BRPI0615339A2

BRPI0615339A2 - Combinação farmacêutica para a prevenção ou tratamento de doenças associadas com a diminuição de lágrimas

Info

Publication number: BRPI0615339A2
Application number: BRPI0615339-9A
Authority: BR
Inventors: Mamoru Kobayashi; Tetsuya Asari
Original assignee: Kissei Pharmaceutical
Priority date: 2005-08-29
Filing date: 2006-08-28
Publication date: 2011-05-17
Also published as: US20100197788A9; AU2006285963A1; TW200744635A; KR20080038412A; IL189620A0; EP1938837A4; WO2007026630A1; NO20081550L; EP1938837A1; JPWO2007026630A1; RU2008112176A; US20080306160A1; CN101252952A; CA2619445A1; ZA200801858B

Abstract

COMBINAçãO FARMACêUTICA PARA A PREVENçãO OU TRATAMENTO DE DOENçAS ASSOCIADAS COM A DIMINUIçãO DE LAGRIMAS é pretendido prover uma droga preventiva ou terapêutica para uma doença causada por uma diminuição em fluido lacrimal. Mais especificamente, é pretendido prover uma droga preventiva ou terapêutica para uma doença causada por uma diminuição em fluido lacrimal (olho seco, ceratoconjuntivite seca, dano no epitélio ceratoconjuntivo, uma diminuição na lacrimação, xeroftalmia, síndrome de olho seco relacionada com idade, danos ao olho na síndrome de Stevens-Johnson, danos ao olho na síndrome de Sjogren, úlcera ceratoconjuntiva, secura pelo uso de lentes de contato ou semelhantes), caracterizada por conter um estimulante de receptor <225>^3^ adrenérgico. Ainda, é pretendido prover uma droga combinada,caracterizada por conter uma combinação do estimulante de receptor <225>^3^-adrenérgico e um estimulante de receptor <225>^2^ adrenérgico. em combinação.

Description

"COMBINAÇÃO FARMACÊUTICA PARA A PREVENÇÃO OU TRA-TAMENTO DE DOENÇAS ASSOCIADAS COM A DIMINUIÇÃO DE LÁGRIMAS"

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a uma composiçãofarmacêutica útil para a prevenção ou tratamento de uma do-ença associada com diminuição em lágrimas.

Mais especificamente, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para a prevenção ou trata-mento de doenças associadas com diminuição em lágrimas, quecompreende um estimulante de β3 adrenoceptor (daqui por di-ante referido como "β3 AR") . A presente invenção também re-fere-se a uma combinação farmacêutica adicionalmente compre-endendo um estimulante de adrenoceptor (daqui por diantereferido como "β2 AR") .

Antecedentes da Técnica

Uma doença típica associada com diminuição de lágrimas é o-Iho seco. Pelo Grupo de estudo de Olho Seco, olho seco é de-finido como distúrbios do epitélio ceratoconjuntivo causadospor anormalidade qualitativa ou quantitativa de lágrimas(camada lacrimal) e critérios diagnósticos de olho seco ba-seado em exame de anormalidades qualitativas e quantitativasdas lágrimas (camada ocular) e distúrbios do epitélio cera-toconjuntivo foram propostos (por exemplo, ver referêncianão-patente 1) . Os critérios diagnósticos têm sido re-investigados cada 10 anos, e os critérios de 1995 são cor-rentemente amplamente usados no Japão. No exterior, os cri-térios diagnósticos NIH (Lemp et al., 1995) são usados emgeral. Como principais sintomas subjetivos de olho seco, se-cura, dor, coceira dos olhos, embaçamento de visão devido adesordens do epitélio ceratoconjuntivo, severas desordens devisão e semelhantes são conhecidas.

Em adição a olho seco, as seguintes doenças podemser consideradas sindromes com sintomas similares que sãoassociados com diminuição em lágrimas: desordens secas decórnea e conjuntiva, desordens do epitélio ceratoconjuntivo,sindrome com diminuição em secreção de lágrimas, xeroftalmi-a, olho seco devido a envelhecimento, oftalmopatia em sín-drome de Stevens-Johnson, oftalmopatia em sindrome deSjõgren, úlcera ceratoconjuntiva, oligodacria, ceratoconjun-tiva sicca, pênfigo ocular, blefarrite marginalis, oclusãoinsuficiente de pálpebras dos olhos, neuroparalisia sensori-al, conjuntivite alérgica, e secura de conjuntivite pós-viral, cirurgia pós-catarata, em utilização de lentes decontato ou em operação de terminal mostrador visual (VDT).

0 principal tratamento destas doenças associadascom diminuição em lágrimas é fármacoterapia usando prepara-ções oftálmicas, embora cirurgias tal como plug no ponto Ia-crimal e oclusão pontual também são realizadas. Fármacotera-pia principalmente empregada inclui lágrimas artificiais pa-ra o propósito de aumento de lágrimas e gotas oculares dehialuronato de sódio para o propósito de estabilização delacrima sobre o epitélio ceratoconjuntivo. Entretanto, umavez que a camada aquosa, camada de lipideo e camada de muco-sa, que formam a camada lacrimal, são ditas serem importan-tes para manutenção de superfície ceratoconjuntiva saudável,drogas usadas correntemente não são suficientemente efeti-vas. Quando ela é causada por alergia ou inflamação, gotasoculares esteroidais e antialérgicas são usadas. Entretanto,reações adversas como aumento em pressão intraocular induzi-da por prolongada administração de esteróides algumas vezessão problemáticas. 0 número de pacientes continua a aumen-tar, na medida em que o ambiente de pacientes muda como au-mento em operações com olhos fixos em instrumentos AO, umapoluição de ar e alergia. Assim, inicial desenvolvimento deum agente terapêutico efetivo é desejado (por exemplo, verreferência não-patente 2).

Existem dois fatores na diminuição de lágrimas. Umé diminuição em secreção de lágrimas e o outro é aumento emevaporação e excreção de lágrimas. Secreção de lágrimas o-corre principalmente em duas maneiras. Uma é secreção refle-xo induzida por estimulação para a região controlada pelonervo trigeminal (córnea, conjuntiva, pele, nariz, emoção esemelhantes) . A outra é secreção básica, que protege a su-perfície ceratoconjuntiva. Em caminhos de nervo que facili-tam secreção de lágrimas, existem tr~es dos nervos simpaté-ticos e parassimpatético, trigeminal (ver referência não pa-tente 3) . Embora secreção reflexo seja dita ser providaprincipalmente pela glândula lacrimal principal, outrasglândulas secretoras podem estar desempenhando papéis (verreferência não patente 4). É reportado que a principal glân-25 dula lacrimal é controlada pelos nervos simpatético e paras-simpatético ou neuropeptídeos como neuropeptídeo Y. Quandosecreção de lágrimas é suprimida por bloqueadores β-adrenoceptores como propranolol, é pensado que subtipo PiARou P2AR desempenha um papel em secreção de lágrimas (ver re-ferência não-patente 5) . Por outro lado, secreção de Iipi-deos, que previne a evaporação de lágrimas, origina-se nasglândulas meibomianas, glândulas Zeis e glândulas Moll (verreferência não-patente 4), e é controlada pelos nervos sim-patético e parassimpatético e neuropeptideos como substânciaP. Em adição, foi elucidado que glicoproteinas como mucinaque forma a camada mucosa são secretadas de células gobletee células de mucosa na glândula lacrimal (ver referêncianão-patente 6) . Entretanto, o detalhado mecanismo da secre-ção permanece indeterminado.É dito que hipofunção destes Ii-pideos e secreção de mucosa causam o colapso da estrutura detr~es camadas lacrimal da ceratoconjuntiva e desempenha umpapel importante em olho seco como um resultado.

