BRPI0612736A2

BRPI0612736A2 - medicamento, composições farmacêuticas lipofìlicas, usos de medicamentos e de composições farmacêuticas lipofìlicas, e, processo para a preparação de um lipogel

Info

Publication number: BRPI0612736A2
Application number: BRPI0612736-3A
Authority: BR
Inventors: Susanna Vaccaro; Giovanni Gennari; Lanfranco Callegaro; Antonio Giannelli; Salvatore Caruso
Original assignee: Fidia Farmaceutici
Priority date: 2005-07-07
Filing date: 2006-07-05
Publication date: 2012-10-02
Also published as: DK1901755T3; CA2613976A1; EP1901755A1; US11040089B2; US8900576B2; JP5322637B2; US20080206228A1; AU2006268950B2; EP1901755B1; PL1901755T3; US20170209552A1; HK1116683A1; CA2613976C; WO2007006484A1; ES2352350T3; DE602006016799D1; AU2006268950A1; SI1901755T1; US9603910B2; ATE480244T1

Abstract

MEDICAMENTO, COMPOSIçõES FARMACêUTICAS LIPOFìLICAS, USOS DE MEDICAMENTOS E DE COMPOSIçõES FARMACêUTICAS LIPOFìLICAS, E, PROCESSO PARA A PREPARAçãO DE UM LIPOGEL. A presente invenção se refere a novas composições contendo ácido hialurónico e seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase (e com relação a formulações farmacêuticas) para a preparação de um curativo para tratamento tópico de vários tipos de machucados, queimaduras de profundidade variada, de escara de decúbito, de úlcera vascular e de úlcera de pé diabético assim como para tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóide.

Description

"MEDICAMENTO, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS LIPOFÍLICAS, USOS DE MEDICAMENTOS E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS LIPOFÍLICAS, E, PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UM LIPOGEL"

ASSUNTO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere a novas composições contendo ácido hialurônico ou os seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase (e formulações farmacêuticas relativas) para a preparação de um curativo para tratamento tópico de vários tipos de machucados, queimaduras de profundidade variada, ulceras de pressão, ulceras vasculares e ulceras de pé diabético assim como para o tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóide.

FUNDAMENTO DA INVENÇÃO

Debridamento enzimático de tecido necrótico envolve a remoção de tal tecido por meio da ação de enzimas não tóxicas que são capazes de degradar colágeno, fibrina e elastina desnaturados presentes no tecido desvitalizado, preservando o tecido viável.

Essa técnica é preferível para debridamento cirúrgico/mecânico porque ela é mais seletiva para tecido de granulação e é especialmente adequada em lesões não infectadas tais como ulceras da pele de diversa etiologia e de profundidade variada.

As formulações enzimáticas disponíveis no mercado hoje contêm a enzima proteolítica colagenase (Noruxol® e Iruxol®) ou são constituídas por uma associação de fibrinolisina e desoxirribonuclease (Elase®), todas as quais são eficazes (embora com resultados diferentes) em remover tecido necrótico, exudato purulento e fibrina (Mekkes J.R., Arch Dermatol Rese, 1998, 290:152-157).

De maior interesse do ponto de vista de aplicação são colagenases produzidas de Vibrio Alginolyticus (Achromobacter Colagenase EC 3.4.24.08; Borivoj K., Matrix Supplement, 1992, 1: 127-133; EP 0.115.974 BI) produzida de uma cepa não patogênica com uma atividade específica que é marcadamente superior aquela da enzima produzida de Clostridium^ tem sido amplamente descritas e caracterizadas (embora não ainda comercializadas).

Colagenase é uma proteína que é muito instável em soluções aquosas mesmo em baixas temperaturas. Além disso, ela pode ser facilmente desnaturada por agentes quelantes e vários íons metálicos que podem interagir com o íon cálcio que é essencial para a atividade enzimática da molécula.

E uma enzima que é extremamente sensível aos procedimentos químico-físicos tais como congelamento, descongelamento, liofilização e secagem, processos que são freqüentemente necessários no curso da preparação de formulações farmacêuticas finais. Várias formulações diferentes têm, portanto, sido testadas para revelar uma composição final que contenha uma colagenase estável, e, portanto, ativa (EP 0.543.521B1, pedido de patente WO 96/41870, WO 93/00807, WO 94/24273).

