BRPI0619395A2

BRPI0619395A2 - uso de um agonista de receptor de adenosina a3(a3ar)

Info

Publication number: BRPI0619395A2
Application number: BRPI0619395-1A
Authority: BR
Inventors: Pnina Fishman
Original assignee: Can Fite Biopharma Ltd
Priority date: 2005-11-30
Filing date: 2006-11-29
Publication date: 2011-10-04
Also published as: JP2009517458A; CA2622879C; AU2006321165A1; US10265337B2; KR20080071609A; US20080300213A1; JP5339916B2; AU2006321165B2; EP1959939A1; EP1959939B1; ES2379591T3; DK1959939T3; KR101101252B1; CA2622879A1; US20160263142A1; ATE540673T1; JP2013166789A; CN101330909B; CN101330909A; WO2007063538A1

Abstract

USO DE UM AGONISTA DE RECEPTOR DE ADENOSINA A~ 3~ (A~ 3~AR). A presente invenção fornece o uso de um agonista de receptor de adenosina A~ 3~ (agonista de A~ 3~AR) para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de um indivíduo mamífero tendo osteoartrite (OA), a quantidade do agonista de A~ 3~AR sendo eficaz para tratar ou prevenir o desenvolvimento de OA. Agonistas de A~ 3~AR preferidos de acordo com a invenção são IB-MECA e Cl-IB-MECA. O Agonista de A~ 3~AR pode ser administrado em combinação com um outro medicamento, tal como, Metotrexato (MTX). A invenção também fornece composições farmacêuticas para o tratamento de osteoartrite compreendendo uma quantidade de um agonista de A~ 3~AR.

Description

"USO DE UM AGONISTA DE RECEPTOR DE ADENOSINA A3 (A3AR)" CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção diz respeito à terapia e em particular ao tratamento de osteoartrite.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Osteoartrite, conhecida no passado como artrite degenerativa, é a forma mais comum de artrite. É uma doença da articulação que ocorre depois de anormalidade ou dano de articulações ou sem dano de articulação.

A doença envolve a deterioração da cartilagem nas articulações. Com o passar do tempo, a cartilagem, que cobre as extremidades de ossos em uma articulação, começa a romper e pode desgastar-se completamente, e os ossos esfregarão entre si, causando dor. Devido à dor em uma articulação, o músculo adjacente é menos usado, e a resistência do músculo é assim enfraquecida.

Os sintomas usuais de osteoartrite são rigidez, limitação de movimento, dor e deformidade da articulação e articulações afetadas apresentam edema, ondas de calor e hipertrofia anormal de articulações.

A prevalência de osteoartrite é similar em homens e mulheres. Entretanto, em mulheres um número maior de articulações são afetadas, enquanto homens sofrem de uma freqüência mais alta de invasão da articulação do quadril. Os fatores de risco de osteoartrite incluem envelhecimento (taxas de prevalência aumentam acentuadamente com a idade), obesidade, displasia congênita do quadril, trauma acidental ou atlético, uma história de artrite, medicamentos, grupos de trabalho particulares, cirurgia e hereditariedade. Osteoartrite por si só não afeta muito a vida de algumas pessoas, mas a osteoartrite crônica que se prolonga durante um período longo de tempo causa dor e deformidade das articulações e assim reduz a qualidade de vida. Em particular, osteoartrite nos joelhos é conhecida como uma causa principal de deficiência crônica.

Vários medicamentos e métodos de tratamento foram desenvolvidos e usados para o tratamento de osteoartrite. Os objetivos principais do tratamento são aliviar a dor, manter as funções das articulações e prevenir deficiência devido ao distúrbio funcional das articulações.

Correntemente não existe nenhum tratamento médico conhecido para anular os efeitos deste dano de cartilagem. De preferência as terapias para osteoartrite são dirigidas principalmente para tratar os sintomas. Sob este aspecto, osteoartrite foi tratada usando substâncias anti-inflamatórias do tipo corticosteróide (tais como hidrocortisona e Betametasona), que funcionam para inibir a síntese de prostaglandina, assim como com um grande número de medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs, tais como diclofenaco, aspirina e ibuprofeno), que têm um efeito analgésico e também anti-inflamatório. Entretanto, devido aos seus efeitos colaterais sérios, estes medicamentos são usados com cuidado especial.

Assim, existe uma necessidade contínua para pesquisar e desenvolver métodos novos para tratar a osteoartrite.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção fornece o uso de um agonista de receptor de adenosina A3 (agonista de A3AR) para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de osteoartrite em um indivíduo mamífero.

Além disso, a presente invenção fornece um método para o tratamento de osteoartrite em um indivíduo mamífero, o método compreende administrar ao dito indivíduo em necessidade do dito tratamento uma quantidade de um agonista de A3AR, a quantidade sendo eficaz para tratar ou prevenir o desenvolvimento de osteoartrite.

Ainda mais, a invenção fornece uma composição farmacêutica para o tratamento de osteoartrite em um indivíduo mamífero compreendendo como ingrediente ativo um agonista de A3AR e um carreador farmaceuticamente aceitável.

O uso terapêutico de um agonista de A3AR pode ser por si só, ou às vezes em combinação com outros medicamentos tais como metotrexato (MTX), esteróides, NSAIDS, e outros.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

De modo a entender a invenção e ver como ela pode ser realizada na prática, uma forma de realização preferida agora será descrita, por via de exemplo não limitante apenas, com referência aos desenhos anexos, em que:

As Figs. IA e IB são gráficos de barra que mostram o efeito do tratamento de IB-MECA (CFlOl) ou um tratamento combinado de EB- MECA e MTX na proliferação de sinoviócitos tipo fibroblastos humanos (FLS) (Fig. IA) ou FLS de rato (Fig. 1B) como determinado por ensaio de MTT.

