BRPI0113085B1 - Preparation to be applied to a surface of an individual understanding ammonia oxidizing bacteria that metabolize transparation, and clothing article - Google Patents

Abstract

"composições que incluem bactérias que oxidam amônia para aumentar a produção de óxido nítrico e precursores de óxido nítrico, e métodos de uso dessas composições". a presente invenção refere-se a um método de aumento de saúde através da geração em estreita proximidade de uma superfície de um indivíduo de óxido nítrico e precursores de óxido nítrico usando bactérias adaptadas para oxidar amônia e uréia derivadas de transpiração. efeitos locais e sistêmicos são descritos, incluindo redução de doença vascular, aumento de função sexual, melhoria na saúde da pele e redução de transmissão de doenças sexualmente transmitidas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PREPARAÇÃO PARA SER APLICADA A UMA SUPERFÍCIE DE UM INDIVÍDUO COMPREENDENDO BACTÉRIAS QUE OXIDAM AMÔNIA QUE METABO-LIZAM TRANSPIRAÇÃO, E ARTIGO DE ROUPA".

Esse pedido reivindica prioridade para o Pedido Provisório dos Estados Unidos N° Série 60/224.598, depositado em 11 de agosto de 2000.

Campo da Invenção A presente invenção refere-se a uma composição que inclui bactérias que oxidam amônia para aumentar a produção de óxido nítrico e precursores de óxido nítrico na superfície de um indivíduo e a métodos de uso dessa composição.

Fundamento Bactérias benéficas foram utilizadas para suprimir o crescimento de bactérias patogênicas. Bactérias e outros micoorganismos são onipresentes no meio ambiente. A descoberta de bactérias patogênicas e a teoria de doença provocada por germes tem tido um extraordinário efeito na saúde e estados de doença. Bactérias são parte normal do conteúdo intestinal de todas as coisas vivas. Essas bactérias não são patogênicas sob condições normais, e, de fato, melhoram a saúde tomando o conteúdo intestinal normal menos hospitaleiro a organismos causadores de doenças. Isso se realiza de várias maneiras: nutrientes são consumidos, deixando menos nutrientes para agentes patogênicos; são produzidas condições, tais como pH, tensão de oxigênio, que não são hospitaleiras a agentes patogênicos; são produzidos compostos que são tóxicos a agentes patogênicos; agentes patogênicos são consumidos como alimento por esses microorganismos; permanece menos espaço físico disponível para agentes patogênicos; e sítios de ligação específicos são ocupados deixando menos sítios para agentes patogênicos. A presença dessas bactérias desejáveis é vista como útil na prevenção de estados de doença.

Fermentação de produtos alimentícios tem sido efetuada para substituir organismos de deterioração ou patogênicos potenciais por uma cepa não-patogênica desejada. Bebidas fermentadas, vinho, alimento em conserva, produtos fermentados derivados do leite, incluindo queijo, iogurte, soro de manteiga, salsicha, são todos exemplos onde microorganismos desejados são deliberadamente inoculados em produtos alimentícios sob condições que favorecem seu crescimento e inibem o crescimento de cepas de i deterioração e patogênicas. Patentes U.S. que descrevem o uso de bactérias específicas para inibir o crescimento de bactérias nocivas incluem: Patente U.S. N9 3.984.575, concedida a Farr, 5 de outubro de 1976; Patente U.S. Ns 4.689.226, concedida a Nurmi e outros, 25 de agosto de 1987; Patente U.S. N9 5.322.686, concedida a Grahn e outros, 21 de junho de 1994; i Patente U.S. N9 5.451.400, concedida a Stern e outros, 19 de setembro de 1995; Patente U.S. Ns 5.604.127, concedida a Nisbet e outros, 18 de fevereiro de 1997; e Patente U.S. N9 5.807.546, concedida a Stern e outros, 15 de setembro de 1998. A Patente dos Estados Unidos Ns 5.176.911, concedida a Tosi e outros, 5 de janeiro de 1993, descreve o uso de bactérias específicas recuperadas de pacientes saudáveis assintomáticos e caracterizadas em laboratório como uma aplicação tópica preventiva e curativa na área vaginal de mulheres sofrendo de infecções vaginais por lêvedo. A Patente dos Estados Unidos N9 5.534.253, concedida a Casas 1 e outros, 9 de julho de 1996, descreve a administração de uma cepa específica de Lactobacillus reuteri através de pulverização externa, incorporação na alimentação ou injeção em ovos, para produzir uma substância antibiótica identificada como .beta.-hidroxipropionaldeído. A Patente dos Estados Unidos N9 6.080.401, concedida a Reddy e outros, 27 de junho de 2000, descreve a adição de vários probióticos a drogas originárias de ervas e farmacêuticas para aumentar sua eficácia. O probiótico é selecionado do grupo que consiste de membros não-patogênicos do gênero Lactococcus, Lactobacillus, Pediococcus, Strepto-coccus, Propionibacteríum, Brevibacterium, Penicillium e Saccharomyces, e misturas dos mesmos. Nos exemplos, as bactérias são ingeridas juntamente com a droga ou usadas em uma preparação de limpeza de dentes.

Sumário A presente invenção refere-se a um método de suprimento de um composto de óxido nítrico a um indivíduo mediante posicionamento de bactérias que oxidam amônia em estreita proximidade com a superfície do indivíduo.

Uma outra modalidade da presente invenção refere-se a um artigo de pano tratado com bactérias adaptadas para metabolizar qualquer de amônia, sais de amônio ou uréia em óxido nítrico e/ou precursores de óxido nítrico. A presente invenção refere-se também a uma preparação para ser aplicada à superfície de um indivíduo a qual compreende bactérias que oxidam amônia adaptadas para metabolizar qualquer de amônia, sais de amônio ou uréia em óxido nítrico e/ou precursores de óxido nítrico.

Descrição Detalhada A presente invenção refere-se a uma composição que inclui bactérias que oxidam amônia para aumentar a produção de óxido nítrico e/ou precursores de óxido nítrico em estreita proximidade com a superfície de um indivíduo e a métodos de uso dessa composição. Mais especificamente, aplicação à pele de uma composição de bactérias que oxidam amônia durante ou após o banho para metabolizar uréia e outros componentes de transpiração em nitrito e finalmente em Óxido Nítrico (NO) resulta em uma fonte natural de N9 Um aspecto da presente invenção produz liberação de óxido nítrico tópico em ou próximo da superfície da pele, onde pode difundir-se para a pele e ter efeitos locais, bem como sistêmicos. Esse óxido nítrico naturalmente produzido pode então participar nos caminhos metabóli-cos normais através dos quais óxido nítrico é utilizado pelo corpo. Adição de uréia ou sais de amônio à pele proporciona substratos adicionais que essas bactérias utilizam para formar nitrito. Como usada nesta invenção, a expressão perto da superfície é definida como adjacente a ou em estreita proximidade com, mas não precisa estar em contato com a superfície. A invenção é compreendida mediante a percepção de que até o advento de água quente corrente e sabonete banho foi infreqüente. Sob es- sas condições (prevalecente por >99,9% do tempo histórico e pré-histórico) a pele teria desenvolvido uma comunidade natural de microorganismos adaptados ao ambiente da pele. Um componente abundante da transpiração humana é uréia. No solo, bactérias naturais atuam sobre uréia e hidrolisam-na a amônia, que é então oxidada a nitrito, seguido de oxidação rápida, por outras bactérias ainda, a nitrato. No solo, todos os compostos que contêm nitrogênio são finalmente degradados a nitrato. De fato, é nitrato que a maior parte das plantas absorve como sua fonte de nitrogênio. Sob condições de banho infreqüente, bactérias da pele que podem metabolizar uréia em nitrito desenvolver-se-iam e proliferariam. O nitrito resultante na pele quando ume-decido por transpiração adicional sob o pH normal de 4,5 do suor liberaria NO. O Óxido Nítrico é uma pequena molécula que se difunde rapidamente através da pele para os capilares da pele. Vasodilatação desses capilares ocorreríam, bem como difusão de NO para o sangue, onde ele poderá ser transportado para outras regiões do corpo. Dilatação dos capilares na superfície da pele aumenta o fluxo de sangue para a mesma, e, portanto, perda de calor da mesma durante períodos de exercício.

Doença cardíaca e outras doenças vasculares são uma causa significativa de morte no mundo desenvolvido. Doenças vasculares também causam significativas reduções na qualidade de vida daqueles atingidos. Recursos médicos significativos são dedicados a prevenção, tratamento e pesquisa das causas dessas formas de doença.

Exercícios têm sido há muito angariados como tendo efeitos protetores sobre o coração, o sistema vascular e a saúde em geral. Numerosos estudos e relatórios têm mostrado uma correlação inversa entre exercício e morte por doença cardíaca. Curiosamente os efeitos protetores de exercício no sistema vascular são às vezes vistos como sendo menores em níveis de atividade mais vigorosa. Esse efeito protetor diminuído de atividade física mais vigorosa não é observado em todos os estudos, mas tem sido observado tanto para doença cardíaca quanto para ataque cardíaco. Um estudo recente, "Physical Activity and Stroke Incidence The Harvard Alumni Health Study" ("Atividade Física e Incidência de Ataque Cardíaco - Estudo de Saúde em Alunos de Harvard"), de l-Min Lee e outros (Stroke. 1998; 29:2049-2054), mostrou uma curva em forma de U de incidência de ataque cardíaco versus intensidade de exercício. Caminhar foi também observado reduzir incidência de ataque cardíaco independentemente de outras formas de exercício. Os autores foram incapazes de explicar essas observações, nem foi ainda realizada uma explicação satisfatória dessas observações.

