BRPI0806312A2

BRPI0806312A2 - agonistas cgpr piperidina

Info

Publication number: BRPI0806312A2
Application number: BRPI0806312-5A
Authority: BR
Inventors: Matthew Colin Thor Fyfe; Revathy Perpetua Jeevaratnam; John Keily; Simon Andrew Swain
Original assignee: Prosidion Ltd
Priority date: 2007-01-04
Filing date: 2008-01-04
Publication date: 2011-09-06
Also published as: JP2010514832A; EP2114936A1; US20100048625A1; EA016507B1; CA2674360A1; EA200900878A1; WO2008081208A1

Abstract

AGONISTAS GPCR PIPERIDINA. A presente invenção refere-se a compostos da fórmula (I): ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, que são agonistas GP-CR e são úteis no tratamento de obesidade e diabetes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "AGONISTAS GPCR PIPERIDINA". Antecedentes da Invenção

A presente invenção refere-se a agonistas do receptor acoplado à proteína-G (GPCR). Em particular, a presente invenção se refere a agonis- tas GPCR que são úteis no tratamento de obesidade, por exemplo, como reguladores de saciedade, síndrome metabólica e no tratamento de diabe- tes.

A obesidade é caracterizada por uma massa de tecido adiposo excessiva relativa ao tamanho do corpo. Clinicamente, a massa de gordura corporal é estimada pelo índice de massa corporal (BMI; peso (kg)/altura (m)2), ou circunferência abdominal. Os indivíduos são considerados obesos quando o BMI estiver maior que 30 e há conseqüências médicas estabeleci- das por estarem acima do peso. Há algum tempo um ponto de vista médico aceito é que um peso corporal aumentado, especialmente como resultado de gordura corporal abdominal, está associado a um risco aumentado de de- senvolver diabetes, hipertensão, doença cardíaca, e inúmeras outras com- plicações da saúde, tais como, artrite, acidente vascular cerebral, doença da vesícula biliar, problemas musculares e respiratórios, dor nas costas e ainda alguns cânceres.

As abordagens farmacológicas para o tratamento de obesidade vêm sendo relacionadas à redução de massa de gordura ao alterar o equilí- brio entre ingestão e dispêndio de energia. Muitos estudos estabeleceram claramente a ligação entre adiposidade e o circuito cerebral envolvidos na regulação de homeostasia energética. A prova direta e indireta sugere que vias serotonérgicas, dopaminérgicas, adrenergicas, colinérgicas, endocana- binóides, opióides, e histaminérgicas além de muitas vias neuropeptídicas (por exemplo, neuropeptídeo Y e melanocortinas) estão envolvidas no con- trole central de ingestão e dispêndio de energia. Os centros hipotalâmicos também são capazes de captar hormônios periféricos envolvidos na manu- tenção do peso corporal e grau de adiposidade, tal como, insulina e leptina, e peptídeos derivados de tecido adiposo. Fármacos voltados para a patofisiologia associada com diabetes Tipo I insulina-dependente e diabetes Tipo Il não-insulina-dependente pos- suem muitos efeitos colaterais potenciais e não atendem adequadamente a dislipidemia e hiperglicemia em uma alta proporção de pacientes. O trata- mento geralmente se concentra nas necessidades individuais do paciente utilizando dieta, exercício, agentes hipoglicêmicos e insulina, porém ainda há a necessidade de novos agentes antidiabéticos, particularmente aqueles que podem ser melhor tolerados com menos efeitos adversos.

Similarmente, a síndrome metabólica (síndrome X) coloca as pessoas em alto risco de desenvolver doença arterial coronariana, e é carac- terizada por um grupo de fatores de risco que inclui obesidade central (tecido adiposo excessivo na região abdominal), intolerância à glicose, altos níveis de triglicerídeos e baixos níveis de colesterol HDL, e pressão sangüínea alta. A isquemia miocárdica e doença microvascular consistem em uma morbidez estabelecida associada com a síndrome metabólica não-tratada ou insatisfa- toriamente controlada.

Ainda há a necessidade de novos agentes antiobesidade e anti- diabéticos, particularmente aqueles que são bem tolerados com poucos efei- tos adversos.

GPR119 (anteriormente mencionado como GPR116) é um GP- CR identificado como SNORF25 no documento W000/50562 que descreve tanto receptores humanos como de rato, US 6.468.756 também descreve o receptor de camundongo (números de acesso: AAN95194 (humano), A- AN95195 (rato) e ANN95196 (camundongo)).

Em humanos, GPR119 é expresso no pâncreas, intestino delga- do, cólon e tecido adiposo. O perfil de expressão do receptor GPR119 hu- mano indica sua utilidade potencial como um alvo para o tratamento de obe- sidade e diabetes.

Os pedidos de patente internacional W02005/061489, W02006/070208, W02006/067531 e W02006/067532 descrevem derivados heterocíclicos como agonistas do receptor GPR119. Os pedidos de patente internacional PCT/GB2006/050176, PCT/GB2006/050177, PCT/GB2006/050178 e PCT/GB2006/050182 (publicados após a data de prioridade do presente pedido) descrevem ainda agonistas do receptor G- PR119.

A presente invenção se refere a agonistas de GPR119 que são úteis no tratamento de obesidade, por exemplo, como reguladores periféri- cos de saciedade, síndrome metabólica e no tratamento de diabetes.

Sumário da Invenção Compostos da fórmula (I):

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ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses, são agonistas de GPR119 e são úteis no tratamento profilático ou terapêutico de obesidade e diabetes.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção se refere a um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

<formula>formula see original document page 4</formula>

em que um entre X e Y é O e o outro é N;

R1 é SO2R51 NR6R71 ou CONR6R7;

R é hidrogênio ou metila;

R3 é hidrogênio ou metila;

R4 é C2-S alquila;

R5 é C1-3 alquila; R e R7 são, independentemente, hidrogênio , C1-4 alquila, que pode ser opcionalmente substituída por halo, hidróxi, C1-4 alcóxi-, arilóxi-, aril C1-4 alcóxi-, C1-4 alquilS(0)m-, C3-7 heterociclila, N(R8)2 ou -C(O)OR9; ou pode ser C3.7 cicloalquila, arila, heterociclila ou heteroarila, em que os grupos cícli- cos podem ser substituídos por um ou mais substituintes selecionados entre halo, C1-4 alquila, C1-4 fluoroalquila, OR6, CN, SO2CH3, N(R8)2 e NO2; ou jun- tamente R6 e R7 podem formar um anel heterocíclico de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído por hidróxi, C1-4 alquila ou C1-4 hidroxialquila e contém opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado entre O e NR8;

R8 é, independentemente, hidrogênio ou C-m alquila; ou um gru- po N(R8)2 pode formar um anel heterocíclico de 4 a 7 membros que contém opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado entre O e NR8;

R9 é hidrogênio ou C-m alquila; e m é O, 1 ou 2.

Em uma modalidade da invenção X é O e em outra Y é O. X é, de preferência, O.

Y é, de preferência, N.

Quando R1 for CONHR6, R2 é, de preferência, metila.

Em uma modalidade da invenção R3 é hidrogênio e em outra R3 é metila. Quando R3 for metila, o estereocentro criado possui, de preferên- cia, a configuração (R).

R4 é, de preferência, C3-4 alquila, particularmente n-propila, iso- propila, ou terc-butila, com ainda mais preferência C3 alquila, especialmente isopropila.

R5 é, de preferência, metila.

R6 é, de preferência, hidrogênio, C1-3 alquila, ou C2-3alquila subs- tituída por hidróxi e R7 é, de preferência, hidrogênio.

Quando R6 for C2-3alquila substituída por hidróxi, essa pode ser substituída por um ou mais, por exemplo, 1 ou 2, de preferência, 1, grupo hidróxi.

