BR112021013084A2 - Ligante do receptor de adenosina a3 (a3ar) para uso na obtenção de pelo menos um efeito de perda de gordura, composição farmacêutica, método para tratar um indivíduo, e kit - Google Patents

Abstract

ligante do receptor de adenosina a3 (a3ar) para uso na obtenção de pelo menos um efeito de perda de gordura, composição farmacêutica, método para tratar um indivíduo, e kit. a presente revelação diz respeito a um ligante do receptor de adenosina a3 (a3ar) para uso na obtenção de pelo menos um efeito de perda de gordura selecionado dentre: redução do peso do indivíduo; redução da massa de gordura corporal no indivíduo; tratamento da obesidade no indivíduo e inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo. a revelação também diz respeito às composições farmacêuticas, métodos de tratamento e kits que compreendem o ligante do a3ar.

Description

LIGANTE DO RECEPTOR DE ADENOSINA A3 (A3AR) PARA USO NA OBTENÇÃO DE PELO MENOS UM EFEITO DE PERDA DE GORDURA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO, E

KIT CAMPO TECNOLÓGICO

[001] A presente revelação diz respeito aos usos médicos de ligantes do A3AR.

ANTERIORIDADE

[002] As referências consideradas relevantes como antecedentes para a matéria aqui divulgada estão listadas abaixo: - Publicação de Pedido Internacional de Patente NO WO04/007519; - Publicação de Pedido Internacional de Patente NO WO2013/111132; - Publicação de Pedido Internacional de Patente NO WO/17090036.

[003] O reconhecimento das referências acima não deve ser interpretado como significando que as referências são de alguma forma relevantes para a patenteabilidade da matéria aqui revelada.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] A obesidade é uma doença complexa que envolve uma quantidade excessiva de gordura corporal que é considerada um fator importante para a saúde, às vezes uma preocupação de risco à vida nas sociedades ocidentais.

[005] A obesidade resulta de um desequilíbrio entre ingestão de alimentos, metabolismo basal e gasto de energia. Em nível individual, múltiplas causas endógenas ou ambientais podem levar à obesidade. Entretanto, na maioria dos casos, uma combinação de ingestão calórica excessiva e disponibilidade de refeições altamente energéticas é considerada o principal contribuinte para a obesidade.

[006] Embora a perda de peso possa melhorar ou prevenir os problemas de saúde associados à obesidade, existem situações em que é necessário combinar procedimentos de perda de peso com medicação.

[007] A publicação de pedido de patente internacional no WO04/007519 descreve compostos que são agonistas dos receptores de adenosina A1 parciais ou completos, e sua utilização no tratamento de mamíferos para vários estados patológicos, incluindo distúrbios diabéticos, obesidade e modificação da função dos adipócitos.

[008] A Publicação de Pedido de Patente Internacional No WO2013/111132 descreve o uso de 2-Cloro-N6- (3-iodobenzil)-adenosina-5'-N-metiluronamida (Cl-IB-MECA, CF102) Cl-IB-MECA para o tratamento do carcinoma hepatocelular (CHC) e para a manutenção da função hepática em um indivíduo com uma hepatopatia crônica.

[009] A Publicação de Pedido de Patente Internacional No WO17/090036 descreve o uso de ligantes do A3AR, especificamente o Cl-IB-MECA, para reduzir o acúmulo de gordura ectópica, particularmente no fígado gorduroso e, especificamente, para tratar a esteatose hepática não alcoólica (DHGNA).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[010] A presente revelação provê, de acordo com um primeiro de seus aspectos, um ligante do receptor de adenosina A3 (A3AR) para uso em qualquer uma das seguintes indicações:

- redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - redução do nível de adipócitos em um indivíduo; e - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

[011] A presente revelação provê, de acordo com um segundo aspecto, uma composição farmacêutica que possui como princípio ativo um ligante do A3AR em uma quantidade eficaz para obter pelo menos um efeito de perda de gordura selecionado a partir de: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - redução do nível de adipócitos em um indivíduo; e - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

[012] A presente revelação também provê um método de tratamento, o método compreendendo administração a um indivíduo com necessidade de uma quantidade de um ligante do A3AR, sendo a quantidade eficaz para obter pelo menos um efeito de perda de gordura selecionado a partir de: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - redução do nível de adipócitos em um indivíduo; e - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

[013] Em alguns exemplos, o ligante do A3AR é um agonista do A3AR, de preferência 2-cloro-N6-(3- iodobenzil)- adenosina-5′-N-metiluronamida (Cl-IB-MECA, aqui também denominado CF102).

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[014] Para melhor compreender a matéria aqui revelada e exemplificar como ela pode ser realizada na prática, as realizações serão agora descritas apenas a título de exemplo não limitativo, com referência aos desenhos anexos, em que: − A figura 1 é um gráfico de barras mostrando a inibição da proliferação de células adiposas usando duas doses de Cl-IB-MECA (CF102) em relação a um grupo de controle (RPMI+DMSO); − As figuras 2A-2B são imagens microscópicas mostrando o acúmulo de gotículas lipídicas produzidas pelos adipócitos 3T3-L1;. A Fig. 2A mostra o acúmulo após tratamento apenas com veículo; e a Fig. 2B mostra o nível de acúmulo após tratamento das células com 5nM de Cl-IB-MECA; − A figura 3 é um gráfico de barras mostrando a densidade óptica do acúmulo de gotículas lipídicas produzidas por adipócitos 3T3-L1 após o tratamento de adipócitos 3T3-L1 com 5nM de Cl-IB-MECA em comparação a um grupo controle (DMEM alta glicose+10% de FBS); − As figuras 4A-4B mostram a alteração no peso dos camundongos alimentados com dieta regular durante todo o período de estudo. Na semana 12 foi iniciado o tratamento com CF102 ou veículo (Figura 4A) ou mudança no peso dos camundongos alimentados com dieta rica em gordura (HFD) durante todo o período de estudo. Na semana 12 foi iniciado o tratamento com CF102 ou veículo (Figura 4B); − A figura 5 é um gráfico que mostra o efeito do modulador alostérico do A3AR, CF602, sobre o peso corporal em um modelo de rato experimental de diabetes induzido pela STZ.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[015] A presente revelação se baseia no achado de que 2-cloro-N6-(3-iodobenzil)-adenosina-5′-N- metiluronamida (Cl-IB-MECA, aqui também denominado CF102), agonista do receptor A3 de adenosina (A3AR) com alta afinidade e seletividade ao A3AR, inibiu a proliferação de adipócitos em um modelo de proliferação de adipócitos em um modelo invitro.

[016] Esta inesperada inibição foi demonstrada, entre outros, pela redução do nível de adipócitos (Figura 1) e pela redução do acúmulo de lipídios produzidos pelos adipócitos 3T3-L1 (Figuras 2A-2B e 3).

[017] Além disso, o efeito inesperado do Cl-IB- MECA foi exibido em uma perda de peso estatisticamente significativa em camundongos com dieta rica em gordura.

[018] Também, inesperadamente, a perda de peso foi igualmente exibida em um modelo animal para diabéticos, que é uma complicação conhecida da obesidade no tratamento com um modulador alostérico do A3AR N-(3,4-Dicloro-fenil)-2- ciclohexil-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina (referido às vezes pela abreviação LUF6000 ou CF602).

[019] Com base nestes achados, os inventores concluíram que um ligante com alta afinidade e seletividade ao A3AR, seja um agonista seletivo do A3AR ou um modulador alostérico seletivo do A3AR, é uma ferramenta eficaz para obter um efeito terapêutico benéfico em qualquer uma ou na combinação dos seguintes: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - redução do nível de adipócitos em um indivíduo; e - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

[020] Sem se ater à teoria, os efeitos acima são considerados ligados entre si, direta ou indiretamente, pelo efeito inibidor que o ligante tem sobre a proliferação de adipócitos e, portanto, são denominados coletivamente “efeitos de perda de gordura”.

