BRPI0506041B1 - Composição indutora de angiogênese acelerada e usos de uma proteína indutora de angiogênese acelerada - Google Patents
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Abstract
proteína indutora de angiogênese acelerada, composições indutoras de angiogênese acelerada e usos de proteína indutora de angiogênese acelerada a presente invenção refere-se a uma proteína indutora de angiogênese, a uma composição que a contém, bem como aos usos de dita proteína.
Description
[001] A presente invenção refere-se a uma proteína indutora de angiogênese, no sentido de que induz cicatrização e/ou revascularização acelerada do tecido animal afetado, assim como composições que a contém, e seus usos.
[002] Angiogênese é um complexo processo biológico pelo qual novos capilares são formados a partir da vasculatura pré-existente. Ocorre em muitas condições fisiológicas e patológicas, e é controlada pelo balanço líquido entre moléculas que têm atividades regulatórias negativas e positivas. Do ponto de vista de aplicação médica, a cicatrização muitas vezes envolve angiogênese na reconstituição de regiões feridas, ou de qualquer forma afetadas, que necessitam de revascularização, por exemplo em feridas dos pés de diabéticos ou feridas causadas por acidentes.
[003] São conhecidos vários produtos para a finalidade de cicatrização por indução à angiogênese, mas até o momento são extremamente caros, por exemplo fatores de crescimento derivados de plaquetas humanas recombinantes (citado na patente americana US 5.457.093).
[004] O pedido de patente internacional WO2005/08932 descreve membranas de látex microporosas obtidas a partir de plantas, métodos de preparação das mesmas e seus usos clínicos, como estimulantes da angiogênese e atividades quimiotáticas. A proteína que se acredita ser responsável pelas atividades angiogênicas e/ou quimiotáticas do látex tem um peso molecular de aproximadamente 35 kDa. No entanto, o WO2005/08932 não descreve um processo para isolá-lo.
[005] O pedido de patente internacional WO98/15300 refere-se a biomembranas úteis para substituição, reconstrução, indução de angiogênese, neoformação ou regeneração de tecidos e órgãos humanos e animais, em que as referidas biomembranas compreendem o produto da polimerização do látex natural como o constituinte principal. Contudo, o WO98/15300 não revela quaisquer proteínas específicas extraídas ou purificadas do látex de plantas lactíferas.
[006] A depositante verificou em suas pesquisas que uma determinada proteína de origem vegetal, de disponibilidade farta e fácil, portanto de baixo custo, induz angiogênese acelerada em tecido animal.
[007] Trata-se de uma proteína dimérica, presente no látex de certas plantas, particularmente no látex da Hevea brasiliensis, com peso molecular de cerca de 20 kDa (cada subunidade com peso molecular de aproximadamente 10 kDa), solúvel em soluções aquosas, estável em pH próximo a 4,5 em temperaturas de até cerca de 75°C. Sua ação sobre tecido afetado é a de prover cicatrização ou revascularização acelerada, auxiliando de forma eficaz o processo provido pelo corpo.
[008] Sem que se crie qualquer limitação à invenção, acredita-se que cada subunidade da proteína dimérica da invenção seja a isoforma de uma mesma proteína, de cerca de 100 aminoácidos.
[009] Outras fontes adequadas da proteína da invenção são plantas dotadas de látex, por exemplo guaiule, ficus, mangabeira, sorva, mamão, plantas euforbiáceas, etc. De maneira particular a fonte utilizada para obter a proteína da invenção é a Hevea brasiliensis. A proteína da invenção pode também ser sintética, sem qualquer conexão com sua origem vegetal.
[010] O homem da técnica não seria levado a pesquisar o assunto, uma vez que é conhecida de longa data a reação alérgica ao látex que parte da população tem, principalmente no uso de luvas cirúrgicas e preservativos sexuais.
