BRPI0718707A2

BRPI0718707A2 - Composição para aplicação em pele ou em mucosa

Info

Publication number: BRPI0718707A2
Application number: BRPI0718707-6A
Authority: BR
Inventors: Tadashi Seto; Takayuki Miyano; Kenichi Haruna; Takahiro Kurose
Original assignee: Rohto Pharma
Priority date: 2006-11-10
Filing date: 2007-11-09
Publication date: 2014-01-07
Also published as: GB2456476A8; GB2456476A; JPWO2008056786A1; GB0909307D0; RU2009122167A; US20100069323A1; CN101534863A; WO2008056786A1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÃO PARA APLICAÇÃO EM PELE OU EM MUCOSA".

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se a uma composição para aplicação à pele ou à mucosa que contem ácido algínico e/ou sais do mesmo, e que tem uma citotoxidez reduzida sobre as células da pele ou da mucosa. Além disso, a presente invenção se refere a um método para a redução da citoto- xidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo.

TÉCNICA ANTECEDENTE

O ácido algínico tem uma ação de se tornar um gel (mais visco- so) depois de ser parcialmente reticulado com um cátion divalente ou de Va- Iencia mais alta tal como um íon de Ca2+; já é conhecido que o ácido algínico pode ser aplicado como um componente para mucosa tal como a mucosa oftálmica, mucosa nasal e mucosa oral (ver o Documento de Patente 1). Também foi descoberto que quando uma formulação que contem o ácido algínico é aplicada à pele ou à mucosa, as pequenas quantidades do íon de Ca2+ que existem na pele ou na mucosa são constatadas com o ácido algíni- co e tornam a formulação em um gel (mais viscosa) sobre a pele ou a muco- sa, e são, por esse motivo úteis para melhorar a retenção da formulação no local da aplicação e para manter a ação produzida pelos ingredientes ativos.

Devido a pele e a mucosa, especificamente a mucosa são muito sensíveis a irritação e a toxidez, os componentes aplicados a elas são exigi- dos em ter baixa irritação e baixa toxidade. Com relação à propriedade de irritação, tem sido registrado que o ácido algínico não tem somente proprie- dades de baixa irritação, porém também o efeito de reduzir as propriedades de irritação de outros compostos (ver o Documento de Patente 2). Com rela- ção à citotoxidez, tem sido registrado que o sal de cálcio do ácido algínico exerce citotoxidez (ver o Documento de Patente 3). No entanto, a citotoxidez de outros sais do ácido algínico bem como do próprio ácido algínico, não foi ainda examinada suficientemente até o presente.

Recentemente, tem sido dada atenção crescente a segurança; desse modo é desejável prover uma composição para aplicação à pele ou à mucosa cuja citotoxidez seja reduzida tanto quanto possível.

Documento de Patente 1: Publicação de Pedido de Patente Ja- ponesa Deixada Em aberto No. 2002-332248

Documento de Patente 2: Publicação de Pedido de Patente Ja- ponesa Deixada Em aberto No. 2006-517200

Documento de Patente: Publicação de Pedido de Patente Japo- nesa Deixada Em aberto No. 2001-212223 DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO Problemas a serem resolvidos pela invenção O objetivo da presente invenção é o de prover uma composição

para aplicação à pele ou mucosa contendo ácido algínico e/ou sais do mes- mo, que tenha uma citotoxidez reduzida com relação à pele ou a mucosa, bem como uma segurança aumentada. Além disso, o objetivo da presente invenção é o de prover um método para a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo.

Meios para a Resolução dos Problemas

Como o resultado de estudos intensos com relação à solução dos problemas acima descritos, os presentes inventores encontraram o que se segue:

(i) Como os ácidos algínicos e/ou os sais dos mesmos conven-

cionais que são purificados a partir de entrançado de algas e semelhantes, e que sejam aceitáveis para compôs viventes, existem vários ácidos algínicos nos quais o peso molecular variam a partir de cerca de 380 até 1.000.000. O ácido algínico e/ou os sais do mesmo que compreendem uma fração baixo 25 peso molecular baixo que tenham um peso molecular de 3.500 ou menor existem em cerca de 7 até 20% dos mesmos com base em uma quantidade total (método de proporção do pico de área por GPC)

(ii) Uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso mo- lecular de 3.500 ou menos exerce menos citotoxidez sobre as células da

mucosa; no entanto, uma fração que tenha um peso molecular de mais do que 3.500 não exerce citotoxidez sobre as células da mucosa.

(iii) Através da seleção de ácido algínico e/ou dos sais do mes- mo, que compreendam substancialmente nenhuma fração de baixo peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos, e mistu- rando os mesmos a uma composição para a pele ou para a mucosa, a cito- toxidez da composição para aplicação à pele ou à mucosa pode ser reduzida 5 de forma marcante; por esse motivo, a segurança da mesma pode ser au- mentada.

A presente invenção foi completada por fazer outros melhora- mentos com base nessas descobertas.

Especificamente, a presente invenção se refere às composições que se seguem para a aplicação à pele ou mucosa:

Item 1-1: Uma composição para a aplicação à pele ou à mucosa que contenha ácido algínico e/ou os sais do mesmo, que não compreenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos.

Item 1-2: A composição para a aplicação a pele ou a mucosa de

acordo com o Item 1-1, na qual a proporção da fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos é de 2,5% ou menos, com base na quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais de ácido algínico e/ou sais do mesmo.

Item 1-3: A composição para a aplicação a pele ou a mucosa de

acordo com o Item 1-1, que contem o ácido algínico e/ou os sais do mesmo em de 0,001 até 20% em peso com base no peso total da composição.

Item 1-4: A composição para a aplicação a pele ou a mucosa de acordo com o Item 1-1, que é uma composição líquida.

Item 1-5: A composição para a aplicação a pele ou a mucosa de

acordo com o Item 1-1, que é uma composição oftálmica, uma composição otológica, uma composição oral, uma composição retal, uma composição vaginal, ou uma composição uretral.

Item 1-6: A composição para a aplicação a pele ou a mucosa de acordo com o Item 1-1, que é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olhos.

Além disso, a presente invenção se refere aos métodos que se seguem para a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou os sais do mesmo:

Item 2-1: Um método para a redução da citotoxidez do ácido al- gínico e/ou os sais do mesmo, que compreende a etapa da remoção de mo- do substancial de uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo.

Item 2-2: O método para a redução de acordo com o Item 2-1, no qual a etapa de remoção está removendo uma fração de baixo peso mo- lecular a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, de tal modo que 10 uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou me- nos seja de 2,5% ou menos com base em uma quantidade total ou uma fra- ção que tenha um peso molecular de 380 ou mais.

A presente invenção também se refere ao uso que se segue:

Item 3-1: Uso do ácido algínico e/ou de sais do mesmo que compreendam substancialmente uma fração de baixo peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para a fabricação de uma composição para a aplicação à pele ou à mucosa.

Item 3-2: O uso de acordo com o item 3-1, em que a composição para a aplicação à pele ou à mucosa tem uma citotoxidez reduzida.

Item 3-3: O uso de acordo com o item 3-1, em que a proporção

da fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos seja de 2,5% ou menos, com base em uma quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais de ácido algínico e/ou sais do mesmo.

Item 3-4: O uso de acordo com o item 3-1, em que o ácido algí-

nico e/ou de sais está contido em 0,001 até 20% em peso com base no peso total da composição para aplicação à pele ou à mucosa.

Item 3-5: O uso de acordo com o item 3-1, em que a composição para aplicação à pele ou à mucosa é uma formulação líquida.

Item 3-6: O uso de acordo com o item 3-1, em que a composição

para aplicação à pele ou à mucosa é uma composição oftálmica, composi- ção otológica, composição oral, composição retal, composição vaginal, ou composição uretral.

Item 3-7: O uso de acordo com o item 3-1, em que a composição para aplicação à pele ou à mucosa é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olho.

A presente invenção também se refere ao seguinte uso:

Item 4-1: Uso do Uso do ácido algínico e/ou de sais do mesmo que não compreendam substancialmente uma fração de baixo peso molecu- lar baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a in- dução de citotoxidez em uma composição para aplicação à pele ou à muco- sa.

Item 4-2: O uso de acordo com o item 4-1, em que a proporção da fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos seja de 2,5% ou menos, com base em uma quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais de ácido algínico e/ou sais do mesmo.

Item 4-3: O uso de acordo com o item 4-1, que é um uso para a fabricação de uma composição para a aplicação a pele ou à mucosa que tenha citotoxidez reduzida.