[021] No contexto da presente revelação, cada um dos efeitos acima ou qualquer combinação de dois ou mais desses efeitos, devem ser considerados uma realização separada.

[022] Assim, a presente revelação provê um ligante do A3AR para uso na obtenção de qualquer um dos efeitos de perda de gordura acima, bem como composições farmacêuticas utilizando o ligante do A3AR para uso na obtenção de quaisquer efeitos de perda de gordura acima e métodos de tratamento de um indivíduo que necessite de quaisquer efeitos de perda de gordura acima; o tratamento também abrange a prevenção de ganho de gordura, como discutido mais adiante.

[023] Em um exemplo, o ligante do A3AR serve para uso no tratamento de um indivíduo que sofre de obesidade.

[024] Em um outro exemplo, o ligante do A3AR serve para uso na indução ou promoção da perda de peso em um indivíduo.

[025] Ainda em um outro exemplo, o ligante do A3AR serve para uso na redução do nível de adipócitos em um indivíduo.

[026] Ainda em outro exemplo, o ligante do A3AR serve para inibição da proliferação de adipócitos.

[027] No contexto da presente revelação, quando se refere à perda de peso ou ao tratamento da obesidade, deve ser entendido como referindo-se de forma equivalente à redução de tecidos adiposos, como os tecidos adiposos que se destinam a armazenar gordura, ou seja, gordura subcutânea e/ou periférica, e excluindo-se a gordura ectópica, como a gordura ectópica em um tecido hepático. Em alguns exemplos, a presente revelação exclui a redução de tecido adiposo ectópico e, especificamente, tecido adiposo no fígado.

[028] Em um exemplo preferido, o ligante do A3AR é usado para tratar um indivíduo com excesso de gordura corporal, particularmente um indivíduo que sofre de obesidade.

[029] Em alguns exemplos, a redução da massa de gordura corporal é demonstrada por uma redução da gordura periférica, em particular redução dos tecidos adiposos.

[030] Em alguns outros exemplos, a redução da massa de gordura corporal é demonstrada pela redução da produção de lipídios de adipócitos 3T3-L1.

[031] O excesso de gordura corporal pode ser determinado de acordo com o Índice de Massa Corporal (IMC). Um indivíduo com IMC acima de 25 é considerado como tendo excesso de gordura corporal, e IMC acima de 30 considera-se que o indivíduo sofre de obesidade.

[032] O efeito do tratamento, por exemplo, a redução dos mensurandos de acordo com a presente revelação, por exemplo, peso, massa gorda corporal e/ou nível de adipócitos, pode ser determinada por seus valores tomados em dois timepoints diferentes. Em alguns exemplos, o primeiro timepoint é anterior ao início do tratamento e o segundo timepoint é durante o tratamento.

[033] Em alguns exemplos, os dois timepoints são durante o tratamento. A diferença de tempo entre o primeiro timepoint e o segundo pode ser, por exemplo, um dia, uma semana, um mês e até mesmo um ano, em que entre o indivíduo recebe o ligante do A3AR, de acordo com qualquer uma das realizações da presente revelação.

[034] Ao se referir a uma redução de um valor de um dos mensurandos, deve-se entender que a redução do valor é de qualquer forma considerada pelo médico como significativa. Pode ser de 1% em relação a um timepoint de referência pré-determinado, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60% ou, às vezes, acima de 70%. Deve-se observar que entre um timepoint de referência e um timepoint de avaliação pode haver diversos timepoints em que são feitas mensurações do valor.

[035] Em alguns exemplos, o timepoint de referência é anterior ao início do tratamento. Em alguns outros exemplos, o timepoint de referência é um ponto durante o tratamento.

[036] Em alguns exemplos, o timepoint de avaliação é um timepoint definido como sendo o final do tratamento. Em alguns outros exemplos, o timepoint da avaliação é um ponto durante o tratamento, que é subsequente ao timepoint de referência.

[037] Deve-se notar que entre os dois timepoints o indivíduo está recebendo o ligante do A3AR. Entretanto, o tratamento com o ligante do A3AR não precisa ser crônico, por exemplo, durante todo o período, e pode ser que o indivíduo o receba periodicamente.

[038] Em um exemplo, o tratamento com o ligante do A3AR é tratamento crônico, a saber, durante todo o período de tratamento.

[039] No contexto da presente revelação, “ligante do receptor de adenosina A3” ou “ligante do A3AR” denota qualquer composto que afete direta (por exemplo, através do local de ligação do receptor) ou indiretamente (por exemplo, através de um local de ligação alostérica) a atividade do receptor de adenosina A3, incluindo a ativação total ou parcial do receptor de adenosina A3.

[040] O ligante do A3AR, de acordo com a presente revelação, é uma molécula que exerce seu efeito principal através da atividade do A3AR, independentemente de a ativação ser através do local de ligação ou do local de ligação alostérica.

[041] O ligante do A3AR tem alta afinidade e seletividade ao A3AR. Isso significa que, nas doses que está sendo administrado, ele afeta essencialmente apenas o A3AR.

[042] A especificidade e alta afinidade do ligante ao receptor de adenosina A3 proporcionam um efeito benéfico sobre a ativação dos outros receptores de adenosina, como o receptor de adenosina A1, conhecido por apresentar, entre outros, efeitos colaterais cardiovasculares que estão ausentes quando se usa um ligante do A3AR. De fato, pesquisas demonstraram que o ligante do A3AR apresenta um efeito protetor, entre outros, efeito neuroprotetor, efeito quimioprotetor, efeito cardioprotetor e efeito hepatoprotetor.

[043] Em um exemplo, o “ligante do receptor de adenosina A3" é um agonista do A3AR.

[044] Em um outro exemplo, o “ligante do receptor de adenosina A3” é um modulador alostérico do A3AR (também denominado efetor alostérico).

[045] Ao se referir ao “agonista do receptor de adenosina A3” ou “agonista do A3AR”, deve ser entendido como qualquer ligante capaz de se ligar especificamente ao receptor de adenosina A3, assim ativando total ou parcialmente o receptor de adenosina A3.

[046] Uma molécula será considerada um agonista do A3AR no contexto da presente revelação (isto é, uma molécula que exerce seu efeito principal através da ligação e ativação do A3AR) se sua afinidade com o A3AR for pelo menos 3 vezes (isto é, seu Ki para A3AR for pelo menos 3 vezes menor), de preferência 10 vezes, desejavelmente 20 vezes e, ainda mais de preferência pelo menos 50 vezes maior do que a afinidade com qualquer outro receptor de adenosina (ou seja, A1, A2a e A2b).

[047] A afinidade de um agonista do A3AR com o A3AR humano, bem como sua relativa afinidade com os outros receptores de adenosina humana, pode ser determinada por uma série de ensaios, como um ensaio de ligação. Os exemplos de ensaios de ligação incluem prover membranas que contenham um receptor e medir a capacidade do agonista do A3AR de deslocar um agonista radioativo ligado; utilizar células que exibem o respectivo receptor de adenosina humana e medir, em um ensaio funcional, a capacidade do agonista do A3AR de ativar ou desativar, conforme o caso, eventos de sinalização a jusante, tais como o efeito sobre a adenilato ciclase medido através do aumento ou diminuição do nível de cAMP; etc. Se o nível administrado de um agonista do A3AR for aumentado de tal forma que seu nível sérico atinja um nível próximo ao dos Ki dos receptores de adenosina A1, A2a e A2b, a ativação destes receptores pode ocorrer seguindo aquela administração, além da ativação do A3AR. Um agonista A3AR é assim administrado preferencialmente a uma dose na qual o nível sérico seja tal que basicamente só o A3ARserá ativado.