Lágrima suprida pela glândula lacrimal e cerato-conjuntiva contem substâncias bioativas tais como vários e-letrólitos, proteínas e vitamina Δ. Entre proteínas secreta-das em lágrimas, mucina é conhecida como uma glicoproteínaoriginando de ceratoconjuntiva e é pensada proteger princi-palmente o globo ocular. Como proteínas originando-se daglândula lacrimal, mucina, lactoferrina, lipocaína, IgA,complemento, fibronectina, EGF (fator de crescimento epite-lial), HGF (fator de crescimento hepatocelular), TGF (fatorde crescimento transformante)βι, TGFP2, várias citocinas, a—milase, SOD (superóxido dismutase), lisozima e semelhantessão conhecidas. Estas proteínas são pensadas estarem em car-ga de prevenção de evaporação de umidade, ação antibacteria-na e suprimento de nutrição para os tecidos oftálmicos e se-melhantes. Desenvolvimento de uma droga que repare sítiosdanificados do epitélio ceratoconjuntivo em olho seco e ou-tras doenças e previne a exarcebação através de facilitaçãode secreção de lágrimas que contenham estas proteínas é de-sejada.

Nestes anos, subtipo β3 R foi reportado como umsubtipo de β-adrenoceptor de sistema de nervo simpatético.Entretanto, a existência ou fisiologia deste subtipo no ór-gão visual não foi reportada. Por outro lado, foi reportadoque um estimulante de p3 AR é útil para a prevenção ou tra-tamento de obesidade, hiperglicemia, uma doença causada porhipermotilidade de trato intestinal, pollakiuria ou inconti-nência urinária, depressão, uma doença causada por cálculobiliar ou hipermotilidade de trato biliar ou semelhantes(ver referências de patente 1 e 2). Entretanto, não foi ain-da reportado ou sugerido que um estimulante β3 AR é útil pa-ra a prevenção ou tratamento de uma doença associada com di-minuição em lágrimas como olho seco.

É conhecido que um estimulante P2AR exerce um e-feito inibidor contra contração de músculo liso e é útil co-mo um agente para o tratamento de asma bronquial, aborto a-meaçado ou parto prematuro ou semelhantes (por exemplo, verreferência não-patente 7) . Em adição, foi reportado que umestimulante P2AR que é seletivo~P2 comparado a sua atividadeestimulante PiAR tem efeitos facilitantes de secreção de lá-grimas e/ou secreção de proteína em lágrima, é útil para aprevenção e tratamento de oftalmopatia seca ou semelhantes etem uma vantagem em que ele tem menos cardioatividade que umestimulante PAR tendo uma atividade estimulante PiAR (refe-rência patente 3). Nada, entretanto, foi descrito ou sugeri-do sobre um efeito de um estimulante P3AR ou um efeito com-binação de um estimulante P2 AR e um estimulante P3 AR sobresecreção de lágrimas nestas referências.

Como um estimulante P3AR tendo uma atividade esti-mulante P2AR, um tipo de derivados de ácido amino etil feno-xi acético são conhecidos e foram reportados serem úteis co-mo um agente para alivio de dor e promoção de remoção decalculi em urolitiase (por exemplo, ver referência de paten-te 4). Entretanto, a referência não descreve nem sugere queestes derivados de ácido amino etil fenoxi acético são úteispara as doenças associadas com diminuição em lágrimas.

[Referência de Patente 1] Publicação InternacionalN0-WO 00-02846 panfleto.

[Referência de Patente 2] Publicação InternacionalN0" WO 2004-072016 panfleto

[Referência de Patente 3] Publicação InternacionalN0" WO 01-41806 panfleto.

[Referência de patente 4] Publicação InternacionalN°- WO 99-05090 panfleto.

[Referência não-patente 1] Jun Shimazaki et al.,Ganka (Ophthalmology), 1995, Vol. 37, pp. 765-770.

[Referência não-patente 2] Editado por Kazuo Tsu-bota, Dry eye clinic, Igakusyoin, 2000, pp. 43-53.

[Referência não-patente 3] Editada por YoshihisaOguchi et al. , Ocular Surface no Shindan to Chiryo (Diagno-sis and Treatment of Ocular Surface), Medicai Aoi Publicati-on, 1993, pp. 15-30.

[Referência não-patente 4] Lemp Μ.A. et al. , Thelacrimal apparatus. Adler's physiology of the eye, Edi.9,Mosby Year Book company, 1992, pp.18-28.

[Referência não-patente 5] Petounis A. D. et al.,Int. Op'hthalm., 1989, Vol. 13, pp. 75-80.

[Referência não-patente 6] Sullivan D. A. et al.,Lacrimal grand, tear film and dry eye syndromes, PlenumPress company, 1994, pp. 1-9.

[Referência não-patente 7] Editada por Chikako Ta-naka et al., NEW Yakurigaku (New pharmacology) , Nankodo,2002, pp. 227-236.

Exposição da Invenção

Problema que a invenção tem por objeto resolver

O propósito da presente invenção é prover uma com-posição farmacêutica para a prevenção ou tratamento de umadoença associada com diminuição em lágrimas.

Meios para resolver o problema

Como o resultado de intensa pesquisa sobre os pro-blemas mencionados acima, os presentes inventores recente-mente verificaram que β=3 AR existe em glândulas lacrimaisprincipal e acessória e células de secreção de mucosa e es-timuladores β3 AR aumentam as quantidades de secreção de lá-grimas e secreção de proteína em lágrimas. Em adição, sur-preendentemente, os inventores também verificaram que umaadministração em combinação de um estimulante β3 AR e um es-timulante β2 AR tem um efeito mais excelente que um estimu-lante AR seletivo, e pelo que formando as bases da pre-sente invenção.