Embora ainda em um estágio experimental, a enzima é usada na forma injetável para tratar contratura de Dupviytren, uma condição deformada dos dedos, enquanto o uso de colagenase é particularmente importante ao reduzir glaucoma, um distúrbio que provoca pressão excessiva no olho com possível lesão ao nervo ótico, ligado com um depósito anormal de colágeno dentro do duto que drena fluidos biológicos da câmara anterior do olho.

A enzima colagenase é principalmente indiciada em debridamento de queimaduras de profundidade variada, ulceras de pressão, ulceras vasculares e ulceras de pé diabético. Além disso, ela é usada para tratar cicatrizes hipertróficas e quelóide.

Cicatrização adequada requer uma fase de re-epitelialização adequada, a qual segue a fase que envolve remover a cicatriz, possivelmente por debridamento cirúrgico e/ou enzimático. Colágeno é o componente principal do tecido necrótico e, conseqüentemente, ele é fundamentalmente importante para removê-lo de modo a favorecer a re-epitelialização do machucado. Entretanto, no curso dessa operação é necessário proteger a pele em volta para evitar fenômeno de irritação dolorosa resultando do uso de colagenase, já que a enzima é capaz de degradar ambos o colágeno natural e desnaturado, hidrolisando as ligações peptídicas da cadeia de aminoácido.

Durante debridamento enzimático a área machucada sendo tratada não diminui em tamanho, ela pode até aumentar. Portanto, quando a escara foi removida, o novo tecido de granulação recentemente formado é exposto e conseqüentemente aberto a infecções bacterianas perigosas que podem por em perigo a completa cicatrização da lesão.

O processo de cicatrização é um fenômeno complexo que envolve muitos tipos de fatores celulares e humorais, e muitas fases que podem favorecer a formação de cicatrizes patológicas, tais como cicatrizes quelóide e hipertróficas.

Cicatrização adequada, portanto, requer a aplicação de drogas para guiar (e acelerar) o processo de cicatrização.

Literatura de patente e científica contém descrições e reivindicações amplas mencionando ácido hialurônico (ELA.) como o fator principal nos processos de regeneração de tecido (pedido de patente europeu EP 1.196.179).

De fato, graças a suas características químico-flsicas e biológicas especiais, ácido hialurônico participa de e modula todas as fases seqüenciais principais da cicatrização:

• Inflamação;

• Formação de tecido de granulação;

• Re-epitelialização

• Remodelamento da cicatriz Devido a suas propriedades químico-físicas, dito polissacarídeo controla hidratação do tecido, criando o microclima correto necessário para rápida cicatrização; além disso, sua alta viscosidade protege o machucado de possíveis infecções bacterianas e/ou virais.

Graças a suas propriedades biológicas, ácido hialurônico tem provado ser eficaz ao proteger contra radicais livres, no controle de processos inflamatórios e no estímulo da angiogênese. Seu papel ao controlar a expressão de citosinas e fatores tróficos tem sido demonstrado, e ao estabilizar o tecido de granulação favorecendo e regulando o fluxo de fibroblastos e células endoteliais no machucado durante re-eptelialização.

Finalmente, dados experimentais têm demonstrado um envolvimento de ácido hialurônico no controle de proliferação de queratinócito e o depósito de colágeno no machucado, desse modo reduzindo a formação de tecido fibrótico e, portanto, de cicatriz patológica (John Chen W. Y. et aL, Wound Repair and Regenartion, 1999, 7:79-89).

HA é um hetero-polissacarídeo composto de resíduos alternados de ácido D-glucurônico e N-acetil-D-glucosamina. E um polímero de cadeia reta com um peso molecular na faixa de 50.000 a 13 χ IO6 Da, de acordo com a fonte da qual ele é obtido e os métodos usados para prepará-lo.

Está presente na natureza nos géis pericelulares, a substância fundamental do tecido conjuntivo nos organismos vertebrados (dos quais ele representa um dos componentes principais), no fluido sinovial de articulações, no humor vítreo e cordão umbilical.

HA, portanto, exerce um papel importante no organismo biológico (além daqueles descritos acima), como um suporte mecânico para as células de muitos tecidos, tais como a pele, tendões, músculos e cartilagem.

Dito polissacarídeo é conhecido por ser usado como um veículo para drogas de vários tipos, em associações simples ou salificadas com ácido hialurônico, já que suas propriedades especiais de biocompatibilidade, biodegradabilidade, não imunogenicidade, viscosidade e hidratabilidade os torna particularmente adequado como um sistema de liberação para drogas e moléculas ambos em um nível sistêmico e tópico (EP .0.197.718B1, EP 0.445.255B1).