[048] Em um exemplo, o agonista do A3AR tem uma afinidade de ligação (Ki) com o A3AR humano na faixa de menos de 100 nM, normalmente menos de 50 nM, de preferência menos de 20 nM, mais de preferência ainda menos de 10 nM e, idealmente, menos de 5 nM. Particularmente preferidos são os agonistas do A3AR que têm um Ki com o A3AR humano de menos de 2 nM e, desejavelmente, menos de 1 nM.

[049] No contexto da presente revelação, deve ser entendido que alguns agonistas do A3AR também podem interagir e ativar outros receptores de adenosina, no entanto, com afinidades mais baixas (a saber, um Ki mais alto).

[050] Em alguns exemplos, o agonista do A3AR é uma molécula que tem uma espinha dorsal de purina. O composto contendo purina pode ser determinado como um agonista do A3AR com base em ensaios de atividade aceitáveis entre estrutura e função.

[051] As características de alguns agonistas do A3AR a serem usados de acordo com a presente revelação e seus métodos de preparação são descritos em detalhes, entre outros, nos documentos de patente US 5.688.774; US 5.773.423, US

5.573.772, US 5.443.836, US 6.048.865, WO 95/02604, WO 99/20284, WO 99/06053, WO 97/27173 e WO 01/19360, todos pelo presente incorporados por referência.

[052] De acordo com alguns exemplos da presente revelação, o agonista do A3AR é um derivado de purina que se enquadra no escopo da fórmula geral (I): R13

N

N (I) N N R12 R11 em que, -R11 representa uma alquila, hidroxi-alquila, carboxi-alquila ou ciano-alquila ou um grupo da seguinte fórmula geral (II):

Y X11 X12 (II) X13 X14 em que: - Y representa oxigênio, enxofre ou CH2; - X11 representa H, alquila, ReRfNC(=O)- ou HORg-, em que

- Re e Rf podem ser iguais ou diferentes e são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, amino, haloalquila, aminoalquila, BOC-aminoalquila e cicloalquila, ou são unidos para formar um anel heterocíclico contendo dois a cinco átomos de carbono; e - Rg é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila, amino, haloalquila, aminoalquila, BOC-aminoalquila e cicloalquila; - X12 é H, hidroxila, alquilamina, alquilamida ou hidroxialquila; - X13 e X14 representam independentemente hidrogênio, hidroxila, amino, amido, azida, halo, alquila, alcóxi, carboxi, nitrilo, nitro, triflur, arila, alcarila, tio, tioéster, tioéter, -OCOPh, -OC(=S)OPh ou ambos X13 e X14 são oxigênios conectados a >C=S para formar um anel de 5 membros, ou X12 e X13 formam o anel da fórmula (III):

O R'Si (III)

O R''Si O em que R' e R'' representam independentemente um grupo alquila; - R12 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquil éter, amino, hidrazido, alquilamino, alcóxi, tioalcóxi, piridiltio, alquenila; alquinila, tio e alquiltio; e - R13 é um grupo da fórmula –NR15R16, em que - R15 é um átomo de hidrogênio ou um grupo selecionado a partir de alquila, -NH-C(Z)- substituído por alquila ou arila, sendo Z sendo O, S, ou NRa com Re tendo os significados acima; em que quando R15 é hidrogênio, então - R16 é selecionado a partir do grupo que consiste nos grupos R e S-1-feniletil, benzila, feniletila ou anilida não substituídos ou substituídos em uma ou mais posições por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em alquila, amino, halo, haloalquila, nitro, hidroxila, acetamido, alcóxi e ácido sulfônico ou um sal deste; benzodioxanemetila, fururila, L-propilalanil- aminobenzila, β- alanilamino-benzila, T-BOC-β-alanilaminobenzila, fenilamino, carbamoíla, fenoxi ou cicloalquila; ou R16 é um grupo da seguinte fórmula (IV):

O O NH2

N N

H H (IV) ou quando R15 é uma alquila ou aril-NH-C(Z)-, então, R16 é selecionado a partir do grupo que consiste em heteroaril- NRa-C(Z)-, heteroaril-C(Z)-, alcaril-NRa-C(Z)-, alcaril-C(Z)-, aril-NR-C(Z)-, aril-NR-C(Z)- e aril-C(Z)-; Z representando um oxigênio, enxofre ou amina.

[053] O agonista do A3AR exemplar (revelado na patente US 5.688.774 na coluna 4, linhas 67-coluna 6, linha 16; coluna 5, linhas 40-45; coluna 6, linhas 21-42; coluna 7, linhas 1-11; coluna 7, linhas 34-36; e coluna 7, linhas 60- 61): N6-(3-iodobenziliodobenzil)-9-metiladenina; N6-(3-iodobenziliodobenzil)-9-hidroxietiladenina; R-N6-(3-iodobenziliodobenzil)-9-(2,3- dihidroxipropil)adenina;

S-N6-(3-iodobenziliodobenzil)-9-(2,3- dihidroxipropil)adenina; Ácido N6-(3-iodobenziliodobenziladenina-9- il)acético; N6-(3-iodobenziliodobenzil)-9-(3- cianopropil)adenina; 2-cloro-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina; 2-amino-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina; 2-hidrazido-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina; N6-(3-iodobenzil)-2-metilamino-9-metiladenina; 2-dimetilamino-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina; N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-propilaminaadenina; 2-hexilamina-N6-(3-iodobenzil)-9-metiladenina; N6-(3-iodobenzil)-2-metoxi-9-metiladenina; N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-metiltioadenina; N6-(3-iodobenzil)-9-metil-2-(4-piridiltio)adenina; (1S, 2R, 3S, 4R)-4-(6-amino-2-feniletilamina-9H- purin-9-il)ciclopentano-1,2,3-triol; (1S, 2R, 3S, 4R)-4-(6-amino-2-cloro-9H-purin-9- il)ciclopentano-1,2,3-triol; (±)-9-[2α,3α-dihidroxi-4β-(N- metilcarbamoil)ciclopent-1β-il)]-N66-(3-iodobenziliodobenzil)- adenina; 2-cloro-9-(2'-amino-2',3'-dideoxi-β-D-5'-metil- arabino-furonamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina; 2-cloro-9-(2',3'-dideoxi-2'-fluor-β-D-5'-metil- arabino furonamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina; 9-(2-acetil-3-deoxi-β-D-5-metil-ribofuronamido)-2- cloro-N6(3-iodobenzil)adenina;

2-cloro-9-(3-deoxi-2-metanossulfonil-β-D-5-metil- ribofuronamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina; 2-cloro-9-(3-deoxi-β-D-5-metil-ribofuronamido)-N6- (3-iodobenzil)adenina; 2-cloro-9-(3,5-1,1,3,3,3-tetraisopropildisiloxil-β- D-5-ribofuranosil)-N6-(3-iodobenzil)adenina; 2-cloro-9-(2',3'-O-tiocarbonil-β-D-5-metil- ribofuronamido)-N6-(3-iodobenzil)adenina; 9-(2',3'-fenoxitiocarbonil-3-deoxi-β-D-5-metil- ribofuronamido)-2-cloro-N6-(3-iodobenzil)adenina; 1-(6-benzilamino-9H-purin-9-il)-1-deoxi-N,4-dimetil- β-D-ribofuranosiduronamida; 2-cloro-9-(2,3-dideoxi-β-D-5-metil-ribofuronamido)- N6 benziladenina; 2-cloro-9-(2'-azido-2',3'-dideoxi-β-D-5'-metil- arabino-furonamido)-N6-benziladenina; 2-cloro-9-(β-D-eritrofuranosido)-N6-(3- iodobenzil)adenina; N6-(benzodioxanemetil)adenosina; 1-(6-furfurilamina-9H-purin-9-il)-1-deoxi-N-metil-β- D-ribofuranosiduronamida; N6-[3-(L-propilamino)benzil]adenosina-5'-N- metiluronamida; N6-[3-(β-alanilamino)benzil]adenosina-5'-N- metiluronamida; N6-[3-(N-T-Boc-β-alanilamino)benzil]adenosina-5'-N- metiluronamida

6-(N'-fenilhidrazinil)purina-9-β-ribofuranosida-5'- N-metiluronamida; 6-(O-fenilhidroxilamina)purina-9-β-ribofuranosida- 5'-N-metiluronamida; 9-(β-D-2',3'-dideoxieritrofuranosil)-N6-[(3-β- alanilamino)benzil]adenosina; 9-(β-D-eritrofuranosido)-2-metilamino-N6-(3- iodobenzil)adenina; 2-cloro-N-(3-iodobenzil)-9-(2-tetrahidrofuril)-9H- purin-6-amina; 2-cloro-(2'-deoxi-6'-tio-L-arabinosil)adenina; e 2-cloro-(6'-tio-L-arabinosil)adenina.