R6 é, com mais preferência, C1-3 alquila ou C2-3alquila substituída por hidróxi, com mais preferência, C2-3 alquila substituída por hidróxi, por exemplo, 2-hidroxietila, 2-hidróxi-1 -metiletila, 2,3-di-hidroxipropila ou 2- hidróxi-1-hidroximetiletila, de preferência, 2-hidroxietila ou 2-hidróxi-1- metiletila, com ainda mais preferência, 2-hidróxi-1 -metiletila, especialmente (R)-2-hidróxi-1-metiletila.

Embora os grupos preferidos de cada variável estejam geral- mente listados acima separadamente para cada variável, compostos preferi- dos dessa invenção incluem aqueles onde diversas ou cada variável na fór- mula (I) é selecionada a partir dos grupos preferidos, mais preferidos ou par- ticularmente listados para cada variável. Portanto, essa invenção pretende incluir todas as combinações de grupos preferidos, mais preferidos e particu- larmente listados.

Os compostos específicos da invenção que podem ser mencio- nados são aqueles incluídos nos Exemplos e sais farmaceuticamente acei- táveis desses.

Como usado aqui, exceto quando estabelecido em contrário, "alquila""significa cadeias de carbono que podem ser lineares ou ramificadas ou combinações dessas. Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, sec- e terc-butila e pentila.

O termo "halo" inclui átomos de flúor, cloro, bromo, e iodo, em particular flúor ou cloro, especialmente flúor.

Os compostos descritos aqui podem conter um ou mais centros assimétricos e, desse modo, podem dar origem a diastereômeros e isômeros ópticos. A presente invenção inclui todos tais diastereômeros possíveis bem como suas misturas racêmicas, seus enantiômeros resolvidos substancial- mente puros, todos os isômeros geométricos possíveis, e sais farmaceuti- camente aceitáveis desses. A fórmula (I) acima é mostrada sem uma este- reoquímica definitiva em algumas posições. A presente invenção inclui todos os estereoisômeros da fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis des- ses. Ademais, misturas de estereoisômeros bem como estereoisômeros es- pecíficos isolados também são incluídos. Durante os procedimentos sintéti- cos usados para preparar tais compostos, ou na utilização dos procedimen- tos de racemizacao ou epimerização conhecidos pelos versados na técnica, os produtos de tais procedimentos podem ser uma mistura de estereoisôme- ros.

Quando o composto da fórmula (I) e os sais farmaceuticamente aceitáveis desse se apresentarem sob a forma de solvatos ou formas poli- mórficas, a presente invenção inclui quaisquer solvatos e formas polimórfi- cas possíveis. Um tipo de um solvente que forma o solvato não é particular- mente limitado desde que o solvente seja farmacologicamente aceitável. Por exemplo, água, etanol, propanol, acetona ou similares podem ser usados.

O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere a sais preparados a partir ácidos não-tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, inclu- sive ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem, por exemplo, ácido clorídrico, metanossulfônico, sulfúrico, p-toluenossulfônico e similares.

Uma vez que os compostos da fórmula (I) são destinados para uso farmacêutico esses são, de preferência, proporcionados em forma subs- tancialmente pura, por exemplo, pelo menos 60% de pureza, mais adequa- damente, pelo menos 75% de pureza, especialmente pelo menos 98% de pureza (% estão em um peso com base no peso).

Os compostos da fórmula (I) podem ser preparados como des- crito abaixo. PG representa um grupo de proteção, G é um oxadiazol substi- tuído, como definido acima, e R1, R21 R3 e R4 também são conforme definido acima.

Os compostos da fórmula (II), onde PG é um grupo de proteção adequado podem ser facilmente preparados a partir de compostos conheci- dos (Esquema 1). Por exemplo, o etil éster do composto (II) onde PG é Boc foi anteriormente relatado (Patente US 6.518.423). A hidrogenação sob con- dições-padrão irá produzir o composto racêmico da fórmula (III). A redução quiral do alceno sob condições adequadas, tal como, hidrogenação na pre- sença de um catalisador quiral produz compostos da fórmula (III) em grande excesso enantiomérico. Um exemplo de um catalisador adequado é [Rh(norbornadieno)2]BF4 e (S)-1-[(R)-2-(di-terc-butilfosfino)ferrocenil]- etilbis(2-metilfenil)fosfina. Os compostos da fórmula (IV) podem ser então obtidos por redução dos ácidos carboxílicos da fórmula (III) sob condições- padrão, por exemplo, borano em um solvente adequado, tal como, THF. A remoção do grupo de proteção é então realizada sob condições bem conhe- cidos pelos versados na técnica.

Esquema 1

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O composto da fórmula (V) onde R3= H é um composto conheci- do (Esquema 2, Siegel, M. G. et al. Tetrahedron 1999, 55, 11619-11639). Os compostos da fórmula (VII) podem ser preparados a partir de compostos da fórmula (V) sob condições-padrão. Por exemplo, o tratamento de compostos da fórmula (V) com brometo de cianogênio seguido por condensação do cia- namida resultante (VI) com um composto da fórmula (IX) sob condições- padrão produz compostos da fórmula (VII) onde X é O. Os compostos da fórmula (IX) estão tanto comercialmente disponíveis, como são facilmente preparados a partir dos ácidos carboxílicos correspondentes utilizando técni- cas bem conhecidas. Alternativamente, a síntese do oxadiazol regioisoméri- co, onde Y é O, pode ser realizada ao aquecer os compostos da fórmula (VI) com hidroxilamina para obter N-hidroxiguanidinas da fórmula (VIII) que po- dem ser condensadas com um ácido carboxílico da fórmula (X) sob condi- ções adequadas. Os ácidos da fórmula (X) estão comercialmente disponí- veis.

Esquema 2

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Os compostos da fórmula (VII) também podem ser preparados por meio de condensação de amina (V) com um cloreto de oxadiazol da fór- mula (XI), como ilustrado no Esquema 3 (Buscemi, S. et al. JCS Perkin I: Org. and Bioorg. Chem., 1988, 1313 and Adembri, G1 et al. JCS Perkin I: Org. and Bioorg. Chem., 1981, 1703).

Esquema 3

<formula>formula see original document page 9</formula>

Os compostos da fórmula (I), onde R1 é sulfona ou amida, po- dem ser formados como esquematizado no Esquema 4. O composto, onde R1 é metilssulfonila e R2 é hidrogênio, foi anteriormente relatado (WO 2005/063738). A combinação dos compostos da fórmula (VIII) e fórmula (VII) utilizando condições de Mitsunobu, por exemplo, em um solvente adequado, tal como, THF, entre O0C e a temperatura ambiente, seguida pela adição de 10 trifenilfosfina e di-isopropilazodicarboxilato, produz os compostos da fórmula (I). Os compostos da fórmula (I), onde R1 é uma amida, podem ser sintetiza- dos começando pelo composto comercialmente disponível da fórmula (VIII) onde R1 é ciano e R2 é metila, utilizando a química bem conhecida pelos versados na técnica. Por exemplo, a condensação de Mitsunobu desse 15 composto com o álcool da fórmula (VII) poderia fornecer uma cianopiridina que poderia ser transformada no ácido correspondente por hidrólise, então nas amidas desejadas por técnicas de formação de ligação de amida pa- drão. As aminopiridinas da fórmula (I) podem ser preparadas a partir das sulfonas correspondentes da fórmula (I) por deslocamento de alcanossulfina- 20 to pela amina apropriada mediante aquecimento em uma temperatura eleva- da.

Esquema 4

<formula>formula see original document page 9</formula> Outros compostos da fórmula (I) podem ser preparados por mé- todos análogos àqueles descritos acima ou por métodos conhecidos indivi- dualmente.

Os compostos da fórmula (I) podem ser preparados separada- mente ou como bibliotecas de compostos que compreendem pelo menos 2, por exemplo, 5 a 1.000, compostos e, com mais preferência, 10 a 100 com- postos da fórmula (I). As bibliotecas de compostos podem ser preparadas por uma abordagem divisão e mistura combinatória ou por síntese paralela múltipla utilizando solução ou química em fase sólida, utilizando procedimen- tos conhecidos pelos versados na técnica.