A Fig. 2 é um gráfico que mostra a diferença em diâmetro do joelho injetado com MIA (Joelho direito) e diâmetro do joelho não injetado com MIA (Joelho esquerdo) dentro do mesmo animal como uma função de dias depois da indução de MLA, em tratado com CFlOl (-■- CF101) e não tratado (-♦- controle). Cada grupo continha 5 animais.

As Figs. 3A a 3D são imagens radiográficas de joelhos que mostram linha epifisária tibial normal sem esclerose em animais tratados com CFlOl (Figs. 3C e 3D, joelhos esquerdo e direito respectivamente) quando comparados a animais tratados com veículo (Figs. 3A e 3B, joelhos esquerdo e direito, respectivamente).

As Figs. 4A a 4E são análises de Western Blot de extratos de proteína derivados de articulações do joelho tratadas com CFlOl (CFlOl) e não tratadas (Controle) de ratos com OA; os extratos de proteína sendo A3AR (Fig. 4A), PI3K (Fig. 4B), IKK (Fig. 4C), NF-κΒ (Fig. 4D), GSK-3P (Fig. DESCRIÇÃO DETALHADA DE FORMAS DE REALIZAÇÃO EXEMPLARES

A invenção é descrita na descrição detalhada seguinte com referência a métodos terapêuticos para o tratamento de osteoartrite envolvendo administração de um agonista de A3AR a um indivíduo em necessidade do mesmo. Deve ser observado que além dos ditos métodos terapêuticos, também abrangido dentro da presente invenção é o uso de um agonista de A3AR para a preparação de uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo sofrendo de osteoartrite assim como uma composição farmacêutica para o tratamento de osteoartrite que compreende uma quantidade eficaz de um agonista de A3AR e um carreador farmaceuticamente aceitável.

Como usado no relatório descritivo e reivindicações, as formas "um", e "o(a)" incluem referências no singular assim como no plural a menos que o contexto dite claramente de outro modo. Por exemplo, o termo "um agonista de A3AR" inclui um ou mais agonistas.

Além disso, como usado aqui, o termo "compreendendo" é intencionado a significar que os métodos ou composição incluem os elementos relatados, mas não excluindo os outros. Similarmente, "que consiste essencialmente de" é usado para definir métodos e composições que incluem os elementos relatados mas excluem outros elementos que podem ter uma atividade terapêutica de importância essencial para osteoartrite. Por exemplo, uma composição que consiste essencialmente de um agonista de A3AR não incluirá ou incluirá apenas quantidades insignificantes (quantidades que terão um efeito insignificante na osteoartrite) de outros ingredientes ativos que têm uma tal atividade. Também, uma composição que consiste essencialmente do agonista de A3AR como definido aqui não excluiria contaminantes traço do método de isolamento e purificação, carreadores farmaceuticamente aceitáveis, tais como solução salina tamponada com fosfato, excipientes, conservantes, e semelhantes. iiQue consiste de" deve significar excluindo mais do que elementos traço de outros elementos. Formas de realização definidas por cada um destes termos de transição estão dentro do escopo desta invenção.

Além disso, todos os valores numéricos, por exemplo, concentração ou dose ou faixas destas, são aproximações que são variadas (+) ou (-) por até 20 %, às vezes por até 10 % dos valores estabelecidos. Deve ser entendido, mesmo que nem sempre explicitamente estabelecido que todas as designações numéricas são precedidas pelo termo "cerca de". Também deve ser entendido, embora nem sempre explicitamente estabelecido, que os reagentes descritos aqui são meramente exemplares e que os equivalentes de tais são conhecidos na técnica.

É fornecido pela presente invenção um método para o tratamento de osteoartrite em um indivíduo mamífero tendo osteoartrite, o método compreende administrar ao dito indivíduo uma quantidade eficaz de um agonista de A3AR.

No contexto da presente invenção o termo "tratamento" compreende tratar a osteoartrite para anular sintomas de doenças, prevenir o desenvolvimento de osteoartrite, assim como controlar e/ou melhorar osteoartrite ou um ou mais sintomas desta. Assim, o tratamento refere-se à administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agonista de A3AR para obter um efeito terapêutico desejado. O efeito terapêutico desejado pode incluir, sem ser limitado a este, melhora da motilidade do indivíduo, diminuição no inchaço e sensibilidade das articulações, redução ou prevenção da deterioração das articulações e do tecido adjacente, redução de qualquer dano irreversível causado por um estágio crônico de osteoartrite, aumento do período de tempo da remissão entre ataques agudos da doença, diminuição da severidade ou cura de osteoartrite, ou fornecimento de osteoartrite na forma de recuperação mais rápida, assim como diminuição de qualquer um dos seguintes sintomas: rigidez, dor e deformidade da articulação, edema na articulação, ondas de calor e hipertrofia anormal das articulações ou prevenção da manifestação de tais sintomas antes que eles ocorram.

No contexto da presente invenção tratamento também inclui prevenção do desenvolvimento de osteoartrite (por exemplo, em indivíduos tendo disposição alta de desenvolver a doença, tais como atletas) assim como reversão do dano causado à cartilagem como um resultado da doença.

Como para o agonista de A3AR, tais compostos são conhecidos na técnica e estão facilmente disponíveis. Geralmente, o agonista de A3AR é qualquer composto que seja capaz de ligar especificamente ao receptor de adenosina A3 (uA3R"), deste modo completa ou parcialmente ativando o dito receptor produzindo deste modo um efeito terapêutico (neste caso particular, um efeito anti-osteoartrítico). O agonista de A3AR é assim uma molécula que exerce seu efeito principal através da ligação e da ativação do A3AR. Isto significa que nas doses que ele está sendo administrado ele essencialmente liga-se a e ativa apenas o A3R.: Em uma forma de realização preferida, o agonista de A3AR tem uma afinidade de ligação (Ki) para o A3AR humano de menos do que 1000 nM, desejavelmente menos do que 500 nM, vantajosamente menos do que 200 nM e ainda menos do que 100 nM, tipicamente menos do que 50 nM, preferivelmente menos do que 20 nM, mais preferivelmente menos do que 10 nM e idealmente menos do que 5 nM. Quanto mais baixa a Ki, mais baixa a dose do agonista de A3AR (que pode ser usada) que será eficaz em ativar o A3R e assim obter um efeito terapêutico.

