-Smo (por exemplo, siRNAs anti- Smo)) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e inibidores da viade biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PISK). Para qualquer um dos usos acima, a dosagem requerida variará dependendo do modo de adminis- tração, da condição particular a ser tratada e do efeito desejado.
Níveis aumentados de sinalização de Hedgehog (por exemplo, sinalização de Hedgehog aberrante) são suficientes para iniciar formação de câncer e são requeridos para sobrevivência de tumor.
Formação de câncer que é requerida para sobrevivência de tumor pode igualmente ser devido à perda de função de Ptch, ganho de função de Hedgehog, ganho de função Smoothened, e/ou ganho de função de Gli.
Estes cânceres incluem, porém —nãosão limitados a, câncer de próstata (Karhadkar SS, et al. (2004) Nature.
Oct 7;431(7009):707-12)(Sanchez P, et al (2004) PNAS Aug 24;:101(34):12561-6)(Mimeault M, et al. (2006), International Journal of Can- cer; 118 (4):1022-31); câncer de mama (Kubo M, et al. (2004) Cancer Res, 2004 Sep 1;64(17):6071-4)(Liu S, et al. (2006) Cancer Res; 66 (12):6063- 71)(Moraes RC, et al. (2007) Development; 134 (6):1231-42); meduloblas- toma (Berman DM, et al. (2002) Science.
Aug 30;297(5586):1559-61); cân- cer de pele não melanoma, isto é carcinoma de célula escamosa (SCC)
. 56/78 ' e carcinoma de célula basal (BCC) (Williams JA, et al. (2003) PNAS Apr . 15;100(8):4616-21)(Xie J, et al. (1998) Nature, Jan 1;391(6662):90-2); cân- i ceres pancreáticos, esôfago, estômago, e biliares (Thayer SP, et al. O (2003) Nature. Oct 23;425(6960):851-6)(Ma et al. (2006) Int J Cancer és 5 118(1)139)(Berman DM, et al. (2003) Nature. Oct 23;425(6960):846- . 51)(Nakashima H, et al. (2006) Cancer Research; 66 (14):7041-9)(Feldmann CÚ G, et al. (2007) Cancer Research; 67 (5):2187-96)(Ji Z, et al. (2007) J Biol Chem; 282 (19):14048-55), e câncer de pulmão de célula pequena (Wat- kins DN, et al. (2003) Nature. Mar 20;422(6929):313-7)(Vestergaard J, et al.
(2006)Lung Cancer; 52 (3):281-90).
Cânceres adicionais em que níveis aumentados de sinalização de Hedgehog são suficientes para iniciar a formação de câncer e são reque- ridos para sobrevivência de tumor incluem, porém não são limitados a cân- cer de cólon (Douard R, et al. (2006) Surgery; 139 (5):665-70)(Qualtrough D,etal (2004) International Journal of Cancer; 110 (6):831-7); glioma (Bar EE, et al. (2007) Neuro-Oncology; 9 (4):594)(Clement V, et al. (2007) Current Biology 17 (2):165-72)(Ehteshan M, et al. (2007) Oncogene; March12, 2007, Epub antes da impressão); melanoma (Stecca B, et al. (2007) PNAS; 104 (14):5895-900); câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC)(Yuan 2Z, etal (2007) Oncogene; 26 (7):1046-55); ovário (Chen XJ, et al. (2007) Cancer Science; 98 (1):68-76); figado (Huang SH, et al. (2006) Carcinogen- esis; 27 (7): 1334-40)(Sicklick JK, et al. (2006) Carcinogenesis; 27 (4):748- 57); renal (Cutcliffe C, et al. (2005) Clinical Cancer Research; 11 (22):7986- 94), rabdomiossarcoma (Hahn H, et al. (1998) Nature Medicine; 4 (5):619- 22) Tostar U, et al. (2006) Journal of Pathology; 208 (1):17-25); e condrossarcoma (Tiet TD, et al. (2006) American Journal of Pathology; 168 (1):321-30).
Linfoma maligno (ML) envolve as células do sistema linfático, e é o quinto câncer mais comum nos Estados Unidos. ML inclui doença de — Hodgkin, e doenças de não Hodgkin que são um grupo heterogêneo de do- enças proliferativas linfoides. Doença de Hodgkin é responsável por aproxi- madamente 14% de todos os linfomas malignos. Os linfomas de não Hodg-
: 57/78 7 kin são um grupo diverso de malignidades que são predominantemente de . origem de célula B.
No esquema de classificação Working Formulation, es- tes linfomas foram divididos em categorias de grau baixo, intermediário, e O alto em virtude de suas histórias naturais (ver "The Non-Hodgkin's Lympho- e 5 ma Pathologic Classification Project," Cancer 49:2112-2135, 1982). Os lin- * fomas de grau baixo são indolentes, com uma sobrevivência média de 5 a CG 10 anos (Horning e Rosenberg, N.
Engl.
J.
Med. 311:1471-1475, 1984). Em- bora quimioterapia possa induzir remissões na maioria de linfomas indolen- tes, curas são raras e a maioria dos pacientes eventualmente reincide, re- querendo outra terapia.
Os linfomas de grau intermediário e alto são tumores mais agressivos, porém eles têm uma maior chance de cura com quimiote- rapia.
Entretanto, uma proporção significante destes pacientes reincidirá e requererá outro tratamento.
Mieloma múltiplo (MM) é um tumor maligno composto de célu- las plasmáticas do tipo normalmente encontrado na medula óssea.
Estas células plasmáticas malignas acumulam-se na medula óssea e tipicamente produzem moléculas IgG ou IgA monoclonais.
As células plasmáticas malig- nas atingem e expandem-se na medula óssea causando anemia e imunos- supressão devido à perda de hematopoiese normal.
Indivíduos sofrendo de mieloma múltiplo frequentemente experimentam anemia, lesões osteolíticas, insuficiência renal, hipercalcemia, e infecções bacterianas recorrentes.
MM representa a segunda malignidade hematopoiética mais comum. "Distúrbios relacionados a Hedgehog," também compreendem cânceres dos sistemas sanguíneo e linfático, incluindo linfomas, leucemi- a emielomas.
Os métodos e combinações da invenção antagonizam um ou mais componentes da via de sinalização de Hedgehog para inibir o cresci- mento e proliferação de células de linfoma, células de leucemia, ou células de mieloma.
Linfoma é um tumor maligno de linfoblastos derivados de linfóci- tos B.
Mieloma é um tumor maligno composto de células plasmáticas do tipo normalmente encontrado na medula óssea.
Leucemia é uma doença aguda ou crônica que envolve os órgãos de formação de sangue.
NHLs são carac- terizados por um aumento anormal no número de leucócitos nos tecidos do
' 58/78 7 corpo com ou sem um aumento correspondente daqueles no sangue círcu- . lante e são classificados de acordo com o tipo de leucócito mais proeminen- temente envolvido.
O Por meio de exemplo, indivíduos sofrendo de ou em risco de de- es 5 senvolvimento de linfoma (por exemplo, linfoma de célula B, plasmoblasto- * ma, plasmacitoma ou CLL) podem ser tratados com os métodos e combina- CG ções da invenção.
Preferivelmente, o indivíduo é um ser humano.
Os méto- dos e combinações da invenção vinculam administrar ao indivíduo uma composição farmacêutica contendo uma quantidade eficaz de um inibidor Smoothened em combinação com um ou mais dos seguintes: (i) inibidores da via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas); e (ii) inibidores de Gli.