Durante a síntese dos compostos da fórmula (I), os grupos fun- cionais lábeis nos compostos intermediários, por exemplo, grupos hidróxi, carbóxi e amino, podem ser protegidos. Os grupos de proteção podem ser removidos em qualquer estágio na síntese dos compostos da fórmula (I) ou podem estar presentes no composto final da fórmula (I). Uma discussão a- brangente das maneiras nas quais os diversos grupos funcionais lábeis po- dem ser protegidos e dos métodos de clivagem dos derivados protegidos resultantes é fornecida, por exemplo, em Protective Groups in Organic Che- mistry, T. W. Greene and P.G.M. Wuts, (1991) Wiley-lnterscience, New York, 2nd edition.

Outros compostos da fórmula (I) podem ser preparados por mé- todos análogos àqueles descritos acima ou por métodos conhecidos indivi- dualmente.

Durante a síntese dos compostos da fórmula (I), os grupos fun- cionais lábeis nos compostos intermediários, por exemplo, grupos hidróxi, carbóxi e amino, podem ser protegidos. Os grupos de proteção podem ser removidos em qualquer estágio na síntese dos compostos da fórmula (I) ou podem estar presentes no composto final da fórmula (I). Uma discussão a- brangente das maneiras nas quais os diversos grupos funcionais lábeis po- dem ser protegidos e dos métodos de clivagem dos derivados protegidos resultantes é fornecida, por exemplo, em Protective Groups in Organic Che- mistry, T.W. Greene and P.G.M. Wuts, (1991) Wiley-lnterscience, New York, 2nd edition.

Quaisquer novos intermediários, tais como aqueles definidos acima, podem ser úteis na síntese de compostos da fórmula (I) e, portanto, também estão incluídos dentro do escopo da invenção, bem como sais ou derivados protegidos desses.

Como indicado acima, os compostos da fórmula (I) são úteis como agonistas GPR119, por exemplo, no tratamento e/ou profilaxia de obe- sidade e diabetes. Para tal uso os compostos da fórmula (I) serão geralmen- te administrados sob a forma de uma composição farmacêutica.

A invenção também proporciona um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como um produto farmacêutico.

A invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I), em combinação com um veí- culo farmaceuticamente aceitável. De preferência, a composição é compre- endida de um veículo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade tera- peuticamente eficaz não-tóxica de um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Ademais, a invenção também proporciona uma composição far- macêutica para o tratamento de doenças ao modular GPR119, resultando no tratamento profilático ou terapêutico de obesidade, por exemplo, regulação da saciedade, ou para o tratamento de diabetes, que compreende um veícu- lo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz não-tóxica do composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel do mesmo. As composições farmacêuticas podem compreender opcional- mente outros ingredientes terapêuticos ou adjuvantes. As composições in- cluem composições adequadas para administração oral, retal, tópica e pa- renteral (inclusive subcutânea, intramuscular, e intravenosa), embora a via mais adequada em qualquer caso determinado irá depender do hospedeiro particular, e natureza e gravidade das condições para as quais o ingrediente ativo é administrado. As composições farmacêuticas podem ser convenien- temente apresentadas em forma de dosagem unitária e preparadas por meio de qualquer um dos métodos conhecidos na técnica de farmácia.

Na prática, os compostos da fórmula (I), ou sais farmaceutica- mente aceitáveis desses, podem ser combinados como o ingrediente ativo em mistura íntima com um veículo farmacêutico de acordo com técnicas de mistura farmacêutica convencionais. O veículo pode tomar uma ampla varie- dade de formas dependendo da forma de preparação desejada para a admi- nistração, por exemplo, oral ou parenteral (inclusive intravenosa).

Desse modo, as composições farmacêuticas podem ser apre- sentadas como unidades distintas adequadas para administração oral, tais como, cápsulas, drágeas ou comprimidos que contêm uma quantidade pre- determinada do ingrediente ativo. Ademais, as composições podem ser a- presentadas como um pó, como grânulos, como uma solução, como uma suspensão em um líquido aquoso, como um líquido não-aquoso, como uma emulsão óleo em água, ou como uma emulsão líquida água em óleo. Além das formas de dosagem comuns especificadas acima, o composto da fórmu- la (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, também pode ser administrado por meios de liberação controlada e/ou dispositivos de entrega. As composições podem ser preparadas por meio de qualquer um dos méto- dos de farmácia. Em geral, tais métodos incluem uma etapa de colocar o ingrediente ativo em associação com o veículo que constitui um ou mais in- gredientes necessários. Em geral, as composições são preparadas ao mistu- rar uniforme e intimamente o ingrediente ativo com veículos líquidos ou veí- culos sólidos finamente divididos ou ambos. O produto pode ser, então, con- venientemente conformado na apresentação desejada. Os compostos da fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitá- veis desses, também podem ser incluídos nas composições farmacêuticas em combinação com um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos.

O veículo farmacêutico empregado pode ser, por exemplo, um sólido, líquido, ou gás. Exemplos de veículos sólidos incluem lactose, terra alba, sucrose, talco, gelatina, agar, pectina, acácia, estearato de magnésio, e ácido esteárico. Exemplos de veículos líquidos são xarope, óleo de amen- doim, óleo de oliva, e água. Exemplos de veículos gasosos incluem dióxido de carbono e nitrogênio.

Qualquer meio farmacêutico conveniente pode ser empregado na preparação das composições para forma de dosagem oral. Por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizantes, conservantes, agentes corantes, e similares podem ser usados para formar preparações líquidas orais, tais como, suspensões, elixires e soluções; enquanto os veículos, tais como, amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de gra- nulação, lubrificantes, aglutinantes, agentes desintegrantes, e similares po- dem ser usados para formar preparações sólidas orais, tais como, pós, cáp- sulas e comprimidos. Devido a sua facilidade de administração, comprimidos e cápsulas são as unidades de dosagem oral preferidas de acordo com os veículos farmacêuticos sólidos empregados. Opcionalmente, os comprimidos podem ser revestidos por técnicas-padrão aquosas ou não-aquosas.

Um comprimido que contém a composição dessa invenção pode ser preparado por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes auxiliares ou adjuvantes. Os comprimidos podem ser pre- parados por compressão, em uma máquina adequada, sendo que o ingredi- ente ativo está sob a forma de fluxo livre tal como pó ou grânulos, opcional- mente misturado com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, agente ativo de superfície ou dispersante. Os comprimidos moldados podem ser feitos por moldagem em uma máquina adequada, uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte. Cada comprimido contém, de preferência, de cerca de 0,05 mg a cerca de 5 g do ingrediente ativo em cada drágea ou cápsula contendo, de preferência, de cerca de 0,05 mg a cerca de 5 g do ingrediente ativo.

Por exemplo, a formulação destinada para a administração oral a humanos pode conter de cerca de 0,5 mg a cerca de 5 g do agente ativo, misturado com uma quantidade apropriada e conveniente de material de ve- ículo que pode variar de cerca de 5 a cerca de 95 porcento da composição total. As formas de dosagem unitária irão conter geralmente entre cerca de 1 mg a cerca de 2 g do ingrediente ativo, tipicamente 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg, ou 1000 mg.

As composições farmacêuticas da presente invenção adequadas para administração parenteral podem ser preparadas como soluções ou suspensões dos compostos ativos em água. Um tensoativo adequado pode ser incluído, tal como, por exemplo, hidroxipropilcelulose. As dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, e mis- turas desses em óleos. Ademais, um conservante pode ser incluído para impedir o crescimento prejudicial de micro-organismos.

