BRPI0616378A2 - inibidores de proteìna cinase baseados em alcóxi indolinona e métodos para modulação da atividade catalìtica - Google Patents

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Abstract

INIBIDORES DE PROTEìNA CINASE BASEADOS EM ALCÈXI INDOLINONA E MéTODOS PARA MODULAçãO DA ATIVIDADE CATALìTICA. Derivados de ácido e amina baseados em alcóxi indolinona têm aumentado e inesperadamente as propriedades do fármaco como inibidores de proteina cinases, e são úteis no tratamento de enfermidades relacionadas às atividades anormais de proteína cinase, tais como câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORESDE PROTEÍNA CINASE BASEADOS EM ALCÓXI INDOLINONA E MÉTO-DOS PARA MODULAÇÃO DA ATIVIDADE CATALÍTICA".
Descrição
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a inibidores de proteína cinase ea seu uso no tratamento de enfermidades relacionadas a atividades de pro-teína cinase anormais, tais como câncer e inflamação. Mais particularmente,a invenção se refere a derivados baseados em alcóxi indolinona e seu salfarmaceuticamente aceitável utilizável como inibidores de proteína cinase .
Antecedentes:
As proteínas cinases são enzimas que catalisam a fosforilação degrupos hidroxila de resíduos de tirosina, serina, e treonina de proteínas. Muitosaspectos da vida celular (por exemplo, crescimento de célula, diferenciação, pro-liferação, ciclo e sobrevivência de célula) dependem das atividades de proteínacinase. Além disso, a atividade anormal de proteína cinase tem sido relacionadaa um hospedeiro de enfermidades, tais como câncer e inflamação. Portanto, es-forço considerável tem sido dirigido a identificação de modos de modular as ativi-dades de proteína cinase. Em particular, muitas tentativas foram feitas para iden-tificar moléculas pequenas que agem como inibidores de proteína cinase .
Vários derivados de pirrolil-indolinona têm demonstrado excelen-te atividade como inibidores de proteína cinases (Larid et al. FASEB J. 16,681, 2002; Smolich et al. Blood, 97, 1413, 2001; Mendel et al. Clinicai Cân-cer Res. 9, 327, 2003; Sun et al. J. Med. Chem. 46, 1116, 2003). A utilidadeclínica destes compostos tem sido promissora, mas tem sido parcialmentecomprometida devido a solubilidade aquosa relativamente pobre e/ou outraspropriedades de fármaco. O que é necessário é uma classe de derivadosmodificados de pirrolil-indolinona tendo ambas as atividade inibitória e pro-priedades aumentadas de fármaco.
Sumário
A invenção é dirigida a derivados baseados em alcóxi indolinonae a seu uso como inibidores of proteína cinases. É descrito aqui que derivadosbaseados em alcóxi indolinona têm propriedades de fármaco aumentadas einesperadas que distinguem vantajosamente esta classe de compostos so-bre derivados de pirrolil-indolinona conhecidos tendo atividade de inibição deproteína cinase. É também descrito que os derivados baseados em alcóxiindolinona são úteis no tratamento de enfermidades relacionadas a ativida-des anormais de proteína cinase, tal como câncer.
Um aspecto da invenção é dirigido a um composto representadopela Fórmula (I):
<formula>formula see original document page 3</formula>
Fórmula I
Na Fórmula (I), R1 é selecionado a partir do grupo consistindoem hidrogênio, halo, (C1-C6) alquila, (C3-C8) cicloalquila, (C1-C6) haloalqui-la, hidróxi, (C1-C6) alcóxi, amina, (C1-C6) alquilamina, amida, sulfonamida,ciano, arila (C6-C10) substituída ou não-substituída; R2 é selecionado a par-tir do grupo consistindo em hidrogênio, halo, (C1-C6) alquila, (C3-C8) ciclo-alquila, (C1-C6) haloalquila, hidróxi, (C1-C6) alcóxi, (C2-C8) alcoxialquila,amina, (C1-C6) alquilamina, (C6-C10) arilamino; R3 é selecionado a partir dogrupo consistindo em hidrogênio, (C1-C6) alquila, (C6-C10) arila, (C5-C10)heteroarila, e amida; R4, R5, R6 e R8 são independentemente selecionados apartir do grupo consistindo em hidrogênio e (C1-C6) alquila; R7 é (C1-C6)alquila; R9 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidróxi, (C1-C6)O-alquila, (C3-C8) O-cicloalquila, e NR10R11; onde R10 e R11 são independen-temente selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-C6)alquila, (C1-C6) hidroxialquila, (C2-C6) dihidroxialquila, (C1-C6) alcóxi, (C1-C6)ácido de alquil carboxílico, ácido de (C1-C6) alquil fosfônico, ácido de (C1-C6)alquil sulfônico, ácido de (C1-C6) hidroxialquil carboxílico, (C1-C6) alquil a-mida, (C3-C8) cicloalquila, (C5-C8) heterocicloalquila, (C6-C8) arila, (C5-C8)heteroaril, ácido de (C3-C8) cicloalquil carboxílico, ou R10 e R11 junto com Nforma um (C5-C8) anel heterocíclico ou substituído ou não-substituído comum ou mais hidroxilas, cetonas, éteres, e ácidos carboxílicos; η é 1, 2, ou 3;em é 0, 1, ou 2. Alternativamente, este aspecto da invenção é tambémdirigido a um sal farmaceuticamente aceitável, seu tautômero, um sal farma-ceuticamente aceitável de seu tautômero, ou um pró-fármaco de Fórmula (I).
