BRPI0516464B1 - método para a preparação de um produto farmacêutico - Google Patents

Abstract

formulação farmacêutica, metodo para a preparação de um produto farmacêutico, e, uso de uma formulação farmacêutica. a invenção provê uma formulação farmacêutica e um método para preparar a formulação.

Description

“MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DE UM PRODUTO FARMACÊUTICO” INTRODUÇÃO A presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica de insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma e insulina cristalina, ou um análogo ou derivado da mesma. As preparações possuem características químicas superiores.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

No tratamento de diabetes melitus, muitas variedades de preparações de insulina foram sugeridas e usadas, tais que insulina regular, insulina Semilente®, insulina isofano, suspensões de zinco insulina, protamina zinco insulina, e insulina Ultralente®. Como pacientes diabéticos são tratados cm insulina durante várias décadas, existe uma necessidade importante quanto a preparações de insulina que aperfeiçoem a segurança e a qualidade de vida. Algumas das preparações de insulina disponíveis são caracterizadas por um rápido início da ação e outras preparações possuem um início relativamente lento, mas apresentam uma ação mais ou menos prolongada. Preparações de insulina de ação rápida são, de modo usual, soluções de insulina, enquanto que preparações de insulina de ação retardada podem ser suspensões contendo insulina em forma amorfa e/ou cristalina, precipitada pelo adição de sais de zinco isoladamente ou pela adição de protamina ou pela combinação de ambos.

Em adição, alguns pacientes estão usado preparações tento tanto um início mais rápido da ação, como uma ação mais prolongada. Uma tal preparação pode ser uma solução de insulina, em que cristais de protamina insulina são suspensos. A invenção refere-se a uma tal suspensão em uma forma previamente misturada.

Acta Pharmaceutica Nordica 4 (4), 1992, págs. 149-158, expõe preparações de insulina, nas quais a concentração de NaCl foi variada na faixa de 0 a 250 mM. A maior partes das preparações, incluindo todas as preparações que compreendem adicionalmente glicerol, contêm uma quantidade mais alta de NaCl, isto é 0,7% correspondendo aproximadamente t a uma concentração de 120 mM. E mencionado neste documento que, enquanto que NaCl possuí um efeito de estabilização sobre preparações de insulina, glicerol e glicose conduzem a uma deterioração química aumentada. A US 5866538 expõe preparações de insulina com glicerol e/ou manitol e baixas concentrações de NaCl. Esta referência não descreve suspensões na presença de protamina. A US 6127334 expõe suspensões de insulina AspB28 contendo ácido clorídrico, solução de ZnClí, solução de sulfato de protamina, m-cresol, fenol, glicerol, monoidrogenofosfato de dissódio e água. Outros exemplos incluem os ingredientes acima, incluindo manitol e/ou NaCl e/ou LysB28' ProB29'insulina. Os exemplos diferem deste modo, tanto em ingredientes como em métodos para a preparação da formulação. As preparações solucionam o problema provendo suspensões, que são resistentes à tensão física. A US 554 7930 descreve soluções de insulina AspB28 contendo ácido clorídrico, solução de ZnCl2, solução de sulfato de protamina, m-cresol, fenol, glicerol, monoidrogenofosfato de dissódio e água. Os exemplos diferem assim, tanto em ingredientes como em métodos de preparação.

A invenção provê, deste modo, uma nova formulação para suspensões de insulina e um novo método para preparar a formulação. DESCRICÂO DA INVENÇÃO

Por “análogo de insulina”, como aqui usado, é compreendido um polipeptídeo, que possuí uma estrutura molecular, que pode ser formalmente derivada a partir da estrutura de uma insulina de ocorrência natural, por exemplo aquela de insulina humana, pela eliminação e/ou substituição de pelo menos um resíduo aminoácido ocorrente na insulina natural e/ou pela adição de pelo menos um resíduo de aminoácido. Os resíduos de aminoácido adicionados e/ou substituídos podem ser ou resíduos de aminoácido codificáveis ou outros resíduos de aminoácido de ocorrência natural ou resíduos de aminoácido puramente sintéticos. Em um aspecto da invenção, um máximo de 6 aminoácidos são corrigidos. Em um aspecto da invenção, um máximo de 5 aminoácidos são corrigidos. Em um aspecto da invenção, um máximo de 4 aminoácidos são corrigidos. Em um aspecto da invenção, um máximo de 3 aminoácidos são corrigidos. Em um aspecto da invenção, um máximo de 2 aminoácidos são corrigidos. Em um aspecto da invenção, 1 aminoácido é corrigido.