O indivíduo pode ser um que é diagnosticado com linfoma, com ou sem metástase, em qualquer estágio da doença (por exemplo, estágio | a IV, sistema de estagiamento Ann Arbor). Linfomas adequados para tratamento com métodos da invenção incluem, porém não são limitados a, doença de Hodgkin e doença de não Hodgkin.
Doença de Hodgkin é um distúrbio ma- ligno humano de tecido linfático (linfoma) que parece originar-se em um lin- fonodo particular e depois se espalha para o baço, figado e medula óssea.
Ela ocorre principalmente em indivíduos entre as idades de 15 e 35. Ela é caracterizada por dilatação indolor, progressiva dos linfonodos, baço e tecido linfático geral.
Doença de Hodgkin clássica é dividida em quatro subtipos: (1) doença de Hodgkin de esclerose nodular (NSHD); (2) doença de Hodgkin de celularidade mista (MCHD); (3) doença de Hodgkin de depleção de linfócito (LDHD); e (4) doença de Hodgkin clássica rica em linfócito (CLRHD). Em algumas modalidades preferidas, os presentes métodos e combinações podem ser usados para tratar linfoma de não Hodgkin (NHL). Doença de não Hodgkin é também chamada linfossarcoma e refere-se a um grupo de linfomas que se diferem de modos importantes de doença de Hodgkin e são classificados de acordo com a aparência microscópica das célulasde câncer.
Linfoma de não Hodgkin inclui, porém não é limitado a, (1) linfomas de crescimento lento e leucemia linfoide (por exemplo, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, linfoma linfoplasmacitoide,
- 59/78 " linfoma de centro de folículo, linfoma de célula B de célula fendida pequena . folicular, célula mista folicular, zona marginal, leucemia de célula cabeluda, Ú plasmacitoma, mieloma, leucemia de linfócito granular grande, micose fun- O goide, síndrome de szary); (2) linfomas moderadamente agressivos e leu- e 5 cemia linfoide (por exemplo, leucemia prolinfocítica, linfoma de célula do 1 manto, linfoma de centro de folículo, linfoma de centro de folículo de célula VU fendida pequena folicular, leucemia linfocítica crônica/leucemia prolinfocítica, linfoma angiocêntrico, linfoma angioimunoblástico); (3) linfomas agressivos (por exemplo, linfoma de célula B grande, linfomas de célula T periférica, linfoma de célula T intestinal, linfoma de célula grande anaplásica); e (4) lin- fomas altamente agressivos e leucemia linfoide (por exemplo, leucemi- a/linfoma linfoblástico B precursor de célula B, linfoma de Burkitt, linfoma de célula B de alto grau, leucemia/linfoma linfoblástico T precursor de célula T semelhante a Burkitt). Os métodos da presente invenção podem ser usados para formas adultas ou infantis de linfoma, bem como linfomas em qualquer estágio, por exemplo, estágio 1, Il, III, ou IV. Os métodos descritos aqui po- dem também ser empregados para tratar outras formas de leucemia, por exemplo, leucemia linfocítica aguda (ALL).
Alguns dos métodos terapêuticos e combinações da invenção são particularmente direcionados ao tratamento de linfomas ou mielomas que não expressam Gli3. Ao mesmo tempo em que Glit e Gli2 parecem ser expressos em todos os linfomas, expressão detectável de Gli3 está presente principalmene em linfomas que foram resistentes à inibição da via de Hh por ciclopamina. Não existe nenhuma expressão de Gli3 em células B de baço normaise na maioria de linfomas responsivos à ciclopamina.
Desse modo, antes do tratamento com as combinações e méto- dos da invenção, indivíduos com linfomas podem ser primeiro examinados quanto à expressão de Gli3 em uma amostra de célula de linfoma obtida do indivíduo. O nível de expressão de Gli3 na amostra pode ser comparado ao nível de expressão de Gli3 em células B de baço normais obtidas do indiví- duo. Os níveis de expressão de Gliô3 nas amostras de linfoma ou mieloma e as células de controle podem ser determinados usando métodos bem co-
' 60/78 ] nhecidos na técnica. Uma provável sensibilidade ao tratamento com os mé- - todos e combinações descritos aqui é indicada pela ausência de expressão de Gli3 detectável nas amostras de linfoma ou mieloma ou um nível de ex- eo pressão que não é significantemente maior (por exemplo, não mais do que es 5 25%, 50%, ou 100% maior) do que o nível de expressão de Gli3 na célula B * normal. De outro modo sendo uma etapa adicional dos métodos terapêuti- CÚ cos da invenção, a pré-avaliação quando à ausência de expressão de Gli3 pode ser usada independentemente como um método para estratificação do paciente.
Além dos linfomas, os métodos e composições descritos acima são também adequados para o tratamento de mielomas. Mieloma múltiplo é um neoplasma fatal caracterizado por um acúmulo de um clone de células plasmáticas, frequentemente acompanhadas pela secreção de cadeias de lg. A invação de medula óssea pelo tumor está associada com anemia, hi- pogamaglobinemia, e granulocitopenia com concomitantes infecções bacte- rianas. Um ambiente de citocina anormal, principalmente níveis elevados de 1L-6 e I1L-1B, frequentemente resulta em osteoclase aumentada induzindo à dor óssea, fraturas, e hipercalcemia. A despeito de quimioterapia agressiva e transplantação, mieloma múltiplo é um distúrbio proliferativo de plasma universalmente fatal.
Combinações e métodos da invenção são úteis no tratamento de carcinoma de célula basal (BCC ou úlcera de roedor) , tumores das glându- las adrenais que surgem a partir do córtex ou de parte da medula da medula de glândula adrenal, e tumores ovarianos.
Pacientes humanos com síndrome de Gorlin (também conhe- cida como Síndrome do Nervo Basocelular (BCNS) e carcinoma de célula basal nevoide), uma síndrome genética de câncer dominante autossômico, desenvolvem carcinoma de célula basal (BCC) com alta frequência, e outros tumores sólidos (por exemplo, meduloblastomas) em menor frequência, de- vidoãà perda de linha germinativa de mutações de função em Ptch. Estes pacientes, bem como outros, pacientes de não Gorlin com BCC que têm perda somática de mutações de função em Ptch, e não se espera que res-
' 61/78 7 pondam a tratamentos associados com ligante de Hedgehogs. Eles, entre- ' tanto, responderiam a inibidores de sinalização de Hh a jusante dos ligantes de Hh, tal como encontrado nos métodos e combinações da presente inven- o ção. es 5 Similarmente, outros tumores sólidos, devido a mutações de Pt- ] ch ou Smo não responderão à inibição relacionada com o ligante Hh, porém CÚ responderão ao bloqueio de Smo (por exemplo, por administração dos mé- todos e combinações da invenção).
Uma combinação de inibidores Smoothened (por exemplo, um composto de fórmula |, fórmula II, ou fórmula )Il, ou qualquer um dos com- postos listados aqui ou incorporados por referência) ou a sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo, e inibidores de via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K) da invenção são também úteis no tratamento de distúrbios relacionados a Hedgehog que incluem distúrbios de crescimento ósseo ex- cessivo. Distúrbios de crescimento ósseo excessivo incluem, porém não são limitados a, acromegalia, macrocefalia, sindrome de Sotos, displasia diafisá- ria progressiva (PDD ou doença Camurati-Engelmann), displasia craniodiafi- sária, e distúrbios de hiperostose endosteal incluindo doença Van Buchem (tiposlell)e esclerosteose.