Um primeiro sub-gênero deste primeiro aspecto da invenção édirigido ao composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco representados pelaFórmula (II):
<formula>formula see original document page 4</formula>
NR5-(CHR6)n-CH(OR7)-(CHR8)m-C(O)OR12
Fórmula Il
Na Fórmula (II), R12 é selecionado a partir do grupo consistindoem hidrogênio, (C1-C6) alquila, e (C3-C8) cicloalquila. Outros grupos sãoconforme definidos na Fórmula (I). Em concretizações preferidas, R1 e R2são independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em hi-drogênio e flúor; R3 e R4 são metila; R5, R6, R8, e R12 são hidrogênio; R7 é(C1-C6) alquila; η é 1 ou 2; e m é 0 ou 1. Espécies preferidas incluem osseguintes compostos:Um segundo sub-gênero preferido deste primeiro aspecto dainvenção é dirigido a um composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco represen-tados pela Fórmula (III):
<formula>formula see original document page 5</formula>
Na Fórmula (III), os vários grupos R são os mesmos conforme aFórmula (I). Em concretizações preferidas, R1 e R2 são independentementeselecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, halo, ciano; R3 éselecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-C6) alquila,(C6-C10) arila, (C5-C1-0) heteroarila, e amida; R4, R5, R6 e R8 são independen-temente selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio e (C1-C6))alquila; R7 é (C1-C6) alquila; η é 1 ou 2; m é 0 ou 1; e R10 e R11 são sele-cionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-C6) alquila, (C1-C6)hidroxialquila, (C2-C6) dihidroxialquila, (C1-C6) alcóxi, ácido de (C2-C6) alquilcarboxílico, ácido de (C1-C6) alquil fosfônico, ácido de (C1-C6) alquil sulfônico,ácido de (C2-C6) hidroxialquil carboxílico, (C1-C6) alquila amida, (C3-C8) ci-cloalquila, (C5-C8) heterocicloalquila, (C6-C8) arila, (C5-C8) heteroaril, áci-do de (C4-C8) cicloalquil carboxílico, ou R10 e R11 juntos com N forma um(C5-C8) anel heterocíclico ou substituído ou não-substituído com um ou maishidroxilas, cetonas, éteres, e ácido carboxílicos.
Em um primeiro subgrupo deste segundo sub-gênero, m é 0.Espécies preferidas deste primeiro subgrupo são representadas pelas se-guintes estruturas:
<formula>formula see original document page 6</formula>
Em um segundo subgrupo deste segundo sub-gênero, m é 1.Espécies preferidas deste segundo subgrupo são representadas pela se-guinte estruturas:<formula>formula see original document page 7</formula>
Espécies adicionais do segundo aspecto da invenção são repre-sentadas pela seguinte estruturas:
<formula>formula see original document page 7</formula>
em que: R9 é selecionado a partir do grupo consistindo em radicais represen-tados pelas seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 8</formula>
Outro aspecto da invenção é dirigido a um método para a modu-lação da atividade catalítica de uma proteína cinase com um composto ousal de qualquer um dos compostos de Fórmulas (l-lll). Em um modo preferi-do, a proteína cinase é selecionada a partir do grupo consistindo em recep-tores de VEGF e receptores de PDGF.Breve Descrição das Figuras:
A Figura 1 ilustra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de 3-alcóxi-4-acilaminoamida partindo-se de 3-hidróxi-4-aminobu-tanoato cloridrato de metila e o agente de acilação ativado 1 -3.
A Figura 2 ilustra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de 2-alcóxi-3-acilaminoamida partindo-se de 2-hidróxi-3-aminopro-pionato cloridratos de metila e agente de acilação ativado 1-3.
A Figura 3 ilustra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de (2S)-2-alcóxi-4-acilamino-amida partindo-se de (2S)-2-hidróxi-4-aminobutanoato cloridrato de metila e o agente de acilação ativado 1-3.
Descrição Detalhada:
Exemplos 1-8: A síntese de ácidos (1-4) e amidas (1-5) é mos-trada na Figura 1. Variações deste procedimento sintético geral podem sercompreendidas e conduzidas por aqueles técnicos no assunto. Desse modo,os compostos da presente invenção podem ser sintetizados por aqueles téc-nicos no assunto.
Exemplo 1: ácido 4-((5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil)-amino)-3-metóxi-butírico
<formula>formula see original document page 9</formula>
A uma suspensão de 4-amino-3-hidroxibutirato de metila (1,0equiv, que foi preparada pelo refluxo de aminoácido livre em metanol secocom 1,2 de equiv HCI) e DIEA (5 equiv) em DCM, Mmt-Cl (1,1 equiv) foi adi-cionada porção a porção a 25°C. Após agitação durante toda noite, o DCMfoi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso em acetato deetila, lavado com salmoura (3x), secado sobre Na2SO4 anidro. O acetato deetila foi então removido, e o resíduo foi secado durante toda a noite sob altovácuo, e submetido a cromatografia instantânea para dar composto 1-1. Auma solução de composto 1-1 em DMF seco, NaH (1,5 equiv) foi adicionadosob argônio. Após agitação a 25°C por 1 hora, Mel (5 equiv) foi adicionado àsolução, e a suspensão resultante foi suavemente agitada a 25°C durantetoda noite. O DMF foi removido sob vácuo; o resíduo foi suspenso em aceta-to de etila, lavado com salmoura (3x), e secado sobre Na2SO4 anidro. Após oacetato de etila ser removido via evaporação, o resíduo resultante foi tratadocom 1% de TFA em DCE/DCM por 30 minutos. Os solventes orgânicos fo-ram então removidos sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi tritura-do com hexano (3x) para obter-se o aminoácido livre 1-2. Este aminoácidofoi usado diretamente na próxima etapa sem qualquer purificação e caracte-rização. Desse modo, a uma solução de 1-2 (2 equiv) e DIEA (5 equiv) emDMF, o composto 1-3 (1 equiv) foi adicionado a 25°C. Após agitação por 30minutos (LC-MS mostra o consumo completo de 1-3), KOH (5 equiv) em á-gua foi adicionado, e a solução foi agitada por outras 2 horas (LC-MS de-monstrou uma hidrólise completa). Os solventes foram removidos sob pres-são reduzida, e HCI (1N, excesso) foi adicionado para dar um precipitado.