As composições farmacêuticas da presente invenção adequadas para uso injetável incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis. Ade- mais, as composições podem estar sob a forma de pós estéreis para a pre- paração extemporânea de tais soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em todos os casos, a forma injetável final deve ser estéril e deve ser efeti- vamente fluida para fácil seringabilidade. As composições farmacêuticas de- vem ser estáveis sob as condições de fabricação e armazenamento; desse modo, de preferência, devem ser protegidas contra a ação contaminante de micro-organismos, tais como, bactérias e fungos. O veículo pode ser um sol- vente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido), óleos vege- tais e misturas adequadas dos mesmos.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem estar sob uma forma adequada para uso tópico, tal como, por exemplo, um aerossol, creme, pomada, loção, pó de talco, ou similares. Ademais, as composições podem estar sob uma forma adequada para uso em dispositi- vos transdérmicos. Essas formulações podem ser preparadas, utilizando um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, através de métodos de processamento convencionais. Como um exemplo, um creme ou pomada é preparado ao misturar o material hidrofílico e água, juntamente com cerca de 5% em peso a cerca de 10% em peso do compos- to, para produzir um creme ou pomada com uma consistência desejada.

As composições farmacêuticas dessa invenção podem estar sob uma forma adequada para administração retal onde o veículo é um sólido. Prefere-se que a mistura forme supositórios em dose única. Os veículos a- dequados incluem manteiga de cacau e outros materiais comumente usados na técnica. Os supositórios podem ser convenientemente formados primeiro ao misturar a composição com o(s) veículo(s) amaciado(s) ou fundido(s) se- guido por resfriamento e conformação em moldes. Além dos ingredientes de veículo anteriormente mencionados, as formulações farmacêuticas descritas acima podem incluir, conforme adequado, um ou mais ingredientes de veícu- lo adicionais, tais como, diluentes, tampões, agentes flavorizantes, aglutinan- tes, agentes ativos de superfície, espessantes, lubrificantes, conservantes (inclusive antioxidantes) e similares. Ademais, outros adjuvantes podem ser incluídos para tornar a formulação isotônica com o sangue do receptor desti- nado. As composições que contêm um composto da fórmula (I), ou sais far- maceuticamente aceitáveis desse, também podem ser preparadas em forma concentrada de pó ou líquido.

Geralmente, os níveis de dosagem na ordem de 0,01 mg/kg a cerca de 150mg/kg de peso corporal por dia são úteis no tratamento das condições indicadas acima, ou alternativamente, cerca de 0,5mg a cerca de 7g por paciente por dia. Por exemplo, a obesidade pode ser tratada de ma- neira eficaz por meio da administração de cerca de 0,01 a 50mg do compos- to por quilograma de peso corporal por dia, ou alternativamente cerca de 0,5mg a cerca de 3,5g por paciente por dia.

Entende-se, entretanto, que o nível de dose específico para qualquer paciente particular irá depender de uma variedade de fatores inclu- sive a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administra- ção, via de administração, taxa de excreção, combinação de fármaco e a gravidade da doença particular submetida à terapia.

Os compostos da fórmula (I) podem ser usados no tratamento de doenças ou condições onde GPR119 exerce uma função.

Desse modo, a invenção também proporciona um método para o tratamento de uma doença ou condição onde GPR119 exerce uma função que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo ,necessitado des- se, uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (I), ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo. As doenças ou condições onde GPR119 exerce uma função incluem obesidade e diabetes. No contexto do presente pedido, o tratamento de obesidade pretende incluir o tratamento de doenças ou condições, tal como, obesidade e outros distúrbios alimentares associa- dos à ingestão excessiva de alimentos, por exemplo, pela redução de apetite e peso corporal, manutenção da redução de peso e prevenção de recorrên- cia e diabetes (inclusive diabetes Tipo 1 e Tipo 2, tolerância à glicose dimi- nuída, resistência à insulina e complicações diabéticas, tais como, neuropa- tia, nefropatia, retinopatia, cataratas, complicações cardiovasculares e disli- pidemia). E o tratamento de pacientes que possuem uma sensibilidade a- normal a gorduras ingeridas resultando em dispepsia funcional. Os compos- tos da invenção também podem ser usados para o tratamento de doenças metabólicas, tais como, síndrome metabólica (síndrome X), tolerância à gli- cose diminuída, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, bai- xos níveis de HDL e hipertensão.

Os compostos da invenção podem oferecer vantagens sobre os compostos que atuam através de mecanismos diferentes para o tratamento dos distúrbios mencionados acima, pois esses podem oferecer proteção de célula-beta, cAMP aumentado e secreção de insulina e também esvazia- mento gástrico retardado.

Os compostos da invenção também podem ser usados para tra- tar condições caracterizadas por baixa massa óssea, tal como, asosteopeni- a, osteoporose, artrite reumatóide, osteoartrite, doença periodontal, perda óssea alveolar, perda óssea devido à osteotomia, perda óssea idiopatica na infância, doença de Paget, perda óssea devido a câncer metastático, lesões osteolíticas, curvatura da coluna vertebral e perda de altura.

A invenção também proporciona um método para a regulação de saciedade que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo ,necessitado desse, uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

A invenção também proporciona um método para o tratamento de obesidade que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo ,necessitado desse, uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

A invenção também proporciona um método para o tratamento de diabetes, inclusive diabetes Tipo 1 e Tipo 2, particularmente diabetes tipo 2, que compreende uma etapa de administrar a um paciente,necessitado desse, uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

A invenção também proporciona um método para o tratamento de síndrome metabólica (síndrome X), tolerância à glicose diminuída, hiperli- pidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, baixos níveis de HDL e hipertensão que compreende uma etapa de administrar a um paciente, ne- cessitado desse, uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

A invenção também proporciona um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de uma condição, conforme definido acima.

A invenção também proporciona o uso de um composto da fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma condição, conforme definido acima.

Nos métodos da invenção o termo "tratamento" inclui tanto tra- tamento terapêutico como profilático.

Os compostos da fórmula (I) podem apresentar propriedades vantajosas comparadas com agonistas GPR119 conhecidos, por exemplo, os compostos podem apresentar potência ou estabilidade aumentada, ou solubilidade aumentada, desse modo, aprimorando-se as propriedades de absorção e biodisponibilidade, ou outras propriedades vantajosas para com- postos que serão usados como produtos farmacêuticos.

Os compostos da fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitá- veis desses, podem ser administrados separadamente ou em combinação com um ou mais outros compostos terapeuticamente ativos. Os outros com- postos terapeuticamente ativos podem servir para o tratamento da mesma doença ou condição que os compostos da fórmula (I) ou uma doença ou condição diferente. Os compostos terapeuticamente ativos podem ser admi- nistrados de maneira simultânea, seqüencial ou separada.

Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados com ou- tros compostos ativos para o tratamento de obesidade e/ou diabetes, por exemplo, insulina e análogos de insulina, inibidores da Iipase gástrica, inibi- dores da Iipase pancreática, sulfonil uréias e análogos, biguanidas, agonis- tas a2, glitazonas, agonistas PPAR-γ, agonistas PPAR-α/γ misturados, ago- nistas RXR, inibidores de oxidação de ácido graxo, inibidores de a- glucosidase, inibidores de dipeptidil peptidase IV, agonistas GLP-I1 por e- xemplo, análogos e miméticos de GLP-I, β-agonistas, inibidores da fosfodi- esterase, agentes de redução lipidica, inibidores da glicogênio fosforilase, agentes antiobesidade, por exemplo, inibidores da Iipase pancreática, anta- gonistas MCH-I e antagonistas CB-I (ou agonistas inversos), antagonistas de amilina, inibidores da lipoxigenase, análogos de somostatina, ativadores de glicoquinase, antagonistas de glucagon, agonistas de sinalização de insuli- na, inibidores de PTP1B, inibidores de gluconeogenese, agentes antilipolíti- cos, inibidores de GSK, agonistas do receptor de galanina, agentes anoréti- cos, agonistas do receptor CCK, leptina, fármacos antiobesidade serotonér- gicos/dopaminérgicos, inibidores de reabsorção, por exemplo, sibutramina, antagonistas de CRF, proteínas de ligação de CRF, compostos tiromiméti- cos, inibidores da aldose reductase, antagonistas do receptor de glucocorti- cóide, inibidores de NHE-I ou inibidores de sorbitol desidrogenase. A terapia de combinação que compreende a administração de um composto da fórmu- la (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um outro agente antiobesidade representa um aspecto adicional da invenção.