Deve ser observado que alguns agonistas de A3AR também podem interagir com e ativar outros receptores com afinidades mais baixas (isto é, uma Ki mais alta). Uma molécula será considerada um agonista de A3AR no contexto da invenção (isto é, uma molécula que exerce seu efeito principal através da ligação e da ativação de A3R) se sua afinidade para o A3R for pelo menos 3 vezes (isto é sua Ki ao A3R for pelo menos 3 vezes mais baixa), preferivelmente 10 vezes, desejavelmente 20 vezes e mais preferivelmente pelo menos 50 vezes maior do que a afinidade para qualquer outro dos receptores de adenosina.

A afinidade de agonistas de A3AR para o A3R humano assim como sua afinidade relativa para os outros receptores de adenosina humanos pode ser determinada por vários ensaios, tal como um ensaio de ligação. Exemplos de ensaios de ligação incluem fornecer membranas ou células tendo o receptor e medir a capacidade do agonista de A3AR para substituir um agonista radioativo ligado; utilizar células que apresentam o receptor de adenosina humano respectivo e medir, em um ensaio funcional, a capacidade do agonista de A3AR para ativar ou desativar, conforme for o caso, eventos de sinalização a jusante tais como o efeito em adenilato ciclase medida através do aumento ou diminuição do nível de cAMP; etc. Evidentemente, se o nível administrado de um agonista de A3AR for aumentado tal que seu nível sangüíneo atinja um nível que se aproxima daquele da Ki dos outros receptores de adenosina, a ativação destes receptores pode ocorrer a seguir de tal administração, além da ativação do A3R. Um agonista de A3AR é assim preferivelmente administrado em uma dose tal que o nível sangüíneo que será atingido dará origem essencialmente apenas à ativação de A3R.

A característica de alguns agonistas de A3AR de adenosina e métodos de sua preparação são descritos em detalhe em, inter alia, US 5.688.774; US 5.773.423; US 5.573.772; US 5.443.836; US 6.048.865; WO 95/02604; WO 99/20284; WO 99/06053; WO 97/27173 e WO 01/19360, todos os quais são incorporados aqui por referência.

Os exemplos seguintes são especificados na US 5.688.774 na coluna 4, linhas 67-coluna 6, linha 16; coluna 5, linhas 40 a 45; coluna 6, linhas 21 a 42; coluna 7, linhas 1 a 11; coluna 7, linhas 34 a 36; e coluna 7, linhas 60 a 61:

N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina;

N6-(3-iodobenzil)-9-hidroxietiladenina;

R-N6-(3-iodobenzil)-9-(2,3-diidroxipropil)adenina;

S-N6-(3-iodobenzil)-9-(2,3-diidroxipropil)adenina;

ácido N6-(3-iodobenziladenin-9-il)acético;

N6-(3 -iodobenzil)-9-(3 -cianopropil)adenina;

2-cloro-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina;

2-amino-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina;

2-hidrazido-N6-(3 -iodobenzil)-9-metiladenina;

N6-(3-iodobenzil)-2-metilamino-9-metiladenina;

2-dimetilamino-N6-(3 -iodobenzil)-9-metiladenina;

N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-propilaminoadenina;

2-hexilamino-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina;

N6-(3-iodobenzil)-2-metóxi-9-metiladenina;

N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-metiltioadenina;

N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-(4-piridiltio)adenina;

(1S, 2R, 3S, 4R)-4-(6-amino-2-feniletilamino-9H-purin-9- il)ciclopentano-l,2,3-triol;

(1S, 2R, 3S, 4R)-4-(6-amino-2-cloro-9H-purin-9-il) ciclopentano-l,2,3-triol;

(±)-9-[2a,3a-diidróxi-4β-(N-metilcarbamoil)ciclopent-1 β-il)]- N6-(3 -iodobenzil)-adenina;

2-cloro-9-(2'-amino-2',3'-didesóxi-β-D-5'-metil-arabino- furonamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina;

2-cloro-9-(2' ,3' -didesóxi-2' -fluoro-β-D-5' -metil-arabino furonamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina;

9-(2-acetil-3-desóxi-β-D-5-metil-riboíuronamido)-2-cloro- N6(3-iodobenzil)adenina; 2-cloro-9-(3-desóxi-2-metanossulfonil-P-D-5-metil- ribofuronamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina;

2-cloro-9-(3-desóxi-P-D-5-metil-ribofuronamido)-N6-(3- iodobenzil)adenina;

2-cloro-9-(3,5-1,1,3,3-tetraisopropildissiloxil-P-D-5- ribofuranosil)-N6-(3-iodobenzil)adenina;

2-cloro-9-(2',3'-0-tiocarbonil-P-D-5-metil-riboflironamido)- N6-(3 -iodobenzil)adenina;

9-(2-fenoxitiocarbonil-3-desóxi-P-D-5-metil-ribofuronamido)- 2-cloro-N6-(3 -iodobenzil)adenina;

1 -(6-benzilamino-9H-purin-9-il)-1 -desóxi-N,4-dimetil-P-D- ribofuranosiduronamida;

2-cloro-9-(2,3-didesóxi-P-D-5-metil-ribofuronamido)-N6- benziladenina;

2-cloro-9-(2' -azido-2',3' -didesóxi-P-D-5' -metil-arabino- furonamido)-N6-benzi ladenina;

2-cloro-9-(P-D-eritrofuranosido)-N6-(3-iodobenzil)adenina; N6-(benzodioxanemetil)adenosina;

