BRPI0016693B1 - Derivados de pirrolidina como inibidores de fosfodiesterase específico amp cíclico - Google Patents

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Laurence E Burgess
Edward A Kesicki
Amy Oliver
John J Gaudino
Zachary S Jones
Bradley J Newhouse
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Description

DERIVADOS DE PIRROLIDINA COMO INIBIDORES DE FOSFODIESTERASE
ESPECÍFICO AMP CÍCLICO
REFERÊNCIA CRUZADA PARA O REFERIDO DEPÓSITO
Esta é uma continuação parcial do pedido de patente série n° 09/471,846, depositado em 23 de dezembro de 1999, ainda pendente.
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção se refere a uma série de compostos que são inibidores potentes e seletivos do monofosfato cíclico-3,5 de adenosina específico da fosfodiesterase (MFAc específico da PDE) . Em particular, a presente invenção se refere a uma série de novos compostos de pirrolidina que são úteis para inibir a função do cMFA específico da PDE, em particular PDE4, assim como métodos de fabricação dos mesmos, composições farmacêuticas contendo os mesmos e seus usos como agentes terapêuticos, por exemplo, no tratamento de doenças inflamatórias e outras doenças envolvendo elevados níveis de citoquinas e mediadores pró-inflamatórios.
EMBASAMENTO DA INVENÇÃO A inflamação crônica é uma complicação multifatorial de uma doença caracterizada pela ativação de múltiplos tipos de células inflamatórias, particularmente células da linhagem linfóide (incluindo linfócitos T) e da linhagem mielóide (incluindo granulócitos, macrófagos e monócitos). Mediadores pró-inflamatórios, incluindo as citoquinas tais como o fator de necrose tumoral (FNT) e a interleucina-1 (IL-1), são produzidos por essas células ativadas. Dessa forma, um agente que suprima a ativação dessas células, ou suas produções de citoquinas pró- inflamatórias, seria útil no tratamento terapêutico das doenças inflamatórias e outras doenças envolvendo elevados níveis de citoquina. 0 monofosfato cíclico de adenosina (cMFA) é um segundo mensageiro que intermedia as respostas biológicas das células a uma grande variedade de estímulos extracelulares. Quando ocorre a ligação antagônica apropriada a um receptor específico da superfície celular, a adenilatociclase é ativada para converter o trifosfato de adenosina (ATP) em monofosfato de adenosina (cAMP). Aceita- se teoricamente que as ações antagônicas induzidas do cAMP dentro da célula sejam mediadas predominantemente pela ação da proteína quinase dependente da AMPc. As ações intracelulares do AMPc são terminadas ou pelo transporte de nocleotídeo para fora da célula, ou pela divagem enzimática do nucleotídeo cíclico fosfodiesterase (PDEs), que hidrolisa a ligação 3'-fosfodiester para formar o monofosfato de 5'-adenosina (5'-AMP). 0 5'-AMP é um metabólico inativo. As estruturas do AMPc e do 5'-AMP são ilustradas abaixo. Níveis elevados de AMPc nas células de linhagem mielóide e linfóide são associadas com a supressão das células de ativação. A família de enzimas intracelulares de PDEs, entretanto, regula os níveis de AMPc nas células. 0 PDE4 é um isotipo PDE predominante nessas células e é o maior contribuinte na degradação do AMPc. De acordo com o exposto, a inibição da função do PDE evitará a conversão de AMPc no metabólico inativo 5'-AMP e, conseqüentemente, mantém mais elevados os níveis de AMPc e, de acordo com o exposto, suprime a ativação celular (veja Beavo et al.,"Cyclic Nucletide Phosphodiesterases: Structure, Regulations and Drugs Action", Wiley and Sons, Chichester, pp. 3-14, (1990); Torphy et al.,"Drugs News and Perspestives", 6, pp.203-214 (1993); Giembycz et al., "Clin.Exp.Allergy", 22, pp. 337-344 (1992)).
Em particular,os inibidores de PDE4, tais como rolipram, têm sido mostrados por inibir a produção de TNFa e inibir parcialmente a liberação de IL-Ιβpelos monócitos (veja Semmler et al., "Int.J.Immunopharmacol., 15, pp. 409- 413, (1993); Molnar-Kimber et al., "Mediators of Inflaramation", 1, pp. 411-417, (1992)). Os inibidores de PDE4 também têm sido mostrados por inibir a produção de radicais superóxido a partir de leucócitos polimorfonucleares humanos (veja Verghese et al.( "J. Mol.
Cell. Cardiol.", 21 (Suppl. 2), S61 (1989); Nielson et al., "J. Allergy Immunol.", 86, pp. 801-808, (1990)); por inibir a liberação de aminas vasoconstritivas e prostanóides a partir de basófilos humanos (veja Peachell et all., "J.
Immunol.", 148, pp. 2503-2510, (1992)); por inibir o aumento respiratório violento em eosinófilos (veja Dent et al., "J, Pharmacol.", 103, pp.1339-1346, (1991), e por inibir a ativação de linfócitos T humanos (veja Robicsek et al., "Biochem. Pharmacol·.", 42, pp. 869-877, (1991)). A ativação de células inflamatórias e a produção excessiva ou desregulada de citoquinas (por exemplo, TNFa e IL-β)estão envolvidas em doenças e desordens alérgicas, autoimunes e inflamatórias, tais como artrite reumatoide, osteoartrite, artrite de gota, espondilite, oftalmopatologia associada à tireóide, doença de Behcet, septicemia, choque septicêmico, choque endotóxico, septicemia por gram negativos, septicemia por gram positivos, síndrome de choque tóxico, asma, bronquite crônica, síndrome da ansiedade respiratória adulta, doença inflamatória pulmonar crônica, tais como doença de obstrução crônica pulmonar, silicose, sarcoidose pulmonar, dano da reperfusão do miocárdio, do cérebro e das extremidades, fibrose, fibrose cística, formação de quelóides, formação de cicatrizes, arteriosclerose, desordem de rejeição em transplantes tais como rejeição alografitizada de enxerto vs. Hospedeiro, glomeronefrite crônica, lupus, doença inflamatóría dos intestinos, tais como doença de Crohn e colite ulcerativa, doenças proliferativas de linfócitos, tais como leucemia e dermatoses inflamatórias, tais como dermatite atópica, psoríase e urticária.
Outras condições caracterizadas por elevados níveis de citoquinas incluem danos cerebrais devido a trauma moderado (veja Dhillon et al., "J. Neurotrauma", 12, pp. 1035-1043, (1995); Suttorp et al., "J. Clin. Invest.", 91, pp. 1421-1428 (1993)), cardiomiopatias, tais como falha congestiva do coração (veja Bristow et. Al., "Circulation", 97, pp. 1340-1341 (1998)), caquexia, caquexia secundária à infecção ou malignidade, caquexia secundária devido à síndrome da deficiência imunológica adquirida (AIDS), ARC (complexo relacionado a AIDS), mialgias febris devido a infecções, malária cerebral, osteoporose e doença da reabsorção óssea, formação de quelóides, formação de cicatrizes tissulares e pirexia.
Em particular, TNFa tem sido identificado como tendo uma função preponderante com relação â síndrome da deficiência imunológica adquirida humana (AIDS). A AIDS resulta da infecção dos linfócitos T pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Embora o HIV também infeccione e seja mantido nas células de linhagem mielóide, o TNF tem sido mostrado como regulador da infecção do HIV nos linfócitos T e nos monócitos (veja Poli et al., "Proc.
Natl. Acad. Sei.", USA, 87, pp. 782-785, (1990)).
Diversas propriedades do TNFa, tais como a estimulação das colagenases, estimulação das angiogeneses in vivo, estimulação da reabsorção óssea e uma habilidade para aumentar a aderência das células tumorais ao endotélio, são consistentes com o papel da TNF no desenvolvimento e espalhamento metastático do câncer no hospedeiro. Recentemente o TNFa tem sido diretamente implicado na promoção do crescimento e da metástase das células tumorais (veja Orosz et al., "J. Exp. Méd.", 177, pp. 1391-1398, (1993)). 0 PDE4 possui uma grande distribuição tissular.
Existem pelo menos quatro genes para o PDE4 cujos múltiplos transcritos de qualquer dado gen podem render diversas proteínas diferentes que dividem idênticos sítios catalíticos. A identidade aminoácida entre os quatro possíveis sítios catalíticos é maior que 85%. Suas sensibilidades compartilhadas a inibidores e suas similaridades cinéticas refletem o aspecto funcional desse nível de identidade aminoácida. Teoriza-se que o papel dessas proteínas PDE4 alternativamente expresso permite um mecanismo através do qual uma célula pode diferencialmente localizar essas enzimas intracelulares e/ou regular a eficiência catalítica via modificação pós-translacional.
Qualquer dado tipo de célula que expressa a enzima PDE4 tipicamente expressa mais que uma das quatro possíveis codificações genéticas dessas proteínas.
Pesquisadores têm mostrado considerável interesse no uso dos inibidores PDE4 como agentes antiinflamatórios.
As primeiras evidências indicam que a inibição do PDE4 tem um efeito benéfico sobre uma variedade de células inflamatórias tais como monócitos, macrófagos, células T da linhagem Th-1 e granulócitos. A síntese e/ou liberação de muitos mediadores pró-inflamatórios, tais como citoquinas, mediadores lipídicos, superóxido e aminas biogênicas, tal como a histamina, tem sido atenuada nessas células pela ação de inibidores de PDE4. Os inibidores de PDE4 também afetam outras funções celulares incluindo a proliferação de células T, transmigração granulócita em resposta a substâncias quimiotóxicas e a integridade das junções das células endoteliais dentro dos vasos sanguíneos. Já foram relatados o projeto, a síntese e a escolha de vários inibidores de PDE4. As metilxantinas, como a cafeína e a teofilina, foram os primeiros inibidores de PDE4 descobertos, mas esses compostos são não-seletivos com relação a que PDE ser inibida. A droga rolipram, um agente antidepressivo, foi um dos primeiros inibidores específicos relatados como sendo específico párea o PDE4. A rolipram, tendo a seguinte fórmula estrutural, tem uma concentração de inibição (IC50) relatada de 50% de cerca de 200 nM (nanomolar) com relação â inibição do PDE4 humano recombinante.
Rolipram Pesquisadores continuam a pesquisar por inibidores de PDE4 que sejam mais seletivos com relação à inibição do PDE4, que tenham um IC50 mais baixo que o rolipram e que evite efeitos colaterais indesejáveis sobre o sistema nervoso central (SNC) tais como ânsia de vômito, vômitos e sedação, associados com a administração do rolipram. Uma classe de compostos é descoberta por Feldman et al., na patente US n° 5.665.754. Os compostos descobertos aqui são pirrolidinas substituídas possuindo uma estrutura similar ao rolipram. Um composto particular, tendo a fórmula estrutural (I), possui um IC50 com relação ao PDE4 humano recombinante de cerca de 2 nM. Considerando- se que foi observada uma separação favorável do efeito colateral emético da eficácia, esses compostos não exibiram uma redução dos efeitos indesejáveis sobre o SNC.
Adicionalmente, diversas empresas estão agora realizando testes clínicos de outro inibidor de PDE4.
Entretanto, problemas referentes à eficácia e a efeitos colaterais adversos, tais como vômitos e distúrbios do sistema nervoso central, continuam não resolvidos.
De acordo com o exposto, compostos que inibam seletivamente o PDE4 e que reduzam ou eliminem os efeitos colaterais adversos sobre o SNC, associados aos inibidores de PDE4 anteriores, seriam úteis no tratamento da alergia e doenças inflamatórias e outras doenças associadas com a produção excessiva ou desregulada de citoquinas, tal como a TNF. Adicionalmente, os inibidores seletivos de PDE4 seriam úteis no tratamento de doenças que são associadas com elevados níveis de AMPc ou a função do PDE4, em particular o tecido alvo.
RESUMO DA INVENÇÃO A presente invenção está direcionada a inibidores potentes e seletivos de PDE4 úteis no tratamento de doenças e condições onde a inibição da atividade do PDE4 seja considerada benéfica. Os presentes inibidores de PDE4 inesperadamente reduzem ou eliminam os efeitos colaterais adversos sobre o SNC, associados com os inibidores de PDE4 anteriores.
Em particular, a presente invenção está direcionada a compostos de pirrolidina tendo a fórmula estrutural (II): Onde R1 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila de baixo peso molecular, alquila ligado por ponte (Ex. norbornila), arila, citoalquila (Ex. indanila), um heterocíclico saturado de 4-, 5- ou 6 membros (Ex. 3-tetraidrofurila), heteroarila, Ci-4alquilenoarila, Ci-4alquileno-0-arila, Ci-4alquilenoeteroarila, Οχ. 4alquilenoHet, C2-4alquilenoaril-0-arila, Cx-4alquileno ligado por ponte a alquila, Ci-4alquilenocicloalquila (Ex. ciclopentilmetila) , propargila substituída ou não- substituída (Ex. -CH2C=C-C6H5) , alila substituída ou não- substítuida (Ex. -CH2CH=CH-CsH5) e halocicloalquila (Ex. fluorociclopentila); R2 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, metila, metila halosubstituída, por ex. CHF2. R3 é selecionado de um grupo constituído de C (=0) 0R7, C (=0) R7, NHC (=0) 0R7, Ci-3alquilenoC (=0) 0R8, Ci- 3alquilenoC (=0) R8, C(=NH)NRSR9, C(=0)NR8R9, C (=0)-C (=0) NR8R9, C (=0) C (=0) 0R3, Ci-4alquileno 0R8, arila, Ci-3alquilenoarila, Ci-3alquilenoheteroarila, S02heteroarila, Het e heteroarila; R4 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila e arila; R5 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquinila, haloalquila, hidroxialquila, cicloalquila e arila; R6 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve e C(=0)R7; R7 é selecionado de um grupo constituído de alquila leve, ramificado ou não ramificado, Ci_ 4alqulenoaríla, cicloalquila, Het, Ci- 4alquilenocicloalquila, heteroarila e arila, cada um opcionalmente substituído por um ou mais dos 0C(=0)R8, C (=0) R8, 0R8, NR8R9 ou SR0; R8 e R9, os mesmos ou diferentes, são selecionados de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, cicloalquila, arila, heteroarila, C(=0)0-alquila, C(=0)0-arila, C(=0)alquila, alquilS02, haloalquilaS02, C (=0) -Ci-3alquilenoarila, C (=0)-Ci_4alquilenoarila, CV 4alquílenoarila e Het ou R8 e R9 juntos formam um anel de 4 membros ou de 7 membros; R10 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila, haloalquila, cicloalquila, arila, C(=0)alquila, C(=0)cicloalquila, C(=0)arila, C(=0)0-arila, C (=0) O-cicloalquila, CH20H, CH20-alquila, CHO, CN, N02 e S02Rn; R11 é selecionado de um grupo constituído de alquila, cicloalquila, trifluorometila, arila, aralquila e NR8R9; e seus sais e solvatados (Ex. hidratos).
Em uma outra incorporação, a presente invenção está direcionada a compostos de pirrolidina tendo uma fórmula estrutural {IIa) Onde R1 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquila ligado por ponte, arila, cicloalquila, um heterocíclico saturado de 4-, 5- ou 6 membros, heteroarila, Ci_4alquilenoarila, Ci-4alquileno-0- arila, Ci_4alquilenoeteroarila, Ci-4alquilenoHet, C2- 4alquilenoaril-0-arila, Ci-4alquileno ligado por ponte a alquila, Ci~4alquilenocicloalquila, propargila substituída ou não-substituída, alila substituída ou não-substituida e halo-cicloalquila; R2 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, metila, metila halo-substituída; R3 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, Ci-4alquilenoarila e C(=0) Ci-3alquileno-0-Ci- 3alquilenoarila; R4 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila e arila; R5 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquinila, haloalquila, hidroxialquila, cicloalquila e arila; R6 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve e C(=0)R7; R7 é selecionado de um grupo constituído de alquila leve, ramificado ou não ramificado, Ci_ 4alqulenoarila, cicloalquila, Het, Ci_ 4alquilenocicloalquila, heteroarila e arila, cada um opcionalmente substituído por um ou mais dos 0C(=0)R8, C (=0) R8, OR3, NR8R9 ou SR8; e R8 e R9, os mesmos ou diferentes, são selecionados de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, cicloalquila, arila, heteroarila, C(=0)0-alquila, C(=0)0-arila, C(=0)alquila, alquilS02, haloalquilaS02, C (=0)-Ci-3alquilenoarila, C (=0)-Ci-4alquilenoarila, Cj.. 4alquilenoarila e Het ou R8 e R9 juntos formam um anel de 4 membros ou de 7 membros; R10 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila, haloalquila, cicloalquila, arila, C(=0)alquila, C(=0)cicloalquila, C{=0)arila, C(=0)0-arila, C (=0) O-cicloalquila, CH20H, CH20-alquila, CHO, CN, N02 e S02Ru; e R11 é selecionado de um grupo constituído de alquila, cicloalquila, trifluorometila, arila, aralquila e NR8R9; e seus sais e solvatados (Ex. hidratos). A presente invenção também está direcionada a composições farmacêuticas contendo um ou mais dos compostos da fórmula estrutural (II) , ao uso dos compostos e composições contendo os compostos no tratamento de uma doença ou desordem, e ao método de preparação de compostos e intermediários envolvidos na síntese dos compostos da fórmula estrutural (II). A presente invenção também está direcionada a métodos de (a) tratamento de um mamífero tendo uma condição onde a inibição de PDE4 traga benefícios, (b) modulação dos níveis de AMPc num mamífero, (c) redução dos níveis de TNFa num mamífero, (d) supressão de células inflamatórias num mamífero, e (e) inibição da função do PDE4 num mamífero pela administração de quantidades efetivamente terapêuticas, num mamífero, de um composto de fórmula estrutural (II) ou uma composição contendo um composto da fórmula estrutural (II).
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS INCORPORAÇÕES PREFERIDAS A presente invenção é direcionada a compostos tendo a fórmula estrutural (II): Onde R1 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquila ligado por ponte (Ex. norbornila), arila, citoalquila (Ex. indanila), um heterocíclico saturado de 4-, 5- ou 6 membros (Ex. 3- tetraidrofurila), heteroarila, Ci-4alquilenoarila, Ci_ 4alquileno-0-arila, Ci-4alquilenoeteroarila, Ci- 4alquilenoHet, C2-4alquilenoaril-0-arila, Ci-4alquileno ligado por ponte a alquila, Ci_4alquilenocicloalquila (Ex. ciclopentilmetila) , propargila substituída ou não- substituída (Ex. -CH2C=C-C6H5), alila substituída ou não- substituida (Ex. -CH2CH=CH-C6H5) e halocicloalquila (Ex. fluorociclopentila); R2 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, metila, metila halosubstituída, por ex. CHF2. R3 é selecionado de um grupo constituído de C (=0) 0R7, C (=0) R7, NHC (=0) OR7, Cx^alquilenoC (=0) OR8, C4- 3alquilenoC (=0) R8, C(=NH)NR8R9, C(=0)NR8R9, C (=0)-C (=0)NR8R9, C (=0) C (=0) OR8, Ci_4alquileno 0Ra, arila, Ci-3alquilenoarila, Ci-3alquilenoheteroarila, S02heteroarila, Het e heteroarila; R4 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila e arila; R5 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquinila, haloalquila, hidroxialquila, cicloalquila e arila; R6 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve e C(=0)R7; R7 é selecionado de um grupo constituído de alquila leve, ramificado ou não ramificado, Ci_ 4alqulenoarila, cicloalquila, Het, Ci- 4alquilenocicloalquila, heteroarila e arila, cada um opcionalmente substituído por um ou mais dos 0C(=0)R8, C (=0) R8, 0R3, NR8R9 ou SR8; R3 e R9, os mesmos ou diferentes, são selecionados de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, cicloalquila, arila, heteroarila, C(=0)0-alquila, C(=0)0-arila, C(=0)alquila, alquilS02, haloalquilaS02, C(=0)-Ci_3alquilenoarila, C (=0)-Ci-4alquilenoarila, Ci_ 4alquilenoarila e Het ou R8 e R9 juntos formam um anel de 4 membros ou de 7 membros; R10 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila, haloalquila, cicloalquila, arila, C(=0)alquila, C(=0)cicloalquila, C(=0)arila, C(=0)0-arila, C (=0) O-cicloalquila, CH20H, CH20-alquila, CHO, CN, N02 e S02Rn; R11 é selecionado de um grupo constituído de alquila, cicloalquila, trifluorometila, arila, aralquila e NR8R9; e seus sais e solvatados (Ex, hidratos).
Em uma outra incorporação, a presente invenção é direcionada a compostos de pirrolidina tendo ao fórmula estrutural (lia): Em uma outra incorporação, a presente invenção está direcionada a compostos de pirrolidina tendo uma fórmula estrutural (lia) Onde R1 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquila ligado por ponte, arila, cicloalquila, um heterocíclico saturado de 4-, 5- ou 6 membros, heteroarila, Ci-4alquilenoarila, Ci.4alquileno-0- arila, Ci-4alquilenoeteroarila, Ci_4alquilenoHet, C2. 4alquilenoaril-0-arila, Ci_4alquileno ligado por ponte a alquila, Ci-4alquilenocicloalquila, propargila substituída ou não-substituída, alila substituída ou não-substituida e halo-cicloalquila; R2 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, metila, metila halo-substituída; R3 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, Ci-4alquilenoarila e C (=0) Ci-salquileno-O-Ci- 3alquilenoarila; R4 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila e arila; R5 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, alquinila, haloalquila, hidroxialquila, cicloalquila e arila; R6 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve e C(=0)R7; R7 é selecionado de um grupo constituído de alquila leve, ramificado ou não ramificado, Ci_ 4alqulenoarila, cicloalquila, Het, CV 4alquilenocicloalquila, heteroarila e arila, cada um opcionalmente substituído por um ou mais dos 0C(=0)R8, C(=0)R8, 0R8, NR8R9 ou SR8; e R8 e R9, os mesmos ou diferentes, são selecionados de um grupo constituído de hidrogênio, alquila leve, cicloalquila, arila, heteroarila, C(=0)0-alquila, C(=0)0-arila, C(=0)alquila, alquilS02, haloalquilaS02/ C(=0) -Ci-3alquilenoarila, C(=0)-Ci-4alquilenoarila, Ci- 4alquilenoarila e Het ou R8 e R9 juntos formam um anel de 4 membros ou de 7 membros; R10 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, alquila, haloalquila, cicloalquila, arila, C(=0)alquila, C(=0)cicloalquila, C(=0)arila, C(=0)0-arila, C (=0) O-cicloalquila, CH20H, CH20-alquila, CHO, CN, N02 e S02Ru; e R11 é selecionado de um grupo constituído de alquila, cicloalquila, trifluorometila, arila, aralquila e NR8R9; e seus sais e solvatados (Ex. hidratos).
Tal como utilizado aqui, o termo "alquila" sozinho ou em combinação, é definido de modo a incluir grupos hidrocarbonetos saturados de cadeias lineares e ramificadas contendo de um até 16 átomos de carbono, seja substituído ou não substituído. 0 termo "alquila leve" é definido aqui como um grupo alquila possuindo de um a seis átomos de carbono (Ci-Cg) . Exemplos de grupos alquila leves incluem, mas não se limitam a, metil, etil, n-propil, isopropil, isobutil, butil terciário, isopentil, n-butil, neopentil, n-hexil e assemelhados. 0 termo "alquinil" refere-se a grupos alquila insaturados que contenham uma tripla ligação carbono-carbono. 0 termo "alquila ligado por ponte" é definido aqui como um grupo hidrocarboneto C6-Ci6 bicíclico ou policíclico, por exemplo, norboril, adamantil, biciclo [2.2.2] octil, biciclo [2.2.1] heptil, biciclo [3.2.1] octil, bicilo [4.1.0] heptil, biciclo [3.1.0] áxil e decaidronaftil, substituído ou não substituído. 0 termo "cicloalquila" é definido aqui para incluir grupos hidrocarbonetos alifáticos C3-C10 monocíclicos ou policíclicos fundidos. Exemplos de grupos cicloalquila incluem, mas não estão limitados a, ciclopropil, ciclobutil, cicloexil, decaidronaftaleno e ciclopentil. Tal como utilizado aqui, "cicloalquil" também abarca grupos hidrocarbonetos alifáticos C3-C7 cíclicos fundidos em um anel arila. Por exemplo, indanil e tetraidronaftalenil são grupos cicloalquil como definidos aqui. üm grupo alquila, alquila ligado por ponte ou cicloalquila opcionalmente pode ser substituído por um ou mais, tipicamente um a três substituintes, por exemplo, alquila leve, cicloalquila, haloalquila, por exemplo, CF3-, halo, hidroxi, alcóxi, aril, heteroaril e Het. 0 termo "alquileno" se refere a um grupo alquila tendo um substituinte. Por exemplo, o termo "Ci_ 3alquilenocicloalquila" se refere a um grupo alquila contendo de um a três átomos de carbono e substituído com um grupo cicloalquila. Um exemplo de "Ci-3alquilenoarila" é o benzila. 0 termo "haloalquila" é definido aqui como um grupo alquila substituído por um ou mais halo substituintes, sejam flúor, cloro, bromo, iodo ou combinações dos mesmos. Similarmente, "halocicloalquil" e "haloaril" são definidos como um grupo cicloalquil ou aril tendo um ou mais halo-substituintes. 0 termo "aril", sozinho ou em combinação, é definido aqui como um grupo aromático monocíclico ou bicíclico, por exemplo, fenil ou naftil, que podem ser substituídos ou não substituídos, por exemplo, por um ou mais, e particularmente um a três, substituintes selecionados a partir de halo, alquil, fenil, fenil substituído, hidroxi, hidroxialquil, alcóxi, ariloxi, alcoxialquil, nitro, amino, alquilamino, alquiltio, alquilsulfinil e alquisulfonil. Exemplos de grupos arila incluem fenil, naftil, bifenil, tetraidronaftil, indanil, 2-clorofenil, 3-clorofenil, 4-clorofenil, 4-fluorfenil, 2- metilfenil, 4-metóxifenil, 4-trifluorometilfenil, 4- nitrofenil e assemelhados. 0 termo "heteroarila" é definido aqui como um sistema de anéis monocíclico ou bicíclico contendo um ou dois anéis aromáticos e contendo pelo menos um átomo de nitrogênio, oxigênio ou enxofre em um anel aromático, e que pode ser não substituído ou substituído, por exemplo, com um ou mais, e em particular de um a três substituintes, como halo, alquil, hidroxi, hidroxialquil, alcóxi, alcoxialquil, haloalquil, aril, haloaril, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinil e alquilsulfonil. Exemplos de grupos heteroarila incluem tienil, furil, piridil, oxazolil, 1,2,4-oxadiazo-3-lil, quinolil, isoquinolil, indolil, triazolil, isotiazolil, isoxazolil, imidizolil, benzotiazolil, pirazinil, pirimidinil, tiazolil e tiadiazolil.
Os termos "heterociclo" e "Het" são definidos como um anel aromático de 4-, 5- ou 6 membros, tendo um ou mais, tipicamente um a três, heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio e enxofre presentes no anel, e opcionalmente substituído com alquil, halo, aril, alcóxi, Ci_3alquilenoHet, Ci-3alquilamino, Ci.3alquilenoalquilamino e haloaril. Exemplos não limitantes incluem tetraidrofurano, tetraidropirano, piperidina, piperazina, sulfolano, morfolina, 1,3-dioxolano, tetraidropirano, dioxano, trimetilenoóxido e assemelhados. 0 termo "halogênio" ou "halo" é definido aqui para incluir flúor, cloro, bromo e iodo.
Os termos "alcóxi" e "arilóxi" são definidos como -0R, onde R é alquil ou aril, respectivamente. 0 termo "alcoxialquil" é definido como um grupo alcóxi ligado a um grupo alquil. 0 termo "propargil" é definido como R-C=C-CH2-, onde R é hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída. 0 termo "alil" é definido como R-CH=CHCH2-, onde R é hidrogênio, alquila leve, haloalquila, cicloalquila, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída. 0 termo "hidroxi" é definido como -OH. 0 termo "hidroxialquila" é definido como um grupo hidróxi ligado a um grupo alquila. 0 termo "amino" é definido como -NH2. 0 termo "alquilamino" é definido como -NR2 onde pelo menos um R é alquila e o segundo R é alquila ou hidrogênio. 0 termo "acilamino" é definido como RC(=0)NH, onde R é alquil ou aril. 0 termo "nitro" é definido como -N02. 0 termo "alquiltio" é definido como -SR, no qual R é alquil. 0 termo "alquilsulfinil" é definido como R-S(0)2, onde R é alquil. 0 termo "alquilsulfonil" é definido como R-S(03), onde R é alquil. E incorporações preferidas, R5 é metil, R7 é metil ou benzil, R2 é metil ou difluorometil, R4 é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, metil, trifluorometil, ciclopropil, benzil e fenil, e R é selecionado de um grupo constituído de hidrogênio, acetil e benzoil. Preferivelmente, R é selecionado de um grupo constituído de: Preferivelmente, R3 é selecionado de um grupo constituído de: onde Ac é CH3C(=0) e tBu é C(CH3)3.
Em incorporações mais preferidas, R1 é selecionado de um grupo consistindo de ciclopentil, benzil, tetraidrofuril, indanil, norbornil, fenetil, fenilbutil, metilenociclopropil, metilenotetraidrofuril, etilenotienil, Ci-4alquilenociclopentil, metilenoindanil, Cx_ 4alquilenofenil, fenilpropargil, fenilalil, 3- (4- clorofenil)-(1,2,4-oxadiazo-5-il)metil, Cx-4alquilenofenoxi, Ci_4alquilenobifenil, Cx.4alquilenocicloexil, piranil, metileno ligado por ponte a alquil, tetraidronaftil, decaidronaftil e Cx.4alquil, onde R1 é opcionalmente substituído por um ou mais fenil, hidroxi, metoxi, metil, etil, trifluorometil, fluoro, fenoxi, t-butil, metoxi, ciclopropil e halofenil; R2 é selecionado de um grupo constituído de metil e difluorometil; R3 é selecionado de um grupo constituído de C02CH3, C(=0)CH20H, C (=0) CH (CH3)-OH, C(=0)C(CH3)20H, C(=0)C(=0)NH2í C (=0)0(=0) OH, C(=0)CH2NH2, C (=0) CH (OH) CH20H, C (=0) CH (OH) CH2CH2CH3, R4 é hidrogênio; R5 é metil; R6 é hidrogênio e R8 e R9, independentemente, são selecionados de um grupo constituído de hidrogênio e alquila leve, ou formam um anel de 5 ou 6 membros. A presente invenção incluí todos os possíveis estereoisômeros e isômeros geométricos de compostos de fórmula estrutural (II), e inclui não somente compostos racêmicos mas também os isômeros oticamente ativos como um todo. Quando um composto de fórmula estrutural (II) é desejado como um simples enantiômero, ele pode ser obtido ou por resolução do produto final ou por síntese estereoespecífica a partir de material de partida isomericamente puro ou a partir do uso de um reagente quiral auxiliar, por exemplo, veja Z.Mais et al., "Tetraedron: Assimetry", 8(6), págs 883-888 (1997). A resolução do produto final, um intermediário ou um material de partida podem ser conseguidos por quaisquer métodos adequados conhecidos pelo estado da arte. Adicionalmente, em situações onde os tautômeros dos compostos da fórmula estrutural (II) são possíveis, a presente invenção é compreendida como incluindo todas as formas tautoméricas dos compostos. Como demonstrado adiante, estereoisômeros específicos exibem uma excepcional habilidade em inibir o PDE4 sem manifestar os efeitos colaterais adversos do SNC, tipicamente associados com inibidores de PDE4.
Em particular, é geralmente aceito que os sistemas biológicos possam exibir atividades muito sensíveis em relação à natureza estereoquímica absoluta dos compostos (Veja, E.J.Ariens, "Medicinal Research Reviews", 6:451-466(1986); E.J.Ariens, "Medicinal Research Reviews", 7:367-387 (1987); K.W.Flower, "Handbook of Stereoisomers: Therapeutic Drugs", CRC Press, editado por Donald P. Smith, pp. 35-63 (1989) e S.C.Stinson, "Chemical and Engineering News", 75:38-70 (1997)).
Por exemplo, rolipram é um inibidor estereoespecífico do PDE4 que contém um centro quiral. 0 enantiômero (-) do rolipram tem um mais alto potencial farmacológico que o enantiômero ( + ) , que pode ser relacionado à sua ação antidepressiva potencial. Schultz et al., "Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol", 333:23-30 (1986). Além disso, o metabolismo do rolipram parece ser estereoespecífico com o enantiômero (+) exibindo uma mais rápida taxa de clareamento que o enantiômero (-). Krause et al., "Xenobiotica", 18:561-571 (1988). Finalmente, uma recente observação indicou que o enantiômero (-) do rolipram (R-rolipram) é cerca de dez vezes mais emético que o enentiômero (*) (S-rolipram). A.Robichaud et al., "Neuropharmacology", 38:289-297 (1999). Essa observação não é facilmente reconciliada com as diferenças na disposição do teste em animal para isômeros do rolipram e com a habilidade do rolipram em inibir a enzima PDE4. O composto da presente invenção pode ter três ou mais centros quirais.
Tal como mostrado abaixo, compostos de uma específica orientação estereoquímica exibem similares atividades inibitórias do PDE4 e atividade farmacológica, mas alteram a toxicidade ao SNC e o potencial emético.
De acordo com o exposto, compostos preferidos da presente invenção têm a fórmula estrutural (III) : Os compostos da fórmula estrutural (III) são inibidores potentes e seletivos do PDE4, e não manifestam os efeitos adversos ao SNC e nem o potencial emético demonstrado pelos estereoisômeros de um composto da fórmula estrutural (III).
Compostos com a fórmula estrutural (II) que contém partes ácidas podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com cátions adequados. Cátions aceitáveis farmaceuticamente adequados incluem cátions dos metais alcalinos (por exemplo, sódio ou potássio) e cátions de metais alcalinos terrosos (por exemplo, cálcio ou magnésio). Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula estrutural (II), que contém um centro básico, são sais de adição ácida formados com ácidos farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos incluem os sais de hidrocloreto, hidrobrometo, sulfato ou bissulfato, fosfato ou hidrogeno fosfato, acetato, benzoato, succinato, fumarato, maleato, lactato, citrato, tartarato, gluconato, metanossulfonato, benzenossulfonato e p-toluenosulfonato. À luz dos termos precedentes, qualquer referencia a compostos da presente invenção aqui relatada, é compreendida por estar incluindo os compostos da fórmula estrutural (II) , assim como sais farmaceuticamente aceitáveis e seus solvatados.
Os compostos da presente invenção podem ser terapeuticamente administrados como compostos químicos limpos, mas é preferível administrar os compostos da fórmula estrutural (II) como composição ou formulação farmacêutica. De acordo com o exposto a presente invenção também fornece um composto da fórmula estrutural (II) para formulações farmacêuticas, junto com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos e/ou profiláticos. Os carreadores são "aceitáveis" quando são compatíveis com outros compostos da formulação e não são deletérios para o próprio recebedor.
Em particular, um inibidor seletivo de PDE4 da presente invenção é usado sozinho ou em combinação com um segundo agente terapêutico antiinflamatório, por exemplo, um agente terapêutico específico para TNFa, tal como ENBREL® ou REMICADE®, que tem utilidade no tratamento da artrite reumatoide. Do mesmo modo, a utilidade terapêutica do antagonismo ao IL-1 tem também sido exibido em modelos animais para artrite reumatoide. Assim, tem-se imaginado que o antagonismo ao IL-1 em combinação com a inibição ao PDE4, que atenua o TNFa, seria eficaz.
Os presentes inibidores do PDE4 são úteis no tratamento de uma variedade de alergias, doenças autoimunes e doenças inflamatórias. 0 termo "tratamento" inclui prevenção, diminuição, parada ou reversão da progressão da severidade da condição ou dos sintomas que estão sendo tratados. Dessa forma o termo "tratamento" inclui a terapia médica e/ou a administração profilática, como apropriado.
Em particular, inflamação significa uma resposta localizada protetora induzida por um dano ou destruição de tecidos, que serve para destruir, dissolver ou expulsar (isto é, seqüestrar) tanto o agente danoso quanto o tecido danificado. 0 termo "doença inflamatória", significa qualquer doença na qual uma resposta inflamatória excessiva ou irregular leva a excessivos sintomas inflamatórios, danos do tecido hospedeiro, ou perda da função tissular.
Adicionalmente, o termo "doença autoimune", tal como usado aqui, significa qualquer grupo de desordens na qual o tecido danificado está associado com uma resposta humoral ou respostas mediadas por células contra os constituintes do próprio corpo. 0 termo "doença alérgica", tal como usado aqui, significa quaisquer sintomas, dano tissular ou perda da função tissular resultante de alergia. 0 termo "doença artrítica", tal como usado aqui, significa qualquer doença da grande família de doenças que são caracterizadas por lesões inflamatórias das juntas, atribuídas a diversas etiologias. 0 termo "dermatite", tal como usado aqui, significa qualquer doença da grande família de doenças da pele que são caracterizadas por inflamação da pele atribuída a uma variedade de etiologias. 0 termo "rejeição de transplante", tal como usado aqui, significa qualquer reação imune direcionada contra um tecido enxertado (incluindo órgãos e células (por exemplo, medula óssea)), caracterizada pela perda de função do tecido enxertado e tecidos vizinhos, dor, exsudação, leucocitose e trombocitopenia. A presente invenção também fornece tanto um método de modulação dos níveis de monofosfato cíclico de adenosina (MFAc) em um mamífero, como um método de tratamento de doenças caracterizadas por elevados níveis de citoquina. 0 termo "citoquina", tal como usado aqui, significa qualquer polipeptídeo secretado que afeta as funções das células, e que modula as interações entre as células na resposta imune ou inflamatória. As citoquinas incluem, mas não estão limitadas a monoquinas, linfoquinas e quimioquínas indepemdentemente de qual célula as produza.
Por exemplo, uma monoquina é referida geralmente como sendo produzida ou secretada por um monócito, entretanto, muitas outras células produzem monoquinas, tais como células assassinas naturais, fibroblastos, basófilos, neutrófilos, células endoteliais, astrócitos cerebrais, células estromais da medula óssea, queratinócitos epidérmicos e linfócitos B. Linfoquinas são geralmente referenciadas como sendo produzidas por células linfócitos. Exemplos de citoquinas incluem, ms não estão limitados a, interleucina- 1 (IL-1), interleucina-6 (IL-6), Fator alfa de Necrose de Tumor (TNFa) e Fator beta de Necrose de Tumor (TNFP) . A presente invenção também fornece um método de redução dos níveis de TNF em um mamífero, que consiste na administração de quantidades efetivas de um composto de fórmula estrutural (II) ao mamífero. 0 termo "reduzindo os níveis de TNF", tal como usado aqui, significa também: a) decaimento excessivo in vivo dos níveis de TNF em um mamífero, para os níveis normais ou abaixo dos níveis normais pela inibição da liberação in vivo do TNF por todas as células, incluindo mas não limitando a monócitos ou macrófagos; ou b) indução de uma regulação de decaimento, a níveis translacional ou de transcrição, de níveis excessivos de TNF in vivo em um mamífero até os níveis normal ou abaixo de normal; ou c) indução de uma regulação de decaimento, pela inibição direta da síntese de TNF como um evento pós- translacional.
Além disso, os compostos da presente invenção são úteis na supressão da ativação de células inflamatórias. 0 termo "ativação de células inflamatórias", tal como usado aqui, significa a indução por um estímulo (incluindo mas não se limitando a citoquinas, antígenos ou auto- anticorpos) a uma resposta celular proliferativa, a produção de mediadores solúveis (incluindo mas não se limitando a citoquinas, radicais oxigênio, enzimas, prostanoides ou aminas vasoativas) ou expressão da superfície celular de novos ou aumentado número de mediadores (incluindo mas não se limitando a antígenos de maior histocompatibilidade ou moléculas de adesão celular) nas células inflamatórias (incluindo mas não se limitando a monócitos, macrófagos, linfócitos T, linfócitos B, granulocitos, leucócitos polimorfonucleares, mastócitos, basófilos, eosinófilos, céliulas dendríticas e células endoteliais). Será apreciado por técnicos especializados que a ativação de uma ou a combinação desses fenótipos nessas células pode contribuir para a iniciação, perpetuação ou exacerbação de uma condição inflamatória.
Os compostos da presente invenção também são úteis para causar o relaxamento da musculatura lisa do sistema respiratório, broncodilatação e prevenção da broncoconstrição.
Os compostos da presente invenção, desse modo, são úteis no tratamento de tais doenças como doença artrítica (tal como artrite reumatoide), osteoartrite, artrite de gota, espondilite, oftalmopatia associada a tiróide, doença de Behcet, septicemia, choque septicêmico, choque endotóxico, septicemia por gram negativos, septicemia por gram positivos, síndrome do choque tóxico, asma, bronquite crônica, rinite alérgica, conjuntivite alérgica, conjuntivite vernal, granuloma eosinofílico, síndrome da ansiedade respiratória adulta (SARA), doença inflamatória pulmonar crônica (tal como doença pulmonar obstrutiva crônica), silicose, sarcoidose pulmonar, dano da reperfusão do miocárdio, do cérebro ou das extremidades, danos do cérebro ou da medula espinhal devido a pequenos traumas, fribrose incluindo a fribrose cística, formação de quelóides, formação de cicatrizes do tecido, aterosclerose, doenças autoimunes, tais como lupus eritematoso sistêmico (SLE) e desordens de rejeição de transplantes (por exemplo, reação e rejeição alografítica do enxerto vs. Hospedeiro (EvH)), glomerulonefrite crônica, doença inflamatória dos intestinos, tal como doença de Crohn e colite ulcerativa, doença proliferativa linfocítica, tal como leucemias (por exemplo, leucemia linfocítica crônica; CLL)(Veja Mentz et al., "Blood 88", pp. 2172-2182(1996)), e dermatose inflamatória tal como dermatite atópica, psoríase, ou urticária.
Os compostos da presente invenção também são úteis no tratamento da obesidade,sozinho ou em combinação com um inibidor de PDE3, e no tratamento e prevenção da nefropatia na diabete do tipo 2 (Veja Mora et al., "New England Journal of Medicine",342,p.441 (2000)) . Inibidores de PDE3 são conhecidos dos técnicos especializados.
Outros exemplos de tais doenças ou condições relacionadas incluindo cardiomiopatias, tal como falha congestiva do coração, pirexia, caquexia, caquexia secundária a infecção ou malignidade, caquexia secundária a síndrome da deficiência imunolõgica adquirida (AIDS), ARC ( complexo relacionado a AIDS), malária cerebral, osteoporose e doença de reabsorção dos ossos, febre e mialgias devido a infecção. Em adição, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento da disfunção erétil, especialmente impotência vasculogênica (Doherty, Jr. et al., patente US 6.127.363), diabete insípida e desordens do sistema nervoso central, tal como depressão e demência com multi-infartos.
Compostos da presente invenção também têm utilidade fora do meio tipicamente conhecida como terapêutico. Por exemplo, o presente composto pode funcionar como preservativo do transplante de órgãos (Veja Pinsk et al., "J.Clin.Invest.", 92, pp. 2994-3002 (1993)) como tal.
Inibidores seletivos do PDE4 também podem ser úteis no tratamento da disfunção erétil, especialmente impotência por vasculogênica (Doherty, Jr et al.,patente US 6.127.363), diabete insipidus ("Kidney Int.", 37, p.362 (1990); "Kidney Int., 35, p. 494,(1989)), e desordens do sistema nervoso central, tal como demência multiinfartiva (Nicholson, "Psychopharmacology", 101, p.147 (1990)), depressão (Eckman et al., "Curr. Ther. Res.", 43, p.291 (1988)), ansiedade e resposta ao estresse ("Neuropharmacology", 38, p.1831 (1991)), isquemia cerebral ("Eur.J.Pharmacol., 272, p.107 (1995)), discinesia tardiva ("J.Clin.Pharmacol., 16, p.304 (1976)), doença de Parkinson (veja "Neurology", 25,p.722 (1975); "Clin. Exp. Pharmacol.
Physiol,26,p.421 (1999)) , e síndrome pré-menstruai. Com relação a depressão, os inibidores seletivos de PDE4 mostram eficácia numa variedade de modelos animais de depressão tais como "desespero comportamental" ou teste de Porsolt ("Eur. J. Pharmacol.", 47,p.379 (1978); "Eur. J.