Ou seja, a presente invenção refere-se a:

[1]uma composição farmacêutica para a prevenção outratamento de uma doença associada com diminuição em lágri-mas, a facilitação de secreção de lágrimas ou a facilitaçãode secreção de proteína em lágrimas que compreende um esti-mulante β3 AR, um estimulante β3 AR tendo uma atividade esti-mulante β2 AR ou uma combinação farmacêutica compreendendoum estimulante β3 AR e um estimulante β2 AR;

[2]uma combinação farmacêutica como descrita acimaem [1] onde as doenças associadas com diminuição em lágrimasão uma ou mais doenças selecionadas do grupo consistindo emolho seco, distúrbios secos de córnea e conjuntiva, distúr-bios do epitélio ceratoconjuntivo, síndrome com diminuiçãoem secreção de lágrimas, xeroftalmia, olho seco devido a en-velhecimento, oftalmopatia em síndrome de Stevens-Johnson,oftalmopatia em síndrome de Sjõgren, úlcera ceratoconjunti-va, oligodacria, ceratoconjuntivite sicca, pênfigo ocular,blefarite marginalis, oclusão insuficiente das pálpebras doolho, neuroparalisia sensória, conjuntivite alérgica, e se-cura de conjuntivite pós-viral, cirurgia pós-catarata, emuso de lentes de contato ou em operação de terminal mostra-dor visual (VDT);

[3]uma combinação farmacêutica como descrita acimaem [1] ou [2] onde a forma de dosagem é uma formulação oralou uma formulação parenteral tal como uma gota ocular; e se-melhantes .

Efeito da InvençãoCombinações farmacêuticas compreendendo um estimu-lante β3 AR da presente invenção exercem efeitos que facili-tam secreção de lágrimas e secreção de proteína em lágrima esão úteis para a prevenção ou tratamento de doenças associa-das com diminuição em lágrimas tal como olho seco ou seme-lhantes .

Breve descrição do desenho

Figura 1

Resultados de manchamento imuno da glândula lacri-mal principal extirpada de coelhos são mostrados. Na figura,porções manchadas (indicadas por setas) indicam a distribui-ção de β3 AR.

Figura 2

Resultados de manchamento imuno de glândulas Ia-crimais humanas são mostrados. Na figura, porções manchadasindicam a distribuição de β3 AR. A figura na direita mostrauma aumento da área em estrutura na figura na esquerda, esetas indicam porções manchadas.

Figura 3

Resultados de manchamento PAS da glândula lacrimalprincipal extirpada de coelhos são mostrados. Na figura,porções manchadas (indicadas por setas) indicam a distribui-ção de glicoproteínas (mucina e semelhantes).

Figura 4

Ações de Composto 1 (administrado no duodeno) so-bre a secreção de lágrimas em coelhos são mostradas. A figu-ra à esquerda mostra mudanças na quantidade de secreção delágrimas (μΐ,) . A figura à direita mostra mudanças na quanti-dade de proteína em lágrimas (μς). Em cada figura, o eixo deabscissas indica grupos de administração de droga, que são,a partir da esquerda, Controle: grupo Controle (veículo),grupo de Composto 1 (3 mg/kg) e grupo de Composto 1 (30mg/kg). As mudanças na quantidade sobre o eixo de ordenadasindicam diferenças entre a quantidade medida por 5 minutosem 20 minutos após administração de droga e a quantidademedida por 5 minutos antes de administração de droga. Cadavalor é média +/- DP de 4 animais. O "*" indica p<0,05 (di-ferença significante comparada a grupo Controle em testeDunnett) .

Figura 5

Ações de Composto 1 (administrado no duodeno) so-bre a secreção de lágrimas em coelhos são mostradas. A figu-ra sobre a esquerda mostra mudanças na quantidade de secre-ção de lágrimas (μί). A figura à direita mostra mudanças naquantidade de proteína em lágrimas (μς) . Em cada figura, oeixo de abscissa indica tratamentos dados 5 minutos antes deadministração de Composto 1, que são, a partir da esquerda,solução salina: grupo de administração de solução salina fi-siológica e ICI:ICI-118551, um inibidor de β2 AR seletivo(30 μg/kg) grupo de tratamento. As mudanças na quantidadesobre o eixo de ordenadas têm os mesmos significados comodefinidos na Figura 3. Cada valor é média +/- DP de 5 ani-mais.

Figura 6

Ações de Composto 2 ou sulfato de terbutalina (ad-ministrado no duodeno) sobre a secreção de lágrimas em coe-ihos são mostradas. A figura na esquerda mostra a quantidadetotal de secreção de lágrimas (μΐι) , e a figura à direitamostra a quantidade total de proteína em lágrimas (μς) . Emcada figura, o eixo de abscissa indica grupos de administra-ção de droga, que são, a partir da esquerda, Controle: grupocontrole (veículo), grupo Composto 2 (0,3 mg/kg), grupo Com-posto 2 (1 mg/kg), grupo Composto 2 (10 mg/kg) e Ter: gruposulfato de terbutalina (10 mg/kg). 0 eixo de ordenadas indi-ca a quantidade total medida para 60 minutos após adminis-tração de drogas testes. Cada valor é média +/- DP de 4 ani-mais. 0 indica p<0,05 (diferença significante comparadaa grupo Controle em teste Dunnett ou teste-t), e "#" indicap<0,05 (diferença significante comparada a grupo sulfato deTerbutalina em teste-t) .

Figura 7

Ações de Composto 2 ou sulfato de terbutalina (ad-ministrado no duodeno) sobre a secreção de lágrimas em ratossão mostradas. A figura à esquerda mostra a quantidade totalde secreção de lágrimas (μΐι) , e a figura à direita mostra aquantidade total de proteína em lágrimas (μς). Em cada figu-ra, o eixo de abscissas tem o mesmo significado como defini-do na Figura 5, e o eixo de ordenadas indica a quantidadetotal medida por 60 minutos após administração de uma drogateste. Cada valor é média +/- DP de 9 a 10 animais. O "*"indica p<0,05 (diferença significante comparada a grupo Con-trole em teste de Dunnett), "N.S." significa nenhumadiferen-ça significante (comparada a grupo de sulfato de Terbutalinaem teste-t) , e o "#" tem o mesmo significado como definidona Figura 6.

Figura 8

Ações de Composto 2 (solução 0,1%, 50 μι) em ins-tilação simples para olhos de coelhos sobre secreção de lá-grimas são mostradas. 0 eixo de abscissa expressa tempo (otempo após administração) (minutos) quando medição foi rea-lizada, a partir da esquerda, Controle: grupo Controle (ve-iculo) e grupo de Composto 2 (solução 0,1%) de cada vez. Oeixo de ordenada indica mudanças na quantidade de secreçãode lágrimas (μl comparada àquela 5 minutos antes de admi-nistração. Cada valor é média +/- DP de 4 animais. O "*" in-dica p<0,05 (diferença significante comparada a grupo Con-trole em teste-t).

Figura 9

Ações de Composto 2 ou sulfato de terbutalina(instilação ocular) sobre secreção de mucina na conjuntivade coelhos são mostradas. O eixo de abscissa indica gruposde administração de droga, que são, a partir da esquerda,Controle: grupo Controle (veiculo), grupo de Composto 2 (so-lução 0,1%) e Ter: grupo de sulfato de terbutalina (solução0,1%) . O eixo de ordenadas indica a contagem de células go-bletes positivas PAS em um certo campo visual. Cada valor émédia +/- DP de 4 animais. O "*" indica p<0,05 (diferençasignificante comparada a grupo Controle em teste-t).