Combinações da invenção são úteis no tratamento de cresci- mento de cabelo indesejado, por exemplo, manchas píilosas e prevenção cosmética de recrescimento de cabelo após depilação.
Combinações da invenção são também úteis no tratamento de tais distúrbios relacionados a Hedgehog como psoríase, que outros inibido- res de via de Hedgehog conhecidos (por exemplo, ciclopamina) têm mostra- do utilidade no tratamento (Cutis, 2006, 78(3):185-8; Br. J. Dermatology A- pr;154(4):619-23.
Combinações da invenção são também úteis no tratamento de tais distúrbios relacionados a Hedgehog como "distúrbios fibróticos," particu- larmente fibrose do fígado. Distúrbios fibróticos são caracterizados por proli- feração excessiva de fibroblasto ou miofibroblasto proliferação e produção
. 62/78 7 de matriz de tecido conectivo, incluindo colágeno, fibronectina e glicosami- . noglicans (GAG). Distúrbios fibróticos do fígado íncluem, porém não estão Ú limitados a alcoólicos, associados com a hepatite C, e fibrose biliar primária, 2 bem como esteatose não alcoólica, colangite esclerosante, e fibrose que es 5 resultade esquistossomíase. . A sinalização de Hedgehog é importante para diferenciação de CG célulaT, como evidenciado pelo menos por camundongos Shh-/- tendo ta- manho de timo pequeno, e mostrando diferenciação de célula T negativa dupla a positiva dupla reduzida.
Além da proliferação e diferenciação de cé- lulas progenitoras de célula T, sinalização de Hh é mostrada modular a sina- lização de receptor de célula T durante a seleção do repertório.
Consequen- temente, os métodos e combinações da invenção podem ser úteis para o tratamento e diagnóstico de distúrbios associados com a célula T, tais como doenças autoimunes e inflamatórias, e em evasão de sistema imune por tu- mores.
Fatores de transcrição de Gli Fatores de transcrição de dedo de zinco (zinc-finger) GIi1, Gli2, e Gli3 são os efetores finais da via de sinalização de Hedgehog, para a qual Smoothened transduz seu sinal na liberação de inibição de Patched (por e- xemplo, em ligação de ligante de Hedgehog). Gli está implicada em tumori- gênese, e sua ativação constitutiva é criticamente importante para o desen- volvimento de câncer (Lauth, M. e outro (2007) PNAS 104(20): 8455). Os dados descritos aqui sugerem que a amplificação do fator de transcrição a jusante Gli2 pode ser responsável pela reativação da via de Hedgehog a despeito da presença de inibidores de Smo (que podem induzir a, por exemplo, a formação de tumores resistentes). Inibidores que agem sobre Glift ou Gli2 são supostos inibirem o crescimento de tumores resisten- tes, particularmente em combinação com inibidores Smoothened, como for- necido pelos presentes métodos da invenção.
Inibidores de Gli conhecidos que podem ser usados nos méto- dos de combinação da invenção incluem, porém não são limitados a, anta- gonistas de Gli de molécula pequena GANT61 (GIi-ANTagonista 61) e
. 63/78 " GANTS58 (Laugh, M. e outro). Outros inibidores conhecidos de Gli que po- . dem ser usados nos métodos de combinação da invenção incluem, porém não estão limitados a, sesquiterpenos zerumbona e epóxido de zerumbona; O estaurosporinona de alcaloides de bisindol, 6-hidroxistaurosporinona, arciria- es 5 flavinaC,e5,6-di-hidroxiarciriaflavina A; e fisalinas F e B. (Hosoya, T. e ou- . tro (2008) ChemBioChem 9:1082). CG Pl3Ks As fosfatidilinositol 3-cinases (PI3Ks) são lipídeo cinases ampla- mente expressas que fosforilam fosfoinositídeos na posição D-3 do anel ino- sitol. Estas proteínas funcionam como transdutores de sinal a jusante de re- ceptores de superfície celular. Os produtos de reações catalisados por PI3K, 3,4 5-trisfosfato de fosfatidilinositol (Ptdlns(3,4,5)P3), 3,4-bisfosfato de fosfa- tidilinositol (Ptdlns(3,4)P2), e 3-fosfato de fosfatidilinositol (Ptdlns(3)P), são segundos mensageiros que têm papeis centrais em diversos processos celu- lares, incluindo crescimento, diferenciação, mobilidade, proliferação e sobre- vivência celular.
Os oito membros da família PISK foram classificados nos três grupos com base em sua sequência primária, preferência de substrato in vitro, estrutura de domínio, e modo de regulação. PI3Ks classe |l são pre- dominantemente associadas com frações de membrana celular, são caracte- rizadas por um domínio C2 em sua terminal C, e consiste em três isoformas (PI3K-C2a, PISK-C26, e PISK-C2y). (Sheikh, e outro (2003) BMC Clin. Pa- thol. 3:1). PI3Ks classe |!l utilizam apenas fosfatidilinositol como um substra- to, e desempenham um papel essencial em tráfico de proteína através da lisossoma. (Volinia, e outro (1995) EMBO J. 14:3339).
As PI3Ks classe |, que são o objeto dos métodos e combinações do presente pedido, são compostas de dois subgrupos, IA e IB. O subgrupo PISK de classe IA consiste nestas subunidades catalíticas, p1105, p1108 e p1103, que formam heterodímeros com um de cinco domínios regulatórios: p850,p858,p85y, ps0De p550. Estas PISKs são ativadas por tirosina cina- sess receptoras de superfície celular.
A PI3K classe IB consiste em um membro, um heterodimero de
: 64/78 . P110g, e um domínio p101 regulatório, que é ativado pelas subunidades By R de proteínas G seguindo à estimulação de receptores acoplados à proteína ] G.
PIBKs IA e IB catalisam a formação de Ptdlns(3,4,5)P3, um processo que O é revertido pela ação da lipídeo fosfatase, PTEN. e 5 Via de Síntese de Colesterol + Entre as razões pelas quais as vias de biossíntese Hedgehog e CU colesterol estão ligadas é que a síntese de esterol é requerida para transdu- ção de sinal de Shh. (Corocoran, R. e Scott, M. (2006) PNAS 103(22):8409). Não apenas é o ligante Shh covalentemente modificado por colesterol, po- réma sinalização de Shh pode ser bloqueada em recebimento de células na via de Hedgehog quando a síntese de esterol é prejudicada. (Cooper, M. e outro (1998) Science 280:1603). Os efeitos antitumorais de estatinas são bem conhecidos na técnica, e diversas estatinas estão em experiências cli- nicas para indicações de câncer.
Uma ligação entre o colesterol e o câncer tem sido sugerida por estudos usando a classe de estatina de inibidores de síntese de colesterol. (Bar, E. & Stearns, D. (2008) Expert Opin.
Investig. fármacos 17(2):185). As estatinas ligam-se à HMG-CoA redutase (a enzima 3-hidróxi-3-glutari-coenzima A) redutase aproximadamente 1000 vezes mais eficazmente do que o substrato natural.