Taxas de morte devido a doença cardíaca freqüentemente mostram variação sazonal significativa. Um artigo recente "Seasonal Variation in Chronic Heart Failure Hospitalizations and Mortality in France" ("Variação Sazonal em Hospitalizações e Mortalidade por Insuficiência Cardíaca Crônica na França"), Fabrice Boulay, MD, e outros (Circulation. 1999; 100:280-286), mostra aumentos pronunciados de mortalidade durante os meses de inverno e declínios durante os meses de verão por um período de seis anos. Esse estudo, que cobriu toda a população da França, mostrou uma média mensal de pico em relação a janeiro que foi 20% acima da média anual. O mínimo mensal foi de 15% abaixo da média em agosto. Esse padrão é visível para cada ano incluído no estudo, mas nenhuma explicação satisfatória para esses dados é fornecida.

Dieta, fumo, exercício, controle de pressão sangüínea alta, ser casado, tipo de personalidade, fatores genéticos, infecções virais, consumo moderado de álcool são mostrados afetar as taxas de morte e doenças vasculares. Com tantos fatores sendo importantes, é muito difícil encontrar os controles apropriados para corrigir fatores conhecidos, bem como fatores confusos desconhecidos potenciais. Verifica-se que um outro fator, que é facilmente controlado, poderá explicar algumas das discrepâncias entre taxas diferentes de distúrbios vasculares.

Atividade física induz várias alterações fisiológicas. À medida que se aumenta o exercício físico, a taxa cardíaca e de respiração aumenta para fornecer combustível e oxigênio às células que produzem trabalho. Uma vez que essa produção de trabalho não é 100% eficiente, o calor meta-bólico também aumenta e tem de ser dissipado. O corpo aumenta a produ- ção de suor para dissipar esse calor através de resfriamento evaporativo.

Embora a medicina ocidental tenha se concentrado nos efeitos fisiológicos imediatos de exercício, a sudação intrinsecamente também tem patrocinadores. Elevação da temperatura ambiente, como em uma sauna, tem sido reivindicada ter efeitos salutares na saúde de uma pessoa. De fato, o uso de altas temperaturas para induzir sudação tem sido um componente comum de higiene pessoal em muitas culturas antes da introdução de sabonete e água corrente (quente). O hammam turco, a sauna finlandesa, a cabana de sudação dos nativos americanos, a bania russa e o temascal dos centro-americanos são todos exemplos do uso de alta temperatura para limpeza e higiene pessoais. Os banhos gregos e romanos são similares a registros escritos que datam do século V antes da era cristã. A explicação popular para os efeitos de tratamentos similares a sauna sobre a saúde tem sido a "descarga" de toxinas do corpo através do aumento de sudação.

Embora a medicina moderna tenha tido muitos progressos na compreensão da fisiologia humana, há ainda uma grande quantidade de questões que permanece inexplicada. Medicamentos e práticas tradicionais são freqüentemente uma fonte útil de compostos e procedimentos para testar propriedades medicinais. Assim, um método que aperfeiçoa a capacidade natural do corpo em regular e aumentar a formação e liberação de óxido ní-trico poderá ter amplos e significativos benefícios sobre a saúde.

Progressos na compreensão da interação de óxido nítrico com a fisiologia do sistema vascular humano têm sido feitos. Um progresso foi a descoberta pelos doutores Robert F. Furchgott, Louis J. Ignarro e Ferid Mu-rad de que Óxido Nítrico é um vasodilatador, que tem servido de base para a compreensão do mecanismo de ação de nitratos orgânicos, tal como nitro-glicerina, como vasodilatadores, e para novas drogas que aumentam o tempo de ação de NO endógeno, tal como Viagra. Óxido nítrico tem também estado envolvido como componente da defesa natural do corpo humano contra organismos causadores de doenças. Em um livro, "Nitric Oxide and Infection" ("Óxido Nítrico e Infecção"), Ferric C. Fang ed., Kluwer Academic/Plenum Publishers, 1999, descreve que numerosos organismos causadores de doenças provocam um aumento na produção de oxido nítrico pelo corpo. Evidência sugere que essa produção seja terapêutica, embora muito óxido nítrico esteja também envolvido em alguns estados de doença.

Variação circadiana no óxido nítrico tem sido inversamente associada a variação circadiana na pressão sangüínea. Indivíduos saudáveis exibem maiores níveis de NO, bem como maior variação circadiana, do que indivíduos com hipertensão essencial ou doença arterial oclusiva periférica. Ver "Role of Endogenous Nitric Oxide in Circadian Blood Pressure Regulati-on in Healthy Humans and in Patients with Hypertension Atherosclerosis" ("Papel do Óxido Nítrico Endógeno na Regulação de Pressão Sangüínea Circadiana em Humanos Saudáveis e em Pacientes com Aterosclerose por Hipertensão"), Bode-Boger SM e outros (J. Investig. Med., março de 2000; 48(2)125-32). Os efeitos de óxido nítrico no sistema vascular são descritos in "Nitric Oxide and the Regulation of the Perípheral Circuíation" ("Óxido Nítrico e a Regulação da Circulação Periférica"), Phillip J. Kadowitz e Dennis B. McNamara, editores, Birkhauser Boston, 2000, bem como in "The Haemo-dynamic Effects of Nitric Oxide" ("Os Efeitos Hemodinâmicos do Óxido Nítrico"), editado por Robert T. Mathie e Tudor M. Griffith, Imperial College Press, 1999.

Controle e regulação da geração e liberação de óxido nítrico poderão proporcionar um método para manter pressão sangüínea apropriada, tono vascular, propriedades de coagulação do sangue e um hospedeiro de outras funções corporais. Entretanto, óxido nítrico apresenta um tempo de vida curto em fluidos fisiológicos.

Hemoglobina pode reversível mente ligar-se a óxido nítrico para formar S-nitroso-hemoglobina. Esse composto forma-se em uma parte do corpo e é transportado pelo sangue para regiões de reduzida pressão parcial de oxigênio, onde se decompõe liberando óxido nítrico. O óxido nítrico causa então dilatação dos capilares onde o teor de oxigênio do sangue é baixo. Essa dilatação aumenta o fluxo de sangue àquelas áreas onde é necessário mais oxigênio, aquelas áreas com reduzido teor de oxigênio. Uma fonte co- nhecida de S-nitroso-hemoglobina são os pulmões. Óxido nítrico é produzido nas vias nasais e é absorvido nos pulmões melhorando a função dos pulmões ao aperfeiçoar a combinação de sangue e fluxo de ar. O óxido nítrico também tem efeitos na circulação periférica.

Sabe-se que gás óxido nítrico poderá ser administrado, e que ele é também gerado nas vias nasais durante inalação, o qual é aspirado pelos pulmões juntamente com ar inalado. Assim, óxido nítrico é absorvido nos pulmões onde se liga a hemoglobina e forma hemoglobina S-nitrosolada. Este é uma importante fonte de hemoglobina S-nitrosolada que produz efeitos sistêmicos no corpo. As seguintes patentes dos Estados Unidos apresentam vários efeitos fisiológicos da inalação de óxido nítrico: Patente N9 5.427.797, concedida a Frostell e outros, 27 de junho de 1995; Patente N9 5.765.548, concedida a Perry, 16 de junho de 1998; e Patente N9 5.904.938, concedida a Zapol e outros, 18 de maio de 1999.

Aplicação tópica de óxido nítrico é conhecida. A Patente dos Estados Unidos N9 5.519.020, concedida a Smith e outros, 21 de maio de 1996, descreve o uso de materiais que liberam óxido nítrico, colocados em estreita proximidade de feridas para aumentar a cicatrização através de uma variedade de mecanismos. Um material polimérico é usado para controlar a taxa em que óxido nítrico é liberado, porque óxido nítrico poderá ser tóxico e prejudicial em doses excessivas. A Patente dos Estados Unidos N9 5.646.181, concedida a Fung e outros, 8 de julho de 1997, descreve modificações tópicas que contêm compostos que liberam óxido nítrico orgânico, os quais quando aplicados topicamente liberam óxido nítrico em quantidades suficientes para tratar impotência sem produzir efeitos colaterais sistêmicos tal como hipotensão. A Patente dos Estados Unidos N9 5.648.101, concedida a Tawashi, 15 de julho de 1997, descreve produtos que liberam óxido nítrico através de reação de um nitrito inorgânico e um sal de metal ferroso. Esses produtos poderão ser ingeridos, aplicados topicamente, tomados como su-positórios, aplicados como emplastros transdérmicos e usados em bombas osmóticas. A Patente dos Estados Unidos N9 5.891.472, concedida a Rus-sell, 6 de abril de 1999, descreve o uso de doadores de óxido nítrico aplicados topicamente para o tratamento de laminite eqüina. A Patente dos Estados Unidos N9 5.895.658, concedida a Fossei, 20 de abril de 1999, descreve o uso de L-arginina aplicada topicamente, um substrato para a produção de uma forma de óxido nítrico de óxido nítrico sintase, para causar vasodilatação local da pele com a finalidade de produzir efeitos benéficos tais como aquecimento de tecidos gelados ou frios, crescimento de cabelo no couro cabeludo, cicatrização de úlceras nas pernas secundárias a diabetes ou confinamento à cama, bem como efeitos benéficos através de restauração de mecanismos naturais baseada na melhoria de suprimento local de sangue. A Patente dos Estados Unidos N9 5.958.427, concedida a Salzman e outros, 28 de setembro de 1999, descreve compostos que contêm doadores de óxido nítrico que não atravessam membranas mucosas, mas liberam óxido nítrico que atravessa a pele ou membranas mucosas e proporciona efeitos locais. Esses compostos poderão também ser aplicados topicamente à genitália para uso como um afrodisíaco ou aplicados na boca para uso como agentes antibacterianos. A Patente dos Estados Unidos Ns 6.056.966, concedida a Selim e outros, 2 de maio de 2000, descreve o uso de nitratos orgânicos tópicos que são doadores de óxido nítrico no tratamento de impotência masculina. Esses nitratos produzem os efeitos desejados sem efeitos sistêmicos indesejados, incluindo hipotensão.