Melhor Modo Para Operar a Invenção

Como um estimulante β3 AR usado na presente inven-ção, um composto tendo uma atividade estimulante β3 AR maisforte que sua atividade estimulante β1 AR, especialmente, 10vezes ou um mais forte é preferível, e um 100 vezes ou maisforte é mais é preferível. A atividade estimulante de cadareceptor pode ser determinada através de processos tais comoestudos de ligação conhecidos, estudos funcionais usando ór-gãos extraídos ou semelhantes (por exemplo, como descrito emreferência patente 4). Como compostos concretos, por exem-plo, compostos descritos em referência de patentel, 2 ou 4,BRL37344 . , ZD2079, CGP12177, CL316243, L-796568, Ro40-2148,ICID7114, YM-178, solabegron e semelhantes podem ser ilus-trados.

Como compostos preferíveis em estimulantes β3 AR,por exemplo, compostos descritos em referência de patente 1:Ácido 2-[2-bromo-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acético,2-[2-bromo-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acetato de etila,ácido 2-[2-cloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acético,2-[2-cloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acetato de etila,ácido 2-[2,5-dicloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acéti-co,

2-[2,5-dicloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acetato deetila,

ácido 2-[4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil] amino] etil-2,5-dimeil fenoxi] acético,2-[4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil]-2,5-dimetil fenoxi] acetato de eti-la (daqui por diante referido como Composto 1),

ácido 2-[2-hidroxi-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acético,

-2-[2-hidroxi-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil] amino] etil] fenoxi] acetato de etila,ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;compostos descritos em referência de patente 2:ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-2,3',5'-trimetil bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-isopropil-3',5'-dimetilbifenil-4-carboxílico,

ácido (3-acetil-4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-5'-dimetil bi-fenil-4-iloxi) acético,

ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2,2'-dimetil bifenil-4-carboxilico,

ácido 2-etil-4 ' - {2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2'-metil bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-isopropil-2'-metil bife-nil-4-carboxílico,ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-2'-metil-2-propil bifenil-4-carboxílico,

ácido 4 ' — {2 —[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-2-metoxi-3',5'-dimetil bife-nil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil-2-propil bife-nil-4-carboxilico,

ácido 2-etil-4' - {2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil-2-propil bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-ciclo pentil-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bife-nil-4-carboxílico,

ácido 2-etil-3'-flúor-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,

ácido 3'-flúor-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-isopropil bife-nil-4-carboxilico,

ácido 3'-flúor-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-propil bifenil-- 4-carboxilico,

ácido (4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-2,3',5'-trimetil bifenil-4-iloxi) acético,

ácido 3-hidroxi-4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil bi-fenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil-3-(p-toliloxi)bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-(4-cloro fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-35'-dimetilbifenil-4-carboxílico,

ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-35'-dimetilbifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi)-3',5'-dimetil bifenil-4-carboxílico,

ácido 4'—{2—[(lR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi)-3'-metilbifenil-4-carboxilico,

ácido 3'-flúor-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi feno-xi) bifenil-4-carboxílico,

ácido 3-(4-cloro fenoxi)-3'-flúor-4'-{2-[(IR, 2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bi-fenil-4-carboxílico,ácido 4 ' — {2—[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-2'-metil-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2'-metil bi-fenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil ) -1-metil etil amino] etoxi}-6-metoxi-2'-metil bifenil-3-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-6-metoxi-3',5'-dimetil bife-nil-3-carboxilico,

ácido 6-cloro-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-35'-dimetil bi-fenil-3-carboxilico,

ácido 6-cloro-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bifenil-3-carboxílico,

ácido 2-etil-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxílico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-2-metil bifenil-4-carboxilico,

ácido 4' — {2 —[(lR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1 —metil etil amino] etoxi}—2—isopropil bifenil—4—carboxilico,

ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-triflúor metil bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-3-propil bifenil-4-carboxílico,

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-2-propil bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-sec-butil-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-ciclo pentil-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi) bifenil--4-carboxilico,

ácido 3-(4-cloro fenoxi)—4' — {2—[(1R,2S)-2-hidroxi--2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,

ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi--2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico, ou

ácido 4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(p-toliloxi) bifenil-4-carboxilico, ou um seu éster de alquila inferior, ou um seusal farmaceuticamente aceitável;

BRL37 34 4, ZD2079, CGP12177, CL316243, L-796568,Ro4 0-214 8, ICID7114, YM-178, solabregon; e estimulantes β3AR tendo uma atividade estimulante β2 AR como mencionado a-baixo e semelhantes podem ser ilustrados.

Entre os compostos acima, os compostos descritosem referência de patente 1, especialmente ácido 2— [4— [2 —[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino]etil]-2,5-dimetil fenoxi] acético, 2-[ 4-[2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] eil]-2,5-dimetil fenoxi] acetato de etila, ou um seu sal farmaceuti-camente aceitável são preferíveis.

Uma dosagem de um estimulante β3 AR pode ser de-terminada quando necessário de acordo com o estimulante β3AR individual, peso de corpo, idade, sexo, e grau de doençasde cada paciente. Por exemplo, a faixa de dosagens de umcomposto descrito em referência de patente 1 em adultos é0,2 a 200 mg/dia em administração oral, 0,0001 a 2% em admi-nistração ocular, preferivelmente 0,001 a 0,2%. Os compos-tos descritos em referência de patente 4 como Composto 2mencionado abaixo ou semelhantes podem ser administrados emuma faixa de dosagem similar.

Um composto tendo uma atividade estimulante β2 ARem adição a uma atividade estimulante β3 AR tende a exerceratividades mais notáveis secretando lágrimas e proteína emlágrimas que um composto tendo somente uma atividade estimu-lante β3 AR e assim, um tal composto é preferível. Como umestimulante β3 AR tendo uma atividade estimulante β2 AR usadona presente invenção, entre os estimulantes β3 AR acima, umcomposto tendo uma atividade estimulante β2 AR mais forteque sua atividade estimulante βι AR é preferível, um 10 ve-zes ou mais forte é mais preferível, e um 100 vezes ou maisforte é ainda mais preferível. Como um composto concreto,por exemplo, compostos descritos em referência de patente 4podem ser ilustrados. Como um composto preferível, por exem-plo, compostos descritos em referência de patente 4: 2-[3-flúor-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metiletil] amino] etil] fenoxi] acetato de benzila; ácido 2— [3 —cloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metiletil amino] etil] fenoxi] acético, ácido 2-[ 4-[2-[[(IS,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etil] fe-noxi] acético (daqui por diante referido como Composto 2) ouácido 2-[3-flúor-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etil] fenoxi] acético, um seu ésterde alquila inferior; ou um seu sal farmaceuticamente aceitá-vel e semelhantes podem ser ilustrados. Composto 2. pode serfacilmente preparado através de um processo descrito em umaliteratura ou semelhantes (por exemplo, ver referência depatente 4) . A atividade estimulante de cada receptor podeser determinada através de processos tais como estudos deligação conhecidos, estudos funcionais usando órgãos extraí-dos ou semelhantes (por exemplo, ver referência de patente4).

