BRPI0909142B1

BRPI0909142B1 - composto cíclico e sal do mesmo, seu uso, seu processo de preparação, e composição farmacêutica

Info

Publication number: BRPI0909142B1
Application number: BRPI0909142-4A
Authority: BR
Inventors: Nakamura Ikuko; Ohsumi Keisuke; Yoshikawa Koji; Kanasaki Ryuichi; Takase Shigehiro
Original assignee: Astellas Pharma Inc
Priority date: 2008-03-14
Filing date: 2009-03-13
Publication date: 2019-11-12
Also published as: JP5387567B2; EP2261238A1; IL208058A0; CN101970462B; RU2010141977A; TW200944225A; ES2464723T3; ZA201006445B; CA2718395C; WO2009113661A1; JPWO2009113661A1; KR101558632B1; CA2718395A1; KR20110005691A; AU2009224302B2; AU2009224302A1; CN101970462A; US20110015121A1; US8598115B2; MX2010009953A

Abstract

composto cíclico e sal do mesmo, seu uso, seu processo de preparação, e composição farmacêutica a presente invenção refere-se a um composto útil como um agente antifúngico, particularmente um agente terapêutico para micoses profundamente acomodadas. um fungo acremonium persicinum foi coletado, e compostos cíclicos foram isolados de seus líquidos de cultura. os presentes inventores confirmaram que os compostos cíclicos ou seus sais têm uma potente atividade antifúngica e são úteis como medicamentos, particularmente um agente antifúngico, e assim a presente invenção estava completa. o composto cíclico e o sal do mesmo, de acordo com a presente invenção, podem ser usados como um agente para a prevenção ou o tratamento de micoses, particularmente, micoses profundamente acomodadas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSTO CÍCLICO E SAL DO MESMO, SEU USO, SEU PROCESSO DE PREPARAÇÃO, E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA.

Campo da Técnica [001] A presente invenção refere-se a um composto cíclico útil como um ingrediente ativo de uma composição farmacêutica, tal como uma composição farmacêutica para o tratamento de micoses, particularmente micoses profundamente acomodadas.

Antecedentes da Técnica [002] Quando um antibiótico foi administrado durante um período prolongado de tempo, bactérias patogênicas a serem direcionadas foram removidas, mas fungos resistentes a antibióticos aumentaram. É considerado que tal situação causa micoses profundamente acomodadas (O fenômeno em que aumento remarcadamente de fungos restantes é designado como substituição microbiana assim chamada). Alternativamente, um paciente idoso, um paciente pós-operatório, ou um paciente a quem um fármaco antitumor ou um imunossupressor é administrado é submetido à infecção fúngica, devido à biofilaxia suprimida. É considerado que fungos aumentados em tal paciente causam micoses profundamente acomodadas.

[003] Agentes terapêuticos para micoses profundamente acomodadas incluem fármacos antifúngicos, por exemplo, 1) flucitosina de fármaco de base de ácido nucleico, com base na inibição de síntese de DNA em fungos, e 2) anfoterecina B de macrolídeo de polieno, miconazol de derivado de imidazol, e fluconazol de derivado de triazol, com base na inibição de síntese de membrana celular em fungos.

[004] Ferricromo, um hexapeptídeo cíclico contendo três ornitinas, tendo a seguinte estrutura química é um composto conhecido (literatura de não patente 1), mas essa referência não descreve que ferricromo tem uma atividade antifúngica.

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Produto químico 1

[literatura de não patente 1] Journal of American Chemical Society, 1980, vol. 102, pp. 4224-4231

Descrição dos Problemas da Invenção a Serem Resolvidos pela Invenção [005] Um objetivo da presente invenção é prover um composto útil como um ingrediente ativo de uma composição farmacêutica, tal como uma composição farmacêutica para o tratamento de micoses, particularmente micoses profundamente acomodadas.

Meios para Resolver os Problemas [006] Os presentes inventores conduziram estudos intensos nos compostos antifúngicos produzidos por micro-organismoos de ocorrência natural e, como um resultado, verificou-se que uma cepa de fungos Acremonium persicinum designada como MF-347833 produz compostos tendo uma potente atividade antifúngica. Além disso, os presentes inventores focalizaram o caldo de cultura da cepa, e realizaram o isolamento de compostos cíclicos tendo uma potente atividade antifúngica oriunda do caldo de cultura, e assim a presente invenção estava completa.

[007] A presente invenção refere-se a um composto da fórmula (I) ou a um sal do mesmo, e a uma composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo e um excipiente.

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Produto químico 2

[008] Além disso, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para o tratamento de micoses, compreendendo o composto da fórmula (I) ou o sal do mesmo, isto é, um agente para o tratamento de micoses, compreendendo o composto da fórmula (I) ou o sal do mesmo.

[009] Além do mais, a presente invenção refere-se ao uso do composto da fórmula (I) ou ao sal do mesmo para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento de micoses, e a um método de tratamento de micoses compreendendo administração a um indivíduo que necessita do mesmo o composto da fórmula (I) ou o sal do mesmo em uma quantidade eficaz para o mesmo.

Efeitos da Invenção [0010] O composto da fórmula (I) ou o sal do mesmo pode ser usado como um agente para a prevenção e/ou tratamento de micoses, particularmente, micoses profundamente acomodadas ou similares.

Breve Descrição dos Desenhos [figura 1] [0011] A figura 1 é um gráficográfico que mostra o espectro de ¹HRMN do composto A (Solvente para a medição: de-DMSO).

[figura 2] [0012] A figura 2 é um gráfico que mostra o espectro de ¹³C-RMN do composto A (Solvente para a medição: de-DMSO).

[figura 3]

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4/28 [0013] A figura 3 é um gráfico que mostra o espectro de ¹H-RMN do composto B (Solvente para a medição: de-DMSO).

[figura 4] [0014] A figura 4 é um gráfico que mostra o espectro de ¹³C-RMN do composto B (Solvente para a medição: de-DMSO).