Item 4-4: O uso de acordo com o item 4-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição líquida.

Item 4-5: O uso de acordo com o item 4-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição é uma composição oftálmica, composição otológica, composição oral, composição retal, compo- sição vaginal, ou composição uretral.

Item 4-6: O uso de acordo com o item 4-1, em que a composição

para aplicação à pele ou à mucosa é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olho.

A presente invenção também se refere ao uso que se segue:

Item 5-1: Uso do ácido algínico e/ou de sais do mesmo que não compreendam substancialmente uma fração de baixo peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxidez composição para a aplicação à pele ou à mucosa, e para aumen- tar a retenção de um ingrediente ativo contido em uma composição para a aplicação à pele ou à mucosa.

Item 5-2: O uso de acordo com o item 5-1, em que a proporção da fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos seja de 2,5% ou menos, com base em uma quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais de ácido algínico e/ou sais do mesmo.

Item 5-3: O uso de acordo com o item 5-1, que é um uso para a fabricação de uma composição para a aplicação a pele ou à mucosa que tenha citotoxidez reduzida.

Item 5-4: O uso de acordo com o item 5-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição líquida.

Item 5-5: O uso de acordo com o item 5-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição é uma composição oftálmica, composição otológica, composição oral, composição retal, compo- sição vaginal, ou composição uretral.

Item 5-6: O uso de acordo com o item 5-1, em que a composição para aplicação à pele ou à mucosa é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olho.

A presente invenção também se refere ao uso que se segue do

ácido algínico e/ou dos sais do mesmo:

Item 6-1: Um ácido algínico e/ou sais do mesmo que não com- preenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citoto- xidez sobre a pele ou a mucosa.

Item 6-2: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 6-1, que compreende uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos seja de 2,5% ou menos em uma fração de 2,5% ou menos com base em uma quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais.

Item 6-3: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 6-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição líquida. Item 6-4: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 6-1, é uma composição oftálmica, composição otológica, composição oral, composição retal, composição vaginal, ou composição uretral.

Item 6-5: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 6-1, em que a composição para aplicação à pele ou à mucosa é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olho.

A presente invenção também se refere ao uso que se segue do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo:

Item 7-1: Um ácido algínico e/ou sais do mesmo que não com- preenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxidez sobre a pele ou a mucosa, e que aumente a retenção de um ingrediente ati- vo contido em uma composição para a aplicação à pele ou à mucosa.

Item 7-2: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 7-1, que compreende uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos seja de 2,5% ou menos em uma fração de 2,5% ou menos com base em uma quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais.

Item 7-3: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 7-1, em que a composição para a aplicação a pele ou à mucosa é uma composição líquida.

Item 7-4: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 7-1, é uma composição oftálmica, composição otológica, composição oral, composição retal, composição vaginal, ou composição uretral.

Item 7-5: O ácido algínico e/ou sais do mesmo de acordo com o item 7-1, em que a composição para aplicação à pele ou à mucosa é uma gota oftálmica ou uma lavagem de olho.

Efeitos da Invenção

Na composição para a aplicação a pele ou à mucosa da presen- te invenção a citotoxidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo é reduzi- da de forma marcante; desse modo ele pode ser usado com segurança para a mucosa, que é sensível a toxidez.

O ácido algínico e/ou sais do mesmo que é usado de forma con- vencional se precipita com facilidade em solução; por esse motivo isto é difí- cil de ser formulado. O ácido algínico e/ou sais do mesmo usado na presente 5 invenção podem suprimir a formação de precipitação. Desse modo, a com- posição para a aplicação à pele ou à mucosa da presente invenção também tem a vantagem de que ela é fácil de ser formulada quando comparada com o ácido algínico e/ou sais do mesmo que são usados de modo convencional.

Além disso, a composição para a aplicação à pele ou à mucosa 10 da presente invenção tem um efeito excelente de aumentar a viscosidade e melhorando a resistência do gel, através da ação do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo contido em entrar em contato com ambos os fluidos corpo- rais como fluido as transpiração e das lágrimas sobre a pele ou a mucosa. Desse modo, a composição para a aplicação à pele ou à mucosa da presen- 15 te invenção é útil pata impedir a indução de citotoxidez sobre a pele ou a mucosa, aumentando a retenção de um ingrediente ativo contido na compo- sição para a aplicação à pele ou à mucosa e manter a ação do ingrediente ativo.

O método para a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou 20 dos sais do mesmo da presente invenção proporciona ácido algínico e/ou dos sais do mesmo tendo a citotoxidez á uma célula da mucosa ou da pele; por esse motivo ele é útil para a provisão de ingredientes básicos que são misturados à composição para a aplicação à pele e à mucosa que tenham uma citotoxidez reduzida e uma segurança aumentada.

Melhor modo para a Execução da Invenção

1. Composição para a aplicação à pele ou à mucosa.

O ácido algínico é um polissacarídeo composto de ácido manu- rônico (que pode ser simplesmente referido como “M” a partir daqui, neste pedido de patente) e ácido gulurônico (que pode ser simplesmente referido como “G” a partir daqui, neste pedido de patente), e é um copolímero em bloco., no qual frações de homopolímero do ácido manurôico (frações MM), frações de homopolímero de ácido gulurônico (frações GG) e frações de áci- do manurônico e de ácido gulurônico dispostas de forma aleatória (frações MG) são ligadas de forma aleatória.

Na composição para a aplicação à pele ou a mucosa da presen- te invenção, é usado o ácido algínico ou um sal do mesmo que não compre- enda substancialmente frações de peso molecular que tenham um peso mo- lecular de 3.500 ou menos. “Ácido algínico que não compreenda substanci- almente frações de peso molecular que tenham um peso molecular de 3.500 ou menos” significa que um ácido algínico no qual uma fração baixa de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos é removi- da, e que não compreende uma fração de baixo peso molecular exceto uma fração que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos que não possa ser removida inteiramente. Mais especificamente, como um exemplo de um “á- cido algínico que não compreende substancialmente fração de peso molecu- lar que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos”, a proporção de um ácido algínico que tenha uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos (área do pico total correspondendo a um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos) com base em uma quantida- de total de uma fração tendo um peso molecular de 380 ou mais (área do pico total correspondendo a um peso molecular de 380 ou mais) (que pode ser simplesmente referida como um “teor de um peso molecular de 3.500 ou menos” aqui, em seguida) é de 2,5% ou menos, quando o método GPC é executado, como descrito abaixo.

Com base no ponto de vista da redução da toxidez com relação às células da pele ou da mucosa, a proporção de um peso molecular de 25 3.500 ou menos no ácido algínico usado na composição da presente inven- ção para a aplicação à pele ou à mucosa é de preferência de 0 até menos do que 2,0%, de mais preferência de 0 até menos do que 1.5%, de maior preferência de 0 até menos do que 1,0%. Em outras palavras, a proporção de uma fração que tenha um peso molecular de mais do que 3.500 (uma 30 fração de alto peso molecular) no ácido algínico usado na presente invenção é maior do que 97,5%, de preferência 98,0 até 100%, de mais preferência de

98,5 até 100%, de maior preferência de 99,0 até 100%, com base na quanti- dade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais.

Na presente invenção, o peso molecular do ácido algínico e a proporção de um peso molecular de 3.500 ou menos pode ser determinada através do método de cromatografia de permeação de gel (método GPC). As 5 condições específicas estão mostradas nos Exemplos de Referência.

Para o ácido algínico e/ou os sais do mesmo usados na presen- te invenção, a proporção da composição do ácido manurônico para o ácido gulurônico (proporção M/G; proporção molar) não está especificamente limi- tada. Por exemplo, o ácido algínico com uma proporção M/G que varie a par- 10 tir de 0,4 até 4,0 é amplamente usada. Quando menor a proporção M/G, fica mais fácil para a composição iniciar a formação do gel. Por esse motivo, é desejável que a proporção M/G seja de 2.5 ou menos, de preferência de 2.0 ou menos, der mais preferência de 1.6 ou menos, e de maior preferência de

1.0 ou menos a partir do ponto de vista da retenção melhorada dos ingredi- 15 entes farmacologicamente ativos nos locais de aplicação. Na presente in- venção, a proporção M/G é um valor calculado através da divisão do ácido algínico em unidades de bloco, fracionando as mesmas, e quantificando ca- da uma das mesmas; a proporção é determinada de forma específica de acordo com o método descrito em A. Haug et al., Carbohyd. Res. 32(1974), 20 p. 217-225.