1 -(6-ftirfurilamino-9H-purin-9-il)-1 -desóxi-N-metil-P-D- ribofuranosiduronamida;

N6- [3 -(L-prolilamino)benzil] adenosina-5' -N-metiluronamida;

N6- [3-(p-alanilamino)benzil] adenosina-5' -N-metiluronamida;

N6-[3-(N-T-Boc-p-alanilamino)benzil]adenosina-5'-N- metiluronamida

6-(N'-fenilidrazinil)purino-9-P-ribofliranosida-5 '-N- metiluronamida;

6-(0-fenilidroxilamino)purino-9-P-ribofuranosida-5'-N- metiluronamida;

9-(β-D-2' ,3'-didesoxieritrofuranosil)-N6- [(3-β- alanilamino)benzil]adenosina;

9-(p-D-eritrofuranosido)-2-metilamino-N6-(3- iodobenzil)adenina;

2-cloro-N-(3-iodobenzil)-9-(2-tetraidrofuril)-9H-purin-6-

amina;

2-cloro-(2'-desóxi-6'-tio-l-arabinosil)adenina; e 2-cloro-(6'-tio-1 -arabinosil)adenina.

Na US 5.773.423 na coluna 6, linha 39, a coluna 7, linha 14,

especificamente divulgados são compostos que incluem a fórmula:

<formula>formula see original document page 11</formula> X1 é RaRbNCX=O), em que Ra e Rb podem ser os mesmos ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila C1- C10, amino, haloalquila C1-C10, aminoalquila C1-C10, e cicloalquila C3-C10;

R2 é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, halo, alcóxi C1-C10, amino, alquenila C2-C10, e alquinila C2-C10; e

R5 é selecionado do grupo que consiste de R- e S-l-feniletila, um grupo benzila não substituído, e um grupo benzila substituído em uma ou mais posições com um substituinte selecionado do grupo que consiste de alquila C1-C10, amino, halo, haloalquila C1-C10, nitro, hidróxi, acetamido, alcóxi C1--C 10, e sulfo.

Compostos mais específicos incluem aqueles da fórmula acima em que Ra e Rb podem ser os mesmos ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de hidrogênio e alquila C1-C10, particularmente quando R2 é hidrogênio ou halo, especialmente hidrogênio.

Compostos específicos adicionais são aqueles compostos em que Ra é hidrogênio e R2 é hidrogênio, particularmente quando R5 é benzila não substituído.

Compostos mais específicos são tais compostos em que Rb é um alquila C1-C10 ou cicloalquila C3-C10, particularmente um alquila C1-C10, e mais particularmente metila.

Especialmente específicos são aqueles compostos onde Ra é hidrogênio, R é alquila C1-C10 ou cicloalquila C3-C10, e R5 é R- ou S-1- feniletila ou um benzila substituído em uma ou mais posições com um substituinte selecionado do grupo que consiste de halo, amino, acetamido, haloalquila C1-C10, e sulfo, onde o derivado de sulfo é um sal, tal como um sal de trietilamônio.

Um exemplo de um composto especialmente preferido divulgado na US 5.773.423 é IB-MECA. Além disso, aqueles compostos em que R2 é um alquenileno C2-C10 da fórmula Rd — C=C — onde Rd é um alquila CrCs são particularmente observados nesta publicação. Também específicos são aqueles compostos em que R2 é exceto hidrogênio, particularmente aqueles em que R2 é halo, alquilamino C1-C10, ou alquiltio C1-C10, e, mais preferivelmente, quando adicionalmente Ra é hidrogênio, Rb é um alquila C1-C10, e/ou R5 é um benzila substituído.

Tais compostos especificamente divulgados incluem 2-cloro- Nó-(3-iodobenzil)-9-[5-(metilamido)-p-D-ribofuranosil]-adenina, N6-P- iodobenzil)-2-metilamino-9-[5-(metilamido)-P-D-ribofuranosil]-adenina, e N6-P -iodobenzil)-2-metiltio-9- [5 -(metilamido)-P-D-ribofuranosil] -adenina,

Além disso, US 5.773.423 divulga na coluna 7, linha 60, à coluna 8, linha 6, agonistas de A3AR como xantino-7-ribosídeos modificados tendo a fórmula: <formula>formula see original document page 13</formula>

em que X é O;

R6 é RaRbNC(=O), em que Ra e Rb podem ser os mesmos ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila C1- C10, amino, haloalquila C1-C10, aminoalquila C1-C10, e cicloalquila C3-C10;

R7 e Rg podem ser os mesmos ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de alquila C1-C10, R- e S-l-feniletila, um grupo benzila não substituído, e um grupo benzila substituído em uma ou mais posições com um substituinte selecionado do grupo que consiste de alquila C1-C10, amino, halo, haloalquila C1-C10, nitro, hidróxi, acetamido, alcóxi C1-C10, e sulfo; e

R9 é selecionado do grupo que consiste de halo, benzila, fenila, e cicloalquila C3-C10.