[054] Outros agonistas exemplares do A3AR, revelados na patente US 5.773.423, são compostos da fórmula (V): R5

NH N 5 6 7 1 N 8 2 9 4 3 5'X 1 N N O R2 4' 1' 3' 2'

OH OH (V) em que, X1 é RaRbNC(═O), em que Ra e Rb podem ser iguais ou diferentes e são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila C1-C10, amino, haloalquila C1-C10, aminoalquila C1-C10 e cicloalquila C3-C10;

R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halo, alquioxi C1-C10, amino, alquenila C2-C10 e alquinila C2-C10; e R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em R- e S-1-feniletil, um grupo benzílico não-substituído e um grupo benzílico substituído em uma ou mais posições por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-C10, amino, halo, haloalquila C1-C10, nitro, hidroxi, acetamido, alcóxi C1-C10 e enxofre.

[055] Os agonistas do A3AR mais específicos incluem aqueles da fórmula acima em que Ra e Rb podem ser iguais ou diferentes e são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio e alquila C1-C10, particularmente quando R2 é hidrogênio ou halo, especialmente hidrogênio.

[056] Os agonistas do A3AR específicos adicionais são aqueles compostos em que Ra é hidrogênio e R2 é hidrogênio, particularmente quando R5 é benzil não- substituído.

[057] Os agonistas do A3AR mais específicos são tais compostos em que Rb é uma alquila C1-C10 ou cicloalquila C3-C10, particularmente uma alquila C1-C10 e mais particularmente metila.

[058] Especialmente específicos são os agonistas do A3AR em que Ra é hidrogênio, Rb é alquila C1-C10 ou cicloalquila C3-C10 , e R5 é R- ou S-1-feniletil ou uma benzila substituída em uma ou mais posições por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em halo, amino, acetamido, haloalquila C1-C10 e enxofre, em que o derivado do enxofre é um sal, como um sal trietilamônio.

[059] Além disso, aqueles compostos nos quais R2 é um alquenileno C2-C10 da fórmula Rd—C═C—, em que Rd é uma alquila C1-C8 também são particularmente notados na patente US

5.773.423.

[060] Também são específicos aqueles compostos em que R2 é diferente do hidrogênio, particularmente aqueles em que R2 é halo, alquilamino C1-C10 ou alquiltio C1-C10 e, mais preferivelmente, quando adicionalmente Ra é hidrogênio, Rb é uma alquila C1-C10 e/ou R5 é uma benzila substituída.

[061] Outros agonistas do A3AR exemplares revelados na patente US 5.773.423 são xantino-7-ribosidos tendo a fórmula (VI): R8 N 4

X 3 8 9 2 R9 1 7 N 5 4 5'R6 N O R7 4' 1'

O 3' 2'

OH OH (VI) em que, X é O; R6 é RaRbNC(═O), em que Ra e Rb podem ser iguais ou diferentes e são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila C1-C10, amino, haloalquila C1-C10, aminoalquila C1-C10 e cicloalquila C3-C10; R7 e R8 podem ser iguais ou diferentes e são selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C10, R- e S-1-feniletil, um grupo benzila não substituída e um grupo benzila substituída em uma ou mais posições por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-C10, amino, halo, haloalquila C1-C10, nitro, hidroxi, acetamido, alcóxi C1-C10 e enxofre; e R9 é selecionado a partir do grupo que consiste em halo, benzila, fenila e cicloalquila C3-C10. WO 99/06053 revela nos exemplos 19 a 33 os compostos selecionados: N6-(4-bifenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(2,4-diclorobenzil-carbonilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(4-metoxifenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(4-clorofenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(fenil-carbonilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(benzilcarbamoilamino)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(4-sulfonamido-fenilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(4-acetil-fenil-carbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-((R)-α-feniletilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-((S)- α-feniletilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-(5-metil-isoxazol-3-il-carbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida;

N6-(l,3,4-tiadiazol-2-il-carbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6(4-n-propoxifenilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; N6-bis-(4-nitrofenilcarbamoil)-adenosina-5'-N- etiluronamida; e N6-bis-(5-cloro-piridin-2-il-carbamoil)-adenosina- 5'-N-etiluronamida. Mais especificamente, os agonistas do A3AR revelados que devem ser utilizados de acordo com a presente revelação incluem: 2-cloro-N6-(3-iodobenzil)-9-[5-(metilamino)-β-D- ribofuranosil]-adenina, também conhecido como 2-cloro-N6-(3- iodobenzil)-adenosina-5′-N-metiluronamida ou pela abreviação Cl-IB-MECA; N6-(3-iodobenzil)-2-metilamino-9-[5-(metilamino)-β- D-ribofuranosil]-adenina, também conhecido como N6-(3- iodobenzil)-adenosina-5′-N-metiluronamida ou conhecido como 1- Deoxi-1-[6-[[[(3-iodofenil)metil]amino]-9H-purina-9-il]-N- metil-D-ribofuranuronamida ou pela abreviação IB-MECA; N6-2- (4-aminofenil)etiladenosina (APNEA); N6-(4-amino-3-iodobenzil) adenosina-5'-(N- metiluronamida) (AB-MECA).

[062] Um exemplo de um agonista do A3AR especialmente preferido é o 2-Cloro-N6-(3-iodobenzil)-2- metilamino-9-[5-(metilamino)-β-D-ribofuranosil]-adenina, também conhecido como 2-Cloro-N6-(3-iodobenzil)-adenosina-5′-N- metiluronamida ou pela abreviação Cl-IB-MECA.

[063] Em alguns exemplos, Cl-IB-MECA é utilizado para obter um efeito de perda de gordura.

[064] Em um exemplo em particular, Cl-IB-MECA é utilizado para o tratamento da obesidade.

[065] Ao se referir ao “modulador alostérico do A3AR” ou “A3ARM” deve ser entendido como referindo-se à regulação positiva, ativação ou aumento da atividade do receptor através da ligação do modulador alostérico no local alostérico do receptor, que pode ser diferente do local de ligação do ligante endógeno ou agonista deste.

[066] Em um exemplo, “modulação” denota um efeito do ligante do A3AR sobre o receptor exibido por um aumento de pelo menos 15% na eficácia do receptor de adenosina A3 pela ligação do composto ao local alostérico do receptor e/ou por uma diminuição na taxa de dissociação da adenosina ou de um agonista do A3AR ao local de ligação ortostérica.

[067] Em um exemplo, a modulação é feita por um modulador alostérico A3AR (A3ARAM) que é um derivado de imidazoquinolina.