Uma administração em combinação de um estimulanteβ3 AR e um estimulante β2 AR pode aumentar mais drasticamenteas quantidades de secreção de lágrimas e secreção de proteí-na em lágrimas do que uma administração simples de cada es-timulante. Como um estimulante β2 AR usado em combinação comum estimulante β3 AR na presente invenção, um composto tendouma atividade estimulante β2 AR mais forte que sua atividadeestimulante βι AR é preferível, um 10 vezes ou mais forte émais preferível, e um 100 vezes ou mais forte é ainda maispreferível. A atividade estimulante de cada receptor podeser determinada através de processos tais como estudos deligação conhecidos, estudos funcionais usando órgãos extraí-dos ou semelhantes (por exemplo, ver referência de patente4). Como um composto concreto, por exemplo, procaterol, ri-todrina, terbutalina, salbutamol, clenbuterol, tulobuterol,mabuterol, salmeterol, formoterol, trimetoquinol, hexoprena-lina, metoxifenamina, orciprenalina, fenoterol e semelhantese um seu sal podem ser ilustrados, e especialmente procate-rol ou um seu sal é preferível. Estes compostos podem sercomercialmente disponíveis ou preparados através de um pro-cesso descrito em uma literatura ou semelhante.

Nos compostos descritos nas referências de paten-tes 1 a 3, o termo "alquila inferior" significa alquila retoou ramificado tendo 1 a 6 carbonos, e por exemplo, metila,etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila,tert-butila, pentila, isopentila, neopentila, tert-pentila,hexila e semelhantes podem ser ilustrados.

uma dosagem de um estimulante β2 AR pode ser de-terminada quando necessário de acordo com o estimulante β2AR individual ou um estimulante β3 AR combinado com, peso decorpo, idade, sexo, e grau de doenças de cada paciente. Porexemplo, a faixa de dosagens da droga em adultos pode ser0,001 a 0,2 mg/dia de cloridrato de procaterol, 0,01 a 150mg/dia de cloridrato de ritodrina, 0,01 a 15 mg/dia de sul-fato de terbutalina, 0,01 a 15 mg/dia de sulfato de salbuta-mol, 0,001 a 0,1 mg/dia de cloridrato de clenbuterol, 0,1 a10 mg/dia de cloridrato de tulobuterol, 0,01 a 0,1 mg/dia decloridrato de mabuterol, 0,01 a 0,1 mg/dia de xinafoato desalmeterol, 0,01 a 0,2 mg/dia de fumarato de formoterol, 0,1a 20 mg/dia de cloridrato de trimetoquinol, 0,001 a 0,02mg/dia de hexoprenalina, 10 a 300 mg/dia de cloridrato demetoxifenamina, 0,5 a 100 mg/dia de sulfato de orciprenalinae 0,1 a 10 mg/dia de bromidrato de fenoterol em administra-ção oral, e 0,0001 a 1% de cloridrato de procaterol em admi-nistração ocular.

Uma combinação farmacêutica compreendendo um esti-mulante β3 AR e um estimulante β2 AR da presente invençãotambém inclui uma formulação simples compreendendo separada-mente o estimulante β3 AR acima e o estimulante β2 AR acima,uma formulação em uma embalagem que contem ambas de uma for-mulação contendo um estimulante β3 AR e uma formulação con-tendo um estimulante B2 AR, e uma combinação de uma formula-ção contendo um estimulante β3 AR e uma formulação contendoum estimulante P2AR que são co-administradas simultaneamenteou em intervalos na mesma forma de administração ou em dife-rentes formas de administração.

Uma combinação farmacêutica da presente invençãoexerce uma atividade de facilitação de secreção de lágrimase secreção de proteína em lágrimas, e assim, é útil para aprevenção ou tratamento de uma doença associada com diminui-ção em lágrimas. Na presente invenção, o termo "doença asso-ciada com diminuição em lágrimas" significa sintomas secosoftálmicos causados qualitativa e/ou quantitativamente poranormalidade e um distúrbio do epitélio ceratoconjuntivo as-sociado com a mesma e também inclui uma causada por quais-quer causas de diminuição em secreção de lágrimas e aperfei-çoada evaporação ou excreção de lágrimas, e, por exemplo,olho seco, distúrbios secos de córnea e conjuntiva, distúr-bios do epitélio ceratoconjuntivo, sindrome com diminuiçãoem secreção de lágrimas, xeroftalamia, olho seco devido aenvelhecimento, oftalmopatia em sindrome de Stevens-Johnson,oftalmopatia em sindrome de Sõgren, úlcera ceratoconjuntiva,oligodacria, ceratoconjuntivite sicca, pênfigo ocular, ble-farite marginalis, oclusão insuficiente de pálpebras dos o-lhos, neuroparalisia sensória, conjuntivite alérgica, securade conjuntivite pós-viral, cirurgia após catarata, em uso delentes de contato ou em operação de terminal mostrador visu-al (VDT) e semelhantes podem ser ilustrados. Olho seco in-clui olho seco baseado nos critérios de diagnósticos comodescritos em referência não-patente 1 assim como olho secodiagnosticado ou suspeito baseado em características taiscomo anormalidade qualitativa ou quantitativa (diminuição)ou distúrbios do epitélio ceratoconjuntivo associado com asmesmas.

Em combinações farmacêuticas da presente invenção,uma formulação compreendendo um estimulante β3 AR, uma for-mulação compreendendo um estimulante β2 AR, ou uma formula-ção simples compreendendo um estimulante β3 AR e um estimu-lante β2 AR pode ser usada como cada formulação simples oupreparada opcionalmente através de mistura ou através de di-luição e dissolução de um estimulante β3 AR, um estimulantep2 AR, ou um estimulante β3 AR e um estimulante β2 AR comcarreadores de formulação incluindo necessários excipientes,desintegrantes, ligantes, lubrificantes, diluentes, tampões,agentes isotônicos, anti-sépticos, umectantes, emulsifican-tes, agentes dispersantes, estabilizadores e solubilizantesou semelhantes em várias formas de dosagem na maneira usual.

Exemplos de formas de administração da composiçãofarmacêutica da presente invenção são formulações orais taiscomo pulverizados, grânulos, grânulos finos, xarope seco,comprimidos, cápsulas ou semelhantes; formulações parente-rais administradas não-oralmente tais como gotas oculares,injeções, cataplasmas, supositórios ou semelhantes. Formula-ções orais ou gotas oculares são preferíveis. Especialmente,formulações orais são preferíveis para um paciente sensívela irritação de mucosa causada por anti-sépticos ou semelhan-tes. No caso de uma formulação compreendendo um estimulanteβ3 AR e uma formulação separada compreendendo um estimulanteβ2 AR serem administradasestas formas de administração podemser diferentes umas das outras.

Exemplos

A presente invenção é ainda ilustrada em mais de-talhes por meio dos seguintes exemplos testes e exemplos.Entretanto, a presente invenção não é limitada aos mesmos.