Compostos que liberam óxido nítrico poderão também ser injetados no corpo de um indivíduo. A Patente dos Estados Unidos Ns 5.721.278, concedida a Garfield e outros, 24 de fevereiro de 1998, descreve o uso de inibidores de síntese de óxido nítrico para inibir ovulação, e o uso de precursores de óxido nítrico para ocasionar ovulação. A Patente dos Estados Unidos 5.800.385, concedida a Demo-pulos e outros, 1 de setembro de 1998, descreve soluções que incluem doadores de óxido nítrico para irrigar os sítios de feridas operatórias. Os doado- res de óxido nítrico poderão ser incluídos nas soluções para sua atividade antiespasmódica. A Patente dos Estados Unidos 5.858.017, concedida a Demo-pulos e outros, 12 de janeiro de 1999, descreve o uso de soluções que contêm entre outras coisas doadores de óxido nítrico em soluções de irrigação urológicas. A Patente dos Estados Unidos 5.861.168, concedida a Cooke e outros, 19 de janeiro de 1999, descreve a aplicação intramural de precursores de óxido nítrico durante angioplastia coronariana com balão para reduzir espessamento dos vasos tratados e melhorar a tolerância ao procedimento de angioplastia.

Sabe-se usar óxido nítrico para tratar uma variedade de condições. A Patente dos Estados Unidos N9 5.278.192, concedida a Fung e outros, 11 de janeiro de 1994, descreve o uso de nitratos orgânicos para tratamento contínuo de condições que incluem angina, particularmente crônica, angina do peito estável, doenças isquêmicas, insuficiência cardíaca conges-tiva, para controlar hipertensão e/ou impotência em pacientes masculinos. Esses nitratos orgânicos poderão ser administrados de várias maneiras, incluindo comprimidos sublinguais, orais e bucais, bem como cápsulas, cremes e pomadas tópicos, emplastros, fitas, sprays e soluções intravenosas. A Patente dos Estados Unidos Ns 5.385.940, concedida a Moskowitz, 31 de janeiro de 1995, descreve a administração de doadores de óxido nítrico ou L-arginina para atuar como substrato de óxido nítrico sintase durante um ataque cardíaco para aumentar a produção de óxido nítrico e causar desse modo vasodilatação para reduzir o tamanho do infarto. A Patente dos Estados Unidos NQ 5.632.981, concedida a Saa-vedra e outros, 27 de maio de 1997, descreve polímeros que contêm compostos que liberam óxido nítrico ligado. A Patente dos Estados Unidos 5.645.839, concedida a Chobani-an e outros, 8 de julho de 1997, descreve o uso de doadores e precursores de óxido nítrico combinados com angiotensina que convertem inibidores de enzima para suprimir e reverter fibrose no corpo, onde a fibrose é associada a um distúrbio selecionado do grupo que consiste de fibrose cardiovascular, distúrbios arterioscleróticos, fibrose pulmonar, síndrome da dificuldade respiratória em adulto, distúrbios inflamatórios, esclerodermia, cirrose, quelóides e cicatrizes hipertróficas. A Patente dos Estados Unidos N2 5.648.393, concedida a Sta-mler e outros, 15 de julho de 1997, descreve o uso de compostos S-nitrosilados para tratar impotência. A Patente dos Estados Unidos NQ 5.650.447, concedida a Keefer e outros, 22 de julho de 1997, descreve o uso de polímeros que contêm compostos que liberam óxido nítrico ligado para tratar restenose quando incorporados em dispositivos tais como suturas, implantes vasculares, sondas, válvulas cardíacas, bombas para medicamentos, cateteres que transportam medicamento, dispositivos auto-aderentes tais como implantes endolumi-nais, lipossomos, micropartículas, microesferas, contas, discos ou outros dispositivos. A Patente dos Estados Unidos Ns 5.789.447, concedida a Wink, Jr. e outros, 4 de agosto de 1998, descreve um método de redução de dano a tecido induzido por meio de radicais livres associado a dano por reperfu-são isquêmica, onde o dano por reperfusão isquêmica é associado a uma condição ou doença selecionado do grupo que consiste de transplante, trauma, inflamação, insulto, ataque apoplético, artrite reumatóide, ateroscle-rose, câncer, demência, diabetes, crise hipertensiva, úlceras, lúpus, anemia das células falciformes, síndrome isquêmica dos intestinos, embolia pulmonar, síndrome de Bali, pancreatite, ataque cardíaco e envelhecimento. A Patente dos Estados Unidos N2 5.814.666, concedida a Green e outros, 29 de setembro de 1998, descreve o uso de compostos que liberam óxido nítrico como agentes antimicrobianos. A Patente dos Estados Unidos N2 5.910.316, concedida a Keefer e outros, 8 de junho de 1999, descreve o uso de um agente de liberação de óxido nítrico diretamente aplicado ao pênis através de dispositivo de transporte que é selecionado do grupo que consiste de um aplicador trans-uretral, um implante peniano, um emplastro dérmico e um preservativo. A Patente dos Estados Unidos Ns 6.057.367, concedida a Sta-mler e outros, 2 de maio de 2000, descreve o uso de uma variedade de métodos para manipular tensão nitrosativa.

Esses métodos incluem o uso de nitrito acidificado como solução bucal e uma mistura de nitrito acidificado mais um tiol como aplicação tópica. S-nitrosotiol poderá ser aplicado topicamente ou formado in situ a partir de um nitrito inorgânico, um ácido farmacologicamente aceitável e um tio. Micróbios partenogênicos poderão também converter substratos em agentes nitrosantes que inibem o crescimento dos micróbios partenogênicos.

No livro "Nitric Oxide and Infection" (“Óxido Nítrico e Infecção"), Ferric C. Fang ed., Kluwer Academic/Plenum Publishers, 1999, em um capítulo intitulado "Nitric Oxide and Epithelial Host Defense" ("Óxido Nítrico e Defesa por Hospedeiro Epitelial"), de Nigel Benjamin e Roelf Dykhuizen, os autores discutem suas descobertas da produção de óxido nítrico na pele, da importância desse fato no controle de infecções normais e de sua descoberta de que uma pomada contendo nitrito acidificado é eficaz no tratamento de tinea pedis (pé de atleta). Eles atribuem a produção normal de nitrito na pele à redução de nitrato do suor a nitrito por bactérias na pele. Muitas bactérias heterotróficas reduzirão nitrato a nitrito, por exemplo E. coli. Essas bactérias são anaeróbios facultativos que normalmente utilizam oxigênio como fonte de elétrons para sua respiração celular, mas podem também utilizar nitrato na ausência de oxigênio. Todas essas bactérias utilizam substratos orgânicos para energia e crescimento e muitas dessas bactérias podem ser patogênicas. Na boca, nitrato salivar é reduzido por esses anaeró-bios facultativos. Essas bactérias que reduzem nitrato são mantidas anaeró-bicas pelas camadas de biopelícula que se acumulam na língua. Uma vez que se espera que a superfície da pele seja aeróbica, a redução de nitrato a nitrito deve ser menor. Embora algum óxido nítrico possa ser produzido através de redução bacteriana de suor, o teor de uréia do suor é muito maior do que aquele de nitrato. Encontra-se uma fonte mais significativa que é mais fácil e seguramente estimulada, que é a utilização de uréia do suor para formar nitrito através de bactérias que oxidam amônia e uréia.

Nitrato na dieta é rapidamente absorvido e é concentrado pelo corpo na saliva. Na boca, bactérias facultativamente anaeróbicas na língua metabolizam nitrato para formar nitrito. A saliva contém nitrito significativo e estudos mostram que quando a pele é lambida esse NO é liberado. Acredita-se que esse NO tem efeitos antimicrobianos e vasodilatadores. A liberação de NO é a racionalização quanto ao que animais (e humanos) lambem feridas para aumentar a cicatrização. Similarmente, um remédio popular comum para impotência é o uso de saliva diretamente aplicada ao pênis, onde liberação de NO induziría e prolongaria a ereção.

Em seu capítulo, Benjamin e Dykhuizen, ao discutirem o papel que nitrito salivar tem na redução de enfermidades transportadas por alimentos, salientam que no estômago cloreto está presente em alta concentração e catalisará reações de nitrosação para formar intermediários reativos adicionais que poderão adicionar-se à toxicidade de nitrito acidificado. Na pele, a concentração de cloreto pode atingir aquela de uma solução salina saturada, níveis muito maiores do que podem ser atingidos no estômago. O banho tem como um de seus principais objetivos remover bactérias da pele. Embora bactérias patogênicas sejam indesejáveis, todas as bactérias não são patogênicas. Progressos recentes nas formulações de sabonetes incluem a adição de agentes antimicrobianos de amplo espectro aos sabonetes. Banho tem reduzido grandemente a incidência de doenças transportadas pela água tais como cólera e várias doenças de diarréia. Poderá ocorrer que remoção de todas as bactérias tenha o efeito indesejado de remoção das bactérias naturais que produzem nitrito, que o corpo desenvolveu para utilizar fisiologicamente.