A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de obesidade em um mamífero, tal como, um humano, tal méto- do compreende administrar uma quantidade eficaz de um composto da fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente antiobesidade, a um mamífero necessitado desse.

A invenção também proporciona o uso de um composto da fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente antiobesidade para o tratamento de obesidade.

A invenção também proporciona o uso de um composto da fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na fabricação de um medicamento para uso em combinação com outro agente antiobesidade, para o tratamento de obesidade.

O composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel do mesmo, e o(s) outro(s) agente(s) antiobesidade pode/podem ser co- administrado(s) ou administrado(s) de maneira seqüencial ou separada.

A coadministração inclui a administração de uma formulação que inclui o composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o(s) outro(s) agente(s) antiobesidade, ou a administração simultâ- nea ou separada de formulações diferentes de cada agente. Quando os per- fis farmacológicos do composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o(s) outro(s) agente(s) antiobesidade permitirem isso, a coadministração dos dois agentes pode ser preferida.

A invenção também proporciona o uso de um composto da fór- mula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente antiobesidade na fabricação de um medicamento para o tratamento de obe- sidade.

A invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente antiobesidade, e um veículo farmaceuti- camente aceitável. A invenção também inclui o uso de tais composições nos métodos descritos acima. Os agonistas GPR119 são de uso particular em combinação com agentes antiobesidade de atuação central.

O outro agente antiobesidade para uso nas terapias de combi- nação de acordo com esse aspecto da invenção é, de preferência, um mo- dulador CB-I1 por exemplo, um antagonista CB-I ou agonista inverso. Exem- plos de moduladores CB-I incluem SR141716 (rimonabanto) e SLV-319 ((45)-(-)-3-(4-clorofenil)-N-metil-N-[(4-clorofenil)sulfonil]-4-fenil-4,5-diídro-1H- pirazol-1-carboxamida); bem como aqueles compostos descritos em EP576357, EP656354, WO 03/018060, WO 03/020217, WO 03/020314, WO 03/026647, WO 03/026648, WO 03/027076, WO 03/040105, WO 03/051850, WO 03/051851, WO 03/053431, WO 03/063781, WO 03/075660, WO 03/077847, WO 03/078413, WO 03/082190, WO 03/082191, WO 03/082833, WO 03/084930, WO 03/084943, WO 03/086288, WO 03/087037, WO 03/088968, WO 04/012671, WO 04/013120, WO 04/026301, WO 04/029204, WO 04/034968, WO 04/035566, WO 04/037823 WO 04/052864, WO 04/058145, WO 04/058255, WO 04/060870, WO 04/060888, WO 04/069837, WO 04/069837, WO 04/072076, WO 04/072077, WO 04/078261 e WO 04/108728, e as referências descritas nesses.

Outras doenças ou condições onde GPR119 foi sugerido para exercer uma função incluem aquelas descritas nos documentos WO 00/50562 e US 6.468;756, por exemplo, doenças cardiovasculares, hiperten- são, doenças respiratórias, anormalidades gestacionais, doenças gastroin- testinais, doenças imunes, distúrbios osteomusculares, depressão, fobias, ansiedade, transtornos de humor e doença de Alzheimer.

Todas as publicações, inclusive, porém sem caráter limitativo, patentes e pedido de patente citadas nesse relatório descritivo, estão aqui incorporados a título de referência como se cada publicação individual esti- vesse específica e individualmente indicada para ser aqui incorporada a títu- lo de referência como apresentado.

A invenção será descrita agora a título de referência aos seguin- tes exemplos que servem para propósitos ilustrativos e não devem ser con- siderados uma limitação do escopo da presente invenção. Exemplos

Materiais e métodos

A cromatografia em coluna foi realizada em SiO2 (40 a 63 ma- lha), exceto onde especificado em contrário. Os dados de LCMS foram obti- dos da seguinte maneira: coluna Atlantis 3μ Ci8 (3,0 X 20,0 mm, taxa de flu- xo = 0,85 mL/min) eluição com uma solução de H2O-CH3CN contendo 0,1% de HCO2H durante 6 min com detecção UV em 220 nm. Informações de gradiente: 0,0-0,3 min 100% de H2O; 0,3-4,25 min: Aumento para 10% de H20-90% de CH3CN; 4,25-4,4 min: Aumento para 100% de CH3CN; 4,4-4,9 min: Manter em 100% de CH3CN; 4,9-6,0 min: Retornar para 100% de H2O. Os espectros de massa foram obtidos utilizando uma fonte de ionização por "electropulverização" nos modos iônicos positivo (ES+) ou negativo (ES").

Abreviações e acrônimos; Ac: Acetil; DIPEA: N,N-Di- isopropiletilamina; EDCI: hidrocloreto de 1-(3-Dimetilaminopropil)-3- etilcarbodi-imida; Et: Etila; h: hora(s); HOBt: 1-Hidroxibenzotriazol; IH: Isso- hexano; /Pr: Isopropila; Me: Metila; RT: Tempo de retenção; THF: Tetra- hidrofurano; TMEDA: N5, N5, N, N-Tetrametiletilenodiamina.

A síntese dos compostos a seguir foi descrita em outro lugar nesse documento: N-Hidroxi-isobutiramidina: J. Org. Chem. 2003, 68, 7316- 7321; 3-Piperidin-4-ilpropan-1-ol: Tetrahedron 1999, 55, 11619-11639. To- dos os outros compostos estavam disponíveis junto a fontes comerciais. Preparação 1: 4-(3-Hidroxipropil)piperidina-1-carbonitrila

Uma pasta fluida de NaHCO3 (35,2 g, 0,42 mol) em H2O (70 mL) foi adicionada a uma solução agitada de 3-piperidin-4-ilpropan-1-ol (20,0 g, 0,14 mol) em CH2CI2 a O0C. Uma solução de BrCN (17,8 g, 0,17 mol) em CH2CI2 (19 mL) foi adicionada à reação durante 1 min, então a agitação con- tinuou a O0C durante 0,5 h. A reação foi então agitada a 20°C durante 2 h, antes de ser lavada com NaHCO3 aquoso saturado e salmoura. A solução de CH2Cb foi seca (MgSO4)1 filtrada e concentrada a vácuo para fornecer um óleo que foi dissolvido em uma pequena quantidade de CH2CI2, antes de ser filtrado através de um tampão de SiO2, eluição com EtOAc. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto do título: m/z (ES+)= 169,1 [M + H]+.

Preparação 2: 3-[1 -(3-lsopropil[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propan-1 -ol

ZnCI2 (Et2O a 1M, 145 ml_, 145 mmols) foi adicionado durante 20 min a uma solução agitada de 4-(3-hidroxipropil)piperidina-1-carbonitrila (Preparação 1, 20,3 g, 121 mmols) e N-hidroxi-isobutiramidina (14,8 g, 145 mmols) em EtOAc (290 mL) e THF (270 mL). Após duas horas, o precipitado branco que se formou foi coletado e lavado com THF-EtOAc (1:1, 50 mL). Esse precipitado foi dissolvido em EtOH (550 mL) e HCI a 12M (70 mL), en- tão a solução foi agitada com aquecimento a 70°C durante 16 h. O EtOH foi removido a vácuo, o restante foi diluído com H2O1 então o pH foi ajustado para 7 com NaHC03 sólido. A mistura foi extraída com EtOAc (3x), então os extratos combinados foram lavados com salmoura, antes de serem secos (MgSO4). A filtração e remoção do solvente forneceram o composto do título: m/z (ES+) = 254,1 [M + H]+.