No ácido algínico e/ou nos sais do mesmo usados na presente invenção, a proporção da fração MM, da fração GG e da fração MG, não está especificamente limitada, e pode ser selecionada de forma apropriada dependendo do uso ou da forma da composição para a aplicação a apele ou à mucosa.

Os sais do ácido algínico usados na presente invenção não es- tão especificamente limitados, contanto que a forma dos mesmos sejam sais do ácido algínico que não compreendam substancialmente frações de baixo peso molecular, que tenham um peso molecular de 3.500 ou menos, e que 30 sejam farmaceuticamente ou fisiologicamente aceitáveis. Os exemplos es- pecíficos dos sais do ácido algínico incluem o sal de sódio, sal de potássio, sal de trietanol amina, sal de amônio, e os semelhantes. Os sais do ácido algínico podem ser usados de forma isolada ou em qualquer combinação de dois ou mais tipos dos mesmos.

Nas composições para a aplicação à pele ou à mucosa da pre- sente invenção, um único tipo de ácido algínico e de sais do mesmo pode 5 ser usado ou quaisquer combinações de dois ou mais tipos do mesmo po- dem ser usadas, contanto que elas não compreendam substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos. De forma específica, o ácido algínico, o alginato de sódio e o al- ginato de potássio são usados de preferência na presente invenção devido a 10 que eles são solúveis em água. A partir do ponto de vista do alcance efetivo do efeito da presente invenção, preparação fácil e os semelhantes, o ácido algínico é especificamente de preferência.

O ácido algínico e/ou os sais do mesmo que tenha a faixa de peso molecular acima pode ser preparado através da remoção de uma fra- ção que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos, através da filtragem sobre gel do ácido algínico e/ou os sais do mesmo disponíveis, ou de ácido algínico e/ou os sais do mesmo purificados a partir de entrançados de algas de acordo com um método convencional e os semelhantes. De forma alter- nativa, o ácido algínico e/ou os sais do mesmo que tenham a faixa de peso molecular acima podem ser preparados através da adição de ácido algínico e/ou os sais do mesmo disponíveis, ou de ácido algínico e/ou os sais do mesmo purificados a partir de entrançados de algas de acordo com um mé- todo convencional para uma solução com uma polaridade mais baixa do que aquela da água, e recolhendo o depósito gerado. Os exemplos específicos de soluções com a polaridade mais baixa do que aquela da água incluem os alcoóis inferiores tais como o metanol e o etanol, solventes orgânicos tais como acetona e as misturas líquidas dos mesmos com água.

Quando o ácido algínico e/ou os sais do mesmo, úteis na pre- sente invenção são purificados a partir de entrançados de algas, os exem- pios de entrançados de algas usados como os materiais incluem Lessonia nigrescens do Chile, Lessonia flavicans so Chile, Macrocystis pyrifera da Costa Oeste, Ecklonia maxima da África do Sul, Durvillaea potatorum da Tasmânia, Ascophyllum nodosum da Europa do Norte, Laminaria hyperbo- rea da Europa do Norte, Laminaria digitata da Europa do Norte, ou os seme- lhantes.

Na composição para a aplicação na pele ou na mucosa da pre- sente invenção, a proporção de mistura da fração de ácido algínico não está especificamente limitada, e pode ser selecionada de forma apropriada de- pendendo dos tipos de mucosa aplicada, a forma da composição para a a- plicação a pele ou à mucosa, e os semelhantes. Especificamente, a propor- ção de mistura da fração do ácido algínico (conversão em peso do ácido al- gínico) é usualmente de 0,001 até 20% em peso, de preferência de 0,005 até 10% em peso, com base em uma quantidade total da composição para aplicação à pele ou à mucosa. Especificamente a proporção de mistura da fração do ácido algínico (conversão em peso do ácido algínico) para cada utilização da composição para aplicação à pele ou à mucosa é como se se- gue:

Quando a composição for uma composição oftálmica, ela é usu- almente de 0,001 até 1% em peso, de preferência de 0,005 até 1% em peso, de mais preferência de 0,01 até 0,5% em peso, de maior preferência de 0,01 até 0,2% em peso;

Quando a composição for uma composição nasal, ela é usual-

mente de 0,001 até 10% em peso, de preferência de 0,01 até 5% em peso, de mais preferência de 0,05 até 1% em peso;

Quando a composição for uma composição oral, ela é usualmen- te de 0,001 até 20% em peso, de preferência de 0,01 até 10% em peso, de mais preferência de 0,01 até 5% em peso;

Quando a composição for uma composição retal, vaginal ou ure- tral, ela é usualmente de 0,001 até 10% em peso, de preferência de 0,005 até 5% em peso, de mais preferência de 0,01 até 2% em peso;

Quando a composição for uma composição dérmica, ela é usu- almente de 0,001 até 20% em peso, de preferência de 0,01 até 10% em pe- so, de mais preferência de 0,01 até 5% em peso.

A composição para aplicação à pele ou à mucosa da presente invenção pode conter ingredientes ativos (ingredientes farmacologicamente ativos, ingredientes fisiologicamente ativos ou os semelhantes) além do áci- do algínico e/ou dos sais do mesmo acima. Os exemplos de tais ingredientes incluem, porem não estão limitados a, descongestionantes, fármacos para a 5 modulação dos músculos oculares, fármacos anti-inflamatórios ou adstrin- gentes, fármacos antialérgicos, vitaminas, amino ácidos, fármacos antibacte- rianos ou desinfetantes, sacarídeos, polímeros ou os derivados dos mes- mos, celulose ou os derivados da mesma, anestésicos locais, fármacos anti- glaucoma e fármacos anti-catarata. Os ingredientes farmacologicamente 10 ativos e os ingredientes fisiologicamente ativos usados de preferência na presente invenção incluem os ingredientes que se seguem:

Descongestionantes, por exemplo, fármacos α-adrenérgicos, tais como epinefrina, cloridrato de epinefrina, cloridrato de efedrina, cloridrato de oximetazolina, cloridrato de tetraídrozolina, cloridrato de nafazolina, cloridra- 15 to de epinefrina, cloridrato de metilefedrina, bitartarato de epinefrina, nitrato de nafazolina ou os semelhantes, todos os quais podem estar tanto na forma d, forma I ou na forma dl;

Fármacos para a modulação dos músculos oculares: por exem- plo, inibidor de colinesterase com centros ativos similares aquele da acetilco- lina, tais como metil sulfato de neostigmina, tropicamida, helenieno, sulfato de atropina ou os semelhantes;

Fármacos anti-inflamatórios ou adstringentes: por exemplo, sul- fato de zinco, Iactato de zinco, alantoína, ácido ε-aminocapróico, indometa- cina, cloreto de lisozima, nitrato de prata, prenoprofeno, sulfonato de azuleno 25 de sódio, glicirizinato de dipotássio, glicirizinato de amônio, diclofenaco de sódio, bromofenaco de sódio, cloreto de berberina, sulfato de berberina ou os semelhantes;

Fármacos antialérgicos: por exemplo, levocabastina, amlexanox, ibudilast, tazanolast, tranilast, isotipendil, difeterol, triprolidina, tripelennami- na, tonzilamina, mebidrolina, fenetazina, oxatomida, suplatast, cromoglicato de sódio, pemirolast de potássio, ou os semelhantes;

Vitaminas: por exemplo, acetato de retinol, palmitato de retinol, cloridrato de piridoxina, dinucleotídio de flavina de sódio adenina, fosfato de piridoxal, cianocobalamina, pantotenato de cálcio, pantotenato de sódio, áci- do ascórbico, acetato de tocoferol, nicotinato de tocoferil, sucinato de tocofe- ril, sucinato de cálcio tocoferil, derivados da ubiquinona, ou os semelhantes;

5 Amino ácidos, por exemplo, ácido aminoetil sulfônico (taurina),

ácido glutâmico, creatinina, aspartato de sódio, aspartato de potássio, aspar- tato de magnésio, aspartato de magnésio e de potássio, ácido glutâmico, glutamato de sódio, glutamato de magnésio, ácido ε-aminocapróico, glicina, alanina, arginina, lisina, γ-ácido aminobutírico, ácido γ-amino valérico, sulfato 10 de condroitina de sódio ou os semelhantes, todos os quais podem estar na forma d, forma I ou na forma dl;

Fármacos antibacterianos ou desinfetantes: por exemplo, alquil- poliaminoetilglicina, cloramfenicool, sulfametoxazola, sulfisoxazola, sulfame- toxazola sódio, sulfisoxazola dietanolamina, sulfisoxazola monoetanolamina, sulfisomezola de sódio, sulfisomidina sódio, ofloxacin, norfloxacin, Ievofloxa- cin, cloridrato de lomefloxacina, aciclovir ou os semelhantes;