Com isso em mente, vários aspectos curiosos da fisiologia humana podem ser compreendidos. As áreas do corpo que têm mais necessidade de cicatrização rápida, controle de infecção e portanto de produção de NO são pés, mãos, couro cabeludo e área genital, que são as partes do corpo onde a transpiração é mais abundante, mesmo quando não precisam de resfriamento. Isso poderá ocorrer porque há uréia, cloreto e ferro na transpiração, e porque a transpiração tem um baixo pH.

Sauna e outros tipos de banhos de suor podem ser vistos como maneiras de aumentar a produção de nitrito e NO na pele. O uso moderno da sauna como parte de um ritual de banho que envolve lavagem com sabonete e água corrente não atingiría tal resultado e tem sido praticado apenas desde o século XIX. Uréia e nitrito são muito solúveis em água e seriam completamente lavados de forma imediata. Quando o hábito de sauna desenvolveu-se inicialmente há mais de 2000 anos, não havia água quente corrente, de modo que a pele reteria a uréia e o nitrito solúveis, e sem sabonete as bactérias também seriam retidas.

Um outro hábito, o uso de um espanador, um feixe de ramos de vidoeiro usado para bater suavemente na pele, pode ser visto como um método de inocular a pele com bactérias presentes no espanador. Entre usos, o espanador secaria completamente e as bactérias sobreviventes se tornariam necessariamente adaptadas para viver em resíduos de transpiração sob condições razoavelmente secas, o estado natural da pele humana. O advento da teoria dos germes e a necessidade observada de condições higiênicas assépticas modificaram o uso desses dispositivos até onde provavelmente não servem mais a essa função original.

Os efeitos benéficos da sudação à saúde podem ser vistos como derivando do aumento de produção e liberação de NO na pele, em vez de devido a remoção de sujeiras. A transpiração como um método de remoção de sujeira parecería ser um método não-intuitivo e ineficaz. A maior parte da sudação ocorre durante períodos de alta carga metabólica, que parecería ser um momento inoportuno para usar qualquer capacidade metabólica para livrar o corpo de produtos de sujeira. De fato os rins param sob condições de débito cardíaco insuficiente. A produção de suor pode variar grandemente de dia para dia, hora para hora e de minuto para minuto. Acúmulo de sujeiras como antecipação de eventos episódicos de sudação parecería ser uma alocação pobre de recursos. Sudação nervosa que ocorre como antecipação de eventos de grande tensão poderá ser a maneira de o corpo preparar-se para um evento de grande tensão. Umedecimento da pele com transpiração liberaria NO do nitrito recentemente gerado e acumulado que atuaria então como um vasodilatador, o que poderá aumentar o fluxo sanguíneo e preparar o corpo para responder eficientemente ao estressor. Nitratos orgânicos tal como nitroglicerina são freqüentemente prescritos para exatamente uso antes de tensão física ou emocional para obter imediatamente essa vasodi-latação.

Sudação pode então ser vista como a solução para distúrbios da pele, em vez de causa. Se o teor de bactérias na pele que oxidam amônia e uréia fosse restaurado a níveis pré-industriais, por conseguinte áreas do corpo com sudação profusa também apresentariam produção profusa de nitrito e NO e se esperaria cicatrizarem mais rapidamente, resistirem melhor a infecção e se encontrarem em um estado geral melhor de saúde. Na ausência dessas bactérias, o que acontece ser crescimento relativamente lento, outras bactérias heterotróficas de crescimento mais rápido hidrolisariam uréia a amônia livre que é bastante tóxica e irradia-se para a pele. É desse modo que a ausência das bactérias apropriadas que produzem resíduos de transpiração torna-se irritante. Oxidação de amônia a nitrito ou nitrato baixa o pH e converte qualquer amônia livre remanescente no íon amônio menos tóxico.

Após formação na pele, óxido nítrico poderá difundir-se para os capilares da pele e ser absorvido pelo sangue. Os capilares da pele poderão dilatar-se em resposta, e algum óxido nítrico poderá ser absorvido por hemoglobina para formar S-nitroso-hemoglobina que circulará através do corpo e terá efeitos sistêmicos.

Uma região da pele que é fina e possui capilares sangüíneos em abundância é a pele da cabeça e do couro cabeludo. A presença de cabelo na cabeça é freqüentemente racionalizada como limitação a perda de calor. Mas surpreende que o couro cabeludo tenha cabelo para impedir perda de calor enquanto o resto do corpo permanece essencialmente sem pêlo. Há significativa perda de calor da cabeça, possivelmente como resultado de a pele do couro cabeludo ser fina de modo a permitir a rápida difusão de óxido nítrico para o sangue. O sangue do couro cabeludo liga-se com aquele do cérebro antes de entrar no coração e pulmões. O suprimento de sangue do cérebro está entre os mais críticos do corpo e mostra pouca variação mesmo durante períodos de extrema tensão metabólica. Combinação de sangue que apresenta baixa tensão de oxigênio do cérebro com sangue que apresenta um alto teor de óxido nítrico do couro cabeludo poderá ser um uso eficiente do óxido nítrico assim produzido. Porque óxido nítrico poderá também ser liberado para o ar em torno da cabeça e do rosto, onde ar é aspirado durante respiração em estreita proximidade com uma fonte de óxido nítrico, a concentração de óxido nítrico aumentaria no ar inspirado. Os padrões diferentes de pêlo facial observados entre homens e mulheres poderão derivar de padrões diferentes de pico de atividade metabólica, homens durante caça e combate e mulheres durante gravidez, trabalho e parto. Do mesmo modo que óxido nítrico inalado é protetor de hemorragia pulmonar em cavalos, óxido nítrico liberado por bactérias em pêlo facial poderá facilitar maiores níveis de esforço físico.

Muitas das veias do couro cabeludo drenam do crânio para os sinos vasculares no cérebro. As artérias que trazem sangue para o cérebro atravessam esses mesmos sinos. Esse contato poderá ocorrer de modo que óxido nítrico possa difundir-se do sangue venoso que deixa o couro cabeludo para o sangue arterial que entra no cérebro. Essa difusão ajudaria a explicar o efeito protetor de exercício moderado sobre insulto. Suor na cabeça reduziría então a resistência vascular no cérebro. Pêlo pode ser visto como material de isolamento, mas também como uma superfície em que bactérias que oxidam amônia poderão proliferar. Pêlo poderá também ser um material absorvente para impedir que suor se perca e poderá também proporcionar um microclima adequado para as bactérias que oxidam amônia. Suor nervoso é mediado através do caminho adrenérgico e tipicamente estimula suor na cabeça e no pescoço.

Sudação para fins de não-resfriamento pode ser vista como uma maneira natural de o corpo aumentar a produção de óxido nítrico. O organismo causador da malária é afetado por óxido nítrico, e quando inibidores de óxido nítrico sintase são dados a animais com malária, a mortalidade aumenta. A sudação excessiva que é um dos sintomas de malária (e de muitas outras infecções) pode ser vista como um dos mecanismos naturais que aumentam a produção de óxido nítrico no corpo. O suor humano apresenta uma alta concentração de ácido lácti-co. Isso situa o pH normal do suor na faixa de 4,5, onde nitrito rapidamente se decompõe para liberar N9 O suor também contém ferro abundante. Um quarto do ferro ingerido é excretado no suor. Sabe-se bem que ferro coordena-se com NO e forma complexos ferro-nitrosila. Óxido nítrico também reage com superóxido para formar peroxinitrito. Em solução aquosa, o ferro catalisa reações de peroxinitrito com outros compostos para formar produtos tóxicos. A presença de ferro abundante e nitrito na pele poderá ser a primeira linha de defesa contra infecções na pele.

Porque as camadas externas de pele não são vivas, limpeza e cura dessas camadas mortas com óxido nítrico antes de mudança das mesmas não devem ter efeitos prejudiciais sobre a saúde. Na verdade, dependendo das bactérias para produção de nitrito e portanto da produção de NO, nenhuma parte viva do corpo precisa ser exposta a altos níveis de nitrito ou óxido nítrico ou produtos tóxicos da reação de N9 Os níveis podem ser atingidos na pele, o que seria prejudicial a tecidos vivos. Essa poderá ser uma maneira muito eficaz de evitar infecções na pele e poderá ser o sistema que humanos desenvolveram para utilizar na ausência de banho freqüente. O efeito de exercício em doença vascular pode também ser visto sob uma nova luz. Atividade moderada é tanto exercício quanto uma maneira de, através de indução de transpiração, aumentar a produção de N9 Atividade vigorosa produz também isso, mas se a sudação é suficientemente profusa, o banho é geralmente efetuado após o exercício. Lavagem da transpiração remove o efeito protetor dessa produção de N9 Isso explica o efeito protetor reduzido de exercício vigoroso quando comparado com exercício moderado observado em alguns estudos. O efeito protetor de exercício é aumentado, mas o efeito protetor de NO é reduzido por banho. Isso poderá indicar que o efeito benéfico à saúde de NO derivado de bactérias na pele é, pelo menos em algumas pessoas, de magnitude comparável àquela de exercício.