[011] Uma vez sintetizada, ou purificada a partir de sua fonte natural, a proteína da invenção é utilizada como tal, ou sob qualquer forma farmacêutica adequada (tópica ou sistêmica), interna ou externamente ao corpo animal, particularmente corpo humano. Estão incluídos, sem qualquer limitação, cremes, pastas, unguentos, pomadas, loções, dispersões, emulsões, soluções, pós, sprays, líquidos injetáveis, comprimidos, tabletes, bolus, etc, com liberação imediata ou controlada. O homem da técnica sabe formular tais produtos, com os excipiente e veículos adequados à administração visada.
[012] Dentro de uma alternativa da invenção, estão contemplados usos da mencionada proteína em reconstrução de partes ou paredes de órgãos internos, por exemplo por aplicação direta da proteína aos ditos órgãos ou combinada com material estrutural, por exemplo polimérico (tal como filme de látex natural ou outro polímero sintético adequado), seja por substituição total ou parcial de órgãos, por exemplo, por via implantação de próteses.
[013] Dentro de outra alternativa da invenção, sem excluir qualquer outra, a proteína da invenção é utilizada em aplicações que contemplam efeitos cosméticos, e que beneficiam o usuário mesmo que não exposto a condições mórbidas, doenças ou disfunções orgânicas causadoras de feridas ou ruptura na continuidade do tecido animal (principalmente pele, paredes dos órgãos e mucosas). Nesse sentido faz-se referência ao uso da proteína da invenção em cicatrização de cortes ou traumas teciduais (raspagem, perfuração, etc), advindos de cirurgias plásticas, por exemplo para retirada de flacidez, rugas, papadas ou verrugas, além de produtos tópicos para rejuvenescimento, correção gengival, abrasão da pele (“peeling”), exposição excessiva à radiação solar, pele recentemente tatuada, recuperação de implante capilar, cortes estéticos nas orelhas ou caudas de cães com pedigree, etc.
[014] Os exemplos a seguir indicam de forma meramente ilustrativa alguns aspectos particulares da invenção, sem que por isso ela esteja de qualquer forma seja limitada por a eles. As limitações da invenção, como é bem sabido, estão estabelecidas nas reivindicações anexas.
[015] Látex natural fresco de Hevea brasiliensis foi coagulado e centrifugado, obtendo-se uma fração sólida inferior e um soro, qual seja, uma fração aquosa sobrenadante.
[016] Dito soro foi submetido a uma separação cromatográfica de troca iônica em uma coluna de dietilaminoetil-celulose (DEAE-celulose). As lavagens foram feitas com NaCl e a absorbância, ou densidade óptica, dos tubos retirados foi medida a 280 nm. Três picos principais foram identificados, como se pode ver na figura 1 anexa.
[017] Em cromatografia HPLC (“high performance liquid chromatography”) de fase reversa, como indicado na figura 2, amostra da fração do pico I revelou a presença da proteína dimérica da invenção (duas subunidades), com peso molecular total de cerca de 20kDa, sendo solúvel em soluções aquosas e estável em pH 4,5 em temperaturas de até cerca de 75°C.
[018] A geração de novos vasos sanguíneos é acompanhada em quase todos os estados por maior permeabilidade vascular. Assim, amostras das frações dos três picos anteriormente mencionados foram avaliadas quanto à atividade de aumento da permeabilidade vascular, com testes in vivo conforme Miles, A.A.; Miles, E.E., J. Physiol. 118, 228 (1952). O resultado revelou uma indução à angiogênese mais intensa pela fração do pico I, pelo maior volume de corante extravasado que para os demais picos - ou seja, indicando maior presença de indutor de angiogênese na fração do pico I.
[019] Seguindo-se a metodologia de Wilting, J. et. al. Anat. Embryol. 186, 251 (1991), foi determinada a atividade angiogênica sobre a membrana cório-alantóica (CAM) de embriões de galinha. Foram feitas aplicações com as frações correspondentes aos picos I, II e III, assim como com um controle de soro fisiológico, fotografando-se o resultado. As imagens obtidas foram tratadas com os softwares GIMP e IMAJEJ Q para quantificação relativa de vasos sanguíneos. A figura 4 mostra que a fração do pico I foi aquele que mais propiciou o aparecimento dos vasos.