Sacarídeos: por exemplo, monossacarídeos, dissacarídeos, e especificamente glicose, maltose, trealose, sacarose, ciclodextrina, xilitol, sorbitol, manitol ou os semelhantes;

Polímeros ou os derivados dos mesmos: por exemplo, goma a-

rábica, goma caraia, goma xântano, goma caroba, goma guar, goma guáia- co, semente de marmelo, goma damar, goma tragacanto, goma benzoína, goma de alfaroba, caseína, agar, dextrina, dextrano, carragenana, gelatina, colágeno, pectina, amido, ácido poligalacturônico, quitina e derivados dos 25 mesmos, quitosana e derivados dos mesmos, elastina, heparina, heparinoi- de, sulfato de heparina, sulfato de heparano, ácido hialurônico, sulfato de condroitina, ceramida, polivinil álcool (completamente ou parcialmente sapo- nificado), polivinil pirrolidona, metacrilato de polivinil, ácido poliacrílico, polí- mero de carboxivinil, polietilenoimina, ácido ribonucléico, ácido dioxirribonu- 30 clêico, macrogol e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis ou os seme- lhantes;

Celulose e os derivados da mesma: por exemplo, etil celulose, hidroxietil celulose, hidroxipropil celulose, hydroxipropilmetil celulose, metil celulose, carboximetil celulose, sódio carboximetil celulose, carboxietil celu- lose, nitro celulose ou os semelhantes;

Anestésicos locais: por exemplo, cloridrato de procaína, cloridra- 5 to de lidocaína ou os semelhantes;

Fármacos antiglaucoma: por exemplo, isopropil unoprostona, epinefrina, cloridrato de apraclonidina, cloridrato de carteolol, cloridrato de dipivefrina, cloridrato de dorzolamida, cloridrato de pilocarpina, cloridrato de bunazosina, cloridrato de bupranolol, cloridrato de betaxolol, cloridrato de 10 befunolol, cloridrato de carbachol, cloridrato de levobunolol, dipivalato de epinefrina, brometo de distigmina, nipradiolol, maleato de timolol, Iatanoprost ou os semelhantes;

Fármacos anti-catarata: por exemplo, glutaciona, piremixina e dissulfonato de sódio 5,12-di-hidro azapentaceno.

As proporções de mistura de cada um dos ingredientes são co-

nhecidas no campo das formulações para aplicação à pele, formulações pa- ra aplicação à mucosa, e outras. Desse modo, as proporções de misturação dos ingredientes acima na composição para aplicação na pele ou na mucosa da presente invenção serão selecionadas de forma apropriada dependendo 20 da forma de dosagem da referida composição para a aplicação à pele ou à mucosa, dos tipos de ingredientes farmacologicamente ativos ou fisiologica- mente ativos, e semelhantes. Por exemplo, as proporções de mistura de in- gredientes farmacologicamente ativos ou ingredientes fisiologicamente ati- vos podem ser selecionadas a partir de uma faixa de cerca de 0,0001 até 25 30% em peso, de preferência de cerca de 0,001 até 10% em peso com base em uma quantidade total da composição para a aplicação à pele ou à muco- sa.

A composição para a aplicação à pele ou à mucosa da presente invenção pode compreender um tipo de componente ou aditivo, ou mais do que um tipo de componente ou de aditivo em combinação, que sejam sele- cionados de forma apropriada a partir de diversos componentes e aditivos dependendo do uso ou da forma da referida composição de acordo com os dispositivos convencionais, contanto que o efeito da invenção não seja pre- judicado. Os exemplos de tais componentes ou aditivos incluem os veículos geralmente usados para a preparação de formulações semissólidas ou líqui- das (solventes aquosos ou bases aquosas ou oleosas, etc.) e uma variedade 5 de aditivos tais como surfatantes, preservativos, fármacos desinfetantes ou antibacterianos, ajustadores de pH, agentes de tonicidade, agentes de que- lação, agentes de tamponamento e estabilizadores.

Os exemplos de componentes típicos usados nas composição para a aplicação à pele ou à mucosa da presente invenção incluem, porem não estão limitados a:

Veículos: solvente aquoso tal como a água e etanol hídrico; Surfatantes: por exemplo, surfatantes não iônicos tais como po- Iioxietileno (a partir daqui, referido como POE) - polioxipropileno, (a partir daqui, referido como POP), copolímeros em bloco (por exemplo, poloxâmero 407), adutos de etileno diamina de copolímeros em bloco de POE e POP; por exemplo, poloxamina), monooleato de sorbitano de POE, óleo de rícino hidrogenado de POE (por exemplo, óleo de rícino hidrogenado PO- E(60), e estearato de pólioxila; surfatante anfotérico do tipo da glicina tais como alquil diaminoetil glicina; surfatantes catiônicos tais como sal de amô- nio quaternário de alquila )por exemplo, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzalcônio) ou semelhantes, com o número entre parênteses representan- do o número de moles adicionado;

Preservativos, desinfetantes ou fármacos antibacterianos; por exemplo,cloridrato de alquildiaminoetil glicina, benzoato de sódio, etanol, 25 cloreto de benzalcônio, cloreto de benzaltonio, gliconato de clorexidina, clo- robutanol, ácido sórbico, sorbato de potássio, deidroacetato de sódio, paraí- droxi benzoato de metil, paraídroxi benzoato de etil, paraídroxi benzoato de propil, paraídroxi benzoato de butil, sulfato de oxiquinolina, álcool de fenetil, álcool de benzil, biquanida (como por exemplo, poliehametileno de biguani- 30 da), Glokill® (Rhodia) ou os semelhantes.

Ajustadores de pH: por exemplo ácido clorídrico, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de magnésio, hi- dróxido de trietanolamina, mono etanolamina, diisopropanolamina,ácido sul- fúrico, ácido polifosfórico, ácido propiônico, ácido oxálico, ácido glucônico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido, sucínico, gluconolactona, acetato de amônio ou os semelhantes;

Agentes de tonicidade: por exemplo, sulfito de hidrogênio de só-

dio, sulfito de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, cloreto de sódio, cloreto de magnésio, cloreto de potássio, acetato de sódio, carbonato de sódio hidrogênio, tiossulfato de sódio, sulfato de magnésio, fosfato de hidro- gênio de dissódio, fosfato de di-hidrogênio de sódio, fosfato de diidrogênio 10 de potássio, glicerina, propileno glicol ou os semelhantes;

Agentes de quelação: por exemplo, ácido ascórbico, edetato de tatrasódio, edetato de sódio, ácido cítrico ou os semelhantes;

Agentes de tamponamento: por exemplo, tampão de citrato, tampão de acetato, tampão de carbonato, tampão de borato, tampão de fos- 15 fato ou os semelhantes. Mais especificamente, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido acético, acetato de potássio, acetato de sódio, carbonato de hidrogê- nio de sódio, carbonato de sódio, ácido bórico, bórax, ácido fosfórico, fosfato de hidrogênio dissódio, fosfato de sódio di-hidrogênio, fosfato de hidrogênio de potássio ou os semelhantes;

Estabilizadores: por exemplo, hidróxitolueno de dibutil, tromata-

mol, sulfoxilato de formaldeído de sódio (Rongalite), tocoferol, pirossulfito de sódio, mono etanolamina, mono estearato de alumínio, mono estearato de gliceril, ou os semelhantes.

A forma de dosagem da composição para aplicação à pele ou a 25 mucosa da presente invenção não está especificamente limitada. Uma vari- edade de formas de dosagem incluindo líquidos, suspensões, unguentos, cremes, géis, loções, preparações adesivas e sprays, e aerossóis podem ser relacionados. Entre essas formas de dosagem a líquida é a usada de prefe- rência.

A composição para aplicação à pele ou a mucosa da presente

invenção pode ser preparada com a utilização de bases ou aditivos apropri- adas, dependendo das suas formulações e assim por diante, de acordo com um método comnvencional.

O local da aplicação da composição para aplicação à pele ou a mucosa da presente invenção pode ser a pele ou a mucosa, de preferência a mucosa. Os tipos de mucosas como o local de aplicação são estão especi- ficamente limitados, e a composição da presente invenção pode ser aplicada às diversas mucosas que constituem o corpo vivo. Especificamente, quando a composição da presente invenção é usada como uma composição para a aplicação à mucosa, ela pode ser usada como uma composição oftálmica para a aplicação às mucosas do olho tais como a córnea e a conjuntiva; co- mo uma composição otológica para a aplicação às cavidades nasais, cavi- dades aurais e assim por diante; como uma composição para a aplicação ao arco alveolar, língua, lábios da boca, mucosa oral e assim por diante; uma composição retal para aplicação ao reto; uma composição vaginal para a aplicação à vagina; uma composição uretral para a aplicação ao trato uriná- rio, ou outras.