Pharmacol.", 57, p.431 (1979); "Antidepressants: neurochemical, behavioral and clinicai prospectives", Enna, Malick e Richelson, eds., Raven Press, p.121 (1981)), e o "teste de suspensão de caudda" ("Psychopharmacology", 85, p.367 (1985)) . Recentes pesquisas encontraram que o tratamento crônico in vivo de uma variedade de antidepressivos aumenta as expressões derivadas do cérebro do PDE4 ("J.Neuroscience", 19,p.619 (1999)). Desse modo um inibidor seletivo de PDE4 pode ser usado sozinho ou em conjunto com um segundo agente terapêutico em um tratamento para as quatro maiores classes de antidepressivos: processos eletroconvulsivos, inibidores da monoamino oxidase e recuperação seletiva dos inibidores da serotonina ou norepinefrina. Inibidores seletivos do PDE4 também podem ser úteis em aplicações que modulem a atividade brocodilatadora via ação direta sobre as células do tecido muscular bronquial liso para ao tratamento da asma.
Os inibidores seletivos de PDE4 da presente invenção também podem ser usados no tratamento da infertilidade tanto em machos como em fêmeas. 0 presente inibidor de PDE4 eleva os níveis de AMPc dentro dos granulócitos e desse modo, melhorar a indução da ovulação e da maturação do oócito pela ação da gonadotropina (Tsafriri et al., "Dev, Biol.", 178, pp. 393-402 (1996)). Além disso, os presentes inibidores do PDE4 podem ser usados no tratamento para casais inférteis tendo parâmetros normais de sêmem, pela melhora da mobilidade do esperma sem afetar a reação do acrossoma (veja Fosch et al.,"Hum. Reprod.", 13, pp.1248-1254 (1998)).
Compostos e composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem aquelas nas quais o princípio ativo é administrado a um mamífero em uma quantidade efetiva para atingir a intenção de seu propósito. Mais especificamente, uma "quantidade terapeuticamente efetiva", significa uma quantidade efetiva para prevenir o desenvolvimento do, ou aliviar os sintomas existentes dos sintomas que estão sendo tratados. A determinação da quantidade efetiva está bem dentro das capacidades daqueles especializados na técnica, especialmente à luz das descrições detalhadas aqui fornecidas. 0 termo "mamífero" tal como usado aqui, inclui machos e fêmeas, e engloba humanos, animais domésticos (por ex: gatos e cães), animais de criação (por ex: bovinos, equinos, suínos) e animais selvagens (por ex: primatas, grandes gatos, espécies em zoológicos).
Uma "dose terapeuticamente efetiva" refere-se a uma quantidade do composto que resulta em atingir o efeito desejado. A toxidade e a eficácia terapêutica de tais compostos pode ser determinada por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou em animais experimentais, por exemplo, para determinar o LD50 (a dose letal para 50% da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente efetiva para 50% da população). A relação de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, que é expresso como a razão entre LD50 e ED50. São preferidos os mais altos índices terapêuticos. Os resultados obtidos de tais dados podem ser usados na formulação da faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem de tais produtos fica preferivelmente dentro da faixa de concentrações circulantes que incluem ED50 com pouca ou nenhuma toxidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa dependendo da forma de dosagem empregada, e a rota de administração utilizada. A formulação exata, rota de administração e dosagem podem ser escolhidas pelo médico do indivíduo em virtude das condições do paciente. A quantidade da dosagem e o intervalo podem ser ajustados individualmente para promover níveis plasmáticos do princípio ativo que sejam suficientes para manter os efeitos terapêuticos.
Tal como apreciado por técnicos especializados, as referências aqui ao tratamento se estendem â profilaxia, bem como ao tratamento de doenças estabelecidas ou sintomas. É adicionalmente apreciado que a quantidade de composto da invenção necessária para uso no tratamento, varia de acordo com a natureza da condição que está sendo tratada, com a idade e a condição do paciente e é finalmente determinada por um médico atendente ou um veterinário. Em geral, entretanto, as doses usadas para tratamento em adultos tipicamente estão na faixa de 0,001 mg/kg até cerca de 100 mg/kg por dia. A dose desejada pode ser convenientemente administrada numa simples dose ou como múltiplas doses administradas em intervalos apropriados, por exemplo como duas, três, quatro ou mais sub-doses por dia. Ma prática, o médico determina o regime de dosagem real que seja mais adequado para um determinado paciente, e a dosagem varia com a idade, peso e resposta de um paciente em particular. As dosagens acima são exemplos de casos na média, mais pode haver casos individuais em que dosagens mais elevadas ou menores sejam escolhidas, e estas estão dentro do escopo da presente invenção.
As formulações da presente invenção podem ser administradas de um modo padrão para o tratamento das doenças indicadas, tal como oralmente, parenteralmente, transmucosamente (isto é, sublingual ou via administração bucal), topicamente, transdermicamente, retal, inalação (por ex: nasal ou inalação pulmonar profunda).
Administração parenteral inclui, mas não se imita a intravenosa, intrarterial, intraperitoneal, subcutâneo, intramuscular e intra-articular. A administração parenteral também pode ser realizada utilizando-se a técnica de alta pressão, como POWDERJECT®.
Para administração bucal, a composição pode estar na forma de tabletes ou pastilhas formuladas de maneira convencional. Por exemplo, tabletes e cápsulas para administração oral que podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes (por ex: charope, goma arábica, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilage de amido ou polivinilpirrolidona) , cargas (por exemplo, lactose, açúcar, celulose microcristalina, amido de milho, fosfato de cálcio ou sorbitol), lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, polietilenoglicol ou sílica), desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou sódio glicolato de amido) ou agentes umectantes (por exemplo, laurilsulfato de sódio). Os tabletes podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos pela técnica.
Alternativamente, os compostos da presente invenção podem ser incorporados em preparações líquidas orais tais como suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires,por exemplo. Além disso, as formulações contendo esses compostos podem ser apresentadas como produtos secos para reconstituição com água ou outros veículos adequados antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes de suspensão, como xarope de sorbitol, metilcelulose, xarope de açúcar/glicose, gelatina, hidroximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio e gordura hidrogenada comestível; agentes emulsificantes, como lecitína, monooelato de sorbitol ou goma arábica; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), tais como óleo de amêndoa, óleo fracionado de coco, ésteres oleosos, propilenoglicol e álcool etílico; e preservativos, tais como paraidrobenzoato de metila ou propila e ácido sórbico.
Tais preparações podem também ser formuladas como supositórios, por exemplo, contendo uma base convencional para supositórios, tal como manteiga de cacau ou outros glicerídeos. Composições para inalação tipicamente podem ou ser fornecidas na forma de uma solução, suspensão ou emulsão que pode ser administrada como pó seco ou na forma de aerosol usando um propelente convencional, tal como diclorodifluormetano ou triclorofluormetano. Formulações tópicas ou transdérmicas típicas consistem de veículos aquosos ou não aquosos convencionais, tais como colírios, Cremes, emolientes, loções e pastas, ou estão na forma de pastas medicamentosas, retalho ou membrana.
Adicionalmente, composições da presente invenção podem ser formuladas para administração parenteral por injeções ou infusão contínua. Formulações para injeções podem estar na forma de suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e podem conter agentes da formulação, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão. Alternativamente, o princípio ativo pode estar na forma de pó para constituição com o veículo adequado (por exemplo, estéril, apirogênico, água) antes do uso.
Uma composição de acordo com a presente invenção pode também ser formulada como preparação de depósito. Tais formulações de longa ação podem ser administradas por implantes (por exemplo, subcutânea ou intramuscular) ou por injeção intramuscular. Conseqüentemente, os compostos da invenção podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos (por exemplo, uma emulsão em óleo aceitável), resinas troca íons ou derivados pouco solúveis (por exemplo, sais pouco solúveis).
Para uso veterinário, um composto da fórmula (II) , ou seus sais não tóxicos, é administrado como uma formulação adequada aceitável de acordo com a prática veterinária normal. 0 veterinário pode prontamente determinar a o regime de dosagem e a rota de administração que seja mais apropriada para um determinado animal.
Assim, a invenção fornece em um aspecto adicional uma composição farmacêutica consistindo de um composto da fórmula (II), junto com um diluente farmaceuticamente aceitável ou um carreador adequado. Ξ fornecido adicionalmente pela presente invenção um processo de preparação de uma composição farmacêutica consistindo de um composto da fórmula (II), cujo processo consiste em misturar um composto da fórmula (II), juntamente com um diluente farmaceuticamente aceitável ou um carreador adequado.
Exemplos específicos, não limitantes, de compostos da fórmula estrutural (II) são fornecidos abaixo, as sínteses dos mesmos foram realizadas de acordo com procedimentos mostrados abaixo.
Geralmente, compostos da fórmula estrutural (II) podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas de síntese. Em cada esquema descrito abaixo, entende-se na técnica que grupos protetores podem ser utilizados onde necessários de acordo com o princípio geral da síntese química. Esses grupos protetores são removidos na fase final da síntese sob condições alcalinas, ácidas ou hidrogenolíticas que são evidentes para aqueles especializados na técnica. Pelo emprego de apropriadas manipulação e proteção de quaisquer funcionalidades químicas, a síntese dos compostos da fórmula estrutural (II) não especificamente expressadas aqui, podem ser realizadas por métodos análogos aos esquemas mostrados abaixo. A menos que de outro modo notado, todos os materiais de partida foram obtidos a partir de fornecedores comerciais e utilizado sem purificação adicional. Todas as reações e frações de cromatografia foram analisadas em cromatografia de camada fina em placas de sílica gel de 250 mm, visualizadas com luz UV (ultra violeta) e revelados com I2 (iodo). Produtos e intermediáriso foram purificados por cromatografia em chama ou HPLC de fase reversa.
Os compostos de estrutura geral da fórmula (II) podem ser preparados, por exemplo, por primeiro reagindo benzaldeído dissubstituído (1) com 2-butanona, e depois seguindo o esquema da reação ilustrado abaixo. Outras rotas sintéticas também são conhecidas e disponíveis para pessoas especializadas na técnica. Por exemplo, veja Feldman et al., na patente US 5.665.745, incorporada aqui como referência, para várias reações individuais e os métodos sintéticos descobertos nos Intermediários e Exemplos apresentados a seguir. 0 esquema da reação acima fornece um composto (5) de formula estrutural (II), em que R1 e R2 são determinados pelo benzaldeído de partida, R3 é C(=0)0CH3, R4 é hidrogênio, R5 é metil, R6 é hidrogênio, R7 é metil e R10 é hidrogênio. A seleção apropriada dos materiais de partida ou a realização das reações de conversão no composto (5) , fornecem compostos de fórmula estrutural geral (II) tendo outros substituintes R1 até R7 e R10. A seguir se ilustram as sínteses de vários intermediários e compostos de fórmula estrutural (II) . Os seguintes exemplos são fornecidos para ilustração e não devem ser considerados como limitantes.
Nas estruturas aqui mostradas, para uma ligação faltando um substituinte, o substituinte é metil, por exemplo: Onde nenhum substituinte for indicado como estando ligado a um átomo de carbono ou nitrogênio, entende-se que o átomo de carbono tem o número apropriado de átomos de hidrogênio.
Abreviações que são conhecidas mesmo dos técnicos pouco especializados também são usadas aqui, por exemplo, "Me" para metil, "OMs" para mesilato, "Ph" para fenil, "CH2C12" para cloreto de metileno, "NaOH" para hidróxido de sódio, "EtOAc" para acetato de etila, "NH4OH" para hidróxido de amônio, "MeOH" para metanol, "LiOH" para hidróxido de lítio, "CsC03" para carbonato de césio, "H2" para gás hidrogênio, "TFA" para ácido trifluoracético, "OAc" para acetato, "Ac" para acetil, "t-But" para butil terciário, "sat." para saturado, "h" para hora, "g" para grama, "mmol" para milimol, "eq" para equivalente, "M" para molar e "N" para normal. Síntese geral para as séries de ciclopentila: Síntese geral para as séries indanila: Síntese geral para vários substitumtes R1: Intermediário 1 3-ciclopropilmetoxi-4-metoxibenzaldeído Uma solução de 3-hidroxi-4-metoxibenzaldeído (400g, 2,63mol) e bromometilciclopropano (426g, 3,2mòl) em 1 L dimetilformamida (DMF) foi agitada com carbonato de potássio (K2C03) (483g, 3,5mol) a 55° por 3,5h. Foi então adicionado 11 de água, a mistura foi resfriada em gelo e 0 Intermediário 1 foi filtrado como sólido branco (535g, 99%), m/z 207 (MH+) .
Intermediário 2 3-(indanil-2-oxi)-4-metoxibenzaldeído Processo Mitsunobu Uma solução de 3-hidroxi-4-metoxibenzaldeído (15,2g, lOOmmol, leq), 2-indanol (12,lg, 90mmol, 0,9eq) e trifenilfosfina (26,2g, lOOmmol, leq) em THF seco (300ml) foi tratada por gotejamento com diisopropilazodicarboxilato (DIAC) (19,6ml, lOOmmol, leq). A mistura reacional foi agitada em refluxo por 16h, e depois resfriada e diluída com dietil éter (50Oml). A solução foi lavada com água (2 x 150ml), 1M NaOH (4 x 125ml) e cloreto de sódio saturado (NaCl) (2 x lOOml) , seca com sulfato de sódio (Na2S04) e concentrado até formar um xarope que solidifica em repouso. 0 sólido foi suspenso em Et20 (350ml) e agitado por uma noite para fornecer pequenas partículas. 0 sólido foi coletado por filtração a vácuo e recristalização a partir de etanol/água (21,4g). 0 filtrado etéreo foi concentrado e purificado por cromatografia em chama (sílica gel, coluna de 7,5 x 36cm Biotage KP-Sil, eluído com 25% de EtOAc em heptano) para render um adicional de 5g do Intermediário 2. 1H NMR (300MHz, CDCl3) δ: 9.85 (s, 1H) , 7.49-7.44 (m, 2H) , 7.25-7.16 (m, 4H) , 6.97 (d, J=8.7 Hz, 1H) , 5.29-5.22 (m, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.45 (dd, J=16.7, 6.6 Hz, 2H), 3.24 (dd, J=16.7, 3.6 Hz, 2H). XH NMR (75MHz, CDCl3) δ: 190.9, 155.5, 147.9, 140.4, 130.0, 126.9, 126.8, 124.7, 112.1, 111.0, 78.9, 56.1, 39.7.
Intermediário 3 3-(terc-butoxi)-4-metoxibenzaldeído A uma solução agitada de isovanilina (30,4g, 200mmol) em CH2C12 (200ml) a temperatura ambiente, sob um cobertor de nitrogênio, foram adicionados (2-aza-1-(terc- butoxi) -3-metilbute-l-nil) (metiletil) amina (crua 40ml, cerca de 200mmol) como um agente de alquilação. A cada 2 horas, um outro equivalente molar do agente de alquilação foi adicionado até um total de 5 equivalentes terem sido adicionados, A reação foi realizada por agitação por 16 horas. TLC em 3/7 EtOAc/hexano indicou que a reação estava aproximadamente 80% completa. A mistura foi diluída com CH2C12 (500ml) e lavada com 3M NaOH (4 x 300ml) para remover a isovanilina não reagida. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, MgS04, filtrada e concentrada a vácuo até um óleo marrom cru, que foi cromatografado em chama em 3/1 hexano/EtOAc e seco em vácuo para fornecer um puro Intermediário 3 (22,6g 54%). XH NMR (400MHz, CDC13) δ: 9.84 (s, 1H) , 7.60 (d, 1H) , 7.55 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 3.86 (s, 3H), 1.39 (s, 9H).
Intermediário 4 Ester etílico do ácido (2E)-3-(3-tert-butoxi-4- metoxifenil)-2-metil-acrílico.
Processo Horner-Emmons A uma solução agitada de trietil 2- fosfonopropionato (25,6 ml, 119,4mmol) em THF (120ml) a 0°C sob um cobertor de nitrogênio foi adicionado hexametildissililamida de lítio (1M em THF, 114ml, 114mmol) gotejado por seringa. Depois de 30 minutos, uma solução do Intermediário 3 (22,6g, 108mmol) em THF (40ml) foi adicionada por canulação. Após 2 horas, a 0°C, TLC a 4/1 hexano/EtOAc mostrou reação completa. A reação foi parcialmente concentrada por evaporador rotativo e particionada entre EtOAc (500ml) e água (500ml). A fase orgânica foi lavada com NaCl saturado (500ml), seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 produto cru foi cromatografado em chama em 9/1 hexano/EtOAc, para fornecer, depois de concentração a vácuo, o Intermediário 4 (34,lg 98%) . XH NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.60 (s, 1H) , 7.16 (d, 1H) , 7.12 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.37 (s, 9H) .
Intermediário 5 Ácido (2E)-3-(3- tert - butoxi - 4 - metoxi fenil)-2-metil-acrílico.
Processo de hidrólise do hidróxido de lítio A uma solução agitada do Intermediário 4 (34,lg 116mmol) em dioxano (116ml) a temperatura ambiente sob um cobertor de nitrogênio foi adicionada uma solução de monoidrato de LiOH (5,87g 140mmol) em água (116ml). A
reação foi deixada esfriar até a temperatura ambiente. A reação então foi particionada entre EtOAc (4OOml) e 1M de ácido fosfórico (H3P04) (400ml). A fase orgânica foi isolada, lavada com H20 (400ml) e NaCl saturado (400ml), seco (MgS04), filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o Intermediário 5 como um sólido branco (28,2g 92%). XH NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.66 (s, 1H) , 7.20 (d, 1H) , 7.18 (s, 1H), 6.92 (d, 1H), 3.83 (s, 3H) , 2.16 (s, 3H), 1.38 (s, 9H) .
Intermediário 6 (E) - 4 - (3 - benziloxi - 4 - metoxifenil)-3 - metilbut-3-eno-2-ona.
Processo de condensação de aldol catalisada por ácido.
Uma solução comercialmente disponível de 3 - benziloxi - 4 - metoxibenzaldeído (34g, 0,14mol, leq) e 2- butanona (50ml, 0,56mol, 4eq) em THF seco (50ml)foi resfriada até -4°C. Cloreto de hidrogênio gasoso foi passado através da solução bem agitada por muitos minutos e a mistura reacional foi terminada e estocada a -4°C por 16h. A mistura foi colocada dentro de uma solução resfriada com gelo, bem agitada, e saturada de bicarbonato de sódio (NaHC03) (cerca de 21) . Quando necessário, o pH foi ajustado a >7 com NaHC03 sat., e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 3OOml). A fase de EtOAc foi lavada com NaHC03 (2 x 2OOml) , e NaCl saturado (2 x 200ml) , seco com Na2S04 e concentrada até formar um xarope. A mistura crua foi purificada por cromatografia por chama (sílica gel, coluna de 7,5 x 36 cm Biotage KP-Sil, eluída com 25% EtOAc em heptano) para render o Intermediário 6 (29,lg 70%). ΧΗ NMR (300MHz, CDC13) δ: 7.46-7.27 (m, 6H) , 7.06-6.91(m, 3H), 3.93 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.92 (d, J=l.l Hz, 3H).
Intermediário 7 (E) - 4 - [3 - (indanil - 2 - oxi) - 4 -metoxi fenil] - 3 - metilbut - 3 - eno - 2 - ona.
Preparado a partir do Intermediário 2 por um processo de condensação de aldol do Intermediário 6. LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 323.4 (m+1).
Intermediário 8 (E) - 4 - [3-bromo-4-metoxifenil]-3-eno-2-ona.
Preparado a partir do 3-bromo-4-metoxibenzaldeído pelo processo da condensação de aldol catalisada por ácido do Intermediário 6. lE NMR (300 MHz, CDC13) δ: 7.66 (d, J=2,0 Hz, 1H) , 7.36- 7.41 (m, 2H) , 6.94 (d, J=8.6 Hz, 1H) , 3.94 (s, 3H) , 2.45 (s, 3H), 2,06 (d, J=l.l Hz, 3H).
Intermediário 9 (E) - 4 - [3 - ciclopentiloxi - 4 -metoxifenil] - 3 - metilbut - 3 - eno - 2 - ona.
Preparado a partir do Intermediário 1 pelo processo da condensação de aldol catalisada por ácido do Intermediário 6. XH NMR (300 MHz, CDC13) 5: 7.45 (br s, 1H) , 7.05-6.99(m, 2H) , 6.99 (d, J=8.26 Hz, 1H) , 4.81-4.75, (m, 1H) , 3.89 (s, 3H) , 2.46 (s, 3H) , 2.09 (d, J=l.l Hz, 3H) , 1.98-1.79 (m, 6H), 1.66 -1.60 (m, 2H).
Intermediário 10 Etil (2E) -3- (3- ciclopentiloxi -4- metoxifenil) - 2 - metilpropeno-2-ato.
Preparado a partir de 3-ciclopentiloxi-4- metoxibenzalde[ido disponível comercialmetne, pelop rocedimento de Horne-Emmons do Intermediário 4, para render um líquido marrom (68,4g 100%) XH RMN (400 ΜΗζ, CDC13) δ: 7.64 (s, 1Η) , 7.01- 6.96 (c, 2Η) , 6.87 (τη, 1Η) , 4.77 (m, 1Η) , 4.26 (q, 2Η) , 3.87 (s, 3Η), 2.14 (s,3H), 1.81-1.96 (c, 6Η), 1.59-1.63 (c, 2Η) , 1.34 (t, 3Η). LRMS (Eletrospray, positivo): DA/e 305,3 (m+1).
Intermediário 11 Ácido - (2E) -3- (3- ciclopentiloxi -4- metoxifenil) - 2- metilpropeno-2-6ico. O Intermediário 10 (68,4g; 225mmol) foi hidrolisado pelo processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para fornecer o Intermediário 11 como um sólido laranja (55g, 88%). XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.76 (s, 1H) , 7.06- 7.00 (c, 2H) , 6.89 (m, 1H) , 4.78 (m, 1H) , 3.88 (s, 3H) , 2.17 (s,3H), 1.97-1.83 (c, 6H) , 1.64-1.61 (c, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 275,3 (M-l).
Intermediário 12 Cloreto de (2E) -3- (3- ciclopentiloxi -4- metoxifenil) - 2- metilpropeno-2-ila.
Processo do ácido clorídrico A uma borra resfriada (0°C)e agitada de Intermediário 11 (55g, 199mmol) em CH2C12 anidro (400 ml) , foi adicionada uma solução de cloreto de oxalila em CH2C12 (109ml, 2.0 M, 218mmol, 1.1 eq.) via seringa sob uma atmosfera seca por cloreto de cálcio durante 10 minutos.
Foi observada intensa produção de bolhas. A solução escura resultante foi deixada sob agitação a 0°C por 15 minutos, e então uma quantidade catalítica de DNF foi adicionada via seringa (0,3ml). A solução resultante foi agitada a 0°C por 0,5 horas enquanto as borbulhas diminuem, e depois é deixada aquecendo até a temperatura ambiente e agitada por uma noite (17 horas). A mistura reacional foi diluída com EtOAc (500ml) e foi cuidadosamente extinta com água (250ml). Após vigorosa agitação por 1 hora, as camadas são separadas e a camada orgânica foi lavada com água (400ml) e salmoura (400ml), depois seca (MgS04), filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o Intermediário 12 como um sólido marrom (57,5g, 98%). XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.98 (s, 1H) , 7.11- 7.02 (c, 2H) , 6.92 (m, 1H) , 4.79 (m, 1H) , 3.90 (s, 3H) , 2.22 (s,3H), 2.01-1.82 (c, 6H), 1.68-1.62 (c, 2H) .
Intermediário 13 Etil (2E)-3-(3-indanil-2-oxi-4-metoxifenil)-2- metilpropeno-2-ato Preparado via o processo de Horner Emmons do Intermediário 4 a partir do Intermediário 2. RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.64 (d, 1H) , 7.28- 7.17 (m, 4H) , 7.06 (dd, 1H) , 7.03 (d, 1H) , 6.90 (d, 1H) , 5.20 (c, 1H) , 4.28 (q, 2H) , 3.85 (s, 3H) , 3.39 (dd, 2H) , 3.26 (dd, 2H), 2.16 (d, 3H), 1.36 (t, 3H).
Intermediário 14 Ácido(2E)-3-(3 -indani1-2 -oxi-4 -metoxi f eni1)-2- metilpropeno-2-óico Preparado a partir do Intermediário 13 via o processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (400 MHz, D6 DMSO) δ: 7.56 (s, 1H) , 7.25- 7.11 (m, 5H) , 7.06 (d, 1H) , 6.99 (d, 1H) , 5.22 (c, 1H) , 3.71 (s, 3H), 3.34 (dd, 2H), 3.03 (d, 2H), 2.06 (s, 3H).
Intermediário 15 Cloreto de(2E)-3-(3-indanil-2-oxi-4-metoxifenil)- 2-metilpropeno-2-ila.
Preparado a partir do Intermediário 14 via o processo do ácido clorídrido do Intermediário 12. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8.01 (s, 1H), 7.29-6.93 (m, 7H) , 5.23 (c, 1H) , 3.89(s, 3H) , 3.42 (dd, 2H) , 3.28 (dd, 2H), 2.26 (s, 3H).
Intermediário 16 3-[(2E)-3-(9-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-2- metilpro peno-2-il]-(4R)-4-fenil-l,3-oxazolidi-2-nona.
Processo da acilação da oxazolidinona. A uma solução de R-fenil oxazolidinona (10, Og 61,3mmol) resfriada (-78°C) , suspensa e mecanicametne agitada em tetraidrofurano seco (400ml) foi adicionada uma solução de n-butil lítio em hexanos (27ml de 2,5M, l,leq) via seringa sob uma atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi agitada a -78°C por 0,8 horas, e então a solução do Intermediário 12 (19,9g, 67,4mmol, l,leq) em THF
(lOOml) foi adicionada via cânula. Após agitação a -78°C por 15 minutos, a reação foi deixada aquecer lentamente até OoC por 40 minutos, durante os quais a solução reacional se torna em uma lama grossa. Após agitação a 0°C por 2,5 horas, a reação é extinta com uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio (NH4C1) (300ml) e a massa de THF foi removida por pressão reduzida. 0 resíduo então foi extraído com clorofórmio (CHC13) (3 x 700ml) e as camada orgânicas combinadas foram lavadas com água (300ml) e salmoura (30Oml) e então seca (MgSo4) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer cerca de 33g de um sólido laranja claro. 0 material foi suspenso em EtOAc 10% em hexano (1,2 1) e agitado vigorosamente pro uma noite. O pó fino resultante foi coletado por sucção em funil de Buchner e então seco a vácuo,p ar fornecer 0 Intermediário 16 como um pó castanho (21,8g 88%). XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.41-7.37 (C, 5H), 7.06 (s, 1H) , 7.01-6.97 (C, 2H) , 6.86 (m, 1H) , 5.54 (t, 1H) , 4.77-4.73 (c, 2H) , 4.29 (t, 1H) , 3.87 (s, 3H) , 2.17 (s, 3H), 1.97-1.82 (C, 6H), 1.62- 1.56 (C, 2H).
Intermediário 17 3- [ (2E)-3-(3-indanil-2-oxi-4-metoxifenil)-2- metilpro peno-2-il]-(4R)-4-fenil-l,3-oxazolidi-2-nona.
Preparado a partir do Intermediário 15 via o processo de acilação de oxazolidinona do Intermediário 16. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.43-7.33 (C, 5H) , 7.25-7.15 (m, 4H) , 7.07-6.03 (m, 2H) , 6.89 (d, 1H) , 5.54 (dd, 1H), 5.19 (C, 1H), 4.74 (t, 1H) , 4.28 (dd, 1H) , 3.84 (s, 3H), 3.38(dd, 2H), 3.24 (ddd, 2H), 2.19 (d, 3H).
Intermediário 18 Etil (2E) - 3 - [4 - metoxi - 3 - (fenilmetoxi) fenil] - 2 - metilpropeno-2-ato.
Preparado a partir do 3-beziloxi-4- metoxibenzaldeído via processo de Horner Emmons do Intermediário 4. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.56 (s, 1H) , 7.44 (t, 2H) , 7.36 (t, 2H) , 7.30 (t, 1H) , 7.01 (dd, 1H) , 6.95 (d, 1H) , 6.90 (d, 1H) , 5.18 (s, 2H) , 4.24 (q, 2H) , 3.92 (s, 3H) , 1.98 (d, 3H), 1.33(t, 3H) .
Intermediário 19 Ácido - (2E) - 3 - [4 - metoxi - 3 - (fenilmetoxi) fenil] - 2 - metilpropeno-2-óico.
Preparado a partir do Intermediário 18 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 e usado sem caracterização.
Intermediário 20 Cloreto de (2E) - 3 - [4 - metoxi - 3 - (fenilmetoxi) fenil] - 2 - metilpropeno-2-ila.
Preparado a partir do Intermediário 19 via processo do ácido clorídrico do Intermediário 12. RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.91 (s, 1H), 7.47-7.29 (m, 5H) , 7.10 (dd, 1H) , 7.00 (d, 1H) , 6.95 (d, 1H) , 5.20 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.04 (s, 3H).
Intermediário 21 3-{(2E) - 3 - [4 - metoxi - 3 - (fenilmetoxi) fenil] - 2 - metilpropeno-2-il}(4R)-4-fenil-l,3-oxazolidi- 2-nona.
Preparado a partir do Intermediário 19 via acilação da oxazolidinona do Intermediário 16. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.44-7.29 (m, 11H) , 7.03-6.89 (m, 3H) , 5.52 (dd, 1H) , 5.17 (a, 2H) , 4.73 (dt, 1H). 4.27 (dd, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).
Intermediário 22 (2E)-3-[3-(3-tert-butoxi-4-metoxifenil)-2- metilacriloil ]-4-R-feniloxazolidi-2-nona.
Preparado a partir do Intermediário 5 (25,7g, 97,2mmol) via o processo de acilação de oxazolidinona do Intermediário 16 para fornecer o Intermediário 22 como um sólido branco fosco (39,8g, rendimento quantitativo). XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.42-7.33 (m, 5H), 7.16 (d, 1H), 7.02 (s, 1H) , 6.87 (d, 1H) , 5.55 (dd, 1H) , 4.73 (dd, 1H) , 4.26 (dd, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
Intermediário 23 Trans-(±)-1-[l-benzil-4-(3-benziloxi-4- metoxifenil)-3-metilpirrolidi-3-nil] etanona Ciclização da azometina ilida Uma solução do Intermediário 6 (15g, 50,6mmol, leq) e N-(metoximetil)-N-(trimetilsililmetil)benzilamina (11,9g, 50,6mmol, 0,leq). Após agitação a 0°C por 30 min,, a mistura reacional foi agitada a tempratura ambiente por 16 horas. A solução foi tratada com adição de N- (metoximetil)-N-(trimetilsililmetil)benzilamina (6g, 25,3mmol, 0,5eq), agitada por 1 hora a temperatura ambiente, e tratada pela terceira vez com N-(metoximetil)- N-(trimetilsililmetil)benzilamina (6g, 25,3mmol, 0,5eq). A mistura reacional foi concentrada, e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (500ml). A solução foi lavada com HC1 IN (2 x 60ml com adição de lOml de NaCl saturada) , água (250ml), NaOH 1M (250ml) , água (250ml), NaCl satrurada (2 x lOOml) , seca com Na2S04, e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (silica gel, coluna Biotage KP-Sil 7,5 x 36cm, eluída com éter dietílico, 5- 10%, em diclorometano) para render o Intermediário 23 como um xarope amarelo (17,4g, 80%). *Η RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.44-7.22 (m, 10H) , 6.81-6.72(m, 3H) , 5.41 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.72-3.67(m, 2H) , 3.58 (d, J=13,0Hz, 1H) , 3.08 (d, J=9,7Hz, 1H) , 2.99 (dd, J=8,9Hz, 1H), 2.74 (dd, J=9,lHz, 1H), 2.33 (d, J=9,7Hz, 1H), 2.15 (s, 3H), 0,68 (s, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3)ô: 211.3, 148.4, 147.4, 139.2, 137.2, 132.7, 128.51, 128.50, 128.3, 127.8, 127.4, 127.0, 121.6, 115.2, 111.2, 71.0, 63.8, 60.0, 59.5, 57.9, 56.0, 47.7, 25.6, 20.6.
Intermediário 24 Trans-(+)-1-{l-benzil-4-[3-(indanil-2-oxi)-4- metoxife- nil]-3-metilpirrolidi-3-nil} etanona.
Preparado a partir do Intermediário 7 pelo processo de ciclização da azometina do Intermediário 23. RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.38-7.16(m, 9H) , 6.88 (br s, 1H) , 6.78 (br s, 2H) , 5.18-5.13(m, 1H) , 3.82- 3.73 (m, 2H) , 3.79 (s, 3H) , 3.60 (d, J=13,0Hz, 1H) , 3.41- 3.17 (m, 4H), 3.14 (d, J=9,7Hz, 1H), 3.05 (t, J=8,3Hz, 1H) , 2.84 (t, J=8,3Hz, 1H), 2.44 (d, J=9,7Hz, 1H) , 2.24 (s, 3H) , 0,86 (s, 3H).
Intermediário 25 Éster etílico do ácido (+)l-benzil-4-(3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidi-3-nico.
Preparado a partir do Intermediário 10 pelo processo de ciclização da azometina ilida do Intermediário 23 para render um óleo âmbar (16,7g, 61% de rendimento). XH RMN (300 ΜΗζ, CDCl3) δ: 7.39-7.23(m, 5Η, aromático), 6.91 (s, 1H, aromático), 6.78 (m, 2H, aromático), 4.75(m, 1H) , 4.18(q, 2H, OEt) , 3.86 (m, 1H) , 3.81 (s, 3H, OCH3) , 3.75 (d, 1H, J=13,2Hz), 3.62{d, 1H, J=13,2Hz) , 3.20 (d, 1H, J=9,5Hz), 3.01 (m, 1H) , 2.91(m, 1H) , 2.51(d, 1H, J=9,5Hz), 1.93-1.58 (m, 8H, ciclopentil), 1.28 (t, 3H, Oet), 0.9 (s, 3H CH3) .
Intermediário 26 Trans-(+)-1-[l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4- metoxife- nil)-3-metilpirrolidi-3-nil] etanona.
Preparado de acordo com o processo estabelecido na Patente US 5.665.754.
Intermediário 27 (+)-1-[l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4- metoxifenil)-3-metílpirrolidi-3-nil] metanol. A uma solução magneticamente agitada do Intermediário 25 (9,23g, 21,3mmol) em tolueno seco (lOml) a 0°C foi adicionado hidreto de diisobutilalumínio (64ml, Ι,ΟΜ em CH3C12, 63,9mmol). A mistura foi agitada por 30 minutos a 0°C e depois na temperatura ambiente por 1 hora.
Ao final foi extinta com MeOH (20ml). Uma solução de ácido hidroclorídrico (HCl)(lOOml)foi então adicionada e a mistura foi então agitada por outros 30 minutos. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH3C1 (2 x 20ml). A fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de NH4C1, seca sobre Na2S04, e então concentrada para fornecer um produto oleoso amarelo claro (8,28g; 98% de rendimento). XH RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.31-7.14 (m, 5H, aromático), 6.78-6.71 (m, 3H, aromático), 4.76-4.73(br. m, 1H),3.79 (s, 3H, OCH3), 3.71-3.55(m, 3H) , 3.47-3.10(m,3H), 2.92 (d, 1H, J=9,2Hz) , 2.62 (m, 1H) , 3.35-2.33 (m, 2H) , 1.89-1.58 (m, 8H, ciclopentil), 0.52 (s, 3H CH3) .
Intermediário 28 (+)-l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)- 3-metilpirrolidina-3-carboxaldeído.
Uma solução de cloreto de oxalila (4,87ml, 9,73mmol) em CH2C12 (20 ml) foi resfriada a -78°C sob um cobertor de nitrogênio e agitada enquanto era tratadew com uma solução de dimetil sulfoxido (DIVISO, l,38ml, 19,5 mmol) em CH2C12 (5ml). Observou-se liberação de gases. Quando a adição estava completa, a solução foi agitada por 5 minutos, então a solução do Intermediário 27 (3,5g, 8,85mmol) em CH2C12 (10 ml) foi adicionada por um período de 10 minutos. A mistura foi agitada por 30 minutos, tratada com trietilamina (Et3N)(6,7ml, 44,3 mmol) e permitiu-se que se aquecesse até a temperatura ambiente.
Foi adicionada água ã mistura e as fases resultantes foram separadas. A fase aquosa foi extraída com CH2C12 (2 x 50ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2S04) e concentradas para formar um produto oleoso (3,2g, 92%). RMN (300 MHz, CDC13) δ: 9.63 (s, 1H, CHO) , 7.34-7.21(m, 5H, aromático), 6.78-6.68(m, 3H, aromático), 4.73 (br. m, 1H) , 3.80 (s, 3H, OCH3) , 3.78-3.61(m, 3H) , 3.18-3.11(m, 2H), 2.86-2.81(m, 1H), 2.58-2.52 (m, 1H), 2.43-2.34(m, 2H), 1.87-1.50 (m, 8H, ciclopentil), 0.74 (s, 3H, CH3) .
Intermediário 29 (+)-1-[l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4- metoxifenil)-3-metilpirrolidi-3-nil]-l-hidroxipropano-2- ona. A uma solução de etilvinil éter (0,95ml, 9,91mmol) em THF seco (4ml) a -78°C foi adicionado t-butil lítio 1,7M em pentano (5,25ml, 8,93mmol) e a solução resultante foi aquecida até 0°C. A cor da solução mudou de amarela para incolor. 0 ânion vinílico resultante foi então resfriado a -78°C e a solução do Intermediário 28 (1,95g, 4,96mmol) em THF (lOml) foi adicionada gota a gota. A mistura resultante foi agitada por 45 minutos, extinta com NH4C1 (15ml) saturado e extraída com Et20 (3 x 30 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e então concentrados. 0 produto cru foi dissolvido em ET20 e tratado com ácido sulfúrico concentrado (H2S04) em um funil de separação enquanto era vigorosamente agitado. A solução de Et20 foi lavada com água (3Oml), com solução saturada de NaHC03 (30ml), seca sobre Na2S04 e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia rápida (sílica gel, 20% EtOAc- hexanos) para fornecer 0 Intermediário 29 como um óleo laranja (l,36g, 62% rendimento). RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7.34-7.27 (m, 5H, aromático), 6.77-6.68(m, 3H, aromático), 4.75-4.72(br. m, 1H), 4.13-4.08 (m, 1H) , 3.81 (s, 3H, 0CH3) , 3.79-3.57(m, 3H), 3.26(m, 1H), 2.99 (d, 1H, J=9,2Hz), 2.69-2.64(m, 1H), 2.39 (d, 1H, J=9,2Hz) , 2.25 (s, 3H, OCH3) , 1.94-1.59 (m, 8H, ciclopentil), 0.69 (s, 3H CH3) .
Exemplo 1 Éster metílico do ácido ( + ) - 4 - (3 ciclopentiloxi - 4 - metoxifenil) - 3 - (1 - hidroxi - 1 - metiletil) - 3 -metilpirrolidina-1 carboxílico. A uma solução 3M de brometo de metilmagnésio (0,6ml, 1,8mmol) em Et20 a 0°C, foi adicionada a solução do Intermediário 36 (0,65g, l,73mmol) em THF seco (5ml), gota a gota via uma seringa de bombeamento. A mistura resultante foi agitada a 0°C por 30 minutos, e depois à temperatura ambiente por 1 hora. A mistura reacional foi extinta com NH4C1 saturado (15 ml) e extraída com Et20 (2x10 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 e então concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (sílica gel, 20% EtOAc-hexanos, depois 50%) para fornecer o Exemplo 1 como um óleo laranja (0,37g, 55%) . XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 6.83-6.77(m, 3H, aromático), 4.75-4.74 (br. m, 1H), 3.83 (s, 3H, OCH3) , 3.96- 3.50(m, 4H), 3.73(s, 3H, OCH3), 3.37-3.25(m, 1H), 1.96-1.59 (m, 8H, ciclopentil), 1.22 (s,3H,CH3), 1.07 (s, 6H CH3) .
Intermediário 30 2- [l-benzil-4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-(S)-metílpirrolidi-3-nil]propanol-2. O Intermediário 33 (0,992g, 2,52mmol) foi dissolvido em THF (7,5ml) e a solução foi resfriada a 0°C.
Iodeto de metilmagnésio (3,0M em éter, 2,52ml, 7,6mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada a 0°C por 1,5 hora. Foi adicionado NH4C1 saturado e a mistura reacional foi concentrada â vácuo. 0 resíduo foi diluído com EtOAc e a fase orgânica foi lavada três vezes com NaHCÜ3 saturado, NaCl saturado e então seco sobre Na2S04 e concentrado a vácuo (0,96g, 93%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.33-7.24 (m, 5H) , 6.83- 6.77(m, 3H), 3.86-3.74 (m, 7H), 3.68-3.59 (dd, 2H) , 3.32 (dd, 1H) , 3.24(d, 1H) , 2.48 (dd, 1H) , 2.16(d, 1H) , 1.35-1.28(m, 1H) , 1.21-1.18(m, 5H) , 0.66-0.60 (m, 2H) , 0.56 (s, 3H), 0.38-0.33(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 410,5 (m+1).
Intermediário 31 2- [4-(S)-(3-ciclopropílmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)-metilpirrolidi-3-nil]propanol-2 0 Intermediário 30 (0,96g, 2,3mmol) foi dissolvido em metanol (lOml) e a solução foi tratada com catalisador de Pearlman (20% Pd(OH)2 sobre carbono, 200 mg) e formiato de amônio (l,0g, 15,8mmol). A solução foi aquecida até refluxo por 6 horas. O catalisador foi removido por filtração e a solução foi concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em ETOAc e lavado três vezes com água, NaCl saturado, seco sobre Na2S04 e concentrado a vácuo (384 mg, 52%). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.83-6.79(m, 3H) , 3.86- 3.80(m, 5H), 3.75-3.66(m, 2H), 3.57-3.51(m, 2H) , 3.22- 3.17(m, 1H) , 2.78-2.67 (m, 1H) , 1.34-1.21(m, 7H) , 0.69(s, 3H), 0.66-0.60 (m, 2H), 0.37-0.33 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 320(m+1).
Intermediário 32 2-benziloxi-l-[4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-(1-hidroxi-l-metiletil)-3-(S)-metilpirro- lidi-l-nil] etanona. 0 Intermediário 31 (75mg, 0,23mmol) foi dissolvido em CH2C12 (lml) e a solução foi tratada com N,N- diisopropiletilamina (DIEA)(61μ1, 0,35mmol), e então resfriada a 0°C. Adicionou-se cloreto de benziloxiacetila (55,6μ1, 0,23mmol) e a solução foi agitada a 0°C por 3 horas. A mistura reacional foi diluída com CH2C12 e lavada três vezes com HCl IN, uma vez com água, três vezes com NaHC03 6%, e então seca com Na2S04 e concentrada a vácuo. 0 produto cru (103mg) foi cromatografado com ETOAc/hexano (1:1) para fornecer o Intermediário 32 (21mg, 19%). ^ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.41-7.27(m, 5H) , 6.85- 6.76(m, 3H), 4.66-4.61(m, 2H), 4.13-4.07(m, 2H), 3.94- 3.59(m, 7H), 3.53-3.47(m, 1H), 3.28-3.22(m, 1H) , 1.34- 1.24(m, 2H), 1.24-1.19(m, 2H), 1.14-l.ll(m, 2H), 1.07- 0.98(m, 6H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.36-0.31(m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 320(m+1).
Exemplo 2 1- [4- (S)- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxífenil)-3- (1-hidroxi-l-metiletil)-3-(S)-metilpirrolidi-l-nil]-2- hidroxi etanona. 0 Intermediário 32 (21mg, 45μmol) foi dissolvido em etanol (95%, 2ml) e tratado com catalisador de Pearlman (20% Pd(OH)2 sobre carbono, 20mg). A solução foi submetida a pressão de H2 de 1 atmosfera por 20 horas. O catalisador foi removido por filtração e concentrado a vácuo, para chegar ao Exemplo 2 (15mg, 88%). 1H RMN (CDC13í 400 MHz) δ: 6.87-6.80(m, 3H), 4.20- 4.09(m, 2H), 3.89-3.62(m, 9H), 3.58-3.51(m, 1H), 3.13- 2.87(m, 2H) , 1.35-1.01 (m, 10H), 0.67-0.61(m, 2H), 0.39- 0.33(m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378.4 (m+1).