De fato, experimentos pré-clínicos com HA associados com antiinflamatórios (tal como Diclofenac) para uso tópico têm demonstrado que HA significativamente aumenta (comparado ao controle) absorção da droga na pele onde, graças à ação específica de ácido hialurônico, ele é compartimentado para formar um "reservatório", minimizando ainda absorção através da pele. A ação da droga (e eficácia) é desse modo significativamente aumentada (Brown M.B. et ai, JEADV, 2005, 19:309-318).

O requerente, contrária à descrição acima de HA como um sistema de liberação, tem surpreendentemente revelado que uma associação entre HA e/ou os seus derivados com a enzima colagenase determina uma clara redução na atividade da enzima, desse modo permitindo a degradação/remoção da escara com simultânea formação de tecido de granulação, graças à ação específica da HA.

Além disso, dito polissacarídeo protege o tecido saudável que envolve a lesão da ação digestiva da colagenase, desse modo aumentando a aquiescência do paciente com o produto.

Diminuindo a atividade proteolítica da colagenase, ácido hialurônico manifesta propriedades que provam ser o oposto absoluto daqueles do sistema de liberação descrito acima, como conhecido pelo especialista no estado atual da técnica.

Uma outra questão da presente invenção é representada pelas formulações farmacêuticas de uma natureza lipofílica, contendo colagenase em associação com HA, que permite a completa estabilização da enzima, e, portanto, sua manutenção na forma ativa, em temperatura ambiente por períodos prolongados de tempo. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção descreve e reivindica a associação de HA e/ou seus derivados com a enzima colagenase nas formulações farmacêuticas de uma natureza lipofilica a qual, graças à presença de excipientes/estabilizantes especiais, permite a enzima proteolítica permanecer estável em temperatura ambiente por períodos prolongados de tempo.

Graças às propriedades especiais de HA na regeneração do tecido, debridamento enzimático pela nova composição de enzima/HA substancialmente modifica as fases de remoção de escara e nova regeneração de tecido que normalmente tratamento seguinte com colagenase somente, permitindo o estabelecimento de novas fases que determinam cicatrização adequada sem a formação de cicatriz patológica:

• A degradação/remoção de escara ocorre ao mesmo tempo como a formação de tecido de granulação;

· A formação de novo tecido conjuntivo determina uma

redução no tamanho do machucado após remoção da escara (por razões fornecidas acima) e, então uma diminuição significante no risco de infecções bacterianas e/ou virais;

• O tecido envolvente saudável é protegido da ação digestiva da colagenase graças ao HA;

• Remoção de escara pode ser realizada sem dor.

As reivindicações das novas formulações de colagenase/HA descritas acima são possíveis porque HA tem provado ser capaz de modular a atividade proteolítica de colagenase significativamente diminuindo sua ação durante debridamento enzimático do tecido necrótico, como demonstrado posteriormente.

A formulação da enzima/HA é particularmente indicada no debridamento de queimaduras de profundidade variada, ulceras de pressão, ulceras vasculares e ulceras de pé diabético, machucados de várias naturezas e de diferentes tamanhos e profundidade e, além disso, no tratamento de cicatrizes quelóide e hipertróficas com aquiescências do paciente final com o produto que é decididamente maior do que aquela com a enzima somente.

Além disso, dita composição é também reivindicada no tratamento de contratura de Dupuytren e glaucoma.

Os derivados de HA que podem ser usados nas novas formulações que são o assunto da presente invenção são listados abaixo:

1.HA salificado com bases orgânicas e/ou inorgânicas com um peso molecular de 50-730KDa (EP 0.138.572 BI) ou com um alto peso molecular de 750-1230 KDa5 (EP 535200 BI);

2.Hyaff®: os ésteres de HA com álcoois de série alifâtico, aralifático, cicloalifático, aromático, cíclico ou heterocíclico, com uma percentagem do esterifícação que varia de acordo com o tipo e o comprimento do álcool usado, entre 1 e 100%, preferivelmente entre 50 e 75% (EP 216453 BI);

3.Hyadd™: amidos de HA com aminas de série alifática, aralifática, cicloalifática, aromática, cíclica ou heterocíclica, com uma percentagem de amidação entre de 1 e de 10%, preferivelmente 4% (EP 1095064 BI);