[figura 5] [0015] A figura 5 é um gráfico que mostra o espectro de ¹ H-RMN do composto D (Solvente para a medição: de-DMSO).

[figura 6] [0016] A figura 6 é um gráfico que mostra o espectro de ¹³C-RMN do composto D (Solvente para a medição: d6-DMSO).

Melhor Modo para Realizar a Invenção [0017] A presente invenção será explicada em detalhes aqui em seguida.

[0018] O composto da presente invenção algumas vezes forma um sal com uma base. Como tal um sal, pode ser mencionado, por exemplo, sais com uma base inorgânica, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio, ou semelhantes, ou sais com base orgânica, tais como metilamina, etilamina, etanolamina, lisina, ornitina ou similar. Os sais como usados aqui incluem o assim chamado sal complexo e composto quelato. Um metal que forma um sal pode ser um metal divalente ou trivalente, tais como ferro, alumínio, gálio ou similar.

[0019] Aqui em seguida, uma forma livre do composto da fórmula (I), um sal de alumínio do composto da fórmula (I), um sal de ferro do composto da fórmula (I) e um sal de gálio do composto da fórmula (I) são algumas vezes chamados de composto A, composto B, composto C e composto D, respectivamente.

[0020] O composto da fórmula (I) existe como vários isômeros geométricos. O composto da fórmula (I) é algumas vezes mostrado apenas como um único isômero neste relatório, mas a presente invenção inclui

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5/28 isômeros outros que não o único isômero, e ulteriormente inclui isômeros isolados e misturas dos mesmos.

[0021] O composto da fórmula (I) algumas vezes um ou mais átomos de carbono assimétricos, e podem haver vários isômeros óticos, baseados nos átomos de carbono assimétricos. A presente invenção inclui isômeros óticos isolados e misturas dos mesmos.

[0022] A presente invenção inclui um profármaco farmaceuticamente aceitável do composto da fórmula (I). O profármaco farmaceuticamente aceitável significa um composto tendo um grupo que pode ser convertido em um grupo oxima ou similar por solvólise ou sob condições fisiológicas.

[0023] A presente invenção inclui vários hidratos, solvatos, e formas de cristal do composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo, e ulteriormente inclui vários compostos marcados com um radioisótopo ou um não radioisótopo.

[0024] Características micológicas de um micro-organismo que produz o composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo serão descritas abaixo.

1) Origem de produção de cepa [0025] A cepa de fungo MF-347833 do gênero Acremonium foi isolada do lixo de folha coletada no parque nacional de Endau Rompin, Johore, Malásia. Essa cepa foi depositada no International Patent Organism Depositary National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Address: AIST Tsukuba Central 6, 1-1, Higashi 1-chome Tukuba-shi, Ibaraki-ken 305-8566 Japão) como FERM BP-10916 (data do depósito: 10 de outubro de 2007).

(2) Características morfológicas de produção de cepa [0026] As características morfológicas da cepa foram determinadas com base nas observações de sua forma em um meio de ágar de dextrose de batata. O crescimento da cepa em um meio ágar de dextrose

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6/28 de batata (Difco 2010) era rápido. Colônias se desenvolveram para um diâmetro de 39-41 mm a 25°C em 2 semanas, e conídios foram formados. As superfícies das colônias eram flocose, e as suas margens eram onduladas. Cada colônia foi radialmente sulcada do centro para a margem, mas era difícil identificar esses estriados sulcados oriundos da superfície. As colônias eram brancas (1A1), mas branca amarelada (4A2) no seu centro. Os sulcos, os quais radiavam a partir do centro para a margem, poderiam ser identificados a partir do reverso. As colônias eram, em geral, da cor marfim (4A3), mas marron mostarda (5E6) no centro. Colônias alcançaram cerca de 24 mm de diâmetro a 30°C duas semanas mais tarde, e nenhum crescimento foi observado a 5°C e a 37°C.

[0027] A cepa se desenvolveu rapidamente em um meio de ágar de farinha grossa de milho (Difco 0386), a as colônias se espalharam a um diâmetro de 39-40 mm a 25°C em 2 semanas. A superfície de cada colônia era feltrosa. A sua margem era ondulada, e as colônias não eram sulcadas. A superfície era branca (1A1), e o reverso era também branco (1A1). Colônias alcançaram um diâmetro de 14 mm a 30°C em 2 semanas, e não foram sulcadas. No crescimento foi observado a 5°C e a 37°C.

[0028] Hifas vegetativas eram de 1,8-2,7 pm de largura, e clamidoesporo ausente. Conidióforos eram hialino, não ramificados, e se originam individualmente de uma única hifa vegetativa ou hifas plectonematogêneas. Muitas verrugas no conidióforo e a sua base foi separada. Ontogênia de conídio era fialídica, e o comprimento da base de cada conidióforo para o vértice de fiálides era de 33-40 pm. Conídios eram hialino, elipsoidal, de 3,7 a 4,5 x de 2,8 a 3,2 pm (média: 4 x 3 pm) de tamanho, agregados na massa no vértice de fiálides, mas nunca em cadeia. A superfície de conídios apareceu regular por observação com um microscópio ótico (x400), mas um padrão grosseiramente côncavo

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7/28 convexo poderia ser observado com um microscópio eletrônico (x9000). [0029] As características morfológicas indicam uma possibilidade de que uma cepa pertence ao gênero Acremonium. Uma comparação foi feita com base em Cephalosporium-artige Schimmelpilze (Hyphomycetes)/Walter Gams (1971), e como um resultado, as características morfológicas da cepa estavam de acordo com aquelas de Acremonium persicinum na seção Gliomastix. Além disso, como um resultado de uma homologia de uma busca com relação a um 28S rDNA e um 18S rDNA da cepa, esses rDNAs estavam incluídos no clado de Acremonium persicinum na seção Gliomastix. A conclusão das características morfológicas era consistente com aquela das características genéticas. A cepa foi identificada como Acremonium persicinum, e designada como cepa de Acremonium persicinum MF-347833.