Este precipitado foi coletado e lavado (por água) por filtração, secado sobalto vácuo para dar o composto do título (95% baseado no composto 1-3).LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado para C2i H22FN3O5: 416, obti-do: 416. 1H-RMN (DMSO-de, 400 MHz), δ 13,67 (s, 1H), 12,18 (b, 1H), 10,90(s, 1H), 7,75 (dd, J = 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,64 (t, J = 6,0 Hz,1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz1 J = 8,4 Hz, 1H), 3,73 (m, 1H), 3,43-3,31 (m, 2H), 3,22 (s, 3H), 2,52-2,35 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H).
Exemplo 2: ácido 3-etóxi-4-({5-[5-flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilideno-metil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil)-amino)-butírico
<formula>formula see original document page 10</formula>
Uma via similar como aquela para a síntese do Exemplo 1 foiusada para preparar o composto do título. Iodoetano usado ao invés de iodo-metano para obter-se o composto 3-etoxi (9,7% baseado no composto 1-3).LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado para C22H24FN3O5: 430, obti-do: 430.Exemplos 3-8: O procedimento geral para a síntese de amidas(1-5): Uma amina (2 equiv) foi adicionada a uma solução do ácido (1-4), HATU(1,05 mmol), e DIEA (5 equiv) em DMF (5 mL). Após a solução ser agitada a25°C por 2 horas, HCI aquoso (2 mL, 1N) foi adicionado. Esta solução foisubmetida à HPLC preparativa para obter-se o produto de amida puro, quefoi subseqüentemente caracterizado por LC-MS e espectroscopia de RMN.
Exemolo 3: (3-dimetilcarbamoil-2-etóxi-propil)-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-oxo1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxilico
<formula>formula see original document page 11</formula>
A HPLC preparativa deu 13 mg do composto do título (41%) apartir de 30 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254nm, MH+ calculado para C24H29FN4O4: 457, obtido: 457. 1H-RMN (DMSO-d6,400 MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, 9,2 Hz, 1H),7,72 (s, 1H), 7,60 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz,8,4Hz, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,58-3,45 (m, 2H), 3,40-3,27 (m, 2H, rebarbado emsinais de água), 2,97 (s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,07 (t,J =7,2 Hz, 3H).
Exemplo 4: (3-dimetilcarbamoil-2-metóxi-propil)-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxilico
<formula>formula see original document page 11</formula>
HPLC preparativa deu 46 mg do composto do título (36%) a par-tir de 120 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C23H27FN4O4: 443, obtido: 443. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz, 9,2 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,63 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J= 4,8 Hz, 8,8 Hz,1 Η), 3,78 (m, 1 Η), 3,42-3,31 (m, 2Η), 3,30 (s, 3Η), 2,97 (s, 3Η), 2,82 (s, 3Η),2,43 (s, 3Η), 2,41 (s, 3Η), 2,63-2,43 (m, 2Η).
Exemplo 5: (2-metóxi-4-morfolin-4-il-4-oxo-butil)-amida de ácido 5-f5-Flúor-2-oxo-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometin -2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico
HPLC preparativa deu 48 mg do composto do título (37%) a par-
tir de 110 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C25H29FN4O6: 485, obtido: 485. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13.68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, 9,2 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,63 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J= 4,8 Hz, 8,4 Hz,1H), 3,80 (m, 1H), 3,55 (m, 4H), 3,47 (m, 4H), 3,38 (m, 2H), 3,31 (s, 3H),2,60 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H).Exemplo 6: [4-(4-hidróxi-piperidin-1-il)-2-metóxi-4-oxo-butill-amida de ácido5-r5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
HPLC preparativa deu 20 mg do composto do título (33%) a par-tir de 50 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C26H3IFN4O5: 499, obtido: 499. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz, 9,6 Hz, 1H), 7,72(s, 1H), 7,63 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J= 4,4 Hz, 8,4 Hz,1H), 3,92 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,68 (b, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,15 (m, 1H), 3,01(m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,45 (m, 2H), 2,43 (s, 3H),2,41 (s, 3H), 1,70 (m, 2H), 1,30 (m, 2H).
o
r?
H
HExemplo 7: (2-metóxi-4-oxo-4-pirrolidin-1-il-butil)-amida de ácido 5-í5-Flúor-2-0x0-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 13</formula>
HPLC preparativa deu 40 mg do composto do título (32%) a par-tir de 110 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C25H29FN4O4: 469, obtido: 469. 1H-RMN (DMSO-d6) 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz, 9,6 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,63 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, 8,8 Hz,1H), 3,82 (m, 1H), 3,50-3,25 (m, 6H), 3,30 (s, 3H), 2,55-2,45 (m, 2H), 2,43 (s,3H), 2,41 (s, 3H), 1,86 (m, 2H), 1,76 (m, 2H).
Exemplo 8: [2-metóxi-3-(metóxi-metil-carbamoil)-propill-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 13</formula>
HPLC preparativa deu 15 mg do composto do título (15%) a par-tir de 80 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C23H27FN4O5: 459, obtido: 459. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,90 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz, 9,2 Hz, 1H), 7,72(s, 1H), 7,68 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,84 (dd, J= 4,4 Hz, 8,4 Hz,1H), 3,79 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,50-3,35 (m, 2H), 3,31 (s, 3H), 3,13 (s, 3H),2,55-2,45 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H).
Exemplos 9-15: A síntese de ácidos (2-3) e amidas (2-4) é mos-trada na Figura 2. Variações deste procedimento sintético geral podem sercompreendidas e efetuadas por aqueles técnicos no assunto. Desse modo,os compostos da presente invenção podem ser sintetizados por aqueles téc-nicos no assunto.