4. Derivados O-sulfatados de HA até o quarto grau de

sulfatação (EP 0702699 BI);

5. ACP®: ésteres internos de HA com uma percentagem de um esterifícação interna entre 0,5 e 10% e preferivelmente 5% (EP 0341745 BI);

6. Derivados de HA desacetilado: derivado da desacetilação da

fração do N-acetil-n-acetil-glucosamina com uma percentagem de desacetilação preferivelmente entre 0,1 e 30%, quando todos os grupos carbóxi de HA podem ser salificados com bases orgânicas e/ou inorgânicas (EP1313772 BI);

7. Hyoxx™: derivados percarboxilados de HA obtidos da oxidação do hidroxila primária da fração do de N-acetil-glucosamina com um grau de percarboxilação de entre 0 a 100% e preferivelmente entre 25 e 75%. Todos os grupos carbóxi de HA podem ser salificados com bases orgânicas e/ou inorgânicas (n° do pedido de patente EP1339753).

O HA usado na presente invenção como tal ou na preparação de seus derivados pode ser derivado de qualquer fonte, por exemplo, ele pode ser obtido pela extração da crista do galo (EP0138572 BI), pela fermentação, ou por meios tecnológicos e seu o peso molecular varia entre 400 e 3 χ 10 Da, em particular entre 1 χ IO5 Da e 1 χ IO6 Da, e mais particularmente ainda entre 50.000 e 200.000 Da.

A concentração da enzima colagenase a ser usada em associação com HA ou os derivados do mesmo varia entre 0,0 IU e .lOOU/miligrama de HA, preferivelmente entre 0,1 e 20U e mais preferivelmente ainda entre 0,2 e 1 OU/mg de HA.

A concentração final de HA ou dos derivados do mesmo na composição farmacêutica final varia entre 0,01 e 5% peso/peso do produto final, variando preferivelmente entre 0,1 e 2% peso/peso, e mais preferivelmente ainda entre 0,2 e 0,4% em peso/peso. 20 Uma unidade de colagenase é definida como a quantidade de

enzima que hidrolisa 1 nmol de PZ-Pro-Leu-Gly-pZ-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg- D-Arg em um segundo em pH igual a 7,1 e a 37°C (PZ=4-fenil- azobenziloxicarbonil) (Wunsch E. et al, Physiol Chem, 1963, 333:149-151).

A colagenase preferivelmente usada ou para ser usada nas 25 composições que são o assunto da presente invenção é aquela produzida do microorganismo não patogênico que pertence a Vibrio Alginolyticus sub. Cepa de Iophagus, NCIMB (National Colection of Industrial and Marine Bactéria), cepa número 11038, cepa equivalente: LMG 3418.

E um microorganismo gram-negativo que produz uma colagenase com um peso molecular de 90.000 a 110.000 Daltons, (nomenclatura de IUBMB: EC 3.4.24.3), estável em uma faixa de pH de 4,0 e .11,0 mas com um pH ótimo entre 6,0 e 8,0, estável nas temperaturas que variam entre 4 e 40°C com uma temperatura ótima de 37°C.

A enzima é definida como uma metaloendopeptidase porque ela quebra o colágeno em fragmentos de peptídeo, agindo diretamente em sua estrutura de proteína de cadeia tripla. A atividade específica da enzima é inibida pelos sais de prata e de cobre e também pelos agentes quelantes tais como o EDTA, a qual se liga ao íon cálcio necessário à atividade da colagenase.

A atividade colagenolítica da colagenase do Vibrio Alginolyticus versus a atividade da mesma enzima associado com o ácido hialurônico

O objetivo do estudo era comparar a atividade da enzima como tal com aquela da nova composição de colagenase/HA, para observar a influência do ácido hialurônico na atividade proteolítica da mesma enzima.

Material:

• colágeno extraído da pele de bovino em uma concentração de 1 mg/ml (do tampão preparado como descrito daqui por diante) como um substrato para a atividade enzimática;

• a colagenase extraída de Vibrio Alginolyticus foi testada em três concentrações diferentes de unidades d de enzima de 0,33, de 0,66 e de 1,32;

• a colagenase extraída de Vibrio Alginolyticus foi testada nas mesmas três concentrações de 0,33, 0,66 e 1,32 U, mas em associação com ácido hialurônico nas seguintes relações: 0,16 U/mg de HA, 0,33 U ou 0,66U/mg de KA (então 0,33, 0,66 e 1,32 U são associados com 2 mg de HA). Em todos os três casos, a concentração de polissacarídeo foi mantida constante. Método da digestão enzimática:

O processo de degradação do colágeno foi realizado a 37°C por um período de tempo inicialmente ajustado em 90 minutos. Subseqüentemente, o processo foi repetido nas mesmas concentrações e na mesma temperatura, mas a reação foi parada 4 e 12 horas depois que foi iniciada.