(3) Características culturais [0030] As características da cepa foram determinadas nos meios comercialmente disponíveis e meios preparados de acordo com as composições descritas em uma referência. Como um meio de ágar de dextrose de batata, um meio de ágar de dextrose de Sabouraud, um meio de ágar de Emerson YpSs, um meio de ágar de farinha grossa de milho, um meio de ágar de farinha grossa de aveia, Difco 2010, Difco 0109, Difco 0739, Difco 0386, e Difco 0552 foram adquiridos, respectivamente. Um meio de ágar de extrato de malte, um meio de ágar de solução de Czapek , e um meio de ágar de MY20 foram preparados de acordo com as composições descritas em um catálogo JCM (Nakase,T. 6th ed., pp.617, Japan Collection of Microorganisms, the Institute of Physical and Chemical Research, Saitama, 1995).

[0031] A cepa de fungo MF-347833 foi inoculada sobre cada meio ágar, e foi observada após o cultivo a 25°C por 14 dias. Cores foram determinadas de acordo com Methuen Handbook of Colour (Kornerup,

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A. e J.H. Wanscher, 3a. ed., pp.252, Methuen, London, 1987). Temperaturas de crescimento foram determinadas no meio ágar de dextrose de batata (Difco 2010).

Tabela 1

Características culturais de cepa de Acremonium persicinum MF347833

Meio	Características culturais
Ágar de extrato de malte	Crescimento: Rapidamente. 30-31 mm de diâmetro. Superfície: Circular, ondulado na margem, flocose, branco (1A1). Reverso: Amarelo-pálido a laranja-pálido (5A3).
Ágar de dextrose de batata (Difco 2010)	Crescimento: Rapidamente. 39-41 mm de diâmetro. Superfície: Circular, ondulado na margem, flocose, branco (1A1) a branco-amarelado (4A2). Reverso: Sulcado, cor de marfim (4A3). Marrom-mostarda no centro (5E6).
Ágar de solução de Czapek	Crescimento: Rapidamente. 57-59 mm de diâmetro. Superfície: Circular, inteira na margem. Feltroso, um pouco cinza avermelhado no centro, em geral, branco (1A1). Reverso: Laranja-pálido (5A2).
Ágar de dextrose de Sabouraud (Difco 0109)	Crescimento: Rapidamente. 32-33 mm de diâmetro. Superfície: Circular, ondulado na margem. Formação de estriados. Flocose, branco (1A1). Reverso: Sulcado, branco-amarelado (4A2).
Ágar de Emerson YpSs (Difco 0739)	Crescimento: Rapidamente. 36-38 mm de diâmetro. Superfície: Circular, ondulado na margem. Feltroso, em geral, branco (1A1). Reverso: Laranja-pálido (5A2).
Ágar de farinha grossa de milho (Difco 0386)	Crescimento: Rapidamente. 39-40 mm de diâmetro. Superfície: Circular, ondulado na margem. Feltroso, em geral, branco (1A1). Reverso: Branco (1A1).

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Meio	Características culturais
Agar de MY20	Crescimento: Rapidamente. 34-35 mm de diâmetro. Superfície: Circular, inteira na margem. Flocose, em geral, branco (1A1). Reverso: Amarelo-pálido (4A4).
Ágar de farinha grossa de aveia (Difco 0552)	Crescimento: Rapidamente. 50-51 mm de diâmetro. Superfície: Circular, inteira na margem. Flocose, branco-amarelado (4A2) no centro, em geral, branco (1A1). Reverso: Amarelo-pálido (4A4).

[0032] A cepa algumas vezes mostra variações de ocorrência artificial ou natural. O fungo da cepa de Acremonium persicinum MF-347833 usado na presente invenção inclui não apenas a cepa originalmente isolada, mas também variações artificiais causadas por raios ultravioletas, raios de radiação, agentes químicos, ou semelhantes, e variações de ocorrência natural.

Processo de produção [0033] O composto da presente invenção pode ser obtido por cultivo de um micro-organismo que pertence a um gênero Acremonium e tem uma atividade de produção do composto da presente invenção. O microorganismo pode ser cultivado de acordo com métodos de cultivo geral de micro-organismos.

[0034] O meio a ser usado não é particularmente limitado, contanto que ele contenha fontes de nutrientes capazes de serem utilizadas pelo fungo de cepa Acremonium persicinum MF-347833. Um meio sintético, um meio meio-sintético, ou um meio natural pode ser usado. Com relação à composição do meio, L-arabinose, D-xilose, D-glicose, D-frutose, sacarose, inositol, L-ramnose, rafinose, D-manitol, manose, melibiose, lactose, D-galactose, maltose, trealose, salicina, xantina, quitina, amida, glicose, dextrina, glicerol, óleo vegetal, ou similar podem ser usados como a fonte de carbono. Como a fonte de nitrogênio, extrato de carne,

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10/28 peptona, farinha grossa de glúten, farinha grossa de semente de algodão, pó de soja, pó de amendoim, farinha grossa de peixe, licor de maceração de milho, levedura seca, extrato de levedura, cloreto de amônio, sulfato de amônio, nitrato de amônio, ácido úrico, ou outras fontes de nitrogênio orgânicas ou inorgânicas podem ser usadas. Se desejado, sulfato, nitrato, carbonato, fosfato, ou similar de sódio, potássio, magnésio, cálcio, zinco, ferro, cobalto ou similar podem ser adicionados como sais de metal. Além disso, um composto para a promoção de geração ou um agente antiespuma, tais como metionina, cisteína, cistina, tiossulfato, oleato de metila, óleo de toicinho, óleo de silício, tensoativos ou similares, podem ser usados, se desejado.