Os exemplos da composição oftálmica acima incluem gotas of- tálmicas que incluam fármacos oftálmicos, soluções oftálmicas; lavadores de olhos incluindo loções para olhos, colírios, unguento para olhos, e soluções para os usuários de lentes de contato, e produtos para proteção das lentes 20 de contato (soluções de limpeza, soluções para armazenamento, soluções desinfetantes, soluções de múltiplas finalidades e as semelhantes. As gotas oftálmicas e as lavagens de olhos acima incluem as gotas oftálmicas e lava- gens para olhos que podem ser instiladas com as lentes de contato no lugar. Na forma usada aqui, neste pedido de patente, a expressão lentes de conta- 25 to engloba todos os tipos de lentes de contato incluindo as lentes de contato rígidas (incluindo as lentes de contato rígidas permeáveis ao oxigênio); len- tes de contato macias e assim por diante. Os exemplos das composições otológicas acima incluem as gotas nasais (incluindo colunarium e soluções nasais), lavadoras nasais (incluindo fármacos para a lavagem nasal e solu- 30 ções para a lavagem nasal) e gotas para ouvidos (incluindo fármacos para ouvidos e soluções para ouvidos). Os exemplos das composições orais aci- ma incluem, especificamente, fármacos orofaríngeos,lavagens bucais e os semelhantes. Os exemplos de composições retais acima incluem agentes para hemorróidas, supositórios e os semelhantes. Os exemplos das compo- sições vaginais acima incluem supositórios vaginais e cremes vaginais. Os exemplos das composições uretrais acima incluem os demulcentes e anes- 5 tésicos de superfície.

A composição para a aplicação a pele ou a mucosa da presente invenção é usada de preferência, entre as aplicações acima, como uma composição oftálmica, de mais preferência como gotas oftálmicas ou lava- gens de olhos. Entre as mucosas que constituem o corpo humano, a mucosa 10 do olho é conhecida como uma das mucosas suscetíveis aos efeitos dano- sos da citotoxidez; no entanto, a composição para a aplicação a pele ou a mucosa da presente invenção é também pode ser usada para a mucosa do olho, que é sensível a esse efeito danoso de citotoxidez, com elevada segu- rança e sem submeter à mucosa do olho a citotoxidez. A lavagem de olhos, 15 é a de preferência, uma vez que ela é usada em grandes quantidades para a lavagem da mucosa do olho.

II. Método parta a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo.

Como descrito acima, o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não exercem a citotoxidez sobre uma célula de mucosa ou da pele, po- dem ser providos através da redução substancial de uma fração de peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos, a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo. Desse modo, a presente inven- ção também proporciona um método para a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que compreende a etapa de remover substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo. No método para a redução, os meios para a remoção de modo substancial de uma fração de peso molecular baixo que tenha um peso mo- Iecular de 3.500 ou menos a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo estão descrita na seção “I. Composição para aplicação à pele ou à mucosa”.

III. O uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreendem substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos.

Como descrito acima, o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreendem substancialmente uma fração de baixo peso molecu- 5 Iar que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos é útil para a fabricação da composição para a aplicação à pele ou à mucosa, especificamente a composição para a aplicação à pele ou a mucosa que tenha a citotoxidez reduzida. Desse modo, a presente invenção também proporciona o uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreendam substancial- 10 mente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de

3.500 ou menos para a fabricação de uma composição para aplicação à pele ou à mucosa.

Além disso, o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo podem ser usados para evitar a indução da citotoxidez na composição para aplicação à pele ou à mucosa que contenha o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que compreenda uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos. Desse modo, a presente invenção também proporciona o uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não com- preendam substancialmente uma fração de peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para impedir a indução da citotoxi- dez. A presente invenção também proporciona o uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreendam uma fração de peso molecular baixo, que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para impedir a in- dução de citotoxidez sobre a pele ou a mucosa, e aumentando a retenção de um ingrediente ativo contido em uma composição para aplicação à pele ou à mucosa.

IV. O uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreenda substancialmente uma fracão de peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos.

Como descrito acima, o ácido algínico e/ou os sais do mesmo

que não compreendam substancialmente uma fração de baixo peso molecu- lar pode ser usado para evitar a indução da citotoxidez sobre a pele ou a mucosa pelo ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que compreendam uma fração de peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos. Desse modo, a presente invenção também proporciona o uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não compreendam substancial- 5 mente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de

3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxidez sobre a pele ou à mu- cosa.

Além disso, o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo podem ser usados para evitar a indução da citotoxidez na pele ou na mucosa, e aumen- 10 tar a retenção de um ingrediente ativo que esteja contido em uma composi- ção para a aplicação à pele ou à mucosa. Desse modo, a presente invenção também proporciona o ácido algínico e/ou dos sais do mesmo que não com- preendam substancialmente uma fração de peso molecular baixo que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para impedir a indução da citotoxidez 15 sobre a pele ou a mucosa, e aumentando a retenção de um ingrediente ativo contido em uma composição para aplicação à pele ou à mucosa.

Exemplos

Os Exemplos e os Exemplos de Teste que se seguem ilustram a presente invenção em mais detalhe, porem não devem ser considerados como limitando o âmbito da mesma.

Exemplo de referência.

Método para a determinação do peso molecular do ácido algíni- co.

De acordo com o método que se segue, o peso molecular do 25 ácido algínico e a proporção de um peso molecular de 3.500 foram determi- nados. Primeiro, oito tipos de padrões de pululano com pesos moleculares conhecidos foram usados como marcadores de peso molecular para a pre- paração de uma curva da calibração através da plotagem dos tempos de retenção através do método GPC versus os pesos moleculares do pululano. 30 Em seguida, o ácido algínico (uma amostra corretiva de ácido algínico) foi submetida ao método GPC, e a média de peso molecular médio calculada para o ácido algínico (a amostra corretiva de ácido algínico) foi obtido de acordo com a curva de calibração previamente preparada. Além disso, o á- cido algínico (uma amostra corretiva de ácido algínico) foi submetido ao mé- todo GPC em que um detector de dispersão de Iuz de laser de ângulo múlti- plo (MALS) foi usado como o detector para dar o peso molecular médio, com o qual a equação relacionai previamente obtida com o pululano foi corrigida. Em seguida, através da utilização dessa equação relacionai corrigida, o peso molecular do ácido algínico e a proporção de um peso molecular de 3.500 ou menos foi determinada. Os detalhes são como se seguem:

(1) Condições de medição do GPC.

O método de cromatografia por permeação de gel (método GPC) em cromatografia líquida foi realizado com a utilização da condição que se segue com relação à determinação.

(1-1) Detector: Detector de índice refrativo diferencial ou detector de dispersão de Iuz de laser de ângulo múltiplo (MALS)

(1-1-1) Detector de dispersão de Iuz de laser de ângulo múltiplo (MALS): foi usado um detector de dispersão de Iuz de laser de ângulo múlti- plo DAWN-EOS.

(1-1-2) O comprimento de onda foi ajustado em 690 nm (laser semi condutor).

(1-1-3) O segundo coeficiente virial (A2): x concentração (c) foi ajustado para 0 mol/g.

(1-1-4) O aumento do índice de refração (dn/dc) foi ajustado para 0,114 ml/g.

(1-1-5) A temperatura foi ajustada para 23 + 2°C.

(1-2) Coluna: três colunas de aço inoxidável dada uma cheia de polímeros de vinil hidrófilos que tinham 10.000.000, 400.000 e 5.000 limites de exclusão de peso molecular com relação a soluções aquosas de oxido de polietileno ou de polietileno glicol (tamanho de partículas foram de 13 μιη, 10 μηη, 7 μηι, respectivamente) são conectadas e usadas. Cada coluna de aço inoxidável tem um diâmetro interno de 7,8 mm e um comprimento de 30 cm. (1-3) A temperatura foi ajustada para 35°C (1-4) Fase móvel: uma solução que foi obtida através da dissolu- ção de 11,5 g de fosfato de di-hidrogênio amônio e 17,5 g de cloreto de só- dio em água destilada até um volume total de 1000 ml e ajustando o pH para

4,0 com ácido fosfórico, foi usada.