Os análogos de insulina podem ser tais, que a posição 28 da cadeia B possa ser modificada a partir do resíduo Pro natural para Asp, Lys, ou Ile. Além disso, Asn na posição A21 pode ser modificado para Ala, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Vai, em particular para Gly, Ala, Ser, ou Thr e, de modo preferido, para Gly. Além disso, Asn na posição B3 pode ser modificado para Lys ou Asp. Outros exemplos de análogos de insulina são insulina des (B30) humana, análogos de insulina, em que um ou ambos de BI e B2 foram eliminados; análogos de insulina, em que a cadeia A e/ou a cadeia B possuem uma extensão N-terminal e análogos de insulina, em que a cadeia A e/ou a cadeia B possuem uma extensão C-terminal. Outros análogos de insulina são aqueles em que um ou mais de B26-B30 foram eliminados. Se um ou mais dos resíduos aminoácido nas posições B26-B30 tiverem isso eliminados, o resíduo de aminoácido C-terminal da cadeia B será Lys. Em um aspecto da invenção, o análogo de insulina é AspB28.

Por “ derivado de insulina”, como aqui usado, é compreendida uma insulina de ocorrência natural ou um análogo de insulina que foi quimicamente modificado, por exemplo através da introdução de uma cadeia lateral em uma ou mais posições da espinha dorsal insulina ou pela oxidação de grupos de redução dos resíduos de aminoácido na insulina, ou pela conversão de um grupo carboxílico livre para um grupo éster ou para um grupo amida. Outros derivados são obtidos através da acilação de um grupo amino ou de um grupo hidróxi.

No contexto da presente invenção, o termo “cerca de” significa dentro de uma faixa razoável, em tomo do valor mencionado. O termo pode representar a faixa, que é determinada pela acurácia de medição.

Em outras modalidades, o termo “cerca de” está dentro de +/- 10% do valor.

No contexto da presente invenção, “um” significa um ou mais do que um.

No contexto presente, a unidade “U” corresponde aproximadamente a 6 nmol/ml.

Na presente invenção, a quantidade de um sal refere-se à quantidade de sal adicionada à preparação de insulina, por exemplo sob a forma de NaCl. Na formulação, outras fontes de sal podem existir. No entanto, na presente invenção, a quantidade de sal presente refere-se à adição externa de sal.

No presente contexto, sal significa um sal fisiologicamente aceitável. Em um aspecto da invenção, o sal é derivado a partir de Lítio, A A Sódio, Potássio, Magnésio ou Cálcio, e Cl, Br, SO4 , PO4 . Em um aspecto da invenção, 0 sal é NaCl.