WO 99/06053 divulga nos exemplos 19 a 33 compostos selecionados de:

N6-(4-bifenil-carbonilamino)-adenosina-5' -N-etiluronamida; N6-(2,4-diclorobenzil-carbonilamino)-adenosina-5'-N-

etiluronamida;

N6-(4-metoxifenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N-

etiluronamida;

N6-(4-clorofenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N-

etiluronamida;

N6-(fenil-carbonilamino)-adenosina-5' -N-etiluronamida; N6-(benzilcarbamoilamino)-adenosina-5'-N-etiluronamida;

N6-(4-sulfonamido-fenilcarbamoil)-adenosina-5'-N-etiluronamida;

N6-(4-acetil-fenilcarbamoil)-adenosina-5'-N-etiluronamida;

N6-((R)-a-feniletilcarbamoil)-adenosina-5'-N-etiluronamida;

N6-((S)-a-feniletilcarbamoi^-adenosina-S'-N-etiluronamida;

N6-S-metil-isoxazol-S-il-carbamoi^-adenosina-S^N- etiluronamida;

N6-(l,3,4-tiadiazol-2-il-carbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida;

-n-propóxi-fenilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida;

De acordo com uma forma de realização da invenção, o agonista de A3AR é um composto que exerce seu efeito principal através da ligação e da ativação do A3AR de adenosina e é um derivado de purina caindo dentro do escopo da fórmula geral (I):

<formula>formula see original document page 14</formula>

em que,

- Rn representa um alquila, hidroxialquila, carboxialquila ou cianoalquila ou um grupo da fórmula geral seguinte (II):

N6-bis-(4-nitrofenilcarbamoil)-adenosina-5'-N-etiluronamida;

e

N6-bis-(5 -cloro-piridin-1 -il-carbamoil)-adenosina- 5' -N- etiluronamida. <formula>formula see original document page 15</formula>

em que:

- Y representa oxigênio, enxofre ou CH2;

- Xn representa H, alquila, ReRfNQ=O)- ou HOR8-, em que

- Re e Rf podem ser os mesmos ou diferentes e são selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila, amino, haloalquila, aminoalquila, BOC-aminoalquila, e cicloalquila ou são unidos juntos para formar um anel heterocíclico contendo dois a quatro átomos de carbono; e

- Rg é selecionado do grupo que consiste de alquila, amino, haloalquila, aminoalquila, BOC-aminoalquila, e cicloalquila;

- X12 é Η, hidroxila, alquilamino, alquilamido ou hidroxialquila;

- X13 e X14 representam independentemente hidrogênio, hidroxila, amino, amido, azido, halo, alquila, alcóxi, carbóxi, nitrilo, nitro, trifluoro, arila, alcarila, tio, tioéster, tioéter, -OCOPh, -OC(=S)OPh ou tanto Xl3 quanto Xl4 são oxigênios conectados a >C=S para formar um anel de 5 membros, ou X12 e X13 formam o anel da fórmula (IH):

<formula>formula see original document page 15</formula>,

onde R' e R" representam independentemente um grupo alquila;

-R12 é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, halo, alquiléter, amino, hidrazido, alquilamino, alcóxi, tioalcóxi, piridiltio, alquenila; alquinila, tio, e alquiltio; e

-R13 é um grupo da fórmula -NR15R16 em que - Ri5 é um átomo de hidrogênio ou um grupo selecionado de alquila, alquila substituído ou aril-NH-C(Z)-, com Z sendo O, S, ou NRa com Re tendo os significados acima; em que quando Ri 5 é hidrogênio do que

- Ri6 é selecionado do grupo que consiste de R- e S-I- feniletila, benzila, feniletila ou grupos anilida não substituído ou substituído em uma ou mais posições com um substituinte selecionado do grupo que consiste de alquila, amino, halo, haloalquila, nitro, hidroxila, acetoamido, alcóxi, e ácido sulfônico ou um sal destes; benzodioxanometila, fururila, L- propilalanil-aminobenzila, β-alanilamino-benzila, T-BOC-β- alanilaminobenzila, fenilamino, carbamoíla, fenóxi ou cicloalquila; ou Ri6 é um grupo da fórmula seguinte:

<formula>formula see original document page 16</formula>

ou quando Ri5 é um alquila ou aril-NH-C(Z)-, depois, R16 é selecionado do grupo que consiste de heteroaril-NRa-C(Z)-, heteroaril-C(Z), alcaril-NRa-C(Z)-, alcaril-C(Z)-, aril-NR-C(Z)- e aril-C(Z)-; Z representando um oxigênio, sulfo ou amina; ou um sal fisiologicamente aceitável do composto acima.

De acordo com uma forma de realização preferida, o agonista de A3AR é um derivado de nucleosídeo da fórmula geral (IV):

<formula>formula see original document page 16</formula> em que X1, R2 e R5 são como definidos acima, e sais fisiologicamente aceitáveis do dito composto.

Os grupos de carboidrato não cíclicos (por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, aralquila, alcarila, alquilamina, etc) que formam parte do substituinte dos compostos da presente invenção são ramificados ou não ramificados, preferivelmente contendo de um ou dois a doze átomos de carbono.

Um grupo específico de agonistas de A3AR são os derivados de N6-benziladenosina-5'-uronamida. Alguns derivados de N6- benziladenosina-5'-uronamida preferidos são N6-2-(4- aminofenil)etiladenosina (APNEA), -amino-3 -iodobenzil) adenosina-5' - (N-metiluronamida) (AB-MECA) e l-desóxi-l-{6-[({3-iodofenil} metil)amino]-9H-purino-9-il} -N-metil-P-D-ribofuranuronamida (IB-MECA) e 2-cloro-N6-(3-iodobenzil)adenosina-5'-N-metiluronamida (Cl-IB-MECA).

De acordo com uma outra forma de realização, o agonista de A3AR pode ser um derivado de óxido de adenosina, tal como N6- benziladenosina-5 '-N-alquiluronamida-N1-óxido ou N6-benziladenosina-5'- N-dialquiluronamida-N1 -óxido, em que a posição 2-purina pode ser substituída com um alcóxi, amino, alquenila, alquinila ou halogênio.

O agonista de A3AR é administrado em quantidades que são suficientes para obter um efeito anti-osteoartrítico. Como será avaliado, a quantidade do agonista de A3AR dependerá da severidade da doença, do regimento terapêutico intencionado e da dose terapêutica desejada. Por via de exemplo, quando a dose for 1 mg por dia e o regimento de administração desejado for administração de 1 vez por dia, a quantidade do agonista de A3AR em uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo será de 1 mg. Onde é intencionado dividir esta dose ao dia em 2 administrações ao dia, a quantidade do agente ativo na composição farmacêutica será de 0,5 mg.