(1-5) A velocidade de fluxo da fase móvel foi ajustada para 0,75 5 mml por minuto. Neste estudo, a estabilização de uma linha de base é im- portante, por esse motivo, o controle da temperatura e o equilíbrio do instru- mento têm que ser executados de forma suficiente para ser obtida um a li- nha de base. Depois que a fase móvel é passada durante mais do que uma noite com o trajeto de referência aberto, a fase móvel é passada de novo 10 durante mais do que uma noite com o trajeto de referência fechado. Durante a análise a temperatura ambiente não deve ser mudada; a temperatura no interior dos instrumentos, tais como nas colunas, tubos e detectores também tem que ser constantes.

(2) Preparação da curva de calibração com o marcador de peso molecular.

Os padrões de pululano que estavam disponíveis como marca-

dores de peso molecular (mais do que oito tipos de pululano tendo pesos moleculares conhecidos em uma faixa a partir de 5.900 até 788.0000) e gli- cose são dissolvidos respectivamente na fase móvel descrita nas condições de medição acima do GPC até uma concentração de 0,1 p/v%, e cada 100 20 μΙ dos mesmos é submetida ao método GPC descrito abaixo para serem obtidos os tempos de eluição dos mesmos. Uma curva de calibração com relação aos padrões de pululano é preparada através da plotagem do loga- ritmo de um peso molecular M de cada padrão de pululano (Iogi0M) no eixo y e os seu tempo de eluição no eixo x, determinando a equação linear da 25 curva de calibração (Equação 1 abaixo).

Equação 1: y = ax + b y: Iogi0M

x: tempo de eluição

(3) Correção da equação Iinearcom relação à curva de calibração.

(3-1) Preparação da amostra corretiva do ácido algínico.

100 g de entrançado de algas (Lessonia nigrescens) secas são cortadas, lavadas com água e imersas em 3 I de 0,2% em peso de ácido sulfúrico durante 2 horas. O extrativo é removido e o resíduo é imerso em 1 litro de solução aquosa de hipoclorito de sódio (cloro disponível: 10,5% em peso), durante 10 minutos, depois dos quais o resíduo é recolhido seguido pela adição de água purificada até 3 I e deixada em repouso durante 10 ho- ras. O mesmo volume de uma solução de metanol e água acidificada com ácido sulfúrico (2% em peso de ácido sulfúrico, 90% em peso de metanol, água para o restante) é adicionado a essa solução, e o precipitado resultante é recuperado através de filtragem e secado. 3 g desse precipitado seco são adicionados em porções a 250 ml de água, e agitados durante 10 minutos. Depois da confirmação da dispersão homogênea em água, 0,825 g de car- bonato de sódio são adicionados e a mistura é agitada durante outros 20 minutos, para a dissolução do precipitado. Depois de ser confirmado que o precipitado foi completamente dissolvido, é adicionada água até um peso total de 300 g para a produção de uma solução em bruto de ácido algínico. À 200 g da solução em bruto de ácido algínico, são adicionados em porções 1.800 ml de acetona seguida por agitação durante 30 minutos, depois da qual a solução é filtrada através de papel de filtro (Φ 110 mm). O resíduo obtido sobre o papel de filtro é recolhido, e em seguida, através de secagem do mesmo em temperatura ambiente, a acetona é removida por destilação para ser obtido à amostra corretiva de ácido algínico.

(3-2) Determinação da média do peso molecular médio presumi- do da amostra corretiva de ácido algínico com os padrões de pululano.

A amostra corretiva de ácido algínico preparada acima é carre- gada e dissolvida até uma concentração de 0,1% em peso na fase móvel 25 descrita nas condições de medição acima para o GPC para a preparação de uma solução de amostra. Essa solução de amostra é submetida ao método GPC para análise. Nos dados do processamento depois da análise dessa amostra corretiva do ácido algínico, o pico do ácido algínico é dividido em i pedaços durante Ada 0,1 minuto do tempo de eluição, e as áreas com rela- 30 ção a cada seção (An) são calculadas através de um método de integração automático. Além disso, os tempos de solução de cada uma das seções é atribuído à equação 1 para o cálculo dos seus valores de M, que são consi- derados como os pesos moleculares presumidos do ácido algínico de cada seção (presunção de Mn). Além disso, os valores de área com relação a ca- da uma das seções (An) são divididos pelo peso molecular presumido do ácido algínico das suas seções (presunção Mn) para calcular o número pre- 5 sumido das moléculas de ácido algínico de suas seções (presunção Nn). O peso molecular presumido (presunção Mn) e o número de moléculas presu- mido (presunção Nn) calculados dessa forma são determinados para a se- guinte equação 2 para o cálculo da média do peso molecular médio da a- mostra corretiva do ácido algínico (presunção Mw).

Equação 2:

i i

MW assumption — Σ (Nn assumption x Mn assumption x Mn assumption) / Σ (Nn assumption x Mn assumption)

n=1 n=1

(3-3) Determinação da média de peso molecular médio real da amostra corretiva do ácido algínico.

A amostra corretiva do ácido algínico é carregada e dissolvida até uma concentração de 0,5 % p/v na fase móvel descrita nas condições de medição acima para O GPC para a preparação de uma solução de amostra. 100 μΙ dessa solução da amostra são submetidos ao método GPC, ao qual é 20 conectado o detector de índice refrativo diferencial ou detector de dispersão de Iuz de laser de ângulo múltiplo (MALS), como um detector, e a média do peso molecular médio real (Mw real) é determinada através do método GPC- MALS. O cálculo da média do peso molecular médio é realizado através da análise de plotagem de Berry com relação ao único pico detectado e a leitura 25 do valor da interceptação.

(3-4) Correção para a equação linear

Através da correção do peso molecular presumido do ácido algí- nico (presunção Mn) de tal forma que a média do peso molecular médio do ácido algínico (presunção Mw) calculado com a equação 2 é igual a média 30 do peso molecular médio do ácido algínico real (Mw real) calculado pelo mé- todo GPC-MALS (3-3) acima, os pesos moleculares reais do ácido algínico com relação a cada seção (Mw real) é determinado. Especificamente, b’ é calculado de tal forma que o Mw real seja igual ao valor calculado pela atri- buição da equação 2.

axn+b'

Presunção Mn: 10

axn+b'

Presunção Nn: An /10

A equação 3 que se segue, na qual o a e o b' obtidos acima es- tão incluídos, é usada para uma curva de calibração real do ácido algínico. Equação 3: y = ax + b' y: Iog10Maig x: tempo de eluição

Maig: peso molecular do ácido algínico.

(4) Cálculo do peso molecular e área de pico do peso molecular de 3.500 ou menos.

Para o ácido algínico e/ou os sais do mesmo que são os objeti- vos com relação à determinação, o tempo de eluição para cada um dos pi- cos no cromatógrafo obtidos através do método GPC é aplicado á curva de calibração expressa na equação 3 acima, e por meio disso, os pesos mole- culares de cada um dos picos são calculados.

Na presente invenção, as áreas de pico no cromatógrafo obtidos através do método GPC são calculadas através de um método de integração automático com a utilização de um Agilent 1100 series Agilent ChemStation (Agilent Technologies) com as condições de ajuste que se seguem ou atra- vés de um método similar.

. Ajustes iniciais 25 Sensibilidade do declive 5

Largura do pico 10 Rejeito da área 100 Rejeito elevado 10 Queda do ombro

. Programa

0,1 segundo: Integração DESLIGADA

Tempo de eluição correspondendo a um peso molecular de

1.100.000 de ácido algínico: Linha de base nos vales LIGADA Tempo de eluição correspondente a um peso molecular de

1.000.000 de ácido algínico: Integração LIGADA

Tempo de eluição correspondente a um peso molecular de 3.500 de ácido algínico ácido: Divisão de pico LIGADA Tempo de eluição correspondente a um peso molecular de 3.000

de ácido algínico : Sensibilidade do declive 2,5.

A área de pico do ácido algínico com um peso molecular de 3.500 ou menos é calculada como a área de pico de um ácido algínico com um peso molecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos.

Exemplo de Teste 1.

1. Preparação do adido algínico.

Preparação de ácido algínico no qual uma fração de baixo peso molecular não foi removida.

A um pedaço de 5 g de entrançado de algas (Lessonia nigres- 15 cens) secas do Chile foram adicionados 100 ml de água; a mistura foi deixa- da em repouso em temperatura ambiente durante 60 minutos, seguidos pelo aquecimento em um banho de água até de 90 a 100°C durante 30 minutos, enquanto era ocasionalmente agitada com uma haste de vidro. Depois disso, a mistura foi resfriada para 4°C durante cerca de 3 horas, e filtrada com a 20 utilização de papel de filtro (ADVANTEC, No.2, φ 110mm), depois do que o filtrado foi coletado, a 50 ml dessa solução foram adicionados 450 ml de ace- tona, seguido por agitação e filtragem através de papel de filtro da mesma maneira, depois do que o precipitado foi recolhido. O precipitado foi secado para a produção de ácido algínico (Exemplo comparativo 1).