[068] Em um exemplo, o A3ARAM ou derivado da imidazoquinolina tem a seguinte fórmula geral (VII): H R1

N N

N R2

N

H (VII) em que:

- R1 representa uma arila ou alcarila sendo opcionalmente substituída no anel aromático por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-C10, halo, alcanol C1-C10, hidroxila, acila C1-C10, alcoxila C1-C10; alcóxicarbono C1-C10, alcoxialquila C1-C10 ; tioalquila C1-C10 ; alquiléter C1-C10, amino, hidrazido, alquilamino C1-C10, piridiltio, alquenila C2-C10; alquinila C2- C10, tio, alquiltio C1-C10, acetamido, ácido sulfônico; ou os ditos substituintes podem formar juntos uma cicloalquila ou cicloalcenila fundida à dita arila, a cicloalquila ou cicloalcenila compreendendo opcionalmente um ou mais heteroátomos; desde que a dita arila não seja um grupo fenila não substituída; - R2 representa hidrogênio ou um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-C10, alquenila C2-C10; alquinila C2-C10, cicloalquila C4-C10, cicloalquenila C4-C10, um anel aromático heterocíclico de cinco a sete membros, cicloalquila fundida C5-C15, anéis aromáticos ou heteroaromáticos bicíclicos; alquiléter C1-C10, amino, hidrazido, alquilamino C1-C10, alcóxi C1-C10, alcóxicarbono C1- C10, alcanol C1-C10, acila C1-C10, tioalcóxi C1-C10, piridiltio, tio e alquiltio C1-C10, acetoamido e ácido sulfônico; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[069] De acordo com algumas realizações, o R1 substituinte em A3ARAM tem a seguinte fórmula geral (VIII): X2 (CH2)n X1 (VIII) em que n é 0 ou um número inteiro selecionado de 1 a 5; de preferência, n é 0, 1 ou 2; e - X1 e X2, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionados a partir de hidrogênio halogênio, alquila, alcanol ou alcóxi, indanila, pirrolina, desde que quando o dito n é 0, X1 e X2 não são hidrogênio.

[070] Em mais alguns exemplos, R1 em A3ARAM é um substituinte com a fórmula acima (VIII), em que X1 ou X2, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionados a partir do hidrogênio, cloro, metoxi, metanol ou um substituinte tendo as fórmulas (VIIIa) ou (VIIIb):

Y N

H (VIIIa) (VIIIb) em que Y é selecionado a partir de N ou CH.

[071] Em alguns outros exemplos ainda, R2 em A3ARAM é selecionado a partir de H, alquila C1-10, cicloalquila C4-10, a cadeia alquila pode ser uma cadeia reta ou ramificada ou formar um anel de cicloalquila de quatro a sete membros.

[072] Em um exemplo, R2 em A3ARAM é selecionado a partir de um anel aromático heterocíclico de cinco a sete membros.

[073] Em alguns exemplos, os substituintes de R2 em A3ARAM são selecionados a partir de H, n-pentil, ou um anel aromático heterocíclico de cinco membros com a seguinte fórmula (IX):

Z

(IX) em que Z é selecionado a partir de O, S ou NH, de preferência O.

[074] De acordo com um exemplo, R2 em A3ARAM compreende um ou mais anéis fundidos, particularmente para formar substituintes bicíclicos.

[075] Os exemplos não limitantes de compostos bicíclicos que podem ser usados para formar os substituintes no contexto do A3ARAM compreendem biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[4.1.0]heptano, ácido biciclo[4.1. 0]heptan-3- carboxílico, ácido biciclo[3.1.0]hexan-3-carboxílico, ácido biciclo[4.1.0]heptan-2-carboxílico, ácido biciclo[3.1.0]hexan- 2-carboxílico, e ácido biciclo[2.2.1]heptan-2-carboxílico.

[076] De acordo ainda com alguns outros exemplos, o R2 em A3ARAM é selecionado dentre 2-ciclohexeno e 3-ciclohexeno.

[077] Os derivados específicos de imidazoquinolina que podem ser usados como moduladores alostéticos do A3AR estão listados abaixo: N-(4-Metil-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(4-Metoxi-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(4-Cloro-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3-Metanol-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina;

N-([3,4-c]Indan)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(1H-indazol-6-il)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(4-Metoxi-benzil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(1H-Indol-6-il)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(Benzil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5-c]quinolin- 4-amina; N-(Feniletil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-cicloheptil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-furil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclobutil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclohexil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2--1H-imidazo[4,5-c]quinolin- 4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-pentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina.

[078] Os derivados de imidazoquinolina acima são considerados moduladores alostéricos, pois demonstraram ter, por um lado, afinidade reduzida, caso haja, com os locais de ligação ortostérica dos receptores de adenosina A1 e A2A, A2B e afinidade reduzida com o local de ligação ortostérica do receptor de adenosina A3 e, por outro lado, alta afinidade com o local alostérico de ligação do receptor de adenosina A3 [Pedido de Patente Internacional Nº WO07/089507, aqui incorporado por referência].

[079] Um derivado imidazoquinolina especificamente preferido de acordo com a presente revelação é N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclohexil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina (também referido às vezes pela abreviação LUF6000 ou CF602), sendo um modulador alostérico do A3AR.

[080] No contexto das fórmulas gerais aqui reveladas, o seguinte significado deve ser considerado para os vários termos: − O termo “alquila” é usado aqui para se referir a uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos com 1 a 10 átomos de carbono e mais de preferência 1 a 6 átomos de carbono incluindo, entre outros, metila, etila, n- propila, isopropila, n-butila, t-butila, n-heptila, octila e similares.

[081] Da mesma forma, os termos “alquenila” e “alquinila” denotam uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos com, respectivamente, de 2 a 10, ou de 3 a 10 átomos de carbono e mais de preferência 2 a 6 ou 3 a 6 átomos de carbono, tendo alquenila ou alquinila pelo menos uma ligação insaturada.

[082] Os substituintes de alquila, alquenila ou alquinila podem ser substituídos por um grupo que contenha um heteroátomo. Assim, deve ser entendido que, embora não explicitamente declarado, quaisquer modificações de alquila definidas acima e abaixo, tais como alquiltio, alcóxi, alcanol, alquilamina, etc., também incluem as modificações de alquenila ou alquilinacorrespondentes, tais como, alqueniltio,

alqueniloxi, alquenol, alquenilamina, ou respectivamente, alquiniltio, alquiniloxi, alquinol, alquinilamina.

[083] O termo “arila” denota um grupo carbocíclicos aromáticos insaturados de 5 a 14 átomos de carbono com um único anel (por exemplo, fenil) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo, naftil ou antril). As arilas preferidas incluem fenila, indanila, benzimidazol.

[084] O termo “alcaril” se refere a grupos - alquileno-arila, de preferência com 1 a 10 átomos de carbono na fração de alquileno e de 6 a 14 átomos de carbono na fração de arila. Tais grupos de alcaril são exemplificados por benzila, fenetila ileno e similares.

[085] O termo “arila substituída” se refere a uma fração aromática que é substituída por 1 a 3 substituintes, como definido acima. É possível uma ampla gama de substituintes, como reconhecido pels técnicos no assunto. No entanto, alguns dos substituintes preferidos incluem, entre outros, halogênio, amino (substituído), nitro, ciano, alquila, alcóxi, aciloxi ou alcanol, sulfonila, sulfinila.

[086] O termo “Halo” ou “halogênio” se refere ao flúor, cloro, bromo e iodo, de preferência ao cloro.

[087] O termo “acila” se refere aos grupos H- C(O)- assim como alquil-C(O)-.

[088] O termo “alcanol” se refere ao grupo -COH, bem como alc-OH, “alc” denotando uma cadeia de alquileno, alquenileno ou alquinileno.

[089] O termo “alcóxi” é usado aqui por significar -O-alquil, incluindo, entre outros, metoxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, n-butoxi e similares.

[090] O termo “alquiltio” é usado aqui por significar -S-alquil, incluindo, entre outros, metiltio, etiltio, n-propiltio, isopropiltio, n-butiltio e similares.