[Exemplo Teste IJTeste de manchamento imuno usan-do anticorpo β3 AR

A glândula lacrimal principal foi extirpada de co-elhos brancos Japoneses machos (cerca de 3 kg), encharcada efixada em formalina tamponada com fosfato 10%, fixada em pa-rafina e fatiada em seções de 3 μπι. Após ativação de antige-nicidade, peroxidase endógena foi eliminada, as seções foramencharcadas no primeiro anticorpo (anticorpo β3 AR) por 24horas, rinsadas com tampão fosfato (pH 7,4), encharcadas noanticorpo secundário marcado (anticorpo marcado HRP) por 1hora e rinsadas com uma solução de tampão fosfato (pH 7,4).Após cores serem desenvolvidas com DAB (diamino benzidina) ,as seções foram encharcadas em solução de hematoxilina - Ma-yer por 5 s, rinsadas com água corrente, desidratadas e lim-pas para serem embutidas. Exame microscópico confirmou apresença de β3 AR em glândulas lacrimais principais de coe-lhos (Figura 1).

O manchamento imuno foi realizado da mesma maneiracom glândulas lacrimais humanas no lugar de glândulas lacri-mais principais de coelhos. A presença de β3 AR também foiconfirmada em glândulas lacrimais humanas (Figura 2).

[Exemplo Teste 2]Manchamento PAS (Schiff ácido pe-riódico)

A glândula lacrimal principal foi extirpada de co-elhos brancos Japoneses machos (cerca de 3 kg), encharcada efixada em formalina tamponada com fosfato 10%, fixada em pa-rafina e fatiada em seções de 3 μπι. Após desparafinização,as seções foram rinsadas com água destilada, encharcadas emsolução de ácido periódico 1% por 10 minutos, rinsadas comágua destilada, e encharcadas em reagente de Schiff por 10minutos. As seções foram encharcadas em solução 0,5% de metabissulfito de sódio, e a operação foi repetida três vezes.Após rinsagem com água destilada, as seções foram encharca-das em solução de hematoxilina - Mayer por 5 s, rinsadas comágua corrente, desidratadas e limpas para serem embutidas.Exame microscópico confirmou a presença de células serosas ecélulas de mucosa em glândulas lacrimais principais de coe-lhos. Foi confirmado que as células sobre as quais a presen-ça de β3 AR foi confirmada em exemplo teste 1 foram princi-palmente células positivas PAS, ou seja, células de mucosacontendo glicoproteinas como mucina (Figura 3).

[Exemplo 1]Medição de secreção de lágrimas em coe-lhos que receberam um estimulante β3 AR

Quatro coelhos brancos Japoneses machos em jejum(cerca de 3 kg) forma alocados para cada grupo. Composto 1(cloridrato, 3 ou 30 mg/kg) , um estimulante β3 AR, ou o vei-culo (goma arábica 0,5%) foi administrado ao duodeno atravésde uma agulha colocada no duodeno de um coelho, que foi a-nestesiado com uretano (25%, 5 mL/kg, subcutaneamente). Aquantidade de secreção de lágrimas foi medida por 5 minutosantes de administração de droga e por 5 minutos em 20 minu-tos após administração de droga na seguinte maneira. Uma pe-ça de papel de filtro pré-pesada (Wattman N0' 41, 0,22 mm deespessura, 2,5x1,5 mm) foi inserida em cada pálpebra superi-or e inferior de olho esquerdo ou direito. A diferença empeso dos papéis de filtro antes e após inserção (peso pós-inserção - peso pré-inserção) foi definida como a quantidadede secreção de lágrimas. Cinqüenta (50) μl de um agente a-nestésico local, cloridrato de oxibuprocaO,4% (Santem Co.),foram instilados nos olhos 5 minutos antes de cada medição.Lágrimas e o anestésico local instilado foram imediatamentelimpas antes de papel de filtro ser inserido. Papéis de fil-tro recuperados após cada medição foram colocados em tubos.Um tampão fosfato (pH 7,4) (500 μL) foi adicionado a cada umdos tubos, e eles foram agitados por 30 s. Após os papéis defiltro serem removidos e a mistura ser centrifugada em 1880χ g por 5 minutos, concentrações de proteína em sobrenadanteforam medidas usando um Micro BCA Protein Assay Reagent Kit(Pierce Co.) . A quantidade de proteína em lágrimas foi cal-culada baseada na concentração de proteína e a quantidade desecreção de lágrimas em cada tempo. A diferença na quantida-de de secreção de lágrimas antes de administração de umadroga teste e aquela em cada medição após administração foidefinida como uma mudança na quantidade de secreção de lá-grimas ou proteína em lágrimas. Cada miligrama da mudança naquantidade de lágrimas foi tomado como 1 μL em tabulação.Como um resultado, administração de Composto 1 (cloridrato,3 ou 30 mg/kg) no duodeno facilitou a secreção de lágrimas esecreção de proteína em lágrimas. Administração de Composto1 (30 mg/kg) aumentou significantemente a mudança na quanti-dade de proteína em lágrima em coelhos comparado a grupoControle (Figura 4).

Em adição, de modo a estudar o papel desempenhadopor uma atividade estimulante β2 AR nas ações de Composto 1descritas acima, 30 μg/kg de ICI-118551 (Sigma Co.), um ini-bidor de β2 AR seletivo foram administrados intravenosamente5 minutos antes de administração de Composto 1 930 mg/kg) e0 mesmo teste foi realizado. As atividades de facilitação desecreção de lágrimas e secreção de proteína em lágrimas peloComposto 1 não foram afetadas pelo pré-tratamento com o ini-bidor seletivo de β2 AR, ICI-118551 (30 μg/kg, i.v.) (Figura5) . Os resultados confirmaram que as atividades de Composto1 facilitando secreção de lágrimas e secreção de proteína emlágrimas foram exercidas por meio de β3 AR.

[Exemplo 2]Medição de lágrimas em coelhos que re-ceberam um estimulante β3 AR tendo uma atividade estimulanteβ2 AR.

Quatro coelhos brancos Japoneses machos em jejum(cerca de 3 kg) foram alocados para cada grupo. Composto 2(0,3, 1 ou 10 mg/kg), que é um estimulante β3 AR tendo umaatividade estimulante β2 AR, sulfato de terbutalina (10mg/kg) , que é um estimulante β2 AR, ou seu veículo (águadestilada) foi administrado ao duodeno através de uma agulhacolocada no duodeno de um coelho que foi anestesiado com u-retano (25%, 5 mL/kg, sub-cutaneamente). Da mesma maneiracomo no Exemplo 1, quantidades de secreção de lágrimas eproteína em lágrimas foram medidas cada 5 minutos antes deadministração de droga e em 5, 20, 30, 40 e 50 minutos apósadministração de droga. As quantidades totais de secreção delágrima e proteína em lágrima foram definidas como a somatotal das quantidades de secreção em cada tempo de mediçãodurante 60 minutos após administração da droga teste. Cadagrama da mudança na quantidade de lágrimas foi consideradacomo 1 em tabulação.

Os resultados de medição das quantidades totais desecreção de lágrimas e proteína em lágrimas são mostrados naFigura 6. Administração de Composto 2 (0,3, 1 e 10 mg/kg) noduodeno facilitou dependentemente de dose a secreção de lá-grimas e secreção de proteína em lágrimas em coelhos, e, emdoses de 1 mg/kg e acima, aumentou significantemente asquantidades totais de secreção de lágrimas e secreção deproteína em lágrimas comparado a grupo Controle. Por outrolado, administração de sulfato de terbutalina (10 mg/kg) noduodeno aumentou significantemente as quantidades totais desecreção de lágrimas e secreção de proteína em lágrimas com-parado a grupo Controle. Entretanto, os aumentos através desulfato de terbutalina foram significantemente menores queaqueles em grupo de Composto 2 (10 mg/kg).