Preparação 3: ácido 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}piridina-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 22</formula>

Uma solução agitada de metil 5-hidroxipiridina-2-carboxilato (726 mg, 4,7 mmols), 3-[1-(3-isopropil[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propan-1- ol (Preparação 2, 1,00 g, 4,0 mmols), e trifenil fosfina (1,24 g, 4,7 mmols) em THF foi tratada por gotejamento com di-isopropil azodicarboxilato (1,1 mL, 4,7 mmols). Após 16 h, a reação foi concentrada, então o resíduo foi dissolvido em EtOAc. A solução foi lavada com NaOH a 2M (2x) e salmoura, antes de ser seca (MgSO4)1 filtrada e concentrada. O restante foi então agi- tado com uma pequena quantidade de Et2O a 0°C. Após 40 min, a mistura foi filtrada, então o filtrado foi concentrado e o resíduo purificado por croma- tografia em coluna (EtOAc-CH2CI2, 3:7) para fornecer metil 5-{3-[1-(3- isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propóxi}piridina-2-carboxilato: m/z (ES+) = 389,00 [M + H]+. Uma mistura desse éster (1,34 g, 3,5 mmols), LiOH- H2O (1,45 g, 34,6 mmols), MeOH (26 mL), e H2O (7 mL) foi agitada a 20°C durante 16 h. O MeOH foi removido a vácuo, então mais H2O foi adicionada. A solução foi lavada com EtOAc (2x), antes de ser acidificada para pH 5 com HCI a 2M. O precipitado formado foi coletado e seco a vácuo para fornecer o composto do título: m/z (ES+) = 374,96 [M+ H]+.

Preparação 4: ácido 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}-3-metil-piridina-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 23</formula>

A condensação de Mitsunobu de 5-hidróxi-3-metilpiridina-2- carbonitrila (1,00 g, 7,5 mmols) com 3-[1-(3-isopropil[1,2,4]oxadiazol-5- il)piperidin-4-il]propan-1-ol (Preparação 2, 1,57 g, 6,2 mmols), por um proce- dimento similar àquele descrito na Preparação 3, forneceu 5-{3-[1-(3- isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propóxi}-3-metil-piridina-2- carbonitrila: m/z (ES+) = 370,01 [M + H]+. Uma solução dessa nitrila (500 mg, 1,4 mmol) em EtOH (8 mL) e NaOH a 2M (4 mL, 8,0 mmols) foi aquecida a 70°C durante 7 h, antes de ser agitada em temperatura ambiente durante 16 h. O EtOH foi removido sob pressão reduzida, então o restante foi diluído com H2O. A solução foi lavada com EtOAc (2x), antes de ser acidificada para pH 5 com HCI a 2M. A mistura foi extraída com EtOAc (2x), então os extra- tos combinados foram secos (MgSO4), filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH-CH2CI2 (1:9) para produzir o composto do título: RT = 3,31 min; m/z (ES+) = 389,02 [M + H]+. Preparação 5: 2-Bromo-5-{3-[1-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}piridina

<formula>formula see original document page 24</formula>

A condensação de Mitsunobu de 2-bromo-5-hidroxipiridina com 3-[1-(3-isopropil[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propan-1-ol (Preparação 2), por um procedimento similar àquele descrito na Preparação 3, forneceu o composto do título: RT = 4,01 min; m/z (ES+) = 409,0 [M+ H]+. Exemplo 1: ácido 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}-3-metil-piridina-2-carboxílico ((R)-2-hidróxi-1-metiletil)amida

<formula>formula see original document page 24</formula>

Uma solução de ácido 5-{3-[1-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)piperidin-4-il]propóxi}-3-metilpiridina-2-carboxílico (Preparação 4, 178 mg, 459 Mmols), EDCI (176 mg, 917 pmols), HOBt (141 mg, 917 pmols) e DIPEA (160 μL, 917 pmols) em THF anidroso (8 mL) foi agitada durante 30 min. (R)- 2-Aminopropan-1-ol (108 μΙ_, 1376 pmols) foi adicionado, então a agitação continuou durante 16 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzi- da, então CH2CI2 foi adicionado. A solução foi lavada com H2O a 2M de Na- OH, H2O e salmoura, antes de ser seca (MgSO4). A filtração, evaporação de solvente e cromatografia em coluna (EtOAc) forneceram o composto do títu- lo: δ (CDCI3) 1,25-1,41 (m, 11H), 1,47-1,62 (m, 3H), 1,81-1,96 (m, 4H), 2,77 (s, 3H), 2,93 (sept, 1H), 3,02-3,13 (m, 2H), 3,63-3,71 (m, 1H), 3,78-3,82 (m, 1H), 4,02-4,10 (m, 2H), 4,15-4,28 (m, 3H), 4,45-4,55 (br, 1H), 7,02 (d, 1H), 8,05-8,15 (m, 2H); RT = 3,49 min; m/z (ES+) = 446,00 [M+ H]+. Exemplo 2: ácido 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}piridina-2-carboxílico ((R)-2-hidróxi-1-metiletil)amida

<formula>formula see original document page 25</formula>

A condensação de ácido 5-{3-[1-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)piperidin-4-il]propóxi}-piridina-2-carboxílico (Preparação 3) com (R)-2- aminopropan-1-ol, empregando um procedimento similar àquele usado no Exemplo 1, forneceu o composto do título: m/z (ES+) = 432,03 [M + H]+. Exemplo 3: amida do ácido 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)piperidin-4-il]propóxi}-3-metilpiridina-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 25</formula>

A condensação de ácido 5-{3-[1-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)piperidin-4-il]propóxi}-3- metilpiridina-2-carboxílico (Preparação 4) com amônia, empregando um procedimento similar àquele usado no Exemplo 1, forneceu o composto do título: RT = 3,62 min; m/z (ES+) = 388,02 [M + H]+. Exemplo 4: 5-{3-[1-(3-lsopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propóxi}-2- metanossulfonilpiridina

<formula>formula see original document page 25</formula>

n-BuLi (322 μL de uma solução em hexanos a 2,5 M, 0,81 mmol) foi adicionado por gotejamento a uma solução agitada de 2-bromo-5-{3-[1-(3- isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4-il]propóxi}piridina (Preparação 5, 300 mg, 0,73 mmol) em THF anidroso (4 mL) a -78°C. Após 15 min, a rea- ção foi tratada com (MeS)2 (132 μL, 1,47 mmol), então a agitação continuou a -78°C durante mais 15 min. A reação foi então deixada aquecer a -50°C durante uma hora, antes de ser finalmente aquecida em temperatura ambi- ente. A mistura foi dividida entre HCl a 1M e EtOAc, então a fase orgânica foi lavada com NaOH a 1M e salmoura, antes de ser seca (MgSO4). A filtra- ção, evaporação de solvente e cromatografia em coluna (EtOAc-IH, 15% a 30%) forneceram 5-{3-[1-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]propóxi}-2-metilssulfanilpiridina. Uma solução agitada desse tioéter (75 mg, 0,2 mmol) em CH2Cb (10 mL) foi tratada com ácido 3-cloroperbenzóico (99 mg de 70% puro, 0,4 mmol). Após 40 min, a reação foi extinguida com Na2CO3 aquoso, então a fase orgânica foi separada e concentrada. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna (EtOAc-1H, 20% a 50%) para produzir o composto do título: RT = 3,55 min; m/z (ES+) = 409,18 [M+ H]+.

O composto a seguir também pode ser feito pelos processos descritos acima: 5-{(R)-3-[1-(3-Isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)piperidin-4- il]butóxi}-2-metanossulfonilpiridina

A atividade biológica dos compostos da invenção pode ser tes- tada nos seguintes sistemas de ensaio:

Ensaio Repórter de Levedura

Os ensaios repórteres baseados em célula de levedura forma anteriormente descritos na literatura (por exemplo, veja Miret J. J. et al, 2002, J. Biol. Chem., 277:6881-6887; Campbell R.M. et al, 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett, 9:2413-2418; King K. et al, 1990, Science, 250:121-123); WO 99/14344; WO 00/12704; e US 6.100.042). Em suma, as células de le- vedura foram elaboradas de modo que a levedura alfa-G endógena (GPAI) seja deletada e substituída por quimeras de proteína-G construídas utilizan- do múltiplas técnicas. Adicionalmente, o GPCR de levedura endógena, Ste3 foi deletado para permitir a expressão heteróloga de um GPCR de mamífero recomendado. Na levedura, os elementos da via de transdução de sinaliza- ção de feromônio, que são conservados em células eucarióticas (por exem- pio, a via quinase da proteína ativada por mitógeno), conduzem a expressão de Fusl. Ao colocar β-galactosidase (LacZ) sob o controle do promotor Fusl (Fuslp), um sistema foi desenvolvido de modo que a ativação do receptor resulte em uma leitura enzimática.