Exemplo 9: ácido de 3-((5-r5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil)-amino)-2-metóxi-propiônicoequiv, que foi preparada pelo refluxo do aminoácido livre isoserina em meta-nol seco com 1,2 equiv de HCI) e DIEA (5 equiv) em DCM, Mmt-Cl (1,1 e-quiv) foi adicionada porção a porção a 25°C. Após agitação durante toda anoite, o DCM foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso emacetato de etila, lavado com salmoura (3x), secado sob Na2SO4 anidro. Oacetato de etila foi então removido, e o resíduo foi secado durante toda anoite sob alto vácuo, e submetido à cromatografia instantânea para darcomposto 2-1. A uma solução de composto 2-1 em DMF seco, NaH (1,5 e-quiv) foi adicionado sob argônio. Após agitação a 25 0C por 1 hora, Mel (5equiv) foi adicionado à solução, e a suspensão resultante foi suavementeagitada a 25°C durante toda a noite. O DMF foi removido sob vácuo; o resí-duo foi suspenso em acetato de etila, lavado com salmoura (3x), e secadosobre Na2SO4 anidro. Após o acetato de etila ser removido via evaporação, oresíduo resultante foi tratado com 1% de TFA em DCE/DCM por 30 minutos.Os solventes orgânicos foram então removidos sob pressão reduzida, e oresíduo resultante foi triturado com hexano (3x) para obter o aminoácido livre2-2. Este aminoácido foi usado diretamente na próxima etapa sem qualquerpurificação e caracterizações. Desse modo, a uma solução de 2-2 (2 equiv)e DIEA (5 equiv) em DMF, composto 1-3 (1 equiv) foi adicionado a 25°C.Após agitação por 30 minutos (LC-MS mostra o consumo completo de 1-3),25 KOH (5 equiv) em água foi adicionado, e a solução foi agitada por outras 2horas (LC-MS demonstrou uma hidrólise completa). Os solventes foram re-movidos sob pressão reduzida, e HCI (1N, excesso) foi adicionado para darum precipitado. Este precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e
A uma suspensão de 3-amino-2-hidroxipropionato de metila (1,0secado sob alto vácuo, para dar o composto do título (99% baseado nocomposto 1-3). LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado paraC20H20FN3O5: 402, obtido: 402. 1H-RMN (DMSO-d6) 400 MHz), δ 13,67 (s,1H), 12,83 (b, 1H), 10,90 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,69 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,82 (dd, J = 4,8 Hz1 J = 8,4Hz, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,32 (s, 3H), 2,42 (s, 3H),2,40 (s,3H).
Exemplo 10: 2-Etóxi-3-({5-r5-flúor-2-oxo-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1 H-pirrol-3-carbonil)-amino)-ácido propiônicofoi usada para preparar o composto do título. Iodoetano foi usado ao invésde iodometano para obter-se o composto 2-etóxi (38% baseado no compos-to 1-3). LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado para C2iH22FN405:416, obtido: 416. 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz), δ 13,67 (s, 1H), 12,80 (b,1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J =2,4 Hz, J =9,2 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,68 (t,J = 6,Q Hz, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J = 8,4 Hz, 1H), 4,00 (dd,J= 5,2 Hz, J= 7,6 Hz, 1H), 3,58 (m, 2H), 3,41 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s,3H), 1,14 (t, J= 6,8 Hz, 3H).
(compostos 2-4): Uma amina correspondente (2 equiv) foi adicionada auma solução do ácido (composto 2-3), HATU (1,05 mmol), e DIEA (5 equiv)em DMF (5 ml_). Após a solução ser agitada a 25°C por 2 horas, HCI aquoso(2 mL, 1N) foi adicionado. Esta solução foi submetida à HPLC preparativapara obter-se o produto de amida puro, que foi subseqüentemente caracteri-zado por LC-MS e espectroscopia de RMN.
Uma via similar conforme aquela para a síntese do Exemplo 9Exemplos 11-15: O procedimento geral para a síntese de amidasExemplo 11: (2-dimetilcarbamoil-2-etóxi-etil)-amida de ácido 5-r5-Flúor-2-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxilico
<formula>formula see original document page 16</formula>
HPLC preparativa deu 46 mg do composto do título (62%) a par-tir de 70 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C23H27FN4O4: 443, obtido: 443.
Exemplo 12: (2-etoxi-3-morfolin-4-ila-3-oxo-propila)-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 16</formula>
HPLC preparativa deu 40 mg do composto do título (49%) a par-tir de 70 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C25H29FN4O5: 485, obtido: 485. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,67 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H),7,71 (s, 1H), 7,70 (m, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J = 8,4 Hz,1H), 4,40 (m, 1H), 3,73-3,35 (m, 12H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,12 (t, J =7,2 Hz, 3H).
Exemplo 13: (2-dimetilcarbamoil-2-metóxi-etil)-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometin -2.4-dimetil-1 H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 16</formula>
HPLC preparativa deu 93 mg do composto do título (76%) a par-tir de 115 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C22H25FN4O4: 429, obtido: 429. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,90 (s, 1H), 7,75 (dd, J= 2,4 Hz, J= 9,6 Hz, 1H),7,72 (m, 1 Η), 7,71 (s, 1Η), 6,93 (m, 1Η), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J = 8,8 Hz,1 Η), 4,40 (dd, J= 4,8 Hz, J= 7,2 Hz1 1Η), 3,50 (m, 1Η), 3,32 (m, 1Η), 3,24(s, 3Η), 3,10 (s, 3Η), 2,86 (s, 3Η), 2,43 (s, 3Η), 2,41 (s, 3Η).Exemplo 14: (2-metóxi-3-morfolin-4-il-3-oxo-propil)-amida de ácido 5-f5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
HPLC preparativa deu 98 mg do composto do título (73%) a par-tir de 115 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,H+ calculado para C24H27FN4O5: 471, obtido: 471. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,67 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,75 (dd, J= 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H),7,71 (s, 1H), 7,70 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J = 8,8 Hz,1H), 4,34 (dd, J = 4,8 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 3,85-3,30 (m, 10H), 3,26 (s, 3H),2,44 (s, 3H), 2,42 (s, 3H).