Combinações de inibidores Smoothened com inibidores de via de biossíntese de colesterol, inibidores de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K), elou inibidores de Gli A invenção provê combinações de inibidores Smoothened (por exemplo, um composto de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qualquer umdos compostos listados aqui ou incorporados por referência) e inibidores de via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinosito! 3-cinase (PISK). Esta combinação po- de ser fornecida como combinações farmacêuticas, por exemplo, a kit, com- preendendo a) um primeiro agente que é um inibidor Smoothened (por e- xemplo, um composto de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qualquer um dos compostos listado aqui ou incorporados por referência) como descrito aqui, em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, e b)
: 65/78 ' pelo menos um coagente que compreende inibidores de via de biossíntese . de colesterol (por exemplo, estatinas) e/ou inibidores de Gli O Kkit pode : compreender instruções para sua administração. + Efeitos sinérgicos são possíveis com as combinações da inven- e 5 ção, istoé,os efeitos terapêuticos da combinação de inibidores Smoothened . (por exemplo, um composto de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula III, ou qual- CÚ quer um dos compostos listado aqui ou incorporados por referência) e inibi- dores de via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou inibidores de fosfatidilinosito! 3-cinase (PISK) podem ser signifi- cantemente maiores do que os efeitos terapêuticos de cada inibidor adminis- trado individualmente, ou mesmo do que os efeitos meramente aditivos es- perados de combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, os agentes combinados são administrados simultaneamente. Em outras modalidades, os agentes combinados são administrados sequencialmente.
As dosagens dos agentes coadministrados irão variar depen- dendo do tipo específico de agente empregado, da condição que está sendo tratada e assim em diante.
Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ou similar como utilizado aqui são destinados a abranger a administração dos agentes terapêuticos selecionados para um único paciente, e destinam-se a incluir regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma rotina de administração ou ao mesmo tempo.
O termo "combinação farmacêutica" como usado aqui signífica um produto que resulta da mistura ou combinação de mais do que um ingre- diente ativo e inclui ambas as combinações fixa e não fixa dos ingredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um inibidor de composto Smoothened e um coagente, são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única enti- dade ou dosagem. O termo "combinação não fixa" significa que os ingredien- tes ativos, por exemplo, um inibidor de composto Smoothened e um coagen- te, são ambos administrados a um paciente como entidades separadas ou simultaneamente, concomitantemente ou sequencialmente sem nenhum |i-
- 66/78 ' mite, em que tal administração fornece níveis terapeuticamente eficazes dos : 2 compostos no corpo do paciente.
O último também se aplica à terapia de ' coquetel, por exemplo, a administração de 3 ou mais ingredientes ativos. oO Administração e Composições Farmacêuticas : es 5 A invenção refere-se ao uso de combinações de composições ' farmacêuticas compreendendo inibidores Smoothened (por exemplo, um CU composto de fórmula |, fórmula Il, ou fórmula Ill, ou qualquer um dos com- postos listado aqui ou incorporados por referência), e inibidores de via de biossíntese de colesterol (por exemplo, estatinas), inibidores de Gli, e/ou Inibidores de PISK para o tratamento terapêutico (e, em um aspecto mais amplo da invenção, profilático) de distúrbio(s) relacionado(s) ao Hedgehog tais como cânceres.
Em geral, compostos dos métodos e combinações da invenção serão administrados em quantidades terapeuticamente eficazes por meio de qualquer um dos modos usuais e aceitáveis conhecidos na técnica, o singu- larmente ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos.
Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar amplamente dependendo da severidade da doença, da idade e saúde relativa do indivíduo, da potência dos compostos usados e outros fatores.
Em geral, resultados satisfatórios são indicados para serem obtidos sistemicamente em dosagens diárias de cerca de 0,03 a 2,5 mg/kg por peso corporal.
Uma dosagem diária indicada no mamífero maior, por exemplo, humanos, é na faixa de cerca de 1000 mg, preferivelmente 500 mg, mais preferivelmente 100 mg, convenientemente administrados, por exemplo, em doses divididas até quastro vezes ao dia ou em forma retardada.
Formas de dosagem unitária adequadas para admínis- tração oral compreendem de aproximadamente 1 à 50 mg de ingrediente ativo.
Compostos dos métodos e combinações da invenção podem ser administrados como composições farmacêuticas por qualquer rotina conven- cional, em particular enteralmente, por exemplo, oralmente, por exemplo, na forma de comprimidos ou cápsulas, ou parenteralmente, por exemplo, na forma de soluções ou suspensões injetáveis, tipicamente, por exemplo, na
. 67/78 ] forma de loções, géis, pomadas ou cremes, ou em uma forma nasal ou su- . positório. Composições farmacêuticas compreendendo um composto da presente invenção em forma livre ou em uma forma de sal farmaceuticamen- 2 te aceitável em associação com pelo menos um carreador ou diluente far- es 5 maceuticamente aceitável podem ser fabricadas de uma maneira conven- º cional misturando-se métodos de granulação ou revestimento. Por exemplo, CG composições orais podem ser comprimidos ou cápsulas de gelatina compre- endendo o ingrediente ativo juntamente com a) diluentes, por exemplo, lac- tose, dextrose, sucarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrifican- tes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também c) aglutinantes, por exem- plo, silicato de magnésio alumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, me- tilcelulose, carboximetilcelulose de sódio e ou polivinilpirrolidona; se deseja- do d) disintegrantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efervescentes; e/ou e) absorventes, colorantes, aromati- zantes e adoçantes. Composições injetáveis podem ser soluções ou sus- pensões isotônicas aquosas, e supositórios podem ser preparados de emul- sões ou suspensões graxas.
Compostos podem ser esterilizados e/ou contêm adjuvantes, tais como agentes conservantes, estabilizantes, umectantes ou emulsificantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, eles podem também conter outras substâncias terapeuticamente valiosas. Formulações adequadas para aplicações transdérmicas incluem uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção com um vei-. culo Um veículo pode incluir solventes farmacologicamente aceitáveis para auxiliar a passage através da pele do hospedeiro. Por exemplo, dispositivos transdérmicos são na forma de uma bandagem compreendendo um membro de reforço, um reservatório contendo o composto opcionalmente com veícu- los, opcionalmente uma barreira controladora da taxa para liberar o compos- toparaa pele do hospedeiro em uma taxa controlada e predeterminada du- rante um período de tempo prolongado, e destina-se a prender o disposiivo à pele. Formulações transdérmicas de matriz podem também ser usadas.
- 68/78 ] Formulações adequadas para aplicação tópica, por exemplo, à pele e olhos, . são preferivelmente soluções aquosas, pomadas, cremes ou geis bem co- ' nhecidos na técnica.
Tais podem conter solubilizantes, estabilizantes, agen- o tes realçadores da tonicidade, tampões e conservantes. e 5 EXEMPLOS + A presente invenção é também exemplificada, porém não limita- CÚ da, pelos seguintes exemplos representativos, que se destinam a ilustrar a invenção e não devem ser construídos como sendo limitações sobre a mes- ma.
A menos que de outra maneira indicado, os referidos exemplos empre- gamos seguintes materiais e métodos: Descrição de modelo subcutâneo de aloenxerto de meduloblastomas Células de meduloblastoma de camundongo (1.0 - 5.0 x 109), dissociadas diretamente de fragmentos de tumor originalmente derivados de meduloblastomas de aparecimento espontâneo em camundongos Ptch+/- p53-/, Ptoh+/-Hic+/- ou Ptch+/-, foram inoculadas subcutaneamente no flan- co direito de camundongos Harlan nu/nu.