Uma quantidade eficaz para obter o efeito desejado é determinada por considerações conhecidas na técnica. Uma "quantidade eficaz de anti-osteoartrítico" para propósitos aqui deve ser eficaz para obter um efeito terapêutico, o efeito terapêutico sendo como definido mais acima.

E avaliado que a quantidade eficaz depende de uma variedade de fatores incluindo a afinidade do agonista de A3AR escolhido ao A3AR, seu perfil de distribuição dentro do corpo, uma variedade de parâmetros farmacológicos tais como meia vida no corpo, em efeitos colaterais indesejados, se quaisquer, em fatores tais como idade e sexo do indivíduo a ser tratado, etc. A quantidade eficaz tipicamente é testada em estudos clínicos tendo o objetivo de descobrir a faixa de dose eficaz, a dose tolerada máxima e a dose ideal. A maneira de conduzir tais estudos clínicos é bem conhecida a um pessoa hábil na técnica de desenvolvimento clínico.

Uma quantidade às vezes também pode ser determinada com base em quantidades mostradas serem eficazes em animais. E bem conhecido que uma quantidade de X mg/Kg administrada a ratos pode ser convertida a uma quantidade equivalente em uma outra espécie (notavelmente em seres humanos) pelo uso de uma das equações de conversões possíveis bem conhecidas na técnica. Exemplos de equações de conversão são como segue:

Conversão I:

<table>table see original document page 18</column></row><table>

A área de Superfície Corporal dependente da conversão da

Dose: Rato (150 g) para Homem (70 Kg) é 1/7 da dose do rato. Isto significa que no presente caso 0,001 a 0,4 mg/Kg em ratos iguais a cerca de 0,14 a 56 micrograma/Kg em seres humanos; assumindo um peso médio de 70 Kg, isto traduziria-se em uma dosagem absoluta de cerca de 0,01 a cerca de 4 mg. Conversão Π:

Os fatores de conversão seguintes: Camundongo = 3, Rato = 67. Multiplicar o fator de conversão pelo peso do animal indo de mg/Kg a mg/m para equivalente de dose humana.

<table>table see original document page 19</column></row><table>

De acordo com esta equação o equivalente de quantidades de 0,001 a 0,4 mg/Kg em ratos para seres humanos são 0,16 a 64 μg/Kg; isto é, uma dose absoluta para uma pesagem humana de cerca de 70 Kg de cerca de 0,0 lia cerca de 4,4 mg, similar à faixa indicada na Conversão I.

Conversão III:

Uma outra alternativa para conversão é ajustando-se a dose para produzir o mesmo nível plasmático ou AUC como aquele obtido a seguir da administração a um animal.

Assim, com base na medição feita em camundongos a seguir da administração oral de IB-MECA (um agonista de A3AR) e com base em tais medições feitas em seres humanos em um estudo clínico em que IB- MECA foi fornecido a voluntários machos saudáveis foi concluído que uma dose de 1 micrograma/Kg a 400 microgramas/Kg em camundongos em que IB-MECA foi eficaz e é equivalente a uma dose humana de cerca de 0,14 a 57 microgramas/Kg, isto é, uma dose total para um indivíduo de 70 Kg de 0,01 a 4 mg.

Além disso, com base nos métodos da conversão acima, uma faixa de dosagem preferida para IB-MECA e Cl-IB-MECA (um outro agonista de A3AR) seria menor do que 4 mg, tipicamente dentro da faixa de cerca de 0,01 a cerca de 2 mg (cerca de 0,14 a 28 microgramas/Kg, respectivamente) e desejavelmente dentro da faixa de cerca de 0,1 a 1,5 mg (cerca de 1,4 a 21 microgramas/Kg, respectivamente). Esta dose pode ser administrada uma, duas ou em várias vezes ao dia.

Estudos em ser humano como descritos na publicação do pedido de patente US N- 20050101560 e por Fishman et ai. [Fishman P. et al., Tolerability, pharmacokinetics, and concentration-dependent hemodinamic effects of oral CFlOl (ΓΒ-MECA oral), an A3 adenosine receptor agonist, in healthy young men Int J Clin Pharmacol Ther. 42:534- 542, 2004] mostraram que o nível de IB-MECA decai no plasma humano com uma meia vida de cerca de 8 a 10 horas, quando comparada a uma meia vida de apenas 1,5 horas em camundongos, no caso de administração ao dia múltipla, a correção nas dosagens para necessidades de efeitos acumulativos precisa ser feita às vezes (uma dose subseqüente é administrada antes que o nível de alguma prévia fosse decaído e assim, existe um aumento do nível plasmático sobre aquele que ocorre em uma dose única. Na base das ditas experiências em ser humano a administração duas vezes ao dia parece ser um regimento de administração preferido. Entretanto isto não exclui outros regimentos de administração.

De acordo com uma forma de realização da invenção, a administração do agonista de A3AR é preferivelmente administração ao dia, entre uma e algumas vezes ao dia, preferivelmente uma ou duas vezes ao dia, a dose em cada administração estando na faixa de entre cerca de 1 a cerca de 1000 μg/kg de peso corporal, preferivelmente menos do que 400 μg/kg de peso corporal, e ainda menos do que 200 μg/kg de peso corporal. Tipicamente, a dose do agonista de A3AR está em uma faixa de 1 a 100 μg/kg de peso corporal.

O agonista de A3AR é formulado em uma composição farmacêutica. Uma "composição" no contexto da invenção é intencionada a significar uma combinação do(s) agente(s) ativo(s), junto(s) ou separadamente, com um carreador farmaceuticamente aceitável assim como outros aditivos. O carreador às vezes pode ter o efeito de melhorar a liberação ou penetração do ingrediente ativo ao tecido alvo, para melhorar a estabilidade do medicamento, para reduzir taxas de liberação, para melhorar propriedades de liberação lenta, para reduzir efeitos colaterais não desejados etc. O carreador também pode ser uma substância que estabiliza a formulação (por exemplo, um conservante), fornecendo-se a formulação com um sabor comestível, etc. Por exemplos de carreadores, estabilizadores e adjuvantes, ver E. W. Martin, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, MacK Pub Co (Junho de 1990).