[0035] Com relação à condição de cultivo, é em geral, preferido cultivar a cepa sob condições aeróbicas, na temperatura de 8,9 a 31,2°C, de preferência cerca de 26,0 a 27,6°C. O período de cultivo pode ser apropriadamente selecionado de acordo com a composição do meio ou das condições da temperatura, mas é em geral cerca de 1 a 30 dias, de preferência, cerca de 2 a 7 dias.

[0036] O composto da presente invenção pode ser purificado e isolado de uma cultura de acordo com métodos convencionais de purificação e isolamento de uma substância fisiologicamente ativa de uma cultura de um micro-organismo comum. Mais particularmente, uma cultura é extraída com um solvente orgânico apropriado, e uma substância desejada é purificada e isolada do extrato resultante. Isto é, a separação e a purificação são realizadas, usando-se uma atividade antifúngica como um índice, por métodos que utilizam a diferença na solubilidade a um solvente apropriado, ou similar, e são usados na preparação de uma substância fisiologicamente ativa comum. Esses métodos podem ser apropriadamente usados, sozinhos, em uma sua combinação desejada, ou repetidamente. Como outros métodos para a purificação, uma cultura per se, ou um sobrenadante preparado por remoção do fungo de uma

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11/28 cultura por centrifugação ou filtração, pode ser submetido a métodos que utilizam a diferença na solubilidade a um solvente apropriado, a diferença na taxa de precipitação a partir de uma solução, a diferença na afinidade adsorvível a vários adsorventes, a diferença na distribuição entre duas fases líquidas, ou similar. Por exemplo, um líquido de cultura pode ser posto em contato com um veículo apropriado, e um composto adsorvido pode ser eluído com um solvente apropriado a partir do veículo para purificar o composto. Esses métodos podem ser apropriadamente usados, sozinhos, em uma combinação desejada dos mesmos, ou repetidamente.

[0037] O sal do composto da fórmula (I), que está incluído no composto da presente invenção, pode ser preparado por reação do composto da fórmula (I) com um sal inorgânico, tais como AlK(SO4)2 · 12H2O, FeCh •6H2O, Ga2 (SO4)3-nH2O ou similar sob as condições de uma temperatura ambiente até temperatura aquecida em um solvente que não afeta a reação. Exemplos do solvente não são particularmente limitados, mas incluem uma solução aquosa contendo álcoois tal como metanol. A temperatura de reação é de preferência de 10°C a 50°C.

[0038] O composto cíclico (I) ou o sal do mesmo de acordo com a presente invenção pode ser obtido por cultivo de um micro-organismo capaz de produzir o composto ou o sal em um meio de nutriente, e separação do composto desejado da cultura resultante de acordo com um método convencional. O micro-organismo usado no método de produção não é particularmente limitado, contanto que pertença ao gênero Acremonium e pode produzir o composto.

[0039] A composição farmacêutica compreendendo um, ou dois ou mais dos compostos da fórmula (I) ou seus sais como o ingrediente ativo pode ser preparada de acordo com métodos comumente usados,

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12/28 usando-se excipientes, em geral, usados no campo, tais como excipientes farmacêuticos, veículos farmacêuticos ou similares.

[0040] Exemplos de administração incluem administração oral por comprimidos, pílulas, cápsulas, grânulos, pós, líquidos e similares, e administração parenteral por injeções (por exemplo, intra-articular, intravenosa, intramuscular ou similar), supositórios, soluções oftálmicas, pomadas oftálmicas, líquidos transdérmicos, pomadas, fixações transdérmicas, líquidos de transmucosa, emplastros de transmucosa, agentes de inalação e similares.

[0041] Para uma formulação sólida para a administração oral, comprimidos, pós, grânulos ou similares podem ser usados. Tal formulação sólida pode ser preparada por misturação de um, ou dois ou mais ingredientes ativos com pelo menos um excipiente inerte, tais como lactose, manitol, glicose, hidroxipropil celulose, celulose microcristalina, amido, polivinilpirrolidona, metassilicato de aluminato de magnésio e/ou similar. A composição pode conter aditivos inertes, por exemplo, lubrificantes tais como estearato de magnésio, desintegradores tais como carboximetil amida de sódio ou similares, estabilizadores, ou agentes de dissolução auxiliares, de acordo com métodos convencionais. Os comprimidos ou as pílulas podem ser revestidos com um revestimento de açúcar ou uma película de uma substância gástrica ou entérica, se desejado.

[0042] A composição líquida para a administração oral inclui emulsões farmaceuticamente aceitáveis, soluções, suspensões, xaropes, elixires ou similares, e contém solventes inertes comumente usados, tais como água destilada ou etanol. Além dos solventes inertes, a composição líquida pode conter agentes auxiliares (tais como solubilizadores, agentes de umectação ou agentes de suspensão), adoçantes, aromatizantes, agentes aromáticos ou conservantes.

[0043] As injeções para a administração parenteral incluem líquidos aquosos ou não aquosos, estéreis, suspensões e emulsões. O solvente

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13/28 aquoso inclui, por exemplo, água destilada para as injeções e solução salina fisiológica. O solvente não aquoso inclui, por exemplo, propileno glicol, polietileno glicol, óleos vegetais tais como óleo de oliva, alcoóis tais como etanol, polissorbato 80 (nome na Pharmacopeia), e similares. Tais composições podem ulteriormente conter agentes isotônicos, conservantes, agentes de umectação, agentes de emulsificação, dispersantes, estabilizadores ou agentes de dissolução auxiliares. Essas composições podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias, combinação de um germicida ou irradiação. Alternativamente, elas podem ser usadas por primeiramente tornálas em composições sólidas estéreis e dissolução ou suspensão delas em água estéril ou outro solvente estéril para o uso de injeção antes de seu uso.