A reação de digestão ocorreu no agente de tamponamento de Tris-HCL, 0.05 M, contendo o CaCl2 0,0 IM em pH=7,4 para o qual o substrato da reação tinha sido adicionado, ou a própria colagenase ou a enzima associado com as concentrações de HA como descritas acima.

Resultados:

A mistura enzimática da digestão obtida (enzima e produtos da degradação de colágeno correspondentes) foi analisada em gel de poliacrilamida a 7% (eletroforese: SDS-PAGE; Laemmli U. K., Nature, 1970, .680-685), para mapear os vários fragmentos de proteína separados de acordo com seu peso molecular, (MW) e marcada com azul Comassie.

Após a eletroforese iniciar, o colágeno separa-se em sub- unidades com um MW de aproximadamente 100.000 Daltons com outros fragmentos de peptídeo com um MW de aproximadamente 33.000 Daltons. Todos os géis foram carregados com os padrões do peso

molecular, com o colágeno não digerido como o controle positivo, com o colágeno degradado pela colagenase como tal e enzima relativa separadamente carregada e, por último, com o colágeno degradado pela colagenase associada com HA e enzima somente. Figura 1 mostra claramente que enzimas de 0,33 U somente

degradam parcialmente o colágeno em 90 minutos, mas, sobretudo, que a presença de HA na composição de colagenase/HA (na mesma concentração da enzima) modifica a ação colagenolítica da enzima, reduzindo sua atividade. Figuras 2 e 3 ainda mostram a ação modulatória exercida pelo ácido hialurônico sobre a enzima: após 90 minutos 0,66 Ue 1,32 U de colagenase degradam completamente o colágeno enquanto, especialmente em .0,66 U, o HA diminui a ação colagenolítica da enzima. A influência de dito polissacarídeo na enzima é ainda mais evidente com 1,32 U de colagenase.

Figures 4 e 5 mostram a situação após 4 e 12 horas: após 4 horas de incubação da enzima (0.66 U) com colágeno é ainda possível observar a ação de HA sobre colagenase porque as frações de proteína não digerida de colágeno são visíveis, embora fraca; após 12 horas (novamente com 0,66 U de enzima) a ação modulatória do polissacarídeo não é mais evidente e o colágeno é degradado completamente.

Para propósitos puramente descritivos, e sem ser limitado pelos mesmos, nós relatamos daqui por diante alguns exemplos de como as novas formulações que são o assunto da presente invenção podem ser preparadas:

Método de produzir colagenase/ Iipogel HA

Preparação dos componentes funcionais do lipogel

Uma solução aquosa inicial ou uma solução tampão em pH 7.1 (TrisHCL 25 milímetros, CaCl2 10 mM) é preparada com 82,7 U/ml do colagenase; 45 ml desta solução são liofilizadas com os seguintes excipientes: Maltose (18 g) como diluente/estabilizante, Carragenano, possivelmente purificada (0,54 g) como o estabilizante e a água 45 g. 18,6 g do produto liofilizado é obtido (produto seco), composto como segue:

• maltose 95% em peso/peso

· carragenano 2,8% em peso/peso

• colagenase 0,9% em peso/peso

O produto liofilizado é então micronizado.

Ao mesmo tempo, o HA obtido pela fermentação e com um MW de 160KDs é micronizado também. Dispersão dos componentes funcionais na base lipofílica Exemplos 1 e 2

A enzima colagenase e HA preparados conforme descritos acima são dispersados uniformemente em uma base lipofílica constituída pelos seguintes excipientes:

• óleo de rícino hidrogenado na forma de pó (com ação gelificante)

•álcool cetil estearílico (como agente de consistência)

•vaselina viscosa (como fase lipofílica)

· óleo do vaselina leve (como fase lipofílica)

Preparação da base lipofílica:

Dissolva e solubilize em cerca 88-90°C Vaselina viscosa e álcool cetil estearílico no óleo de Vaselina. Uma vez macia, massa fundida foi obtida, dissolva e solubilize o pó de óleo de rícino hidrogenado na fase lipofílica recentemente formada.