As células de levedura foram transformadas por uma adaptação do método de acetato de lítio descrito por Agatep et al, (Agatep, R. et al, 1998, Transformation of Saccharomyces cerevisiae by the Iithium aceta- te/single-stranded carrier DNA/polyethilene glycol (LiAc/ss-DNA/PEG) proto- col. Technical Tips Online, Trends Journals, Elsevier). Em suma, as células de levedura se desenvolveram durante a noite em placas de levedura tripto- na (YT). O DNA de cadeia simples do veículo (10ug), 2 pg de cada um dos dois plasmídeos de repórter FusIp-LacZ (um com o marcador de seleção URA e um com TRP), 2 pg de GPR119 (receptor humano ou de camundon- go) em vetor de expressão de levedura (2 ug de origem de replicação) e um tampão acetato de lítio/polietileno glicol/ TE foi pipetado em um tubo Eppen- dorf. O plasmídeo de expressão de levedura que contém o receptor/ sem controle de receptor possui um marcador LEU. As células de levedura foram inoculadas nessa mistura e a reação procede a 30°C durante 60min. As cé- lulas de levedura sofreram então choque térmico a 42°C durante 15min. As células foram então lavadas e espalhadas sobre as placas de seleção. As placas de seleção são meio de levedura definido sintético menos LEU, URA e TRP (SD- LUT). Após incubação a 30°C durante 2 a 3 dias, as colônias que se desenvolveram sobre as placas de seleção foram então testadas no ensaio LacZ.

Para realizar os ensaios enzimáticos fluorimétricos de β- galactosidase, as células de levedura que conduzem o receptor GPR119 humano ou de camundongo se desenvolveram durante a note em meio SD- LUT líquido a uma concentração insaturada (ou seja, as células ainda esta- vam se dividindo e ainda não tinham atingido a fase estacionária). Essas foram diluídas em meio fresco a uma concentração de ensaio ótima e 90μΙ de células de levedura adicionados a placas de poliestireno pretas de 96 poços (Costar). Os compostos, dissolvidos em DMSO e diluídos em 10% de solução DMSO a 10X a concentração, foram adicionados às placas e as pla- cas colocadas a 30°C durante 4 h. Após 4 h, o substrato da β-galactosidase foi adicionado a cada poço. Nesses experimentos, Fluoresceína di (β-D- galactopiranosida) foi usada (FDG)1 um substrato da enzima que libera fluo- resceína, permitindo uma leitura fluorimétrica. 20 μΙ por poço de 500 μΜ de FDG/2,5% de Triton X100 foram adicionados (o detergente foi necessário para tornar as células permeáveis). Após a incubação das células com o substrato durante 60 min, 20 μΙ por poço de carbonato de sódio a 1M foi adi- cionado para terminar a reação e aumentar o sinal fluorescente. As placas foram então lidas em um fluorímetro a 485/535nm.

Os compostos da invenção forneceram um aumento no sinal fluorescente de pelo menos ~ 1,5 vez aquele do sinal de fundo (isto é, o si- nal obtido na presença de 1% de DMSO sem o composto). Os compostos da invenção que forneceram um aumento de pelo menos 5 vezes podem ser preferidos.

Ensaio cAMP

Uma linhagem celular estável que expressa GPR119 humano recombinante foi estabelecida e essa linhagem celular pode ser usada para investigar o efeito dos compostos da invenção sobre níveis intracelulares de AMP cíclico (cAMP). As monocamadas celulares são lavadas com salina tamponada com fosfato e estimuladas a 37°C durante 30min com concentra- ções variadas de composto em tampão de estimulação mais 1% de DMSO. As células são então Iisadas e o teor de cAMP determinado utilizando o kit Perkin Elmer AIphaScreen(TM) (Amplified Luminescent Proximity Homoge- neous Assay) cAMP. Os tampões e condições de ensaio são conforme des- crito no protocolo do fabricante. Estudo de alimentação in vivo

O efeito dos compostos da invenção sobre o peso corporal e ingestão de alimentos e água pode ser examinado em ratos machos Spra- gue-Dawley com alimentação livre mantidos em iluminação em fase reversa. Os compostos do teste e compostos de referência são dosados por vias de administração adequadas (por exemplo, de maneira intraperitoneal ou oral) e as medidas tiradas durante as próximas 24 h. Os ratos são individualmente alojados em gaiolas de polipropileno com pisos de grade de metal em uma temperatura de 21 ± 4°C e 55 ± 20% de umidade. As bandejas de polipropi- leno com tampões são colocadas abaixo de cada gaiola para detectar qual- quer derramamento de comida. Os animais são mantidos sobre um ciclo cla- ro-escuro em fase reversa (luzes desligadas durante 8 h de 09,30-17,30 h) durante esse tempo o ambiente é iluminado por luz vermelha. Os animais possuem acesso livre a uma dieta em pó para ratos padrão e água de tornei- ra durante um período de aclimatação de duas semanas. A dieta fica contida em jarras de alimentação de vidro com tampas de alumínio. Cada tampa possui um orifício de 3 a 4 cm para permitir o acesso ao alimento. Os ani- mais, jarras de alimentação e garrafas de água são pesadas (até o mais próximo de 0,1 g) no início do período escuro. As jarras de alimentação e garrafas de água são subseqüentemente medidas 1, 2, 4, 6 e 24 h após ad- ministrar aos animais um composto da invenção e qualquer diferença signifi- cativa entre os grupos de tratamento em linha de base comparados com controles tratados com veículo.

Efeitos antidiabéticos de compostos da invenção em um modelo in-vitro de células beta pancreáticas (HIT-T15)

Cultura Celular

As células HIT-T15 (passagem 60) foram obtidas junto a ATCC, e foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fe- tal de bezerro e selenito de sódio a 30nM. Todos os experimentos foram fei- tos com células em menos que a passagem 70, de acordo com a literatura, que descreve propriedades alteradas dessa linhagem celular em números de passagem acima de 81 (Zhang HJ, Walseth TF, Robertson RP. Insulin se- cretion and cAMP metabolism in HIT cells. Reciprocai and serial passage- dependent relationships. Diabetes. 1989 Jan;38(l):44-8).

Ensaio cAMP

As células HIT-T15 foram semeadas em meio de cultura-padrão em placas de 96 poços em 100.000 células/0,1 ml/poço e cultivadas durante 24 h e o meio foi então descartado. As células foram incubadas durante 15 min em temperatura ambiente com 100 μl de tampão de estimulação (solu- ção salina tamponada Hanks, HEPES a 5 mM, IBMX a 0,5 mM, 0,1% de BSA, pH 7,4). Isso foi descartado e substituído por diluições de composto acima da faixa de 0,001, 0,003, 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30 μΜ em tam- pão de estimulação na presença de 0,5% de DMSO. As células foram incu- badas em temperatura ambiente durante 30 min. Então, 75 ul de tampão de lise (HEPES a 5 mM, 0,3% de Tween-20, 0,1% de BSA, pH 7,4) foram adi- cionados por poço e a placa foi agitada a 900 rpm durante 20 min. O materi- al particulado foi removido por centrifugação a 3000 rpm durante 5 min, en- tão as amostras foram transferidas em duplicata para placas de 384 poços, e processadas após as instruções do kit de ensaio Perkin Elmer AIphaScreen cAMP. Em suma, reações de 25 μΙ foram preparadas contendo 8μΙ de amos- tra, 5μΙ de mistura de grânulo aceitante e 12 μΙ de mistura de detecção, de modo que a concentração dos componentes de reação final seja igual àque- la estabelecida nas instruções do kit. As reações foram incubadas em tem- peratura ambiente durante 150 min, e a placa foi lida utilizando um instru- mento Packard Fusion. As medidas de cAMP foram comparadas com uma curva padrão de quantidades de cAMP conhecidas (0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100, 300, 1000 nM) para converter as leituras em quantidades de cAMP absolutas. Os dados foram analisados utilizando software XLfit 3.