[Exemplo 3]Medição de lágrimas em ratos que rece-beram um estimulante β3 AR tendo uma atividade estimulante β2AR

Nove 9 a 10 ratos de linhagem SD machos em jejum(7 semanas de idade) foram alocados para cada grupo. Ratosforam fixados em posição de bruços sob anestesia de uretane(25%, 5 mL/kg, sub-cutaneamente) . Composto 2 (0,3, 1 ou 10mg/kg) , que é um estimulante β3 AR tendo uma atividade esti-mulante β2 AR, sulfato de terbutalina (10 mg/kg), que é umestimulante β2 AR, ou seu veículo (água destilada) foram ad-ministrados ao duodeno através de uma agulha colocada no du-odeno. Uma extremidade de um capilar (Drummond Microdispen-ser Co. 10 μl) foi colocada no canthus interno de olho di-reito de rato após lágrimas serem limpas. A quantidade desecreção de lágrimas foi medida através do comprimento docapilar enchido com lágrimas em 60 minutos após administra-ção de droga. A quantidade total de secreção de lágrimas(μL) foi calculada usando o diâmetro interno do capilar a ocomprimento do capilar enchido com lágrimas. Após a quanti-dade de secreção de lágrimas ser medida, as lágrimas no ca-pilar foram recuperadas em um tubo para medir a concentraçãode proteína usando Micro BCA Protein Assay Reagent Kit (Pi-erce Co.). A quantidade total de proteína em lágrimas foicalculada usando a concentração de proteína obtida e a quan-tidade total de secreção de lágrimas.

Os resultados de medição das quantidades totais desecreção de lágrimas e proteína em lágrimas são mostrados naFigura 7. Administração de Composto 2 (0,3, 1 e 10 mg/kg) noduodeno facilitou dependentemente de dose a secreção de lá-grimas e secreção de proteína em lágrimas em ratos, e, emdoses de 1 mg/kg e acima, aumentou significantemente asquantidades totais de secreção de lágrimas e secreção deproteína em lágrimas comparado a grupo Controle. Por outrolado, administração de sulfato de terbutalina (10 mg/kg) noduodeno aumentou significantemente as quantidades totais desecreção de lágrimas e secreção de proteína em lágrimas com-parado a grupo Controle. Entretanto, a quantidade total deproteína em lágrimas induzida por sulfato de terbutalina foisignificantemente menor que aquela em grupo Composto 2 (10mg/kg).

[Exemplo 4]Medição de lágrimas em coelhos seguin-do instilação ocular de um estimulante β3 AR tendo uma ati-vidade estimulante β2 AR

Quatro coelhos brancos Japoneses machos em jejum(cerca de 3 kg) foram alocados para cada grupo. Após coelhosserem anestesiados com uretane (25%, 5 mL/kg, subcutaneamen-te) , 50 μΐ; de Composto 2 (solução 0,1%) ou o veiculo (umasolução tampão de fosfato, pH 7,4) foram instilados no olhodireito ou esquerdo. A quantidade de secreção de lágrimasfoi medida e calculada para cada 5 minutos antes e em 5 e 20minutos após instilação da mesma maneira como no Exemplo 1.A diferença na quantidade de secreção de lágrimas antes deadministração de uma droga teste e aquela em cada tempo demedição após instilação ocular foi definida como uma mudançana quantidade de secreção de lágrimas. Cada miligrama da mu-dança na quantidade de secreção de lágrimas foi consideradacomo 1 μΐ; em tabulação. Como um resultado, instilação ocularde composto 2 (solução 0,1%) facilitou secreção de lágrimasem coelhos e aumentou significantemente a quantidade de se-creção de lágrimas medida para 5 minutos após instilação o-cular comparado a grupo Controle (Figura 8).

[Exemplo 5]Secreção de mucina da conjuntiva de co-elho seguindo instilação ocular de um estimulante β3 AR ten-do uma atividade estimulante β2 AR (processo de citologia deimpressão)

Quatro coelhos brancos Japoneses machos (cerca de3 kg) foram alocados para cada grupo. Após coelhos serem a-nestesiados com cetamina-xilazina (3:1), 50 μΐϋ de Composto 2(solução 0,1%), sulfato de terbutalina (solução 0,1%) ou seuveiculo (uma solução tampão fosfato, pH 7,4) foram instila-dos em qualquer lado dos olhos. Secreção de mucina a partirda conjuntiva foi medida 30 minutos após instilação atravésde processo de citologia de impressão. Ou seja, após insti-lação ocular de 50 μL de um anestésico local (cloridrato deoxibuprocaina por Santen Co.), lágrimas residuais foram lim-pas 5 minutos após instilação e papel de filtro de acetatode celulose 3x3 mm foi prensado sobre a conjuntiva por 30 s.Então, manchamento PAS foi realizado com os papéis de filtrorecuperados da mesma maneira como no Exemplo 2. Após papéisde filtro serem limpos e embutidos, o número de células go-blete positivas PAS existentes em um certo campo visual deum microscópio foi contado. Diminuições na contagem indicamque secreção de mucina a partir da conjuntiva é facilitada.Como um resultado, Composto 2 facilitou secreção de mucina apartir da conjuntiva mais que o veiculo. Entretanto, sulfatode terbutalina não teve efeito (Figura 9).

Como mencionado acima, um estimulante β3 AR aumen-tou dependentemente de dose as quantidades de secreção delágrimas e secreção de proteína em lágrimas em ratos ou coe-lhos, especialmente, a quantidade de proteína em lágrimas etambém aumentou a quantidade de secreção de mucina a partirda conjuntiva. Em adição, um estimulante p3 AR em combinaçãocom um estimulante p2 AR exerceu um efeito aumentando signi-ficantemente comparado a um estimulante p2 AR. Um tal resul-tado foi observado em ambas administrações intraduodenal eocular. Assim, um estimulante p3 AR exerceu um efeito aumen-tando acentuadamente as quantidades de secreção de lágrimase secreção de proteína em lágrimas através de um uso simplesou um uso em combinação com um estimulante β2 AR.

Aplicabilidade Industrial

As combinações farmacêuticas da presente invençãosão extremamente úteis como agentes para a prevenção ou tra-tamento de doenças associadas com diminuição em lágrimas.

Claims

1. Combinação farmacêutica para a prevenção outratamento de uma doença associada com a diminuição de lá-grimas, CARACTERIZADA pelo fato de compreender um estimulan-te de adrenoceptor β3.

2. Combinação farmacêutica para facilitar a secre-ção de lágrimas, CARACTERIZADA pelo fato de compreender umestimulante de adrenoceptor-p3.

3. Combinação farmacêutica para facilitar a secre-ção de proteína nas lágrimas, CARACTERIZADA pelo fato decompreender um estimulante de adrenoceptor~p3.