Na presente invenção, “ um composto fenólico” refere-se a fenol em si mesmo, a derivados do mesmo, e a misturas de fenol e/ou seus derivados. Os derivados de fenol são, por exemplo, cresol nos diferentes isômeros 0-, m- e p-cresol. Em um aspecto da invenção, 0 cresol usado na presente invenção é m-cresol. Em um aspecto da invenção, um composto fenólico compreende uma mistura de fenol e m-cresol. A presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica, que compreende insulina cristalina, um análogo ou derivado da mesma e insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma compreendendo ainda: Protamina, Zn , tampão, um agente isotônico, um composto fenólico e um sal na quantidade de mais do que 3 mM. Em um aspecto da invenção, a quantidade de sal adicionada está abaixo de 50 mM. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado em uma quantidade de 7 a 40 mM. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado em uma quantidade de 10-30 mM na preparação final. Em um aspecto da invenção, sal é adicionado em uma quantidade de 13-16 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado em uma quantidade de 17-23 mM na preparação final. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado em uma quantidade de 17-23 mM na preparação final. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado na quantidade de 15 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o sal é adicionado em uma quantidade de 20 mM da preparação final.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende tanto insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma, e insulina ou derivados da mesma precipitados, preferivelmente cristalinos, em diferentes razões em peso. Em um aspecto da invenção, a formulação farmacêutica refere-se a insulina, análogos ou derivados da mesma em uma razão em peso de insulina dissolvida, ou um análogo ou derivado da mesma, a insulina cristalina, análogos ou derivados da mesma em de 1:99 a 99:1; Em um aspecto da invenção, as preparações compreendem uma razão, em peso, de insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma, a insulina cristalina, análogos ou derivados da mesma, de 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, e 95:5 e inclui os intervalos entre as relações especificamente mencionadas. Em um aspecto da invenção, a preparação refere-se a insulina AspB28 em uma suspensão, que compreende uma razão, em peso, de insulina dissolvida para insulina cristalina AspB de 30:70. Em um aspecto da invenção, a preparação refere-se a insulina AspB28, que compreende uma razão, em peso, de insulina dissolvida para cristalina AspB28 de 70:30. Em um aspecto da invenção, a preparação refere-se a insulina íSO

AspB , em uma suspensão, que compreende uma razão, em peso, de insulina Λή dissolvida para cristalina AspB de 80:20. Em um aspecto da invenção, a preparação refere-se a insulina AspB28 em uma suspensão, que compreende nA uma razão, em peso, de insulina dissolvida para cristalina AspB de 20:80. Em um aspecto da invenção, a preparação refere-se a insulina AspB em uma suspensão, que compreende uma razão, em peso, de insulina dissolvida para cristalina AspB28 de 50:50.

Em um aspecto da invenção, as preparações contêm entre 600 e 6000 nmol/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto da invenção, as preparações contêm 100 U/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto a invenção, as preparações contêm 200 U/ml de insulina, um derivado ou análogo da mesma. A quantidade de protamina determina a quantidade de insulina cristalina, um análogo ou derivado da mesma, na formulação. A quantidade de protamina determina a razão, em peso, de insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma para insulina cristalina, um análogo ou derivado da mesma e é ajustada de modo correspondente. Em uma modalidade da invenção, a protamina usada está entre 0,01 a 5,0 mg/ml.

Em um aspecto da invenção, zinco é adicionado, zinco pode se originar, de modo parcial ou total, a partir de um sal de zinco, tal que cloreto de zinco, sulfato de zinco ou acetato de zinco. Em um aspecto da invenção, o zinco é adicionado sob a forma de cloreto de zinco. A quantidade de Zn2+ adicionada é de 2 Zn2+:6 insulina para 5 Zn:6 insulina.

Em um aspecto da invenção, a formulação compreende um agente isotônico. Em um aspecto da invenção, o agente isotônico é selecionado a partir do grupo, que consiste de um açúcar ou álcool de açúcar, um aminoácido Por exemplo, L-glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina), um alditol (por exemplo, glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenoglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol), polietilenoglicol (por exemplo, PEG 400), ou misturas dos mesmos. Qualquer açúcar, tal que mono-, di- ou polissacarídeos, ou glucanos solúveis em água, incluindo, por exemplo, frutose, glicose, manose, sorbose, xilose, maltose, lactose, sacarose, trealose, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, amido solúvel, hidroxietil amido e carboximetilcelulose-Na podem ser usados. Em uma modalidade, o aditivo de açúcar é sacarose. O álcool de açúcar é definido como um hidrocarboneto C4-C8 tendo pelo menos um grupo -OH, e inclui, por exemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol, e arabitol. Em uma modalidade, o aditivo de álcool de açúcar é manitol. Os açúcares ou álcoois de açúcar acima mencionados podem ser usados, de modo individual ou em combinação. Não existe limite fixo para a quantidade usada, desde que o açúcar e o álcool de açúcar sejam solúveis na preparação líquida e não afetem, de modo adverso, os efeitos de estabilização alcançados usando os métodos da invenção. Em um aspecto da invenção, o agente de isotonicidade incluído nas preparações é glicerol.