Preparação do ácido algínico no qual a fração de baixo peso molecular foi removida e a fração de baixo peso molecular do ácido algínico.

100 g de entrançado de algas (Lessonia nigrescens) secas são cortadas, lavadas com água e imersas em 3 I de 0,2% em peso de ácido sulfúrico durante 2 horas. O exudato foi removido e o resíduo foi imerso em 30 1 litro de solução aquosa de hipoclorito de sódio (cloro disponível: 10,5% em peso), durante 10 minutos, depois do que o resíduo foi recolhido seguido pela adição de água purificada até 3 I e deixada em repouso durante 10 ho- ras. A esta solução, o mesmo volume de uma solução de metanol e água acidificada com ácido sulfúrico (2% em peso de ácido sulfúrico, 90% em pe- so de metanol, água para o restante) foi adicionado a essa solução, e o pre- cipitado resultante foi recuperado através de filtragem e secado. 3 g desse 5 precipitado seco foram adicionados em porções a 250 ml de água, e agita- dos durante 10 minutos. Depois da confirmação da dispersão homogênea em água, 0,825 g de carbonato de sódio foram adicionados e a mistura foi agitada durante outros 20 minutos, para a dissolução do precipitado. Depois de ser confirmado que o precipitado foi completamente dissolvido, é adicio- 10 nada água até um peso total de 300 g para a produção de uma solução em bruto de ácido algínico. À 200 g da solução em bruto de ácido algínico, fo- ram adicionados em porções 1,800 ml de acetona seguida por agitação du- rante 30 minutos, depois do que a solução foi filtrada através de papel de filtro (ADVANTEC, No. 2, Φ 110 mm). O resíduo obtido sobre o papel de fil- 15 tro foi recolhido, e em seguida, através de secagem do mesmo em tempera- tura ambiente, a acetona foi removida por destilação para ser obtida uma fração de ácido algínico a qual foi dissolvida em acetona (isto é, acido algíni- co no qual uma fração de baixo peso molecular foi removida; Exemplo 1). Ao inverso, o filtrado obtido depois da filtração foi recolhido e a acetona e a á- 20 gua foram removidas através de destilação sob pressão reduzida (12,3 a 19,9 KPa (100 a 150 mm Hg), 25°C) para ser obtida uma fração de acido algínico a qual foi dissolvida em acetona (isto é, uma fração de baixo peso molecular de acido algínico; Exemplo Comparativo 2).

2. Medição da distribuição de peso molecular do ácido algínico preparado.

Através da utilização de um cromatógrafo líquido (Agilent 1100

system (Agilent Technologies), Dispositivo de Controle e de Processamento de dados: G2170AJ ChemStation, Bomba: G1311A, Injetor: G1329A, detec- tor: detector de índice diferencial de refração G1362A (temperatura pré ajus- tada: 35°C), câmara termostática: G1316A) e de acordo com a condição e o 30 método descrito no Exemplo de Referência acima, as proporções de um pe- so molecular de 3.500 ou menos no ácido algínico obtido no Exemplo 1 e nos Exemplos Comparativos 1 e 2 acima foram determinados. A proporção de um peso molecular de 3.500 ou menos foi de- terminada de acordo com o método descrito no Exemplo de Referência aci- ma através da preparação de uma amostra corretiva do ácido algínico, de- terminando a média do peso molecular da amostra corretiva do ácido algíni- 5 co, preparando uma curva de calibração com os padrões de pululano (Sho- dex P-82, Showa Denko), calculando os pesos moleculares de cada um dos picos e a área dos referidos picos detectadas através do método GPC com relação ao ácido algínico do Exemplo 1 e dos Exemplos Comparativos 1 e 2.

Os resultados das proporções de um peso molecular de 3.500 ou menos em cada um dos ácidos algínicos (Exemplo 1 e Exemplos Compa- rativos 1 e 2) são como se seguem:

Tabela 1

Exemplo Exemplo Com¬ Exemplo Com¬ 1 parativo 1 parativo 2 Proporção do peso mole¬ 2,3% 7,7% 12,4% cular de 3.500 ou menos 3. Avaliação da citotoxidez do ácido algínico preparado.

O teste com relação à toxidez do ácido algínico preparado acima (Exemplo 1 e Exemplos Comparativos 1 e 2)com relação às células foi exe- cutado. Primeiro, uma solução de ácido algínico foi preparada através da dissolução de cada um dos ácidos algínicos até uma concentração de 0,2 ou 2,0% (p/v) em um meio de cultura de células de meio 199 (GIBCO) suple- mentado com 10% em volume de soro fetal bovino (Daiichi Kagaku Yaku- hin). Em seguida a linha de células epiteliais de córnea de coelho (Número ATCC: CCL-60) foram colocadas em pratos a 2,0 x 105 células por cavidade em prato de micro titulação de 48 cavidades (Corning), e a solução de ácido algínico preparada acima foi adicionada para ser obtida uma concentração final de 0,1 ou de 1,0% (p/v) de ácido algínico, e as células foram em segui- da cultivadas sob as condições de 37°C, 5% CO2 e 90% de umidade relati- va. Na cavidade sem a solução de ácido algínico, preparada como o contro- le, foi adicionado o mesmo volume de meio de cultura de células. 48 horas depois da iniciação da cultura, o sobrenadante foi recolhido e 10% (v/v) do Cell Countinag Kit-8 (Dojin Kagaku) de um reagente para a contagem de células viáveis foi adicionado, depois do que elas foram incubadas sob as condições de 37°C, 5% CO2 e 90% de umidade relativa durante uma hora. Depois de uma hora, a absorção (450 nm) do corante que se desenvolveu 5 através da reação com as células viáveis foi medida com a utilização de um espectrofotômetro (Termo Electron). Com os valores da absorção observa- dos, a viabilidade das células foi calculada na equação que se segue, e a citotoxidez de cada ácido algínico foi avaliada.

Equação 5

Viabilidade da célula (%) = 100 x (absorção do grupo o qual ca-

da solução de ácido algínico foi adicionada - absorção de um meio que con- tem um reagente para a detecção de célula viável) / (absorção do grupo de controle - absorção do meio contendo um reagente para a detecção de célu- la viável).

Os resultados estão mostrados na figura 1. Através da adição de

1,0%(p/v) da solução de ácido algínico do Exemplo Comparativo 2 foi adi- cionada, foi desenvolvida uma alta citotoxidez, especificamente de viabilida- de de célula de cerca de 5%. Além do mais, a observação microscópica também demonstrou que as células as quais o ácido algínico do exemplo

comparativo 2 foi adicionado perderam a sua capacidade de adesão e flutua- ram. Ou inverso, foi reconhecido que a toxidez do ácido algínico do Exemplo

1 é claramente reduzida quando comparada com o ácido algínico dos E- xemplos Comparativos 1 e 2. Esses resultados revelaram que a citotoxidez do ácido algínico resulta a partir do componente contido na fração de baixo

peso molecular. Além do mais, foi confirmado que a citotoxidez com relação às células de mucosa pode ser reduzida através da adição seletiva de ácido algínico que não compreenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular da composição para aplicação à pele ou à mucosa.

Exemplo de teste 2. Avaliação da irritação do ácido algínico.

Uma gota oftálmica da Formulação do Exemplo 1 que se segue foi

preparada com a utilização do ácido algínico do Exemplo 1. A gota oftálmica foi enchida de forma asséptica em um recipiente de plástico depois de filtragem 10

através de um filtro de membrana com 0,22 μπι de tamanho Formulação do ExemDlo 1 Ácido Algínico do Exemplo 1 0,1g Cloreto de sódio 0,44g Cloreto de Potássiio 0,08g Ácido bórico 0,3g Bórax 0,035g Ácido clorídrico q.s. Hidróxido de sódio q.s. Áaua Durificada a.s. Volume total 100 ml (pH 7) Essas gotas oftálmicas foram administradas aos olhos de cinco adultos humanos sadios (três homens e duas mulheres), e a sensação de irritação foi avaliada de acordo com o critério que se segue:

Método de avaliação

+: com irritação ±: com irritação suave -: sem irritação

Os resultados obtidos estão mostrados na Tabela 2. Os resulta- dos demonstraram que as gotas oftálmicas da formulação do Exemplo 1 proporcionaram uma boa sensação de uso; nenhum individuo se queixou de irritação imédiatamente depois da instilação ocular, ou mesmo 5 minutos ou minutos depois da instilação ocular.