Incidência reduzida de doença cardíaca no verão poderá ser devido ao aumento de quantidade e tempo em que suor permanece na pele. Pelo fato de que bactérias que oxidam amônia são de crescimento lento, elas podem facilmente ser lavadas completamente mais rápido do que podem proliferar. Sendo esse um padrão anual que pode ser observado na incidência de doença do coração, ele é forte evidência de que esse efeito é substancial.

Nitrito pode ser gerado de diversas maneiras por bactérias. A primeira é pela oxidação de amônia ou uréia. Essa é a primeira etapa necessária na nitrificação de amônia no solo. Bactérias autotróficas específicas utilizam essa oxidação de amônia para atender a todas as suas necessidades de energia metabólica. Um segundo tipo de bactérias autotróficas utiliza esse nitrito e o oxida adicionalmente a nitrato e utiliza essa energia para seu metabolismo. Outras bactérias que incluem bactérias heterotró-ficas podem utilizar nitrito para oxidar outros compostos enquanto reduzem o nitrato a nitrito. Em um pH de ou abaixo de 5,5, nitrito se decompõe liberando NO. A reduzida incidência de doença cardíaca poderá ser devido a óxido nítrico derivado da redução bacteriana de nitrato ou à geração bacteri-ana de nitrito a partir de amônia ou uréia. Espera-se que bactérias autotróficas apenas proliferem se há um longo intervalo entre banhos, semanas ou mais, de modo que muitas das diferenças observadas de incidência são provavelmente devidas a óxido nítrico derivado de nitrato de suor. Entretanto, o uso de bactérias que oxidam amônia na presente invenção permitiría níveis mais altos e maiores efeitos na saúde vascular.

Processos similares são usados para gerar óxido nítrico que é usado na cura de carne. Propriedades gerais do óxido nítrico, propriedades fisiológicas, propriedades químicas e seu papel e mecanismo de ação na preservação de alimentos são bem descritos no livro "Nitric Oxide Principais and Actions" ("Princípios e Ações do Óxido Nítrico"), editado por Jack Lan-dcaster, Jr., Academic Press, 1996. Bactérias heterotróficas, para atingir um baixo pH e produzir nitrito a partir de nitrato, são comumente usadas na pre- servação de came, onde nitrato em uma salmoura de conserva é reduzido a nitrito, liberando NO que reage com a carne para produzir a cor e o aroma característicos de carne curada. Na preservação de carne, essas bactérias são adicionadas como cultura pura onde elas retardam o desenvolvimento indesejável de bactérias de doença e de deterioração. Micrococcus varians é às vezes usado com essa finalidade conforme descrito in Patente U.S. N9 4.147.807, concedida a Gryczka e outros. Não se esperaria que essas bactérias, como componente normal de alimento, causassem quaisquer efeitos adversos à saúde quando aplicadas à pele ou quando acidentalmente ingeridas. Aplicação dessas bactérias à pele aumentaria a produção de óxido nítrico na pele através da redução de nitrato a nitrito. Algumas bactérias he-terotróficas podem produzir nitrito a partir de amônia, mas sua oxidação de amônia é substancialmente mais lenta do que aquela dos oxidantes autotró-ficos iitotróficos de amônia.

No meio ambiente, amônia e uréia são oxidadas a nitrito por Ni-trosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosocystis, Nitrosolobus e Nitro-sovibrio. Essas bactérias são todas bactérias litotróficas gram-negativas que utilizam dióxido de carbono como sua principal fonte de carbono. No meio ambiente, nitrito é oxidado a nitrato por Nicrobactere Nitrocystis. Nitrosomo-nas é o tipo mais abundante desses tipos no solo e se esperaria ser o tipo mais abundante em pele normal. Essas bactérias são autótrofos, isto é, elas não utilizam carbono orgânico para energia, embora algumas possam assimilar carbono orgânico em um grau limitado que pode estimular crescimento. Toda a energia metabólica é obtida da oxidação da espécie que contém nitrogênio. A maior parte do carbono deriva da fixação de dióxido de carbono que utiliza essa energia. Porque essas bactérias precisam apenas de amônia, oxigênio, minerais inorgânicos e dióxido de carbono, espera-se que elas sejam completamente não-patogênicas. A única parte do corpo onde todas essas substâncias são disponíveis é o exterior da pele. Elas são de crescimento lento quando comparadas a outras bactérias. Onde E. coli apresenta um tempo de duplicação ótimo de 20 minutos, Nitrosomonas apresenta um tempo de duplicação ótimo de 10 horas. Porque èlas não utilizam glicose ou compostos orgânicos, elas são difíceis de cultivar e não crescem nos meios padrões usados para isolar agentes patogênicos, que utilizam substratos orgânicos para energia e crescimento. Algumas cepas podem também utilizar uréia díretamente.

Essas bactérias autotróficas que oxidam amônia podem ser estimuladas aplicando à pele nutrientes necessários a essas bactérias, tais como aqueles nutrientes encontrados nos meios de cultura padrões da Coleção de Culturas Tipo Americano, incluindo ATCC 1953, ATCC 928, ATCC 1573, ATCC 221, ATCC 929, incluindo, por exemplo, uréia, sais de amônio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, fosfato, cloreto, sulfato, sais minerais em traços, incluindo ferro, cobre, zinco, cobalto, manganês, molibdênio e tampões. Aplicação de uma preparação ou solução que compreende alguns ou todos esses nutrientes à pele e couro cabeludo estimularia as bactérias autotróficas que ocorrem naturalmente, formando nitrito e óxido nítrico sem estimular bactérias heterotróficas.

Nitrobacter são inibidas por pH elevado e por amônia livre. No solo isso pode conduzir à acumulação de nitrito no solo, o qual é bastante tóxico quando comparado a nitrato. Na pele, adição de um agente alcalino elevaria o pH e inibiría a oxidação de nitrito permitindo o desenvolvimento de maiores concentrações. Assim, o uso de um composto alcalino poderia servir para aumentar a concentração de nitrito. Talco, embora sendo com frequência essencial mente neutro, contém carbonatos de cálcio e magnésio como impurezas. Pequenas quantidades dessas poderão por conseguinte tornar a pele alcalina quando seca, mas após sudação o pH cai ria e o aumento de nitrito seria disponível para conversão em N9 Bactérias inibidoras tais como Nitrobacter que reduzem a concentração de nitrito na pele é um método útil para aumentar adicional mente a liberação de óxido nítrico. Alternativamente, Nitrobacter poderíam ser incluídas, o que elevaria então a produção de nitrato. Por conseguinte, podem ser usadas outras bactérias que utilizam esse nitrato e os outros compostos orgânicos da pele humana para formar nitrito.

Bactérias que são úteis nesse sentido são bactérias que meta- bolizam os constituintes normais da transpiração humana em precursores de NQ Estes incluem, por exemplo, uréia a nitrito, uréia a nitrito, nitrato a nitrito, uréia a amônia, nitrito a nitrato e amônia a nitrito. Em alguns casos, é preferida uma cultura mista. As bactérias podem convenientemente ser aplicadas durante ou após o banho e podem ser incorporadas em vários sabonetes, pós tópicos, cremes, aerossóis, géis e pomadas. Um aspecto da invenção contempla aplicação a partes do corpo que transpiram mais, tais como, por exemplo, mãos, pés, área genital, área sob os braços, pescoço e couro cabeludo. A principal diferença entre essas áreas diferentes da pele é a atividade da água. A pele das mãos é muito mais seca do que a dos pés, normalmente coberta com meias e sapatos, devido ao aumento de exposição das mãos aos efeitos de secagem do ar ambiente. Considera-se que diferentes cepas de bactérias poderão funcionar melhor em áreas diferentes do corpo, e uma cultura mista de todos os tipos permitiría àquelas que crescem melhor proliferar e aclimatar-se, e tomar-se a cultura dominante presente em uma área específica. Roupa poderá também ser usada para alterar o micro-clima local para facilitar o crescimento das bactérias desejadas. Por exemplo, o uso de um chapéu poderá estimular cabelo denso e ajudar a manter o couro cabeludo em um ambiente mais quente e mais úmido.

Porque um ambiente normal à pele é relativamente seco, bactérias adaptadas a ambientes com baixa tensão de água são vantajosas. Um exemplo de bactérias que oxidam amônia moderadamente halófilas é Nitro-sococcus mobillis descrita por Hans-Peter Koops e outros (Arch. Microbiol. 107, 277-282 (1976)). Essa bactéria possui uma ampla faixa de crescimento. Por exemplo, embora o pH ótimo para crescimento seja de 7,5, sob pH 6,5 ela ainda cresce sob 33% de sua taxa máxima. Uma outra espécie mais ha-lófila, Nitrosococcus halophillus descrita por Η. P. Koops e outros (Arch. Microbiol. (1990) 154:244-248), foi isolada de soluções salinas saturadas em um lago de sal natural. Nitrosococcus oceanus (ATCC 1907) é halófila, mas apresenta uma concentração de sal ótima intermediária entre as outras duas. As concentrações ótimas de NaCI para as três são 200, 700 e 500 mM de sal, respectivamente. N. oceanus, contudo, utiliza uréia e tolera concen- trações de amônia tão altas quanto 1.100 mM como cloreto de amônio. Embora crescimento sob condições ótimas seja o mais rápido, resultados similares poderão ser obtidos usando mais bactérias. Desse modo, embora o pH ótimo para crescimento de N. mobillis seja de 7,5, pode-se atingir a mesma produção de nitrito usando três vezes outras tantas bactérias sob pH 6,5. Porque as quantidades de bactérias na presente invenção poderão ser grandes, várias ordens de magnitude maiores do que aquelas que ocorrem dentro de 24 horas de banho, o fato de que o pH da pele não é ótimo para essas bactérias não é uma inibição ao seu uso. Porque N. halophillus foi isolada de uma solução salina saturada, ela deve facilmente sobreviver no ambiente da pele humana relativamente mais úmido.