Exemplo 15: (2-metóxi-3-oxo-3-pirrolidin-1-il-propil)-amida de ácido 5-í5-Flúor-2-0X0-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometin-2,4-dimetil-1 H-pirrol-3-ácido carbo-xílico
HPLC preparativa deu 86 mg do composto do título (66%) a par-tir de 115 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C24H27FN4O4: 455, obtido: 455. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,67 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, J= 9,6 Hz, 1H),7,70 (m, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,4 Hz, J = 8,4 Hz,1H), 4,20 (dd, J= 5,2 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 3,60-3,47 (m, 3H), 3,43-3,28 (m,3H), 3,26 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 1,88 (m, 2H), 1,78 (m, 2H).
Exemplos 16 - 315: Ainda exemplos adicionais de amida sãomostrados na tabela seguinte:<formula>formula see original document page 18</formula>
<table>table see original document page 18</column></row><table>-continuação-
<formula>formula see original document page 19</formula>-continuação-
<formula>formula see original document page 20</formula><table>table see original document page 21</column></row><table>
Na tabela acima, R9 é selecionado a partir dos seguintes radicais:<formula>formula see original document page 22</formula>
Estes exemplos de amida 16 - 315 podem ser produzidos poraqueles técnicos no assunto que seguem o procedimento acima e/ou proce-dimentos conhecidos.
Exemplos 316-320: A síntese de ácidos (3-3) e amidas (3-4) émostrada na Figura 3. Variações deste procedimento sintético geral podemser compreendidas e efetuadas por aqueles técnicos no assunto. Desse mo-do, os compostos da presente invenção podem ser sintetizados por aquelestécnicos no assunto.
Exemplo 316: ácido de (S)-4-((5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilideno-metin-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil)-amino)-2-metóxi-butírico
<formula>formula see original document page 23</formula>
A uma suspensão de 4-amino-2-hidroxipropionato de metila (1,0equiv, que foi preparada pelo refluxo do aminoácido livre em metanol secocom 1,2 equiv de HCI) e DIEA (5 equiv) em DCM, Mmt-Cl (1,1 equiv) foi adi-cionada porção a porção a 25°C. Após agitação durante toda a noite, o DCMfoi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso em acetato deetila, lavado com salmoura (3x), secado sob Na2SO4 anidro. O acetato deetila foi então removido, e o resíduo foi secado durante toda a noite sob altovácuo, e submetido à cromatografia instantânea para dar composto 3-1. Auma solução de composto 3-1 em DMF seco, NaH (1,5 equiv) foi adicionadosob argônio. Após agitação a 25 0C por 1 hora, Mel (5 equiv) foi adicionado àsolução, e a suspensão resultante foi suavemente agitada a 25°C durantetoda a noite. O DMF foi removido sob vácuo; o resíduo foi suspenso em ace-tato de etila, lavado com salmoura (3x), e secado sobre Na2SO4 anidro. Apóso acetato de etila ser removido via evaporação, o resíduo resultante foi tra-tado com 1% de TFA em DCE/DCM por 30 minutos. Os solventes orgânicosforam então removidos sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi tritu-rado com hexano (3x) para obter o aminoácido livre 3-2. Este aminoácido foiusado diretamente na próxima etapa sem qualquer purificação e caracteriza-ção. Desse modo, a uma solução de 3-2 (2 equiv) e DIEA (5 equiv) em DMF,composto 1-3 (1 equiv) foi adicionado a 25°C. Após agitação por 30 minutos(LC-MS mostra o consumo completo de 1-3), KOH (5 equiv) em água foi adi-cionado, e a solução foi agitada por outras 2 horas (LC-MS demonstrou umahidrólise completa). Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, eHCI (1N, excesso) foi adicionado para dar um precipitado. Este precipitadofoi coletado e lavado (por água) por filtração, secado sob alto vácuo, paradar o composto do título o composto do título (97% baseado no composto 1-3). LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado para C21H22FN3O5: 416,obtido: 416. 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz), δ 13.68 (s, 1H), 12.80 (b, 1H),10.90 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 2.4 Hz, J = 9.6 Hz1 1H), 7.71 (s, 1H), 7.65 (t, J =5.6 Hz, 1H), 6.93 (m, 1H), 6.83 (dd, J= 4.8 Hz, J = 8.4 Hz, 1H), 3.77 (dd, J =4.0 Hz, J= 8.8 Hz, 1H), 3.40-3.30 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.41 (s,3H), 1.92 (m, 1H), 1.78 (m, 1H).
Exemplo 317: ácido (S)-2-Etóxi-4-((5-r5-flúor-2-oxo-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ili-denometil1-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carbonil)-amino)-butírico
<formula>formula see original document page 24</formula>
Uma via similar conforme aquela para a síntese do Exemplo316 foi usada para preparar o composto do título. Iodoetano foi usado aoinvés de iodometano para obter-se o composto de 2-etóxi (84% baseado nocomposto 1-3). LC-MS: pico simples a 254 nm, MH+ calculado paraC22H24FN3O5: 430, obtido: 430. 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz), δ 13,68 (s,1H), 12,70 (b, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,66 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J= 8,4Hz, 1H), 3,85 (dd, J = 4,0 Hz, J = 8,4 Hz, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,40-3,25 (m,3H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,92 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,13 (t, J= 7,2 Hz,3H).