Os compostos representativos da invenção foram obtidos para aumentar cAMP em um EC50 de menos de 10 μΜ. Os compostos que mos- tram um EC5O de menos de 1 μΜ no ensaio cAMP podem ser preferidos.

Ensaio de secreção de insulina

As células HIT-T15 são semeadas em meio de cultura padrão em placas de 12 poços em 106 células/1 ml/poço e cultivadas durante 3 dias e o meio é então descartado. As células são lavadas χ 2 com tampão Krebs- Ringer suplementado (KRB) contendo NaCI a 119 mM, KCl a 4,74 mM, Ca- Cl2 a 2,54 mM, MgSO4 a 1,19 mM, KH2PO4 a 1,19 mM, NaHCO3 a 25 mM, HEPES a 10mM em pH 7,4 e 0,1% de albumina sérica bovina. As células são incubadas com 1 ml de KRB a 37°C durante 30 min que é então descar- tado. Isso é seguido por uma segunda incubação com KRB durante 30 min, que é coletado e usado para medir os níveis de secreção de insulina basal para cada poço. As diluições de composto (0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 uM) são en- tão adicionadas a poços em duplicata em 1 ml de KRB, suplementado com glicose a 5,6 mM. Após 30 min de incubação a 37°C as amostras são remo- vidas para determinação de níveis de insulina. A medida de insulina é feita utilizando o kit ELISA Mercodia Rat insulin, seguindo as instruções do fabri- cante, com uma curva padrão de concentrações de insulina conhecidas. Pa- ra cada poço os níveis de insulina são corrigidos por subtração do nível de secreção basal da pré-incubação na ausência de glicose. Os dados são ana- lisados utilizando o software XLfit 3. Testes de Tolerância Oral à Glicose

Os efeitos dos compostos da invenção sobre a tolerância oral à glicose (GIc) foram avaliados em ratos machos Sprague-Dawley. O alimento foi retirado 16 h antes da administração de G1c e assim permaneceu duran- te o estudo. Os ratos tinham acesso livre a água durante o estudo. Um corte foi feito nas caudas dos animais, então o sangue (1 gota) foi removido para medida de níveis basais de G1c 60 min antes da administração da carga de G 1c. Então, os ratos foram pesados e oralmente dosados com o composto ou veículo de teste (20% de hidroxipropil-P-ciclodextrina aquosa) 45 min an- tes da remoção de uma amostra de sangue adicional e tratamento com a carga G1c (2 g kg"1 p.o.). As amostras de sangue foram então retiradas da ponta cortada da cauda 5, 15, 30, 60, 120, e 180 min após a administração de G1c. Os níveis de glicose no sangue foram medidos logo após a coleta utilizando um medidor de glicose comercialmente disponível (OneTouch® UItraTM junto à Lifescan). Os compostos representativos da invenção reduzi- ram estatisticamente a excursão de G1c em doses de ^ 10 mg kg"1.

Os efeitos dos compostos da invenção sobre a tolerância oral à glicose (G1c) também podem ser avaliados em camundongos machos C57B1/6 ou camundongos machos ob/ob. O alimento foi retirado 5 h antes da administração de G1c e assim permanece durante o estudo. Os camun- dongos tinham acesso livre a água durante o estudo. Um corte foi feito nas caudas dos animais, então o sangue (20 μΙ) foi removido para medida de níveis basais de G1c 45 min antes da administração da carga de G1c. En- tão, os camundongos foram pesados e oralmente dosados com o composto ou veículo de teste (20% de hidroxipropil-P-ciclodextrina aquosa) ou 25% de Gelucire aquoso 30 min antes da remoção de uma amostra de sangue adi- cional (20 μl) e tratamento com a carga G1c (2-5 g kg"1 p.o.). As amostras de sangue (20 μL) foram então retiradas 25, 50, 80, 120, and 180 min após a administração de G1c. 20 μL de amostras de sangue para medida de níveis de G1c são retirados da ponta cortada da cauda em micropipetas descartá- veis (Dade Diagnostics Inc., Puerto Rico) e a amostra adicionada a 480 μL de reagente de hemólise. Alíquotas em duplicata de 20 μL do sangue hemo- lisado diluído são então adicionadas a 180 μl de reagente glicose Trinders (método colorimétrico enzimático Sigma (Trinder)) em uma placa de ensaio de 96 poços. Após a mistura, as amostras são deixadas em temperatura ambiente durante 30 min antes de serem lidas contra padrões de G1c (ajus- te padrão combinado de glicose/nitrogênio de uréia Sigma).

Claims

1. Composto, da fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente acei- tável do mesmo: <formula>formula see original document page 33</formula> em que um entre X e Y é O e o outro é N; R1 é SO2R5, NR6R7, ou CONR6R7; R2 é hidrogênio ou metila; R3 é hidrogênio ou metila; R4 é C2-5 alquila; R5 é C1-3 alquila; R6 e R7 são, independentemente, hidrogênio , C1-4 alquila, que pode ser opcionalmente substituída por halo, hidróxi, C1-4 alcóxi-, arilóxi-, aril C1-4 alcóxi-, C1-4 alquilS(0)m-, C3-7 heterociclila, N(R8)2 ou -C(O)OR9; ou pode ser C3.7 cicloalquila, arila, heterociclila ou heteroarila, em que os grupos cícli- cos podem ser substituídos por um ou mais substituintes selecionados entre halo, C1-4 alquila, C1^ fluoroalquila, OR61 CN, SO2CH3, N(R8)2 e NO2; ou jun- tamente R6 e R7 podem formar um anel heterocíclico de 5 ou 6 membros opcionalmente substituído por hidróxi, C1-4 alquila ou C1.4 hidroxialquila e contém opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado entre O e NR8; R8 é, independentemente, hidrogênio ou C-m alquila; ou um gru- po N(R8)2 pode formar um anel heterocíclico de 4 a 7 membros que contém opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado entre O e NR8; R9 é hidrogênio ou C1-4 alquila; e m é O, 1 ou 2.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que X é O.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que Y é O.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1 é SO2R5.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que R1 é SO2CH3.

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1 é -CONR6R7.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que R6 é hidrogênio, Ci.3alquila, ou C2-3alquila substituída por hidróxi e R7 é hidrogênio.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que R6 é C1.3 alquila ou C2-3alquila substituída por hidróxi.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em que R6 é C2-3alquila substituída por hidróxi.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, em que R6 é 2-hidróxi etila ou 2- hidróxi-1 -metiletila.

11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações -1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R3 é hi- drogênio.

12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R3 é metila.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, em que R3 é metila e o estereocentro produzido possui a configuração-(f?).

14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações -1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 é C3^ alquila.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 é isopropila.

16. Composto da fórmula (I), de acordo com qualquer um dos Exemplos 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

17. Composição farmacêutica que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

18. Método para o tratamento de uma doença ou condição em que GPR119 exerce uma função que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo, necessitado do mesmo, uma quantidade eficaz de um com- posto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

19. Método para a regulação da saciedade que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo, necessitado do mesmo, uma quantidade eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

20. Método para o tratamento de obesidade que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo, necessitado do mesmo, uma quantidade eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

21. Método para o tratamento de diabetes que compreende uma etapa de administrar a um indivíduo, necessitado do mesmo, uma quantida- de eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindica- ções 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

22. Método para o tratamento de síndrome metabólica (síndrome X), tolerância à glicose diminuída, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hiper- colesterolemia, baixos níveis de HDL ou hipertensão que compreende uma etapa de administrar a um paciente, necessitado do mesmo, uma quantidade eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como um medicamento.

24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na fabri- cação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição, como definidos em qualquer uma das reivindicações 18 a 22.

25. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tra- tamento ou prevenção de uma doença ou condição, como definidos em qual- quer uma das reivindicações 17 a 21.