O tratamento foi iniciado aproxi- madamente 7 a 10 dias após o implante.
Os animais foram randomizados nos grupos de tratamento com volumes de tumor médios similares que varia- ram de aproximadamente 250 a 300 mm3. Os volumes de tumor (mm3) e pesos corporais (g) foram registrados duas ou três vezes por semana de todos os grupos para análise.
A dose foi ajustada ao peso corporal no mo- mento da dosagem.
Comparações entre os grupos de tratamento foram rea- lizadas usando um Teste não paramétrico Kruskal-WallisAWilcoxon Rank Sum. —Análisede Dados de Modelo de Aloenxerto Os tumores foram medidos com compasso de calibre em duas dimensões, e os volumes foram calculados usando a fórmula: (comprimento x largura2)/2, onde o comprimento é a maior das duas medições e a largura é a menor.
Os valores percentuais de tratamento/controle (% T/C) foram cal- —culados usando a seguinte fórmula: % T/C = 100 x ATÍ-VACf se ATFi > O, % TITO = 100 x ATÍ-i/TO se ATf-i < O (regressão). Um respondedor parcial (PR) foi definido como um animal cujo tumor foi menor do que 50% do volume de
- 69/78 ' tumor inicial ao final do estudo.
Um animal sem nenhum tumor palpável ao . final do estudo é definico como um respondedor completo (CR). ' Exemplo 1: Resistência ao Fármaco observada em modelos de Ptch+/- O Camundongos Ptch+/- desenvolvem meduloblastoma esponta- e 5 neamente (Romer, e outro 2004). Os tumores, que foram previamente mos- ij trados serem Smo-dependentes, são usados como modelos para os com- CU postos testes que inibem a via de Hh.
A perda de p53 resulta em um início precoce e aumenta a taxa de incidência de meduloblastomas, onde 95% de camundongos Ptch+/-p53-/- desenvolvem meduloblastoma e a maioria mor- 10 rede tumores cerebrais dentro de 12 semanas do nascimento (Wetmore, Eberhart e Curran 2001, Romer, e outro 2004). Camundongos Ptch+/-Hic+/- também formam meduloblastomas com penetração aumentada e latência diminuída (Briggs e outro, 2008). Inibidores de Smo foram mostrados efi- cazmente diminuirem a incidência de meduloblastoma em camundongos 15 Ptch+/-p53-/-, ambos diretamente no modelo transgênico (Romer, e outro 2004) e no modelo de aloenxertos derivados dos tumores de meduloblasto- ma de Ptch+/-p53-/- (Berman, e outro 2002). Portanto, a eficácia in vivo do composto 1 foi avaliada em mo- delos de aloenxerto de meduloblastoma de camundongo Ptch+/-p53-/-, Pt- 20 cht/-Hict/- e Ptch+/-, derivados dos correspondentes camundongos trans- gênicos e passados in vivo, e seguindo a dosagem contínua a longo prazo.
Exemplo 1a: Tratamento no modelo de aloenxerto de meduloblastoma de Ptch+/-p53+/- Tratamento no modelo de Ptch+/-p53+/- ocorreu como segue: 25 Tratamentos iniciaram no dia 8 após o implante (5 milhões de célu- las/animal). O composto 1 foi administrado a razão de (isto é, oralmente) em mo/kg bid (isto é, duas vezes ao dia), 10 mg/kg bid, 20 mg/kg qd (isto é, uma vez ao dia), 20 mg/kg bid, 40 mg/kg bid e 80 mg/kg bid durante 25 dias totais.
O composto 2 foi administrado a 100 mg/kg bid durante 25 dias.
O controle de veículo de composto 1 foi de 0,5% de metilcelulose, 0,5% de Tween 80 em água.
O tamanho do grupo inicial consistiu em 8 animais.
O grupo de veículo foi tirado 10 dias após tratamento (tumores maiores do que
+ 70/78 7 10% de peso corporal do camundongo). Os animais foram dosados continu- . amente durante um total de 26 dias de tratamento. ' Seguindo a referida dosagem contínua durante 26 dias (figura 1), O a regressão do tumor foi observada durante a primeira metade do período de .-. 5 dosagem. Posteriormente, entretanto, tumores novamente desenvolveram- - se embora a dosagem fosse continuada. Da mesma maneira, o composto 2 CU dosado a 100 mg/kg bid também inicialmente causou regressão, seguido por novo crescimento de tumor. Expressão de mRNA de Gli1 foi analisada no recrescimento de tumores ao término da dosagem e mostrou ser apenas parcialmente suprimida rimida (60 a 80% comparado ao controle de veículo). Estudos anteriores internos mostraram que próximo 100% inibição de MRNA de Glif é requerida para regressão de tumor. Isto sugere que o recrescimen- to de tumor é devido à inibição insuficiente inibição da via de Hedgehog co- mo analisadas pelo marcador farmacodinâmico mMRNA de Gli1.
Exemplo 1b: Tratamento no modelo de aloenxerto de meduloblastoma de Ptch+/-Hic+/- Em um estudo de acompanhamento no modelo Ptch+/-Hic+/-, os resultados de que são mostrados na figura 2, o tratamento ocorreu como segue: Os tratamentos iniciaram no dia 7 após implante (5 milhões de células/animal). O composto 1 foi administrado a razão de 5 mg/kg de peso corporal, 10 mg/kg bid, 20 ma/kg qd, 20 mg/kg bid, 40 mg/kg bid e 80 mg/kg bid durante a duração do estudo. O composto 2 foi administrado a 100 mg/kg bid durante a duração do estudo. O controle de veículo de composto 1 foide0,5% metilcelulose, 0,5% de Tween 80 em água. O tamanho do grupo incial consistiu em 8 animais. O grupo de veículo foi tirado 10 dias após o tratamento (tumores maiores do que 10% de peso corporal do camundongo).
No modelo Ptch+/-Hic+/-, alguns, porém não todos os tumores mostraram evidência de recrescimento seguinto a regressão inicial. Entre- tanto regressões completas sustentadas foram observadas em um subgrupo de animais (veja a Table 1). As respostas completas sustentadas pareceram ser mais frequentes em doses mais elevadas. Isto sugere que a resistência
. 71178 ' desenvolve-se para graus variáveis em diferentes modelos de tumor de ca- . mundongo de aloenxerto subcutânesos diferentes que compartilham a muta- ção de Ptch+/-, porém têm diferentes mutaçõess supressoras de tumor (p53- O /- ou Hict/-). es 5 Como observado em ambas figura 2 e Tabela 1, tumores de Pt- * ch+/-Hic+/- foram todos dosados com o composto 1 a 5,10, 20, 40 e 80 mg/kg Ú bid e 20 mg/kg qd, e composto 2 a 100 mg/kg bid po iniciando 7 dias após o implante.
Regressões sustentadas listadas na Tabela 1 representam o número de respostas completas ainda presentes no término do estudo no dia 47. Na figura 2, quadrados cheios representam veículo apenas, a ra- zão de peso corporal(isto é, oralmente, duas vezes ao dia). Triângulos cheios com linhas pontilhadas representam o composto 2, administrado 100 mg/kg a razão de peso corporal.
Triângulos cheios de cabeça para baixo com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 5 mg/kg a razão de peso corporal.