[0044] Preparações externas incluem pomadas, emplastros, cremes, geleias, cataplasmas, sprays, loções, soluções oftálmicas, pomadas oftálmicas e similares. Tais preparações contêm bases de pomada, bases de loção, líquidos aquosos ou não aquosos, suspensões, emulsões comumente usados ou similares. Os exemplos da pomada ou bases de loção são polietileno glicol, propileno glicol, petrolato branco, cera de abelha branca, óleo de rícino hidrogenado de polioxietileno, monoestearato de glicerila, álcool estearílico, álcool cetílico, lauromacrogol, sesquioleato de sorbitano e similares.

[0045] Agentes transmucosais tais como agentes de inalação e agentes transnasais podem ser usados em formas sólidas, líquidas ou semissólidas, e podem ser preparados por métodos convencionais. Por exemplo, excipientes conhecidos, ajustadores de pH, conservantes, tensoativos, lubrificantes, estabilizadores, espessantes ou similares podem ser usados, se desejado. Para a administração, dispositivos apropriados para a inalação ou insuflação podem ser usados. Por exemplo, usando-se dispositivos conhecidos (tal como dispositivo de inalação

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14/28 para a administração medida) ou borrifadores, o composto pode ser administrado sozinho, ou pode ser administrado em uma forma de pó de uma mistura formulada ou como uma solução ou suspensão com um veículo farmaceuticamente aceitável. Um dispositivo de inalação para pó seco ou similar pode ser um dispositivo para única administração ou várias administrações, e um pó seco ou uma cápsula contendo pó pode ser usada. Alternativamente, o composto pode ser administrado na forma de um spray em aerossol sob pressão ou similar, usando-se um agente apropriado para a ejeção, por exemplo, um gás apropriado tal como clorofluoroalcano, hidrofluoroalcano, dióxido de carbono ou similar.

[0046] No caso de administração oral, a dosagem usual é cerca de 0,01 a 100 mg/kg, de preferência de 0,1 a 10 mg/kg por dia, que é administrada em uma porção ou duas a quatro porções. No caso de administração intravenosa, a dosagem usual é cerca de 0,01 a 100 mg/kg por dia, que é administrada uma ou várias vezes ao dia. A dose é aproximadamente determinada por levar em consideração cada caso, por exemplo, sintomas, idade, sexo ou similar de cada paciente a ser administrado.

[0047] O composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo pode ser usado juntamente com vários agentes de tratamento ou prevenção de doenças para as quais o composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo é considerado como sendo eficaz. A administração pode ser realizada simultaneamente, ou sucessivamente sem intervenção ou com um intervalo apropriado. A administração simultânea pode ser realizada na forma de uma única formulação, ou na forma de formulações separadas. EXEMPLOS [0048] O processo para a preparação do composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo será ulteriormente ilustrado pelos seguintes Exemplos, mas a presente invenção não é limitada aos compostos descritos

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15/28 abaixo. Além disso, o processo para a preparação do composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo não é limitado aos processos específicos descritos nos seguintes exemplos de trabalho, e o composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo pode ser preparado pela combinação desses processos, ou um método convencional óbvio pelo versado na técnica [0049] As abreviações mostradas na T abela 2 serão usadas nos seguintes Exemplos, Exemplos preparativos e Tabelas.

Tabela 2

Abreviações	Nomes inteiros
AlK(SO4)2· 12H2O	Dodeca-hidrato de sulfato de alumínio potássio
CHCb	Clorofórmio
FeCl3-6H2O	Hexa-hidrato de cloreto de ferro(III)
Ga2(SO4)3 nH2O	Hidrato de sulfato de gálio(III)
KCl	Cloreto de potássio
KH2PO4	Di-hidrogenofosfato de potássio
MeCN	Acetonitrila
MeOH	Metanol
MgSO4-7H2O	Hepta-hidrato de sulfato de magnésio
NaNO3	Nitrato de sódio
(NH4)2SO4	Sulfato de amônio
TFA	Ácido trifluoroacético
HR ESI MS	Ionização por eltrospray de alta resolução MS

Exemplo 1

Produção de cultivo do composto A [0050] Um meio de semeadura 1 (vide tabela 3, 30 mL) foi despejado para dentro de um frasco de Erlenmeyer (tamanho: 100 mL) e foi

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16/28 esterelizado por autoclave (121°C, 30 minutos). Um loopful da cepa de fungo MF-347833 foi asseticamente inoculada de uma cultura inclinada no meio de semeadura 1, e foi cultivada a 25°C por 4 dias enquanto se agitando em um agitador rotativo (220 rpm). A seguir, um meio de produção 1 (vide tabela 4, 100 mL) foi despejado para dentro de um frasco de Erlenmeyer (tamanho: 500 mL) e foi esterilizado por autoclave (121°C, 30 minutos). A cultura de semeadura (2 mL) foi asseticamente inoculada para dentro desse frasco, e foi cultivada a 25°C por 7 dias enquanto se agitando em um agitador rotativo (220 rpm). O cultivo foi monitorado por HPLC (Analytical HPLC1; com relação às condições, vide tabela 5).

Tabela 3

Meio de semeadura 1

Componentes de meio	T eores (%)
Amido de milho	2
Glicerol	1
Sacarose	1
Meio Pharma	1
Farinha grossa de glúten	1
Tween 80	0,2

Tabela 4

Meio de produção 1

Componentes de meio	T eores (%)
Glicose	0,5
Amido solúvel (Nacalai Tesque)	1,5
Extrato de levedura (Wako Pure Chemical Industries)	0,5
KCl	0,02
MgSO4-7H2O	0,02
KH2PO4	0,1

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17/28

NaNO3

0,2

Tabela 5

Condições em HPLC1 analítica

Coluna	Mightysil RP-18 GP 150-4,6 (5 pm), Kanto Chemical
Fase móvel	MeCN:água=28:72(v/v) (contendo 0,5% de NH4H2PO4)
Taxa de fluxo	1 mL/min
Comprimento de onda para detecção	210 nm
Tempo de retenção	Cerca de 4,2 min.
solamento e purificação do composto A

[0051] À cultura (2,6 L) obtida pelo método de cultivo acima, um volume igual de acetona foi adicionado. Essa mistura foi agitada por 1 hora, e foi filtrada para se obter um extrato de cultura. O líquido de extrato de cultura resultante foi misturado com um volume de duas vezes de água, e foi aplicado a uma coluna Diaion SP 850 (tamanho: 400 mL; Mitsubishi Chemical). A eluição foi realizada usando-se um solvente misto [acetona:água = 30:70 (v/v), 1,9 L].