[020] Os ensinamentos aqui trazidos, assim como os exemplos e os gráficos apresentados mostram ao homem da técnica exemplos ilustrativos da invenção, de forma que este possa efetuar variações de forma, mantendo função e resultados de mesma ordem de grandeza, sem no entanto se afastar do escopo da invenção determinado nas reivindicações anexas.
Claims (6)
1. COMPOSIÇÃO INDUTORA DE ANGIOGÊNESE ACELERADA, caracterizada por conter a proteína indutora de angiogênese acelerada, com atividade angiogênica, sendo uma proteína dímera ácida, de peso molecular de 20 kDa, um ponto isoelétrico de 4,25, solúvel em soluções aquosas, estável em pH próximo a 4,5, estável em temperaturas de até 75°C, em que dita proteína dímera compreende duas subunidades ligadas por pontes dissulfeto, cada subunidade compreendendo 100 aminoácidos, cada subunidade tendo um peso molecular de 10 kDa, e que é purificada a partir do látex de Hevea brasiliensis, e pelo menos mais um componente espessante selecionado do polietilenoglicol, em que a dita composição não é uma composição de látex natural.
2. USO DE UMA PROTEÍNA INDUTORA DE ANGIOGÊNESE ACELERADA, com atividade angiogênica, sendo uma proteína dímera ácida, de peso molecular de 20 kDa, um ponto isoelétrico de 4,25, solúvel em soluções aquosas, estável em pH próximo a 4,5, estável em temperaturas de até 75°C, em que dita proteína dímera compreende duas subunidades ligadas por pontes dissulfeto, cada subunidade compreendendo 100 aminoácidos, cada subunidade tendo um peso molecular de 10 kDa, e que é purificada a partir do látex de Hevea brasiliensis, caracterizado por ser na obtenção de composição utilizada em cicatrização de tecido corpóreo animal, particularmente tecido humano.
3. USO DE UMA PROTEÍNA INDUTORA DE ANGIOGÊNESE ACELERADA, com atividade angiogênica, sendo uma proteína dímera ácida, de peso molecular de 20 kDa, um ponto isoelétrico de 4,25, solúvel em soluções aquosas, estável em pH próximo a 4,5, estável em temperaturas de até 75°C, em que dita proteína dímera compreende duas subunidades ligadas por pontes dissulfeto, cada subunidade compreendendo 100 aminoácidos, cada subunidade tendo um peso molecular de 10 kDa, e que é purificada a partir do látex de Hevea brasiliensis, caracterizado por ser na obtenção de produtos voltados à reconstrução ou substituição de partes ou paredes de órgãos internos, bem como revascularização.
4. USO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por ser de forma direta ou associada com material estrutural polimérico, particularmente escolhido entre filme de látex natural ou polímero sintético.
5. USO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por ser para substituição total ou parcial de órgãos do corpo animal, sob forma de prótese.
6. USO DE UMA PROTEÍNA INDUTORA DE ANGIOGÊNESE ACELERADA, com atividade angiogênica, sendo uma proteína dímera ácida, de peso molecular de 20 kDa, um ponto isoelétrico de 4,25, solúvel em soluções aquosas, estável em pH próximo a 4,5, estável em temperaturas de até 75°C, em que dita proteína dímera compreende duas subunidades ligadas por pontes dissulfeto, cada subunidade compreendendo 100 aminoácidos, cada subunidade tendo um peso molecular de 10 kDa, e que é purificada a partir do látex de Hevea brasiliensis, caracterizado por ser na obtenção de produtos voltados a aplicações que contemplam efeitos cosméticos dentre: cicatrização de cortes ou traumas teciduais advindos de cirurgias plásticas, correção gengival, efeito de rejuvenescimento, abrasão de pele, exposição excessiva a radiação solar, pele recentemente tatuada, implante capilar, cortes estéticos em orelhas e caudas de animais.
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B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 24/11/2005, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO. |