O termo "carreador farmaceuticamente aceitável" no contexto da presente invenção denota qualquer um de materiais inertes, não tóxicos, que não reagem com o agonista de A3AR e que podem ser adicionados às formulações como diluentes, carreadores ou para dar forma ou consistência à formulação.

A composição da presente invenção é administrada e dosada de acordo com boa prática médica, considerando a condição clínica do indivíduo individual, o sítio e método de administração, programação de administração, idade, sexo, peso corporal do indivíduo e outros fatores conhecidos aos profissionais médicos. A escolha do carreador será determinada em parte pelo ingrediente ativo particular, assim como pelo método particular usado para administrar a composição. Conseqüentemente, existe uma variedade ampla de composições farmacêuticas adequadas da presente invenção.

O agonista de A3AR pode ser administrado ao indivíduo por uma variedade de modos de liberação como conhecido na técnica. E preferível entretanto que o agonista de A3AR seja administrado oralmente. O carreador será selecionado com base na forma desejada da formulação. Exemplos típicos de carreadores adequados para administração oral incluem (a) soluções líquidas, onde uma quantidade eficaz do agonista de A3AR é dissolvida em diluentes, tais como água, solução salina, sucos naturais, álcoois, xaropes, etc.; (b) cápsulas (por exemplo, o tipo de gelatina de casca dura ou mole habitual contendo, por exemplo, tensoativos, lubrificantes, e cargas inertes), tabletes, pastilhas expectorantes (em que o agonista de A3AR está em um sabor, tal como sacarose ou o agonista de A3AR está em uma base inerte, tal como gelatina e glicerina), e pastilhas, cada uma contendo uma quantidade predeterminada de agonista de A3AR como sólidos ou grânulos; (c) pós; (d) suspensões em um líquido apropriado; (e) emulsões adequadas; (f) formulação de lipossomo; e outros.

O agonista de A3AR também pode ser formulado para aplicação tópica. Para este fim, o agonista de A3AR é combinado com um carreador fisiologicamente aceitável para obter um creme, uma loção, um ungüento, um gel, um hidrogel, uma emulsão água-em-óleo e semelhantes, adequados para aplicação tópica, como conhecidos àqueles habilitados na técnica.

Como observado acima, o uso terapêutico de um agonista de A3AR às vezes pode estar em combinação com outros medicamentos tais como metotrexato (MTX), esteróides, NSAIDS, e outros. Em um tal tratamento de combinação o outro medicamento e o agonista de A3AR podem ser fornecidos aos indivíduos ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, dependendo do programa de dosagem de cada um dos medicamentos. MTX, por exemplo, tipicamente é fornecido aos indivíduos uma vez semanalmente em doses que variam entre 5 e 25 mg, cada dose semanalmente, oral ou parenteralmente. Um agonista de A3AR tipicamente é fornecido em um programa de dosagem mais freqüente, por exemplo uma ou duas vezes ao dia.

A invenção foi descrita em uma maneira ilustrativa, e deve ser entendido que a terminologia que foi usada, é intencionada a estar na natureza de palavras de descrição ao invés de limitação. Obviamente, muitas modificações e variações da presente invenção são possíveis na luz do ensinamento acima. Portanto, deve ser entendido que dentro do escopo das reivindicações anexas, a invenção pode ser praticada de outro modo do que como especificamente descrito em seguida. FORMAS DE REALIZAÇÃO EXEMPLARES

Exemplo 1

O efeito de IB-MECA (aqui às vezes CF101) sozinho ou em combinação com MTX5 na proliferação dos sinoviócitos tipo fibroblasto humano ou de rato (FLS) foi testado. Um efeito na proliferação de FLS é sugestivo de efeito terapêutico potencial em osteoartrite. Culturas de FLS em ser humano

Amostras de fluido sinovial humano foram coletadas de indivíduos com osteoartrite (OA) sofrendo paracentese. O fluido foi centrifugado e o sobrenadante removido. As células foram recolocadas em suspensão em DMEM contendo colagenase tipo I (4 mg/ml), durante 2 horas, e vigorosamente agitadas a 37°. As células liberadas no sobrenadante foram colhidas por centrifugação e foram cultivadas em DMEM contendo 10 % de FBS, 2 mM de glutamina, 100 U/ml de penicilina, 100 μg/ml de estreptomicina, 1 % de aminoácidos não essenciais, 1 % de piruvato de sódio e 20 nM de tamoão HEPES em 37° C. incubadora de COo a 5 %. Deoois de cultivar durante a noite, células não aderentes foram removidas. As células aderentes (FLS) foram subcultivadas em uma razão de 1:2, e as células de passagens 4 a 10 foram usadas nos experimentos.

O efeito de CFlOl sozinho ou em combinação com MTX, na proliferação do FLS foi testado utilizando um ensaio de MTT. As células (células de 5 x 104/ml) foram incubadas em placas microtituladoras de 96 reservatórios durante 72 horas no meio de crescimento. Nas últimas 24 horas CF101 (10 nM) foram adicionados às culturas.

Culturas de Sinoviócitos tipo Fibroblasto (FLS) de Rato

Tecido sinovial de ratos com artrite induzida adjuvante foi coletado. O tecido foi moído e submetido para digestão em 4 mg/ml de colagenase tipo I e 0,25 p/v de tripsina em DMEM. A mistura foi agitada vigorosamente durante 4 horas a 37°. As células liberadas foram separadas do sobrenadante por centrifiigação e cultivadas em DMEM contendo 15 % de FCS, 2 mM de glutamina, 100 U/ml de penicilina, 100 μg/ml de estreptomicina em 37° C, incubadora de CO2 a 5 %. Depois da incubação durante a noite as células não aderentes foram removidas. As células aderentes (FLS) foram sub-cultivadas em uma razão de 1:2, e as células de passagens 4 a 10 foram usadas nos experimentos.