[091] O termo “alcoxialquila” é usado aqui por significar -alquil-O-alquil, incluindo, entre outros, metoximetil, etóximetil, n-propoximetil, isopropoximetil, n- butoximetil, isobutoximetil, t-butoximetil e similares.

[092] O termo “cicloalquila” é usado aqui por significar radicais de hidrocarbonetos cíclicos incluindo, entre outros, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila e similares.

[093] O termo “alcoxicarbonila” é usado aqui por significar -C(O)O-alquil, incluindo, entre outros, metoxicarbonila, etoxicarbonila, propoxicarbonila e similares.

[094] O termo “cicloalquila fundida” é usado aqui por significar qualquer composto ou substituinte compreendendo pelo menos dois anéis alifáticos conectados em um único átomo (para formar uma fração espirocíclica), em dois átomos mutuamente ligados ou através de uma sequência de átomos (ponte principal). Os anéis fundidos podem incluir qualquer parte bicíclica, tricíclica ou policíclica. Os substituintes bicíclicos são preferidos de,acordo com algumas realizações da presente revelação.

[095] A presente revelação também faz uso de sais fisiologicamente aceitáveis de um ligante seletivo do A3AR, tais como os compostos descritos acima. Um “sal fisiologicamente aceitável” se refere a qualquer metal alcalino não tóxico, metal alcalino terrestre e sal de amônio comumente usado na indústria farmacêutica, incluindo os sais de sódio, potássio, lítio, cálcio, magnésio, amônio, bário e protamina de zinco, que são preparados por métodos conhecidos na técnica. O termo também inclui sais de adição ácido não tóxico, que geralmente são preparados reagindo o ligante com um ácido orgânico ou inorgânico adequado. Os sais de adição ácido são aqueles que retêm a eficácia biológica e as propriedades qualitativas das bases livres e que não são tóxicos ou de alguma forma indesejáveis. Os exemplos incluem, entre outros, ácidos derivados de ácidos minerais, clorídrico, hidrobrômicos, sulfúricos, nítricos, fosfóricos, metafosfóricos e similares. Os ácidos orgânicos incluem, entre outros, os ácidos tartáricos, acéticos, propiônicos, cítricos, málicos, malônicos, láticos, fumáricos, benzoicos, cinâmicos, mandélicos, glicólicos, glucônicos, pirúvicos, salicílicos succínicos e arilssulfônicos, por exemplo, p- toluenossulfônico.

[096] O ligante do A3AR pode ser administrado em uma única dose (medicamento único) ou como tratamento contínuo, por um período de dias, semanas ou mesmo meses.

[097] Em um exemplo, o ligante do A3AR é usado para tratamento em longo prazo (tratamento crônico e/ou tratamento de uma condição crônica).

[098] No contexto da presente revelação, tratamento em longo prazo deve ser entendido por abranger um intervalo de tratamento que dura pelo menos dias, semanas ou meses, até que, por exemplo, uma perda de gordura suficiente seja apresentada por parâmetros bem conhecidos por qualquer médico.

[099] Além disso, no contexto de alguns exemplos da presente revelação, tratamento em longo prazo abrange tratamento crônico, por exemplo, a administração diária em longo prazo, às vezes mesmo sem um endpoint previsto para o tratamento. Em alguns exemplos, o tratamento em longo prazo compreende pelo menos uma semana de administração diária do ligante do A3AR, às vezes, um mês de tratamento diário, às vezes, pelo menos 2, 3, 4, 5, 6 ou mesmo 12 meses de administração diária do ligante.

[0100] Ao se referir a “tratamento” pelo ligante do A3AR, deve ser entendido como referência qualquer efeito farmacológico e fisiológico desejado que leve a uma melhora clinicamente significativa no bem-estar do indivíduo, conforme determinado por parâmetros conhecidos no mundo da obesidade. Por exemplo, uma melhora pode ser determinada por uma diminuição em pelo menos 1%, às vezes 5% no nível da massa corporal total ou no nível da massa de gordura corporal do indivíduo.

[0101] Em alguns exemplos, o tratamento é de um indivíduo definido como acometido de uma condição associada ao acúmulo excessivo de gordura periférica, por exemplo, o excesso de tecidos adiposos.

[0102] Em alguns exemplos, o tratamento é de fato um tratamento preventivo, para indivíduos em predisposição ou tendência a ganhar peso. Às vezes, o tratamento com ligante do A3AR pode ser posterior ou em combinação com outro tratamento conhecido por causar (por exemplo, como um efeito colateral) aumento da massa corporal.

[0103] O ligante do A3AR pode ser administrado diariamente ou com um dia ou mais de intervalo entre as administrações. Em uma realização, o ligante do A3AR é usado diariamente para tratamento crônico.

[0104] O ligante do A3AR pode ser administrado sistêmica ou localmente. Para tanto, o ligante do A3AR é combinado com os excipientes farmaceuticamente aceitáveis para formar uma composição farmacêutica adequada para um modo específico de administração e compreendendo uma quantidade efetiva do ligante do A3AR.

[0105] Pelo termo “excipiente farmaceuticamente aceitável” entende-se quaisquer materiais inertes não tóxicos, que não reagem com o ligante do A3AR e que podem ser adicionados ao ligante para facilitar sua administração ao indivíduo.

[0106] Em uma realização, o excipiente é aquele aceitável para a preparação de uma forma de dosagem unitária para administração oral.

[0107] Uma formulação oral pode encontrar-se na forma de pílula, cápsula, na forma de xarope, emulsão, um pó aromático e outras diversas formas. O excipiente é selecionado às vezes com base na forma desejada da formulação. O excipiente também pode, às vezes, ter o efeito de melhorar a administração ou penetração do princípio ativo no tecido alvo, para melhorar a estabilidade do medicamento, para retardar as taxas de liberação, para transmitir propriedades de liberação lenta, para reduzir efeitos colaterais indesejados, etc. O excipiente também pode ser uma substância que estabiliza a formulação (por exemplo, conservante), para prover à formulação um sabor comestível, etc. Os excipientes podem ser qualquer um daqueles utilizados convencionalmente e é limitado apenas por considerações físico-químicas, tais como solubilidade e falta de reatividade com o ligante do A3AR, e pela via de administração. O excipiente pode incluir aditivos, corantes, diluentes, agentes tamponantes, agentes desintegrantes, agentes umectantes, conservantes, agentes aromatizantes e excipientes farmacologicamente compatíveis. Além disso, o excipiente pode ser um adjuvante, que, por definição, são substâncias que afetam a ação do princípio ativo de forma previsível.

[0108] Exemplos típicos de excipientes adequados para administração oral compreendem (a) suspensões ou emulsões em um líquido apropriado, como Cremophor RH40 ou metilcelulose (por exemplo, Methocel A4M Premium); (b) cápsulas (por exemplo, o tipo comum de gelatina em cápsula rígida ou macia contendo, por exemplo, surfactantes, lubrificantes e cargas inertes), comprimidos, pastilhas (em que a substância ativa está em um sabor, como sacarose e acácia ou goma adragante, ou a substância ativa está em uma base inerte, como gelatina e glicerina), e troches, cada um contendo uma quantidade pré- determinada da goma adragante na forma de sólidos ou grânulos; (c) pós; (d) solução, normalmente combinada com um agente potencializador solubilizante; (e) formulação de lipossomas; e outros.

[0109] O ligante do A3AR é usado em uma quantidade eficaz para obter pelo menos um efeito de perda de gordura. A “quantidade eficaz” pode ser determinada de imediato, de acordo com a presente revelação, administrando a uma pluralidade de indivíduos testados várias quantidades do ligante do A3AR e depois delineando a resposta (por exemplo, combinando vários efeitos benéficos) em função da quantidade. Às vezes, a quantidade a ser utilizada pode depender de diversos fatores, tais como modo de administração, idade, peso, área de superfície corporal, sexo, condição de saúde e fatores genéticos do indivíduo; outras drogas administradas; etc.