Algumas bactérias produzem oxido nítrico diretamente. Um exemplo é descrito in "Production of nitric oxide in Nitrosomonas europaea by reduction of nitrite", de Armin Remde e outros (Arch. Microbiol. (1990) 154:187-191). N. europaea, bem como Nitrosovibrio, foram demonstradas produzir óxido nítrico diretamente. Nitrosovibrio é freqüentemente verificado crescer em rocha onde o ácido gerado causa corrosão. Foi sugerido por Poth e Focht, "Dinitrogen production from nitrite by a Nitrosomonas isolate" (Appl. Environ. Microbiol. 52:957-959), que essa redução de nitrito a óxido nítrico volátil é usada como um método para o organismo eliminar o nitrito tóxico do meio ambiente onde o organismo está crescendo, tal como a superfície de uma rocha.

Quaisquer bactérias que oxidam amônia poderão ser usadas na presente invenção. Em uma modalidade preferida, as bactérias que oxidam amônia poderão apresentar as seguintes características como são prontamente conhecidas no estado da técnica: capacidade de metabolizar rapidamente amônia e uréia a nitrito e outros precursores de NO; não-patogênicas; não-alérgicas; não produtoras de compostos odoríferos; não-produtoras de compostos malcheirosos; capacidade de sobreviver e crescer em suor humano; capacidade de sobreviver e crescer sob condições de alta concentração de sal; e capacidade de sobreviver e crescer sob condições de baixa atividade de água.

Podem ser usadas bactérias naturais, bem como bactérias cujas características foram alteradas através de técnicas de engenharia genética. Técnicas de cultura de bactérias podem ser usadas para isolar cepas com as características acima. Uma mistura de cepas puras evitaria os problemas associados a simples cultura de bactérias da pele, o que inclui o crescimento potencial de agentes patogênicos e outras bactérias que apresentam características indesejáveis. No entanto, cultura de bactérias da pele e crescimento das mesmas em meio de crescimento que a simule a composição da transpiração humana poderá também ser eficaz em aumentar a taxa de produção de óxido nítrico. Um método útil para cultivar e isolar tais bactérias é crescê-las em meios que contêm uréia e amônia mais sais minerais, mas sem os compostos orgânicos que bactérias heterotróficas utilizam, tais como açúcares e proteínas. Quando do isolamento de bactérias autotróficas que oxidam amônia e bactérias que oxidam amônia, poderá também ser desejável tentar crescê-las em um meio heterotrófico para verificar se a cepa auto-trófica não está contaminada com bactérias heterotróficas. A Patente dos Estados Unidos N9 4.720.344, concedida a Ganczarczyk e outros, 19 de janeiro de 1988, descreve a operação de uma instalação de tratamento de água de rejeitos sob condições que maximizam a conversão de amônia a nitrito, enquanto se minimiza a conversão do nitrito resultante a nitrato. Isso é efetuado utilizando condições que conduzem ao crescimento de Nitrossomonas, mas não a Nitrobacter. Isso é efetuado mais preferencialmente ajustando o pH e o teor de amônia da água de rejeitos em níveis que conduzem ao crescimento de Nitrossomonas, mas não a Nitrobacter, e em seguida ajustando os tempos de retenção hidráulica nas câmaras de contato em menos do tempo de recuperação das bactérias inibidas. A Patente dos Estados Unidos N9 5.314.542, concedida a Cas-sidy e outros, 24 de maio de 1994, descreve o crescimento e tratamento de culturas bacterianas de Nitrossomonas para permitir vida de prateleira prolongada em um estado latente e tratamento subsequente para produzir rápida recuperação de atividade metabólica. A Patente dos Estados Unidos N9 5.139.792, concedida a Ware e outros, 18 de agosto de 1992, descreve um método de distribuir bactérias específicas em alimentação animal e água potável sem agitação para manter as bactérias em suspensão.

Um método análogo de tratamento de culturas de bactérias que oxidam amônia é também útil na presente invenção, onde bactérias que oxidam amônia são crescidas em um meio, concentradas e separadas do meio, suspensas em água estéril com a concentração de sal apropriada, armazenadas sob condições assépticas, revivendo as bactérias através de adição de amônia, e em seguida aplicadas à pele. Métodos de isolamento de bactérias úteis adequadas para colonização de pele humana são análogos a métodos usados para o isolamento de bactérias adequadas para colonização de sistemas digestivos de gado. Raspagens são coletadas de indivíduos saudáveis, inoculadas em meio adequado, crescidas e caracterizadas. Métodos contínuos de cultura em estado estacionário podem ser utilizados para assegurar estabilidade da cultura com o tempo.

Um método útil de tratamento de culturas de bactérias que oxidam amônia, juntamente com as linhagens de Cassidy e outros, in Patente U.S. Ne 5.314.542, é aquele onde bactérias que oxidam amônia são crescidas em um meio, concentradas e separadas desse meio, suspensas em água estéril com a concentração de sal apropriada, armazenadas sob condições assépticas, revividas através de adição de amônia e retidas por um período de tempo para as bactérias se tornarem ativas. Cassidy e outros utilizam sua cultura de bactérias e método de armazenamento para bactérias usadas para controle de amônia em aquários. Um método similar de crescimento e tratamento de bactérias pode ser usado para produzir bactérias que podem então ser utilizadas na presente invenção e aplicadas à pele.

As bactérias que oxidam amônia são aeróbios que requerem oxigênio para seu metabolismo e não podem crescer em condições anaeró-bicas. Contudo, muitas delas podem também usar nitrato, bem como oxigênio, como fonte terminal de elétrons de seus processos metabólicos. Armazenamento por períodos de tempo prolongados em um recipiente selado corre o risco de o recipiente tornar-se anóxico. Nitrato pode ser adicionado ao fluido no recipiente de modo que nitrato possa ser utilizado em lugar de oxigênio para respiração das bactérias durante armazenamento, permitindo formulações não-fluidas tais como géis e bastões. As bactérias no interior dessas formulações podem derivar seu substrato de oxidação do nitrato dissolvido na ausência de oxigênio dissolvido.

Em uma outra modalidade da presente invenção, uréia, nitrito e nitrato, ferro, ácido láctico e sal poderão ser incluídos em um composto que compreende as bactérias ou aplicados separadamente para suplementar a pele, porque banho remove esses compostos solúveis em água. As bactérias poderão também ser aplicadas durante ou após o banho e poderão ser incorporadas em vários pós tópicos, cremes, bastões, aerossóis e pomadas. Outros compostos poderão ser adicionados a essas preparações cosméticas conforme selecionados por aquele versado na técnica de formulação de cosméticos, tais como, por exemplo, água, óleo mineral, agente de coloração, perfume, alóes, glicerina, cloreto de sódio, bicarbonato de sódio, tampões de pH, agentes de bloqueio de UV, óleo de silicone, óleos naturais, vitamina E, concentrados de ervas, ácido láctico, ácido cítrico, talco, argila, carbonato de cálcio, carbonato de magnésio, óxido de zinco, amido, uréia e ácido eritórbico.

As bactérias que oxidam amônia poderão ser aplicadas em qualquer superfície de um indivíduo, tais como, por exemplo, pele e cabelo. Em uma modalidade preferida, as bactérias são aplicadas à pele de um indivíduo. Em mais uma modalidade preferida, as bactérias que oxidam amônia poderão ser aplicadas ao couro cabeludo porque o couro cabeludo proporciona excelente suprimento de sangue. Bactérias poderão ser incorporadas em vários tratamentos e dispositivos para cabelo, incluindo condicionadores, géis, sprays para cabelo, redes para cabelo, pentes, escovas, chapéus, e artigos para a cabeça.

Uma outra modalidade da invenção inclui métodos análogos usados para curar carne, uma vez que o objetivo de curar carne é a produção de óxido nítrico. Espera-se que essas salmòuras de conserva e compo- sições de cura apresentem pequeno risco à saúde, uma vez que são consideradas seguras para consumo humano. Em particular, quando nitrito é tratado com ácido ascórbico, oxido nítrico é produzido. Nitrito é reduzido por ascorbato para gerar óxido nítrico. Usualmente em cura moderna de carne, ascorbato ou eritorbato são usados com nitrito para gerar óxido nítrico. Na preservação de carne, óxido nítrico é um precursor em uma cadeia de reações químicas que conduzem ao desenvolvimento de aromas e cores específicos. Sob pH baixo, tal como menor que 5, óxido nítrico é rapidamente perdido de salmouras de conserva antes de essas reações químicas poderem ocorrer. Portanto, um pH maior é recomendado para preservação de carne. Misturas de nitrito com eritorbato poderão ser um exemplo. Combinação de formulações de cura de carne com formulações do tipo cosmético poderá resultar em um benefício similar. Combinação de bactérias, uréia e ácido eritórbico poderá ser uma combinação preferida. Outros ácidos fisiolo-gicamente aceitáveis poderão ser usados também.