O efeito de CFlOl sozinho ou em combinação com MTX, na proliferação do FLS foi testado utilizando um ensaio de MTT. As células (células de 5 χ 10/ml) foram incubadas em placas microtituladoras de 96 reservatórios durante 72 horas no meio de crescimento. Nas últimas 24 horas CFlOl (10 nM) foram adicionados às culturas.

Resultados

As Figs. IA e IB mostram, respectivamente, o efeito de CFlOl sozinho, MTX sozinho e uma combinação de CFlOl e MTX na proliferação de FLS humano e de rato, respectivamente, como avaliado pelo ensaio de MTT. Como mostrado, a üorcentaeem de inibicão auando comparada ao controle foi significante (controle acima de 20%). Como pode claramente ser observado, tanto CFlOl sozinho ou CFlOl em combinação com MTX exibiram um efeito inibitório acentuado no FLS.

Exemplo 2

No estudo seguinte o efeito de IB-MECA (aqui, às vezes, CF101) no desenvolvimento de osteoartrite experimental (OA) foi determinado. Neste estudo o modelo experimental de mono-idoacetato (MIA) foi utilizado. O MIA é um modelo experimental de rato que rapidamente reproduz a característica clínica e patológica de OA. MIA é um inibidor de glicólise que foi mostrado para induzir mortalidade de condrócito in vitro. Injeção intra-articular de MIA induz mortalidade de condrócito na cartilagem articular do roedor.

Especificamente, ratos Wistar machos (-200 gr) (laboratórios Harlan) foram anestesiados com Isoflurano e a pata direita foi flexionada em um ângulo de 90° do joelho. O MIA foi dissolvido em solução salina fisiológica e 2 mg, em um volume de 50 μL foram injetados intra-articular da pata direita de cada animal, usando uma agulha de 27 calibre, 0,5 polegada.

O tratamento com CF101, 100 μg/kg, Per Oz (PO), duas vezes ao dia foi iniciado em 7 dia pós injeção.

O diâmetro do joelho foi medido usando calibrador digital calibrado adaptado reforçando-se as extremidades para medir o diâmetro do joelho. Os resultados apresentados na Fig. 2 mostram o delta entre o diâmetro do joelho injetado com MIA (Joelho direito) e o diâmetro do joelho não injetado com MIA (Joelho esquerdo) dentro do mesmo animal. O grupo do controle é comparado ao grupo tratado com CF101 (5 animais em cada grupo).

Como mostrado na Fig. 2, CF101 significantemente inibiu o desenvolvimento do inchaço do tecido em comparação ao grupo de controle (P=9,48317E-06).

Além disso, exame radiográfico de joelhos representativos revelou a região esclerótica adjacente à linha epifisária tibial, afinamento da epífise e exófito pequeno nos animais tratados com veículo. Na linha epifisária tibial normal de animais tratados com CF101 sem esclerose foi observado (Figuras 3A a 3D, nas Figuras 3A e 3B representam o grupo de controle não tratado e Figuras 3C e 3D representam o grupo tratado com CF101).

Para explorar o fato do A3AR e proteínas de sinalização de chave a jusante participando no NF-kB e vias de sinalização de Wnt, extratos de proteína de articulações do joelho de controle e animal tratado com CF101 foram submetidos à análise de Western blot. A3AR foi altamente expressado em células extraídas das articulações do joelho de rato dos ratos com OA e infra-regulado no tratamento com CF101, demonstrando que a ativação do receptor ocorreu. Isto foi seguido por infra-regulação no nível de expressão de PI3K, IKK e NF-kB, indicando que no tratamento com CFlOl a via de sinalização de NF-kB foi inibida. Além disso, o nível de expressão de GSK- 3 β, um elemento de chave da via de sinalização de Wnt5 foi supra-regulado no tratamento com CFlOl (Figuras 4A a 4E).

Estes dados assim claramente mostram que CFlOl, uma molécula I oralmente biodisponível pequena capaz de melhorar processos inflamatórios nas articulações do joelho de indivíduos com OA. O nível de expressão de A3AR alto nos ratos com OA e a desregulação da via de sinalização de NF-kB e Wnt induzida por tratamento com CFlOl reforça a sugestão para utilizar A3AR para combater OA.

Claims

1. Uso de um agonista de receptor de adenosina A3 (A3AR), caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica indicada para o tratamento de um indivíduo mamífero tendo osteoartrite.

2. Uso de um agonista A3AR, caracterizado pelo fato de ser para o tratamento de um indivíduo mamífero tendo osteoartrite.

3. Uso de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o dito agonista de A3AR é selecionado de IB-MECA e Cl-EB- MECA.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica indicada para o tratamento de um indivíduo mamífero tendo osteoartrite, e que está sendo tratado com um outro medicamento.

5. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o dito um outro medicamento é metotrexato (MTX).

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o dito mamífero é um indivíduo humano.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1,3 a -6, caracterizado pelo fato de que ser para preparação de uma composição farmacêutica em uma forma adequada para administração oral.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a dose de administração do dito agonista de A3AR é na faixa entre cerca de 1 a cerca de 1000 μg/kg de peso corporal.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a dose de administração do dito agonista de A3AR é menor do que 400 μg/kg de peso corporal.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a dose de administração do dito agonista de A3AR é menor do que 200 μg/kg de peso corporal.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que dose de administração do dito agonista de A3AR é na faixa entre cerca de 1 a cerca de 1000 \x.gfk.g de peso corporal.