Diamantes cheios com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 10 mg/kg à razão de peso corporal. . Círculos cheios com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 20 mg/kg a razão de qd.
Quadrados abertos com linhas pontilhadas representam o composto 1, admi- nistrado 20 mg/kg a razão de peso corporal.
Triângulos abertos com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 40 mg/kg a razão de pe- so corporal.
Triângulos de cabeça para baixo abertos com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 80 mg/kg a razão de peso corporal.
TABELA 1: Regressão em modelo de Ptch+/-Hic+/- de meduloblastoma
. 72078 1 Dois inibidores adicionais de Smo, composto 3 e composto 4 fo- . ram avaliados em estudos de acompanhamento no modelo Ptch+/-Hic+/- em ' dosagem contínua.
Ambos inicialmente induziram a regressão de tumor se- O guida por recrescimento de tumor na presença de composto.
Os seguintes e 5 números de regressões completas sustentadas foram observados para o , composto 3: 0/8 a 40 mg/kg qd, 3/8 a 40 mg/kg bid , 0/8 a 60 mg/kg qd, 0/8 a CU 80 mg/kg qd, 3/8 a 100 mg/kg qd (os camundongos foram dosados a partir do dia 10 após o implante de tumor até o dia 56, regressões sustentadas são listadas para o dia 56). Nenhuma regressão sustentada foi observada para o composto 4 (os camundongos foram dosados a partir do dia 8 após o im- plante de tumor até o dia 43. Exemplo 1c: Tratamento no modelo Ptch+/- de aloenxerto de medulo- blastoma Nestes estudos, o tratamento ocorreu como segue, os resultados dosquaissão mostrados na figura 3: Os tratamentos iniciaram no dia 7 após o implante (5 milhões de células/animal). O composto 1 foi administrado a razão de a 10 mg/kg qd, 20 mg/kg qd, 40 mg/kg qd, 80 mg/kg qd e 160 mg/kg qd durante a duração do estudo.
O composto 2 foi administrado a 100 mg/kg bid durante a duração doestudo.
O controle de veículo de composto 1 foi de 0,5% de metilcelulose 0,5% de Tween 80 em água.
O tamanho do grupo inicial consistiu em 8 a- nimais, O grupo de veículo foi retirado 7 dias após o tratamento (tumores maiores do que 10% de peso corporal de camundongo). Foi observada re- sistência similar àquela observada com o modelo de Ptc+/-Hic+/-, com um subgrupo dos respondedores completos desenvolvendo-se novamente, e outros mostrando completa regressão (Tabela 2). A regressão sustentada listada na tabela 2 representa o número de regressões completas ainda pre- sentes no término do estudo, no dia 48. Grupos Ptch+/- Veículo os Composto 1 10mg/kg qd os Composto 1 20mg/kg qd 118
. 73/78 " Composto 1 40mg/kg qd 1/8 ; Composto 1 80mg/kg qd 4/8 i Composto 1 160mglkgad — 5/8 o Composto 2 100 mg/kg bid o/8 Ce TABELA 2: Regressões sustentadas no modelo Ptch+/- ' Na figura 3, quadrados cheios representam o veículo apenas, qd CÚ bid (isto é, oralmente, uma vez ao dia). Triângulos cheios com linhas ponti- lhadas representam o composto 1, administrado 10 mg/kg a razão de qd.
Triângulos cheios de cabeça para baixo com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 20 mg/kg a razão de qd.
Diamantes cheios com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 40 mg/kg à ra- zão de qd.
Círculos cheios com linhas sólidas representam o composto 1, administrado 40 mg/kg a razão de peso corporal . Quadrados abertos com linhas pontilhadas representam o composto 1, administrado 80 mg/kg a ra- zão de qd.
Triângulos abertos com linhas pontilhadas representam o com- posto 1, administrado 160 mg/kg a razão de qd.
Triângulos abertos de cabe- ça para baixo com linhas pontilhadas representam o composto 2, adminis- trado 200 mg/kg a razão de peso corporal . Exemplo 2: Caracterização do Mecanismo de Resistência a Fármaco A fim de caracterizar alterações em expressão de gene em tumo- res sensíveis comparados a tumores resistentes (ambos de cujos termos são definidos aqui), RNA foi isolado de tumores sensíveis tratados com vei- culo ou composto 1 durante 4 (dose única), 16 (dose única) e 48 horas (três doses) bem como de tumores resistentes (que inicialmente regrediram na presença do composto 1 (dia 13) porém em seguida redesenvolveram-se na presença de fármaco como descrito acima). Três tumores foram analisados por grupo de tratamento: o grupo de tumor sensível compreende tumores tratados com 20 mg/kg de composto 1 durante 4 horas; 16 horas; e 48 ho- ras.
O grupo de tumor resistente compreende tumores tratados com 10 mg/kg bid e 80 mg/kg bid de composto 1 durante 26 dias.
Expressão de mRNA em amostras de tumor foi analisada por perfil Affymetrix.
Os dados de expressão foram analisados usando o pro-
. 7AM8 7 grama de via GeneGo, cujos dados de grupos foram de acordo com as vias . de transdução de sinal.
Foi observado que genes que são indicativos da ati- vidade de via de sinalização de Hedgehog foram suprimidos em tumores .” sensíveis de uma maneira dependente do tempo sob tratamento com o es 5 composto 1 (durante 4 h,16,e48h.Em tumores resistentes (que inicialmen- ' te regrediram na presença do composto 1 (dia 13) porém em seguida rede- CÚ senvolveram-se na presença de fármaco) a expressão de genes da via de Hedgehog foi intimamente ligada à expressão em tumores tratados com veí- culo indicando que o composto 1 não mais suficientemente inibiu a expres- são de genes da via de Hedgehog.
Um padrão de expressão similar foi ob- servado para genes da via de biossíntese de colesterol.
Um padrão de ex- pressão diferente foi observado para genes indicativos de atividade de via de PI3K.
Nenhuma alteração em expressão de gene foi detectada em tumores sensíveis sob tratamento com o composto 1 durante 4, 16 e 48 h.
Entretanto, superregulação de atividade de via de PISK foi observada em tumores resis- tentes, quando comparados com tumores sensíveis.
Exemplo 2a: Caracterização de mecanismo de reativação de via de Hedgehog Um mecanismo de ação proposto é que alterações genéticas em tumores resistentes levam à reativação da via de Hedgehog a despeito da presença de inibidores de Smo.
Exemplos são mutações de Smo que inter- ferem com a ligação de inibidor, e/ou mutações em genes a jusante de Smo que levam à reativação da via de Hedgehog (por exemplo, Sufu, Gli1, Gli2). DNA foi isolado de tumores resistentes e de tumores sensíveis, nos quais análise de sequenciamento foi executada.
Nenhuma mutação foi detectada em Sufu, Smo, Glit e Gli2 específica para tumores resistentes versus sensíveis.
DNA de 3 tumores sensíveis e 3 resistentes de Ptch+/-p53-/- também foi isolado e analisado quanto à amplificação ampla de genoma ou deleções usando a oligo disposição Agilent CGH Analytics 3.2. DNA de fíga- do de camundongos Ptch+/-p53-/- foi usado como comparação.