Intermediário 33 1- [l-benzil-4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-(S)-metilpirrolidi-3-nil] etanona.
Cloreto de oxalila (2,0M em CH2CI2, l,35ml, 2,7mmol) foi adicionado a CH2C12 (4ml) e a solução foi resfriada a -60°C. A solução de DMSO (0,36ml, 5,0mmol) em CH2C12 (l,5ml) foi adicionada lentamente. Essa solução foi agitada por 5 minutos, então 0 Intermediário 66 (l,06g, 2,7mmol) dissolvido em CH2C12 (7,5ml), foi adicionado à solução. A mistura reacional foi agitada por 30 minutos a -60°C, e depois extinta por Et3N (l,9ml). A mistura foi deixada aquecendo até a temperatura ambiente, diluída com água e após agitação vigorosa por diversos minutos, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada três vezes com HCl IN, três vezes com NaHC03 6%, depois seco sobre Ns2S04 e concentrada a vácuo. O Intermediário 33 foi recuperado e usado sem purificação (0,992g, 93%). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 392,4 (m+1) Intermediário 34 Ester metílico do ácido trans-( + )- [3-acetil-4-(3- benziloxi-4-metoxifenil)-3-metil]pirrolidina-l carboxílico.
Uma solução do Intermediário 23 (17,4g, 40,5mmol, leq) em acetonitrila (150ml) foi tratada com cloroformiato de metila (15,6ml, 202,5mmol, 5eq) e então agitada com refluxo por 1 hora. A mistura reacional foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (coluna Biotage KP-Sil de sílica gel, 7,5 x 36cm, eluída com EtOAc 50-60% em heptano) para conseguir o Intermediário 34 como um xarope incolor (13,7g, 85%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.42-7.27 (m, 5H) , 6.82(d, J=8,8Hz, 1H), 6.69 (br, J=8,3Hz, 1H), 6.63 (d, J=1,8Hz, 1H) , 5.15 (s, 2H) , 3.88 (s, 3H) , 3.84 (dd, J=16,3, 11,0Hz, 1H), 3.73(br s, 3H), 3.24/-3.12(2d, J=ll,31/11.0Hz, 1H), 2.09/2.01 (2 s, 3H), 0,84 (s, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 210.0/209.8, 155.2, 149.0, 147.5, 137.0, 130.5/130.0, 128.5, 127.8, 127.2/127.1, 121.2/121.0, 114.9/114/8, 111.5, 70.9, 58.1/57.2, 55.9, 54.4/54.0, 52.5, 50.2/50.0, 48.4/48.0, 26.3, 17.5.
Intermediário 35 Éster metílico do ácido trans-( + )-3-acetil-4-[3- (indani-2-loxi)-4-metoxifenil]-3-metil]pirrolidina-l-carbo- xílico.
Preparado a partir do Intermediário 24 pelo processo do cloroformiato de metila do Intermediário 34. RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7.24-7.16 (m, 4H) , 6.82(d, J=8,8Hz, 1H) , 6..75-6.72 (m, 2H) , 5.18-5.10 (m, 1H), 3.91 (t, J=ll,2,1H) , 3.80(s, 3H), 3.77-3.65 (m, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.42-3.16(m, 5H), 2.17(d, J=6,8Hz, 3H), 1.04 (s, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 210.0/209.8, 155.3, 149.4, 146.9/146.8, 140.5/140.4, 130.5/130.0, 126.7, 124.7, 121.3/121.1, 116.1/115.8, 111.9, 79.2, 58.2/57.4, 55.9, 54.7/54.2, 52.6, 54.7/54.2, 52.6, 50.2/50.0, 48.5/48.1, 39.7, 26.6/26.5, 17.8.
Intermediário 36 Ester metílico do ácido trans-(+)-3-acetil-4-(3- cilcopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidina-l-carboxí- lico.
Preparado de acordo com o processo mostrado na patente US 5.665.754. A forma racêmica do Intermediário 46.
Intermediário 37 Éster metílico do ácido trans-(±)-[3-acetil-4-(3- hidroxi-4-metoxifenil)-3-metil]pirrolidina-l-carboxílico.
Uma solução do Intermediário 34 (8,7g, 21,9mmol) em etanol (50ml) foi agitada por 16 horas sob H2 (344,5 N/m2) na presença do catalisador de paládio sobre carbono (0,5g, 10%Pd/C). 0 catalisador foi retirado do meio por filtração através de leito de terras diatomáceas, seguido por filtração em membrana de 0,22 μιη. 0 filtrado foi concentrado a vácuo para fornecer o Intermediário 37 como um xarope claro (6,5g, 97%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ: 6.79 (d, J=8,3Hz, 1H) , 6.74 (d, J=l,8Hz, 1H), 6.63 (br d, J=8.3Hz, 1H), 6.04 (Br s, 1H), 3.96-3.85 (m, 1H) , 3.87(s, 3H), 3.75/3.73 (2 s, 3H), 3.74-3.59(m, 3H) , 3.36/3.26 (d, J=ll.2/11.0Hz, 1H) , 2.17/2.15(2 s, 3H), 1.01 (s, 3H) . 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 210.0/209.8, 155.3, 145.9/145.8, 145.5, 131.2/130.8, 119.9, 114.5, 110.6, 58.1/57.2, 55.8, 54.4/53.9, 52.5, 50.3/50.1, 48.4/48.0, 26.3, 17.6.
Intermediário 38 Ester metílico do ácido trans-3-acetil-4-[exo-3- (biciclo [2.2.1]hepttil-2-oxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirro- lidina-1-carboxílico.
Preparado pelo processo Mitsunobu do Intermediário 2 a partir do Intermediário 37 e endo- norborneol (36% de rendimento). 3H RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 6.80(d, J=8,2Hz, 1H) , 6.66(d, J=9.0Hz, 1H), 6.62(s, 1H) , 4.15-4.08(m, 1H), 3.95- 3.86 (m, 1H), 3.83 (s, 3H) , 3.74 (s, 3H), 3.73-3.60(m, 3H), 3.37-3.60 (m, 3H) , 3.37/3.28 (d, J=ll.2/10.8Hz, 1H) , 2.47 (br s, 1H), 2.32 (br s, 1H), 2.17/2.15 (2s,3H), 1.76-1.66 (m, 2H) , 1.63-1.45 (m, 3H), 1.28-1.08 (m, 3H) , 1.02/1.01 (2 s, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 210.0/210.3, 155.7, 149.6, 147.4, 130.8/130.76, 130.3, 120.9/120.7/120.5, 115.6/115.4/115.3/115.2, 112.2, 81.5, 58.6/57.8, 56.4, 54.9/54.6, 52.9, 50.6/50.5, 49.1/49.0/48.7, 41.5, 40.4, 35.8/35.7, 28.8, 26.9/26.8, 24.7/24.6, 18.2.
Intermediário 39 Éster metílico do ácido trans-[3-acetil-4-[4- metoxi-3-(l-metil-3-fenil-propoxi)fenil]-3-metilpirrolidina -1]carboxílico.
Preparado pelo processo Mitsunobu do Intermediário 2 a partir do Intermediário 37 e endo- norborneol (36% de rendimento). RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.29-7.15 (m, 5H) , 6.82(d, J=8,3Hz), 6.72-6.63(m, 2H), 4.33-4.25(m, 1H), 3.94- 3.59 (m, 4H), 3.84(s, 3H) , 3.74(br s, 3H) , 3.36/3.27 (2dd, J=ll.2Hz, 3.0/10.9, 3.9Hz, 1H) , 2.88-2.69 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 4H), 1.95-1.83 (m, 1H), 1.33/1.31(2d, J=2.3/2.3Hz, 3H), 1.01/0.99(28, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 209.9, 155.4, 149.8, 147.1, 141.9, 130.4/129.9, 128.5, 128.4, 125.8, 121.2, 116.9, 111.9, 74.8, 58.1/57.3, 55.9, 54.6/54.3, 52.6, 50.2/50.1, 48.6/48.2, 38.1, 31.8, 26.6, 19.9, 17.7.
Intermediário 40 Ester metílico do ácido trans-(+)-3-acetil-4-(4- metoxi-3-fenetiloxifenil)-3-metilpirrolidina-l carboxílico.
Preparado pelo processo Mitsunobu do Intermediário 2 a partir do Intermediário 37 e feniletanol- 2. XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7.36-7.23 (m, 5H) , 6.82(d, J=8,2Hz, 1H) , 6.70(d, J=8,4 Hz, 1H) , 6.66(s, 1H) , 4.18 (t, J=7,5Hz, 2H), 3.92-3.81(m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.76- 3.61(m, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.40/3.27 (2d, J=ll,2/10.9Hz, 1H), 3.15 (t, J=7.5Hz, 2H), 2.16/2.12 (2s, 3H), 1.00(s, 3H) .
Intermediário 41 Ester metílico do ácido trans-3-acetil-4-[4- metoxi-3-(tetraidrofuranil-3-oxi)fenil]-3-metilpirrolidina- 1 carboxílico.
Preparado pelo processo Mitsunobu do Intermediário 2 a partir do Intermediário 37 e 3- hidroxitetraidrofurano. *H RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 6.85-6.63 (m, 3H) , 4.92-4.88(m, 1H) , 4.07-3.62 (m, 8H) , 3.84(s, 3H) , 3.75(m, 3H) , 3.39/3.29(2d, J=ll.2/10.2Hz, 1H) , 2.19-2.14(m, 5H) , 1.02(br s, 3H). 13C RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 210.0/209.9, 155.4, 149.5, 146.5, 130.0, 121.6/121.5, 116.5/116.4/116.3, 112.0, 111.0, 78.9, 73.0, 67.2, 58.1/57.3, 55.9, 54.6/54.3, 52.6, 50.1/50.0, 48.4/48.0, 33.0, 26.6, 17.8.
Intermediário 42 (4R)-3 -{[(3 S,4 S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxife- nil-4-oxi-metoxifenil)-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]car- bonil}-4 -fenil-1,3-oxazolidinona-2. À uma lama gelada (-4°C) e agitada de acil oxazolidinona (9,30g, 22,8mmol) e N-(metoximetil)-N- (trimetilsililmetil)benzílamina (ll,7ml, 45,6mmol, 2eq) em CHC13 (65ml) foi adicionada uma solução de TFA em CHC13 (4,6ml de 1,0 M, 4,6mmol, 0,2eq) via seringa sob uma atmosfera de nitrogênio. A lama resultante foi agitada a cerca de 0°C por cerca de 4 horas, e depois por cerca de uma noite a 15°C (banho de água) . A solução turva resultante foi então resfriada a -4°C, tratada com uma porção adicional de N-(metoxi-metil)-N-(trimetil-silil- metil)benzílamina (5,9ml, 22,8mmol, leq) via seringa e deixada sob agitação por mais 5 horas, tempo durante 0 qual a mistura reacional tornou-se homogênea. O TLC (5% Et20 em CH2C12) mostrou que a reação estava completa. A massa de CHCI3 foi removida a pressão reduzida, e 0 resíduo foi diluído com EtOAc (250ml) e lavado sucessivamente com HC1 IN aquoso (2 x 50ml) , NaOH IN aquoso (50ml) e salmoura (50ml). A camada orgânica foi então seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para produzir um semi-sólido alaranjado (13,9g). A purificação via cromatografia rápida sobre sílica gel (2% éter em CH2C12) forneceu o diastereoisômero em maior quantidade como uma espuma branca (8,25g, 65%).
Seletividade diastereomérica de cerca de 10:1 (HPLC). XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.42-7.21 (c, 10H) , 6.95 (s, 1H), 6.81 (s, 2H) , ,55(dd, 1H) , 4.74 (t, 1H) , 4.68 (m, 1H), 4.10(dd, 1H) , 3.93 (t, 1H), 3.70(d, 1H), 3.68 (s, 3H) , 3.56 (d, 1H), 3.42(d, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.64 (d, 1H), 2.48(m, 1H), 1.85-1.78(c, 2H), 1.75-1.61 (c, 4H) , 1.57-1.53 (c, 2H), 0,96 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 555.2 (m+1).
Intermediário 43 Ácido(3 S,4 S)-l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4-meto- xifenil)-3-metilpirrolidina-3 carboxílico.
Uma suspensão de peróxido de lítio (0,5g, 10,8mmol) em água-THF (1:1, 6ml) foi adicionada a uma solução do Intermediário 42 (3,Og, 5,4mmol) em água-THF
(3:1, 30ml) a 0°C sob um cobertor de nitrogênio. A suspensão solubiliza imediatamente. Após 1 hora de agitação a 0°C, foi adicionada uma solução de sulfito de sódio (Na2S03) (1,5N, 12ml) para extinguir o excesso de peróxido, e o THF foi removido por pressão reduzida. 0 resíduo básico foi extraído com três partes de 30 ml de CH2C12. a fase aquosa foi acidifiçada o pH 1 com HCl aquoso 1,0N, e extraída com 3 porções de 30ml de Et20. O extrato etéreo foi seco (Na2S04) , concentrado sob pressão reduzida e usado sem qualquer purificação posterior. ΧΗ RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 10.73 (br.s, 1H, COOH), 7.62 (br.s, 2H, aromático), 7.38-7.36 (m, 5H, aromático), 6.78(s, 1H, aromático), 6.69(m, 2H, aromático), 4.71(br s, 1H) , 4.51-4.48(m, 2H) , 4.24-4.11 (br.s, 2H) , 4.08-3.88(br. s, 1H), 3.76(s, 3H, 0CH3) , 3.54 (br.s, 1H) , 3.1 (br.s, 1H) , 1.83-1.52(m, 8H, ciclopentil), 1.05 (br.s, 3H, CH3).
Intermediário 44 Metoxi metil amida do ácido (3S,4S)-l-benzil-4- (3-ciclopentiloxi-4-metoxi-fenil)-3-metil-pirrolidina-3 carboxílico. O Intermediário 44 foi preparado a partir do Intermediário 43 (2,lg, 4,98mmol), 1,1'-carbonidiimidazol (0,89g, 5,47mmol) e hidrocloreto de N,0- dimetilhidroxilamina (0,73g, 7,47mmol) para fornecer o Intermediário 44 (0,9g, 40%) como um pó branco cristalino. RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7.4-7.3 (m, 5H, aromático), 7.06 (d, 1H, J=l,7Hz, aromático), 6.89 (dd, J=8,3Hz, aromático), 6.73(d, 1H, J=8,3Hz, aromático), 4.77- 4.75(m, 1H) , 4.16-4.06 (m, 1H), 3.81(s, 2H, OCH3) , 3.81- 3.71 (m, 2H) , 3.60(s, 3H, 0CH3) , 3.60 (s, 3H, OCH3) , 3.21 (s, 3H, NCH3), 2.78 (d, 1H, J=9,6Hz), 2,77(m, 1H), 2.04 (s, 3H, CH3), 1.92-1.59(m, 8H, ciclopentil), 0.94 (s, 3H, CH3) .
Intermediário 45 1-[(3S,4S)-l-benzil-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-pirrolidi-3-nil] etanona.
Uma solução do Intermediário 44 (0,17g, 0,43mmol) em THF (8ml) foi resfriada a -78°C e tratada com metil lítio (1,5M em THF, 0,315ml, 0,47mmol) sob um cobertor de nitrogênio. A solução foi agitada por 40 minutos a -78°C, depois extinta com uma solução aquosa gelada saturada de NH4C1 (8ml) . Foi adicionada uma mistura de hexanos/CH2Cl2 (3:1, 8ml) sob vigorosa agitação. Depois de uma diluição adicional com mais hexanos/CH2Cl2 (3:1, lOml), foi adicionada salmoura (lOml) e as duas fases foram separadas. A fase aquosa foi lavada com CH2C12 (8ml) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (Na2S04), filtrados e concentrados sob pressão reduzida até um produto oleoso (154mg, 89%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7.39-7.24(m, 5H, aromático), 6.82-6.70 (m, 3H, aromático), 4.74 (br.s, 1H) , 3.81 (s, 3H, OCH3), 3.78-3.51(m, 3H) , 3.14(d, 1H, J=9,7Hz), 3.05 (m, 1H), 2.84 (m, 1H), 2.40 (d, 1H, J=9,7Hz), 2.23 (s, 3H, CH3), 1.92-1.59 (m, 8H, ciclopentil), 0.83 (s, 3H, CH3) .
Intermediário 46 Ester metílico do Ácido(3S,4S)-3-acetil-4-(3- ciclopentiloxi-4-meto-xifenil)-3-metilpirrolídina-l carboxílico. A uma solução agitada do Intermediário 45 (0,154g, 0,38mmol) em acetonitrila (lOml) fopi adicionado cloroformiato de metila (0,146ml, l,89mmol). A solução foi aquecida até 80°C e refluxada por e horas. A solução foi então resfriada até a temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por HPLC de fase reversa forneceu o Intermediário 46 como um óleo (93mg, 65%). Rotação específica: [a]25g23 = +2,5 (c = 1,0 , EtOH) . 3H RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 6.8(d, 1H, J=8,0Hz, aromático), 6.66 (s, 1H, aromático), 6.66 (s, 1H, aromático), 4.73(s, 1H), 3.95-3.64(m, 4H), 3.83(s, 3H, OCH3), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.37 e 3.27(s, 3H, CH3) , 2.17 e 2.14(s, 3Η, CH3), 1.92 -1.59 (τη, 8H, ciclopentil) , 1.03 e 1.02 (s, 3H, CH3) .
Intermediário 47 (3 S,4 S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3- metil -l-benzilpirrolidina-3-carbaldeído.
Processo Geral de Redução/Oxidação da Oxazolidinona. A uma solução agitada e resfriada (-78°C) do Intermediário 42 (15,09g, 27,2mmol) em tolueno (250ml) foi adicionada uma solução de hidreto de alumínio e lítio em tetraidrofurano (16,3ml de 1,0 M, 16,3mmol, 0,6eq) via seringa sob uma atmosfera de nitrogênio.
Observou-se intensa produção de borbulhas. A solução resultante foi deixada sob agitação a -78°C por 2 horas, após o que o banho gelado foi retirado. A reação foi extinta com a adição sucessiva de água (0,62ml), 15% do NaOH aquoso (0,62ml) e água (l,9ml). A mistura resultante foi deixada aquecer até a temperatura ambiente, agitada por 30 minutos, e então diluída com Et30 (500ml) e seca (MgS04) . A filtração e a concentração a vácuo forneceram o álcool (com algum aldeído presente) como um produto semi- sólido (14,8g). Esse material foi utilizado sem qualquer purificação posterior. A uma solução resfriada (-78°C) e agitada de cloretro de oxalila em CH2CI2 (10,9ml, de 2,0M, 21,8mmol, 0,8eq.) foi adicionado DMSO (3,lml, 43,5mmol, l,6eq) em mais CH2C12 (75ml) via seringa e sob atmosfera de nitrogênio. Após agitação a -78°C por 20 minutos, uma solução de álcool bruto em CH2C12 (75ml) foi adicionada através de cânula. A solução amarela resultante foi deixada sob agitação a -78°C por 20 minutos, e então Et3N (15,2ml, 109mmol, 4eq) foi adicionada via seringa. A reação foi deixada sob agitação a -78°C por 20 minutos, e depois aquecida até a temperatura ambiente e agitada por mais 1 hora. A reação foi extinta com salmoura (150 ml), e então extraída com CH2C12 (2 x lOOml) . Os extratos orgânicos combinados foram secos (MgS04) , filtrados e concentrados a vácuo para fornecer o aldeído bruto. A purificação foi realizada via cromatografia rápida em sílica gel (25% EtOAc em hexanos) fornecendo o aldeído como um óleo límpido e incolor. (9,8g, 92%). XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 9.64 (s, 1H), 7.37-7.26 (c, 5H) , 6.78-6.76 (s, 2H) , 6.70 (m, 1H) , 4.74 (m, 1H) , 3.82 (s, 3H), 3.70(m, 1H), 3.64-3.62 (c, 2H), 3.18-3.13(c, 2H), 2.84 (t, 1H) , 2.41(d, 1H) , 1.94-1.83(c, 6H) , 1.63-1.59 (c, 2H), 0.74 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 394.3 (m+1) Intermediário 48 (4R)-3-{[(3S,4S) -4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxife- nil)-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]carbonil}-4-fenil-l,3- oxazolidinona-2.
Preparado via processo de cicloadição de azomethina do Intermediário 23 a partir do Intermediário 17. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.45-7.12 (m, 15H) , 6.95(d, 1H), 6.78(d, 1H), 5.54(dd, 1H), 5.17 (c, 1H), 4.69(t, 1H), 4.22 (dd, 1H), 4.11(t, 1H), 3.84-3.60(m, 5H), 3.51(d, 1H), 3.37(dt, 2H) , 3.21(dd# 2H), 2.90(d, 1H), 2.85(dd, 1H), 1.12(s, 3H).
Intermediário 49 (3S,4S)-4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxífenil)-3- metil-l-benzilpirrolidina-3-carbaldeído.
Preparado a partir do Intermediário 48 via processo de redução/oxidação do Intermediário 17. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 9.65(s, 1H), 7.36-7.17 (m, 9H) , 6.84 (d, 1H) , 6.79 (d, 1H) , 6.76 (dd, 1H) , 5.16 (c, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.76(d, 1H), 3.68-3.63 (c, 1H) , 3.40- 3.31(m, 2H) , 3.24-3.13(m, 2H) , 2.85(dd, 1H) , 2.43(d, 1H) , 0.77 (s, 3H).
Intermediário 50 (IR)-1-{[(3S,4S)-4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxife- nil)-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1. 0 diastereoisômero desejado mais polar. Preparado via processo de Adição de Grignard do Intermediário 56 a partir do Intermediário 49. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.39-7.17 (m, 9H) , 6.84-6.77(m, 3H) , 5.17(c, 1H) , 3.80(s, 3H) , 3.72-3.57(m, 4H) , 3.38-3.19(m, 5H) , 3.11(d, 1H) , 2.57 (t, 1H) , 2.12(d, 1H), 1.15(d, 3H), 0.51 (s, 3H) .
Intermediário 51 (IR) -1- [ (3S,4S)-4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxife- nil)-3-metilpirrolídi-3-nil]etanol-1.
Preparado via processo de debenzilação do Intermediário 31 a partir do Intermediário 50. λΕ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.26-7.17 (m, 4H) , 6.81 (s, 3H) , 5.19 (c, 1H) , 3.80 (s, 3H) , 3.74-3.68(m, 2H) , 3.44-3.17(m, 8H), 2.66 (d, 1H), 2.51(brs, 1H) , 1.18(d, 3H), 0.63 (s, 3H).
Intermediário 52 (4R)-3 -{[(3S,4S)-4-[4-metoxi-3-(fenilmetoxi)- fenil]-3-metil-l-benzilpirrolidí-3-nil] carbonil)etanol-4- fenil-1,3-oxazolidinona-2. (Diastereoisômero em maior quantidade).
Preparado via processo de cilcoadição do Intermediário 23 a partir do Intermediário 21. XH RMN (400 ΜΗΖ, CDCl3) δ: 7.49-7.23 (m, 15Η) , 7.09 (d, 1Η), 6.94 (dd, 1H) , 6.80 (d, 1H) , 5.49(dd, 1H) , 5.17(s, 2H), 4.66(t, 1H) , 4.19(dd, 1H), 4.09(t, 1H), 3.87(s, 3H) , 3.68(q, 2H) , 3.51(d, 1H) , 2.85-2.79 (m, 2H) , 2.69(dd, 1H), 0.99(s, 3H).
Intermediário 53 (3 S,4 S)-4-(4-metoxi-3-(fenilmetoxi)fenil)-3- metil-l-benzilpirrolidina-3-carbaldeído.
Preparado via processo de redução/oxidação do Intermediário 47 a partir do Intermediário 52. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 9.56(s, 1H) , 7.43-7.22 (m, 10H), 6.79(d, 1H), 6.77(d, 1H), 6.71(dd, 1H) , 5.14(dd, 2H) , 3.86 (s, 3H) , 3.71(d,lH), 3.62(d; 1H) , 3.57(d, 1H) , 3.13-3.08(m, 2H), 2.73(dd, 1H), 2.30(d, 1H), 0.58(s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): m/z 416,3 (m+1).
Intermediário 54 3- [l-benzil-4-S-(3-terc-butoxi-4-metoxifenil)-3- S-metilpirrolidina-3-carbonil]-4-R-fenil-oxazolidinona-2. A uma solução do Intermediário 22 (39,8g, 97mmol) em CHC13 (292ml) a 0°C e sob um cobertor de nitrogênio, foi adicionado N-(metoximetil)-N-(trimetil-silil-metil)-benzil- amina (49,5ml, 194 mmol) seguido de ácido TFA (1M em CHC13, 9,7ml, 9,7mmol). A lama foi deixada aquecer até a temperatura ambiente por uma noite. TLC em 2/3 EtOAc/hexano indicou a conversão parcial do material de partida em um produto de Rf levemente mais elevado. A solução resultante foi tratada com mais N-(metoximetil)-N- (trimetilsililmetil)-benzilamina (25ml, 97mmol) para consumir o material de partida residual. Após 3 horas na temperatura ambiente, a reação mostrou-se completa pelo TLC. A solução foi concentrada por evaporador rotatório, e então redissolvida em EtOAc (50Oml). A fase organica foi lavada com HCl 2N (2 x 500ml) , NaOH IN (2x 500ml) e NaCl saturada (1 x 500ml) . A fase organica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o Intermediário 54 com uma razão de aproximadamente 12:1 de diastereoisômeros. A cromatografia numa coluna de llOmm x 203,2mm com 1/3 de EtOAc/hexano fornecido. Após concentração a vácuo das frações acumuladas, o Intermediário 54 (4Og, 76%) como uma espuma amarela. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.42-7.20 (m, 10H) , 7.11(3, 1H), 7.05(d, 1H), 6.76(d, 1H), 5.53(dd, 1H), 4.65(dd, 1H) , 4.20(dd, 1H) , 4.08(dd, 1H), 3.77(s, 3H), 3.65(dd, 2H), 3.51(d, 1H), 2.82(dd, 1H), 2.81(d, 1H), 2.71(dd, 1H), 1.34(s, 9H), 1.06 (s, 3H) .
Intermediário 55 (3R)-4-[3-(terc-butoxi)-4-metoxifenil]-3-metil-l- benzilpirrolidina-3-carbaldeído. 5 À uma solução agitada do Intermediário 54 (21,5g, 39,7mmol) em tolueno (400ml) a -78°C sob um cobertor de nitrogênio foi adicionado hidreto de alumínio e litio (1M em THF, 24ml, 24mmol) gotejado de uma seringa por 10 minutos. Após 15 minutos, a TLC em 4/1 CH2C12/Et20 mostrou 0 consumo completo do material de partida e surgindo um material de Rf mais baixa. Foi adicionado metanol (4ml) em tolueno (40ml) cuidadosamente com uma seringa a -78°C produzindo evolução de gás. Quando a evolução de gás cessou, a reação foi deixada aquecer até a temperatura 5 ambiente, e depois tratada com água (1 ml), NaOH 3N (2 ml), e água (1 ml), sequencialmente. Depois de 10 minutos a reação foi diluída com Et20 (300 ml) e agitada por 15 minutos. Foi adicionado sulfato de magnésio e a mistura foi filtrada através de papel de filtro GF/F com Et20. 0 0 produto bruto foi concentrado a vácuo e apareceu no 1H-RMN como sendo aproximadamente uma mistura 4:1 do aldeído necessário sob álcool reduzido. 0 produto bruto foi dissolvido em CH2C12 (40ml). Separadamente, o cloreto de oxalila (2M em CH2C12, ll,2ml, 22,4mmol) foi agitado a -60°C sob um cobertor dce nitrogênio e tratado com DMSO (3,lml, 44mmol) em CH2C12 (15ml) gota a gota com seringa. Após 5 minutos, a solução da mistura aldeído/álcool foi adicionada à solução de cloreto de oxalila/DMSO por uma cânula. A solução foi agitada a -60°C por 45 minutos e então tratada com Et2N (13,8ml, lOOmmol) e deixada aquecer até a temperatura ambiente. A solução foi diluída a 200ml com CH2C12 e lavada com água (1 x 200ml) , HC1 2N (2 x 200ml) , NaHC03 saturado (1 x 200ml) e NaCl saturado (1 x 200ml). As camadas orgânicas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo até um óleo amarelo que foi dissolvido em 1/3 hexano/EtOAc. Após a dissolução, a fenil oxazolidinona clivada foi precipitada e removida por filtração. 0 filtrado foi cromatografado numa coluna de 70mm x 203,2mm com 3/1 hexano/EtOAc para fornecer (depois da concentração a vácuo do produto contendo as frações) o Intermediário 55 puro como um óleo amarelo (13,7g, 90%). ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 9.62(s, 1H), 7.37-7.22 (m, 5H) , 6.92(s, 1H) , 6.84(d, 1H) , 6.79 (d, 1H) , 3.79(s, 3H) , 3.71(dd, 2H) , 3.62(dd, 1H) , 3.17(dd, 1H) , 2.80(dd, 1H), 2.38(dd, 1H), 2.38(d, 1H), 1.35(s, 9H), 0.73(s, 3H).
Intermediário 56 (IR) -1-{[(3S,4S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxife- nil)-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1.
Processo de Adição de Grignard A uma solução gelada (0°C) e agitada do Intermediário 47 (0,96mg, 2,45mmol) em Et20 seco (lOml) foi adicionada uma solução de iodeto de metilmagnésio (ou outro reagente de Grignard) em éter (2,45ml de 3,0 M, 7,35mmol, 3eq) via seringa e sob uma atmosfera de nitrogênio. Após agitação a 0°C por 15 minutos, a reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 2 horas. A reação então foi cuidadosamente extinta com solução aquosa saturada de NH4C1 (40ml) , e extraída com EtOAc (3 x 50ml) .
As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas a vácuo para fornecer 990mg de um óleo laranja. A purificação via cromatografia rápida em sílica gel (CH2C12 para metanol a 5% em CH2C12) conseguindo o diastereoisômero menos polar (419mg, 42%) e o diastereoisômero mais polar (375mg, 37%) como óleos incolores e viscosos.
Diastereoisômero menos polar: (IS) -1-[(3S,4S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.34-7.28 (c, 5H) , 6.79-6.73 (c, 3H) , 4.74 (m, 1H) , 3.82 (s, 3H) , 3.74(q, 1H) , 3.65(q, 2H), 3.53(t, 1H), 3.40 (t, 1H), 2.99(d, 1H), 2.50 (t, 1H), 2.35(d, 1H), 1.94-1.81 (c, 6H), 1.63-1.59 (c, 2H) , 1.10(d, 3H), 0.52 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 410.3 (m+1) Diastereoisômero mais polar: (IR) -1- [ (3S,4S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil) -3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1. RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.33-7.31 (c, 5H) , 6.79-6.72(c, 3H), 4.74(m, 1H) , 3.82 (s, 3H), 3.69-3.56 (c, 4H) , 3.29 (t, 1H) , 3.10(d, 1H) , 2.56(t, 1H) , 2.09(d, 1H) , 2.04 (s, 3H) , 1.92-1.81 (c, 6H) , 1.62-1.59(c, 2H) , 1.13(d, 3H), 0.47 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 410.3 (m+1) Intermediário 57 (IS) -1-{(3 S,4S)-4-[4-metoxi-3-(fenilmetoxi) fenil]-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1.
Diastereoisômero menos polar. Preparado via processo de Grignard do Intermediário 56 a partir do Intermediário 53. RMN (400 MHz, CDCl3) 6: 7.44-7.22 (m, 10H) , 6.80(d, 1H), 6.75(dd, 1H) , 6.67 (d, 1H), 5.71(s, 2H), 3.88(s, 3H) , 3.66(q, 1H), 3.60(d, 2H), 3.43(t, 1H) , 2.92(d, 1H), 2.38(t, 1H) , 2.22 (d, 1H), 0.98(d, 3H), 0.32(s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): m/z 432,5 (m+1) Intermediário 58 (IR)-1-{(3S,4S)-4-[4-metoxi-3-(fenilmetoxi) fenil]-3-metil-l-benzilpirrolidi-3-nil]etanol-1.
Diastereoisômero desejado, mais polar. Preparado via processo de Grignard do Intermediário 56 a partir do Intermediário 53. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.43-7.21 (m, 10H) , 6.79(d, 1H), 6.75-6.70 (m, 2H) , 5.16(dd, 2H), 3.87(s, 3H) , 3.64-3.49(m, 4H) , 3.23(t, 1H) , 3.06(d, 1H) , 2.46(t, 1H) , 1.99(d, 1H), 1.07(d, 3H), 0.28(s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): m/z 432,5 (m+1) Intermediário 59 1-R-[l-benzil-4-S-(3-terc-butoxi-4-metoxifenil)- 3-S-metilpirrolidinil-3] etanol. A uma soluçào agitada de trimetilaluminio (2M em tolueno, 59,4ml, 119mmol) a o°C sob um cobertor de nitrogênio, foi adicionado iodeto de metilmagnésio (3M em Et20, 36ml, 108mmol) . Após 30 minutos a 0°C, a solução de organometálico foi adicionada via cânula para uma solução do Intermediário 55 (13,7g, 36mmol) em CH2C12 (360ml) a - 78°C sob um cobertor de nitrogênio. Após a completa adição, a solução foi agitada a -78°C por 6 horas. A reação foi então aquecida a 0°C e cuidadosamente colocada em tartarato de sódio e potássio (1500ml) 1M, resfriado em gelo, com agitação rápida e diluída com EtOAc (1500ml). Após agitação por 15 minutos, as camadas foram separadas e a fase organica foilavada com tartarato de sódio e potássio 1M !1 x lOOOml) e NaCl saturado (1 x lOOOml). A fase organica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer uma mistura 2,5:1 de diastereoisômeros mais aproximadamente 10% do aldeído residual de partida bruto ^í-RMN. O produto bruto foi cromatografado em uma coluna de llOmm x 203,2mm com 3/7/0,4 de EtOAc/hexano/MeOH para fornecer, depois de acúmulo e concentração a vácuo do diastereoisômero de menor Rf contendo frações, o Intermediário 59 (8,lg, 57%) como um óleo laranja. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.34-7.23 (m, 5H) , 6.86(m, 3H), 6.79(d,1H) , 3.79(s, 3H) , 3.65 (dd, 1H), 3.62 (s, 2H) , 3.58(dd, 1H), 3.29(dd, 1H), 3.10(d, 1H), 2.53(dd, 1H), 2.07(d, 1H), 1.35(s, 9H), 1.12(d, 3H), 0.45 (s, 3H).
Intermediário 60 Ester etílico do ácido3-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-2-metil-E-acrílico.
Um frasco de fundo redondo foi carregado com THF (850ml) e 2-fosfonopropionato de trietila (97,2g, 0,408mol) e a mistura resultante foi resfriada até 0°C, então foi adicionada uma solução do Intermediário 1 (7Og, 0,34mol) em THF (lOOml). Depois da adição gota a gota, a mistura reacional foi mantida a 22°C por 62 horas. A reação foi extinta com NaCl saturado e diluído com EtOAc. Após a separação, a camada orgânica foi lavada com NaCl saturado, seco sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. O óleo verde foi purificado por cromatografia através de leito de Si02 (650g) usando EtOAc/hexanos (1:10) como eluente (40,8g). RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.67-7.61 (m, 1H) , 7.07-7.02(m, 1H), 6.98-6.95(m, 1H), 6.92-6.89(m, 1H), 4.32- 4.25(m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.90-3.85 (m, 2H), 2.15(s, 3H) , 1.38-1.32(m, 4H), 0.70-0.63(m, 2H), 0.41-0.37(m, 2H).
Intermediário 61 Ácido 3- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-2- metil-3-acrílico. O Intermediário 60 (26,9g, 93mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (95ml) e tratado com uma solução de monoidrato de LiOH (4,6g, lllmmol) dissolvido em água (95ml). A solução resultante foi aquecida a 80°C por 3 horas, então agitada por uma noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi colocada dentro d'água (350ml) e extraída duas vezes com Et20 (500ml no total). A camada aquosa foi diluída com EtOAc (350ml) e o pH foi ajustado com H3PO4 (24ml). As camadas foram separadas, a camada de EtOAc foi lavada com água e NaCl saturado, seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo (20,4g). XH RMN (400 MHz, CDCI3) δ: 7.77(s, 1H) , 7.11- 7.07(dd, 1H), 7.02-6.98 (d, 1H) , 6.93-6.90 (d, 1H), 3.39(s, 3H), 3.86(d, 2H), 2.18(s, 3H), 1.39-1.31 (m, 1H) , 0.69- 0.63(m, 2H), 0.39-0.35 (m, 2H) .
Intermediário 62 Cloreto de 3-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)- 2-metil-E-acriloila. O Intermediário 61 (55,8g, 0,213mol) foi dissolvido em CH2C12 (300ml) e resfriado a 0°C com um tubo de secagem acoplado. Foi adicionado cloreto de oxalila (2,0 M em CH2C12, 117ml, 0,234mol) seguido da adição de DMF (l,0ml). A mistura reacional foi mantida a 22°C por diversas horas. A mistura foi diluída com CH2C12 e lavada com água, NaCl saturado e então seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo (65,lg de um sólido amarelo) . XH RMN (400 MHz, CDCI3) δ: 7.97 (s, 1H) , 7.16- 7.11(dd, 1H), 7.03-7.00 (d, 1H) , 6.95-6.91(dd, 1H) , 3.39(s, 3Η) , 3.87 (d, 2H) , 2.23(s, 3H) , 1.39-1.31(m, 1H) , 0.69- 0.64 (m, 2H) , 0.40-0.37 (m, 2H) .
Intermediário 63 3- [3- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-2-metil- E-acriloil]-4-(R)-feniloxazolidinona-2. 4- (R)-feniloxazolidinona-2 (33,Og, 0,202mol) foi dissolvido em THF (11) e resfriado a -78°C. Foi adicionado n-butil lítio (2,5 M em haxano, 79,5ml, 0,198mol) e a mistura reacional resultante foi agitada por 20 minutos. A
solução_ do Intermediário 62 (65,lg, 0,213mol) em THF
(200ml) foi adicionada gota a gota durante 15 minutos. A mistura reacional foi agitada por 1 hora a -78°C e depois aquecida a 0°C, vagarosamente. A mistura reacional tornou- se grossa com sólidos bege. A mistura foi neutralizada a 0°C com NH4C1 (60Oml) e água (300ml) . A solução foi aquecida para 22 °C rapidamente e colocada em CHC13 (240Oml). Após agitação e separação, a camada orgânica foi lavada com água (11), NaCl saturado (11), seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo até um sólido laranja claro (94,4g). RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.41-7.32 (m, 5H) , 7.07-6.98(m, 2H), 6.95-6.93(d, 1H), 6.90-6.86(d, 1H), 5.55- 5.51(dd, 1H), 4.77-4.71(dd, 1H), 4.30-4.26 (dd, 1H), 3.91(s, 3H), 3.85(d, 2H), 2.17(s, 3H), 1.38-1.29 (m, 1H) , 0.66- 0.62(m, 2H), 0.39-0.34(m, 2H).
Intermediário 64 3- [l-benzil-4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-(S)-metilpirrolidina-3-carbonila]-4-(R)-feniloxa- zolidinona-2. 0 Intermediário 63 (94,4g, 0,21mol) foi dissolvido em CHC13 (640ml), e então resfriado a 0°C. Foi adicionado benzilmetoximetiltrimetilsilanilmetilamina (95g, 0,40mol) e a mistura reacional foi tratada gota a gota com uma solução de THF (3,08ml) em CHC13 (4Oml) . A mistura reacional foi agitada por uma noite enquanto era aquecida até 22°C. Adicionou-se mais benzilmetoximetiltrimetil- silanilmetilamina (71,2g, 0,30mol) e então a mistura foi agitada por mais 68 horas adicionais. A Reação foi extinta com NH4C1 saturado (600ml) e separada. A camada orgânica foi lavada duas vezes com HC1 IN (500ml), uma vez com água, uma vez com NaOH IN (500ml), uma vez com água, uma vez com NaHC03 a 6%, uma vez com NaCl saturado, seco sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. 0 material bruto foi cromatografado em Si02 (1,2kg) em duas porções usando hexano/EtOAc (2:1) como eluente (62,3g). ΧΗ RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.44-7.20 (m, 10H) , 7.07(d, 1H) , 6.94-6.91(dd, 1H), 6.78-6.76 (d, 1H), 5.56- 5.50(dd, 1H) , 4.69-4.63(dd, 1H) , 4.21-4.16(dd, 1H) , 3.38- 3.80(m, 2H) , 3.82(s; 2H) , 3.74-3.70 (d, 1H) , 3.64-3.59(d, 1H), 3.50-3.46 (d, 1H) , 2.90-2.86 (d, 1H) , 2.83-2.71(m, 2H) , 1.36-1.29(m, 1H) , 0.64-0.60(m, 2H), 0.38-0.32(m, 2H).
Intermediário 65 l-benzil-4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-(S)-metilpirrolidina-3-carbaldeído. O Intermediário 64 (62,3g, 0,115mol) foi dissolvido em tolueno (11), foi então resfriado a -78°C. a solução foi tratada com hidreto de alumínio e lítio (Ι,ο M em THF, 69ml, 69mmol) por adição lenta. A mistura reacional foi agitada por 0,5 hora, e então foi extinta a -78°C com a adição gota a gota de MeOH (13ml). A mistura reacional foi agitada por 5 minutos a -78°C, aquecida a 0°C, seguindo-se a adição de água (2,62ml), NaOH 15% (2,62ml) e água (7,85ml). A solução foi agitada por 10 minutos, e adicionou-se Et02 (l,5ml) e a mistura resultante foi agitada por uma noite a 22°C. Foi adicionado sulfato de magnésio e depois de 15 minutos de agitação, a solução foi filtrada através de MgS04 e concentrada a vácuo. A RMN mostrou que os produtos dessa reação foram uma mistura do aldeído desejado com o álcool primário (cerca de 4:1) . Esse material foi utilizado sem qualquer purificação posterior na oxidação de Swern seguida abaixo.
Foi adicionado cloreto de oxalila (2,0 M em CH2C12, 25ml, 50mmol) a CH2C12 (75ml) e resfriado a -60°C.
Foi adicionado dimetilsulfóxido (7,lml, lOOmmol) como uma solução em CH2C12 (30ml) por gotejamento. Após 5 minutos, foi adicionada por gotejamento, uma mistura de aldeído/álcool (4:1, 0,115mol, (ca. 0,05mol álcool)), dissolvida em CH2C12. A mistura foi agitada por 30 minutos e então foi adicionado Et2N (31ml, 222mmol) e a solução foi aquecida a 22°C e agitada por uma noite. A reação foi extinta com água e agitada vigorosamente por 20 minutos e então separada. A camada aquosa foi lavada com CH2C12. As camadas orgânicas recombinadas foram lavadas com NaCl saturado, secas sobre Na2S04 e concentradas a vácuo. 0 Intermediário 65 foi purificado por cromatografia de filtração usando hexano/EtOAc (4:1) como eluente (42g). ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 9.64(s, 1H), 7.39-7.23 (m, 5H), 6.81-6.71 (m, 3H) , 3.83(s, 3H) , 3.83-3.81(m, 2H), 3.80-3.75(d, 1H), 3.67-3.61(m, 2H), 3.19-3.11(m, 2H), 2.86- 2.81(m, 1H) , 2.43-2.40(m, 1H) , 1.38-1.29(m, 1H) , 0.76(s, 3H), 0.68-0.62(m, 2H), 0.30-0.37(m, 2H).
Intermediário 66 1- [l-benzil-4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-(S)-metilpirrolidinil-3] etanol.
Trimetilalumínio (2,0 M em tolueno, 2,lml, 4,2 mmol) foi resfriado a 0°C e iodeto de metilmagnésio (3,0 M em éter etílico, l,3ml, 3,95mmol) foi adicionado gota a gota. A suspensão cinza formada foi agitada a 0°C por 3 minutos e então foi adicionada uma solução do Intermediário 65 (0,5g, 1,3mmol) dissolvido em CH2C12 (6,6ml) e resfriada a -78°C, através de uma cânula. A mistura reacional foi agitada a -78°C por 6 horas. A mistura foi então colocada diretamente num funil separador contendo o sal de Rochelle (1M, 150ml). O resíduo foi enxaguado com EtOAc para dentro do funil. A mistura foi diluída com EtOAc e separada. A camada orgânica foi lavada uma segunda vez com o sal de Rochelle, seguido por NaCl saturado, seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi uma mistura (1:1) dos dois álcoois diastereoisoméricos mais uma pequena quantidade de aldeído. Esses materiais foram separados por cromatografia em Si04 com EtOAc/hexanos (1:1).