Uma formulação farmacêutica de acordo com qualquer das modalidades acima, é aquela em que o agente de isotonicidade está presente na quantidade de 130-225 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o agente de isotonicidade está presente na quantidade de 150-200 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o agente de isotonicidade está presente na quantidade de 160-190 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o agente de isotonicidade está presente na quantidade de 170-180 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o agente de isotonicidade está presente em uma quantidade de cerca de 174 mM da preparação final. Em um aspecto do acima, o agente de isotonicidade é glicerol.

Em um aspecto da invenção, tampões são incluídos nas preparações. Tampões adequados são, em princípio, qualquer tampão farmaceuticamente aceitável para a administração humana. Em uma outra modalidade da invenção, o tampão é selecionado a partir do grupo, que consiste de acetato de sódio, carbonato de sódio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, diidrogenofosfato de sódio, hidrogenofosfato de dissódio, fosfato de sódio, e tris(hidroxÍmetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico e misturas dos mesmos. Cada um destes tampões específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção. Em um aspecto da invenção, o tampão é um tampão de fosfato de sódio. Em um aspecto da invenção, o tampão é diidrato de fosfato de dissódio.

Em um aspecto da invenção, o tampão está em uma quantidade de 2-20 mM. Em um aspecto da invenção, o tampão está em uma quantidade de 6Ί0 mM. Em um aspecto da invenção, a quantidade de tampão é de 7 mM. Em um aspecto da invenção, o tampão é m tampão de fosfato de sódio. Em um aspecto da invenção, o tampão é diidrato de fosfato de dissódio. A invenção provê um método para a preparação de uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, que compreende as etapas de: a) prover uma solução ácida, que compreende insulina, um análogo ou derivado da mesma, uma fonte de zinco, uma quantidade adequada de protamina, opcionalmente compreendendo composto fenólico, e/ou um agente de isotonicidade, e/ou um sal, e b) prover uma solução alcalina compreendendo uma substância, que age como tampão em pH fisiológico, e compreendendo ainda um sal, e/ou composto fenólico e/ou agente de isotonicidade, e c) misturar as soluções ácida e alcalina; e d) deixar a mistura formar a composição farmacêutica, que compreende uma fase solúvel, compreendendo a insulina dissolvida, um análogo ou derivado da mesma, e uma fase com a insulina cristalina, um análogo ou derivado da mesma, e, opcionalmente, a justar o pH e opcionalmente adicionar o sal remanescente, e/ou agente de isotonicidade e/ou um composto fenólico.

Em alguns aspectos do acima, o agente de isotonicidade é <\Λ glicerol. Em aspectos do acima, o análogo de insulina é AspB .

Em um aspecto, a preparação é executada pela mistura de uma solução básica (Solução I), que compreende um tampão, opcionalmente compreendendo um composto fenólico e/ou sal, e/ou glicerol com uma solução ácida (Solução II) compreendendo insulina, uma fonte de zinco, uma quantidade adequada de protamina, opcionalmente ainda compreendendo sal e/ou glicerol, e/ou um composto fenólico. A solução combinada é então opcionalmente ajustada com relação ao volume e valor de pH e deixada cristalizar. De modo opcional, o remanescente do composto fenólico e/ou glicerol e/ou sal é então adicionado. O valor do pH na preparação final está, de modo preferido, na faixa de 7,0 a 7,8.

Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém de 10 a 1000 U/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém 100 U/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém 200 U/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém 400 U/ml de insulina, um análogo ou derivado da mesma. Em um aspecto do método, o análogo de insulina é AspB28.

Em um aspecto da invenção, um sal, agente de isotonicidade e um composto fenólico estão apenas na solução I. Em um aspecto do sal da invenção, o agente de isotonicidade e um composto fenólico estão apenas na solução II. Em um aspecto da invenção, um sal, agente de isotonicidade e um composto fenólico estão divididos, tanto na solução I como na solução II.

Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém apenas uma fração da quantidade total do agente de isotonicidade e de um composto fenólico, e sal. Após a cristalização, a quantidade remanescente de um composto fenólico, e/ou sal e/ou agente de isotonicidade é adicionada. Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém a quantidade total de sal, apenas uma fração do agente de isotonicidade e apenas uma fração da quantidade total de um composto fenólico. Após a cristalização, a quantidade remanescente de um composto fenólico e de um agente de isotonicidade é adicionada. Em um aspecto da invenção, a solução combinada deixada para a cristalização contém a quantidade total de um composto fenólico, sal e agente de isotonicidade.

Em um aspecto da invenção, a quantidade total de composto fenólico é dividida entre as soluções I e II. Em um aspecto da invenção, a quantidade de um composto fenólico é dividida em quantidades iguais entre a solução I e II.

Em um aspecto da invenção, de 0-100% da quantidade total de composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, de 10-90% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, de 20-85% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, de 30-80% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, de 40-75% da quantidade total de um compostos fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, de 50-70% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, 60% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, 80% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, 100% da quantidade total de um composto fenólico são adicionados na mistura deixada para a cristalização. Em um aspecto da invenção, o remanescente de um composto fenólico é adicionado separadamente.

Em um aspecto da invenção, o um composto fenólico é um composto fenólico. Em um aspecto, o composto fenólico é fenol ou m-cresol, ou fenol e m-cresol.

Em um aspecto da invenção, o composto fenólico está presente em de 20-40 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico está presente em 32 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, fenol está presente em de 10-40 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, este composto fenólico compreende fenol na quantidade de 10-20 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende fenol na quantidade de 14-18 mM. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende fenol na quantidade de 16 mM da preparação final.

Em um aspecto da invenção, ra-cresol está presente em de 10-40 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, m-cresol está presente em 32 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende m-cresol na quantidade de 10-20 mM. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende m-cresol na quantidade de 14-18 mM. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende m-cresol na quantidade de 16 mM da preparação final. Em um aspecto da invenção, o composto fenólico compreende m-cresol na quantidade de 16 mM da preparação final.

Em um aspecto da invenção, tanto fenol e m-cresol de acordo com os aspectos acima estão presentes na formulação farmacêutica final. A preparação de insulina cima possui uma boa capacidade para ser novamente colocada em suspensão. Como o produto é uma suspensão, o usuário final precisa novamente colocar o produto em suspensão para que ele apresente uma distribuição uniforme do produto para a injeção. Se o produto não puder ser novamente colocado em suspensão, o produto tem que ser descartado.

Isto pode ser controlado pelo procedimento que se segue.O produto é agitado e visualmente inspecionado pelo olho humano em uma fonte de luz. O produto precisa ser branco e homogêneo.

Em um aspecto da invenção, colocar novamente o produto em suspensão do produto compreende a laminado do produto, sendo seguida pela colocação do produto de cabeça para baixo. A presente invenção é em particular vantajosa em conexão com suspensões, que compreendem análogos de insulina humana. A invenção é adicionalmente ilustrada pelos exemplos que se seguem, os quais, no entanto, não devem ser construídos como limitativos. Exemplo I: Uma preparação de insulina, contendo tanto insulina humana AspB28 dissolvida como cristalina, foi preparada do modo como se segue: A solução I foi preparada pela dissolução de 2,50 g de diidrato de fosfato de dissódio e 1, 17 g de cloreto de sódio, em água, para a injeção. 1,55 g de fenol, 1,77 g de metacresol, 16 g de glicerol e 4,32 g de hidróxido de sódio 2N foram adicionados durante a misturação. O pH da solução foi medido para aproximadamente 9, e água foi adicionada a até 900 ml. A solução II foi preparada pela dissolução de 1,17 g de cloreto de sódio, 1,77 g de metacresol, 1,55 g de fenol e 16 g de glicerol em água. Então 0,45 g de sulfato de protamina em solução foram adicionados à solução, enquanto sob misturação, e 7,5 g de insulina humana AspB , dissolvida em água pela adição a esta de 3,4 g de ácido clorídrico 2 N e 1,04 g de solução de cloreto de zinco (4 mg/ml), foi adicionada à solução, enquanto sob misturação. Água até 800 ml foi adicionada. As soluções foram misturadas e o pH da suspensão foi, se necessário reajustado para aproximadamente 7,2, através da adição de hidróxido de sódio ou de ácido clorídrico. Foi adicionada água a até 2000 ml. A suspensão resultante não foi deixada cristalizar. A forma dos cristais e a quantidade de partículas amorfas foram verificadas através de microscopia.