Exemplo 318-320: O procedimento geral para a síntese de ami-das (compostos 3-4): Uma amina correspondente (2 equiv) foi adicionada auma solução do ácido (composto 3-3), HATU (1.05 mmol), e DIEA (5 equiv)em DMF (5 mL). Após a solução ser agitada a 25°C por 2 horas, HCI aquo-so (2 mL, 1N) foi adicionado. Esta solução foi submetida à HPLC preparativapara obter-se o produto de amina puro, que foi subseqüentemente caracteri-zado por LC-MS e espectroscopia de RMN.
Exemplo 318: ((S)-3-dimetilcarbamoil-3-metóxi-propil)-amida de ácido 5-Í5-Flúor-2-oxo-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 25</formula>
HPLC preparativa deu 37 mg do composto do título (58%) a par-tir de 60 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C23H27FN4O4: 443, obtido: 443. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H),7,72 (s, 1H), 7,65 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J= 4,8 Hz1 J =8,4 Hz, 1H), 4,20 (dd, J= 4,0 Hz, J= 8,0 Hz, 1H), 3,30 (m, 2H), 3,27 (s, 3H),3,04 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,80 (m, 2H).
Exemplo 319: ((S)-3-metóxi-4-morfolin-4-ila-4-oxo-butila)-amida de ácido 5-[5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil]-2.4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
<formula>formula see original document page 25</formula>
HPLC preparativa deu 32 mg do composto do título (46%) a par-tir de 60 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C25H29FN4O5: 485, obtido: 485. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,68 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 2,4 Hz1 J= 9,6 Hz, 1H),7,72 (s, 1 Η), 7,65 (t, J= 5,6 Hz, 1Η), 6,93 (m, 1Η), 6,83 (dd, J = 4,8 Hz, J =8,4 Hz, 1Η), 4,19 (dd, J= 4,8 Hz1 J= 8,0 Hz, 1Η), 3,57 (m, 6Η), 3,47 (m, 2Η),3,28 (m, 2Η), 3,23 (s, 3Η), 2,44 (s, 3Η), 2,41 (s, 3Η), 1,79 (m, 2Η).Exemplo 320: ((S)-3-dimetilcarbamoil-3-etóxi-propil)-amida de ácido 5-Í5-Flúor-2-oxo-1.2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenometil1-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxílico
HPLC preparativa deu 67 mg do composto do título (57%) a par-tir de 120 mg de material de partida (ácido). LC-MS: pico simples a 254 nm,MH+ calculado para C24H29FN4O4: 457, obtido: 457. 1H-RMN (DMSO-d6, 400MHz), δ 13,67 (s, 1H), 10,88 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 7,71(s, 1H), 7,56 (m, 1H), 6,91 (m, 1H), 6,83 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,45-3,25 (m,4H), 3,03 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,80 (m, 2H).
Os compostos aqui descritos são atualmente representativos deconcretizações preferidas, são exemplares, e não são pretendidos como Ii-mitações no escopo da invenção. Será prontamente aparente a um versadotécnico que substituições e modificações variadas podem ser feitas à inven-ção aqui descritas sem fugir do escopo e espírito da invenção.
Ensaio Bioquímico de VEGFR
Os compostos foram ensaiados para atividade bioquímica porUpstate Ltd em Dundee, Reino Unido, de acordo com o seguinte procedi-mento. Em um volume de reação final de 25 μΙ, KDR (h) (5-10 mU) é incuba-do com 8 mM de MOPS pH 7,0, 0,2 mM de EDTA, 0,33 mg/ml de proteínabásica mielin, 10 mM de MgAcetato e [(-33P-ATP] (atividade específica deaproximadamente 500 cpm/pmol, concentração conforme requerida). A rea-ção é iniciada pela adição da mistura de MgATP. Após incubação por 40minutos à temperatura ambiente, a reação é cessada pela adição de 5 μΙ deuma solução de ácido fosfórico 3%. 10 μΙ da reação é então marcada em umΡ30 filtermat, e lavada três vezes por 5 minutos em 75 mM de ácido fosfóri-co, e uma vez em metanol antes da secagem e contagem por cintilação.
Os compostos da presente invenção foram testados neste en-saio e exibiram IC50 entre 1 - 5.000 nM.
Ensaio de fosforilacão de PDGFR
Células NIH3T3 são colocadas em uma placa de 96 cavidadesem DMEM + 10% FBS. Em seguida à fixação da célula, as células são en-fraquecidas com soro durante toda a noite antes da adição dos compostostestes químicos a uma concentração final de 0,1% de DMSO. Em seguida a1 hora de incubação a 37°C, as células são removidas a partir do incubadore permitidas arrefecer à temperatura ambiente por 20 minutos antes da es-timulação com PDGF-BB por 15 minutos à temperatura ambiente. As célulassão colocadas no gelo por 5 minutos, o meio removido, e as células são Ii-sadas com 100 μί-^ητ^ο Iysis de cavidade por 1 hora a 4°C. As placas sãogiradas a 2000 rpm por 30 minutos a 4°C, e PDGFR fosforilatado solubiliza-do é quantificado por ELISA.
As microplacas de alta ligação são incubadas durante toda anoite à temperatura ambiente com anticorpo de captura anticamundongoPDGFR-b em PBS, lavadas com PBS+0,05% Tween20, e bloqueadas por 4 horas ã temperatura ambiente com PBS+1% BSA, e lavadas novamente.100 μΙ_ de lisato/cavidade é incubado durante toda a noite a 4 °C. As placassão lavadas, e as cavidades são incubadas com 100 μl_/cavidade de anti-corpo de camundongo antifosfotirosina-HRP por 2 horas a 37°C. As placassão lavadas novamente, e detecção colorométrica é realizada usando-seTMB como substrato.