Tabela 2

Resultado da avalia¬ ção para irritação (No. de indivíduos) --- ± + Irritação imédiatamente depois da instilação ocular 5 0 0 Irritação depois de 5 minutos da instilação ocular 5 0 0 Irritação depois de 10 minutos da instilação ocular 5 0 0 25

As gotas oftálmicas (Formulação do Exemplo Comparativo 1) que foram preparadas da mesma maneira como a Formulação do Exemplo 1 exceto em que foi usado o ácido algínico do Exemplo Comparativo 1,. no ligar do ácido algínico do Exemplo 1, foram avaliadas com relação à irritação das mesmas depois da instilação ocular. Os resultados mostraram que al- 5 guns indivíduos informaram irritação imédiatamente depois da instilação ocu- lar das gotas oftálmicas da Formulação do Exemplo Comparativo 1.

A partir dos resultados acima, foi confirmado que o ácido algínico que compreende uma fração de baixo peso molecular, que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos exerce a citotoxidez as células da mucosa, e 10 além disso, pode induzir irritação na ocasião da instilação ocular. Em contras- te, foi revelado que o ácido algínico no qual a fração de baixo peso molecular que tinha um peso molecular de 3.500 ou menos tinha sido substancialmente removida teve uma citotoxidez reduzida de forma significativa com relação às células da mucosa, e não ocasiona irritação na ocasião da instilação ocular; 15 por esse motivo, ele é superior em segurança e na sensação de uso.

Exemplo de Teste 3. Avaliação da irritação pelo ácido algínico.

Uma gota oftálmica (Formulação do Exemplo 2) na qual a con- centração do ácido algínico do Exemplo 1 foi de 0,01 g/100 ml e uma gota oftálmica (Formulação do Exemplo 3) na qual a concentração do ácido algí- 20 nico do Exemplo 1 foi de 0,2 g/100 ml, foram preparadas. Com relação às gotas oftálmicas das Formulações dos Exemplos 2 e 3, os componentes contidos foram os mesmos como aqueles da Formulação do Exemplo 1, ex- ceto com relação ao ácido algínico e as concentrações do mesmo.

As goras oftálmicas das Formulações dos Exemplos 2 e 3 foram 25 avaliadas com relação a irritação das mesmas depois da instilação ocular, da mesma maneira como a do Exemplo de Teste 2 acima. O resultado foi que nenhum dos indivíduos se queixou de irritação tanto com as gotas of- tálmicas das Formulações dos Exemplos 2 ou 3 imédiatamente depois da instilação ocular, ou mesmo 5 minutos ou 10 minutos depois da instilação 30 ocular.

Exemplo de Formulação.

O ácido algínico do Exemplo 1 foi usado para a preparação das formulações mostradas nas Tabelas de 3 a 5 (Exemplos de Formulação de 4 a 11).

Tabela 3

Componente Formula¬ Formula¬ Formula¬ Formula¬ (Unidade: g/100mL) ção E- ção E- ção E- ção E- xemplo 4 xemplo 5 xemplo 6 xemplo 7 Gota oft. Gota oft. Lav. de Gota na¬ olho sal Ácido algínico do Exemplo 1 0,1 0,01 0,05 0,2 Cloridrato tetraídrozolina 0,05 _ _ «. Cloridrato nafazolina _ 0,05 Glicirrizinato dipotássio _ _ 0,025 _ Maleato Clorfeniramina 0,03 _ 0,003 0,5 Cloridrato Piridoxina 0,1 _ _ Aspartato Potássio _ _ 0,1 _ Cloreto de sódio _ 0,44 _ 0,67 Cloreto de potássio _ 0,08 _ _ Ácido bórico 1,8 1 1,7 _ Bórax 0,2 0,2 0,1 _ Hidrogênio fosfato de sódio _ _ _ 0,4 Di-hidrogênio fosfato de só¬ - - - 0,9 dio cristal Edentato de sódio 0,005 Polisorbato 80 _ _ 0,1 _ Ácido clorídrico q.s. q.s. q.s. q.s. Hidróxido de sódio q.s. q.s. q.s. q.s. Água purificada q-s. .... q.s. q.s. PH 6 7 6,7 6 Tabela 4

Componente Formulação E- Formulação E- (Unidade: g/100 ml) xemplo 8 xemplo 9 Desinfetante para Fármaco orofarín- lentes de contato geo Ácido algínico do Exemplo 1 0,1 0,05 Sulfonato de azuleno de sódio _ 0,02 cloreto de Potássio 0,100 cloreto de Sódio 0,650 _ Hidrogênio fosfato de sódio 0,200 _ fosfato di-hidrogênio de sódio 0,015 _ Carbonato de hidrogênio de sódio _ 0,2 Hidroxipropil metilcelulose 0,020 __ Ácido etilenodiamina tetraacético - 0,002 de sódio l-mentol _ 0,01 Polisorbato 80 0,020 _ Poloxâmero 407 0,100 _ Polioxietileno de óleo de rícino - 3 hidrogenado Cloridrato de polihexametileno 0,001 - biguanida ácido clorídrico q.s. q.s. hidróxido de sódio q.s. q.s. Água purificada q.s. q.s. PH 7,2 7,5 Tabela 5

Componente Formulação Exem¬ Formulação Exem¬ (Unidade: g/100 ml) plo 10 plo 11 Agente Hemorroidal Creme Vaginal Ácido algínico do Exemplo 1 1 0,5 Aminobenzoato de etil 2,5 _ Lidocaína 2,25 _ Acetato hidrocortisona 0,25 Óxido de zinco 5 Isopropilmetilfenol 0,1 Nitrato de isoconazola _ 1 l-mentol 0,25 _ Petrolato q.s. 8 Parafina líquida 8 Gel hidreto de carbono 30 _ Monostearato gliceril 2,5 _ Monostearato sorbitano 1 Polisorbato 60 3,5 Álcool behenil _ 5 Parabeno 0,1 Água purificada q.s. Descrição resumida dos desenhos

A figura 1 é um gráfico que representa os resultados dos testes com relação à citotoxidez do ácido algínico (Exemplo 1 e Exemplos Compa- rativos 1 e 2);

Claims

1. Composição para a aplicação à pele ou à mucosa que contem ácido algínico e/ou sais do mesmo, que não compreende substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos.

2. Composição para aplicação à pele ou à mucosa de acordo com a reivindicação 1, na qual a proporção da fração que tem um peso mo- lecular de 380 ou mais até 3.500 ou menos é de 2,5% ou menos com base na quantidade total de uma fração que tenha um peso molecular de 380 ou mais do ácido algínico e/ou sais do mesmo.

3. Composição para aplicação à pele ou à mucosa de acordo com a reivindicação 1, na qual o ácido algínico e/ou sais do mesmo está contido em uma quantidade de 0,001 até 20% em peso com base no peso total da composição.

4. Composição para aplicação à pele ou à mucosa de acordo com a reivindicação 1, que é uma formulação líquida.

5. Composição para aplicação à pele ou à mucosa de acordo com a reivindicação 1, que é uma composição oftálmica, composição otoló- gica, composição oral, composição reta, composição vaginal, ou composição u retrai.

6. Composição para aplicação à pele ou à mucosa de acordo com a reivindicação 1, que é uma gota oftálmica ou lavagem para olho.

7. Método para a redução da citotoxidez do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que compreende a etapa de remover substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos a partir do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo.

8. Uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que não com- preenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um peso molecular de 3.500 ou menos para a fabricação de uma composi- ção para aplicação à pele ou à mucosa.

9. Uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que não com- preenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular que te- nha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxi- dez em uma composição para aplicação à pele ou à mucosa.

10. Uso do ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que não compreenda substancialmente uma fração de baixo peso molecular que te- nha um peso molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxi- dez em uma composição para aplicação à pele ou à mucosa, e aumentar a retenção de um ingrediente ativo contido em uma composição para aplica- ção à pele ou à mucosa sobre a pele ou a mucosa.

11. Ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que não compreen- da substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um pe- so molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxidez sobre a pele ou a mucosa.

12. Ácido algínico e/ou dos sais do mesmo, que não compreen- da substancialmente uma fração de baixo peso molecular que tenha um pe- so molecular de 3.500 ou menos para evitar a indução de citotoxidez sobre a pele ou a mucosa e aumentar a retenção de um ingrediente ativo contido em uma composição para aplicação à pele ou à mucosa sobre a pele ou a mu- cosa.