[0052] O eluato resultante foi misturado com água (2,1 L). O total foi aplicado a uma coluna de Daisogel SP-120-ODS-B (tamanho: 350 mL, 15/30 pm; DAISO), e foi eluído com um solvente misto [MeCN:água = 25:75 (v/v), 340 mL].

[0053] A esse eluato, água (350 mL) foi adicionada e foi aplicada a um cartucho OASIS HLB (tamanho: 6 g; Waters), e foi eluída com MeOH (150 mL). O eluato obtido foi concentrado sob pressão reduzida, e acetona foi adicionada ao concentrado para se obter um precipitado. Esse precipitado foi seco para obter pó amarelo (100 mg).

[0054] Uma porção (15 mg) desse pó amarelo foi dissolvida em quantidade pequena de MeOH, e foi purificada por HPLC1 preparativa

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18/28 (Com relação às condições, vide tabela 6). Um pico no tempo de eluição de cerca de 22 minutos foi coletado. A fração coletada foi misturada com um volume igual de água, e foi aplicada a um cartucho de OASIS HLB (tamanho: 500 mg). Água (50 mL) foi passada através do cartucho, e a eluição foi realizada usando-se MeOH (50 mL). Esse eluato foi concentrado sob pressão reduzida, e acetona foi adicionada ao concentrado para obter um precipitado. Esse precipitado foi seco para obter o composto A (13 mg) como um pó branco.

Tabela 6

Condições em HPLC1 preparativa

Coluna	coluna Simetria 7 pm C18, 19x300 mm, Waters
Fase móvel	MeCN:água = 27:73(v/v) (contendo 0,05% de TFA)
Taxa de fluxo	7 mL/min

Propriedades fisicoquímicas do composto A [0055] O composto A purificado e isolado pelo processo acima mostrou as propriedades fisicoquímicas mostradas na Tabela 7.

Tabela 7

Propriedades fisicoquímicas do composto A

Cor e forma	Pó branco
Rotação ótica	[o]d²⁵-57° (c 0,01, MeOH)
Fórmula molecular	C40H62N10O13
HR ESI-MS	Encontrado 891,4592 (M+H)⁺, Calculado 891,4576
IV(KBr)cm^-1	3300, 2950, 1680, 1650, 1640, 1540, 1460, 1420, 1240, 1210, 1160, 1040, 970
espectro de 1H-RMN	Mostrado na figura 1
espectro de ¹³C-RMN	Mostrado na figura 2

[0056] Foi concluído a partir das propriedades fisicoquímicas que o composto A tem uma estrutura química da seguinte fórmula (II). Além

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19/28 disso, as configurações dos aminoácidos constituintes foram concluídas como sendo D-Phe, L-Leu, e L-Asn de acordo com um método de Marfey modificado. Com relação à porção de ornitina, comparou-se o composto A com um análogo de ocorrência natural Ferricromo (literatura de não patente 1), e presumiu-se que ele fosse L-ornitina, uma vez que uma análise de aminoácidos mostrou que três aminoácidos eram idênticos.

Produto químico 3

Exemplo 2

Produção de cultivo dos compostos B e C [0057] Um meio de semeadura 2 (vide tabela 8, 30 mL) foi despejado para dentro de um frasco Erlenmeyer (tamanho: 100 mL) e foi esterilizado por autoclave (121°C, 30 minutos). Um loopful da cepa do fungo MF-347833 foi assepticamente inoculado de uma cultura inclinada no meio de semeadura, e foi cultivado a 25°C por 4 dias enquanto agitando em um agitador rotativo (220 rpm).

[0058] O mesmo meio de semeadura (160 mL) foi despejado para dentro de um frasco de Erlenmeyer (tamanho: 500 mL) e foi esterilizado por autoclave (121°C, 30 minutos). A cultura de semeadura (3,2 mL) foi asseticamente inoculada para dentro desse meio de semeadura, e foi cultivada a 25°C por 3 dias enquanto se agitando em um agitador rotativo (220 rpm).

[0059] A seguir, meio de produção 2 anteriormente preparado (vide

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20/28 tabela 9, 20 L) foi despejado para dentro de um fermentador de jarra (tamanho: 30 L) e foi esterilizado (121°C, 30 minutos). A cultura de semeadura (480 mL) foi asseticamente inoculada para dentro do fermentador de jarra, e foi cultivada a 25°C por 7 dias sob aeração a 20 L/min e agitação a 200 rpm. O cultivo foi monitorado por HPLC (Analytical HPLC2; com relação às condições, vide tabela 11).

[0060] Quando um meio de produção 3 foi usado ao invés do meio de produção 2, a produção de cultivo acima poderia ser realizada sob as mesmas condições de cultivo.