Muitos dos compostos nesta invenção mostraram IC5o de menosdo que 1 μΜ neste ensaio.Ensaio de fosforilacão de VEGFR
Células NIHT3T que sobre-expressam VEGFR-2 (FLK-1) de ca-mundongo são colocadas em uma placa de 96 cavidades em DMEM+10%FBS. Em seguida à fixação da célula por 4 horas, as células são desprovidasde soro durante toda a noite antes da adição dos compostos de teste quími-cos a uma concentração final de 0,1% DMSO. Em seguida a 1 hora de incu-bação a 37°C, as células são estimuladas por 15 minutos a 37°C comVEGF165. As células são colocadas no gelo por 5 minutos, o meio removi-do, lavadas uma vez com PBS frio em gelo, e as células são Iisadas com 50μίΛβπ^ο Iisys cavidade por 1 hora a 4°C. As placas são giradas por 10minutos a 2000 rpm a 4°C, e VEGFR fosforilatado solubilizado é quantificadopor ELISA.
As microplacas de alta ligação são incubadas durante toda anoite à temperatura ambiente com anticorpo de VEGFR em 50 μί de PBS,lavadas com PBS+0,05% Tween20, e bloqueadas por 4 horas à temperaturaambiente com PBS+1% BSA1 e lavadas novamente. 50 μί de Iisa-to/cavidade é incubado durante toda a noite a 4 °C. As placas são lavadas, eas cavidades são incubadas com 50 μL/cavidade de anticorpo de camun-dongo antifosfotirosina-HRP por 2 horas a 37°C. As placas são lavadas no-vãmente, e detecção colorométrica é realizada usando-se TMB como subs-trato.
Muitos dos compostos nesta invenção mostraram IC5o de menosdo que 1 μΜ neste ensaio.
Ensaio Celular: HUVEC: proliferação induzida de VEGF
Os compostos foram ensaiados para atividade celular na prolife-ração induzida por VEGF de células HUVEC. As células HUVEC (Cambrex,CC-2517) foram mantidas em EGM (Cambrex, CC-3124) a 37°C e 5% deCO2. As células HUVEC foram colocadas em uma densidade de 5000 célu-las/cavidade (placa de 96 cavidades) em EGM. Em seguida a fixação da cé-lula (1 hora), o meio EGM foi substituído por EBM (Cambrex, CC-3129) +0,1% de FBS (ATTC, 30-2020), e as células foram incubadas por 20 horas a37°C. O meio foi substituído por EBM +1% FBS, os compostos foram diluí-dos em série em DMSO e adicionados às células a uma concentração finalde 0 - 5.000 nM e 1% de DMSO. Em seguida à uma pré-incubação de 1 ho-ra a 37°C, as células foram estimuladas com 10ng/ml de VEGF (Sigma,V7259), e incubadas por 45 horas a 37°C. A proliferação da célula foi medi-da pela incorporação de BrdU DNA por 4 horas, e a etiqueta BrdU foi quanti-ficada por ELISA (Roche kit, 16472229) usando-se 1M H2SO4 para cessar areação. A absorvância foi medida a 450nm usando-se um comprimento deonda de referência a 690nm.
Descrição Detalhada das Figuras:
A Figura 1 mostra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de 3-alcóxi-4-acilaminoamida partindo-se de 3-hidróxi-4-aminobu-tanoato cloridratos de metila e o agente de acilação ativado 1-3. O materialde partida amino éster cloridrato foi preparado pelo refluxo do aminoácidolivre em metanol anidro na presença de 1,2 eq de HCI. O grupo amino foiprotegido como seu derivado monometoxitritil na presença do grupo hidroxilsecundário para dar o hidróxi éster 1-1 neutro. O grupo hidroxil foi alquilata-do usando-se iodeto de metila- ou de etila para formar o amino alcóxi ésterprotegido. O grupo Mmt foi removido em ácido trifluoracético 1% deixando oamino cloridrato ou composto trifluoracetato 1-2. Este composto foi rapida-mente acilatado com o agente de acilação pré-formado 1-3, e o metil ésterfoi hidrolizado por hidróxido de potássio em água/DMF para dar 1-4. O ácidolivre foi então exposto a HATU, amina e diisopropiletila amina em DMF paradar a alcóxi amida 1-5.
A Figura 2 mostra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de 2-alcóxi-3-acilaminoamida partindo-se de 2-hidróxi-3-aminopro-pionato cloridratos de metila e o agente de acilação ativado 1-3. O materialde partida amino éster cloridrato foi preparado por refluxo do aminoácidolivre em metanol anidro na presença de 1,2 eq de HCI. O grupo amino foiprotegido como seu derivado monometoxitritil na presença do grupo hidroxilasecundário para dar 2-1. O grupo hidroxila foi alquilatado usando-se iodetode metila ou de etila para formar o amino alcóxi éster protegido. O grupoMmt foi removido em ácido trifluoracético 1% deixando o cloridrato amino oucomposto trifluoracetato 2-2. Este composto foi rapidamente acilatado com oagente de acilação pré-formado 1 -3, e o metil éster foi hidrolizado por hidró-xido de potássio em água/DMF para dar 2-4. O ácido livre foi então expostoa HATU, amina e diisopropiletila amina em DMF para dar o alcóxi amida 2-5.
A Figura 3 mostra um esquema que é usado para a síntese dosderivados de (2S)-2-alcóxi-4-acilamino-amida partindo-se de (2S)-2-hidróxi-4-aminobutanoato cloridrato de metila e o agente de acilação ativado 1-3. Omaterial de partida amino éster cloridrato foi preparado pelo refluxo do ami-noácido livre em metanol anidro na presença de 1,2 eq de HCI. O grupo a-mino foi protegido como seu derivado de monometoxitritila na presença dogrupo hidroxila secundário para dar o hidróxi éster neutro 3-1. O grupo hi-droxila foi alquilado usando-se iodeto de metila ou de etila para formar o a-mino alcóxi éster protegido. O grupo Mmt foi removido em ácido trifluoracéti-co 1%, deixando o amino cloridrato ou composto trifluoracetato 3-2. Estecomposto foi rapidamente acilatado com o agente de acilação pré-formado1-3, e o metil éster foi hidrolizado por hidróxido de potássio em água/DMFpara dar 3-4. O ácido livre foi então exposto a HATU, amina e diisopropiletilaamina em DMF para dar a alcóxi amida 3-5.