Uma vantagem de uma modalidade da invenção é que a produção de NO induzida se dá sob controle fisiológico através de sudação. Nitratos orgânicos, tal como nitroglicerina, são às vezes prescritos para uso antes do momento de tensão emocional ou física. Estas são as mesmas condições sob as quais ocorre sudação nervosa. Um aspecto da presente invenção poderá ser uma reduzida incidência de doença cardíaca, doenças vasculares, impotência e infertilidade. Qualquer condição que possa ser tratada através de um método de aumento de NO poderá ser receptiva a tratamento com a presente invenção, mesmo quando tratamentos conhecidos incluem administração de óxido nítrico ou substâncias doadoras de NO oralmente, topicamente, sublingualmente, nasalmente, por meio de injeção, por inalação. Por exemplo, impotência é tratada com Viagra, que prolonga a duração de ação de NQ Uso da presente invenção poderá reduzir a necessidade do uso de agentes tal como Viagra.

Indivíduos não precisam apresentar sintomas clínicos de qualquer desses distúrbios a fim de se beneficiar da presente invenção. A invenção poderá ser usada como medida preventiva juntamente com as mesmas linhas de dieta apropriada, tomando vitaminas, exercitando-se ou tomando banho em geral. Porque distúrbios são relacionados através da ação comum do vasodilatador NO, pode-se usar a invenção para prevenção de doença cardíaca e recebimento de um valor terapêutico para impotência. Porque impotência é um distúrbio que é freqüentemente estigmatizado, um tratamento de impotência que pode ser disfarçado como um tônico para a saúde geral é vantajoso.

Em uma outra modalidade da invenção, a bactéria é aplicada à superfície de vertebrados não-humanos. Animais domesticados tais como cavalos, cães, porcos e galinhas são vistos rolar em sujeira e cobrir-se com ela. Pelo fato de que uréia é um composto abundante na urina e esterco, seria esperado que bactérias adaptadas para viver em solo de terreiro sejam rápidos metabolizadores de uréia em nitrito. Animais selvagens também se cobrem com sujeira. Um componente desse comportamento é provavelmente a inoculação da pele ou couro com bactérias que metabolizariam componentes de suor em NO e precursores de Ns Usar uma cultura substancialmente pura dessas bactérias melhoraria a saúde de animais domesticados e facilitaria seu crescimento. Amônia está freqüentemente presente em grandes quantidades em áreas de lotes de alimentação animal. Bactérias que metabolizariam amônia em NO ou precursores de NO reduziríam os efeitos de doença de amônia ambiente e melhorariam a economia de criação intensiva de animais. Outros objetivos são, por exemplo, vertebrados tais como animais domesticados, de laboratório, transgênicos, quiméricos, e animais de zoológico tais como cavalo, porco, vaca, cão, gato, cabra, carneiro, búfalo, macaco, mula, elefante, lobo, camelo, lhama, galinha, peru, pri-matas, ungulados, roedores, chimpanzés, gorila, orangotango, camundon-gos, ratos e coelhos. A prática de alguns animais, de depositar sua urina e fezes em um único lugar, pode ser vista como sua produção instintiva de um ambiente rico para cultivo e proliferação de bactérias que produzem nitrito. O fato de animais exibirem instintivamente comportamentos que reinoculam suas peles com essas bactérias indicaria que essas bactérias podem ser pronta- mente perdidas da pele e que reinoculação é necessária para os animais. Pelo fato de que humanos tipicamente se banham mais freqüentemente do que animais, a necessidade humana de reinoculação é correspondentemente maior.

Tratamentos para foundering ou laminite eqüina conforme descritos in Patentes dos Estados Unidos: 6.045.827 e 5.891.472, concedidas a Russell; Meri Charmyne, ambas intituladas "Tratamento de laminite eqüina", incluem o tratamento dessa condição com doadores de óxido nítrico aplicados topicamente nas áreas afetadas. Essa grave doença de cavalos é tratada através de aplicação de um doador de óxido nítrico na região das patas e cascos. Nitroglicerina tem sido usada, do mesmo modo que existem outros doadores de óxido nítrico. Cavalos instintivamente realizam esse ato selvagem urinando na lama, permitindo que bactérias formadoras de nitrito proliferem, e caminhando através dessa lama que contém as culturas ativas que produzem nitrito. Práticas modernas estáveis exigem boa manutenção e a eliminação de qualquer acúmulo de urina e fezes onde cavalos caminham. Todos os animais dotados de cascos estão sujeitos a distúrbios similares das patas e cascos. Assim, todos os animais dotados de cascos poderão beneficiar-se de aplicação das bactérias adequadas que oxidam amônia. A Patente dos Estados Unidos N9 5.765.548, concedida a Perry, discute o uso de óxido nítrico misturado com ar respirado pelo cavalo durante exercício vigoroso e o uso de intensificadores de óxido nítrico injetados antes de exercício como benéficos em reduzir a incidência e gravidade de hemorragia pulmonar induzida por exercício. Reduções significativas na pressão capilar foram demonstradas por Perry. Aplicação de uma bactéria apropriada que oxida amônia à pele do cavalo poderá ter o efeito de aumentar a produção natural de óxido nítrico durante exercício. Esse óxido nítrico poderá difundir-se através da pele do cavalo e ser absorvido no sangue onde ele circularia resultando em efeitos sistêmicos. Algum óxido nítrico seria também liberado no ar em torno do cavalo e seria inalado. Presumivelmente, diminuição na queda de pressão traduz-se em aumento de fluxo máximo de ar e sangue nos pulmões, e por conseguinte aumenta o desempe- nho máximo de exercício. Atingir esse aumento de desempenho através de meios naturais seria vantajoso em corrida de cavalos. Similarmente, cães "gray hounds" de corrida, animais de tração, bestas de carga e animais sob tensão poderão também apresentar aumento na produção de óxido nítrico. Atletas humanos poderão similarmente aumentar seu desempenho utilizando bactérias na pele para aumentar a produção de óxido nítrico antes, durante e após exercício. Eventos atléticos típicos incluem, por exemplo, corridas a pé, levantamento de peso, corrida ou prática de bicicleta, jogo ou prática de futebol norte-americano, jogo ou prática de futebol, jogo ou prática de basquetebol, jogo ou prática de beisebol, jogo ou prática de golfe, escalada de montanhas, competição ou prática de boxe, jogo ou prática de hóquei e competição ou prática de tênis.

As bactérias que oxidam amônia poderão ser posicionadas em estreita proximidade com a superfície de um indivíduo, sendo aplicadas direta ou indiretamente à superfície do indivíduo. Bactérias adequadas poderão ser posicionadas em estreita proximidade com a superfície do indivíduo, sendo aplicadas indiretamente em artigos com que a superfície do indivíduo entra em contato, tais como, por exemplo, produtos de cama tais como palha, aparas de madeira, travesseiros, lençóis, cercados, estábulos, escovas, pentes e colchões. Bactérias similarmente adequadas podem ser adicionadas a produtos de cesto de lixo de modo que quando o animal entre em contato com o lixo e o cesto de lixo esse animal venha a se encontrar em estreita proximidade com as bactérias. Como uma característica adicional desses produtos de cesto de lixo, a uréia na urina poderá ser oxidada a produtos não-voláteis e o cheiro de amônia de cestos de lixo será reduzido. Em vez de emitir amônia, os cestos de lixo emitiríam óxido nítrico que aumentaria a função pulmonar de animais e humanos na vizinhança, bem como proporcionaria efeitos sistêmicos.

Em um aspecto da invenção, um artigo é tratado com bactérias que oxidam amônia. Por exemplo, o artigo poderá ser revestido ou impregnado com as bactérias. Em uma modalidade preferida, o artigo tratado com as bactérias contacta a superfície de um indivíduo, tais como, por exemplo, roupas, gola e sela.

Artigos que contactam a superfície de um indivíduo humano, tal como fralda, poderão ser tratados com bactérias que oxidam amônia. Porque fraldas são projetadas para reter e conter urina e fezes produzidas por indivíduos incontinentes, a uréia na urina e fezes podem ser hidrolisadas pela pele e bactérias fecais para formar amônia livre que é irritante e poderá causar brotoeja por fralda. Incorporação de bactérias que metabolizam uréia em nitrito ou nitrato poderá impedir a liberação da amônia livre e poderá liberar nitrito e finalmente NO que poderá ajudar na manutenção de pele saudável tanto em crianças quanto em adultos incontinentes. A liberação de óxido nítrico em fraldas poderá também ter efeitos antimicrobianos em organismos causadores de doença presentes em fezes humanas. Esse efeito poderá continuar mesmo após fraldas descartáveis serem descartadas como refugo e poderá reduzir a incidência de transmissão de doença através de contato com fraldas descartáveis sujas. A adição das bactérias que oxidam amônia à fralda é benéfica quando se percebe que limpeza de um bebê sujo pode remover bactérias que oxidam amônia mais rápida do que elas podem proliferar, deixando na pele somente bactérias heterotróficas que hidrolisam uréia. A epidemia de mortes de bebês devido à Síndrome da Morte Súbita de Bebês, ou SIDS, nos anos 1980 foi aproximadamente coincidente com c uso disseminado de fraldas descartáveis. O programa "dormir de costas" onde bebês eram colocados para dormir sobre suas costas reduziu grandemente a incidência de SIDS. O mecanismo da relação causai entre dormir de costas e baixa incidência de SIDS permanece indefinível, entretanto ele poderá ser devido ao aumento de contato da pele do bebê com urina durante o sono o qual ocorre enquanto o bebê está deitado sobre suas costas. Vítimas de SIDS são freqüentemente encontradas com roupas de cama embebidas de suor, o que poderá ser devido à tentativa em vão do bebê em aumentar a formação de óxido nítrico suando durante a asfixia, em vez de devido ao superaquecimento como se pensa convencionalmente.