Tabela 8

Meio de semeadura 2

Tabela 9

Meio de produção 2

Componentes de meio	T eores (%)
Glicose	0,5
Amido solúvel(Nacalai Tesque)	1,5
Extrato de levedura (Wako Pure Chemical Industries)	0,5
Adekanol LG-109 (ADEKA)	0,05
Silicone KM-70 (Shin-Etsu Chemical)	0,05
KCl	0,02
MgSO4-7H2O	0,02
KH2PO4	0,1

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21/28

NaNO3

0,2

Tabela 10

Meio de produção 3

Componentes de meio	T eores (%)
Sacarose	4
Levedura seca (Asahi Food and Healthcare)	1,5
(NH4)2SO4	0,5
Carbonato de cálcio	0,5

Tabela 11

Condições em HPLC2 preparativa

Coluna	Mightysil RP-18 GP 150-4.6 (5 pm), Kanto Chemical
Fase móvel	MeCN:H2O=28:72(v/v) (contendo 0,5% de NH4H2PO4)
Taxa de fluxo	1 mL/min
Comprimento de onda para detecção	210 nm
Tempo de retenção	Composto B (cerca de 8,7 min), Composto C (cerca de 10 min)
Isolamento e purificação de compostos B e C

[0061] À cultura (meio de produção 2: 90 L) obtida pelo método de cultivo acima, um volume igual de acetona foi adicionado. Essa mistura foi agitada por 1 hora, e foi filtrada para se obter um extrato de cultura. O líquido de extrato de cultura resultante foi misturado com um volume igual de água, e foi aplicado a uma coluna de Diaion SP 850 (10 L; Mitsubishi Chemical). A eluição foi realizada usando-se um solvente misto [acetona:água = 40:60 (v/v), 40 L].

[0062] Ao eluato resultante, um volume igual de água foi adicionado. O total foi aplicado a uma coluna de Daisogel SP-120-ODS-B (15/30 pm, tamanho: 2 L; DAISO), efoi eluído com um solvente misto

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22/28 [MeCN:água = 25:75 (v/v), 7 L].

[0063] A esse eluato, um volume igual de água foi adicionado. O total foi aplicado à coluna de Daisogel SP-120-ODS-B (tamanho: 2 L) novamente, e foi eluído com um solvente misto [MeCN:água = 27,5:72,5 (contendo 0,05% de TFA)(v/v)].

[0064] A esse eluato, um volume igual de água foi adicionado. O total foi aplicado à coluna de Daisogel SP-120-ODS-B (tamanho: 180 mL) novamente, e foi eluído com MeOH. O eluato obtido foi concentrado sob pressão reduzida.

[0065] O resíduo resultante foi dissolvido em quantidade pequena de MeOH, e foi purificado por HPLC2 preparativa (com relação às condições, vide tabela 12).

[0066] Uma fração no tempo de eluição de cerca de 24 a 25 minutos foi misturada com um volume igual de água, e foi aplicada a um cartucho de OASIS HLB (tamanho: 6 g; Waters). Água (100 mL) foi passada através do cartucho, e a eluição foi realizada usando-se MeOH (100 mL). Esse eluato foi concentrado sob pressão reduzida, foi substituído com água, e foi liofilizado para obter o composto C (130 mg) como um pó. Esse pó foi cristalizado usando-se solventes (MeOH, acetato de etila, e n-hexano) para obter o composto C como cristais laranja.

[0067] O procedimento acima foi repetido, exceto que uma outra fração no tempo de eluição de cerca de 19 a 21 minutos foi usada, para se obter um pó. Esse pó foi dissolvido em CHCh, e foi purificado por uma cromatografia de coluna de sílica-gel (Spherical 60N, neutro, de 40-100 pm, Kanto Chemical; CHCh:MeOH = 10:1). O eluato resultante foi concentrado sob pressão reduzida, foi substituído com água, e foi liofilizado para obter o composto B (150 mg) como um pó branco. Esse pó branco (109 mg) foi cristalizado usando-se solventes (MeOH, acetato de etila e n-hexano) para obter o composto B (90,1 mg) como cristais incolores.

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Tabela 12

Condições em HPLC2 preparativa

Coluna	coluna de Mightysil RP-18 GP, 250x20 mm ID., Kanto Chemical
Fase móvel	MeCN:água=30:70 (v/v)(contendo 0,05% de TFA)
Taxa de fluxo	10 mL/min.
Propriedades fisicoquímicas do composto B

[0068] O composto B purificado e isolado pelo processo acima mostrou as propriedades fisicoquímicas mostradas na Tabela 13, e assim, presumiu-se que fosse um composto em que a razão do composto para alumínio é de 1:1.

Tabela 13

Propriedades fisicoquímicas do composto B

Cor e forma	Cristais incolores
Rotação ótica	[o]d²⁵ +210° (c 0,01, MeOH)
Fórmula molecular	C40H59AM10O13
HR ESI-MS	Encontrado 915,4191 (M+H)⁺, Calculado 915,4157
IV(KBr) cm^-1	3300, 2930, 1680, 1650, 1620, 1520, 1370, 1240, 1140, 990
Ponto de fusão	295°C
espectro de 1HRMN	Mostrado na figura 3
espectro de ¹³CRMN	Mostrado na figura 4
Propriedades fisicoquímicas do composto C

[0069] A partir de análise estrutural por raios X de cristal simples e o fato de que o composto C purificado e isolado pelo processo acima mostrou as propriedades fisicoquímicas mostradas na Tabela 14, e assim, determinou-se que fosse um composto em que a razão do composto para ferro é de 1:1.

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Tabela 14

Propriedades fisicoquímicas do composto C

Cor e forma	Cristais laranja
Rotação ótica	[o]d²⁵ +256° (c 0,01, MeOH)
Fórmula molecular	C40H59FeN10O13
HR ESI-MS	Encontrado 944,3693 (M+H)⁺, Calculado 944,3691
Análise estrutural de raios X de cristal único	a = 13,850 (1) A, b = 15,135 (1) A, c = 24,290 (2) A, V = 5091,6(6) A³

Exemplo 3

Preparação do composto D [0070] Composto A (4 mg) foi dissolvido em uma mistura de MeOH (0,4 mL) e água (0,4 mL), e a solução resultante foi misturada com uma solução aquosa (1,2 mL) de Ga2(SO4)3-nH2O (10 mg), e foi agitada por 18 horas a 25^oC. Água (18 mL) foi adicionada ao líquido de reação, e o total foi aplicado a um cartucho de OASIS HLB (fabricado por Warters). Água (6 mL) foi passada através do cartucho, e o composto desejado foi eluído a partir do cartucho com metanol (4 mL). O eluato resultante foi concentrado sob pressão reduzida para obter composto D (4 mg) como um pó branco.