[0110] A quantidade eficaz do ligante do A3AR pode ser definida por uma forma de dosagem unitária. O termo “formas de dosagem unitária” se refere a unidades fisicamente discretas adequadas como doses unitárias para indivíduos humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação a um excipiente farmacêutico adequado.

[0111] Quando o ligante do A3AR é um agonista do A3AR, a quantidade eficaz pode ser, por exemplo, uma quantidade de pelo menos 10 mg/dia, por exemplo, pelo menos 10 mg em um regime de tratamento de uma vez por dia, pelo menos 5 mg duas vezes por dia, pelo menos 3,3 mg três vezes por dia, etc.).

[0112] Uma dose de pelo menos aproximadamente 10 mg/dia pode ser uma dose de pelo menos aproximadamente 15 mg/dia, pelo menos aproximadamente 20 g/dia, pelo menos aproximadamente 25 mg/dia. Em algumas realizações, a dose é de 25±5 mg/dia.

[0113] A quantidade total de ligante do A3AR administrada diariamente a um paciente, independentemente do número de administrações é denominada aqui uma “dose diária de tratamento”.

[0114] Assim, em um exemplo, o ligante do A3AR é formulado em uma forma de dosagem unitária para administração da dose diária de tratamento de pelo menos 10 mg/dia. Quando a forma de dosagem é destinada à administração a um indivíduo em um regime de tratamento compreendendo n doses por dia,

então uma forma de dosagem unitária pode compreender uma porção de 1/n da dose diária de tratamento (por exemplo, quando a dose diária pretendida for 20 mg e o regime de tratamento for duas vezes ao dia, então cada forma de dosagem unitária terá uma dose de 10 mg; ou quando a dose diária de tratamento pretendida for 25 mg e o regime de tratamento for duas vezes ao dia, então cada forma de dosagem unitária terá uma dose de 12,5 mg).

[0115] Em alguns exemplos, o ligante do A3AR é administrado em combinação com o tratamento antiobesidade. No contexto da presente revelação, o tratamento antiobesidade pode incluir qualquer tratamento conhecido na técnica, incluindo plano alimentar e dietas especiais, plano de atividade física, tratamento com um medicamento, cirurgia bariátrica, dispositivos de perda de peso.

[0116] Em alguns exemplos, o ligante do A3AR é usado em combinação com um medicamento para perda de peso comercialmente disponível e clinicamente aceitável. Os exemplos de medicamentos comercialmente disponíveis e aprovados pela FDA incluem Orlistat (Alli, Xenical), Lorcaserina (Belviq), Fentermina e Topiramato (Qsymia), Bupropiona e Naltrexona (Contrave), Liraglutida (Saxenda, Victoza).

[0117] Deve-se reconhecer que o tratamento deve ser considerado eficaz se, em um indivíduo diagnosticado com obesidade ou com um índice de massa corporal (IMC) de 30 ou mais, houver uma perda de peso de pelo menos 3%, às vezes de pelo menos 4% ou pelo menos 5% do peso total, em comparação ao peso antes do início do tratamento. Em alguns exemplos, um tratamento eficaz é aquele em que há uma perda de peso de pelo menos 3% a 6% ou entre 5% e 10% do peso total anterior ao início do tratamento.

[0118] Como utilizado aqui, as formas “um(uma)”, “uns(umas)” e “o(a)” incluem referências singulares e plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Por exemplo, o termo “um ligante do A3AR”inclui um ou mais compostos capazes de afetar especificamente, direta ou indiretamente, total ou parcialmente, a atividade do A3AR.

[0119] Além disso, da forma aqui utilizada, o termo “compreendendo” significa que a composição inclui o agente ativo citado, ou seja, o ligante do A3AR, mas não exclui outros elementos, tais como veículos e excipientes fisiologicamente aceitáveis, assim como outros agentes ativos. O termo “consistindo essencialmente em” é usado para definir composições que incluem os elementos citados, mas excluem outros elementos que podem ter um significado essencial em qualquer um dos efeitos da perda de gordura. “Consistindo em” deverá significar excluir mais do que elementos vestigiais de outros elementos. As realizações definidas para cada um destes termos de transição encontram-se no escopo desta invenção.

[0120] Além disso, todos os valores numéricos, por exemplo, ao se referir às quantidades ou faixas dos elementos que constituem a composição compreendendo o ligante do A3AR como princípio ativo, são aproximações que variam (+) ou (-) em até 20%, às vezes em até 10% dos valores declarados. Deve ser entendido, mesmo que nem sempre explicitamente declarado, que todas as designações numéricas são precedidas pelo termo “aproximadamente”.

[0121] A invenção será agora exemplificada na seguinte descrição de experimentos que foram realizados de acordo com a invenção. Deve-se entender que estes exemplos se destinam a ser de natureza ilustrativa e não de limitação. Obviamente, muitas modificações e variações destes exemplos são possíveis à luz do ensinamento exposto acima. Portanto, deve ser entendido que dentro do escopo das reivindicações anexas, a invenção pode ser praticada de outra forma, em uma miríade de maneiras possíveis, diferentes das especificamente descritas doravante.

EXEMPLOS NÃO LIMITANTES Exemplo 1 - Efeito de CF 102 sobre a proliferação de adipócitos 3T3-L1

[0122] Os pré-adipócitos 3T3-L1 foram adquiridos da American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, EUA). Os pré-adipócitos foram mantidos no meio Eagle modificado da Dulbecco (DMEM; Hyclone, South Logan, UT, EUA), e complementados com 10% de soro de bezerro recém-nascido (Hyclone) e antibióticos (Hyclone) a 37°C em 5% de CO2.

[0123] Para induzir a diferenciação dos adipócitos, os pré-adipócitos foram laminados em lâminas de 24 poços. Após a confluência, o meio foi trocado e foram adicionados 10 µg/mL de insulina, 1 µM DEX e 0,5 mM IBMX. Dois dias depois, o meio foi mudado para o meio basal suplementado com 10% de FBS e 10 µg/mL de insulina. Os meios foram substituídos a cada 2 dias durante um período de 8 a 14 dias.

[0124] Para avaliar a proliferação celular, foi usado o ensaio de incorporação de 3H-timidina. As células 3T3-L1 (5.000 células/poço) foram incubadas com 5 ou 10 nM de CF102 em lâmina de 96 poços durante 48 horas. Cada poço foi pulsado com 1mCi de 3H-timidina pelas últimas 24 horas. As células foram extraídas e a captação de 3H-timidina foi determinada em um contador de cintilação líquida LKB (LKB, Piscataway, NJ, EUA). Resultados:

[0125] A figura 1 mostra o efeito inibidor dependente de dose de CF102 sobre a proliferação dos adipócitos 3T3-L1. As células adiposas incubadas com 5nM e 10nM de CF102 exibiram redução de mais de 20% e 40%, respectivamente, em comparação com a mensuração controle. Exemplo 2- Efeito de CF102 sobre a produção de lipídios em adipócitos 3T3-L1

[0126] Os pré-adipócitos foram incubados em um meio diferenciado (DMEM com alta concentração de glicose + 10% de FBS) contendo 10 µg/mL de insulina, 1 µM DEX e 0,5 mM IBMX e tratados com 5nM de CF102 por 48 horas para avaliar seu potencial efeito antiadipogênico.

[0127] O acúmulo de gotículas lipídicas foi avaliado pela coloração com Oil-Red-O. Em suma, as células foram enxaguadas com PBS, incubadas com 3,7% de HCHO por 1 hora e, em seguida, incubadas com Oil-Red-O durante 45 min. As células foram muito bem enxaguadas para remover o excesso de Oil-Red-O, visualizadas e fotografadas sob um microscópio Olympus com uma câmera Leica. Para a quantificação do acúmulo de lipídios, as células foram dissolvidas em isopropanol e a densidade óptica foi lida em um leitor Dynatech Corp. Microelisa (Chantilly, VA) a 595 nm. O grau de acúmulo de gotículas lipídicas foi proporcional à densidade óptica.