Carbinol mais polar, desejado: XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.36-7.30 (m, 3H) , 7.28-7.24(m, 2H), 6.81-6.74(m, 3H), 3.85(s, 3H), 3.84- 3.79 (m, 2H), 3.71-3.56(m, 4H), 3.33-3.25 (dd, 1H) , 3.12- 3.09 (m, 1H), 2.59-2.53 (dd, 1H), 2.16-2.08 (d, 1H), 1.38- 1.25(m, 1H) , 1.16(d, 3H) , 0.69-0.61(m, 2H) , 0,49(s, 3H) , 0.39-0.35 (m, 2H) .
Intermediário 67 (IR)-l-{(3S,4S) -4-[3-(ciclopropilmetoxi)-4- metoxi-fenil]-3-(S)-metilpirrolidinil-3} etanol-1.
Preparado a partir do Intermediário 66 pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. RMN (400 MHz, CDC13) δ: 6.88-6.71(m, 3H), 3.92- 3.56 (c, 11H), 3.11-3.05(m, 1H) , 1.37-1.25(m, 1H) , 1.20(d, 2H), 0.72 (s, 3H) , 0,63(d, 2H) , 0.37(m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 306,2 (m+1).
Intermediário 68 (IR)-1-{(3S,4S)-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-metilpirrolidinil-3} etanol-1.
Preparado pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 a partir do isômero 1-(R)carbinol (diastereoisômero mais polar) do Intermediário 56. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 6.81(d, 1H) , 6.75- 6.73(m, 2H) , 4.80(c, 1H) , 3.82(s, 3H) , 3.79-3.68 (m, 5H) , 3.61 (t, 1H), 3.10(d, 1H) , 1.96-1.80(m, 6H) , 1.63-1.57(m, 2H), 1.21(d, 3H), 0,72 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 320,4 (m+1).
Intermediário 69 (IS) -1-{(3S,4S) -4-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxi- fenil)-3-metilpirrolidinil-3} etanol-1.
Preparado pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 a partir do isômero 1-(S) (diastereoisômero menos polar) do Intermediário 56. LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 320,4 (m+1).
Intermediário 70 5-[4-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-metilpirroli- dinil-3]-2-metoxifenol.
Preparado a partir do Intermediário 58 pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 (10% de paládio sobre carbono em lugar do acetato de paládio). ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 6.72 (d, 1H) , 6.67 (d, 1H), 6.59(dd, 1H), 3 .80 (s, 3H), 3.60(qd, 1H), 3.29-3.17(m, 6H) , 3.10 (t, 1H), 2.55(d, 1H), 1.06(d, 3H), 0,56(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): m/z 252,1 (m+1).
Intermediário 71 1-R-[l-benzil-4-S-(3-tercbutoxi-4-metoxifenil)-3- S-metilpirroli-dinil-3] etanol.
Foi adicionado iodeto de metilmagnésio (3M em Et20, 36ml, 108mmol) a uma solução agitada de trimetilalumínio (2M em tolueno, 59,4ml, 119mmol) a 0°C, a solução de organometálico foi adicionada, via cânula, à uma solução do Intermediário 55 (13,7g, 36mmol) em CH2CI2 (360ml) a -78 °C sob um cobertor de nitrogênio. Após adição completa, a mistura foi agitada a -78°C por 6 horas. A reação foi então aquecida até 0°C e cuidadosamente colocada em tartarato de sódio e potássio 1M (1500ml), em gelo, com agitação rápida e diluída com EtOAc (1500ml). Após agitação de 15 minutos, as camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com tartarato de sódio e potássio 1M (1 x 100Oml) e NaCl saturado (1 x 100Oml). A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer uma mistura 2,5:1 de diastereoisômeros e mais aproximadamente 10% do aldeído bruto residual de partida, por ^-RMN. 0 produto bruto foi cromatografado em coluna de HOmm x 203,2mm com 3/7/0,4 de EtOAc/hexano/MeOH para fornecer, depois de acúmulo e concentração a vácuo do diastereoisômero desejado de menor Rf contendo frações, o Intermediário 71 (8,lg, 57%) como um óleo laranja. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.34-7.23 (c, 5H) , 6.86(m, 3H), 6.67(d,lH), 3.79(s, 3H) , 3.65 (dd, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.58(dd, 1H), 3.29(dd, 1H), 3.10(d, 1H), 2.53(dd, 1H), 2.07(d, 1H), 1.35(s, 9H), 1.12(d, 3H) , 0.45 (s, 3H).
Intermediário 72 5-[(4R)-4-((IS)-1-hidroxietil)-4-metil-l-benzil- pirrolidinil-3]-2-metoxifenol. A uma solução agitada do Intermediário 71 (2,3g, 5,8mmol) , em CH2C12 (18mmol) a 0°C, sob um tubo de secagem, foi adicionado ácido trifluoroacético (2,7ml, 35mmol). 0 banho refrigerante foi retirado e a reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente, e então agitada por 3,5 horas. A mistura reacional foi concentrada por evaporador rotativo para remover o excesso de ácido trifluoroacético, redissolvida em CH2C12 (50ml), e depois lavada com Na2Co3 10% (2 x 50ml) e NaCl saturado (1 x 50ml) . As camadas orgânicas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o Intermediário 72 como uma espuma branca (l,9g, 96%). XH RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.36-7.20 (m, 5H) , 6.82(s, 1H) , 6.77(d,1H), 6.66(d, 1H) , 5.57(s, 1H) , 3.83 (s. 3Η) , 3.70-3.56(m, 4H), 3.30(dd, 1H), 3.13(d, 1H), 2.55(dd, 1H), 2.04(d, 1H), 1.12(d, 3H), 0.45 (s, 3H).
Intermediário 73 (IR)-1-{(3R)-4-[3-(tercbutoxi)-4-metoxifenil]-3- metilpirrolidinil-3} etanol.
Preparado a partir do Intermediário 71 (lg, 2,53mmol) pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer 775mg do Intermediário 73. RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 6.92-6.79(m, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 3.51-3.42(m, 4H) , 3.29(dd, 1H) , 2.77(d, 1H) , 1.35 (s, 9H) , 1.17(d, 3H), 0,62(s, 3H).
Intermediário 74 R1=H
Carboxilato de metíl 3 -{(IR)-1-hidroxietil)- (3S,4S)-4-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidina.
Processo de acilação mediada por base de Hunig. A uma solução agitada e resfriada (0o) do Intermediário 70 (670mg, 2,67mmol) e da base de Hunig (l,4ml, 8,0mmol) em CH2C12 seco (lOml), 1,4-dioxano (5ml) e MeOH (lml) foi adicionado cloroformiato de metil (0,41ml, 5,3mmol) via seringa e sob atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi deixada sob agitação a 0°C, por 1 hora, e depois diluída com CH2C12 (90ml) , lavada sucessivamente com HCl aquoso 1 N (2 x 20ml) e salmoura (20ml) , seca (Na2S04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo (737mg) foi dissolvido em THF (3ml) e água (2ml), e depois tratado com uma solução de LiOH (112mg, 2,67mmol em 2ml de água) a temperatura ambiente. Após agitação de 4 horas, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (lOOml) e lavada sucessivamente com HCl aquoso 1 N (2 x 50ml), NaHC03 (30ml) e salmoura (30ml) . Depois foi seca (Na2SC>4) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado via cromatografia radial (placa de 4mm com MeOH 3% em CH2C12) para fornecer o Intermediário 74 como uma espuma levemente acobreada (250mg, 30%). *Η RMN (400 MHz, CDC13, mistura de rotomeros) δ: 6.84(d, 1H) , 6.78(d, 1H) , 6.72(dd, 1H) , 5.57(d,lh), 3.90- 3.54(m, 1H), 3.30(d, 0,5H), 3.20(d, 0,5H), 1.35(bf d, 1H) , 1.14 (t, 3H), 0.75(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): m/z 308,6 (m-1). LRMS (Eletrospray, positivo): m/z 210,5 (m+1).
Intermediário 75 Preparado a partir do Intermediário 57 via processo de debenzilação do Intermediário 31 e pelo processo de acilação mediada por base de Hunig do Intermediário 74. LRMS (Eletrospray, positivo): m/z 308,6 (m-1). LRMS (Eletrospray, positivo): m/z 310,5 (m+1).
Intermediário 76 (2R)-2-ácido hidroxiexanóico. A uma solução resfriada (0°C) e agitada de D- norleucina (500mg, 3,81mmol) em lOml de ácido sulfúrico aquoso IN, foi adicionado nitrito de sódio (421mg, 6,lOmmol) em 3ml de água, gota a gota, por um período de 20 minutos. A mistura reacional foi deixada aquecendo lentamente até atingir a temperatura ambiente por um período de 16 horas. A mistura foi então extraída com EtOAc (2 x 25ml), seca (Na2S04) e concentrada para fornecer 200 mg (40%) de uma cera sólida branca. RMN (400 MHz, CDC13) δ: 4.28 (dd, 1H) , 1.92- 1.81(m, 1H) , 1.76-1.64 (m, 1H) , 1.51-1.29(m, 4H) , 0.92 (t, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 131,1 (m-1).
Intermediário 77 Acetato de (IR)-1-(clorocarbonil)pentila Processo de formação da acilação/hidrólise/ácido clorídrico. A uma solução resfriada (0°C) do Intyermediário 76 (200mg, l,51mmol) e uma base de Hunig (657ml, 3,78mmol) em CH2C12 (6ml) foi adicionado cloreto de acetila (215 1, 3,03mmol) com uma seringa. A mistuira resultante foi deixada aquecer lentamnente até a temperatura ambiente por mais de 16 horas. A mistura reacional foi então lavada com HCl (2 x 20ml), seca (na2S04) e concentrada até um óleo marrom alaranjado, que na RMN mostrou ser um material bis- acilado. A esse material foi adicionado 5ml de THF:água, 4:1, e a mistura foi agitada por 16 horas na temperatura ambiente, extraída com EtOAc, seca (Na2S04) e concentrada até 186mg (71%) de um óleo laranja. As RMN e espectrometria de massa confirmaram o ácido acetoxi. A esse material em 5mlde CH2C12 foi adicionadocloreto de oxalila (l,07ml, 2,14mmol, em CH2Cl2 2M) e uma gota de DMF. A mistura foi agitada na temperatura ambiente por 4 horas, e depois concentrada sob pressão reduzida para chegar ao Intermediário 77. ^ RMN (400 MHz, CDC13) : 5.17(dd, 1H) , 2.18 (s, 3H), 2.04-1.86 (m, 2H), 1.50-1.30(m, 4H), 0,93(t, 3H) .
Intermediário 78 Acetato de (clorocarbonil)(4-fluorofenil) metila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido 2-(4-fluorofenil)-2-hidroxiacético. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.48 (q, 2H) , 7.14 (t, 2H), 6.06 (s, 1H), 2.21 (s, 3H) .
Intermediário 79 Acetato de (clorocarbonil)ciclopropila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido 1-hidroxixloropropano carboxílico. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 2.13 (s, 3H) , 1.89- 1.84(m, 2H), 1.46-1.42(m, 2H).
Intermediário 80 Acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-2-metilbutila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido (2S)-2-hidroxi-3-metil pentanóico. λΗ RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 5.01 (d, 1H) , 2.24- 2.17(m, 1H) , 2.17 (s, 3H) , 1.57-1.47 (m, 1H) , 1.39-1.28(m, 1H), 1,03(d, 3H), 0,94(t, 3H).
Intermediário 81 Acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-3-metilbutila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido (2S)-2-hidroxi-4-metil pentanóico. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 5.12 (d, 1H) , 2.16 (s, 3H), 1.88-1.75(m, 3H), 0.97(dd, 6H).
Intermediário 82 Acetato de (IR)-1-(clorocarbonil)-2-feniletila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido (2R)-2-hidroxi-3-fenil propanóico. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.38-7.21 (m, 5H) , 5.33(dd, 1H), 3.33(dd, 1H), 3.18(dd, 1H) , 2.11 (s, 3H) .
Intermediário 83 Acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-2-feniletila.
Preparado via processo de acilação / hidrólise / formação de ácido clorídrico do Intermediário 77 a partir do ácido (2S)-2-hidroxi-3-fenil propanóico. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.38-7.21(m, 5H) , 5.33(dd, 1H), 3.33(dd, 1H), 3.18(dd, 1H), 2.11(s, 3H).
Intermediário 84 (4-clorofenil)(hidroxiimino)metilamina.
Uma solução de 4-clorobenzonitrila (10g, 0,073mol), hidrocloreto de hidroxilamina, NaOH (3,5g, 0,87mol) em etanol (3OOml} e água (80ml) foi refluxada por 10 horas, e então concentrada sob pressão reduzida. O sólido branco resultante foi tomado em água/4:1 EtOAc:CH2CI2· As camadas orgânicas foram isoladas, lavadas uma vez com água, secas (Na2S04) e concentradas até 10,4g de um sólido branco (84%). XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.71 (d, 2H) , 7.41 (d, 2H), 5.85(br s, 2H).
Intermediário 85 Acetato de [3-(4-clorofenil)-1,2,4-oxadiazolia-5] metila A uma solução resfriada (00C) do Intermediário 84 (4,5g, 0,026mol) em piridina seca (20ml) foi adicionado cloreto de acetoxiacetila (6ml, 0,056mol) gota a gota, por um período de 6 horas. Após a adição estar completa, a mistura foi aquecida a 90°C por três horas, e então deixada resfriando até a temperatura ambiente. A piridina foi removida sob pressão reduzida e o material oleoso escuro resultante foi tomado em CH2C12 e filtrado através de papel de filtro GF/F. O filtrado foi lavado com salmoura (2 x lOOml), seco (Na2S04) e concentrado. A filtração Biotage (cartucho 40M, 20% EtOAc/hexano) conseguiu l,93g dc Intermediário 85 como um sólido branco (29%) . XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8.01(d, 2H) , 7.46 (d, 2H), 5.35 (s, 2H), 2.21(s, 3H) .
Intermediário 86 [3-(4-clorofenil)-1,2,4-oxadiazolia-5] metanol-1. A uma solução do Intermediário 84 (lg, 3,96mol) em MeOH (50ml) foi adicionado K2C03 aquoso (0,56M, 7ml, 3(96mmol) e a mistura foi agitada por duas horas na temperatura ambiente. Os solventes foram então removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi tomada em EtOAc (75ml) , lavado com água (2 x 75ml) seco (Na2S04) e concentrado até 820mg (98%) do Intermediário 86 como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8.02 (d, 2H) , 7.47 (d, 2H), 4.97 (s, 2H) , 2.52(br s, 1H) .
Intermediário 87 Metil sulfonato de [3 - (4 - clorofenil) - 1, 2, 4 - oxadiazolia-5] metila.
Preparado a partir do processo de mesilação do Intermediário 90. XH RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8.02 (d, 2H) , 7.47 (d, 2H), 5.49 (s, 2H), 3.24(s, 3H) .
Intermediário 88 3-[4-(trifluorometil)fenil] propi-2-nol-1 Processo de acoplamento catalisado por paládio.
Uma solução de 4-iodobenzotrifluoreto (5g, 0,018 mol), álcool propargílico (l,07ml, 0,018mol), iodeto de cobre(I) (17,5mg, 0,092mmol) e cloreto de bis- trifenilfosfina paládio(II) (129mg, 0,184mmol) em 50ml de dietílamina foi agitada a temperatura ambiente por diversas horas. A dietílamina foi então removida sob pressão reduzida e o resíduo tomado em CH2C12 (150ml). Essa solução foi lavada com HCl IN (3 x 150ml) , seca (Na2S04) e concentrada a 3,lg do Intermediário 88 como um óleo marrom alaranjado (84%). ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.55(q, 4H) , 4.52 (d, 2H) , 1.74(br s, 1H) .
Intermediário 89. 3-(4-fluorofenil) propi-2-nol-l.
Preparado via produção do Intermediário 88. 2H RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.42 (q, 2H) , 7.01 (t, 2H), 1.70 (t, 1H) .
Intermediário 90.
Metil sulfonato de 3-fenilpropi-2-nila.
Processo de Mesilação. A uma solução de 3-fenil-2-propi-2-nilol (lOOg, 0,757mol) e Et3N (158ml, l,13mol) em 3 litros de CH2C12 seco e resfriado a 5°C, foi adicionado cloreto de metanossulfonila (59ml, 0,757mol) via adição por funil, mantendo-se a temperatura interna por volta dos 5°C (a adição foi completada após aproximadamente 45 minutos).
Após uma hora a 5°C o TLC indicou que a maior parte do material de partida foi consumida. Foi adicionado 1 ml do cloreto de metanossulfonila e a mistura reacional foi agitada por um tempo adicional de 30 minutos, a 5°C. 0 TLC
indicou o consumo completo do material de partida. A mistura foi então lavada com HCl 1 N (3 x 250ml), seca (Na2S04) e concentrada para produzir 113g do Intermediário 90 como um líquido amarelo (71%) . 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ: 7.48-7.45(m, 2H) , 7.39- 7.34 (m, 3H) , 5.90 (s, 2H) , 3.16 (s, 3H) .
Intermediário 91 3-(4-fluorofenil)propi-2-nil metilssulfonato.
Preparado a partir do Intermediário 89 via processo de mesilação do Intermediário 90. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) 6: 7.48-7.45(m, 2H) , 7.39- 7.34(m, 3H), 5.90(s, 2H), 3.16(s, 3H) .
Intermediário 92 Sulfonato de 3-[4-(trifluorometil)fenil]propinil- 2 metila.
Preparado a partir do Intermediário 88 via processo de mesilação do Intermediário 90. ΧΗ RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 7.62-7.56 (m, 4H) , 5.09(s, 2H), 3.16(s, 3H) .
Exemplo 3 Preparação de quatro estereoisômetros a partir da redução do Intermediário 36. Foi adicionado borohidreto sódio (2,0mmol, 0,075g) ao Intermediário 36 (l,3mmol, 0;50g) dissolvido em lOml de etanol. A reação completa foi seca a vácuo após 1 hora. O óleo resultante foi extraído 3 vezes com EtOAc e água, então os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre MgS04. A mistura dos dois racêmicos foi obtida como um óleo. ΧΗ RMN δ: 6.80(d, 1H), 6.67(d, 1H), 4.72(bd, 1H), 3.89-3.95(bm, 1H), 3 . 83 (s, 3H) , 3.64-3.78(bm, 1H), 3.74(s, 3H) , 3.33(dd, 1H) , 2.16(d, 3H) , 1.79-1.92 (bm, 4H) , 1.59- 1.63(bm, 2H), 1.01(sd, 3H). A mistura de racêmicos foi dissolvida em acetonitrila 50% e água 50% a uma concentração de 50mg/ml e purificada em porções em uma coluna C-18 (250 x llOmm) usando um gradiente água/acetonitrila/0,5% TFA. Frações apropriadas foram coletadas, combinadas e secas para fornecer óleos. 1H RMN para o menor racemato δ: 6.75-6.82 (bm, 3H), 4.75(bd, 1H), 3.83(s, 3H), 3.64-3.81(bm, 1H), 3.74(s, 3H) , 3.54-3.61(bm, 2H) , 3.28(dd, 1H) , 1.81-1.94(bm, 5H) , 1.58- 1.65 (bm, 4H), 1.15(dd, 3H) , 0,75(s, 3H). 1H RMN para o maior racemato δ: 6.78-6.83 (bm, 3H), 4.74(bd, 1H), 3.77-3.89(bm, 1H), 3.83(s, 3H) , 3.73(s, 3H), 3.65(quin, 1H), 3.25-3.32 (bm, 3H), 1.77-1.96 (bm, 7H) , 1.58- 1.61(bm, 2H), 1.13(d, 3H); 0,92 (s, 3H) .
Separação quiral dos álcoois Duas colunas foram necessárias para separar os quatro diastereoisômeros por HPLC. A primeira coluna de base dextrose (8 x 30cm) foi usada para separar o isômero R,R,S dos outros. lOml (7,lmg/ml solução armazenada) da mistura bruta no tampão da coluna foi introduzido e depois eluído a lml/min com hexanos isocráticos (85%) e isopropanol (15%), coletando as frações apropriadas. Os diatereoisômeros remanescentes foram purificados numa coluna de base de dextrose diferente (10 x 50cm) .
Novamente, lOml (7,lmg/ml solução armazenada) foram injetados, e então eluídos a lml/min com hexanos isocráticos (95%) e isopropanol (5%) . As frações apropriadas foram coletadas, combinadas e secas até fornecerem um óleo.
Exemplo 4 R1 = 2-indanila; R3 = C02CH3 Éster metílico do ácido trans-(+) -3-(1- hidroxietil)-4-[3-(indanil-2-οχί)-4-metoxifenil]-3-metil- pirrolidina-1 carboxílico (dois diastereoisômeros do carbinol).
Uma solução do intermediário 35 (racêmico)(300mg, 0,71mmol, leq) em etanol (lOml) foi tratada com boroidreto de sódio (54mg, l,42mmol, 2eq). A mistura foi agitada por 10 minutos a temperatura ambiente, tratada com HCl IN (50ml) e extraída com EtOAc (3 x 25ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com HCl IN (25ml), água, NaHC03 saturado (25ml), salmoura (25ml) e seca sobre Na2S04, e concentrado a vácuo. Uma porção do resíduo bruto foi purificada por HPLC (Vydac 20 x 250mm C18 coluna de "Proteína e Peptídeo", por 8 minutos, com um gradiente de acetonitrila 50-75% em água com cada solvente contendo 0,05% TFA, com uma taxa de 20ml/mín) para render os diastereoisômeros separados numa razao de 2:1 como xaropes incolores (75 e 37 mg respectivamente, na ordem da eluição da coluna).
Isômero 1: XH RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.24-7.15(m, 4H) , 6.83(bs s, 3H) , 5.21-5.12(m, 1H), 3.91-3.59(m, 1H), 3.91- 3.59(m, 3H) , 3.81(s, 3H) , 3.73(s, 3H) , 3.40-3.18(m, 7H), 1.14(d, J=6.3 Hz, 3H), 0.94(s, 3H).
Isômero 2: :H RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.23-7.15(m, 4H) , 6.85-6.82 (m, 3H), 5.22-5.10(m, 1H), 3.89-3.67(m, 3H), 3.81(m, 3H) , 3.75(s, 3H) , 3.64-3.52(m, 3H) , 3.40-3.15(m, 5H) , 1.20-1.13(m, 3H), 0.78(s, 3H) .
Os compostos dos Exemplos 5 e 6 foram preparados da mesma maneira que o do Exemplo 4: Exemplo 5 R1 = 2-norbornila; R3 = C02CH3 Ester metílico do ácido trans 4-[3-exo- (bíciclo [2.2.1]heptil-2-oxi)-4-metoxifenil]-3-(1-hidroxi- etil)-3-metilpirrolidina-l carboxílico (dois diastereo- isômeros do carbinol). 0 Intermediário 38 foi reduzido e separado como acima para fornecer os isômeros: Isômero 1: 3H RMN (300 MHz, CDC13) δ: 6.82-6.72 (m, 3H) , 4.15(br s, 1H), 3.88-3.59(m, 3H), 3.87(s, 3H) , 3.73(s, 3H) , 3.32-3.24(m, 3H), 2.50-2.47(m, 1H), 2.34-2.28(m, 1H), 1.77- 1.50(m, 5H), 1.21-1.12(m, 6H), 0.92(s, 3H).
Isômero 2: XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 6.82-6.72 (m, 3H) , 4.19-4.15(m, 1H) , 3.85-3.54(m, 5H) , 3.83 (s, 3H) , 3.74(s, 3H) , 3.30/3.23 (2d, J=10,4/10,4Hz, 1H) , 2.49-2.46 (m, 1H) , 2.32(br s, 1H) , 1.76-1.70(m, 2H), 1.65-1.44(m, 3H), 1.21- 1.14(m, 6H) , 0.75(s, 3H) .
Exemplo 6 R1 = PhCH2CH2CH(CH3) ; R3 = C02CH3 Ester metílico do ácido trans-3-(1-hidroxietil)- 4-[4-metoxi-3-fenilpropoxi) fenil]-3-metilpirrolidína-l carboxílico (dois diastereoisômeros do carbinol). 0 Intermediário 39 foi reduzido e separado como acima para fornecer os isômeros: Isômero 1: XH RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7.30-7.25 (m, 3H) , 7.22-7.15(m, 3H), 6.85-6.69(m, 3H), 4.34-4.27(m, 1H), 3.87- 3.54(m, 3H), 3.84(s, 3H) , 3.73/3.72(2 s, 3H) , 3.31-3.20(m, 3H), 2.83-2.75(m, 2H) , 2.18/2.08(m, 1H) , 1.95-1.84(m, 1H), 1.34/1.31(2 s, 3H), 1.12 (d, J=6.3Hz, 3H), 0.89(br s, 3H). 13C RMN (75MHz, CDC13) δ: 156.0, 150.3, 147.8, 142.2, 131.3/131.1, 128.9, 128.8, 126.2, 121.7, 117.1, 112.5, 77.6, 75.3/75.1, 74.1/74.0, 56.3, 56.2/55.8, 52.9, 52.0/51.2, 49.9/49.1, 38.5/38.4, 32.2, 20.3, 19.0/18.9, 14.6/14.5.
Isômero 2: XH RMN (300 MHz, CDC13) δ: 7.29-7.24 (m, 2H) , 7.20-7.14(m, 3H), 6.84-6.69(m, 3H), 4.35-4.24(m, 1H), 3.85/3.84(2 s, 3H), 3.83-3.45(m, 5H) , 3.75 (s, 3H) , 3.31- 3.23(m, 1H), 2.88-2.76 (m, 2H) , 2.21-2.07(m, 1H) , 1.95- 1.83(m, 1H), 1.34/1.32(2 s, 3H), 1.15-1.11 (m, 3H) , 0.73(br s, 3H). 13C RMN (75MHz, CDCl3) δ: 156.0, 149.9, 147.4, 142.3, 129.5/129.4, 128.9, 128.7, 126.2, 122.1-121.8, 117.9/117.7/117.4, 112.0, 77.6, 75.3/75.0/74.9, 69.4/69.3, 56.3, 53.2, 53.1, 49.5/49.3/49.1/48.6, 46.5/46.0, 38.5/38.4/38.3, 32.1, 20.3, 20.0, 17.7.
Os seguintes compostos foram preparados a partir do Intermediário 68 livre de pirrolidina.
Exemplo 7 R1 = C5H9; R3 = COCH2OCH2Ph 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2(fenilmetoxi)eta- nona-1.
Processo de N-acilação A uma solução agitada do Intermediário 68 (42,6 mg, 0,13mmol) em 1,4-dioxano (0,4ml) foram adicionados sucessivamente K2C03 aquoso (0,8ml de 0,65 M, 4eq) e uma solução de ácido clorídrico (R3-Cl) (21μ1, 0,13mmol) em 1,4-dioxane (0,4ml) a temperatura ambiente. A solução resultante foi deixada sob agitação a temepratura ambiente por 4 horas. A reação foi diluída com EtOAc (30ml), e então lavada sucessivamente com água (20ml) e salmoura (20ml), seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o Exemplo 7 como uma espuma levemente acobreada (46,5mg, 99%) . 1H RMN (400 MHz, CDC13, mistura de rotômetros) δ: 7.40-7.31(m, 5H) , 6.80-6.72(m, 3H) , 4.73(c, 1H) , 4.67 (s, 2H) , 4.14 (s, 2H) , 3 .82 (s, 3H) , 3.79-3.45 (s, 5H) , 3.22(d, 1H), 1.92-1.80 (c, 6H) , 1.61-1.55(c, 2H), 1.14(dd, 3H) , 0.73(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 468.4 (m+1).
Exemplo 8 R1 = C5H9; R3 = COCH2OH 1- [3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil]-2-hidroxiatenona-l. 0 Exemplo 7 (35mg, 75μmol) foi sujeito ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 8 (24mg, 84%) . 1H RMN (CD3OD, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.91-6.82(m, 3H) , 4.83(c, 1H) , 4.22(c, 2H) , 3.87-3.22 (m, 1H), 1.93-1.73 (m, 6H) , 1.69-1.59(m, 2H), 1.11(dd, 3H), 0.75(br s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,4 (m+1).
Exemplo 9 R1 = C5H9; R3 = COCH2CH2N (H) C02CH2Ph N- {3- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclo- pentiloxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil]-3-oxopro- pil}(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acilação do Exemplo 7. O p-nitrofenilester do N-Cbz-beta-alanina foi usado no lugar do ácido clorídrico. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.38-7.28(m, 5H) , 6.92-6.83(m, 3H) , 5.06 (c, 2H), 4.86(c, 1H) , 4.84 (c, 1H), 3.81-3.27 (m, 10H) , 2.59(c, 2H) , 1.98- 1.69 (c, 6H), 1.64-1.57(c, 2H), 1.09(d,3H), 0.73(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 525,3 (m+1).
Exemplo 10 R1 = C5H9; R3 = COCH2CH2NH2 1- [3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil] -3-aminopropanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 9 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.91-6.79(m, 3H), 4.81(c, 1H) , 3.92-3.29 (m, 11H), 3.01(br s, 2H) , 2.61-2.58(m, 2H), 1.95-1.73 (m, 6H) , 1.68-1.58(m, 2H), 1.10(dd, 3H), 0.76(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 391,4 (m+1).
Exemplo 11 R1 = C5H9; R3 = C0CH2CH2C02CH2Ph Fenil 4 - [ 3 - ((IR) - 1 - hidroxietil)(3S,4S) - 4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)- 3 - metilpirrolidinil]- 4-oxobutanoato.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acilação do Exemplo 7. 3H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.41-7.31(m, 5H) , 6.84-6.75 (m, 3H) , 5.14 (d, 2H), 4.74(c, 1H), 3.94-3.44 (m, 8H), 3.27(d, 1H) , 2.80-2.73 (m, 2H), 2.67- 2.58(m, 2H) , 1.96-1.81(m, 6H) , 1.68-1.56 (m, 2H) , 1.15(dd, 3H), 0.75(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 510,3 (m+1).
Exemplo 12 R1 = C5H9; R3 = C0CH2CH2C02H Ácido 4-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3- ciclopen-tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-4-oxo- butanóico.
Preparado a partir do Exemplo 11, via processo de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.80-6.72(m, 3H) , 4.74(c, 1H) , 3.98-3.54 (m, 10H), 3.40(d, 1H) , 3.24(d, 1H) , 3.24(d, 1H) , 2.69(c, 2H) , 1.95-1.74(m, 6H), 1.69-1.51(m, 2H), 1.14(dd, 3H), 0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 420,3 (m+1).
Exemplo 13 R1 = C5H9; R3 = COCH2N (H) C02CH2Ph N-{2- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclo- pentiloxi - 4 - metoxifenil) 3 - metilpirrolidinil] - 2 - oxoetil}(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acilação do Exemplo 7. 0 p-nitrofenilester do N-Cbz-glicina foi usado no lugar do ácido clorídrico. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.40-7.25 (m, 5H) , 6.92-6.81(m, 3H) , 5.11 (s, 2H), 4.87(s, 2H) , 4.82 (c, 1H), 4.11-3.28(m, 9H) , 1.95-1.70(m, 6H), 1.65- 1.55(m, 2H), 1.10{brs, 3H), 0.76(brs, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 511,6 (m+1).
Exemplo 14 R1 = C5H9; R3 = COCH2NH2 1- [3- ((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclopentí- loxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil] -2-amino etanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 13 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN (CD3OD , 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.91-6.82(m, 3H) , 4.80(c, 1H) , 3.91-3.28(m, 11H), 1.90- 1.75(m, 6H), 1.66-1.57(m, 2H), 1.09(dd, 3H), 0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 377,2 (m+1).
Exemplo 15 R1 = C5H9; R3 = CO-4-metilpiperazina 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil-4-metilpiperazinil cetona. O Intermediário 68 (30,2mg, 94mmol) foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (400μ1) e resfriado a 0°C, foi adicionado então diimidazol carbonila (16mg, 94μιηο1). A reação foi agitada a 0°C por 1,5 horas, seguida da adição de 1-metilpiperazina (21μ1, 180μmol}. A solução foi aqeucida a 80°C por 60 horas. Após resfriamento, a mistura reacional foi diluída com CH2C12 e lavada três vezes com NaHC03 6%, seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi cromatografado sobre Si02 com EtOAc (15,5mg). 3H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.83- 6.78(m, 3H), 4.76(c, 1H), 4.06-3.77 (m, 18H) , 3.61(q, 1H) , 3.39(br s, 1H) , 1.93-1.78 (m, 6H) , 1.63-1.57(m, 2H) , 1.15(br s, 3H), 0.81(br s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 446,4 (m+1).
Exemplo 16 R1 = C5H9; R3 = CO-N-morfolina 3-((IR)-1-hidroxietil) (3 S,4 S)—4 -(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)3-metilpirrolidinil-morfilinil-4 cetona.
Preparado a partir do Intermediário 68 usando morfolina e carbonildiimidazol como ragente ligante peloporocesso mostrado no Exemplo 15. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.84- 6.77(m, 3H), 4.76(c, 1H), 3.88-3.52(m, 12H), 3.41(dd, 1H), 3.38(dd, 1H), 3.28(dd, 1H), 3.25(dd, 1H), 3.10(d, 1H), 1.95-1.81(m, 6H) , 1.62-1.54 (m, 2H) , 1.15(d, 3H) , 0.75(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 433,3 (m+1).
Exemplo 17 Rx= C5H9 ; R3=C0CH20-Mentol; (IS)-isômero carbinol 1-[3-((IS)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopen-tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirolidinil]-2- [(2 S,IR,5R)-5-metil-2-(metiletil)cicloexiloxi]- etanona-1.
Preparado a partir do isômero S-carbinol do Intermediário 69 pelo processo de acilação mediado por base de Hunig do Intermediário 69. ■‘Ή RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.82- 6.75(m, 3H), 4.74(c, 1H) , 4.19(dd, 1H), 4.04(dd, 1H), 3.92- 3.76(m, 5H) , 3.47-3.199m, 5H) , 2.26(c, 1H) , 2.13(c, 1H) , 1.94-1.80(m, 6H), 1.65-1.53(m, 4H), 1.51-1.19(m, 4H), 0.95- 0.84 (m, 9H) , 0.79 (d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 516,3 (m+1) Exemplo 18 R1= C5H9 ; R3=CO-4-(2-metiltiazol) 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4 - (3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil 2-metil- (1,3-tiazolil-4) cetona.
Preparado a partir do Intermediário 68 via 0 procedimento de acoplamento de EDCI do Exemplo 27 a partir do ácido 2-metil-l,3-tiazol-4 carboxílico. 3H RMN (CD3OD, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.98(dd, 1H), 6.92-6.82(m, 3H), 4.84(c, 1H), 4.27 (t, 0,5H), 4.16 (t, 0,5H), 4.08(t, 0,5H), 3.96(d, 0,5H), 3.85-3.47(m, 7H), 2.72(dd, 3H), 1.88-1.72 (m, 6H), 1.68-1.56(m, 2H), 1.14(dd, 1,5H), 1.08(dd, 1,5H), 0.82(d, 1,5H), 0.73(d, 1,5H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 445,4 (m+1).
Exemplo 19 R1 = C5H9; R3 = S02-3-píridil 3-{[3-((IR)-1-hidroxietil) {3 S, 4 S)—4 -(3-ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]sulfonil}-piri- dina. A uma solução agitada do Intrmediãrio 68 (32mg, 0,lmmol) em dioxano (0,3ml) foram adicionados, sucessivamente, K2C03 (0,6ml, 0,65M 4eq) e uma solução do R3-cloreto de sulfonila (26mg, 0,12mmol) em dioxano (0,3ml) a temperatura ambiente. A solução resultante foi deixada agitando a temperatura ambiente por 2 horas. A reação foi diluída com 1:1 hexanos:EtOAc (30ml) e lavada sucessivamente com água (20ml) e salmoura (20ml), e depois seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o Exemplo 19 como um sólido laranja (36mg, 78%). XH RMN (CDCls, 400 MHz) δ: 9.11(d, 1H, J=2,2Hz), 8.83(dd, 1H, J=l,6, 4.8Hz), 8.17(ddd, 1H, J=l,5, 2.4, 8,1Hz), 7,50(ddd, 1H, J=0,8, 4.9, 8.0Hz), 6.74(d, 1H, J=8,5Hz), 6.68(d, 1H, J=2,lHz), 6.62(dd, 1H, J=2.1, 8,3Hz), 4.7 (c, 1H) , 3.80 (s, 3H) , 3.66-3.62(m, 2H) , 3.51- 3.43(m, 3H) , 3.24(d, 1H, J=13,3Hz), 1.91-1.62(m, 6H) , 1.60-1.55(m, 2H), 1.08(d, 3H, J=6.4Hz), 0,62{s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 461,2 (m+1).
Exemplo 20 R1 = 2-indanila; R3 = C0CH20CH2Ph 1- [3 - ((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-(3-indani-2- loxi-4-metoxifenil)-3-raetilpirrolidinil]-2-(fenilmetoxi)- etanona-1.
Preparado a partir do Imtermediário 51 (50mg, 0,14mmol) pelo processo de acilação com base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de benziloxiacetila (22,5μ1, 0,14mmol) para fornecer o Exemplo 20 como um óleo claro (48 mg, 68%) . 41 RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.41-7.16(m, 9H) , ".84-6.79(m, 3H) , 5.17(c, 1H) , 4.66(d, 2H) , 4.19-4.11(m, 2H) , 3.96(dd, 0,5H), 3.83-3.54(m, 7H), 3.47(d, 0,5H), 3.38-3.29 (m, 2H) , 3.24-3.17(m, 3H) , 3.47(d, 0,5H), 3.96(dd, 0,5H), 3.83-3.54(m, 7H) , 3.47(d, 0,5H), 3.38-3.29(m, 2H) , 3.24-3.17(m, 3H) , 1.57(br t, 1H) , 1.15(dd, 3H), 0,75(8, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 516,8 (m+1).
Exemplo 21 R1 = 2-indanila; R3 = COCH2OH 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S, 4S) —4-(3-indani-2- loxi-4-metoxfenil)-3-metilpirrolidinil]-2-hidroxietanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 20 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 3Η RMN (CD3OD , 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.24-7.18(m, 2H) , 7.14-7.12(m, 2H) , 6.92-6.86(m, 3H) , 5.20 (c, 1H) , 4.27-4.14(m, 2H) , 3.90-3.50(m, 6H) , 3.41(d, 1H), 3.34-3.24(m, 4H) , 3.13-3.08(m, 2H) , 1.12(dd, 3H), 0.77(br s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 377,2 (m+1).
Exemplo 22 R1 = 2-indanila; R3 = C0C02CH3 Metil 2- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-(3- indani-2-loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxoace- tato.
Preparado a partir do Intermediário 51 e cloreto de metil oxalila via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74. *Η RMN (CDC13 , 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.82-6.75(m, 3H) , 4.74(c, 1H) , 4.01(d, 1H) , 3.98-3.56(m, 10H) , 3.50(dd, 1H) , 1.93-1.84(m, 6H) , 1.64-1.56(m, 2H) , 1.45(dd, 1H), 1.16(dd, 3H), 0.79(s, 1,5H), 0,75(s, 1,5H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,2 (m+1).
Exemplo 23 R1 = 2-indanila; R3 = COC (CH3) 2N (H) C02CH2Ph N-{2- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-indani- 2-loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1,l-dimetil-2- oxoetil}(fenilmetioxi)carbamida.
Processo de acoplamento PyBrOP. A uma solução agitada de hexafluorfosfato de bromo-tris-pirrolidino-fosfonio (PyBrOP, 70mg, 0,15mmol), N-carbobenziloxi-2-metilamina (35,5mg, 0,15mmol), e base de Hunig (78μ1, 0,45mmol)em dietilformamida seca (1 ml) foi adicionado o Intyermediário 51 (50mg, 0,14mmol) a temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi deixada sob agitação a temperatura ambiente por 16 horas e depois aquecida a 70°C por 5 horas. A reação foi deixada resfriar até a temperatura ambiente, e então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado via cromatografia radial (placa lmm com 3% MeOH em CH2C12)parafornecer 0 Exemplo 23 como uma espuma branca (20mg, 24%). ■‘Ή RMN (CDC13 , 400 ΜΗζ, mistura de rotômetros) δ:7.43-7.15 (m, 9Η) , δ .82-6.62 (m, 3Η), 5.64(br s, 0,5Η), 5.51(br s, 0,5H), 5.51-5.08(m, 3Η), 3.97-3.15(m, 13Η) , 1.58(br s, 6H), 1.13(br d, 3H), 0.68(brs, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 608,9 (m+18).
Exemplo 24 R1 = 2-indanila; R3 = COC(CH3)2NH2 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3 S,4 S)—4 -(3-indani-2- loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil] -2-amino-2-metil- propanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 23 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz, mistura de rotômetros) 5:7.21-7.16(m, 2H), 7.15-7.12(m, 2H), 6.94-6.87(m, 3H), 5.22 (c, 1H), 4.05(d, 1H) , 3.88(c, 1H) , 3.77-3.69(m, 4H) , 3.60-3.52 (c, 2H), 3.40-3.29 (c, 2H), 3.22(q, 1H), 3.13- 3.09(c, 2H), 1.37(d, 6H), 1.13(brs, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 453,5 (m+18).
Exemplo 25 R1 = 2-indanila; R3 = C02CH3 Carboxilato de metil 3-((IR)-1-hidroxi- etil) (3 S,4 S)—4 -(3-indani-2-loxí-4-metoxifenil)-3-metilpir- rolidina.
Preparado a partir do Intermediário 51 via processo de acilação mediada por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloroformiato de metila. 3H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) 5: 7.24-7.16(m, 4H), 6.86-6.82(m, 3H), 5.18(c, 1H), 3.85- 3.56(m, 8H) , 3.38-3.30(m, 3H) , 3.25-3.19(m, 3H) , 1.15(d, 0,5H), 1.47(d, 0,5H), 1.16 (t, 3H), 0.77(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 426,5 (m+1), 443,3 (m+18).
Exemplo 26 R1 = 2-indanila; R3 = COCH2C(CH3)2C02H Ácido 4 - [3 - ( (IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) - 4 - (3-indani-2-loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]- 2,2 - dimetil-4-oxobutanóico.
Um tubo de vidro de parede grossa e tampa esmerilhada foi carregado com o Intermediário 51 (20mg, 0,05mmol) e anidrido de 2,2-dimetilsuccínico (25,8mg, 0,05mmol). 0 tubo foi selado e então aquecido a 150°C por 30 minutos. A mistura reacional foi deixada resfriar até a temperatura ambiente para fornecer o Exemplo 26 (contendo cerca de 15-20% do outro regioisômero) como um sólido marrom (22mg, 82%) . 1H RMN (CD30D, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.22-7.20(m, 2H), 7.15-7.12(m, 2H), 6.96-6.85(m, 3H), 5.23 (c, 1H), 3.92-3.49(m, 7H), 3.37-3.28(m, 4H) , 3.13- 3.09(m, 2H), 2.73-2.55 (m, 2H), 1.30(brs, 6H) , 1.12 (t, 3H) , 0.76(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 494,5 (m+1).
Exemplo 28 R1 = 2-indanila; R3 = CO-3-tetraidrofuranila 3-((IR)-1-hidroxietil)(3 S,4 S)—4 -(3-indani-2-loxi- 4-metoxifenil)-3-metilciclopentil oxolanil-3 cetona (mistura de 2 diastereoisômeros ao ponto de ligação do tetraidrofuranila).
Preparado a partir do Intermediário 51 via processo de acoplamento da base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de tetraidrofurano-3-carbonila. 3H RMN (CDC13 , 400 ΜΗζ, mistura de rotômetros) δ: 7.40-7.20 (m, 2Η), 7.19-7.16(m, 2Η), 6.86-6.83(m, 3Η), 5.18 (c, 1Η) , 4.15-4.04(m, 1Η) , 3.98-3.15(m, 13H), 2.31- 2.09(m, 2H), 1.75(brs, 1H), 1.26(t, 1,5H), 1.17(t, 1,5H), 0.80(d, 1,5H), 0,78(s, 1,5H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 466,3 (m+1).