Um outro artigo de vestuário que pode ser tratado desse modo é o tampão. Durante o período menstruai de uma mulher, são geradas secre- ções que sob certas circunstâncias podem sustentar o crescimento de bactérias heterotróficas que causam tais como aquelas que causam choque tóxico. Do mesmo modo como se mostrou que nitrito acidificado aplicado topi-camente é curativo para infecções da pele por lêvedo, espera-se que aplicação vaginal dessas bactérias deve ser curativa e preventiva de infecções vaginais por lêvedo. Tomando a vagina menos hospitaleira a organismos causadores de doenças, a incidência de transmissão de doenças sexualmente transmitidas pode ser reduzida. O uso vaginal dessas bactérias por uma mulher poderá também aumentar o desempenho sexual de um parceiro ao proporcionar óxido nítrico adicional ao órgão sexual de sua parceira durante intercurso sexual. Do mesmo modo que o nitrito na saliva proporciona a base para o remédio popular para impotência, o fato de aplicar saliva ao órgão sexual masculino, o efeito estimulador da aplicação de saliva à genitália feminina também tem sua base no teor de nitrito da saliva. A presente invenção ao aumentar a produção de óxido nítrico poderá proporcionar um benefício similar ao acentuar a função sexual tanto de homens quanto de mulheres.

Outros artigos de vestuário tais como, por exemplo, sapatos, inserções de sapatos, pijamas, tênis, cintos, chapéus, camisas, roupa de baixo, trajes para atletas, capacetes, toalhas, luvas, meias, bandagens e similares poderão também ser tratados com bactérias que oxidam amônia. Roupas de cama, incluindo lençóis, travesseiros, fronhas e cobertores, poderão também ser tratadas com as bactérias. Em uma modalidade da invenção, áreas de pele que não podem ser lavadas por um período de tempo poderão também ser contactadas com bactérias que oxidam amônia. Especificamente, pele encerrada em moldes ortopédicos que imobilizam membros feridos durante o processo de cicatrização e áreas em proximidade com ferimentos que têm de ser mantidos secos para cicatrização apropriada, tais como ferimentos com pontos cirúrgicos, poderão beneficiar-se de contato com as bactérias que oxidam amônia.

Considera-se que artigos usados sobre a cabeça e couro cabeludo poderão ser tratados com bactérias que oxidam amônia. Óxido nítrico formado no cabelo, fora da superfície da pele, poderá ser capturado em um chapéu, cachecol ou máscara facial e dirigido para o ar inalado.

Indivíduos que têm uma frequência de banho reduzida, tais como astronautas, membros de tripulação submarina, pessoal militar durante campanha, funcionários civis em locais remotos, refugiados, indivíduos acamados e muitos outros poderão manter a pele mais saudável conservando bactérias na pele de acordo com a presente invenção. Escaras são um fator comum que deriva de distúrbios do fluxo sangüíneo. Espera-se que a presente invenção possa aumentar e normalizar problemas de circulação inadequada.

Um outro aspecto da invenção inclui o uso das bactérias para inibir o crescimento de bactérias heterotróficas. Odor corporal deriva, em parte, de metabólitos bacterianos na pele. O desenvolvimento de odor na pele em um dia ou mais indica que crescimento rápido de bactérias heterotróficas gera os compostos odoríferos. Bactérias que oxidam amônia, ao inibir o crescimento das bactérias heterotróficas, poderão diminuir o odor produzido. Assim, a presente invenção poderá também ser usada para reduzir odor corporal e poderá ser usada sozinha ou em conjunto com outras preparações cosméticas do tipo desodorante.

Em uma outra modalidade, artigos tais como, por exemplo, preservativos e "codpieces" poderão ser tratados com as bactérias apropriadas. É sabido que o órgão sexual masculino requer óxido nítrico para função apropriada durante intercurso sexual. A estimulação de geração de óxido nítrico através do uso de artigos poderá ser benéfica para indivíduos masculinos realizarem atos sexuais. Similarmente, o tratamento de coberturas de pano de móveis utilizados para atividades sexuais também seria vantajoso, tais como, por exemplo, lençóis, cobertores, capas, fronhas.

Bactérias que oxidam amônia poderão ser localizadas em uma superfície do artigo que contacta diretamente a superfície do indivíduo. Alternativamente, as bactérias poderão ser expostas a fluidos corporais, mas não diretamente em contato com a superfície do indivíduo. Em particular, uma fralda, tampão ou bandagem poderão ter uma camada interna tratada com as bactérias que oxidam amônia, e pelo menos uma camada que é permeável a fluidos corporais, óxido nítrico e/ou precursores de oxido nítrico. Essas camadas não precisam ser permeáveis a bactérias. Porque as bactérias que oxidam amônia não podem utilizar compostos diferentes de amônia para energia, elas não podem infectar uma ferida. Embora elas possam ser alergênicas, a inibição de crescimento de bactérias heterotróficas poderá superar o potencial para alergia.

Considera-se que bactérias diferentes serão mais adequadas para aplicações diferentes. Assim, bactérias adaptadas para níveis muito altos de produção de nitrito poderão ser ideais para uso em fraldas, palha para animal se deitar e outras aplicações de não-contato. Altos níveis de nitrito também seriam úteis para proteger a pele de infecções durante safáris prolongados em ambientes tropicais, para aplicações do tipo militar ou para o aumento de desempenho de atletas de elite, vertebrados humanos e não-humanos.

Embora se espere que as bactérias autotróficas que oxidam amônia venham a ser as mais ativas na produção de óxido nítrico e precursores de óxido nítrico, outras bactérias que produzem quantidades menores dos mesmos poderão ser usadas também. Estas poderão ser desejadas em algumas circunstâncias quando, por exemplo, melhor controle da produção de óxido nítrico é necessário. Outras bactérias podem ser incluídas para outros fins, tal como, por exemplo, para controlar o pH através da produção de ácido.

Modificações adicionais e descrição de equivalentes nesta invenção ocorrerão àqueles versados na técnica usando não mais do que experimentação de rotina, e acredita-se que todas essas modificações e equivalentes estejam dentro do espírito e escopo da invenção conforme definida pelas reivindicações seguintes.

REIVINDICAÇÕES

Claims (11)

1. Preparação para ser aplicada a uma superfície de um indivíduo, caracterizada pelo fato de que compreende bactérias que oxidam amô-nia que metabolizam transpiração, quando presente, em qualquer dentre óxido nítrico, precursores de óxido nítrico ou combinações dos mesmos, a referida bactéria sendo selecionada de qualquer dentre Nitrossomonas, Ni-trossococcus, Nitrossospira, Nitrossocystis, Nitrossolobus, Nitrossovibrio e combinações das mesmas, a referida preparação compreendendo ainda ex-cipientes adequados para uso tópico e pelo menos um composto selecionado de qualquer dentre uréia, sais de amônio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, fosfato, cloreto, sulfato, sais minerais em traços, ferro, cobre, zinco, cobalto, manganês, molibdênio, tampões e combinações dos mesmos.

2. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a preparação é de uma composição cosmética qualquer, um desodorante para o corpo ou uma preparação para atletas.

3. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o componente de transpiração é selecionado de qualquer dentre uréia, nitrito, ácido láctico, nitrato, sal, sais de ferro, sais de amônio e combinações dos mesmos.

4. Preparação de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente pelo menos um componente selecionado de qualquer dentre água, óleo mineral, agente de coloração, perfume, alóes, glicerina, cloreto de sódio, tampões de pH, agentes de absorção de UV, óleo de silicone, óleo natural, vitamina E, concentrados de ervas, ácido láctico, ácido cítrico, talco, argila, carbonato de cálcio, carbonato de magnésio, óxido de zinco, amido, uréia, nitrito, nitrato, sais de ferro, sais de amônio e combinações dos mesmos.

5. Preparação de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que é qualquer dentre pó, creme, bastão, aerossol ou pomada.

6. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a superfície do indivíduo é de um ser humano.

7. Artigo de roupa, caracterizado pelo fato de que compreende: artigo de roupa tratado com bactérias que oxidam amônia adaptadas para metabolizar qualquer dentre amônia, sais de amônio ou uréia em qualquer de oxido nítrico, precursores de oxido nítrico ou combinações dos mesmos, a referida bactéria sendo selecionada de qualquer dentre Nitros-somonas, Nitrossococcus, Nitrossospira, Nitrossocystis, Nitrossolobus, Ni-trossovibrio e combinações das mesmas.

8. Artigo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a amônia, sais de amônio ou uréia são um componente de qualquer dentre transpiração, urina, fezes, sangue, secreções de ferida, secreções menstruais, secreções vaginais, misturas aplicadas topicamente e combinações dos mesmos.

9. Artigo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o artigo de roupa é uma fralda.

10. Artigo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que é selecionado de qualquer dentre sapato, tênis, cinto, chapéu, roupa de baixo, traje para atletas, meia, inserção de sapato, bandagem, máscara facial, cachecol, tampão e preservativo.

11. Artigo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente pelo menos um dentre uréia, nitrito, ácido láctico, nitrato, sal, sais de ferro, sais de amônio e combinações dos mesmos.