Uma vez a massa ter sido fundida uniformemente, resfrie para .25-30 0C.

Lipogel: Exemplo 1

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Lipogel: Exemplo 1 B

<table>table see original document page 13</column></row><table> Lipogel: Exemplo 1 C <table>table see original document page 14</column></row><table>

Lipogel: Exemplo 1 D <table>table see original document page 14</column></row><table>

Lipogel: Exemplo 2 A <table>table see original document page 14</column></row><table>

Lipogel: Exemplo 2B <table>table see original document page 14</column></row><table>

Dispersão dos componentes funcionais na base lipofilica

Exemplo 3

Incorporar e solubilizar o óleo de vaselina leve no esmalte de jojoba enquanto lentamente agitara 70-75°C (sistema de gelificação lipofílica baseado em copolímeros de estireno-propileno-butileno no óleo do jojoba) até uma massa macia ser obtida. Resfrie para temperatura ambiente e então adicione, enquanto agita, HA micronizado e colagenase lipofílica micronizada conforme descrito previamente, até que os pós tenham sido completamente amalgamados no lipogel. Lipogel: Exemplo 3 A <table>table see original document page 15</column></row><table>

Lipogel: Exemplo 3 B <table>table see original document page 15</column></row><table>

Ditas formulações podem conter substâncias farmacologicamente e/ou biologicamente ativas tais como, por exemplo, antibióticos, antivirais, cicatrizantes, agentes citostáticos/citotóxicos, drogas anticâncer, hormônios, drogas anti-inflamatórias esteroidais e não esteroidais, fatores tróficos e citosinas de várias naturezas.

A invenção sendo desse modo descrita, está clara que esses 15 métodos podem ser modificados em várias formas. Tais modificações não são para ser consideradas como divergências do espírito e propósito da invenção e qualquer modificação que seria evidente para um perito na técnica vem dentro do escopo das reivindicações a seguir. Explanação das figuras Figura 1: Tempo de digestão de colágeno de 90 minutos

MWS = padrões do peso molecular representados por 6 bandas: 205KDs, llóKDs, 97KDs, 66KDs, 45KDs, 29KDs; PC = colágeno como tal, controle positivo; ColL 1 = colagenase em uma concentração de .0,33U + colágeno; Coll. 2 = colagenase em uma concentração de 0,33U; ColL /HA 1 = colagenase em uma concentração de 0,33U + colágeno na presença do HA; Coll. /HA 2 Colagenase em uma concentração de 0,3311 na presença do HA.

Figura 2: Tempo de digestão de colágeno de 90 minutos

MWS = padrões do peso molecular representados por 6

bandas: 205KDs, llóKDs, 97KDs, ÓÓKDs, 45KDs, 29KDs; PC = colágeno como tal, controle positivo; Coll. 1 = colagenase em uma concentração de .0,66U + colágeno; Coll. 2 = Colagenase em uma concentração de 0,66U; Coll. /HA 1 = colagenase em uma concentração de 0,66U + colágeno na presença do HA; ColL /HA 2 = colagenase em uma concentração de 0,66U na presença do HA.

Figura 3: Tempo de digestão do colágeno de 90 minutos

MWS = padrões do peso molecular representados por 6 bandas: 205KDs, llóKDs, 97KDs, ÓÓKDs, 45KDs, 29KDs; PC - colágeno como tal, controle positivo; Coll. 1 = colagenase em uma concentração de .1,32U + colágeno; Coll. 2 = colagenase em uma concentração de 1,32U; Coll. /HA 1 = colagenase em uma concentração de 1,32U + colágeno na presença do HA; Coll. /HA 2 = colagenase em uma concentração de 1,32U na presença do HA.