Exemplo 29 R1 = 2-indanila; R3 = C0CH2N(H) C02CH2Ph N-{2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-indani- 2-loxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil] - 2 - oxoetíl} (fenilmetioxi)carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 51 via processo de acoplamento do PyBrOP do Exemplo 23 usando N- benziloxi-carbonil glicina. 1H RMN (CD3OD, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.35-7.20(m, 9H), 6.91-6.88(m, 3H), 5.22(brs, 1H), 5.10(s, 2H), 4.07-3.09(m, 15H), 1.13(t, 3H), 0.78(s, 3H).
Exemplo 30 R1 = 2-indanila; R3 = COCH2NH2 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) —4-(3-indani-2- loxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-aminoetanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 29 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 3Η RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.22-7.19(m, 2H) , 7.18-7.15(m, 2H) , 6.84(d, 1H) , 6.81(d, 2H) , 5.17 (c f 1H) , 3.9 6 (dd, 0,5H), 3.81-3.43 (τη, 9H) , 3.37- 3.30(m, 1,5H), 3.23-3.13(m, 2H), 2.99(br s, 2H) , 1.15(t, 3H) , 0.75(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 425,5 (m+1).
Exemplo 31 R1 = 2-indanila; R3 = 2-piridil (IR)-1-[(3S,4S)—4 -(3-indanil-2-oxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(2-piridil)pirrolidinil-3] etanol-1.
Processo de acoplamento do brometo de arila. À uma mistura agitada do Intermediário 51 (115mg, 0,31mmol) e K2C03 (173mg, l,2mmol) em DMF seco (2ml) foi adicionado 2-bromopiridina (0,12ml, l,2mmol) via seringa a temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi aquecida a 90°C por 22 horas, e depois resfriada até a temperatura ambiente. A reação foi diluída com água (6Oml) e extraída com EtOAc (3 x 30ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (Na2S04), filtrados e concentrados a vácuo. 0 resíduo foi purificado via cromatografia rápida sobre sílica gel (100% EtOAc) para fornecer o Exemplo 31 (73,4mg, 53%). XH RMN (CDCla, 400 MHz) δ: 8.18(DDD, lh), 7.45(ddd, 1H) , 7.26-7.21(m, 2H) , 7.19-7.16(m, 2H) , 6.92- 6.88(m, 2H), 6.83(d, 1H), 6.54(ddd, 1H), 6.40 (d, 1H), 5.17 (c, 1H) , 3.86-3.78(m, 5H) , 3.70(d, 1H) , 3.67(d, 1H) , 3.38-3.30(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): D a/e 445,4 (m+1) Exemplo 32 R1 = 2-indanila; R3 = 3-piridil (IR)-1-[(3S,4S)—4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(3-piridil)pirrolidinil-3] etanol-1.
Processo de acoplamento catalisado por paládio. À uma solução agitada do Intermediário 51 (79,3mg, 0,22mmol) e t-butóxido de sódio (29mg, 0,31mmol) em tolueno seco (3ml) foi adicionado, seqüencialmente, 3- bromopiridiona (22,9ml, 0,24mmol), tris(díbenzilideno acetona)dipaládio(0) (3,9mg, cat.) e (R) -( + )-1,1'-bi-2- naftol (5,4mg, cat.) a temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi aquecida a 80 °C por 3 horas e depois deixada resfriar até a temperatura ambiente. A reação então foi diluída com EtOAc (40ml), lavada com salmoura, seca (Na2S04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado via croamtografia rápida sobre sílica gel (40% EtOAc em hexanos) para fornecer o Exemplo 32 (72,lmg, 75%). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.98 (d, 1H) , 7.91 (d, 1H), 7.24-7.15(m, 4H), 7.11(dd, 1H), 6.90-6.82(m, 4H) , 5.15(c, 1H), 3.81-3.72(m, 4H) , 3.70-3.62 (m, 4H), 3.35- 3.11(m, 5H), 1.24(d, 3H), 0,84(s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 445,3 (m+1).
Exemplo 33 R1 = 2-indanila; R3 = 2-pirímidil (IR)-1- [ (3S,4S)—4-(3-indanil-2-oxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-pirimidil-2 pirrolidinil-3] etanol-1.
Preparado a partir do Intermediário 51 via processo de acoplamento do brometo de arila do Exemplo 31. XH RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 8.34 (dd, 2H) , 7.24- 7.18(m, 2H), 7.16(dd, 2H), 6.94-6.84(m, 2H), 6.82(c, 1H), 6.48(t, 1H), 5.16(c, 1H), 4.12-3.75(m, 7H), 3.64(brd, 1H), 3.52(d, 1H), 3.36(d, 1H), 3.32(d, 1H), 3.24(t, 1H), 3.20 (t, 1H), 1.23(d, 3H), 0.83 (s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 446,4 (m+1).
Exemplo 34 R1 = C2H5; R3 = 2-piridil (IR) -1- [ {3S,4S)—4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(2-piridil)pirrolidinil-3] etanol-1.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acoplamento do brometo de arila do Exemplo 31. ’Ή RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 8.18 (ddd, 1H) , 7.46(ddd, 1H), 6.89-6.82(m, 3H) , 6.54(ddd, 1H) , 6.40(d, 1H), 4.75(c, 1H), 3.92-3.65 (m, 8H), 3.36(d, 1H), 1.94- 1.80(m, 6H), 1.66-1.55(m, 2H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 397,4 (m+1).
Exemplo 35 R1 = C5H9; R3 = 3-piridil (IR)-1-[(3S,4S)-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(3-piridil)pirrolidinil-3] etanol-1.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acoplamento catalisado por paládio do Exemplo 32. XH RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 8.00 (d, 1H) , 7.93 (d, 1H), 7.12(dd, 1H) , 6.86-6.78 (m, 4H) , 4.73(c, 1H) , 3.85- 3.59(m, 8H) , 3.12(d, 1H) , 1.90-1.79(m, 6H) , 1.60-1.54 (m, 2H), 1.22(d, 3H), 0.82(s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 397,2 (m+1).
Exemplo 36 R1 = (4-PhO)-Ph; R3 = C02CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-[4-metoxi- 3-(4-fenoxifenoxi)fenil]-3-metilpirrolidina carboxilato.
Procedimento de eterificação Cryptand. A uma suspensão agitada de hidreto de sódio (16mg de uma dispersão de 60% em óleo mineral, 0,40mmol) em anisol seco (2ml) foi adicionado o Intermediário 74 (lOOmg, 0,32mmol), colocando parte por mais de 5 minutos com evolução de H2, a temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. Após agitação por 30 minutos, foram adicionados tris[2-(2-metoxietoxi)etil]amina (lOml, 0,03mmol), cloreto de cobre (I) (10mg, 0,10mmol) e 4-bromo bifenil éter, e a mistura resultante foi aquecida sob refluxo por 20 horas. O anisol foi então removido via destilação a vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (25ml) e filtrado através de papel de filtro GF/F. O filtrado foi lavado com HCl aquoso IN (2Oml) , seco (Na2S04) , filtrado e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado via cromatografia radial (placa de 2mm de sílica com 1:1 hexanos/EtOAc) para fornecer o Exemplo 36 como um óleo castanho (40mg, 26%). 3H RMN (CDC13í 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.30(dd, 2H), 7.09-6.86(m, 10H), 3.88-3.49(m, 11H), 3.28(d, Ο,5Η), 3.19(d, Ο,5Η), 1.93(br s, 0,5Η), 1.83(br s, 0,5Η), 1.12(dd, 3Η), 0.71(br s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 478,2 (m+1).
Exemplo 37 R1 = (4-PhO) -Ph; R3 = C02CH3: outro diastereoisômero do carbinol.
Metil 3- ((IS)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-[4-metoxi- 3-(4-fenoxifenoxi)fenil]-3-metilpirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.32(t, 2H), 7.07(dt, 1H) , 7.03-6.74 (m, 9H) , 3.91-3.55(m, 9H) , 3.35-3.17(m, 3H) , 2.16(d, 0,5H), 1.38(br s, 0,5H), 1.12(d, 3H), 0.85(s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 478,2 (m+1).
Exemplo 38 R1 = (4-Ph) -Ph; R3 = CO2CH3 Metil 3-( (IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-[4-metoxi- 3-(4-fenilfenoxi)fenil]-3-metilpirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.55(d, 2H), 7.51(d, 2H) , 7.42(t, 2H), 7.31(t, 1H), 7.05(dt, 1H) , 6.98-6.92 (m, 4H), 3.87-3.54 (m, 11H), 3.29(d, 0,5H), 3.19(d, 0,5H), 1.64(br s, 0,5H), 1.57(br s, 0,5H), 1.14(dd, 3H), 0.74 (s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 462,2 (m+1).
Exemplo 39 R1 = (4-PhO) -Ph; R3 = C02CH3: outro diastereoisômero do carbinol.
Metil 3-((IS)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi- 3-(4-fenoxifenoxi)fenil]-3-metilpirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.56(d, 2H), 7.52(dt, 1H) , 7.42(t, 2H), 7.32(t, 1H) , 7.10- 6.94(m, 5H) , 3.93-3.58(m, 9H) , 3.38-3.18(m, 3H) , 1.13(d, 3H) , 0.88(s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 462,2 (m+1).
Exemplo 40 R1 = Ph; R3 = C02CH3 Metil 3- ((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4-(4-metoxi- 3-fenoxifenil)-3-metilpirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.32-7.26 (m, 3H), 7.02 (t, 2H), 6.94-6.88 (m, 3H) , 3.85- 3.49(m, 11H), 3.27(d, 0,5H), 3.18(d, 0,5H), 1.12 (t, 3H) , 0.71 (s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 386,3 (m+1).
Exemplo 41 R1 = Ph; R3 = C02CH3: outro diastereoisômero do carbinol.
Metil 3-((IS)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(4-metoxi- 3-fenoxifeníl)-3-metilpirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.29 (t, 2H), 7.08-6.85(m, 6H), 3.87-3.52(m, 9H) , 3.34- 3.16(m, 3H), l.ll(d, 3H), 0.85 (s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 386,3 (m+1).
Exemplo 42 R1 = 4-fluorofenil; R3 = C02CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil) {3 S,4 S)—4 -[3-(4- fluorofenoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinacarboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo cryptand de eterificação do Exemplo 36. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.05-6.84(m, 7H), 3.89-3.45(m, 11H), 3.28(d, 0,5H), 3.18(d, 0,5H), 1.13 (t, 3H) , 0.71(br s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 404,4 (m+1).
Exemplo 43 R1 = CH2C3H5; R3 = CO2CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Processo de eterificação por K2C03. A uma mistura agitada do Intermediário 74 (50mg, 0,16mmol) e K2C03 em pó (24,6mg, 0,18mmol) em DMF (lml)foi adicionado bromometil ciclopropano (16,5μ1, 0,17mmol) via seringa, a temperatura ambiente, sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi aquecida a 65°C por 24 horas, e então colocada para resfriar até a temperatura ambiente. A reação então foi diluída com água (5ml) e extraída com Et20 (3 x 20ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo, 0 resíduo foi purifiocado via cromatografia radial (placa de sílica lmm com 30% EtOAc em hexanos) para fornecer o Exemplo 43 como um óleo claro (30mg, 51%). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.84- 6.75(m, 3H), 3.94-3.54(m, 13H), 3.29(d, 0,5H), 3.21(d, 0,5H), 1.72(br s, 0,5H), 1.65(br s, 0,5H), 1.30(c, 1H) , 1.13 (t, 3H) , 0.73 (s, 3H), 0.61(c, 2H), 0.34(c, 2H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 364,3 (m+1).
Exemplo 44 R1 = CH2C3H5; R3 = C02CH3 diastereoisômero Metil 3-((IS)-1-hidroxietil)(3 S,4 S)—4 -[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo de eterificção do Exemplo 43 com K2C03 usando bromometil ciclopropano. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 6.84- 6.75(m, 3H), 3.89-3.58(m, 11H), 3.33-3.20(m, 3H), 1.52(br s, 1H) , 1.31(c, 1H), l.ll(d, 3H), 0.89(s, 3H), 0.62(m, 2H), 0.33(m, 2H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 364,3 (m+1).
Exemplo 45 R1 = 2-tiazol; R3 = C02CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) —4-(-4-metoxi- 3-(1,3-tiazolil-2-oxi)fenil-3-metil-pirrolidina carboxilato Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificção do Exemplo 43 com K2C03 usando 2- bromotiazol. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.24-7.12(m, 3H) , 6.96(df 1H) , 6.75(d, 1H) , 3.89-3.52(m, 11H), 3,29(d, 0,5H), 3.20(d, 0,5H), 1.74(brs, 1H) , 1.14(t, 3H), 0,74 (s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 393,2 (m+l).
Exemplo 46 R1 = 2-tiazol; R3 = C02CH3 diastereoisômero Metil 3-((IS)-1-hidroxietil) (3S,4S) —4 -(4-metoxi- 3-(1,3-tiazolil-2-oxi)fenil)-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir dos isômeros (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo de eterificção do Exemplo 43 com K2C03. XH RMN (CDC13/ 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.17(d, 1H), 7.16(d, 1H), 7.11(dd, 1H), 6.97(d, 1H), 6.75(d, 1H), 3.86-3.59(m, 9H), 3.42-3.19(m, 3H), 1.52(br s, 1H), 1.14(d, 3H), 0.87(s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 393,2 (m+l).
Exemplo 47 R1 = 2-(N-metil)benzimidazol; R3 = C02CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) - 4 (3- bezímidazolil-2-oxi-4-metoxifenil)-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificção do Exemplo 43 com K2C03 usando 2- cloro-N-metil benzimidazol. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.50(d, 1H) , 7.29-7.10(m, 5H) , 6.95(d, 1H) , 3.80-3.66(m, 13H) , 3.57 (t, 1H) , 3.29(d, 0,5H), 3.20(d, 0,5H), 2.04(brs, 1H), 1.13 (t, 3H), 0.77(s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 440,2 (m+1).
Exemplo 48 R1 = 2 -(N-metil)benzimidazol; R3 = C02CH3: diastereoisômero Metil 3-((IR)-1-hidroxietil)(3 S,4S) - 4 - (3- bezimidazolil-2-oxi-4-metoxifenil)-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS)-carbinol do Intermediário 75 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando 2-cloro-l-metil-lH benzimidazol. 1H RMN (CDC13í 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.50(d, 1H) , 7.30-7.09 (m, 5H) , 6.96(d, 1H) , 3.87-3.63(m, 12H), 3.40-3.21(m, 3H), 1.15(d, 3H), 0.91 (s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 440,2 (m+1).
Exemplo 49 R1 = CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3 Metil 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi- 3-(3-fenilpropoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando cloreto de 3-fenil propila. ■‘Ή RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.35-7.17(m, 5H) , 6.85-6.77 (m, 3H) , 4.02(dt, 2H) , 3.90- 3.52(m, 11H), 3.30(d, 0,5H), 3.21(d, 0,5H), 2.82 (t, 2H) , 2.14(p, 2H) , 1.54(br s, 0,5H), 1.49(br S, 0,5H), 1.13(t, 3H), 0.72 (s, 3H) .
Exemplo 50 R1 = CH2CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3, outro diastereoisômero do carbinol Metil 3-((IS)-1-hídroxietil)(3 S,4S)—4—[4-metoxi- 3-(3-fenilpropoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS) carbinol Intermediário 75 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando o isômero (IS) carbinol do Intermediário 75. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.33-7.19(m, 5H), 6.84-6.78(m, 2H), 6.72(br s, 1H), 4.01(t, 2H) , 3.90-3.56 (m, 9H) , 3.34-3.56(m, 9H) , 3.34-3.23(m, 3H) , 2.82 (t, 2H), 2.15 (p, 2H), 1.11(d, 3H), 0.89(s, 3H) .
Exemplo 51 R1 = CH2CH2CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3 Metil 3-( (IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4-[4-metoxi- 3-(4-fenilbutoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando o l-cloro-4-fenilbutano. ^ RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.32-7.15(m, 5H), 6.84-6.74(m, 3H), 4.00 (t, 2H), 3.89- 3.51(m, 11H), 3.30(d, 0,5H), 3.22(d, 0,5H), 2.69(t, 2H) , 1.90-1.79 (m, 4H), 1.41(dd, 1H), 1.13 (t, 3H) , 0.73(s, 3H) .
Exemplo 52 R1 = CH2CH2CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3, outro diastereoisômero do carbinol Metil 3-((IS)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi- 3-(4-fenilbutoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando o l-cloro-5-fenilpentano. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.32-7.16(m, 5H) , 6.83-6.70 (m, 3H), 3.99{t, 2H) , 3.90- 3.58(m, 9H) , 3.34-3.21(m, 3H) , 2.69(t, 2H) , 1.90-1.77(m, 4H), 1.45(br s, 1H), 1.12(d, 3H), 0.90(s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 442,4 (m+1).
Exemplo 53 R1 = CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3 Metil 3-((IS)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4—[4-metoxi- 3-(2-feniletoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03 usando o brometo de 2-fenetila. RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.39-7.23(m, 5H), 6.84-6.78(m, 3H), 4.20(t, 2H) , 3.87- 3.52(m, 11H), 3.30{d, 0,5H), 3.21(d, 0,5H), 3.15(t, 2H) , 1.13(t, 3H) , 0.73(s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 414,3 (m+1).
Exemplo 54 R1 = CH2CH2Ph ; R3 = C02CH3, outro diastereoisômero do carbinol Metil 3-((IS)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi- 3-(2-feniletoxi)fenil]-3-metil-pirrolidina carboxilato.
Preparado a partir do isômero (IS) carbinol Intermediário 75 via processo de eterificação do Exemplo 43 com K2C03. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômetros) δ: 7.34-7.24(m, 5H) , 6.83(d, 1H) , 6.79(dd, 1H) , 6.73(br s, 1H), 4.18(t, 2H), 3.89-3.56(m, 9H), 3.31-3.20(m, 3H), 3.15(t, 2H), 1.11(d, 3H), 0.89(s, 3H).
Exemplo 55 R1 = C5H9 ; R3 = CH2-piridil (IR)-1- [ (3S,4S)—4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(2-piridilmetil)pirrolidinil-3]etanol-1 Processo de aminação redutiva. A uma solução agitada do Intermediário 68 (32mg, 0,lmmol) e 2-carboxialdeído de piridina (lOml, 0,1 mol)em 1,2-dicloroetano seco (0,3ml) foiadicionad triacetoxi boroidreto de sódio (30mg, 0,14mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio na temperatura ambiente. Após agitação de 3 horas, a reação foi extinta com NaHC03 aquoso saturado (0,lml) e agitada por 5 minutos. A reação foi diluída com EtOAc (20ml), lavada com NaHC03 aquoso saturado (2Oml) e então seco (MgSOj e concentrada a vácuo para fornecer o Exemplo 55 como um óleo amarelo (40,4mg, 98%). 3H RMN (CDC13, 400 MHz) : 8.54 (ddd, 1H) , 7.68 (dt, 1H), 7.43(d, 1H), 7.18(ddd, 1H), 6.79-6.73 (m, 3H), 4.75 (c, 1H) , 3.87-3.77(m, 5H) , 3.69(q, 1H) , 3.59 (t, 1H) , 3.33 (t, 1H), 3.16 (d, 1H) , 2.70 (t, 1H) , 2.21 (d, 1H) , 1.92- 1.80(m, 6H) , 1.64-1.57(m, 2H), 1.14(d, 3H) , 0.50(s, 3H).LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 411,4 (m+1).
Exemplo 56 R1 = C5H9 ; R3 = CH2-3-piridil (IR)-1-[(3 S,4 S)—4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(3-píridilmetil)pirrolidinil-3]etanol-1 Preparado a partir do Intermediário 68 via o processo de aminação redutiva do Exemplo 55 usando piridina-3-carboxaldeído. 3H RMN (CDC13, 400 MHz) : 8.54 (d, 1H) , 8.51 (dd, 1H), 7.68(d, 1H), 7.26(dd, 1H), 6.78-6.71(m, 3H), 4.74(c, 1H) , 3.86-3.78(m, 4H) , 3.68(q, 1H) , 3.64(d, 1H) , 3.53(t, 1H) , 3.22 (t, 1H), 3.05(d, 1H) , 2.62 (t, 1H) , 2.14(d, 1H) , 1.92-1.78 (m, 6H) , 1.64-1.56(m, 2H) , 1.12(d, 3H) , 0.50(s, 3H).LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 411,4 (m+1).
Exemplo 57 R1 = C5H9 ; R3 = CH2-4-piridil (IR)-1- [ (3S,4S)—4—(3-ciclopentiloxi-4-metoxi- fenil)-3-metil-l-(4-piridilmetil) pirrolidinil-3]etanol-1 Preparado a partir do Intermediário 68 via 0 processo de aminação redutiva do Exemplo 55 usando piridina-4-carboxaldeído. XH RMN (CDCI3, 400 MHz) : 8.54 (d, 1H) , 7.27 (d, 2H), 6.79-6.72(m, 3H), 4.74(c, 1H), 3.86-3.74(m, 4H), 3.70(q, 1H), 3.64(d, 1H), 3.55(t, 1H), 3.23(t, 1H) , 3.06(d, 1H), 2.64 (t, 1H), 2.15(d, 1H), 1.92-1.80 (m, 6H) , 1.65- 1.58(m, 2H) , 1.14(d, 3H) , 0.52(s, 3H).LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 411,4 (m+1).
Exemplo 58 R1 = C5H9 ; R3 = CH2CH2C02CH2Ph Fenil metil 3-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4- (3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]- propanoato. A uma solução agitada de acrilato de benzila (19,4mg, 0,12mmol) em DMF seco (0,lml) foi adicionado o Intermediário 68 (12,8mg, 0,04mmol) and K2C03 em pó (26,5mg, 0,18mmol) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi deixada sob agitação a 80°C por 16 horas, e então deixada resfriar até a temperatura ambiente. A reação foi diluída com CH2C12 (20ml) , lavada com água, com NaHC03 aquoso saturado e salmoura, e então seco (Na2S04), filtrado e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado via cromatografia rápida (2:1, EtOAc:hexanos sobre sílica gel) para fornecer o Exemplo 58 (ll,7mg, 60%). 3H RMN (CDC13, 400 MHz) : 7.37-7.31 (m, 5H) , 6.81-6.72(m, 3H) , 5.41(q, 2H) , 4.76(c, 1H) , 3.87-3.81(m, 4H) , 3.65(q, 1H) , 3.54 (t, 1H) , 3.31(t, 1H) , 3.15(d, 1H) , 2.82(dt, 2H) , 2.62-2.54(m, 3H) , 2.08(d, 1H) , 1.91-1.81(m, 6H), 1.66-1.56(m, 2H), 1.15(d, 3H), 0.48(s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 482,3 (m+1).
Exemplo 59 R1 = C5H9 ; R3 = CH2CH2C02H Ácido 3- [3-((IR)-1-hidroxietil){3S,4S)—4 —(3-ciclo pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil] propanóico.
Preparado a partir do Exemplo 58 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 3H RMN (CDCI3, 400 MHz) : 6.82-6.71 (m, 3H) , 4.80 (c, 1H) , 4.06-3.15 (m, 11H), 2.73(br s, 2H), 1.91-1.74 (m, 6H), 1.63-1.53(m, 2H), 1.14(d, 3H), 0.68(s, 3H).
Exemplo 60 R1 = C5H9 ; R3 = CH2C02CH2Ph Acetato de fenil metil 2 - [3 - {(IR) - 1 - hídroxietil){3 S,4 S)—4-(3-ciclo pentiloxi-4-metoxifenil)-3- metilpirrolidinil].
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acoplamento mediado por base de Hunig do Intermediário 74 usando bromoacetato de benzila. XH RMN (CDC13, 400 MHz) : 7.41-7.32 (m, 5H) , 6.82-6.73 (m, 3H) , 5.18(q, 2H) , 4.77 (c, 1H) , 3.82(s, 3H) , 3.68(q, 1H) , 3.59{t, 1H) , 3.52(d, 1H) , 3.36-3.30 (m, 2H) , 3.24(d, 1H) , 2.88 (t, 1H) , 2.31(d, 1H) , 1.93-180 (m, 6H) , 1.65-1.56 (m, 2H), 1.16(d, 3H), 0,53 (s, 3H) . LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 468,3 (m+1).
Exemplo 61 R1 = C5H9 ; R3 = CH2C02H Ácido 2 - [3 - ((IR) - 1 -hídroxietil) (3S,4S)-4- (3 - ciclo - pentiloxi - 4 - metoxi - fenil) - 3 - metil - pirrolidinil] acético.
Preparado a partir do Exemplo 60 via processo de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (CDCI3, 400 MHz) : 6.77-6.68(m, 3H) ,5.56(br s, 1H) , 4.77(c, 1H), 3.99-3.85 (m, 4H), 3.82- 3.59(m, 7H), 2.88(brs, 1H), 1.91-1.75(m, 6H), 1.59-1.51(m, 2H), 11.1 (d, 3H), 0.67(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 376,2 (m-1).
Exemplo 62 R1 = C5H9 ; R3 = COCH (Oac) Ph Acetato de 2-[(3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-(3 - ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metil-pirrolidinil]-2-oxo- 1-feniletila.
Preparado a partir do Intermediário 68 (104mg, 0,33mmol) e ácido O-acetil mandélico clorídrico (75ml, 0,33mmol) pelo processo de acilação do Exemplo 7 para produzir o Exemplo 62 (149mg, 100%). 3H RMN (CDC13i 400 MHz) : 7.60-7.37 (m, 5H) , 6.82-6.70 (m, 3H) , 6.08(mf 1H) , 4.76(m, 1H) , 4.05-3.32(m, 7H), 3.81 (s, 3H) , 2.20(s, 3H), 1.95-1.53(br m, 5H), 1.13 e 0,51(dubletes, 3H, rotomeros) , 0;79 e 0,41 (singletes, 3H, rotomeros).
Exemplo 63 R1 = C5H9 ; R3 = COCH (OH) Ph 1- [ (3R)-3- ((IR)-l-hidroxietil)-4-(3- ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)-3-metil-pirrolidinil] -2-hidroxi-2-fenil etanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 62 por processo de hidrólise com LiOH do Intermediário 5, para fornecer o Exemplo 63 como uma espuma branca (99mg, 66%). XH RMN (CDC13, 400 ΜΗζ) : 7.41-7.26 (m, 5Η) , 6.80-6.41(m, 3Η) , 5.16-5.07{m, 1Η) , 4.75-4.54 (multipletes, 1H, rotometros e diastereoisomeros), 4.06-2.80(m, 7H), 3.81, 3.79 e 3.78(síngletes, 3H, rotomeros e diastereoisomeros), 1.95-1.55(br m, 5H) , 1.15 e 1.02(dubletes, 3H, rotomeros), 0,77, 0,75, 0.46 e 0.38(síngletes, 3H, rotomeros e diastereoisomeros). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 454,5 (m+1).
Exemplo 64 R1 = C5H9 ; R3 = COCH2OCH2Ph 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)—4—(3— ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-(fenilmetoxi) etanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 68 (176mg, 0,574mmol) por processo de base de Hunig do Intermediário 74, usando cloreto de benziloxiacetila (31 1, 0,22mmol, 2eq) rendendo um óleo claro e incolor (79mg, 29%). XH RMN (CDCI3, 400 ΜΗζ, mistura de rotomeros) : 7.38-7.28(m, 5H), 6.77-6.73(m, 3H), 4.73-4.71(m, 1H), 4.65- 4.64 (m, 2H) , 4.14-3.19(c, 12H) , 2 .-07-1.56 (m, 8H) , 1.16- 1.09(dd, 3H), 0.72 (s, 3H). LRMS (Eletrosdpray, positivo): Da/e 454,5 (m+1).
Exemplo 65 R1 = C5H9 ; R3 = COCH2OH 1-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4-(3- ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-hidroxieta- nona-1.
Preparado a partir do Exemplo 64 pelo processo de debenzilação do Intermediário 31, rendendo um sólido branco (47mg, 73%). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotômeros) : 6.82-6.76(m, 3H), 4.75-4.73(m, 1H), 4.15-3.04(c, 12H) , 1.92-1.61(m, 9H), 1.27-1.24(dd, 3H), 0.76(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,2 (m+1).
Exemplo 66 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-C0CH(0ac)CH3 Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3- ciclopen-tíloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-(IS)-1- metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 68 (106mg, 0,330mmol) por processo de acilação do Exemplo 7, usando cloreto de (S)- (-)-2-acetoxipropionila (84 1, 0,66mmol, 2eq) rendendo um óleo claro e incolor que não foi oposteriormente purificado.
Exemplo 67 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-COCH(OH)CH3 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclopen- til-oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil] (2 S)-2-hidroxi- propanona-1. 0 composto bruto do Exemplo 66 foi desprotegido pelo processo do LiOH do Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 67 como um sólido branco (22mg, 17% para duas etapas). 3H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.82-6.76(m, 3H) , 4.75- 4.73(m, 1H) , 4.38-4.35 (m, 1H), 3.88-3.55(c, 9H) , 3.39- 3.25(dd, 11H), 1.92-1.58(m, 9H) , 1.41-1.36(dd, 3H) , 1.18- 1.14(dd, 3H), 0.77-076(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 392,3 (m+1).
Exemplo 68 R1 = C5H9 ; R3 = CO(CH2CH2)OAc Acetato de {[3-((lR)-l-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3- ciclopentil-oxi-4-metoxifenil)-3- metilpirrolidinil]carbonil}ciclopro-pila. 0 Intermediário 68 (97,6mg, 0,306mmol) foi acilado pelo processo de acilação do exemplo 7, usando cloreto de 2-acetoxi-2-cilcopropano etanoila (99mg, 0,61mmol), rendendo um óleo claro e incolor (77mg, 56%). XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 6.78-6.71(m, 3H), 4.72-4.71(m; 1H), 3.80-3.36(m, 10H), 2.08(s, 3H) , 1.90-1.50 (m, 11H), 1.16-l.ll(d, 3H) , 0.96(br s, 1H) , 1.18-1.14(dd, 3H), 0.70(s, 3H).
Exemplo 69 R1 = C5H9 ; R3 = CO(CH2CH2)OH [3-((IR)-1-hidroxietil){3S,4S) —4-(3-ciclopentíl- oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil hidroxi ciclopropil cetona. 0 composto do Exemplo 68 (77mg) foi hidrolisado pelo processo LiOH do Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 69 como um sólido branco (34mg, 44% em duas etapas) . XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 6.80-6.75(m, 3H), 4.74-3.33(c, 10H), 2.30(br s, 1H), 1.93- 1.56(m, 8H), 1.37-0.89(m, 8H), 0.74-0.72(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 404,4 (m+1).
Exemplo 70 R1 = C5H9 ; R3 = COCH(OAc) (CH3)CH3 Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)—4 —(3- ciclopen-tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1,1- dimetil-2-oxoetila. O Intermediário 68 (123mg, 0,389mmol) foi acilado pelo processo de acilação do Exemplo 7, usando cloreto de (+)-2-acetoxi-2-metilpropionila (11μ1, 0,l78mmol, 2eq). C óleo resultante não foi posteriormente purificado.
Exemplo 71 R1 = C5H9 ; R3 = COCH(OH) (CH3)CH3 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) —4—(3-ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-hidroxi-2- metilpropanona-1. 0 produto bruto do Exemplo 70 foi convertido por processo de hidrólise com LiOH do Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 71 como um sólido branco (47mg, 30%). 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 6.79-6.75 (m, 3H) , 4.75(br s, 1H) , 4.49(br s, 1H) , 3.91- 3.48 (c, 10H), 1.90-0.46(m, 14H) , 1.18-1.14(dd, 3H) , 0.77- 0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,3 (m+1).
Exemplo 72 R1 = C5H9 ; R3 = COCO2CH3 Metil 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3 S,4 S)—4 —(3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxoa- cetato. O Intermediário 68 (57,7mg, 0,180mmol) foi convertido pelo processo de DIEA do Intermediário 32, usando cloreto de metil oxalila para render o Exemplo 72 como um óleo claro e incolor (26,8mg, 36%). XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 6.81-6.77(m, 3H), 4.75-4.74(m, 1H), 4.12-3.45(c, 13H), 1.91-1.52(m, 8H), 1.18-1.13(dd, 3H), 0.78-0.75(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,4 (m+1).
Exemplo 73 R1 = C5H9 ; R3 = COCO2CH3 Ácido 2 - [3 - ((IR) -1-hidroxietil) (3S,4S) — 4 - (3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2- oxoacético. 0 exemplo 72 (46,8mg, 0,116mmol) foi convertido pelo processo de LiOH do Intermediário 5, para fornecer o Exemplo 73 como um filme claro e incolor (34mg, 76%). XH RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 6.82-6.76 (m, 3H) , 4.75- 4.73(m, 1H) , 4.43-3.49 (c, 10H), 1.92-1.58 (m, 8H) , 1.ΙΟ- Ι. 16(dd, 3H) , 0.78-0.76(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, negativo): Da/e 390,2 (m-1).
Exemplo 74 R1 = C5H9; R3 - COCONH2 2 - [3 - ((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S) - 4 -(3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxoa- cetamida. 0 exemplo 72 (7,lmg, 0,014mmol) foi dissolvido em THF (0,5ml) e foi adicionado NH40H (0,5ml) e a aparelhagem foi selada e agitada por 2 horas na temperatura ambiente. 0 TLC (1:1, EtOAc:hexanos) mostrou consumo completo do material de partida. A reação foi diluída com EtOAc (20ml) E AS CAMADAS OPRGANICAS FORAM LAVADASS COM SALMOURA (2 x 15ml). A camada organica foi seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo para fornecer um óleo claro e incolor (6,6mg, 117%). ln RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.36(br s, 1H) , 6.82- 6.79(m, 3H), 5.53(br s, 1H), 4.76-4.75(m, 1H), 4.44-3.47(c, 10H), 1.92-1.58(m, 8H), 1.18-1.17(d, 3H), 0.78-0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, negativo): Da/e 389,1 (m-1).
Exemplo 75 R1 = PhC=CCH2; R3 = COCONH2 2-{ (3S,4S)-3-((IR)-l-hidroxietil)-4-[4-metoxi-3- (3- fenilpropinil - 2 - oxi)fenil] - 3 - metilpirrolidiníl - l}-2-oxoacetamida.
Preparado pela acilação do Intermediário 73 com cloreto de metil oxalila pelo processo com DIEA do Intermediário 32, remoção do grupo t-butil pelo processo do Intermediário 72, O-alquilação com o Intermediário 90 pelo processo de eterificação com K2C03 do Exemplo 43 e amidação pelo processo do Exemplo 74. XH RMN (CDC13, 400 ΜΗζ) δ: 7.28-7.42 (m, 5Η) , 7.08(sd, 1Η) , 6.83-6.87 (m, 2Η) , 5.45(bs, 1Η) , 5.0(s, 2H) , 4.42-4.48(2 d, 0,5H), 4.26(t, 0,5H), 3.72-4.01 (m, 3,5H), 3.89(s, 3H) , 3.50-3.70(m, 1H), 3.44(d, 0,5H), 0.96-0.99(dd, 3H), 0.71(d, 3H).
Exemplo 76 R1 = 4-CF3PhC=CCH2; R3 = COCONH2 2-((3 S,4S)-3-((lR)-l-hidroxietil)-4-{4-metoxi-3- [3- (4-trifluorometil-fenil)propinil - 2 - oxi]fenil} - 3 - metilpirrolidinil - l}-2-oxoacetamida.
Preparado como descrito no Exemplo 75, usando o Intermediário 92 como agente O-alquilante. 1H RMN data δ: 7.50-7.61(m, 4H) , 7.04(s, 1H) , 6.85-6.91(m, 2H), 5.69(bs, 1H), 5.00{s, 2H), 4.42-4.49(2d, 0,5H), 4.26(t, 0,5H), 3.69-4.07(m, 5H), 3.90(s, 3H), 3.45- 3.58(m, 1H), 1.04-1.07(dd, 3H), 0.73{d, 3H).
Exemplo 77 R1 = 4-FPhOCH2CH2CH2; R3 = COCONH2 2- [ (3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluoro-fenoxi)propoxi]-4- metoxi-fenil}-3-((R)-1-hidroxi-etil)-3-metil-pirrolidinil - 1]-2-oxoacetamida.
Preparado como descrito no Exemplo 75, usando o 1-(3-cloropropoxi)-4-fluorbenzeno como agente alquilante. 3H RMN data δ: 6.93-6.99(m, 2H) , 6.82-6.88 (m, 5H), 5.44 (s, 1H), 4.4 0 (dd, 0,5H), 4.14-4.22(m, 5H), 3.83(s, 3H), 3.69-4.04(m, 5H) , 3.56(d, 0,5H), 2.28(quint, 2H), 1.16(dd, 3H), 0.75(d, 3H).
Exemplo 78 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCONH2 2-[(3 S,4S)-4-(3-cloropropilmetoxi-4-metoxifenil}- 3-((R)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2-oxoaceta- mida .
Preparado como descrito no Exemplo 75, usando o brometo de ciclopropil metila como agente alquilante. 3H RMN data δ: 6.80-6.81(m, 3H) , 5.50(bs, 1H) , 4.40(2d, 0,5H), 4.23(t, 0,5H), 3.68-4.05(m, 7H) , 3.84 (s, 3H), 1.40 (t, 1H) , 1.17(sd, 3H) , 0.76(d, 3H) , 0.61-0.67(m, 2H), 0.33-0.38(m, 2H).
Exemplo 79 R1 = 2-indanila ; R3 = COCONH2 2-{ (3S,4S)-3-((R)-1-hídroxietil)-4-[3-(indanil- oxi-2)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil-l}-2-oxoaceta- mida.
Preparado como descrito no Exemplo 75, usando o 2-bromo-indano como agente alquilante. lE RMN data δ: 7.16-7.24(mf 4H), 6.84-6.87(m, 3H) , 5.51(s, 1H) , 5.17-5.20(m, 1H) , 4.42-4.5(2d, 0,5H), 4.24 (t, 0,5H), 3.60-4.06 (m, 6H) , 3.81(s, 3H) , 3.20-3.40(m, 4H), 1.20(sd, 3H), 0.78(d, 3H).
Exemplo 80 R1 = C5H9 ; R3 = COCONHCH3 2-[3-((R)-1-hidroxietil) (3S,4S) -4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidinil]-N-metil-2-oxoace- tamida. O Exemplo 72 (17,3mg, 0,0427mmol) foi dissolvido em THF (0,8ml). Foi adicionada metilamina (40% em água, 0,5ml), e o equipamento foi selado e agitado por 1 hora na temperatura ambiente. O TLC (3:1 EtOAc:hexanos) mostrou consumo completo do material de partida. A reação foi diluída com EtOAc (2Oml) e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (2 x 15ml). A camada organica final foi seca sobre Na2S03 e concentrada a vácuo para fornecer um óleo claro e incolor (I6,9mg, 97%). 3H RMN data δ: 7.59(br s, 1H), 6.80-6.79(m, 3H), 4.75-4.73(m, 1H) , 4.47-3.46(c, 10H), 2.89-2.87 (dd, 3H), 1.19-1.57(m, 8H), 1.18-1.16(dd, 3H), 0.76-0.73(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 405,1 (m+1).
Exemplo 81 R1 = C5H9 ; R3 = COCO-piperidina 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidinil]-2-piperidiletano- 1,2-dianona. O Exemplo 72 (25,4mg, 0,0626mmol) foi dissolvido em THF (0,8ml). Foi adicionada piperidina (213ml, 2.15mmol, 34eq.) e o equipamento foi selado e aquecido a 53°C por 12 horas. O TLC (100% EtOAc) mostrou pequena quantidade de formação de produto. A reação foi diluída com EtOAc (20ml) e as camadas orgânicas foram lavadas com HCl 2N (2 x 15ml), NaOH IN (15ml) e salmoura (2 x 15ml) . A camada organica final foi seca sobre Na2S03 e concentrada a vácuo para fornecer um óleo claro e incolor (l,2mg, 4%). '‘Ή RMN data δ: 6.82-6.76 (m, 3H) , 4.75(m, 1H) , 4.01-3.27 (c, 14H), 1.89-1.59 (m, 14H) , 1.18-1.13 (dd, 3H), 0.78-0.74 (d, 3H) .
Exemplo 82 R1 = C5H9 ; R3 = COCONHC5H9 2- [3-{(IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxífenil}-3-metilpirrolidinil]-N-ciclopentil-2- oxoacetamída. 0 Exemplo 72 (20,9mg, 0,0515mmol) foi dissolvido em THF (0,8ml). Foi adicionada ciclopentilamina (211μ1, 2.13mmol, 41eq) e a reação foiagitada na temperatura ambiente por 42 horas. A reação foi diluída com EtOAc (2Oml) e as camadas orgânicas foram lavadas com HC1 2N (2 x 15ml) , NaOH IN (15ml) e salmoura (2 x 15ml) . A camada organica foi seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. 0 óleo resultante foi purificado por cromatografia em sílica (100% EtOAc) para fornecer um óleo claro e incolor (14,0mg, 59%) . 3H RMN (CDC13i 400 MHz) δ: 7.57-7.53 (br s, 1H) , 6.8-6.78(m, 3H) , 4.76-4.73 (br s, 1H) , 4.48-3.44 (c, 9H), 2.04-1.48 (m, 18H), 1.18-1.16(d, 3H) , 0.77-0.73(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, negativo): Da/e 457,2 (m-1).
Exemplo 83 R1 = C5H9 ; R3 = COCONHCH2Ph 2- [3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclopenti- loxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil]-2-oxo-N- benzil acetamida. 0 Exemplo 83 foi preparado pelo método do Exemplo 82 usando benzilamida para fornecer um óleo claro e incolor (9,4mg, 47%). XH RMN (CDC13, 400 MHz) Ô: 7.96-7.92 (br s, 1H) , 7.36-7.25(m, 3H) , 4.75(br s, 1H) , 4.49-4.47(d, 2H) , 4.28- 3.46 (c, 9H), 1.93-1.61 (m, 8H), 1.19-1.16 (dd, 3H), 0.78- 0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, negativo): Da/e 481,4 (m+1).
Exemplo 84 R1 = C5H9 ; R3 = (R) -COCH (C4HS) NHC02CH2Ph N-{(1)-2—[3—({IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentiloxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil]- l-butil-2-oxoetil}(fenilmetoxi)carboxamida. 0 Intermediário 68 (39,5mg, 0,129mmol) foi convertido pelo processo DIEA do Intermediário 32 para render um óleo claro e incolor (59,0mg, 80%). XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 7.36-7.26(m, 5H), 6.82-6.71(m, 3H), 5.71-5.68(dd, 1H), 5.12-5.06(m, 2H) , 4.73(m, 1H) , 4.49-4.47(m, 1H), 4.12- 2.58 (c, 8H) , 2.03-1.25(m, 16H), 1.16-1.14(dd, 3H) , 0.92- 0.84(m, 3H), 0.73-0.72(d, 3H).
Exemplo 85 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-COCH(NH2)C4H9 (2R)-1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentiloxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil]- 2 -aminoexanona-1. O Exemplo 84 (59mg, 0,10mmol) foi convertido pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 85 como um pó branco (43mg, 95%). 1H RMN (CD3OD, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 6.90-6.83(m, 3H) , 3.85-3.30 (c, 10H), 2.00-1.37(m, 14H) , 1.14-1.11 (dd, 3H) , 1.10-0.92(dt, 3H), 0.77(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, negativo): Da/e 433,5 (m+1).
Exemplo 86 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-C0CH(i-Pr)NHC02CH2Ph N-{(IR)-2—[3—((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentiloxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil]- 1-(metiletil)-2-oxoetil}(fenilmetoxi)-carboxamida 0 Intermediário 68 (43,7mg, 0,143mmol) foi acilado pelo método da base de Hunig do Intermediário 74 usando Z-D-Val-Osu (54,6mg; 0,15mmol, l,leq), rendendo um óleo claro e incolor (38,9mg, 49%). 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotometros) δ: 7.36-7.33(m, 5H), 6.80-6.71(m, 3H), 5.62-5.59(d, 1H), 5.10- 5.06(m, 2H) , 5.84-5.72 (m, 1H) , 4.12-2.68(c, 10H), 2.03- 1.52(m, 9H) , 1.18-1.14(dd, 3H) , 1.04-0.92(m, 7H), 0.73- 0.70(d, 3H).