Propriedades fisicoquímicas do composto D [0071] O composto D preparado pelo processo acima mostrou as propriedades fisicoquímicas mostradas na Tabela 15, e assim, presumiu-se que fosse um composto em que a razão do composto A para gálio é 1:1.

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Tabela 15

Propriedades fisicoquímicas do composto D

Fórmula molecular	C40H59GaNwO13
HR ESI-MS	Encontrado 957,3597 (M+H)⁺, Calculado 957,3597
espectro de 1HRMN	Mostrado na figura 5
espectro de ¹³CRMN	Mostrado na figura 6

Exemplo 4

Ensaio de atividade antifúngica [0072] Atividades antifúngicas para fungos de teste mostradas na T abela 15 foram determinadas por um método de microdiluição de caldo (Hikaru Kume e Toshikazu Yamazaki, Clinical Microbiology, Vol.21, No.5, pp.573-580, 1994). O resultado do ensaio para as atividades antifúngicas do composto B novamente os fungos do teste são mostrados na Tabela 16.

Tabela 16

Concentrações eficazes mínimas (MEC) do composto B

Fungos de teste	MEC(pg/mL)
Candida krusei FP1979	0,31
Candida glabrata FP1944	0,31
Candida guilliermondii FP2086	0,31
Candida parapsilosis FP1980	0,39
Cryptococcus neoformans FP1739	0,2
Aspergillus fumigatus FP1305	0,31
Aspergillus terreus SR0174	0,31
Aspergillus niger ATCC6275	0,78
Aspergillus flavus ATCC9643	0,2
Trichosporon asahi FP2044	0,2

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Fungos de teste	MEC(pg/mL)
Fusarium solani FP1930	0,2
Pseudallescheria boydii FP1987	0,2
Rhizopus oryzae FP1988	25
Trichophyton mentagrophytes FP2103	0,78
Trichophyton rubrum FP596	1,25
Alternaria alternata AHU9258	0,1

[0073] Como um resultado, foi confirmado que o composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo tem uma atividade antifúngica. O composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo pode ser usado no tratamento ou similar de micoses, particularmente micoses profundamente acomodadas ou similar, tal como sinusite micótica.

[0074] Neste aspecto, por exemplo, ferricromo (adquirido a partir da Sigma) tinha um MEC de 50 pg/mL ou mais para Aspergillus fumigatus FP1305.

Exemplo 5

Ensaio de citotoxicidade [0075] Citotoxicidade foi julgada por adição de um fármaco de teste à linha de células de linfoma T de camundongo EL-4 a várias concentrações, incubando as células em uma incubadora de CO2 a 37°C por 72 horas, contagem das células usando-se um kit de contagem de células (Wako Pure Chemical Industries), e cálculo de valores de IC50.

[0076] Como um resultado, por exemplo, o composto B não mostrou um efeito citotóxico para as células de EL-4 a uma concentração de 50 pg/mL.

Aplicabilidade Industrial [0077] O composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo pode ser usado como um agente para a prevenção e/ou tratamento de micoses, particularmente, micoses profundamente acomodadas ou similares.

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27/28 [0078] Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência a concretizações específicas, várias mudanças e modificações óbvias por aqueles versados na técnica são possíveis sem se afastar do escopo das reivindicações anexas.

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TRATADO DE BUDAPESTE SOBRE O RECONHECIMENTO INTERNACIONAL DO DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS PARA FINS DE PROCESSAMENTO DE MATÉRIA DE PATENTES

RECEBIDO NO CASO DE DEPÓSITO ORIGINAL emitido por força da regra 7.1 pela AUTORIDADE INTERNACIONAL DE DEPÓSITO identificada abaixo

RECEBIDO NO CASO DE DEPÓSITO ORIGINAL

Nome do Depositante: ASTELLAS PHARMA iNC.

Masafumi NOGIMORI, CEO

Endereço: 3-11, Nihonbashi-Honcho 2-chome, Chuo-ku,

Tokyo 103-8411, Japan

I. Identificação do microorganismo
(Indicação para identificação fornecida pelo depositante) Acremonium persicinum MF347833	(Número de depósito ou número de acesso): FERM BP-10916
II. Descrição científica e/ou designação taxonômica proposta
O microorganismo identificado na coluna I foi acompanhado pe-los documentos descrevendo as seguintes matérias: uma descrição científica x designação taxonômica proposta
III. Recibo do depósito
A Autoridade Internacional de Depósito identificada abaixo recebeu o microorganismo identificado na coluna I, depositado em 10 de outrubro de 2007. (data do depósito original).
IV. Recibo da transferência
A Autoridade Internacional de Depósito identificada abaixo recebeu o microorganismo identificado na coluna I, depositado em (Transferido para FERM P- depósitado em )
V. Autoridade Internacional de Depósito
Nome: International Patent Organism Depositary National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Endereço: AIST Tsukuba Central 6, 1-1, Higashi 1-chrome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken 305-8566 Japão 10 de outrubro de 2007

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para preparar um composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo

o referido processo sendo caracterizado pelo fato de que compreende: cultivar uma cepa que pertence a um gênero de fungo Acremonium; e isolar o composto da fórmula (I), ou um sal do mesmo, de um caldo de cultura resultante.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é obtido por cultura de cepa de Acremonium persicinum MF-347833 do depósito No FERM BP-10916.
3. Composto ou sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto apresenta a fórmula (I) como definida na reivindicação 1, sendo que o sal do composto é um sal de gálio.
4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto ou sal do mesmo, como definido na reivindicação 1, e um líquido não aquoso, sendo que o líquido não aquoso é pelo menos um composto selecionado dentre propileno glicol, polietileno glicol, óleos vegetais tais como óleo de oliva, álcoois tais como etanol, e

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2/2 polissorbato 80.
5. Uso do composto ou sal do mesmo como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de micoses.