Figura 4: Tempo dE digestão do colágeno de 4 horas

MWS = padrões do peso molecular representados por 6 BANDAS: 205KDs, llóKDs, 97KDs, 66KDs, 45KDs, 29KDs; PC - colágeno como tal, controle positivo; Coll. 1 = colagenase em uma concentração de 0,66U + colágeno; Coll. 2 = colagenase em uma concentração de 0,66U; ColL /HA 1 = colagenase em uma concentração de .0,66U + colágeno na presença do HA; Col./HA 2 = colagenase em uma concentração de 0,66U na presença do HA

Figura 5: Tempo de digestão de colágeno de 12 horas MWS - padrões do peso molecular representados por 6 bandas: 205KDs, 116KDs, 97KDs, 66KDs, 45KDs, 29KDs; PC - colágeno como tal, controle positivo; ColL 1 = colagenase em uma concentração de .0,66U + colágeno; ColL 2 = colagenase em uma concentração de 0,66U; ColL /HA 1 = colagenase em uma concentração de 0,66U + colágeno na presença do HA; Colagenase /HA 2 = colagenase em uma concentração de 0,66U na presença do HA.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Medicamento para uso tópico, caracterizado pelo fato de que contém ácido hialurônico e/ou os seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase.

2. Medicamento, caracterizado pelo fato de que contém ácido hialurônico e/ou os seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase para o tratamento da contratura de Dupuytren e glaucoma.

3. Medicamento de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo fato de que a colagenase é produzida do microorganismo não patogênico que pertence a cepa Vibrio Alginolyticus lophagus.

4. Medicamento de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que os derivados de ácido hialurônico são seus sais com bases orgânicas e/ou inorgânicas, ésteres, amidos, derivados sulfatados, ésteres internos, derivados desacetilados e percarboxilados.

5. Medicamento de acordo com reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que contém substâncias farmacologicamente e/ou biologicamente ativas.

6. Medicamento de acordo com as reivindicações 1, 3 a 5, caracterizado pelo fato de que é utilizado no tratamento de queimaduras de profundidade variada, de escara de decúbito, de úlcera vascular e de úlcera de pé diabético e no tratamento de cicatrizes hipertrófica e quelóide.

7. Medicamento de acordo com reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a concentração da enzima proteolítica colagenase varia entre 0,01U e lOOU/miligramas de HA.

8. Medicamento de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a concentração da enzima proteolítica colagenase varia entre 0,1U e 20U/miligramas de HA.

9. Medicamento de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a concentração da enzima proteolítica colagenase varia entre 0,2U e 1 OU/miligramas de HA.

10. Medicamento de acordo com reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a concentração final de HA varia entre 0,01 e .5% em peso/peso do produto acabado.

11. Medicamento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a concentração final de HA varia entre 0,1 e .2% em peso/peso.

12. Medicamento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a concentração final de HA varia entre 0,2 e .0,4% em peso/peso

13. Medicamento de acordo com as reivindicações 2 a 5 e 7 a .12, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de contratura de Dupuytren e glaucoma.

14. Composições farmacêuticas lipofílicas, caracterizadas pelo fato de que contêm ácido hialurônico e/ou os seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase e ainda contêm maltose e carragenano como agentes estabilizantes.

15. Composições farmacêuticas lipofílicas de acordo com as reivindicações 2 a 5, 7 a 12, caracterizadas pelo fato de que contêm maltose e carragenano contendo como agentes estabilizantes.

16. Composições farmacêuticas de acordo com as reivindicações 14 ou 15, caracterizadas pelo fato de que são utilizadas no tratamento de queimaduras de profundidade variada, de escara de decúbito, de úlcera vascular e de úlcera de pé diabético e no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóide.

17. Uso de medicamentos como definidos nas reivindicações .1, 3 a 5, 7 a 12, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de queimaduras de profundidade variada, de escara de decúbito, de úlcera vascular e de úlcera de pé diabético e no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóide.

18. Uso de medicamentos de acordo com reivindicações 2 a 5, .7 a 12, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento da contratura de Dupuytren e glaucoma.

19. Uso de composições farmacêuticas lipofílicas de acordo com as reivindicações 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de queimaduras de profundidade variada, de escara de decúbito, de úlcera vascular e de úlcera de pé diabético e no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóide.

20. Uso de composições farmacêuticas lipofílicas de acordo com as reivindicações 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento da contratura de Dupuytren e glaucoma.

21. Processo para a preparação de um lipogel contendo ácido hialurônico e/ou seus derivados em associação com a enzima proteolítica colagenase, caracterizado pelo fato de que envolve as seguintes etapas: I) preparação da colagenase liofilizada com quantidades ajustadas de maltose e de carragenano; II) micronização de dita colagenase liofilizada; III) micronização de HA; IV) preparação da base IipofIlica do lipogel; V) a dispersão macia dos componentes micronizados na base de lipogel.