Exemplo 87 R1 = C5H9 ; R3 = (R) -COCH (i-Pr) NH2 (2R)-1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentíloxi - 4 - metoxifenil) - 3 - metilpirrolidinil]- 2-amino-3-metilbutanona-1. 0 Exemplo 86 (38,9mg, 0,070mmol) foi convertido pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 87 como um sólido claro (26mg, 88%). 3Η RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.42-6.33 (m, 3H) , 4.36(m; 1H), 3.62-2.80(0, 10H) , 2.81-2.68(m, 1H) , 1.42- 1.08(m, 9H), 0.78-0.65(m, 9H), 0.24 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 419,5 (m+1).
Exemplo 88 R1 = C5H9 ; R3 = (R) -COCH(OAc)C6Hn Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil](IS)-1- cicloexil-2-oxoetila. 0 Intermediário 68 (41,2mg, 0,129mmol) foi acilado pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74 usando 0 ácido(S)-(+)-acetoxiexaidromandelico clorídrico (625ml, 0,4121 M em CH2C12, mistura de rotomeros) para fornecer 0 Exemplo 88 como um óleo claro e incolor (40,5mg, 63%) . 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.78-6.77(m, 3H), 4.84-4.72(m, 2H), 4.12-3.11(m, 9H), 2.10(d, 3H) , 2.02-1.68(m, 1,5H), 1.38-0.99(m, 10H), 0.81- 0.74(d, 3H).
Exemplo 89 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-COCH(OH)C6Hh 1- [3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil](2S)-2-cicloexil- 2-hidroxietanona-1. O Exemplo 88 (40,5mg, 0,0807mmol) foi convertido pelo processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para atingir 0 Exemplo 89 como um óleo claro e incolor (26,9mg, 72%) . ^ RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.80-6.78 (m, 3H) , 4.73(m, 1H), 4.14-4.06(m, 1H), 3.83- 2.99 (c; 9H) , 1.91-1.36(m, 1,7H), 1.35-1.11 (m, 7H), 0.79- 0.78(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 460,3 (m+1).
Exemplo 90 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-COCH(OAc)C6Hn 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil](2R)-2-cicloexil- 2-acetoxietanona-l 0 intermediário 68 (43,lmg, 0,135mmol) foi convertido pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74 usando ácido (R) - (-)-acetoxiexaidromandélico clorídrico (368ml, 0,734 M em CH2C12, 2eq) para fornecer um óleo claro e incolor (59,9mg, 88%).
Exemplo 91 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-COCH(OH)C6Hn (2R)-1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2- cicloexil-2-hidroxietanona-l. 0 Exemplo 90 (59,9mg, 0,119mmol) foi convertido pelo processo de hidrólise com LiOH do Intermediário 5 para formar um filme claro e incolor (46,6mg, 84%). RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.85-6.74(m, 3H), 4.79-4.72(m, 1H), 4.13-4.07(m, 1H), 3.87- 3.01 (c, 9H) , 1.96-1.34(m, 1,7H); 1.34-1.08 (m, 7H) , 0.78- 0.77(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 460,4 (m+1).
Exemplo 92 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-C0CH(C4H9)NHC02CH2Ph N-{2- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]- (IS)-1- butil-2-oxoetil}(fenilmetoxi) carboxamida. O Intermediário 68 (40,6mg, 0,125mmol) foi convertido pelo processo da bese de Hunig do Intermediário 74 usando Z-L-Nle-ONp (53mg, 0,15mmol, l,leq) para fornecer o Exemplo 92 como um óleo claro e incolor (50,4mg, 71%). ’Ή RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.36-7.25(m, 5H), 6.80-6.75(m, 3H), 5.74-5.72(dd, 1H), 5.10-5.06(m, 2H), 4.74-4.53(m, 1H) , 4.13(m, 1H), 4.13- 3.35 (c, 8H), 1.95-1.24 (m, 16H), 1.14-1.13(d, 3H), 0.93- 0.87(m, 3H), 0.74 (s, 3H) .
Exemplo 93 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-COCH(C4H9)NH2 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclopen- tiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-(2 S)-2-amino- exanona-1. 0 Exemplo 92 (50,4mg, 0,0889mmol) foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 93 como um sólido branco (31,7mg, 82%). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.89-6.74(m, 3H) , 4.83-4.75(m, 1H), 4.40-3.32(c, 10H), 1.99-1.68(m, 14H), 1.14-1.12(m, 3H), 1.04-0.95(d, 3H), 0.91-0.88(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 433,5 (m+1).
Exemplo 94 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-COCH(CH2)3CH3 Acetato de (IR)-2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)- 4-(3-ciclo-pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1- butil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acoplamento de base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (IR)-1-(clorocarbonil)pentila. 1H RMN (CDC13/ 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.81(m,2H) , 6.79-6.69 (m, 3H), 5.10-5.02(m, 1H), 4.79- 4.73(m, 1H) , 4.14-3.18(c, 9H) , 2.14(d, 3H) , 1.94-1.76(m, 8H), 1.53 -1.34(m, 4H) , 1.20(dd, 2H), 0.96-0.86(m, 3H), 0.74 (d, 3H).
Exemplo 95 R1 = C5H9 ; R3 = (R)-COCH(OH) (CH2)3CH3 (2R)-1-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclo- pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-hidroxieta- nona-1. O Exemplo 94 (5mg, 0,011mmol) foi hidrolisado por LiOH para render o Exemplo 95 (2,5mg, 55%), como um filme claro. 3H RMN (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 6.91-6.80(m, 3H) , 4.34-4.28(m, 1H), 4.04-3.35(c, 9H), 1.90-1.77(m, 8H), 1.74- 1.62(m, 2H) , 1.55-1.23(m, 4H) , 1.12(d, 3H) , 0.97-0.87(m, 3H), 0.74 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 434,2 (m+1).
Exemplo 96 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-COCH(NHCBZ)CH2Ph N-{2- [3- ((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-ciclo- pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-(IS)-2-oxo-l- benziletil}(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acilação da base de Hunig do Intermediário 74 usando o p-nitrofenilester do N-CBZ-(S)-fenilalanina. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.41-7.26(m, 10H), 6.78-6.42(m, 3H), 5.78-5.74(m, 1H), 5.14-5.05(m, 2H) , 4.76-4.70 (m, 2H), 3.81(s, 3H), 3.75- 2.66(c, 10H), 1.94-1.80(m, 6H) , 1.65-1.57 (m, 2H) , 1.08- 0.99(dd, 3H), 0.64 e 0.33 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 601,2 (m+1).
Exemplo 97 R1 = C5H9 ; R3 = (S)-COCH(NH2)CH2Ph 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3- ciclopentil-oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-{2 S)-2- oxo-ami no-3-fenilpropanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 96 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN (Metanol-d4, 400 MHz, mistura de rotomeros) 6: 7.47-7.31(m, 5H) , 6.88-6.47 (m, 3H), 4.78- 4.76(m, 1H) , 4.48-4.44(m, 1H), 3.80-3.06 (c, 13H), 1.88- 1.80(m, 6H) , 1.67-1.64(m, 2H) , 1.02(d, 3H) , 0.75 e 0.34(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 467,5 (m+1).
Exemplo 98 R1 = C5H9 ; R3 = (R) -COCH (NHCBZ) CH2Ph N-{(IR)-2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3- ciclo-pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxo- 1-benziletil}(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 68 via processo de acilação da base de Hunig do Intermediário 74 usando o p-nitrofenilester do N-CBZ-(R)-fenilalanina. RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.41-7.19 (m, 10H), 6.77-6.46(m, 3H), 5.70(d, 1H), 5.14- 5.04(m, 2H) , 4.76-4.69 {m, 2H), 3.82(s, 3H) , 3.93-2.99 (c, 6H) , 2.53(d, 1H), 1.93-1.81(m, 6H), 1.62-1.56 (m, 2H) , 1.06(dd, 3H), 0.67 e 0.28 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 602,3 (m+1).
Exemplo 99 R1 = C5H9 ; R3 = (R) -COCH (NH2) CH2Ph (2R)-1-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-ciclo- pentiloxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolídinil]-2-amino-3- fenilpropanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 98 via processo de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (Metanol-d4, 400 MHz, mistura de rotomeros) 8: 7.42-7.26(m, 5H), 6.88-6.65(m, 3H), 4.08- 4.78(m, 1H) , 4.42-4.39(m, 1H), 3.89-2.42(c, 13H), 1.89- 1.79(m, 6H) , 1.64-1.62(m, 2H) , 0.99(dd, 3H), 0.69 e 0.21 (s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 467,0 (m+1).
Exemplo 100 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH(OAc)C4H9 Acetato de 2-{ (3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4- [3-(ciclo-propilmetoxi)-4-metoxifenil] -3- metilpirrolidinil}-2-oxo-l-propil etila. 0 Intermediário 67 (46mg, 0,15mmol) foi convertido pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de (+)-2-acetoxipropionila (29mg, 0,165mmol) para chegar ao Exemplo 100 (36mg, 54%). XH RMN (CDCI3, 400 MHz) 6: 6.86-6.69(m, 3H) , 5.30- 5.02(m, 1H) , 4.17-4.00(m, 1H) , 3.82 (s, 3H) , 3.82-3.18(m, 5H) , 3.08 e 2.97 (singletes, 2H, rotomeros), 2.13 e 2.11(singletes, 3H, rotomeros), 1.95-1.23 (m, 5H) , 1.20- 1.14(m, 2H) , 1.00-0.92(m, 3H) , 0.76 e 0.72(dubletes, 3H, rotomeros), 0.62(m, 2H), 0.36(m, 2H) .
Exemplo 101 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH(OH)C4H9 l-{ {3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- hidroxipen-tanona-1. O Exemplo 100 (36mg, 80μmol) foi sujeitado ao processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 101 como um filme claro (30mg, 90%). XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.85-6.73 (m, 3H) , 4.23(m, 1H) , 4.07-2.98 (m, 6H) , 3.83(s, 3H) , 1.17-1.23(m, 5H) , 1.16(m, 3H) , 0.96(m, 3H) , 0.77(s, 3H) , 0.62(m, 2H) , 0.37(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,5 (m+1).
Exemplo 102 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COC(CH3)OCH2Ph 1-{ (3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-(3- ciclopentil-metoxi)-4-metoxifenil] -3- metilpirrolidinil}(2S)-2-(fenilme-toxi)propanona-l. O Intermediário 67 (46mg, 0,15mmol) foi convertido pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de (2S)-2-(fenilmetoxi)propanoila (59mg, 0,3mmol) para fornecer o Exemplo 102 (54mg, 77%). 3Η RMN (CDC13í 400 MHz) δ: 7.40-7.25 (m, 5H) , 6.82- 6.77(m, 2H), 6.72(s, 1H), 4.63(dd, 1H), 4.49(dd, 1H), 4.22(m, 1H), 3.98-3.38 (m, 8H) , 3.82(s, 3H), 3.07 e 2.96 (singletes, 1H, rotomeros) , 1.43(m, 3H) , 1.31(m, 1H) , 1.17 e 1.10(dubletes, 3H, rotomeros), 0.72 e 0.70(singletes, 3H, rotomeros), 0.62(m, 2H), 0.37(m, 2H).
Exemplo 103 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COC(CH3)OH 1-{ (3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-(3- ciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3- metilpirrolidinil}(2S)-2-(hidroxi)-propanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 102 (54mg, 0,12mmol) pelo processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 103 como um óleo claro (45mg, 100%). 3H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 6.84-6.73 (m, 3H) , 4.44(m, 1H) , 4.06-3.16(m, 8H) , 3.82 (s, 3H) , 2.99(d, 1H) , 1.38(m, 3H, rotomeros), 1.30(m, 1H), 1.18(m, 3H, rotomeros), 0.78 e 0.76 (singletes, 3H, rotomeros), 0.62(m, 2H), 0.36(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,7 (m+1).
Exemplo 104 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(t-Bu)NHC02t-Bu N-((IR)-2-{(3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-1- (terc-butil)-2-oxoetil)(terc-butoxi) carboxamida. 0 Intermediário 67 (46mg, 0,15mmol) foi convertido pelo processo de acoplamento EDCI do Exemplo 27 usando Boc-D-t-butilclicina (35mg, 0,15mmol) para obter 0 Exemplo 104 como uma espuma branca (62mg, 80%). 3H RMN {CDCI3, 400 MHz) δ: 6.85-6.79(m, 2H), 6.72- 6.64(m, 1H), 4.36-4.00(m, 3H, rotomeros), 3.83 (s, 3H), 3.79(d, 2H) , 3.67-3.12(m, 4H, rotomeros), 1.44 e 3.79(d, 2H) , 3.67-3.12(m, 4H, rotomeros), 1.44 e 1.41(singletes, 9H, toromeros), 1.32(m, 1H), 1.22-1.16(m, 3H), 1.06 e 1.01(siongletes, 9H, rotomeros), 1.02)m, 3H), 0.73 e 0.63(singletes, 3H, rotomeros), 0.61(m, 2H), 0.36(m, 2H).
Exemplo 105 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -COCH(t-Bu)NH2 (2R)-l-{(3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3- (ciclo-propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- amino-3,3 -dimetilbutanona-1. A uma solução agitada do Exemplo 104 (62mg, 0,12mmol) em CH2C12 (l,5ml) na temperatura ambiente, em um frasco tampado, foi adicionado ácido trifluoroacético (77μ1, Immol). Após agitação por uma noite, a reação foi concentrada a vácuo para fornecer um produto bruto que pareceu ter impurezas de éster trifluoroacetato. O produto bruto foi dissolvido em THF:H20 na temperatura ambiente, agitado em um frasco tampado e tratado com monoidrato de LiOH (42mg, Immol) . Após uma hora a mistura foi particionada entre EtOAc (15ml) e água (15ml). As camadas orgânicas foram isoladas, secas (MgSOj , filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o Exemplo 105 como uma espuma branca (35mg, 70%) . XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.85-6.79 (m, 2H) , 6.78- 6.73(m, 1H), 4.01-3.30(m, 9H) , 3.83 (s, 3H) , 1.13 e 1.12(dubletes, 3H, rotomeros), 1.06 e 1.02(singeltes, 9H, rotomeros), 0.78 e 0.68 (singletes, 3H, rotomeros), 0.63(m, 2h), 0.37(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 419,4 (m+1) Exemplo 106 R1 = H ; R3 = (R) -C0CH(CH2)CH2Ph)NHC02t-Bu N-(2-[(3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-(3- hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil](IR)-2-oxo-l- [(f enilmetoxi)metil]etil}(terc-butoxi)carboxamida. À uma solução agitada de N-bos-O-benzil-D-serina (2,95g, lOmmol) em THF (50ml) a -78°C sob uma cobertura de nitrogênio foi adicionada N-metil-morfolina (l,3ml, lOmmol). Após agitação por 30 minutos, a solução/suspensão do Intermediário 70 (2,51g, 10 mmol) em THF (50ml) foi adicionada por cânula. A reação foi agitada por 2 horas a - 78°C, e depois aquecida a 0°C por 2 horas. A reação então foi parcialmente concentrada por evaporador ortativo até aproximadamente 25ml, e particionada entre EtOAc (250ml) e 2N HCl (250ml). AS camadas orgânicas foram lavadas com HC1 2N (2 x 250ml), NaHC03 (3 x 250ml) e NaCl saturado (1 x 250ml). As camadas orgânicas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o Exemplo 106 como um óleo amarelo (4,2g, 79%). ^ RMN (CDC13; 400 MHz) δ: 7.36-7.21 (m, 5H) , 6.81- 6.63 (m, 3H) , 5.81 (br s, 1H) , 5.47(m, 1H) , 4.73(m, 1H) , 4.51(m, 2H), 4.00-3.40(,m, 83.83H), 1.43 e 1.41 (singletes, 9H, rotomeros), 1.13 e 1.06(dubletes, 3H, rotomeros) 0.95(m, 1H) , 0.73 e 0.045(singletes, 3H, rotomeros).
Exemplo 107 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-C0CH(CH20CH2Ph)NHC02t-Bu N-{2-{ (3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- (IS)-2-oxo-l-[(fenilmetoxí)metil]etil)(terc-butoxi)carbo- xamida. À uma solução agitada de Exemplo 106 (4,2g, 7,9mmol) em DMF (24ml) a temperatura ambiente e sob um cobertor de nitrogênio foi adicionado K2C03 (5,45g, 39,5mmol) seguido por bromo metil ciclopropano (l,53ml, 15,8mmol). A suspensão foi aquecida a 65°Cpor 4 horas, e então tratada com mais bromo metil ciclopropano (l,53ml, 15,8mmol). A reação foi agitada outras 16 horas a 65°C, então resfriada até a temperatura ambiente e particionada entre EtOAc (500ml) e água (500ml). As camadas orgânicas foram lavadas com água (3 x 500ml) e NaCl saturado (1 x 500ml) , secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O produto brutofoi dividido em duas bateladas e cromatografados numa coluna Biotage 40M com l/l EtOAc/hexano para fornecer o Exemplo 107 (2,llg, 46%), após acúmulo e concentração a vácuo do produto contendo as frações. Um produto dialquilado com alto Rf foi identificado como a maior impureza. 1H RMN (CDC13í 400 MHz) δ: 7.36-7.22(m, 5H), 6.81- 6.71(m, 3H), 5.42(m, 1H), 4.73(m, 1H), 4.51(m, 2H), 4.04- 3.44(m, 10H), 3.83 e 3.81(singletes, 3H, rotores), 1.42 e 1.43(singlets, 9H, rotores), 1.32M, 1H), 1.16 e 1.06(dubletes, 3H, rotores), 0.76 e 0.45 (singletes, 3H, rotores), 0.62(m, 2H), 0.37(m, 2H).
Exemplo 108 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-C0CH(CH20CH2Ph)NHC02t-Bu N-{2-{ (3S,4S)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidinil}-(IR)-1- (hidroximetil)-2-oxoetil)(terc-butoxi)carboxamida. 0 Exemplo 107 (2,lml, 3,6mmol) foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para chegar ao Exemplo 108 como uma espuma branca (l,75mg, 100%). 1H RMN (CDC13, 400 ΜΗζ) δ: 6.83-6.71 (m, 3Η) , 5.70(br d, 1Η) , 4.55(m, 1H) , 4.09-3.38 (m, 10H), 3.83(s, 3H) , 1.44 (s, 9H) , 1.33(m, 1H) , 1.18(m, 3H) , 0.73(d, 3H) , 0.62(m, 2H), 0.37(m, 2H).
Exemplo 109 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(CH2OH)NH2 Hidrocloreto de 1-{(3S,4S)-((IR)-1-hidroxietil)- 4-[3-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidi- nil}(2R)-2-amino-3-hidroxipropanona-l. À uma solução do Exemplo 108 (l,75g, 3,6mmol) em dioxano (16ml) na temepratura ambiente sob um tubo de secagem, foi adicionado HCl 4N em dioxano (16ml). A solução clara foi agitada por 4 horas, e então concentrada a vácuo para fornecer 0 Exemplo 109 como uma espuma acobreada(1,5g, 97%) . XH RMN (CDCI3, 400 ΜΗζ) δ: 6.85-6.76 (m, 3H) , 4.36(m, 1H), 4.13-3.31{m, 10H) , 3.84(s, 3H), 1.29(m, 1H), 1.17 e 1.12 (dubletes, 3H, rotomeros), 1.77 e 1.75(singletes, 3H, rotomero), 0,62(m, 2H), 0,36(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 393,4 (m+1) Exemplo 110 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COCH(OAc)C6Hn Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} (IS) -l-cicloexil-2-oxoetila. O Intermediário 67 (91mg, 0,6mmol) foi acoplado pelo procedimento da base de Hunig do Intermediário 74 usando ácido (S)-(+)-acetoxiexaidromandélico clorídrico (ΙΟΟμΙ, 4,98M em CH2C12, l,7eq) para produzir o Exemplo 110 como um óleo claro e incolor (89mg, 61%). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 488,6 (m+1).
Exemplo 111 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-C0CH(0H)C6Hu 1-{3- ((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidínil}(2S)-2-ciclo- exil- 2-hidroxietanona-1. 0 Exemplo 110 (89mg, 0,18mmol) foi sujeitado ao processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para chegar ao Exemplo 111 como um filme claro e incolor (44mg, 54%) . XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.80-6.78(m, 3H),3.88- 3.52(c, 10H), 3.34-3.26(dd, 1H) , 2.98(d, 1H) , 2.12(br s, 1H) , 1.77-1.10 (c, 16H), 0.75-0.73(d, 3H), 0.62-0.59(m, 2H), 0.34-0.31(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 446,6 (m+1).
Exemplo 112 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(OAc)C6Hn Acetato de (IR)-2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) - 4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidi- nil}-l-cicloexil-2-oxoetila. 0 Intermediário 67 (76mg, 0,25mmol) foi acoplado pelo procedimento da base de Hunig do Intermediário 74 usando ácido (R)-(+)-acetoxiexaidromandélico clorídrico (100μ1, 4,16M em CH2C12, l,7eq) para produzir o Exemplo 112 como um óleo claro e incolor (75mg, 62%). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 488,7 (m+1) Exemplo 113 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -COCH (OH) C6Hn (2R)l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2 S) -2- cicloexíl-2-hidroxietanona-l. 0 Exemplo 112 (75mg, 0,15mmol) foi sujeitado ao processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para chegar ao Exemplo 113 como um filme claro e incolor (35mg, 51%) . ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.81-6.73(m, 3H), 3.85- 3.59 (c, 11H), 2.99-2.98(d, 1H) , 2.03-1.15(c, 17H), 0.73(s, 3H), 0.64-0.60(m, 3H), 0.35-0.32(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 446,5 (m+1).
Exemplo 114 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-C0CH(C4H9)NHC02CH2Ph N-((IR)-2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-l- butil-2-oxoetil)(fenilmetoxi)-carboxamida. 0 Intermediário 67 (41mg, 0,013mmol) foi acoplado pelo procedimento da base de Hunig do Intermediário 74 com Z-D-Nle-Onp (57mg, 0,15mmol, l,leq) para produzir 0 Exemplo 114 como um óleo claro e incolor (29,5mg, 40%). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 553,6 (m+1).
Exemplo 115 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(C4H9)NH2 (2R)-1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidinil}-2- aminoexanona-1. 0 Exemplo 114 (29,9mg, 0,054mmol) foi sujeitado ao processo de benzilação do Intermediário 31 para produzir o Exemplo 115 como um pó branco (18,8mg, 83%). XH RMN (CDC13í 400 MHz) δ: 6.83-6.62(m, 3H), 4.17- 4.08(m, 2H), 3.85-3.61(c. 9H), 3.32-3.29(t, 1H), 3.13- 3.11(d, 1H), 2.04-1.78 (m, 3H) , 1.52-1.21(c, 10H), 0.92- 0.88(t-3H), 0.62-.058(m, 5H), 0.34-0.30 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 419,4 (m+1).
Exemplo 116 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -COCH (i-Pr)NHC02CH2Ph N-((IR)-2-{3-{(IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-1- (metiletil)-2-oxoetil)(fenilmetoxi)-carboxamida. 0 Intermediário 67 (41mg, 0,013mmol) foi acoplado pelo procedimento da base de Hunig do Intermediário 74 com Z-D-Val-OSu (52,2mg, 0,15mmol, l,leg) para produzir o Exemplo 116 como um óleo claro e incolor (64,8mg/ 89%). 2H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.35-7.32(m, 5H) , 6.81- 6.69(m, 3H), 5.65-5.61(t, 3H) , 5.28-5.01(m, 2H), 4.34- 2.78(m, 10H), 2.08-1.98 (m, 1H) , 1.31-0.91(c, 8H), 0.71- 0.68(d, 3H), 0.64-0.59(m, 2H), 0.38-0.31(m, 2H).
Exemplo 117 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(i-Pr)NH2 (2R)-1-(3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxí)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- amino-3-metilbutanona-l. 0 Exemplo 116 (64,89mg, 0,120mmol) foi sujeitado ao processo de benzilação do Intermediário 31 para produzir o Exemplo 117 como um sólido claro (38,9mg, 80%). 1H RMN (CDC13; 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.77-6.59(m, 3H), 4.41(s, 1H), 4.23-4.12(m, 2H) , 3.85- 3.60(c, 9H), 3.24 (s, 1H), 3.15-3.13(d, 1H), 2.40(brs, 1H) , 1.29-1.14(m, 11H), 0.62-0.58(m, 5H), 0.33-0.29(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 405,5 (m+1).
Exemplo 118 R1 = H ; R3 = C0CH2SAc 1-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-hidroxi-4- metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-acetiltioetanona-l. O intermediário 70 (173mg, 0,694mmol) foi dissolvido em dioxano (2ml) e adicionou-se K2C03 1M (lml) gota a gota. Foi adicionado ácido acetoximercaptoacético clorídrico (100μ1, 13,9M em dioxano, 2eq), e a solução foi vigorosamente agitada por 1 hora. A solução foi diluída com EtOAc (30ml) e as camadas organicas foram lavadas com K2C03 1M (20ml) e depois com salmoura (20ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. O óleo resultante foi cromatografado em coluna de sílica (1:1, EtOAc:hexanos) produzindo um óleo claro e incolor (34mg, 13%) . 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.85-6.82(m, 3H), 3.92-2.98 (c, 12H), 2.39 (s, 3H), 1.15- 1.11 (t, 3H), 0.75-0.73 (d, 3H).
Exemplo 119 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH2SAc 1-(3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4- [3- hidroxipropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- acetíltioetanona-1.
Em um frasco contendo K2C03 anidro (52mg, 0,37mmol, 4,0eq) sob atmosfera de nitrogênio foi adicionado uma solução do Exemplo 118 (34mg, 0,093mmol, leq) em TMF anidro (lml). Foi adicionado à mistura brometo de ciclopropilmetila(45ml, 0,37mmol, 4,0eq) via seringa. A mistura foi agitada por uma noite a 65°C. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente e então diluída com água (50ml). A solução aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 30ml) e as camadas organicas combinadas foram lavadas com salmoura 950ml) e esntão secas sobre Na2S04, filtradas e concnetradas a vácuo. O óleo resultante foi purificado por coluna de pratos TLC (100% EtOAc) fornecendo um óleo claro e incolor (13,9mg, 36%). 1H RMN (CDC13, 400 ΜΗζ, mistura de rotomeros) δ: 7.01-6.75(m, 3H), 3.91-3.32(c, 11H), 2.64-2.61(m, 2H), 2.38- 2.30(d, 3H) , 1.82-1.50 (br s, 2H), 1.38-1.04(m, 2H) , 0.75(s, 3H), 0.58-0.55(m, 2H) , 0.27-0.23 (m, 2H) .
Exemplo 120 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCHjSH l-{3- ((IR) -1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-sulfanil- etanona-1. O Exemplo 119 (13,9mg, 0,0329mmol) foi sujeitado a procedimento de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para fornecer um óleo claro e incolor(7,2mg, 58%). 1H RMN (CDC13í 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.86-6.75(m, 3H) , 3.83-3.11 (c, 13H), 2.60-2.56 (d, . 2H), 1.39- 0.85(m, 4H) , 0.76-0.74(m, 3H), 0.58-0.56(m, 2H), 0.35- 0.24(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 380,5 (m+1).
Exemplo 121 R1 = CH2C3H5 ; R3 = C0CH2NHC02CH2Ph N- (2-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S;4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida. 0 Intermediário 67 foi acilado pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74 com éster da N-CBZ- glicina p-nitrofenila para fornecer o Exemplo 121. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.42 -7.28 (m, 5H) , 6.83-6.75 (τη, 3H) , 5.87-5.80(m, 1H) , 5.13(s, 2H) , 4.08-3015(c, 13H), 1.39-1.24(m, 1H) , 1.14(t, 3H), 0.73(d, 3H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.39-0.31(m, 2H).
Exemplo 122 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH2NH2 1-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-amino- etanona-1. 0 Exemplo 121 foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para chegar ao Exemplo 122. 3H RMN (Metanol-d4, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.94-6.84(m, 3H) , 4.01-3.27(c, 13h), 1.29- 1.18(M, 3h), 0.79-0.73(Μ, 3Η), 0.62-0.55(m, 2Η), 0.35-0.29 (m, 2Η). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 363,2 (m+1).
Exemplo 123 R1 = CH2C3H5 ; R3 = C0CH2NHS02CH3 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-[(metil- sulfonil)amino] etanona-1.
Acilação do Exemplo 122 pelo processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de metanossulfonila para disponibilizar 0 Exemplo 123. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.68-6.75(m, 3H), 5.48-5.42(m, 1H0, 4.00-3.57(c, 11H), 3.46 e 3.15(d e d, 1H) , 3.00(s, 3H) , 1.67(dd, 1H), 1.36-1.24 (m, 1H), 1.16 (t, 3H), 0.76(d, 3H), 0.66-0.60 (m, 2H) , 0.39- 0.32(m, 2H). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 441,3 (m+1).
Exemplo 124 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH2NHSO2CF3 l-{3-((IR)-l-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2 -{[(triflu- orometil)sulfonil]amino} etanona-1.
Sulfonação do Exemplo 122 pelo processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de trifluorometanossulfonila para disponibilizar 0 Exemplo 124. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ; 6.85-6.77(m, 3H), 4.11-3.10(c, 13H), 1.15(t, 3H) , 0.76(d, 3H) , 0.66-0.60 (m, 2H), 0.40-0.32 (m, 2H). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 495,3 (m+1).
Exemplo 125 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH2NMe2 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-(dimetil- amino) etanona-1.
Reação de acoplamento em fase sólida.
Um vaso reacional equipado com pá de agitação foi carregado com resina EDC (146mg, 0,082mmol, 0,9mmol/g), NMP (2ml) e Ν,Ν-dimetilglicina (20mg, 0,143mmol). A mistura resultante foi deixada sob agitação na temperatura ambiente por uma hora. 0 Intermediário 67 foi então adicionado, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente por 20 horas, e depois filtrada. A resina foi lavada com diversas porções de NMP. Todos os lavados e filtrados foram combinados e sujeitos à pressão reduzida para remover o solvente. A purificação por Biotage sobre o resíduo (cartucho 12S, 5% MeOH/CH2Cl2.1% Nh4OH) forneceu 8mg (25%) de um filme claro. 41 RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.87-6.72 (m, 3H) , 4.07-2.97(c, 13H), 2.35(d, 6H) , 1.35- 1.25(m, 1H), 1.17(t, 3H), 0.74 e 0.64(s, e s, 3H), 0.66- 0.60(m, 2H), 0.37-0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 391,5 (m+1) Exemplo 126 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-C0CH(Me)NHC02CH2Ph Ν-(2-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS)-1- metil-2-oxoetil)(fenilfenoxi)-carboxamida.
Acilação do Intermediário 67 pelo processo em fase sólida EDCI do Exemplo 125 com Z-Ala-Onp chegando ao Exemplo 126. 41 RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.38-7.26 (m, 5H) , 6.84-6.74(m, 3H) , 5.86(dd, 1H) , 5.14- 5.08(m, 2H) , 4.56 (quintet, 1H) , 3.87-3.32 (c, 11H), 1.43- 1.34 (dd, 3H) , 1.33-1.24 (m, 1H) , 1.13 (d, 3H) , 0.74 (s, 3H) , 0.66-0.59(m, 2H), 0.37-0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 511,7 (m+1) Exemplo 127 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COCH(CH3)NH2 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2 S)-2- aminopropanona-1. O Exemplo 126 foi sujeitado ao procedimento do Intermediário 31 para chegar ao Exemplo 127. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.44-8.16(br s, 2H) , 6.82-6.56(m, 3H), 4.53-3.02(c, 12H), 1.43-1.34(dd, 3H) , 1.33-1.24 (m, 1H), 1.13(d, 3H), 0.74(s, 3H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.37-0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 377,3 (m+1) Exemplo 128 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -C0CH(CH3)NHC02CH2Ph N- ((IR) -2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} -1- metil-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação do Exemplo 7 com Z-D-Ala-Osu. XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.28(m, 5H) , 6.85-6.74(m, 3H) , 5.80(t, 1H) , 5.10(d, 2H), 4.57-4.47(m, 1H), 3.99-3.12 (c, 11H), 1.40-1.24(m, 4H), 1.14(d, 3H) , 0.73 (s, 3H) , 0.66-0.59(m, 2H) , 0.38-0.31(m, 2H) . LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 511,6 (m+1) Exemplo 129 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R)-COCH(CH3)NH2 (2R)-1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metílpirrolidinil}-2- aminopropanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 128 via processo debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.60-8.27 (br m, 3H) , 6.87-6.58(m, 3H), 4.75-3.10(c, 12H), 1.74-1.59 (m, 3H) , 1.33-1.05 (m, 4H) , 0.66-0.55 (m, 5H),0.35- 0.27(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 377,2 (m+1) Exemplo 130 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S) -COCH(i-Pr)NHC02CH2Ph N-(2-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS)-1- (metiletil)-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação do Exemplo 7 usando Z-Val-Onp. ΧΗ RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.42-7.27 (m, 5H) , 6.84-6.75 (m, 3H) , 5.63(dd, 1H) , 5.15- 5.02(m, 2H) , 4.40-4.07 (dm, 1H) , 3.87-3.33 (c, 12H), 2.08- 1.95(m, 1H) , 1.34-1.25 (m, 1H) , 1.14(t, 3H) , 1.04-0.90(m, 6H), 0.73(8, 3H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.38-0.31(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 539,5 (m+1) Exemplo 131 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S) -COCH (i-Pr) NH2 l-{3- ((IR) -1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2S)-2- ami no-3 -met i1but anoma-1.
Preparado a partir do Exemplo 130 via método de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.37(br s, 3H), 6.82-6.63 (m, 3H) , 4.24-3.53(c, 11H) , 3.19(d, 1H) , 2.45-2.32 (m,2H), 1.34-1.04 (m, 10H), 0.64 (s, 3H), 0.63-0.56(m, 2H), 0.36-0.29(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 405,4 (m+1) Exemplo 132 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-C0CH(CH2CH(CH3)CH3)NHC02Ph Ν- (2-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} (IS)-1- (2- metilpropil)-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação por base de Hunig do Intermediário 74 usando Z-Leu-Onp. XH RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.43-7.26 (m, 5H), 6.84-6.75(m, 3H)( 5.61(dd, 1H), 5.16- 5.04(m, 2H) , 4.63-4.55(m, 1H), 3.90-3.34(c, 12H), 1.80- 1.68(m, 1H) , 1.64-1.40(m, 2H) , 1.36-1.24(m, 1H), 1.14(d, 3H), 1.05-0.92(m, 6H), 0.74(d; 3H), 0.65-0.59(m, 2H), 0.37- 0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 553,7 (m+1) Exemplo 133 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COCH(CH2CH(CH3)CH3)NH2 1-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2S)-2-amino- 4-metilpentanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 132 via método de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.69-6.86(m, 3H), 4.33-4.28 (m, 1H), 4.03-3.28(c, 11H) , 1.87-1,65(m, 3H), 1.29-1.18(m, 1H), 1.14-0.96(m, 9H), 0.76(d, 3H), 0.61-0.55(m, 2H), 0.36-0.29(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 419,5 (m+1) Exemplo 134 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -COCH (CH2CH (CH3) CH3) NHC02CH2Ph N-((IR)-2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS) -1-(2-metilpropil)-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação por base de Hunig do Intermediário 74 usando Z-D-Leu-ONp. 1H RMN (CDC13, 4 00 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.28 (m, 5H), 6.85-6.70(m, 3H), 5.57(dd, 1H), 5.14- 5.04(m, 2H) , 4.58-4.49(m, 1H), 4.11-3.19(0, 11H), 1.78- 1.66(m, 1H) , 1.60-1.22(m, 3H) , 1.15(ddf 3H) , 1.03-0.85 (m, 6H), 0.72(d, 3H), 0.65-0.57(m, 2H), 0.38-0.30(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 553,7 (m+1) Exemplo 135 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -COCH (CH2CH (CH3) CH3) NH2 (2R)-1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ci- clopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- amino-4-metilpentanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 134 via método de debenzilação do Intermediário 31. ^ RMN (Metanol-d4, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.97-6.91(m, 2H) , 6.88-6.83(m, 1H) , 4.29-3.25(c, 11H) , 1.85-1.59 (m, 3H) , 1.30-1.19(m, 1H) , 1.10(dd, 3H) , 1.06- 0.93(m, 6H) , 0.77(dd, 3H) , 0.62-0.55 (m, 2H) , 0.36-0.29(m, 2H) . LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 419,5 (m+1) Exemplo 136 R1 = CH2C3H5 ; R3 = C0CH(C4H9)NHC02CH2Ph N- (2- {3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxí)-4-metoxifenil] -3-metilpírrolidinil}(IS)-1- butil-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação do Exemplo 7 usando Z-NLeu-ONp. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.25(m, 5H) , 6.85-6.75(m, 3H) , 5.69(dd, 1H) , 5.14- 5.05(m, 2H) , 4.56-4.50 (m, 1H) , 3.87-3.34 (c, 11H), 1.80- 1.54(m, 2H) , 1.43-1.24(m, 5H) , 1.14(m, 3H) , 0.96-0.85(m, 3H), 0.74(s, 3H) , 0.65-0.61(m, 2H) , 0.37-0.32(m, 2H) . LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 553,8 (m+1) Exemplo 137 R1 = CH2C3H5 ; R3 = COCH(C4H9)NH2 1-(3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3-(ciclo- propilmetoxí)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2 S)-2- aminoexanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 136 via método de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.93-6.85(m, 3H) , 4.33-4.25(m, 1H), 4.02-3.47 (c, 11H) , 1.96-1.79(m, 2H), 1.51-1.35(m, 4H), 1.30-1.19(m, 1H) , l.ll(dd, 3H) , 1.03-0.93(m, 3H) , 0.77(d, 3H) , 0.62-0.56(m, 2H), 0.35-0.30(Μ, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 419,5 (m+1) Exemplo 138 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (R) -C0CH(C6Hu)NH2C02CH2Ph N- ((IR)-2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- (1R)-cicloexil-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Processo de acoplamento EDCI/HOBT
Um frasco reacional equipado com agitador foi carregado com N-carboxibenzil-D-cicloexilglicina (23,8mg, 0,0819mmol) , CH2C12 seco (35Ομί), EDCI (15,7mg, 0.0819mmol) e hidroxibenzotiazol (HOBT)(12,5mg, 0,0819mmol). Essa mistura foi deixada sob agitação na temperatura ambiente por 1 hora e 0 Intermediário 67 (25mg, 0,0819mmol) foi adicionado em uma porção. Depois de agitação na temperatura ambiente por 48 horas, a mistura reacional foi diluída com CH2C12 (5ml) , lavada com HCl IN (2 x 20ml) , solução saturada de NaHC03 (1 x 20ml) , seca (Na2S04) e concentrada até formar 27mg de uma espuma branca. XH RMN (CDCI3, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.39-7.29(m, 5H), 6.86-6.78 (m, 2H), 6.75-6.68 (m, 1H), 5.54(dd, 1H) , 4.37-3.25(c, 12H), 1.81-1.56(m, 5H) , 1.36- 0.95(m, 10H), 0.71(d, 3H) , 0.66-0.59(m, 2H) , 0.39-0.31(m, 2H) . LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 580,2 (m+l) Exemplo 139 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S)-COCH(C6Hii)NH2 (2R)-1-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- amino-2-cicloexiletanona-1.
Preparado a partir de Exemplo 138 via processo de debenzilação do Intermediário 31. 3H RMN (Metanol-d4, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.95-6.78(m, 3H) , 4.10-3.20(c, 12H), 1.96- 1.62(m, 5H) , 1.39-1.02(m, 10H), 0.75(d, 3H0, 0.62-0.51(m, 2H), 0.35-0.23 (m, 2H) . LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 445,5 (m+1) Exemplo 140 R1 = CH2C3H5 ; R3 = (S) -COCH (t-Bu) NHC02CH2Ph N-((IR)-2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- (IS)-cicloexil-2-oxoetil)(fenilmetoxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento do Exemplo 138 usando N- carboxibenzil-L-t-butilglicina. 1H RMN (CDC13, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.39-7.29(m, 5H), 6.84-6.76(m, 3H), 5.59-5.53(m, 1H), 5.14- 5.02(m, 2H), 4.34(dd, 1H) , 3.87-3.33(c, 10H), 1.34-1.24(m, 1H), 1.14(dd, 3H) , 0.74(d, 3H) , 0.66-0.59 (m, 2H) , 0.39- 0.31(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 554,2 (m+1) Exemplo 141 1-(3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- (2S)-2- amino-3,3-dímetilbutanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 140 via processo de debenzilação do Intermediário 31. ΧΗ RMN (Metanol-d4, 400 MHz, mistura de rotomeros) δ: 6,98-6.86{m, 3H) , 4.16-3.33(c, 12H), 1.29- 1.20(m, 1H), 1.15-0.97(m, 12H), 0.75(d, 3H) , 0.62-0.56(m, 2H) , 0.36-0.30(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): Da/e 419,5 (m+1) Exemplo 142 1-((3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(t-butoxi)- 4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-(fenilmetoxi)etanona- 1. 0 Intermediário 73 (775mg, 2.53mmol) foi acoplado com cloreto de benziloxiacetila (497μ1, 3,16mmol) pelo processo da base de Hunig do Intermediário 74, para fornecer o Exemplo 134 como .uma espuma marrom (978mg, 85%). XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.41-7.30 (τη, 5H) , 6.90(m, 2H), 6.81(d, 1H), 4.64(dd, 2H), 4.15(dd, 2H), 3.15(dd, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.62(dd, 1H), 3.57(m, 2H), 3.44(d, 1H) , 3.21(s, 1H) , 1.33(s, 9H) , 1.16 e 1.11(dois dubletes, 3H, rotomeros), 0.73(d, 3H, rotomeros).
Exemplo 143 R1 = H ; R3 = COCH2OCH2Ph 1-[ (3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3 - hidroxi - 4 -metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-(fenilmetoxi)etanona-1 À ums solução agitada do Exemplo 142 (750mg, 1.65mmol) em CH2C12 (6,6ml) a 0°C sob um tubo de secagem, foi adicionado ácido trifluoroacético (763μ1, 9,9mmol). A refrigeração foi removida da reação e foi deixada a temperatura aquecer até a temperatura ambiente, e então foi agitada por 3,5 horas. A reação foi concentrada por evaporação rotativa para remover o excesso de ácido trifluoroacético, e então diluída com CH2C12 (30ml)e lavada com Na2C03 10% (2 x 30ml). As camadas orgânicas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuoparafornecer o Exemplo 143. A coromatogradia rápida em EtOAc forneceu, após acúmulo e concentração a vácuo do produto contendo as frações, o Exemplo 143 como uma espuma branca (650mg, 98%) . RMN (CDC13, 4 00 MHz) δ: 7.42 (m, 5H), 6.83- 6.7 0(m, 3H) , 4.64(s, 2H) , 4.16(s, 2H) , 3.93(dd, 1H) , 3 . 95 (s, 3H) , 3.78 (d, 1H) , 3.74 (dd, 2H) , 3.67-3.52 (m, 4H) , 3,44 (d, 1H) , 3.20 (d, 1H) , 1.16 e 1.10(dubletes, 3H, rotomeros), 0.73 (s, 3H).
Exemplo 144 R1 = CH2C(CH3) (CH2CH2) ; R3 = COCH2OCH2Ph 2-benzíloxi-1-(3-((IR)-1-hidroxieti1)(3S,4S)-4- [4-metoxi-3 -(1-metilciclopropilmetoxi)fenil]-3-metilpirro- lidinil-1) etanona.
Processo Mitsunobu em fase sólida A uma solução agitada do Exzemplo 143 (40mg, 0,lmmol) em THF (l,5ml) na tempreatura ambiente, em um tubo reacional cônico tampado, adicionou-se PS-trifenilfosfina (l,65mmol/g, 182mg, 0,3mmol). Após isso deixou-se a suspensão sob agitação lenta por 5 minutos para permitir a expansão do gel, adicionou-se 1-metilciclopropanometanol (29μ1, 0,3mmol) e a reação foi resfriada a 0°C. A suspensão foi então tratada com DIAC (59μ1, 0,3mmol) e a reação foi aquecida a 65°C. Após agitação lenta por uma noite, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de filtro de poliestireno poroso com THF (30ml). 0 filtrado foi concentrado a vácuo e passado por cromatografia rápida numa coluna de 15mm x 152,4mm com 1/1/0,1 de EtOAc/hexano/metanol e o produto contendo as frações foi acumulado e concentrado a vácuo para fornecer o Exemplo 144 como um óleo amarelo (40mg, 86%). ΧΗ RMN (CDClj, 400 MHz) δ: 7.42 (m, 5H) , 6.83- 6.77(m, 3H) , 4.63(s, 2H), 4.15(dd, 2H) , 3.96-3.20(m, 6H, rotomeros) 3.81 (s, 3H) , 1.74(m, 1H) , 1.24(s, 3H) , 1.17 e 1.10(dubletes, 3H, rotomeros), 0.72(d, 3H, rotomeros), 0.53(m, 2H), 0.41(m, 2H) .