[0128] O acúmulo de gotículas lipídicas foi visualizado sob um microscópio e pode ser observado nas Figuras 2A-2B, em que a Figura 2A mostra uma imagem microscópica da mensuração controle e a Figura 2B mostra uma imagem microscópica de gotículas lipídicas derivadas de pré- adipócitos tratados com 5nM de CF102. Resultados:

[0129] A figura 3 mostra a inibição no acúmulo lipídico de células pré-expostas a 5nM de CF102. Os dados são expressos como valor OD a 595 nm no veículo tratado (controle) versus grupo tratado com CF102. (p=0,01). Exemplo 3 -Efeito de CF102 sobre o peso em camundongos com dieta rica em gordura (HFD) versus camundongos alimentados com dieta regular

[0130] Como as complicações decorrentes da obesidade, como diabetes e doenças cardiovasculares, geralmente exigem décadas, os modelos animais substitutos são importantes para estudar os aspectos moleculares da obesidade e seus efeitos fisiopatológicos. Um desses modelos que está ganhando cada vez mais atenção é o modelo de obesidade induzida por dieta em camundongos. O presente protocolo é projetado para avaliar os efeitos de CF102 em um modelo in vivo de obesidade induzida por dieta em camundongos. Camundongos

[0131] Os camundongos utilizados são machos C57BL/6J, de 4 a 6 semanas (The Jackson Laboratory, lote 000664). Dieta

[0132] 60 Kcal % da dieta com gordura (Research Diets, D12492i). Tratamentos com CF102

[0133] Dois tipos de tratamento, preventivo e terapêutico, serão investigados.

Desenho experimental:

[0134] Grupo I-II: Animais não tratados anteriormente (n=20) que foram alimentados com uma dieta regular serviram como um grupo controle e foram definidos como ‘Dieta Magra’. Após 12 semanas, os camundongos foram divididos em 2 grupos (n=10 por grupo), o primeiro foi tratado com uma administração oral diária de CF102 (Can-Fite BioPharma, Cat no A14402-10; 100 µg/Kg) por 4 semanas e o segundo com veículo apenas.

[0135] Grupo III-IV- Camundongos não tratados anteriormente (n=20) foram alimentados com HFD por 12 semanas. Após 12 semanas, os camundongos foram divididos em 2 grupos (n=10 por grupo), o primeiro foi tratado com administração oral diária de CF102 (Can-Fite BioPharma, Cat no A14402-10; 100 µg/Kg) por 4 semanas e o segundo apenas com veículo. Resultados e Análise

[0136] No grupo de dieta magra, CF102 causou perda de peso nos animais em comparação ao controle.

[0137] Especificamente, a Figura 4A mostra que os camundongos não tratados anteriormente em dieta magra tratados com CF102 não apresentaram nenhuma perda de peso em comparação com os camundongos sem tratamento anterior não tratados. Entretanto, como mostrado na Figura 4B, os camundongos em HFD demonstraram um efeito significativo (p<0,001) de perda de peso no tratamento com CF102 (a seta indica o ponto de início do tratamento). Exemplo 4 - Efeito de CF602, modulador alostérico do A3AR, sobre o peso corporal de camundongos diabéticos

[0138] O diabetes é uma das complicações da obesidade. Portanto, o efeito de um ligante do A3AR sobre o peso corporal em um modelo diabético também foi avaliado. Métodos:

[0139] Ratos machos Sprague Dawley (8 a 10 semanas de idade) receberam o PI com estreptozotocina (STZ) em um nível de dose de 60 mg/kg em tampão citrato para criar um modelo diabético. Somente animais com glicemia superior a 250 mg/dL foram incluídos no estudo. CF602, ligante do A3AR alostérico, foi administrado via oral duas vezes por dia durante cinco dias na dose de 100 µg/kg. O peso corporal foi monitorado após 5 dias. Resultados:

[0140] A Figura 5 mostra a mudança de peso em relação ao valor basal, a saber, o peso no final do tratamento menos o peso antes do tratamento (ou seja, a diferença). A perda de peso foi uma diminuição significativa (p<0,03) no peso corporal nos animais tratados com CF602.

Claims (22)

REIVINDICAÇÕES

1. LIGANTE DO RECEPTOR DE ADENOSINA A3 (A3AR) PARA USO NA OBTENÇÃO DE PELO MENOS UM EFEITO DE PERDA DE GORDURA, caracterizado por ser selecionado dentre: (a) redução do peso de um indivíduo; (b) redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; (c) tratamento da obesidade em um indivíduo; e (d) inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

2. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo dito ligante estar em uma forma de dosagem adequada para a administração diária ao dito indivíduo.

3. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pela dita forma de dosagem ser adequada para administração uma ou duas vezes ao dia.

4. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo dito ligante estar em uma forma de dosagem adequada para administração oral.

5. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo dito ligante do A3AR ser um agonista do A3AR.

6. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com a reivindicações 5, caracterizado pelo dito agonista do A3AR ser selecionado a partir do grupo que consiste em N6-2- (4- aminofenil)etiladenosina (APNEA), N6-(4-amino-3-iodobenzil) adenosina-5'-(N-metiluronamida) (AB-MECA), N6-(3-iodobenzil)-

adenosina-5-N-metiluronamida (IB-MECA) e 2-cloro-N6-(3- iodobenzil)-adenosina-5-N-metiluronamida (Cl-IB-MECA).

7. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo agonista do A3AR ser Cl-IB-MECA.

8. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo ligante do A3AR ser um modulador alostérico do A3AR.

9. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo modulador alostérico do A3AR ser selecionado a partir do grupo que consiste em: N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclopentil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-cicloheptil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; N-(3,4-dicloro-fenil)-2-ciclobutil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina; e N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclohexil-1H-imidazo[4,5- c]quinolin-4-amina.

10. LIGANTE DO A3AR PARA USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo uso ser em combinação com um tratamento antiobesidade.

11. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável e, como princípio ativo, um ligante do A3AR em uma quantidade eficaz para obter pelo menos um efeito de perda de gordura selecionado a partir de: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo;

- tratamento da obesidade em um indivíduo; - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

12. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por estar em uma forma de dosagem adequada para a administração diária do dito ligante do A3AR ao dito indivíduo.

13. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por estar em uma forma de dosagem adequada para administração uma ou duas vezes ao dia.

14. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizada para o tratamento crônico do dito indivíduo.

15. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizada por estar em uma forma de dosagem adequada para administração oral.

16. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 15, caracterizada pelo ligante do A3AR ser um agonista do A3AR.

17. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo agonista do A3AR ser um Cl-IB-MECA.

18. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 17, caracterizada pelo ligante do A3AR ser um modulador alostérico do A3AR.

19. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo dito modulador alostérico do A3AR ser N-(3,4-Dicloro-fenil)-2-ciclohexil-1H- imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina (CF602).

20. MÉTODO PARA TRATAR UM INDIVÍDUO, caracterizado por compreender a administração ao dito indivíduo de uma quantidade de um ligante do A3AR, sendo a quantidade eficaz para obter pelo menos um efeito de perda de gordura selecionado a partir de: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.

21. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por ser para tratar a obesidade.

22. KIT, caracterizado por compreender: (a) uma composição farmacêutica que compreende um ligante do A3AR, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 11 a 19; (b) instruções de uso da composição farmacêutica, obtendo pelo menos um dos seguintes efeitos: - redução do peso de um indivíduo; - redução da massa de gordura corporal de um indivíduo; - tratamento da obesidade em um indivíduo; - inibição da proliferação de adipócitos em um indivíduo.