4. Combinação farmacêutica, como reivindicada emqualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelofato de que o estimulante de adrenoceptor~p3 éácido 2-[4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil] amino] etil]-2,5-dimetil fenoxi] acético,ácido 2-[2-bromo-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil] amino] etil] fenoxi] acético, ácido 2-[2-cloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metiletil] amino] etil] fenoxi] acético, ácido 2-[2,5-dicloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] a-mino] etil] fenoxi] acético, ácido 2-[4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino] etil]-2,5-dimetil fenoxi] acético ou ácido 2-[2-hidroxi-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil] amino]etil] fenoxi] acético, ou um seu éster de alquila inferior;ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

5. Combinação farmacêutica, como reivindicada emqualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelofato de que o estimulante de adrenoceptor-p3 éácido 4' —{2 —[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-2,3',5'-trimetil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-metil etil amino] etoxi}-3-isopropil-3',5'-dimetilbifeni1-4-carboxilico,ácido (3-acetil-4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-5'-dimetil bi-fenil-4-iloxi) acético,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2,2'-dimetil bifenil-4-carboxilico,ácido 2-etil-4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil. etil amino] etoxi}-2'-metil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-isopropil-2'-metil bife-nil-4-carboxilico,ácido 4' — {2 —[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2'-metil-2-propil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-metoxi-3',5'-dimetil bife-ni 1-4 -carboxilico,ácido 4' — {2 —[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil-2-propil bife-nil-4-carboxílico,ácido 2-etil-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[ (1R, 2S)-2-hi-droxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil-2-propil bifenil-4-carboxílico,ácido 3-ciclo pentil-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bife-nil-4-carboxilico,ácido 2-etil-3'-flúor-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,ácido 3'-flúor-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-isopropil bife-nil-4-carboxílico,ácido 3'-flúor-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-propil bifenil-4-carboxílico,ácido (4'—{2 —[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2,3',5'-trimetil bifenil-4-iloxi) acético,ácido 3-hidroxi-4'-{2-[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil bi-fenil-4-carboxílico,ácido 4' -{ 2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil-3-(p-toliloxi)bifeni1-4-carboxilico,ácido 3-(4-cloro fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-- 2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetilbifenil-4-carboxilico,ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-- 2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetilbifenil-4-carboxilico,ácido 4' -{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi)-3',5'-dimetil bifenil-4-carboxílico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-l-métil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi)-3'-metilbifenil-4-carboxílico,ácido 3'-flúor-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi feno-xi) bifenil-4-carboxílico,ácido 3-(4-cloro fenoxi)-3'-flúor-4'-{2-[(IR,2S)-- 2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bi-fenil-4-carboxílico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2'-metil-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-- 2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-2'-metil bi-fenil-4-carboxílico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-6-metoxi-2' -metil bifenil-3-carboxilico,ácido 4'-{2 - [ (IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-6-metoxi-3',5'-dimetil bife-nil-3-carboxilico,ácido 6-cloro-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3',5'-dimetil bi-fenil-3-carboxilico,ácido 6-cloro-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi}-3'-metil bifenil-3-carboxílico,ácido 2-etil-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxílico,ácido 4' -{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-metil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-2-isopropil bifenil-4-carboxílico, ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil) -1-metil etil amino] etoxi}-2-triflúor metil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-propil bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-2-propil bifenil-4-carboxilico,ácido 3-sec-butil-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxílico,ácido 3-ciclo pentil-4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-fenoxi bifenil-4-carboxilico,ácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(4-metoxi fenoxi) bifenil-- 4-carboxílico,ácido 3-(4-cloro fenoxi)-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-- 2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico,ácido 3-(4-flúor fenoxi)-4'-{2-[(1R,2S)-2-hidroxi-- 2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etoxi} bifenil-4-carboxilico, ouácido 4'-{2-[(IR,2S)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fe-nil)-1-metil etil amino] etoxi}-3-(p-toliloxi) bifenil-4-carboxilico, ou um seu éster de alquila inferior, ou um seusal farmaceuticamente aceitável;

6. Combinação farmacêutica, como reivindicada emqualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelofato de que o estimulante de adrenoceptor-p3 é BRL37344,ZD2079, CGP12177, CL316243, L-796568, Ro40-2148, ICID7114,YM-178, ou solabegron, ou um seu sal farmaceuticamente acei-tável .

7. Combinação farmacêutica, como reivindicada emqualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADA pelofato de que o estimulante de adrenoceptor~P3 é um estimulan-te de adrenoceptor-p3 tendo uma atividade estimulante de a-drenoceptor-p2.

8. Combinação farmacêutica, como reivindicada nareivindicação 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o estimulan-te de adrenoceptor-p3 tendo uma atividade estimulante de a-drenoceptor-p2 é 2-[3-flúor-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etil] fenoxi] acetato debenzila; ou ácido 2-[3-cloro-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etil] fenoxi] acético,ácido 2—[4—[2—[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etil amino] etil] fenoxi] acético ou ácido 2-[3-flúor-4-[2-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi fenil)-1-metil etilamino] etil] fenoxi] acético, ou um seu éster de alquila in-ferior; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

9. Combinação farmacêutica, de qualquer uma dasreivindicações 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de ser umacombinação adicionalmente compreendendo um estimulante deadrenoceptor~p2.

10. Combinação farmacêutica, como reivindicada nareivindicação 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o estimulan-te de adrenoceptor-p2 é procaterol, ritodrina, terbutalina,salbutamol, clenbuterol, tulobuterol, mabuterol, salmeterol,formoterol, trimetoquinol, hexoprenalina, metoxifenamina,orciprenalina ou fenoterol, ou um seu sal farmaceuticamenteaceitável.

11. Combinação farmacêutica, de qualquer uma dasreivindicações 1 e de 4 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de quea doença associada com a diminuição das lágrimas é uma oumais de uma doença selecionada do grupo consistindo em olhoseco, distúrbios de ressecamento da córnea e da conjuntiva,distúrbios do epitélio ceratoconjuntivo, sindrome com dimi-nuição na secreção de lágrimas, xeroftalmia, olho seco devi-do ao envelhecimento, oftalmopatia na sindrome de Stevens-Johnson, oftalmopatia na sindrome de Sjõgren, úlcera cerato-conjuntiva, oligodacria, ceratoconjuntivite sicca, pênfigoocular, blefarite marginal, oclusão insuficiente das pálpe-bras oculares, neuroparalisia sensorial, conjuntivite alér-gica e secura de conjuntivite pós-viral, cirurgia pós-catarata, no uso de lentes de contato ou no uso de terminaisde video (VDT).

12. Combinação farmacêutica, de qualquer uma dasreivindicações 1 a 11, CARACTERIZADA pelo fato de que a for-ma de dosagem é uma formulação oral.

13. Combinação farmacêutica, de qualquer uma dasreivindicações 1 a 11, CARACTERIZADA pelo fato de que a for-ma de dosagem é uma formulação parenteral.

14. Combinação farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 13, CARACTERIZADA pelo fato de que a formulaçãoparenteral é um colírio.