Exemplo 145 R1 = CH2C(CH3) (CH2CH2) ; R3 = COCH2OH 1- ((3R) -3- ((IR)-1-hidroxietil)-4-{4-metoxi-3- [ (metilciclopropil)metoxi]fenil}-3-metilpirrolidinil)-2- hidroxietanona. O produto bruto do Exemplo 144 (40mg, 0,086mmol) foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 145 como um óleo claro (32,5mg, 100%). XH RMN (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) δ: 6.87-6.79(m, 3H), 3.97-3.18(m, 7H, rotomeros), 3.83(s, 3H), 1.23 (s, 3H) , 1.14 e 1.11(dubletes, 3H, rotomeros), 0.77 (s, 3H) , 0.56(m, 2H), 0.42(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,2 (m+1).
Exemplo 146 R1 = CHaCHsCjHs; R3 = COCH2OCH2Ph 2-benziloxi-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-ciclopropiletoxi)- 4-metoxifenil]-3-((IR)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil- 1] etanona. 0 Exemplo 143 foi sujeitado ao processo do Exemplo 144 usando 2-ciclopropiletanol (26mg, 0,3mmol) para fornecer o Exemplo 146 (41mg, 88%). 3H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.41-7.25(Μ, 5H), 6.82- 6.74(m, 3H), 4.63(s, 2H), 4.15(dd, 2H), 4.04(dd, 2H), 3.98- 3.20(m, 5H, rotomeros), 3.81(s, 3H), 1.82 e 1.79(m, 1H, rotomeros), 1.72(dd, 2H) , 1.40-1.20(m, 1H) , 1.18 e 1.12(d, 3H, rotomeros), 0.82(m, 1H) , 0.74 (s, 3H), 0.46(m, 2H), 0.12(m, 2H).
Exemplo 147 R1 = CH2CH2C3H5; R3 = COCH2OH l-{(3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(2-ciclopro- piletoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-hidroxieta- nona-1. 0 Exemplo 146 foi sujeitado ao processod e debenzilação do Intermediário 31 para fornecer 0 Exemplo 147 como um óleo claro (27,4mg, 82%). 3H RMN (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) δ: 6.91-6.80(m, 3H), 4.19(m, 2H) , 4.10(m, 2H) , 3.97-3.15(m, 5H, rotomeros) , 3.82 (s, 3H), 1.73(dd, 2H), 1.25(m, 1H), 1.14 e 1.12(dubletes, 3H, rotomeros), 0.85(m, 1H) , 0.78(s, 3H) , 0.46(m, 2H), 0.14(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,5 (m+1).
Exemplo 148 R1 = CH2CH2C5H9,· R3 = COCH2OH l-{ (3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(2-ciclopentil- etoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-hidroxieta- nona-1.
Preparado usando 0 procedimento do Exemplo 144, usando 0 Exemplo 143 e 2-ciclopentiletanol (34mg, 0,3mmol) para fornecer 0 Exemplo 148 (41mg, 100%). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 7.41-7.25(m, 5H), 6.82- 6.74(m, 3H), 4.63(s, 2H), 4.15(dd, 2H), 3.99(dd, 2H), 3.98- 3.20(m, 5H, rotomeros) , 3.81 (s, 3H) , 2.00-1.20(m, 11H) , 1.18 e 1.12(d, 3H, rotomeros), 0.74 (s, 3H) .
Exemplo 149 1- [ (3S,4S)-4-[3-(2-ciclopentiletoxi)-4-metoxife- nil]-3-((IR)-l-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil}-2-hidroxi- etanona-1. O Exemplo 148 foi sujeitado ao processod e debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o produto como um óleo claro (43,7mg, 86%). XH RMN (CDCI3/CD3OD, 400 MHz) δ: 6.87-6.80(m, 3H), 4.18(m, 2H) , 4.03(m, 2H) , 3.99-3.11(m, 5H, rotomeros), 3.84 (s, 3H) , 2.01-1.15(m, 11H), 1.14 e 1.11(dubletes, 3H, rotomeros), 0.77(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,4 (m+1).
Exemplo 150 2-benzoxi-l- [4-(S)-[3-(biciclo[4.1.0]heptil-7- metoxí)-4-metoxifenil]-3-(S)-(1-(IR)-1-hidroxietil)-3- metilpirrolidinil-1] etanona.
Preparado a partir do 143 pela reação de Mitsunobu do' Exemplo 144 usando biciclo[4.1.0]heptil-7- metanol para chegar a uma mistura 80:20 de isômeros cis e trans (34% rendimento). 1H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.42-7.23 (m, 5H) , 6.85- 6.72(m, 3H) , 5.06-4.89(m, 1H) , 4.67(s, 2H), 4.15(s,2H), 4.07-3.56(m, 9H) , 2.09-1.56 (m; 8H) , 1.36-0.87 (m, 8H) , 0.73(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 508,6 (m+1).
Exemplo 151 1- [4- (S)- [3-(biciclo[4.1.0]heptil-7-metoxi)-4- metoxifenil]-3-(S)-(1-(IR)-1-hidroxietil)-3-metilpirroli- dinil-1] hidroxietanona. O Exemplo 150 (15mg, 30mmol) foi dissolvido em 95% etanol (lml) e a solução foi tratada com catalisador de Pearlman (20% Pd(OH)2 sobre carbono, 15mg). A mistura reacional foi hidrogenolisada a 1 atmosfera de hidrogênio por 16 horas. A mistura reacional foi filtrada para remover 0 catalisador e então o seolvente foi remofido com arraste por nitrogênio. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel se necessário usando EtOAc/hexanos/metanol (1:1:0,2)(76% rendimento). XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.73-6.66(m, 3H), 4.04- 3.99(m, 2H), 3.94-3.87(m, 4H) , 3.83-3.20(m, 7H) , 3.15- 2.73(m, 1H) , 1.78-1.47(m, 5H), 1.14-0.69(10H) , 0.63- 0.60(3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 418,3 (m+1).
Exemplo 152 2-benziloxi-l-[4-(S)-[3-(biciclo[3.1.0]hexil-6- metoxi)-4-metoxifenil]-3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-3- metilpirrolidinil-1] etanona.
Preparado a partir do 143 pelo método de Mitsunobu do Exemplo 144 usando biciclo[3.1.0]hexil-6 metanol. O produto foi uma mistura inseparável de isômeros no lado alcoólico da cadeia (32% rendimento). XH RMN (CDC13) 400MHz) δ: 7.45-7.29(m, 5H), 6.84- 6.72(m, 3H) , 5.02-4.94 (m, 1H) , 4.66(s, 2H) , 4.16(s, 2H) , 4.08-3.44 (m, 8H), 1.96-1.51(m, 4H) , 1.26(d, 6H), 1.18- 1.08(dd, 5H), 0.72(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 494,4 (m+1).
Exemplo 153 1- [4-(S)-[3-(biciclo[3.1.0]hexil-6-metoxi)-4- metoxifenil]-3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-3-metilpirrolidi- nil-1]-2-hidroxietanona.
Preparado a partir do Exemplo 152 pelo método de debenzilação do Exemplo 151 (90% rendimento). 2H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.87-6.79(m, 3H), 4.97- 4.90 (m, 1H) , 4.19-4.14 (m, 2H) , 3.99-3.36 (τη, 7H) , 3.30- 2.89(m, 1H) , 1.92-1.52(m, 4H) , 1.28(d, 6H) , 1.16-1.06(m, 6H) , 0.77(m, 3H).LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 404,3 (m+1).
Exemplo 154 2- benziloxi-l-[4-(S)-[3-(4-tert-butilcicloexil- oxi)-4-metoxifenil]-3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-3-metilpir- rolidinil-1] etanona.
Preparado pelo método de Mitsunobu do Exemplo 144 usando o Exemplo 143 e 4-terc-butil-cicloexanol (17% rendimento). 1H RMN (CDC13, 400 ΜΗζ) δ: 7.43-7.28(m, 5H) , 6.85- 6.73(m, 3H) , 6.37(brd s, 1H) , 5.02-4.93 (m, 2H) , 4.67(s, 2H), 4.13(m, 2H), 3.89-3.43 (m, 7H), 2.19-1.36(m, 8H) , 1.26(d, 9H), 1.18-1.08(dd, 1H), 0.92-0.81(m, 6H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 538,8 (m+1).
Exemplo 155 1-[4-(S)-[3-(4-tert-butilcicloexiloxi)-4-metoxi- fenil]-3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-1]-2- hidroxietanona.
Preparado a partir do Exemplo 154 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (17% rendimento). 2Η RMN (CD3OD, 400 ΜΗζ) δ: 6.82-6.74(m, 3H), 4.91- 4.85(m, 3H), 3.82-3.78 (m, 4H) , 3.76-3.30 (m, 4H), 2.14- 1.34(m, 2H) , 1.22-1.18(m, 10H), 1.08-0.99(m, 3H) , 0.86- 0.78(m, 9H), 0.79-0.75(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 448,8 (m+1).
Exemplo 156 2-benziloxi-l-{3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-4-(S)- [4-metoxi-3-(4-metilcicloexiloxi)fenil]-3-metilpirrolidi- nil-l}etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando 4-metilcicloexanol (mistura de isômeros) (10% rendimento). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.42-7.28(m, 5H) , 6.83- 6.74(m, 3H) , 4.67(s, 2H) , 4.40-4.36(m, 1H) , 4.15-4.12(m, 2H), 3.97-3.44(m, 8H), 1.98-1.91(m, 2H), 1.60-0.85(m, 15H), 0.74-0.71(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 496,7 (m+1).
Exemplo 157 2-hidroxi-l-{3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-4-(S)-[4- metoxí-3-(4-metilcicloexiloxi)fenil]-3-metilpirrolidinil- ljetanona.
Preparado a partir do Exemplo 156 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (rendimento quantitativo). XH RMN (CD3OD, 400 MHz) δ: 6.87-6.79(m, 3H), 4.18- 4.11(m, 2H) , 3.98-3.70(m, 1H) , 3.69-3.36(m, 10H) , 3.09- 2.89(m, 1H), 1.99-1.92(m, 1H), 1.61-1.43(m, 6H), 1.28- 1.23(m, 2H) , 1.14-1.10(m, 3H) , 0.97-0.86 (m, 3H) , 0.78- 0.76(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 406,6 (m+1).
Exemplo 158 2-benziloxi-l-[4-(S)-[3-(decaidronaftaleniloxi- 2)-4-metoxifenil]-3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirroli- dinil-l}etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando decaidronaftalenol-2 (mistura de isômeros) (10% rendimento). XH RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 7.42-7.29 (m, 5H) , 6.85- 6.74(m, 3H) , 5.03-4.95 (m, 1H) , 4.68(s, 2H) , 3.98-3.45(m, 7H), 1.90-1.10(m, 22H), 0.75-0.72(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 536,7 (m+1).
Exemplo 159 1- [4-(S)-[3-(decaidronafaleniloxi-2)-4-metoxi- fenil]-3-(S)-(1-(IR)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2- hidroxietanona.
Preparado a partir do Exemplo 158 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (rendimento quantitativo). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 6.85-6.79(m, 3H), 5.02- 4.94 (τη, 1H) , 4.23-4.12 (m, 2H) , 4.03-3.48 (m, 10H) , 3.08- 2.89(m, 1H) , 1.89-1.80 (m, 2H) , 1.78-1.13(m, 17H). 0.77- 0.75(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 446,1 (m+1).
Exemplo 160 2- benziloxi-l-[4-(S)-[3-(bicicloexiloxi-4)-4- metoxifenil]-3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirroli- dinil-1]etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando bicicloexilol-4 (mistura de isômeros) (12% rendimento). ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.42-7.29(m, 5H) , 6.84- 6.74(m, 3H) , 5.03-4.95(m, 1H) , 4.68(s, 2H) , 4.17-4.11(m, 2H) , 3.98-3.45(m, 7H) , 1.90-1.10(m, 26H), 0.75-0.72(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 564,8 (m+1).
Exemplo 161 1- [4- (S)- [3-(bicicloexiloxi-4)-4-metoxifenil]-3- (S)-(1-(IR) -hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2- hidroxietanona.
Preparado a partir do Exemplo 160 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (rendimento quantitativo). 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ: 6.85-6.79(m, 3H), 5.02- 4.93(m, 1H), 4.20-4.15(m, 2H) , 4.07-3.47(m, 8H) , 3.07- 2.88(m, 1H) , 2.17-1.94(m, 2H) , 1.82-0.82 (m, 23H). 0.77- 0.74(brd s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 474,6 (m+1).
Exemplo 162 2-benziloxi-l-(3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4- (S)- [4-metoxi-3-(4-trifluorometilcicloexiloxi)fenil]-3-metil- pirrolidinil-ljetanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando 4-trifluorometilcicloexanol (mistura de isômeros) (40% rendimento). 1H RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.46-7.24(m, 5H) , 6.88- 6.77(m, 3H) , 4.72-4.61(brd s, 2H), 5.03-4.89(brd m, 1H), 4.19-3.18(m, 10H), 2.26-0.80(m, 14H), 0.75-0.68(brd, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 550,7 (m+1).
Exemplo 163 2-hidroxi-l-(3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4-(S)- [4- metoxi-3-(4-trifluorometilcicloexiloxi)fenil]-3-metilpir- rolidinil-1}etanona.
Preparado a partir do Exemplo 162 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (rendimento quantitativo). XH RMN (CD3OD, 400 MHz) δ: 6.85-6.83(m; 3H), 5.03- 4.90(m, 1H), 4.26-4.15(m, 2H), 4.13-3.39(m, 2H), 3.89- 3.37(m, 7H), 3.10-2.90(m, 1H), 2.26-2.18(m, 2H), 2.08- 2.01(m, 3H), 1.55-0.86(m, 7H) , 0.75 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 460,3 (m+1).
Exemplo 164 2-benziloxi-l-{3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4- (S)- [4-metoxi-3-(3-metoxi-3-metilbutoxi)fenil]-3-metil-pirroli- dinil-l}etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando 3-metoxi-3-metilbutanol (78% rendimento). XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.42-7.29(m, 5H), 6.85- 6.72(m, 3H) , 4.67(s, 2H) , 4.17-4.13(m, 3H) , 3.97-3.45(m, 9H), 3.23(d, 4H), 2.07-2.01(m, 2H),1.23(s, 6H) , 1.16- 1.09(dd, 4H), 0.72(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 500,6 (m+1).
Exemplo 165 2-hidroxi-l-{3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4- (S) - [4- metoxi-3-(3-metoxi-3-metil)fenil]-3-metilpirrolidinil-l} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 164 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (97% rendimento). ΧΗ RMN (CD3OD, 400 MHz) δ: 6.83-6.72(m, 3H), 4.12- 4.11(m, 4H) , 4.01-3.79(m, 1H) , 3.83 (s, 3H) , 3.72-3.46 (m, 7H), 3.22 (s, 3H) , 2.05-1.99 (m, 2H) , 1.22(brd s, 7H) , 1.16- 1.11(m, 3H), 0.73(brd s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 410,2 (m+1).
Exemplo 166 2-benzíloxi-l-{3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4-(S)- [4-metoxi-3-(3-fenilciclopentilmetoxi)fenil]-3-metilpirro- lidinil-ljetanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando (1-fenilciclopentil)metanol (25% rendimento) . XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.46-7.13 (m, 10H) , 6.78-6.37(m, 3H), 5.01-4.93(m, 1H) , 4.66(m, 2H) , 4.15- 4.10(m, 2H) , 3.92-3.41(m, 7H) , 2.24-2.15(m, 1H),2.04- 1.97(m, 2H) , 1.84-1.70(m, 4H) , 1.26(d, 6H) , 1.13-1.05(dd, 3H), 0.87-0.85(m, 1H), 0.65(2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 558,5 (m+1).
Exemplo 167 2-hidroxi-l-(3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4- (S)- [4- metoxi-3-(1-fenilciclopentilmetoxi)fenil]-3-metilpirrolidi- nil-l} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 166 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (26% rendimento). XH RMN (CD3OD, 400 MHz) δ: 7.46-7.43(m, 3H), 7.34- 7.27(m, 3H), 7.23-7,18(m, 1H) , 6.81-6.71(m, 3H), 6.53- 6.48(m, 1H), 4.15-4.09(m, 2H) , 3.39-3.88 (m, 2H), 3.78- 3.46(m, 7H), 2.25-0.68(m, 17H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 468,7 (m+1).
Exemplo 168 2-benziloxi-l-{3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4- (S)- [4-metoxi-3-(1-fenilciclopropilmetoxi)fenil]-3-metilpirro- lidinil-1}etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu usando (1-fenilciclopropil)metanol (90% rendimento). XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ: 7.46-7.16 (m, 10H) , 6.79-6.72 (m, 2H) , 6.64-6.59(m, 1H), 4.66(m, 2H), 4.14- 4.12(m, 2H), 4.10-4.02(m, 2H), 3.91-3.42(m, 9H), 1.28- 1.25(m, 1H), 1.14-1.06(m, 3H) , 1.04-0.95(m, 4H) , 0.66(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 530,7 (m+1).
Exemplo 169 2-hidroxi-l-{3-(S)-(1-(R)-hidroxietil)-4-(S)- [4- metoxi-3-(1-fenilciclopropilmetoxi)fenil]-3- metilpirrolidinil-l}etanona Preparado a partir do Exemplo 168 pelo processo de debenzilação do Exemplo 151 (44% rendimento). 1H RMN (CDC13, 400MHz) δ: 7.47-7.21(m, 5H), 6.84- 6.60(m, 3H) , 4.15-4.04(m, 4H) , 3.99-3.46(m, 8H), 3.05- 2.99(m, 1H), 2.11-2.04(m, 1H) , 1.74-1.59(m, 2H), 1.29- 0.96(m, 4H), .088-0.68(m, 4H) . LRMS (Electrospray, positivo): Da/e 440,1 (m+1).
Exemplo 170 R1=CH2C (CH2CH3) (CH2OCH2) ; R3=COCH2OCH2Ph 2-benziloxi-l-[(3S,4S)-4-3-(3-etiloxietanil-3- metoxi)-4-metoxifenil]-3-((IR)-1-hidroxietil)-3-metil- pirrolidinil-1] etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 de acordo com 0 processo no Exemplo 144 usando 3-etil-3-oxietano-metanol (34ml, 0,3mmol) para render o Exemplo 150 (44mg, 88%). 1H RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 7.41-7.25(m, 5H), 6.84- 6.80(m, 3H), 4.64(s, 2H), 4.58(dd, 2H), 4.49(d, 2H), 4.17- 4.11(m, 3H) , 3.99(dd, 2H) , 3.98-3.20 (m, 5H, rotomeros), 3.80(s, 3H), 1.91(dd, 2H), 1.80(d, 1H), 1.24(dd, 1H), 1.17 e 1.13(dubletes, 3H, rotomeros), 0.94 (t, 3H) , 0.73(s, 3H).
Exemplo 171 R^CHsCÍCHsCHs) (CH2OCH2) ; R3=COCH2OH 1-((3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-(3-[(3- etiloxietanil-3)metoxi]-4-metoxifenil}-3- metilpirrolidinil)-2-hidroxietanona-l. 0 Exemplo 170 foi desprotegido usando a debenzilação do Intermediário 31 para fornecer o Exemplo 171 como um óleo claro (28,6mg, 80%). XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.91-6.83(m, 3H) , 4.64(d, 1H) , 4.19(m, 2H) , 4.12(m, 1H) , 4.00-3.14(m, 12H) , 3.83(s, 3H), 1.15(m, 3H) , 0.96(m, 3H), 0.78(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 408,5(m+l).
Exemplo 172 R1=t-Bu; R3=COCH2OAc Acetato de (2-{-3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4- [3-(terc-butoxi) -4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- oxoetíla.
Preparado a partir do Intermediário 73 via processo de acoplamento por base de Hunig usando cloreto de acetoxiacetila. *H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.94-6.91(m, 3H) , 4.72-7.48 (m, 2H) , 3.80(m, 3H), 3.97- 3.17(m, 6H), 2.19(s, 3H), 1.33(d, 9H), 1.15(t, 3H) , 0.76(d, 3H) .
Exemplo 173 RX=H ; R3=COCH2OAc Acetato de 2-[-3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4- (3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxoetila.
0 Exemplo 172 foi desprotegido pelo método do TFA do Exemplo 143 para chegar ao Exemplo 173 como uma espuma castanha (173mg, 80%). XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.86-6.70(m, 3H), 5.64(brs, 1H), 4.72-4.62(m, 2H), 3.88(m, 3H) , 3.95-3.18(c, 6H) , 2.20(d, 3H) , 1.15 (t, 3H) , 0.77(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 352,2 (m+1).
Exemplo 174 R1=4-Ph-Ph-CH2CH2 ; R3=C (=0) CH2OCH2Ph 2-benziloxi-l-[(3S,4S)-4-[3-(2-bifenilil-4- etoxi))-4-metoxifenil]-3-{(IR)-1-hidroxietil)-3- metilpirrolidinil-1] etanona. 0 Exemplo 143 (60mg, 0,15mmol) foi sujeitado ao processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando 4-hidrioxietil- biufenil-etila (90mg, 0,45mmol) e utilizado sem nenhuma purificação ou caracterização posterior (73mg, 84%).
Exemplo 175 R1=4-Ph-Ph-CH2CH2 ; R3=C (=0) CH20H 1-[(3 S,4 S)-4-[3-(2-bifenilil-4-etoxi))-4- metoxifenil]-3-((IR)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]- 2-hidroxietanona. 0 Exemplo 174 foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para chegar ao Exemplo 175. XH RMN (CDC13, 300MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.58(br t, 7,4Hz, 3H), 7.47-7.27(m, 6H), 6.86-6.77(m, 3H), 4.24(dt, J=3,0 7,4Hz, 2H), 4.11(brt, J=4,lHz, 2H), 4.01- 3.47(m, 5,5H, rotomeros) , 3.87(s, 3H) , 3.20(t, J=7,4Hz, 2H), 3.03(d, J=9,8Hz, 0,5H, rotomeros), 1.36/1.32(2d, J=3,6/3,7Hz, 1H) , 1.16/1.13(2d, J=6,5/6,4Hz, 3H) , 0.74 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): m/e 490 (m+l)+.
Exemplo 176 Rx= CH2C=CPh ; R3=COCH2OAc Acetato de 2-{-3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [4-metoxifenil-3-(3-fenipropiniloxi-2)fenil]-3- metilpirrolidinil}-2-oxoetila.
Um frasco de fundo redondo equipado com barra de agitação e condensador foi carregado com o comopsto do Exemplo 173 (270mg, 0,769mmol), acetona (5ml), CsC03 (376mg, l,15mmol) e o Intermediário 90 (242mg, l,15mmol) sob um atmosfera de nitrogênio. A mistura foi refluxada por 4 horas e então deixada resfriar até a temperatura ambiente. A acetona foi removida sob pressão reduzioda e o resíduo tomado em EtOAc/água. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x lOOml) , seca (Na2S04) e concentrada. A purificação com Biotage (cartucho 40, 1:1:0,1 EtOAc:hexano:MeOH) atingiu 146 mg do Exemplo 176 como uma espuma branca (41%) . ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.41-7.26(m, 5H) , 7.05(dd, 1H) , 6.85(d, 2H) , 5.05-4.95(m, 2H), 4.70-4.58(m, 2H) , 3.88(d, 3H) , 3.95-3.13(c, 6H), 0.97-0.92(dd, 3H), 0.71(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 466,4 (m+1).
Exemplo 177 Rx= CH2C=C-4-FPh ; R3=COCH2OAc Acetato de 2 -{-3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- {3-(4-fluorofenil)propini1oxi-2]-4 -met oxi f eni1}-3 - metilpirrolidinil}-2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 173 pelo método do Exemplo 176 usando 0 Intermediário 91 com agente de alquilação. ^ RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.36(m, 2H), 7.04-6.97(m, 3H), 6.86-6.85(m, 2H), 4.98- 4.97(m, 2H) , 4.71-4.59(m, 2H) , 3.88(d, 3H) , 3.96-3.16(c, 6H), 2.20-2.18(m, 3H), 1.01(t, 3H) , 0.72(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 484,8 (m+1).
Exemplo 178 R1=CH (C3H5) C3H5 ; R3=COCH2OAc Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (diciclopropilmetoxi))-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidinil}- 2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 173 pelo processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando diciclopropilcarbinol. 1H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.26-6.78(m, 3H), 4.74-4.60 (m, 2H), 3.96-3.46 (m, 9H) , 3.21- 3.10(m, 2H) , 2.20 (s, 3H) , 1.26(d, 1H) , 1.19-l.ll(m, 4H) , 0.75(d, 3H), 0.55-0.41(m, 4H), 0.33-0.24(m, 4H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 446,5 (m+1).
Exemplo 179 ^=3-(4-clorofenil) (1,2,4-oxadiazolil-5)metila ; R3=COCH2OAc Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3- { [3-(4-clorofenil) (l,2,4-oxadíazolíl-5)]metoxi}-4- metoxifenil)-3-me-tilpirrolidínil]-2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 173 via método do CsC03 do Exemplo 176 usando o Intermediário 87. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.02(d, 2H) , 7.46(d, 2H) , 6.95-6.85(m, 3H) , 5.40(d, 2H) , 4.70-4.58(m, 2H) , 3.94(d, 3H) , 3.95-3.12(c, 6H) , 2.19(s, 3H), 1.04-1.00(dd, 3H), 0.64(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 544,4 (m+1).
Exemplo 180 R3= CH2C=CPh ; R3=COCH2OH 1-{-3- {(IR) -1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi-3- (3-fenilpropiniloxí-2)fenil]-3-metilpirrolidinil}-2- hidroxietanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 176 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.26(m, 5H), 7.07-7.06(m, 1H), 6.85-6.84(m, 2H), 5.05- 4.94(m, 2H), 3.89(s, 3H), 4.13-2.99(c, 8H), 0.98-0.92(dd, 3H), 0.71 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 424,6 (m+1).
Exemplo 181 Rx= CH2C=C-4-Ph ; R3=COCH2OH 1-(-3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluoro- fenil)propiniloxi-2]-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidinil)-2- hidroxi-etanona.
Preparado a partir do Exemplo 177 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.39-7.36(m, 2H), 7.03-6.98(m, 3H), 6.85(s, 2H), 5.02- 4.93(m, 2H) , 3.89(s, 3H) , 4.15-3.01(c, 8H) , 1.04-0.99 (dd, 3H), 0.72(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 442,7 (m+1).
Exemplo 182 R1=C3H5CHC3H5 ; R3=COCH2OH l-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (diciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- 2-hidroxietanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 178 pelo processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. ■‘Ή RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.90-6.78(m, 3H), 4.17-3.44(c, 11H), 3.15-3.03(m, 2H), 1.32-1.20 (m, 1H) , 1.19-1.09(m, 4H) , 0.75(d, 3H), 0.54- 0.39(m, 4H), 0.34-0.23(m, 4H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 404,5 (m+1).
Exemplo 183 R1=3-(4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazolil-5)metila ;
R3=COCH2OH 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-{ [3- (4- clorofenil)(l,2,4-oxadiazolil-5)]metoxí}-4-metoxifenil)-3- metilpirrolidinil]-2-hiroxietanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 179 via processo de hidrólise do Intermediário 5. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.03(d, 2H) , 7.46(d, 2H) , 6.95-6.86(m, 3H) , 5.40(d, 2H) , 3.88 (s, 3H) , 4.12-2.98(c, 8H) , 1.05-0.99 (dd, 3H) , 0.64(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 502,4 (m+1).
Exemplo 184 R^CHjCHjt-Bu ; R3=COCH2OCH2Ph 1-(3-( (IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (3,3- dimetil-butoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- (fenilmetoxi) etanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 143 via processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando 3,3-dimetil-l-butanol. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.41-7.31(m, 5H), 6.80-6.75(m, 3H), 4.70-4.63(m, 2H), 4.15- 3.21 (c, 13H), 1.80-1.73(m, 2H) , 1.17-1.10(m, 2H) , 0.98(s, 9H) , 0.74(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 484,6 (m+1).
Exemplo 185 R^CHzCHzt-Bu ; R3=COCH2OCH2OH 1-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (3,3- dimetil-butoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- hidroxíetanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 184 via processo de debenzilação do Intermediário 31. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.88-6.71(m, 3H), 4.38-2.99(c, 13H), 1.82-1.73(m, 2H) , 1.19-1.08(m, 3H), 0.80-0.69 (m, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 394,4 (m+1).
Exemplo 186 R^CHjCjHs ; R3=COCH2OCH2Ph l-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropil-metoxi) -4-metoxifenil] -3-metilpirrolidiml} -2- (fenilmetoxi) etanona-1.
Preparado a partir do Intermediário 67 via método de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de benziloxi acetila. XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.29(m, 5H) , 6.82-6.74(m, 3H) , 4.66(s, 2H), 4.15- 3.20 (c, 11H), 1.71-1.57(br s, 1H) , 1.35-1.23 (m, 1H) , 1.16- 1.07(dd, 3H), 0.71 (s, 3H), 0.62(d, 2H), 0.34(d, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 454,6 (m+1).
Exemplo 187 R1=CH2C3H5 ; R3=COCH2OH 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- hidroxietanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 186 via método de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN (Metanol-d4, 400MHz) δ: 6.95-6.84(m, 3H) , 4.31-4.22(m, 2H) , 3.91-3.23(c, 11H), 1.30-1.19(m, 1H) , 0.74 (s, 3H), 0.62-0.56(m, 2H) , 0.35-0.28(m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 364,2 (m+1).
Exemplo 188 R1=CH2C3H5 ; R3=C0CH2NHC02CH2Ph N- (2-{3- ((IR) -1-hidroxietil) (3S,4S) -4- [3- (ciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} 2 oxoetil)(fenilme-toxi) carboxamida.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acilação do Exemplo 7 usando Z-Gly-ONp. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.45-7.30(m, 5H), 6.85-6.76(m, 3H), 5.81(br s, 1H), 5.13(s, 2H), 4.10-3.43(c, 12H), 3.17(d, 1H), 1.68(br s, 1H) , 1.36- 1.26(m, 1H) , 1.14 (t, 3H) , 0.73(d, 3H) , 0.66-0.60 (m, 2H) , 0.38-0.31(m, 2H).
Exemplo 189 R^CHsCsHs ; R3=COCH2NH2 l-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} - 2- aminoetanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 188, via processo de debenzilação do Intermediário 31. ΧΗ RMN (Metanol-d4/ 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.96-6.81(m, 3H) , 4.00-3.27 (c, 13H), 1.29-1.18(m, 1H) , 1.13-1.07(m, 3H), 0.75(m, 3H), 0.62-0.54 (m, 2H), 0.35- 0.28(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 363,2 (m+1).
Exemplo 190 R^CHzCaHs ; R3=COC (CH3) 2OCOCH3 Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- 1,l-di-metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de 2-acetoxiisobutirila. 3H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.87-6.70(m, 3H) , 3.93-3.32(c, 11H), 2.08(d, 3H) , 1.81- 1.65 (br m, 1H) , 1.65-1.53(m, 6H) , 1.35-1.23(m, 1H), 1.19- l.ll(t, 3H) , 0.68(d, 3H) , 0.65-0.57(m, 2H) , 0.37-0.30 (m, 2H) .
Exemplo 191 R1=CH2C3H5 ; R3=COC(CH3)2OH 1-{3-((IR)-1-hidroxietii) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2 - hidro-xi-2-metilpropanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 190 via processo de hidrólise com LiOH do Intermediário 5. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.84-6.75(m, 3H) , 4.43(br s, 1H) , 4.01-3.41 (c, 11H), 1.52- 1.41(m, 6H) , 1.52-1.41(m, 6H), 1.32-1.17(m, 1H) , 1.16- 1.08 (t, 3H) , 0.73(d, 3H) , 0.63-0.57(m, 2H) , 0.37-0.29 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 392,5 (m+1).
Exemplo 192 R1=CH2C3H5 ; R3=(S) -COCH(CH3)OAc Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS) -l-metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de 2-acetoxipropionila. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.83-6.76 (m, 3H), 5.25-5.17(m, 3H), 4.08-3.35 (c, 12H) , 2.15-2.09(m, 3H), 1.50-1.44 (m, 3H) , 1.35-1.23 (m, 1H) , 1.15(d, 3H), 0.79-0.71(m, 3H), 0.65-0.60(m, 2H) , 0.37- 0.30 (m, 2H) .
Exemplo 193 R1=CH2C3H5 ; R3=(S) -COCH(CH3)OH l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2S)-2-hidro- xipropa-nona-1.
Preparado a partir do Exemplo 192 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. 3H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.84 - 6.73(m, 3H), 4.39-4.28(m, 1H), 3.88-3,48(c, 10H), 3.29(dd, 1H) , 1.40-1.20 (m, 4H) , 1.12 (t, 3H) , 0.73(d, 3H) , 0.64-0.55(m, 2H), 0.37-0.29(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,7 (m+1).
Exemplo 194 R1=CH2C3H5 ; R3=COCH (Ph) OAc Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- oxo-l-feniletila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando ácido O-acetilmandélico clorídrico. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 7.57-7.35 (m, 5H) , 6.84-6.51 (m, 3H) , 6.11-6.04(m, 1H), 4.08-3.05(c, 11H), 2.21-2.14(m, 3H), 1.36-1.20(m, 1H) , 1.14-1.06(dd, 3H) , 0.78 e 0.48(s e d, 3H), 0.67-0.57(m, 2H), 0.37-0.28(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 482,6 (m+1).
Exemplo 195 R1=CH2C3H5 ; R3=C0CH (Ph) OH 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidinil}-2-hidroxi-2- fenil-etanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 194 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 7.40-7.28 (m, 5H) , 6.81-6.42(m, 3H) , 5.13- 4.61(m, 1H), 4.07-3.29(c, 10H), 3.21-2.79(m, 1H), 1.36- 1.20 {m, 1H) , 1.15-0.97(dd, 3H) , 0.73 e 0.47(d e s, 3H), 0.65-0.56(m, 2H),0.37-0.28(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 440,2 (m+1).
Exemplo 196 R^CHzCjHs ; R3=COCH (4-FPh) OAc Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-1- (4-fluorofenil)-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (clorocarbonil)(4-fluorofenil)metila. 3Η RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 7.60-7.46 (m, 2H) , 7.15-7.03(m, 2H) < 6.85-6.54(m, 3H), 6.09-5.99(m, 1H), 4.07-2.87(c, 11H), 2.19-2.12(m, 3H), 1.33-1.20 (m, 1H) ,1.15-1.03(dd, 3H) , 0.78 e 0.52(d e d, 3H), 0.65-0.57(m, 2H), 0.38-0.27(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 501,0 (m+1).
Exemplo 197 R1=CH2C3H5 ; R3=COCH (4-FPh) OH l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S) -4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-(4-fluoro- fenil)-2-hidroxietanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 194 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 7.40-7.28(m, 5H) , 6.81-6.42(m, 3H) , 5.13- 4.61(m, 1H), 4.07-3.29 (c, 10H), 3.21-2.79(m, 1H), 1.36- 1.20 (m, 1H) , 1.15-0.97 (dd, 3H) , 0.73 e 0.47(d e s, 3H), 0.65-0.56(m, 2H),0.37-0.28(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 440,2 (m+1).
Exemplo 198 R1=CH2C3H5 ; R3=COC(CH2CH2)OAc Acetato de ({3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclo-propilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}- carbonil) ciclopropila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (clorocarbonil) ciclopropila. 1H RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.85-6.72(m, 3H) , 4.06- 3.31 (c, 11H), 2.10(8, 3H) , 1.74-1.62(m, 1H) , 1.59-1.47 (m, 1H), 1.35-1.19(m, 2H), 1.14(d, 3H), 1.02-0.93(m, 1H), 0.71 (s, 3H), 0.65-0.59(m, 2H), 0.37-.030 (m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 432,5 (m+1).
Exemplo 199 R1=CH2C3H5 ; R3=COC(CH2CH2)OH 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil hidroxiciclopropil cetona.
Preparado a partir do Exemplo 198 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.88-6.78(m, 3H), 4.42- 3.30(c, 11H), 1.42-1.22(m, 3H) , 1.16(d, 3H) , l.ll-0.88(m, 3H), 0.74(d, 3H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.39-0.31(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 390,5 (m+1).
Exemplo 200 R1=CH2C3H5 ; R3 = (S) -COCH (OAc) CH (CH3) CH2CH3 Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} (IS)-1-(clorocarbonil)-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-2-metilbutila. *H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 6.85-6.72(m, 3H), 4.84(dd, 1H), 3.89- 3.31(C, 11H), 2.12(d, 3H) , 2.09-1.95 (m, 1H) , 1.75-1.62 (m, 1H), 1.15 (t, 3H), 1.00-0.86 (m, 6H), 0.75(d, 3H), 0.65- 0.56(m, 2H), 0.37-0.30(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 462,5 (m+1).
Exemplo 201 R1=CH2C3H5 ; R3= (S) -COCH (OH) CH (CH3) CH2CH3 l-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- (ciclopropil-metoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} (2S)-2-hidroxi-3-metilpentanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 200 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros e diastereoisômeros) δ: 6.85-6.76(m, 3H) , 4.18-4.11(m, 1H) , 3.94-3.26(0, 11H), 1.75-1.66(m, 1H), 1.54-1.19(m, 4H), 1.15(dd, 3H) , 1.07(m, 3H) , 0.94-0.85 (m, 3H) , 0.76(d, 3H) , 0.66-0.60(m, 2H), 0.38-0.32(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 420,5 (m+1).
Exemplo 202 R1=CH2C3H5 ; R3=(S) -COCH(OAc)CH2CH(CH3)2 Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS) -1-(2-metilpropil)-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-2-oxoetila. ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.84-6.74(m, 3H), 5.19-5.10(m, 1H), 4.15-2.95(c, 11H) , 2.13(d, 3H), 1.95-1.72(m, 2H) , 1.58-1.39(m, 2H), 1.34- 1.23(m, 1H) , 1.18-1.12(m, 3H) , 1.00-0.88(m, 6H) , 0.75(d, 3H), 0.68-0.57(m, 2H), 0.37-0.30(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 462,5 (m+1).
Exemplo 203 R1=CH2C3Hs ; R3= (S) -COCH(OH)CH2CH(CH3)2 l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil] -3-metilpirrolidinil}(2S)-2-hidro- xi-4-metilpentanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 202 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.86-6.77(m, 3H), 4.32-4.25(m, 1H), 3.88-2.97 (c, 11H) , 2.05-1.93(d, 1H), 1.73-1.21(m, 5H), 1.14(dd, 3H), 1.02- 0.93(m, 6H) , 0.76(d, 3H) , 0.66-0.60(m, 2H), 0.38-0.32 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 420,3 (m+1).
Exemplo 204 R1=CH2C3H5 ; R3=(S)-COCH(OAc)CH2Ph Acetato de 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS) -2-oxo-l-benzila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig usando acetato de (IS)-1-(clorocarbonil)-2-feniletila. XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40-7.26 (m, 5H) , 6.82-6.70 e 6.52-6.47 (m e m, 3H) , 5.30- 5.18(m, 1H), 3.90-2.79 (c, 13Η), 2.11(d, 3Η) , 1.35-1.25 (m, 1Η), 1.05 (dd, 3H) , 0.66 e 0.33(s e s, 3H) , 0.68-0.60(m, 2H), 0.39-0.32(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 497,0 (m+1).
Exemplo 205 R1=CH2C3H5 ; R3= (S) -COCH (OH) CH2Ph l-{3- ((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[3-(ciclopro- pilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(2 S)-2-hidro- xi-4-metilpentanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 202 via processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5. XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.86-6.77(m, 3H), 4.32-4.25(m, 1H), 3.88-2.97(c, 11H), 2.05-1.93(d, 1H), 1.73-1.21(m, 5H), 1.14(dd, 3H), 1.02- 0.93(m, 6H) , 0.76(d, 3H) , 0.66-0.60(m, 2H) , 0.38-0.32 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 420,3 (m+1).
Exemplo 206 R^CH^Hs ; R3= (S) -COCH (OAc) CH2Ph Acetato de (2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil} -2-oxo-l-benziletila.
Preparado a partir do Intermediário 67 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando acetato de (IR)-1-(clorocarbonil)-2-feniletila. 1H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.37-7.22(m, 5H) , 6.82-6.72, 6.64, 6.45 (m, d e dd, 3H) , 5.27 e 5.18(dd, t, 1H), 3.99-2.56 (c, 13H), 2.12(s, 3H) , 1.34-1.24(m, 1H) , 1.13-1.02(dd, 3H) , 0.68 e 0.34(s e s, 3H), 0.65-0.58(m, 2H), 0.37-0.30 (m, 2H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 496,6 (m+1).
Exemplo 207 R^CHjCsHb ; R3= (R) -COCH (OH) CH2Ph ((2R)-l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4- [3- (ciclopropilmetoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2- hidroxi-3-fenilpropanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 206 via método do peróxido de lítio do Intermediário 43. lE RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.35-7.18(m, 5H), 6.84-6.67(m, 3H), 4.48-4.40(m, 1H), 4.04- 2.70 (c, 13H), 1.34-1.24(m, 1H), 1.08(dd, 3H), 0.71 e 0.49(s e s, 3H), 0.65-0.58(m, 2H), 0.38-0.31(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 454,5 (m+1).
Exemplo 208 R1=t-Bu ; R3=(S) -C0CH(0Ac)CH3 Acetato de (2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3-(terc-butoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}(IS)-1- metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Intermediário 73 via processo de acoplamento por base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de (S)-2-acetoxipropionila. 3H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.95-6.81(m, 3H), 5.24-5.11(m, 1H) , 3.80(m, 3H), 4.08- 3.38(m, 6H), 2.15-2.12(d, 3H), 1.49-1.46(dd, 3H), 1.33(d, 9H), 1.14(d, 3H), 0.76(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 422,4 (m+1).
Exemplo 209 RX=H ; R3=(S) -COCH(OAc)CH3 Acetato de (2-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- (3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil](IS)-1-metil- 2-oxoetíla.
Preparado a partir do Exemplo 208 via método de desproteção do TFA do Exemplo 143. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.88-6.70 (m, 3H) , 5.73-5.69 (br d, 1H) , 5.25-5.19(m, 1H) , 3.88(d, 3H) , 4.06-3.38(m, 6H) , 2.12(d, 3H) , 1.49-1.46 (d, 3H) , 1.16-1.14(dd, 3H), 0.75(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 366,3 (m+1).
Exemplo 210 Rx= CH2C=CPh ; R3= (S)-COCH(OAc)CH3 Acetato de (2-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidi- nil}(IS)-l-metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 209 via método do Cs2C03 do Exemplo 176 usando o Intermediário 90. 3H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.39- 7.26(m, 5H) , 7.05(d, 1H) , 6.85(s, 2H) , 5.23-5.17(m, 1H), 5.05-4.95 (m, 2H), 3.86(s, 3H) , 4.07-3.36(d, 6H), 2.15- 2.12(d, 3H), 1.47-1.40 (t, 3H), 1.36-1.33 (m, 1H), 0.99- 0.95(m, 3H), 0.75-0.71(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e (m+1).
Exemplo 211 Rx= CH2C=CPh ; R3= (S)-COCH (OH) CH3 1-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi-3- (3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidinil}(2S)-2- hidroxipropanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 210 via método de desproteção com O-acetato do Exemplo 95. 3H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.41- 7.26(m, 5H) , 7.07 (d, 1H) , 6.86 (s, 2H) , 5.0-4.94(m, 1H) , 4.36-4.30(m, 1H) , 3.89(s, 3H) , 3.91-3.48(c, 5H) , 3.28(dd, 1H), 1.37-1.32(m, 3H), 0.99-0.92(dd, 3H), 0.73-0.70(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 438,2 (m+1).