Claims (16)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é representado pelaR1 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio,halo, (C1-C6) alquila, (C3-C8) cicloalquila, (C1-C6) haloalquila, hidróxi, (C1-C6) alcóxi, amino, (C1-C6) alquilamino, amida, sulfonamida, ciano, (C6-C10)arila substituída ou não-substituída;R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio,halo, (C1-C6) alquila, (C3-C8) cicloalquila, (C1-C6) haloalquila, hidróxi, (C1-C6) alcóxi, (C2-C8) alcoxialquila, amino, (C1-C6) alquilamino, (C6-C10) ari-lamino;R3 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio,(C1-C6) alquila, (C6-C10) arila, (C5-C10) heteroarila, e amida;R4, R5, R6 e R8 são independentemente selecionados a partir dogrupo consistindo em hidrogênio e (C1-C6) alquila;R7 é (C1-C6) alquila;R9 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidróxi, (C1-C6) O-alquila, (C3-C8) O-cicloalquila, e NR10R11; onde R10 e R11 são inde-pendentemente selecionados a partir do grupo consistindo em hidrogênio,(C1-C6) alquila, (C1-C6) hidroxialquila, (C2-C6) dihidroxialquila, (C1-C6) al-cóxi, ácido (C2-C6) alquil-carboxílico, ácido (C1-C6) alquil-fosfônico, ácido(C1-C6) alquil-sulfônico, ácido (C2-C6) hidroxialquil-carboxílico, (C1-C6) al-quilamida, (C3-C8) cicloalquila, (C5-C8) heterocicloalquila, (C6-C8) arila,(C5-C8) heteroarila, ácido (C3-C8) cicloalquil-carboxílico, ou R10 e R11 juntoscom N formam um (C5-C8) anel heterocíclico ou não-substituído ou substitu-ido por uma ou mais hidroxilas, cetonas, éteres, e ácido carboxílicos;η é 1, 2, ou 3; em é O, 1, ou 2;ou, um sal farmaceuticamente aceitável, seu tautômero, um sal farmaceuti-camente aceitável de seu tautômero, ou um pró-fármaco destes.
2. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é representado pela Fórmula(II):<formula>formula see original document page 32</formula>NR5(CHR6)n-CH(OR7)-(CHR8)m-C(O)OR12Formula IIem que R12 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, (C1-C6) alquila, e (C3-C8) cicloalquila.
3. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 2, caracterizado pelo fato de que:R1 e R2 são independentemente selecionados a partir do grupoconsistindo em hidrogênio e flúor;R3 e R4 são meti Ia;R5, R6, R8, e R12 são hidrogênio;R7 é (C1-C6) alquila;η é 1 ou 2; em é O ou 1.
4. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do gru-po consistindo em:reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é representado por qualqueruma das seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 33</formula><formula>formula see original document page 34</formula>
5. [Claim missing on original document]
6. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é representado pela Fórmula(III):<formula>formula see original document page 34</formula>
7. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que:R1 e R2 são independentemente selecionados a partir do grupoconsistindo em hidrogênio, halo, ciano;R3 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio,(C1-C6) alquila, (C6-C10) arila, (C5-C10) heteroarila, e amida;R4, R5, R6 e R8 são independentemente selecionados a partir dogrupo consistindo em hidrogênio e (C1-C6) alquila;R7 é (C1-C6) alquila;η é 1 ou 2;m é O ou 1; eR10 e R11 são selecionados a partir do grupo consistindo em hi-drogênio, (C1-C6) alquila, (C1-C6) hidroxialquila, (C2-C6) dihidroxialquila,(C1-C6) alcóxi, ácido (C2-C6) alquil-carboxílico, ácido (C1-C6) alquil-fosfônico, ácido (C1-C6) alquil-sulfônico, ácido (C2-C6) hidroxialquil-carboxílico, (C1-C6) alquilamida, (C3-C8) cicloalquila, (C5-C8) heterocicloal-quila, (C6-C8) arila, (C5-C8) heteroarila, ácido (C4-C8) cicloalquil-carboxílico, ou R10 e R11 juntos com N formam um (C5-C8) anel heterocíclicoou não-substituído ou substituído com um ou mais hidroxilas, cetonas, éte-res, e ácido carboxílicos.
8. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que m é 0.
9. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do gru-po representado pelas seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 35</formula>
10. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é representado por qualqueruma das seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 36</formula><formula>formula see original document page 37</formula>
11. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que m é 1.
12. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do gru-po representado pelas seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 37</formula>
13. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é representado por qualqueruma das seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 38</formula>
14. Composto, sal, tautômero, ou pró-fármaco de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do gru-po representado pelas seguintes estruturas compreendendo qualquer umdos núcleos I-IV em associação com qualquer um dos grupos R9 mostradosabaixo:<formula>formula see original document page 39</formula>em que R9 é selecionado a partir do grupo consistindo em radicais represen-tados pelas seguintes estruturas:<formula>formula see original document page 39</formula><formula>formula see original document page 40</formula>
15. Método, caracterizado pelo fato de que compreende a modu-lação da atividade catalítica de uma proteína cinase com um composto ousal como definido em qualquer uma das reivindicações 1-14.
16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pe-lo fato de que a referida proteína cinase é selecionada a partir do grupo con-sistindo em receptores de VEGF e receptores de PDGF.
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