Na preparação resultante a razão, em peso, de insulina precipitada para dissolvida foi de 50:50.

Exemplo II

Uma preparação de insulina contendo ambas a insulina dissolvida e cristalina AspB foi preparada na seguinte maneira: A solução I foi preparada, por dissolver 2,50 g de diidrato de fosfato de dissódio e 0,88 g de cloreto de sódio em Água para Injeção. 1,24 g de fenol, 8 g de glicerol e 4,6 g de hidróxido de sódio 2N foram adicionados durante a mistura. O pH da solução foi medido a aproximadamente 10 e água foi adicionada até 450 ml. A solução II foi preparada pela dissolução de 0,88 g de cloreto de sódio, 1,24 g de fenol e 4 g de glicerol em água. Então 0,64 g de sulfato de protamina em solução foi adicionado à solução enquanto mistura e 7,5 g de insulina humana AspB dissolvida em água pela adição à mesma de 3,4 g de ácido hidroclórico 2N e 1,04 g de solução de cloreto de zinco (4 mg/ml), foram adicionados à solução enquanto mistura, Foi adicionada água até 500 ml. As soluções foram misturadas e o pH da suspensão foi, se necessário, reajustado a aproximadamente, 7,2 por adição de hidróxido de sódio ou ácido hidroclórico. Foi adicionada água para completar 1000 ml. A suspensão resultante foi agora permitida cristalizar. A forma dos cristais e a quantidade de partículas amorfas foram verificadas por microscopia.

Foi preparada a solução III pela dissolução de 0,62 g de fenol, 3,54 g de metacresol e 16 g de glicerol. Água foi adicionada a até 900 ml. A solução III e a mistura de cristalização foram misturadas e o pH da suspensão foi, se necessário, reajustado para 7,2 pela adição de hidróxido de sódio ou ácido clorídrico. Foi adicionada água a até 2000 ml.

Na preparação resultante, a razão, em peso, de insulina precipitada para dissolvida foi de 70:30.

REIVINDICAÇÕES

Claims (4)

1. Método para a preparação de um produto farmacêutico, compreendendo insulina humana AspB28, protamina, Zn++, agente de isotonicidade, um composto fenólico, e sal na quantidade de 7 a 40 mMt em que a razão em peso de insulina humana AspB" dissolvida para cristalina é de 30:70, o dito método compreendendo as etapas de: a) prover uma solução ácida compreendendo insulina humana AspB" , uma fonte de zinco, uma quantidade adequada de protamina, opcional mente compreendendo ainda um composto fenólico, e/ou um agente de isotonicidade, e/ou sal; b) prover uma solução alcalina compreendendo uma substância que age como um tampão em pH fisiológico, e opcionalmente compreendendo ainda sal, e/ou um composto fenólico e/ou agente de isotonicidade; c) misturar as soluções ácidas e alcalinas; d) deixar a mistura formar a composição farmacêutica que compreende uma fase solúvel compreendendo a insulina humana AspB28 dissolvida e uma fase com a insulina humana AspB" cristalina, caracterizado pela mistura de cristalização que contém de 20-85% da quantidade total de composto fenólico no produto final; e) adicionar o composto fenólico remanescente e opcional mente ajustar o pH e opcionalmente adicionar sal remanescente, e/ou agente de isotonicidade; em que o composto fenólico é fenol, m-cresol ou uma mistura de ambos; e cm que o m-cresol é somente adicionado na etapa (e).

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tampão na etapa (b) é diidrato de fosfato de dissódio.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente de isotonicidade é glicerol.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo fato de compreender ainda a etapa de ajustar o valor do pH da formulação farmacêutica para um pH de cerca de 7,0-7,8.