Como ob- servado na figura 4, a amplificação de Gli2 foi detectada em 2 de 3 tumores resistentes e em nenhum dos tumores sensíveis. . A fim de analisar o número de cópia de Gli2 em todos os tumo- i res resistentes, uma PCR quantitativa para Gli2 foi desenvolvida (bem como ' para Gli e Gli3). Amplificação de Gli2 foi detectada em uma grande porcen- | es 5 tagem de tumores resistentes no modelo Ptch+/-p53-/- (24 fora de 44 tumo- po res resistentes) porém em uma extensão menor no modelo Ptch+/- (10%). ' Amplificação de Gli2 não foi detectada no modelo Ptch+/-Hic+/-. í Os dados sugerem que a amplificação do fator de transcrição a jusante Gli2 pode ser responsável por reativação da via de Hedgehog na presença de inibidores de Smo em alguns dos tumores resistentes.
Inibido- res que agem sobre Glit ou Gli2 podem ser capazes de inibir o crescimento de tumores resistentes, Exemplo 2b: Caracterização de mecanismo de inibição de via de bios- síntese de colesterol Superregulação da via de biossíntese de colesterol pode contri- buir para a reativação da via de Hedgehog em tumores resistentes, Oxieste- róis foram implicados previamente como mediadores de sinalização na via de Hedgehog. (Corcoran, et al. (2006) PNAS 103(22): 8408) Níveis de oxies- terol aumentados na célula podem interferir com a inibição da atividade de Smo por inibidores de Smo, diretamente por competição por sítios de ligação sobre Smo ou indiretamente por interferência com a ligação de inibidor.
Ini- bição da via de biossíntese de colesterol por estatinas pode inibir o cresci- mento de tumores resistentes, ou pode prevenir o desenvolvimento de resis- tência sozinho ou em combinação com inibidores Smoothened.
O efeito de estatinas (por exemplo, sinvastatina, flustatina) sobre a proliferação de células de meduloblastoma derivadas de células Ptch+/- sensíveis e resistentes foi avaliado usando-se um "ensaio de proliferação de meduloblastoma ex-vivo." Usando tumores de meduloblastoma Ptch+/-p53-/- , Pteh+/-Hic+/- ou Ptch+/- recentemente coletados de camundongos nus alo- — enxertados, temos desenvolvido um ensaio de proliferação de 48 h a curto prazo que nos permite estimar a potência in vitro de inibidores de Smo.
À leitura quanto à proliferação usa incorporação de timidina 3H.
O ensaio refle-
e 76/78 ' te a sensibilidade in vivo de células de tumor ao composto 1. Células de tu- o * mor sensíveis foram inibidas pelo composto 1 com uma IC50 de 4 nM en- quanto a IC50 em tumores resistentes foi maior do que 20 uM. 2 Como observado na Tabela 3, ambas as células de tumor sensí- o 5 veisbem como resistentes são inibidas pelos inibidores da via de biossíntese ' de colesterol, Sinvastatina com uma IC50 na faixa nanomolar baixa.
Isto suge- Co re que estatinas podem ser capazes de inibir o crescimento de tumores de me- i duloblastoma resistentes in vivo ou que a combinação de inibidores de Smo com estatinas pode ser capaz de prevenir o desenvolvimento de resistência. to 1 (uM) posto A (uM) tina (UM) ' 10 TABELA3Z Exemplo 2c: Administração de Inibidores da Via de PI3K | Composto A, um inibidor de PI3 cinase, foi usado para avaliar o papel da via de PI3 cinase em meduloblastoma.
A Tabela 4 resume os resul- tados do tratamento de meduloblastomas com o composto 1 (um composto inibidor Smoothened de fórmula II), composto A (um composto inibidor de PISK de fórmula A), ou combinações dos mesmos.
O composto A é capaz de inibir a atividade de lipídeo cinase de PISK.
Entre outros efeitos, o com- posto A é conhecido inibir a fosforilação e ativação do efetor a jusante Akt e S6 em ambas células sensíveis e resistentes (mostrado na figura 5). == E eee tumor 1 (uM) A (uM) (uM) roror focar | sesve | 0000 | og | ns [oo peer esse] so | o | [o77006 ensina | sense | 005 | om | me [o2osco mer fressene[ so | os | e 0,001 (20UM 225) * inibidor classe 1 de PISK (alfa, beta, e delta)
. 7778 Í TABELA 4 "e O efeito de inibidores de PI3K (por exemplo, compostos tal como composto A) sobre a proliferação de células de meduloblastoma derivadas O de células de meduloblastoma sensíveis e resistentes foi avaliado usando-se es 5 um "ensaio de proliferação de meduloblastoma ex-vivo," como descrito aci- ' ma.
Como mostrado na Tabela 4, células sensíveis foram inibidas pelo com- Ú posto 1 com uma IC50 de 2 a 4 nM enquanto a IC50 foi maior do que 20 uM em tumores resistentes.
Entretanto, o inibidor de PI3 cinase, composto A, inibiu ambos tumores sensíveis e resistentes com IC50s similares, Como mostrado na figura 5, o composto A inibiu a fosforilação de Akt e S6 tanto em tumores sensíveis e resistentes em concentrações simila- res.
Isto mostra a correlação de inibição da via de PI3 cinase e inibição de proliferação.
A seguir, uma combinação de composto 1 e composto A foi ex- —plorada no modelo de aloenxerto de meduloblastoma Ptch+/-Hic+/-. Como mostrado na figura 6A, os animais foram dosados com 40 mg/kg qd de com- posto 1, 60 mg/kg qd de composto A, e uma combinação de composto 1 e composto A.
Enquanto o composto A teve apenas um efeito moderado sobre o crescimento de tumor comparado com o controle veículo, o composto 1 inicialmente induziu a regressão porém tumores começaram a redesenvol- ver.
Nenhum redesenvolvimento de tumor foi observado em animais tratados com a combinação de composto 1 e composto A.
O tratamento de combinação resultou em tempo prolongado até o ponto final (volume do tumor >1500 mm3), como mostrado na figura 6B.
Os animais tratados com controle veículo e com o composto A tiveram de ser sacrificados em torno do dia 20 e 25, respectivamente, porque seu volu- me de tumor alcançou 1500 mm3. O tempo até o ponto final foi significante- mente prolongado em animais tratados com o composto 1. No grupo de tra- tamento de combinação a maioria dos camundongos permaneceu no estu- do.
Resultados similares foram obtidos para animais tratados com o compos- to 1 sozinho durante os primeiros 10 dias, seguido por tratamento de agente único com o composto A (dados não mostrados). Os dados indicam que a
, 78/78 7 combinação de inibidores de Smo e inibidores de PISK pode significante- . mente retardar ou prevenir o desenvolvimento de resistência no modelo de meduloblastoma. a A seguir, uma combinação de composto 1 e composto B foi ex- es 5 ploradano modelo de aloenxerto de meduloblastoma Ptch+/-Hic+/-. Como . mostrado na figura 7A, os animais foram dosados com 80 mg/kg qd de com- CÚ posto 1, 40 mg/kg qd de composto B, e uma combinação de composto 1 e composto B.
Enquanto o composto B não teve nenhum efeito sobre o cres- cimento de tumor comparado com o controle veículo, o composto 1 inicial- mente induziu regressão porém tumores começam a redesenvolver.
Rede- senvolvimento de tumor em animais tratados com a combinação de compos- to 1 e composto B foi consideravelmente retardado.
O tratamento de combinação resultou em tempo prolongado até o ponto final (volume do tumor >700 mm3), como mostrado na figura 7B.
Animais tratados com o controle veículo e com o composto B alcançaram o ponto final em torno do dia 12 a 15, respectivamente, porque seu volume de tumor alcançou 700 mm3. O tempo até o ponto final foi significantemente prolongado em animais tratados com o composto 1. No grupo de tratamento de combinação a maioria dos camundongos permaneceu no estudo.
Os da- dos indicam que a combinação de inibidores de Smo e inibidores de PISK pode significantemente retardar ou prevenir o desenvolvimento de resistên- cia no modelo de meduloblastoma.

Claims (1)

  1. . REIVINDICAÇÕES . 1. Combinação para tratar um câncer relacionado a porco- espinho compreendendo um inibidor de Estabilizado e um inibidor de PI3 cinase, em que o inibidor de Estabilizado é [6-(cis-2,6-dimetil-morfolin-4-il)- piridin-3-ill-amida de ácido 2-metil-4'-trifluorometóxi-bifenil-3-carboxílico, N- [4-cloro-3-(5-dimetilamino-1H-benzoimidazol-2-iI)-fenil]-3,5-dimetóxi- benzamida, 2-[(R)-4-(6-benzil-4,5-dimetil- piridazin-3-il)-2-metil-3,4,5,6-tetra- hidro-2H-[1,2']bipirazinil-S'-il)-propan-2-0l ou um sal farmaceuticamente acei- tável do mesmo.
    10. 2. Combinação, de acordo com a reivindicação 1, em que o « —cânceré um meduloblastoma. 7 3. Combinação, de acordo com a reivindicaçãos 1 ou 2, em * queo câncer é de um tumor resistente.
    4. Combinação, de acordo com as reivindicações 1-3, em que o inibidor de PI3 cinase é selecionado de -metil-2-[4-(3-metil-2-0x0-8- quinolin-3-i1-2,3- di-hidro-imidazo([4,5-c]quinolin-Hil)-fenil]-propionitrita, 8-(6- metóxi-piridin-3-il)-3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluorometil-fenil)-1,3-di- hidro-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona, 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-i1)-4- trifluorometil-piridin-2-ilamina ou um sal farmaceuticamente aceitável do Q 20 mesmo.
    5. Combinação para tratar um câncer relacionado a porco- ' espinho compreendendo um inibidor de Estabilizado e um inibidor de Gli, em que o inibidor de Estabilizado é [6-(cis-2,6-dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il]- amida de ácido 2-metil-4"'-trifluorometóxi-bifenil-3-carboxílico, N-[4-cloro-3-(5- dimetilamino-IH-benzoimidazol-2-il)-fenil]-3,5-dimetóxi-benzamida, —2-[(R)-4- (6-benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-iI)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1, 2']bipirazinil-S'-il]-propan-2-0l ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
    6. Combinação, de acordo com a reivindicação 5, em que o cânceré um meduloblastoma.
    7. Combinação, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, em que o câncer é de um tumor resistente.
    - 8. Combinação, de acordo com as reivindicações 5-7, em que o inibidor de Gli é selecionado de GANT61 e GANT58.
    9. Combinação, de acordo com as reivindicações 5-7, em que o inibidor de Gli é selecionado de zerumbona, epóxido de zerumbona, estau- rosporinona, G6-hidroxiestaurosporinona, arciriaflavina C, e 5,6- di hidroxiarciriaflavina A, fisalina F, e fisalina B.
    10. Combinação para tratar um câncer relacionado a porco- espinho compreendendo um inibidor de Estabilizado e uma estatina, em que o inibidor de Estabilizado é [6-(cis-2,6- dimetil-morfolin-4-il)-piridin-3-il)— 10 . amida de ácido 2-Metil-4'-trifluorometóxi-bifenil-3-carboxílico, N-[4-Cloro-3- » — (S-dimetilamino-IH-benzoimidazo|-2-il)-fenil])-3,5-dimetóxi-benzamida ou 2- > [([R)-4-(6-Benzil-4,5-dimetil-piridazin-3-i1)-2-metil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- ' [1,2']bipirazinil-S'-il)-propan-2-ol.
    11. Combinação, de acordo com a reivindicação 10, em que o cânceré um meduloblastoma.
    12. Combinação, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, em que o câncer é de um tumor resistente.
    13. Combinação, de acordo com as reivindicações 10-12, em que a estatina é selecionada de pravastatina, sinvastatina, lovastatina, flu- , : 20 vastatina, atorvastatina, cerivastatina, rosuvastatina, e pitavastatina.
    UT ' oo <s —— Veículo po bid 32000 a» Composto —2 100mg/kg po bid ] E à. —— Composto 1&mg/kg po bid 3 —— Composto 1 10mg/kg po bid z o -+-- Composto — 1 20mg/kg po qd Ê ; “nm. Composto 1 20mg/kg po bid 3 1500. Fr a Composto 1 40mg/kg po bid z ” e. Composto 1 B8Omg/kgpobid 2 om é > x À A :
    MNE 6 PR "wu 2a x» E Dias após implante . : ' Fig 1 i 217 i | o
    Ê 81
    Ê : 3 E > 6 16 26 36 4s Dias após implante Fig 2
    Recrescimento do tumor PTC+/- 3001
    É . o ê EÉ 1 " s 81 8 e à 1 E o Y 6 1 16 21 26 31 36 41 46 51 Dias após implante Fig 3
    : 47 s Agilent CGH Analytics 3.2 Cromossomo 1 de camundongo Giz s“ prq ss. o 2» coeecido 8 i 8? DÊ VT TARA Ae Resistente | e a =" E moema iii Resistente à 3 tm AS < REGEIANNA - 8 F a, s dr à oh Ne nar Resistente: 1 8 o MAS ARS, Tera o ta Sensivelt.s do es.. FA FE A DONT SS * Amplificação de GLiZ * 2de3tumores resistentes 3 Ode3 tumores sensíveis Fig 4 men [A p-AKT EFr=—— =
    AKT = a o BMSO 0.01 04. 1/20 DMSO 0.01 01 1 10pM Tumor sensível Ptch+/- Tumor resistente Ptch+/- 1 hora de tratamento ' Fig 5
    | 67 Crescimento de tumor 120 Veículo Composto A 60 ma/kg ad 7 Eno Composto| 1 TT so 40 mp/ka qd
    Ê . 3 600 É aoo - E ão 1 200 Composto A + 1 q " 10 20 30 4 Dias após implante Fig 6A 2 Tempo para progressão da doença ' (Tumor >1509 mm3) 8 D [DA Composto A +1 z 2 8 2 8 4
    E à 20 genes 1 x Composto À
    LU o 10 3 O À O» & Dias após implante Fig 6B
    Tamanho do tumor médio 200 Veículo & Composto — B T Composto 1 E 1990 4º meNa ad [1 | 80 mg/kg qd sa é É * 1000 jd Tl sê f Vo 500: À Í | Composto — B+1 - s AE as o cacE . 9 19 29 3% 42 59 6 79 Dias após implante Fig 7A Tempo para progressão da doença (700mm?) oo r Composto B+1 E í 8 7 ie 7 o ' s bos 2 so . . ê Veículo “ 8 Composto — 1 E 25 Composto B ; 8 40 mo/kg qd 80 mgotkg qd o.
    O 10 20 3O 40 50 6O 70 &OW Dias após implante Fig 7B
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