Exemplo 212 Rx= CH2C=C-4 - FPh ; R3= (S) -COCH (OAc) CH3 Acetato de (2-(3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4- {3-[3-(4-fluorofenil)propíniloxi-2]-4-metoxifenil}-3- metilpirrolidinil)-2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 209 via método do Cs2C03 do Exemplo 176 usando o Intermediário 91. XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.40- 7.36(m, 2H), 7.03-6.96(m, 3H), 5.22-5.20(q, 31H), 4.98-4.96(m, 2H), 4.07-3.53(c, 6H), 3.88-3.86(m, 3H), 2.14- 2.11(d, 3H) , 1.47-1.42 (t, 3H), 1.06-1.01(m, 3H), 0.75- 0.72(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 498,5 (m+1).
Exemplo 216 R*= 3- (4-clorofenil)(l,2,4-oxadiazolil-5)metil ; R3= (S)-C0CH(0Ac)CH3 Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3- { [3-(4-clorofenil) (l,2,4-oxadiazolil-5) ]metoxi}-4-metoxife- nil)-3-metilpirrolidinil](IS)-l-metil-2-oxoetila.
Preparado a partir do Exemplo 209 via método do Cs2C03 do Exemplo 176 usando o Intermediário 87. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.01(d, 2H) , 7.46(d, 1H) , 6.96-6.85(m, 3H) , 5.45-5.36(m, 2H), 5.21-5.14(m, 1H), 4.02-3.36 (c, 6H) , 3.38(m, 3H), 2.11(d, 3H), 1.47-1.42(m, 3H) , 1.04-1.02(d, 3H) , 0.67- 0.65(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 558,2 (m+1).
Exemplo 217 R1= 3-(4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazolil-5)metil ; R3= (S)-COCH(OH)CH3 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-{ [3- (4- clorofenil)(1,2,4-oxadiazolil-5)]metoxi}-4-metoxifenil)-3- metilpirrolidinil](2S)-2-hidroxipropanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 216 via método de desproteção do O-acetato do Exemplo 95. XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 8.06- 8.00(m, 2H) , 7.49-7.45(m, 2H) , 6.97-6.86(m, 3H) , 5.41(m, 2H), 4.35-4.32(m, 1H), 3.88 (s, 3H) , 3.86-3.19(c, 6H) , 1.38- 1.32(m, 3H), 1.05-1.00(dd, 3H), 0.66-0.63(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 516,4 (m+1).
Exemplo 218 R3= 2-indanil ; R3= COCH(OAc)4-FPh Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3- indanil-2-oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1-(4- fluorofenil)-2-oxoetila. 0 Intermediário 51 (72,8mg, 0,198mmol) foi acilado pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 com ácido 2- acetoxi-fluormandélico clorídrico (120mg, 0,297mmol, l,5eq) para produzir um óleo claro e incolor (84,2mg, 75%). 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.53-7.47(m, 2H), 7.26-7.03(m, 6H), 6.87-6.59(m, 3H), 6.09- 6.04(m, 1H) , 5.28-5.01(m, 1H) , 4.14-3.03(c, 13H), 2.16 (s, 3H) , 1.27-1.06 (m, 3H) , 0.82-0.80 (d, 1,5H), 0.55-0.52 (d, 1,5H).
Exemplo 219 R*= 2-indanil ; R3= COCH(OH)4-FPh 1- [3- ((IR) -1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-indaníl-2- oxi-4-metoxifenil)-3-metilpírrolidinil]-2-(4-fluorofenil)- 2-hidroxietanona-l. O Exemplo 218 (19mg, 0,034mmol, leq) foi sujeitado ao processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para fornecer um pó branco (6,lmg, 35%). RMN (CDC13; 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 6.97-6.80 (c, 7H) , 4.19(m, 2H) , 4.13(t, 2H) , 3.82(s, 3H) , 3.72 (s, 3H) , 3.83-3.48 (c, 4H) , 3.25(dd, 1H) , 2.27(quintet, 2H), 1.70(8, 1H), 1.56(br d, 1H), 1.13(t, 3H), 0.73(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 520,4 (m+1).
Exemplo 220 Rx= 2-indanil ; R3= COCH(OAc)CH3 Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3- indanil-2-oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1-metil- 2-oxoetila. O Intermediário 51 (27mg, 0,074mmol) foi acilado pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 com cloreto de ( + )-2- acetoxipropionila (12,^g, 0,110mmol, l,5eq) para produzir um óleo claro e incolor (16,7mg, 47%). XH RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.27- 7.17(m, 4H), 6.85-6.83(m, 3H), 5.30-5.17(m, 2H), 4.13- 3.19(c, 9H), 2.14(s, 3H) , 1.72(brs, 1H), 1.51-1.47(m, 4H), 1.19-1,17(d, 3H), 0.82-0.78(d, 3H).
Exemplo 221 Rx= 2-indanil ; R3= COCH(OH)CH3 1- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3-indanil-2- oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-hidroxipropanona- 1. O Exemplo 220 (16,7mg, 0,0347mmol, leq) foi sujeitado ao processo de hidrólise com LiOH do Intermediário 5 para produzir um sólido branco (4,7mg, 31%) . ■'Ή RMN (CDC13; 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.27- 7.17(m, 4H), 6.85-6.84(m, 3H), 5.19-5.15(m, 1H), 4.39- 4.35(m, 1H) , 3.90-3.18 (c, 14H), 1.57-1.37 (m, 3H), 1.28- 1.15(m, 3H), 0.80-0.78(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 440,4 (m+1).
Exemplo 222 Rx= 2-indanil ; R3= COC(CH3) (OAc)CH3 Acetato de 2-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-(3- indanil-2-oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-1,1-dime- til-2-oxoetila. 0 Intermediário 51 (40mg, 0,llmmol) foi acilado pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 com cloreto de 2- acetoxi-2-metilpropionila (31μ9, 0,22mmol, 2eq) para produzir um óleo claro e incolor (22mg, 40%). 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.26-7.16(m, 4H) , 6.85-6.77 (m, 3H), 4.17(m, 1H), 3.95- 3.19(c, 14H), 2.10(s, 3H) , 1.65-1.57 (m, 6H) , 1.20-1.17(m, 3H), 0.73(d, 3H).
Exemplo 223 R3= 2-indanil ; R3= COC(CH3) (OH)CH3 1-[3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) -4-(3-indanil-2- oxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolídinil] -2-hidroxi-2-metil- propanona-1. O Exemplo 222 (22mg, 0,044mmol) foi sujeitado ao processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para chegar a um sólido branco (4,3mg, 22%) . XH RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotomeros) δ: 7.26-7.17(m, 4H), 6.83(m, 3H), 5.18-5.17(m, 1H) , 4.45- 4.44(m, 1H), 3.89-3.19(c, 14H), 1.52-1.48(m, 6H) , 1.19- 1.17(m, 3H), 0.79-0.78(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 454,4 (m+1).
Exemplo 224 Rx= t-Bu ; R3= C02CH3 Metil-(3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-(terc- butoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidina carboxilato. 0 Intermediário 73 (6,5μ1, 0,084mmol) foi acilado via processo da base de Hunig do Intermediário 74 com metil cloroformiato para fornecer o Exemplo 224 como um óleo amarelo (19mg, 94%). XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.96(d, 1H) , 6.84 (s, 1H), 6.83 (d, 1H), 3.80 (s, 3H) , 3.77-3.58(m, 4H) , 3.06(d, 1H), 1.36 (s, 9H) , 1.16(d, 3H), 0.76(s, 3H) .
Exemplo 225 2-hidroxi-l-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4-{4- metoxi-3-[2-(tetraidrofuranil-2)etoxi]fenil}-3-metilpirro- lidinil-1) etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando 2-tetraidrofuranil-2-etanol seguido por debenzilação via método do Intermediário 31. XH RMN δ: 6.75-6.84(m, 3H) , 4.16-4.20 (m, 2H) , 4.15(s, 3H) , 3.49-4.13(m, 1H) , 3.05(d, 1H) , 1.97-2.10(m, 2H), 1.88-1.96 (t, 2H) , 1.56-1.63(m, 2H) , 1.30-1.17 (t, 3H) , 0.75 (s, 3H) .
Exemplo 226 2-hidroxi-l-{(3S,4S) -3-((R)-1-hidroxietil)-4- [4- metoxi-3-(tetraidrofuranil-3-metoxi)fenil] -3-metilpirro- lidinil-l} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando tetraídrofuranil-3-metanol seguido por debenzilação via método do Intermediário 31. XH dados de RMN δ: 6.79-6.82(m, 3H) , 4.13-4.16(m, 2H), 3.48-3.98(m, 11H), 3.84(s, 3H), 3.05(d, 1H), 2.80(bt, 1H), 2.07-2.15(m, 2H) , 1.72-1.79 (m, 1H), 1.16(t, 3H) , 0.76 (s, 3H) .
Exemplo 227 Rx= (S)-CH(CH2OCH2CH2) ; R3= C02CH3 (3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-((3S)-oxolanil- 3-oxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 (146mg, 0,47mmol) pelo processo Mitsunobu em fase sólida do exemplo 144, usando (S)-( + )-3-hidroxitetraidrofurano (38μ1, 0,47mmol) para chegar ao Exemplo 227, como um óleo claro (95mg, 53%) . XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.82(m, 2H) , 6.78(m, 1H) , 4.95(m, 1H) , 4.03-3.20(m, 10H), 3.82 (s, 3H) , 3.66(s, 3H), 2.17(m, 2H), 1.17(t, 3H) , 0.73 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 379,8 (m+1) Exemplo 228 Rx= (R) -CH (CH2OCH2CH2) ; R3= C02CH3 (3R)-3-((IR)-1-hidroxietil)-4-[3-((3S)-oxolanil- 3-oxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 pelo processo Mitsunobu em fase sólida do Exemplo 144, e (R)-(- )-3-hídroxitetraidrofurano (48μ1, 0,57mmol) para chegar ao Exemplo 228, como um óleo claro (27mg, 37%). lE RMN (CDC13, 400MHz) Ô: 6.82 (m, 2H) , 6.78 (m, 1H), 4.95(m, 1H), 4.03-3.20 (m, 10H), 3.82(s, 3H) , 3.66(s, 3H), 2.17(m, 2H), 1.17(t, 3H), 0.73(s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 380,3 (m+1) Exemplo 229 Rl= CH2CH20 -4-FPh ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-{3- [2- (4- fluorofenoxi)etoxi]-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado pelo processo de eterificação do Exemplo 43 usando o Intermediário 74 (21,2mg, 0,0685mmol, leq) e brometo de 4-fluorofenoxietila (60mg, 0,27mmol, 4,0eq), produzindo um óleo claro e incolor (15,2mg, 49,7%) . . XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.99-6.83 (c, 7H) , 4.35 (t, 2H) , 4.29 (t, 2H) , 3.83 (s, 3H) , 3.72 (s, 3H) , 3.83- 3.48(0, 4H) , 3.25(dd, 1H) , 1.64 (s, 1H) , 1.42(br d, 1H) , 1.13 (t, 3H), 0.73 (s, 3H) .
Exemplo 230 Rx= CH2CH2CH20 -4-FPh ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-{3- [3- (4- fluorofenoxi)etoxi]-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 (25,2mg, 0,0815mmol, leq) pelo processo de eterificação do Exemplo 43, usando 1-(3-cloropropoxi)-4-fluorbenzeno (62mg, 0,33 mmol, 4,0eq), para produzir op Exemplo 230 como um óleo claro e incolor (19,0mg, 50,5%).. XH RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 6.97-6.80(c, 7H),4.19(m, 2H) , 4.13(t, 2H) , 3.72(s, 3H) , 3.83-3.48(c, 4Η), 3.25(dd, 1H), 2.27(quintet, 2H), 1.70(s, 1H) , 1.56(br d, 1H), 1.13 (t, 3H) , 0.73 (s, 3H) .
Exemplo 231 R3= CH2C=CH ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S) -4-(4-metoxi-3-pro- piniloxi-2fenil)-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação com K2C03 do Exemplo 43, usando brometo de propargila. 3H RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.97 (s, 1H) , 6.87- 6.82(m, 2H), 4.76(s, 2H), 3.86(s, 3H), 3.73(s, 3H) , 3.90- 3.55(m, 5H), 3.27(dd, 1H), 2.48(s, 1H) , 1.49-1.46(m, 1H), 1.14 (t, 3H), 0.75 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 348,1 (m+1) Exemplo 232 Rx= CH2C=CCH3 ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-(3-butinil-2-oxi- 4-metoxifenil)-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de eterificação com K2C03 do Exemplo 43, usando 1- bromo-2-butino. XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.96(s, 1H) , 6.85- 6.82(m, 2H) , 4.72-4.71(m, 2H) , 3.86(s, 3H) , 3.72(s, 3H) , 3.90-3.55(m, 5H), 3.27(dd, 1H), 2.48(s, 1H) , 1.81(s, 3H) , 1.14(t, 3H), 0.77 (s, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 362,2 (m+1) Exemplo 233 R3= CH2C=CPh ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi-3-(3- fenilpropiníl-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidina carboxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 via reação de Mitsunobu do Exemplo 144, usando 3-fenil-2-propinol-l. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.41-7.38 (m, 2H) , 7.32-7.23(m, 3H) , 7.07(d. 1H) , 6.84(s, 2H), 5.00-4.94 (m, 2H), 3.88(s, 3H), 3.72(s, 3H), 3.80- 3.69(m, 3H) , 3.57-3.50(m, 2H) , 3.23(dd, 1H) , 1.35-1.32 (m, 1H) , 0.98-0.94 (dd, 3H), 0.70(d, 3H) . LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 424,2 (m+1) Exemplo 234 Rx= CH2C=C-4-FPh ; R3= C02CH3 3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-{3-[3-(4-fluoro- fenil)propínil-2-oxi]-4-metoxifenil}-3-metilpirrolidinacar- boxilato de metila.
Preparado a partir do Intermediário 74 via processo de Mitsunobu em fase sólida do Exemplo 144, usando 0 Intermediário 89. 3Η RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.40-7.36(m, 2H) , 7.04-6.97 (m, 3H) , 6.85(s, 2H) , 4.97(s, 2H) , 3.88(s, 3H) , 3.72(s, 3H) , 3.86-3.65(m. 3H) , 3.58- 3.48(m, 2H), 3.24(dd, 1H), 1.013 (t, 3H) , 1.14(t, 3H), 0.71(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 442,5 (m+1) Exemplo 235 R3= CH2C=CFPh ; R3= COCH2SAc l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi-3- (3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidinil}-2-ace- tiltioetanona-l.
Preparado a partir do Exemplo 118 (30mg, 0,082mmol, l,0eq) pelo processo do Cs2C03 do Exemplo 176 usando mesílato de fenilpropargila (17,4mg, 0,082mmol, l,0eq) fornecendo um óleo claro e incolor (13,2mg, 33%). ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.45-6.86(m, 8H), 4.13-3.49(c, 12H), 2.31(s, 3H) , 1.60(s, 1H) , 1.28-1.24 (dd, 1H) , 1.15-1.08(dd, 3H) , 0.73(8, 3H) .
Exemplo 236 Rx= CH2C=CFPh ; R3= COCH2SH l-{3-((IR)-1-hidroxietil)(3S,4S)-4-[4-metoxi-3- {3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidinil}-2-sul- faniletanona-1.
Preparado a partir do Exemplo 235 (13,2mg, 0,0274mmol) pelo processo de hidrólise por LiOH do Intermediário 5 para fornecer um óleo claro e incolor (10,5mg, 87%). 1H RMN (CD3OH, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.41-7.20(m, 5H), 6.91-6.75(m, 3H), 4.01-3.29(c, 12H), 3.21(s, 1H), 1.88(s, 1H) , 1.38-1.21(m, 1H) , 1.07-1.03(m, 3H), 0.73-0.72(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 440,4 (m+1) Intermediário 93 Éster tert-butílico do {2-[(3S,4S)-3-((R)-1- hidroxietil)-4-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolodi- nil-1]-2-oxoetil) carbâmico.
Em um frasco contendo uma solução do Iontermediário 70 (67,2mg, 0,27mmol) em dioxano (2,0ml) foi adicionado uma solução aquosa 1,0M de K2C03 (l,0ml, l,0mmol). Uma solução de éster N-Boc-glicina p-nitrofenila (236mg, 0,79mmol) em dioxano (lOOml) foi adicionada via seringa na mistura reacional. A mistura final foi agitada na temperatura ambiente por 30 minutos. A reação foi diluída com EtOAc (lOOml) e então lavada com uma solução aquosa NaHC03 (3 x 50ml) e com salmoura (50ml) , seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada a vácuo para produzir um pó amarelo (43mg, 84% rendimento). 1H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.88-6.77(m, 2H, aromático), 6.75-6.65(m, 1H, aromático), 5.56 (br, s, 1H, NH) , 4.07-3.83(m, 3H) , 3.89(s, 3H, OMe) , 3.82-3.68(m, 2H),3.67-3.52 (m, 2H) , 3.46(d, 1H, J=ll,5Hz), 3.19(d, 1H, J=ll,5Hz), 1.46(s, 9H), 1.16-1.05(m, 3H), 0.74(d, 3H). LMRS (Eletropospray, positivo): Da/e 335,151 (m+1) Exemplo 237 2-amino-l-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4-{4- metoxi-3-[3-(4-trifluorometilfenil)-proinil-2-oxi]fenil}-3- metilpirrolidinil-1) etanona.
Preparado a partir do Intermediário 93 pelo método do Cs2C03 do Exemplo 176 a partir do processo do Exemplo 109 para fornecer um produto como um óleo âmbar(12,7mg, 4,1% rendimento). 1H RMN (CDCI3, 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.55-7.4(m, 4H, aromático), 7.93(s, 1H, aromático), 6.85- 6.7(m, 2H, aromático), 4.96(s, 2H0, 4.38(br,s, 2H) , 4.0- 3.4(m, 7H), 3.83(d, 3H, OMe), 3.2(dd, 1H), l.G-0.88(m, 3H), 0.65(m, 3H). LMRS (Eletropospray, positivo): Da/e 491,20 (m+1) Exemplo 238 Rx= t-Bu ; R3= C0C02CH3 Metil 2-{3 -((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4-[3- (tercbutoxi)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil}-2-oxoace- tato.
Preparado a partir do Intermediário 73 via processo de acoplamento da base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de metil oxalila. 1H RMN (CDC13, 4 00MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.90-6.81 (m, 3H), 4.01-3.44(c, 12H), 1.32 (s, 9H), 1.16- 1.12(dd, 3H), 0.77-0.74(d, 3H). LMRS (Eletropospray, positivo): Da/e 394,0 (m+1) Exemplo 239 Rx= H ; R3= C0C02CH3 Metil 2- [3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [3- hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirrolidinil]-2-oxoacetato.
Preparado a partir do Exemplo 238 via método de desproteção de TFA do Exemplo 143. 1H RMN (CDC13, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.85-6.70 (m, 3H), 5.60-5.56(br m, 1H), 4.00-3.46 (c, 12H), 1.17-1.13(dd, 3H), 0.79-0.76 (d e d, 3H) . LMRS (Eletropospray, positivo): Da/e 338,1 (m+1) Exemplo 240 R1^ CH2C=CPh ; R3= C0C02CH3 Metil 2-{3-((IR)-1-hidroxietil) (3S,4S)-4- [4- metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidinil} -2-oxoacetato.
Preparado a partir do Exemplo 239 via método Mitsunobu do Exemplo 144 usando 3-fenil-2-propinol-l. 1H RMN (CDCI3, 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.41-7.26(m, 5H),7.07(s, 1H) , 6.86-6.85 (m, 2H) , 5.05- 4.95(m, 2H) , 4.06-3043(c, 12H), 0.98-0.91(dd, 3H) , 0.74- 0.71(d, 3H). LMRS (Eletropospray, positivo): Da/e 452,7 (m+1) Intermediário 94 l-benzil-4- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- metil-3-vinilpirrolidina. ; Um frasco de fundo redondo equipado com agitador de barra e septo de borracha, foi caregado com éter dietílico seco (lOml) e brometo de metiltrifenilfosfônio (1,88g, 5,27mmol) sob atmosfera de nitrogênio. Foi adicionado então butil-lítio (2,32ml, 5,80mrnol, 2,5M em ) hexanos) através de uma seringa, resultando numa suspensão alaranjada que foi agitada na temperatura ambiente por 3 horas. Foi então adicionada uma solução do Intermediário 65 (2, Og, 5,26mmol em lOml de éter) em Et20 desfazendo a cor imediatamente. Após agitação na temperatura ambiente por 2 j horas, a mistura reacional foi extinta com uma solução saturada de Nh4Cl, extraída com EtOAc (2 x 50ml) , seca (Na2S04) e concentrada. Uma coluna de cromatografia (Sistema Biotage, cartucho de 40M, 25% EtOAc/hexano) conseguiu 850mg (43%) de um óleo alaranjado). ) 1H RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 7.42-7.23 (m, 5H) , 6.80- 6.68(m, 3H)m, 6.05(dd, 1H) , 4.95(dd, 1H) , 4.87(dd, 1H) , 3.86-3.79 (m, 6H) , 3.71(dd, 2H) , 3.22(t, 1H) , 3.04-2.96 (m, 2H) , 2.81(d, 1H), 2.52(d, 1H) , 1.37-1.26 (m, 1H) , 0.77(s, 3H) , 0.66-0.60(m, 2H), 0.37-0.32 (m, 2H) .
Intermediário 95 Ester metílico do ácido 4-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-metil-3-vinilpirrolidina-l-carboxílico.
Uma solução do Intermediário 94 (480mg, l,27mmol)em lOml de acetonitrila foi tratada com cloroformiato de metila (491μ1, 6,38mmol) e a mistura foi refluxada por 6 horas. A mistura reacional foi então concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia (Sistema Biotage, cartucho 40s, 10% EtOAc/hexano a 20%EtOAc/hexano) para produzir 237mg de um óleo amarelo (54%). XH RMN (CDC13í 400MHz) δ: 6.81 (d, 1H) , 6.72- 6.67(m, 2H), 5.87(dd, 1H), 5.09(d, 1H), 4.95(dd, 1H), 3.85 (s, 3H) , 3.84-3.68 (m, 7H) , 3.52-3.32 (m, 2H), 3.14(t, 1H), 1.35-1.25 (m, 1H), 0.35 (s, 3H), 0.66-0.60(m, 2H), 0.37- 0.32(m, 2H).
Exemplo 241 Rx= CH2C3H5; R3= C02CH3; R4= H; Rs= CH20H; R6= H Éster metílico do ácido 4-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-(1,2-diidroxietil)-3-metilpirrolidina-l- carboxílico.
Um frasco reacional equipado com um agitador de pá foi carregado com o Intermediário 95 (4βμ1, 0,133mmol), acetona (250μ1), água (500μ1) e N-metil morfolina N-óxido (17,lmg, 146mmol). A essa mistura foi adicionado tetróxido de ósmio em t-butanol(50μ1, 0,004mmol, 2,5 %p/p solução). A mistura resultante foi agitada na temperatura ambiente por 24 horas. A mistrura reacional foi então diluída com uma solução de tiossulfato de sódio aquoso a 10% (5ml) e filtrada através de papel de filtro GF/F. 0 filtrado foi extraído com EtOAc (2 x lOml) , seco (Na2S04) e concentrado. A purificação através de coluna Biotage (cartucho 12s, 1:1:0,1 de EtOAc/hexano/MeOH) produziu 18mg do Exemplo 241 (36%). RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.81(d, 1H) , 3.86(s, 3H) , 3.85-3.36 (c, 15H), 3.23(dd, 1H) , 1.35-1.27 (m, 1H) , 0.75(s, 3H) , 0.66-0.59 (m, 2H), 0.38-0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): D a/e 380,2 (m+1).
Exemplo 242 Rx= CHAHs; R3= (S)-COCH (CH20C (CH3) (CH3) O) [4- (S)- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3-(S)- (1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-(2,2-dimetil- [1,3]dioxolanil-4-(S)) metanona 0 Intermediário 67 foi acilado pelo processod a base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de 2,2- dimetil-[1,3]dioxolano-4-(S)-carbonila para chegar ao Exemplo 242 (22%) . XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.83 .-6.87 (m, 4H) , 4,71- 4.65(w, 1H) , 4.37-4.32(m, 1H), 4.23-4.15(m, 1H) , 3.95- 3.44(m, 10H), 1.72-1.15(m, 10H), 0.76(s, 3H) , 0.67-0.62(m, 2H), 0.38-0.33(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 434,4 (m+1).
Exemplo 243 R1= CH2C3H5; r3= (S)-COCH(OH)CH2OH 1-[4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2-(S)-di- hidroxipropanona-1. 0 Exemplo 242 (9mg, 20pmol) foi dissolvido em uma solução de ácido acético/água (3:1, 0,9ml). A mistura reacional foi agitada na temperatura ambiente por 72 horas. A solução foi neutralisada colocando-a dentro de uma solução de NaHC03. A solução foi concentrada até secura, então os sólidos foram extraídos cinco vezes com CH2CI2. As fases orgânica combinadas foram secas sobre Na2S04 e concentradas a vácuo (5,lmg, 62%). *Η RMN (CDC13, 400MHz) 5: 6.84-6.76(m, 3H), 4.40- 4.37(m, 1H) , 3.89-3.32 (m; 11H) , 2.33-1.95(m, 1H) # 1.34- 1.12(m, 7H), 0.89-0.81(m, 1H), 0.78-0.73(m, 3H) , 0.66- 0.61(m, 2H), 0.37-0.32(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 394,0 (m+1).
Exemplo 244 Rx= CH2C3H5; r3= (S)-coch(oh)ch2oh 1- [4- (S)- (3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2-(S)-di- hidroxipropanona-1.
Preparado a partir do Intermediário 96 pelo processo descrito no Exemplo 75 e desprotegido como no Exemplo 243. XH RMN (CDCI3, 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.26-7.16(m, 4H, aromático), 6,83-6.82(br.s, 3H, aromático), 5.19-5.15(m, 1H) , 4.45-4.32 (m, 1H) , 4.10- 3.50 (m, 8H) , 3.80(d, 3H, OMe) , 3.45-3.12(m, 5H) , 1.27- 1.25(m, 1H), 1.20-1.15(m, 3H), 0.79-0.77(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 470,58 (m+1).
Exemplo 245 R1= 4-F-Ph-OCH2CH2CH2 ; R3= (R)-COCH (OH) CH2OH (S)-1- [ (3S,4S)-4-{3-(4-fluorofenoxi)propoxi]-4- metoxifenil}-3-((R)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]- 2,3-diidroxipropanona-l.
Preparado pelo processo mostrado no Exemplo 243. XH RMN (CDC13, 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.99-6.92(m, 2H, aromático), 6.87-6.79(m, 5H, aromático), 5.19-5.15 (tn, 1H) , 4.39(s, 1H) , 4.22-4.12(m, 4H) , 4.0 (d, 1H), 3.86(s, 3H, OMe), 3.4-3.3(dd, 1H), 2.32-2.24(m, 2H), 1.17-1.12(m, 3H), 0.7(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 492,25 (m+1).
Intermediário 96 1-((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1-[(3S,4S)- 3-((R)-1-hidroximetil)-4-(3-hidróxi-metoxifenil}-3-metil- pirrolidinil-1] metanona.
Um frasco de fundo redondo equipado com agitador de pá e septo de borracha foi carregado com 5- [4 - (1 - hidroxietil)-4-metílpirrolidinil-3)-2-metoxifenol (2,4g, 9,55mmol), CH2C12 seco (50ml)e DIEA(3,49ml, 20,lmmol) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi resfriada a 0°C e o cloreto de (S)-2,2-dimetil-[1,3]dioxolano-4-carbonila (3,14g, 19,lmmol) e, 15ml de CH2C12 foi adicionao gota a gota através de seringa. A mistura reacional foi deixada aquecer gradualmente até a temnperatura ambiente por um período de 16 horas. A mistura foi então diluída com 50ml de CH2C12, lavada com HC1 IN (2 x 50ml), NaHC03 saturado (1 x 50ml) e concentrada até 3,9g de uma espuma castanha. 0 material foi tomado em lOOml de CH30H e resfriado a 0°C.
Foram adicionados três equivalentes de LiOH IN aquoso (29ml, 29/0mmol), amistura foi agitada a 0°C por 2 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida em um banho térmico na temperatuda de 30°C para remover o CH30H. 0 material aquoso remanescente foi neutralizado com NH4CI até pH 7 e extraída com EtOAc (2 x lOOml) . Os extratos foram secos sobre Na2S04 e concentrados até formar 2,74g de uma espuma castanha (76%). :H RMN (CDC13; 400MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.90-6.70 (m, 3H) , 5.66(br, s, 1H) , 4.68(t, 1H), 4.34 (t, 1H), 4.23-4.09(m, 6H), 3.89(s, 3H), 3.94-3.42(m, 5H), 1.49- 1.37(m, 6H), 1.17(d, 3H), 0.76(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,3 (m-1).
Exemplo 246 Rx= F3C-Ph-C=CCH2; R3= CO-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4 1-((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1-((3S,4S)- 3-((R)-1-hidroxietil)-4-{4-metoxi-3-[3-(4-trifluorometil- fenil)propinil-2-oxi]fenil}-3-metilpirrolidinil-l)metanona.
Em um frasco contendo CS2CO3 (67mg, 0,206mmol, l,leg) sob um cobertor de nitrogênio foi adicionada uma solução do Intermediário 96 (71mg, 0,187mmol, l,0eq) em acetona anidra (lml). 0 Intermediário 92 (52,lmg, 0,187mmol, l,leq)foi adicionada à mistura via seringa. A mistura reacional foi então aquecida e agitada a 65°C por 4 horas. A mistura reacional foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com água (50ml). A solução aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 30ml) e os combinados orgânicas foram lavados com salmoura (50ml), e depois secos sobre Na2S04, filtrados e concenrados a vácuo para formar como produto uma espuma branca (104mg). 1H RMN (CDCI3, 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.5-7.35(m, 4H, aromático), 6.96(d, 1H, aromático), 6.85- 6.75(m, 2H, aromático), 4.92(d, 2H, CH2) , 4.65-4.50(m, 1H), 4.35-4.20(m, 1H) , 4.15-4.00(m, 1H) , 3.85-3.40(m, 5H) , 3.8(d, 3H, OMe), 3.35-3.30 (dd, 1H) , 1.45-1.25(2d, 6H, Me) , 1.0-0.9(m, 3H), 0.63(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 562,25 (m+1).
Exemplo 247 Rl= F3C-Ph-C=CCH2; R3= CO-CH (OH) CH2OH (R)-2,3-diidroxi-1-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil) -4-{4-metoxi-3-[3-(4-trifluorometilfenil)propiniloxi]fenil} -3-metilpirrolidinil-l)propanona-1. A um frasco reacional contendo o Exemplo 246 (104mg, 0,185mmol) foi adicionado ácido acético (3,0ml) e água (l,0ml). 0 frasco foi então selado, aquecido a 50°C e agitado por 2 horas. A mistura reacional foi concentrada a vácuo e purificada por HPLCem fase reversa em um acoluna C18 (Luna 10: C18, 250xl0mm). O gradiente de eluição de 50 - 100% de acetonitrila-água (0,05% TFA) forneceu um produto como um óleo âmbar (27,8mg, 28,5% rendimento).
Intermediário 94 l-benzil-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifeníl)-3- metil-3-vinilpírrolidina.
Um frasco de fundo redondo equipado com agitador de barra e septo de borracha, foi caregado com éter dietílico seco (lOml) e brometo de metiltrifenilfosfônio (1,8 8g, 5,27mmol) sob atmosfera de nitrogênio. Foi adicionado então butil-lítio (2,32ml, 5,80mmol, 2,5M em hexanos) através de uma seringa, resultando numa suspensão alaranjada que foi agitada na temperatura ambiente por 3 horas. Foi então adicionada uma solução do Intermediário 65 (2,0g, 5,26mmol em lOml de éter) em Et20 desfazendo a cor imediatamente. Após agitação na temperatura ambiente por 2 horas, a mistura reacional foi extinta com uma solução saturada de Nh4Cl, extraída com EtOAc (2 x 50ml) , seca (Na2S04) e concentrada. Uma coluna de cromatografia (Sistema Biotage, cartucho de 40M, 25% EtOAc/hexano) conseguiu 850mg (43%) de um óleo alaranjado). 1H RMN (CDCl3, 400MHz) : 7.42-7.23(m, 5H), 6.80- 6.68(m, 3H)m, 6.05 (dd, 1H) , 4.95(dd, 1H) , 4.87(dd, 1H) , 3.86-3.79(m, 6H) , 3.71(dd, 2H) , 3.22 (t, 1H) , 3.04-2.96 (m, 2H) , 2.81(d, 1H), 2.52(d, 1H) , 1.37-1.26 (m, 1H) , 0.77(s, 3H) , 0.66-0.60 (m, 2H), 0.37-0.32 (m, 2H) .
Intermediário 95 Ester metílico do ácido 4-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-metil-3-vinilpirrolidina-l-carbox£lico.
Uma solução do Intermediário 94 (480mg, l,27mmol)em lOml de acetonitrila foi tratada com cloroformiato de metila (491μ1, 6,38mmol) e a mistura foi refluxada por 6 horas. A mistura reacional foi então concentrada sob pressão reduzida e 0 resíduo foi purificado por " cromatografia (Sistema Biotage, cartucho 40s, 10% EtOAc/hexano a 20%Et0Ac/hexano) para produzir 237mg de um óleo amarelo (54%) . 2H RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 6.81(d, 1H), 6.72- 6.67(m, 2H), 5.87(dd, 1H), 5.09(d, 1H), 4.95{dd, 1H), 3.85 (s, 3H) , 3.84-3.68 (m, 7H) , 3.52-3.32 (m, 2H) , 3.14 (t, 1H), 1.35-1.25 (m, 1H), 0.35{s, 3H) , 0.66-0.60(m, 2H), 0.37- 0.32(m, 2H).
Exemplo 241 Rx= CH2C3H5; R3= C02CH3; R4= H; R5= CH2OH; R6= H
Ester metílico do ácido 4-(3-ciclopropilmetoxi-4- metoxifenil)-3-(1,2-diidroxietil)-3-metilpirrolidina-1- carboxílico.
Um frasco reacional equipado com um agitador de pá foi carregado com o Intermediário 95 (46μ1, 0,133mmol), acetona (250μ1), água (500μ1) e N-metil morfolina N-óxido (17,lmg, 146mmol). A essa mistura foi adicionado tetróxido de ósmio em t-butanol(50μ1, 0,004mmol, 2,5 %p/p solução). A mistura resultante foi agitada na temperatura ambiente por 24 horas. A mistrura reacional foi então diluída com uma solução de tiossulfato de sódio aquoso a 10% (5ml) e filtrada através de papel de filtro GF/F. 0 filtrado foi extraído com EtOAc (2 x 10ml), seco (Na2S04) e concentrado. A purificação através de coluna Biotage (cartucho 12s, 1:1:0,1 de EtOAc/hexano/MeOH) produziu 18mg do Exemplo 241 (36%) . XH RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 6.81(d, 1H) , 3.86 (s, 3H) , 3.85-3.36 (c, 15H), 3.23(dd, 1H) , 1.35-1.27(m, 1H) , 0.75(s, 3H), 0.66-0.59(m, 2H), 0.38-0.32(m, 2H). LRMS(Eletrospray, positivo): D a/e 380,2 (m+1).
Exemplo 242 R*= CH2C3H5; r3= (S)-COCH(CH2OC(CH3) (CH3)0) [4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3-(S)- (1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-(2,2-dimetil- [1,3]dioxolanil-4-(S)) metanona 0 Intermediário 67 foi acilado pelo processod a base de Hunig do Intermediário 74 usando cloreto de 2,2- dimetil-[1,3]dioxolano-4-(S)-carbonila para chegar ao Exemplo 242 (22%). 1H RMN (CDCI3, 400MHz) δ: 6.83.-6.87(m, 4H), 4,71- 4.65(w, 1H), 4.37-4.32(m, 1H), 4.23-4.15 (m, 1H) , 3.95- 3.44(m, 10H), 1.72-1.15(m, 10H), 0.76(s, 3H) , 0.67-0.62(m, 2H) , 0.38-0.33 (m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 434,4 (m+1).
Exemplo 243 R3= CH2C3H5; R3= (S)-C0CH(0H)CH20H 1- [4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolídinil-l]-2-(S)-di- hidroxipropanona-1. 0 Exemplo 242 (9mg, 20μmol) foi dissolvido em uma solução de ácido acético/água (3:1, 0,9ml). A mistura reacional foi agitada na temperatura ambiente por 72 horas. A solução foi neutralisada colocando-a dentro de uma solução de NaHC03. A solução foi concentrada até secura, então os sólidos foram extraídos cinco vezes com CH2C12. As fases orgânica combinadas foram secas sobre Na2S04 e concentradas a vácuo (5,lmg, 62%). XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 6.84-6.76 (m, 3H) , 4.40- 4.37(m, 1H) , 3.89-3.32(m, 11H), 2.33-1.95 (m, 1H) , 1.34- 1.12(m, 7H), 0.89-0.81(m, 1H), 0.78-0.73(m, 3H), 0.66- 0.61(m, 2H), 0.37-0.32(m, 2H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 394,0 (m+1).
Exemplo 244 Rx= CH2C3H5; R3= (S)-COCH(OH)CH2OH 1- [4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)-(1-(R)-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]-2-(S)-di- hidroxipropanona-1.
Preparado a partir do Intermediário 96 pelo processo descrito no Exemplo 75 e desprotegido como no Exemplo 243. XH RMN (CDC13; 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 7.26-7.16(m, 4H, aromático), 6.83-6.82 (br.s, 3H, aromático), 5.19-5.15(m, 1H) , 4.45-4.32(m, 1H) , 4.10- 3.50(m, 8H) , 3.80(d, 3H, OMe), 3.45-3.12(m, 5H) , 1.27- 1.25(m, 1H), 1.20-1.15(m, 3H), 0.79-0.77(m, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 470,58 (m+1).
Exemplo 245 R1= 4-F-Ph-OCH2CH2CH2 ; R3= (R)-COCH (OH) CH20H (S)-1-[(3S,4S)-4-(3-(4-fluorofenoxi)propoxi]-4- metoxifenil}-3-((R)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l]- 2,3-diidroxipropanona-1.
Preparado pelo processo mostrado no Exemplo 243. ^ RMN (CDCÍ3, 300MHz, mistura de rotômeros) δ: 6.99-6.92(m, 2H, aromático), 6.87-6.79(m, 5H, aromático), 5.19-5.15(m, 1H) , 4.39(s, 1H) , 4.22-4.12(m, 4H) , 4.0(d, 1H) , 3.86(s, 3H, OMe), 3.4-3.3(dd, 1H) , 2.32-2.24(m, 2H) , 1.17-1.12(m, 3H), 0.7(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 492,25 (m+1).
Intermediário 96 1-((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1- [ (3S,4S)- 3-((R)-1-hidroximetil)-4-(3-hidróxi-metoxifenil}-3-metil- pirrolidinil-1] metanona.
Um frasco de fundo redondo equipado com agitador de pá e septo de borracha foi carregado com 5- [4- (1- hidroxíetil)-4-metilpirrolidinil-3)-2-metoxifenol (2,4g, 9,55mmol), CH2C12 seco (50ml)e DIEA(3,49ml, 20,lmmol) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi resfriada a 0°C e o cloreto de (S)-2,2-dimetil-[1,3]dioxolano-4-carbonila (3,14g, 19,lmmol) e, 15ml de CH2C12 foi adicionao gota a gota através de seringa. A mistura reacional foi deixada aquecer gradualmente até a temnperatura ambiente por um período de 16 horas. A mistura foi então diluída com 50ml de CH2C12, lavada com HCl IN (2 x 50ml) , NaHC03 saturado (1 x 50ml) e concentrada até 3,9g de uma espuma castanha. 0 material foi tomado em lOOml de CH3OH e resfriado a 0°C.
Foram adicionados três equivalentes de LiOH IN aquoso (29ml, 29,0mmol), amistura foi agitada a 0°C por 2 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida em um banho térmico na temperatuda de 30°C para remover o CH3OH. 0 material aquoso remanescente foi neutralizado com NH4C1 até pH 7 e extraída com EtOAc (2 x lOOml) . Os extratos foram secos sobre Na2S04 e concentrados até formar 2,74g de uma espuma castanha (76%). ΧΗ RMN (CDC13, 400MHz; mistura de rotômeros) δ: 6.90-6.70(m, 3H) , 5.66(br, s, 1H) , 4.68(t, 1H), 4.34(t, 1H), 4.23-4.09(m, 6H), 3.89(s, 3H), 3.94-3.42(m, 5H), 1.49- 1.37(m, 6H), 1.17(d, 3H), 0.76(s, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 378,3 (m-1).
Exemplo 246 Rx= F3C-Ph-C=CCH2; R3= CO-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4 1-((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1- ((3S,4S)- 3-((R)-1-hidroxietil)-4-{4-metoxi-3-[3-(4-trifluorometil- fenil)propinil-2-oxi]fenil}-3-metilpirrolidinil-l)metanona.
Em um frasco contendo Cs2C03 (67mg, 0,206mmol, l,leq) sob um cobertor de nitrogênio foi adicionada uma solução do Intermediário 96 (71mg, 0,187mmol, l,0eq) em acetona anidra (lml). 0 Intermediário 92 (52,lmg, 0,187mmol, l,leq), foi adicionada à mistura via seringa. A mistura reacional foi então aquecida e agitada a 65°C por 4 horas. A mistura reacional foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com água (50ml). A solução aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 30ml) e os combinados orgânicas foram lavados com salmoura (50ml), e depois secos sobre Na2S04, filtrados e concenrados a vácuo para formar como produto uma espuma branca (104mg). 1H RMN (CDC13, 300MHz, mistura de rotômeros) Ô: 7.5-7.35(m, 4H, aromático), 6.96(d, 1H, aromático), 6.85- 6.75(m, 2H, aromático), 4.92(d, 2H, CH2) , 4.65-4.50 (m, 1H), 4.35-4.20(m, 1H), 4.15-4.00(m, 1H) , 3.85-3.40(m, 5H) , 3.8 (d, 3H, OMe), 3.35-3.30(dd, 1H) , 1.45-1.25(2d, 6H, Me) , 1.0-0.9(m, 3H), 0.63(d, 3H). LRMS (Eletrospray, positivo): Da/e 562,25 (m+1).
Exemplo 247 Rx= F3C-Ph-C=CCH2; R3= CO-CH (OH) CH2OH (R)-2,3-diidroxi-l-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil) -4- (4-metoxi-3- [3-(4-trifluorometilfenil)propiniloxi]fenil} - 3-metilpirrolidinil-1)propanona-1. A um frasco reacional contendo o Exemplo 246 (104mg, 0,185mmol) foi adicionado ácido acético (3,0ml) e água (l,0ml). 0 frasco foi então selado, aquecido a 50°C e agitado por 2 horas. A mistura reacional foi concentrada a vácuo e purificada por HPLCem fase reversa em um acoluna C18 (Luna 10: C18, 250xl0mm). 0 gradiente de eluição de 50 - 100% de acetonitrila-água (0,05% TFA) forneceu um produto como um óleo âmbar (27,8mg, 28,5% rendimento).
Exemplo 248 Rx= 3-tienil-CH2CH2 ; R3= COCH2OCH2Ph (R)-2,3-diidroxi-l-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil) -4-(4-metoxi-3-[3-(4-trifluorometilfenil)propinil-2-oxi] fenil}-3-metilpirrolidinil-l)propanona-l.
Preparado por alquilação do Exemplo 143 pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 usando brometo de 2 - (3 - tienil)etila. XH RMN data δ: 7.27-7.38 (m, 6H) , 7.05-7.07 (m, 1H), 7.12-7.13(m, 1H), 6.74-6.84(m, 3H), 6.05(s, 2H) , 4.15- 4.22(m, 4H), 3.44-3.93 (m, 6,5H), 3.86(s, 3H) , 3.14-3.24(m, 2,5H), 1.13(dd, 3H), 0.72(s, 3H) .
Exemplo 249 Rx= Ph(ciclo-C3H4)CH2 ; R3= COCH2OH 2-hidroxi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4-[4- metoxi-3-((R)-2-fenilciclopropilmetoxi)fenil]-metilpirroli- dinil-l}etanona.
Preparado por alquilação do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando brometo de 2- fenil-ciclopropanol e remoção do grupo benzila pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. '‘'Η RMN data δ: 7.17-7.30(m, 5H) , 6.72-6.85(m, 3H) , 4.00-4.14(m, 2H) , 3.49-3.98 (m, 8,5H), 3.86(s, 3H) , 3.05(d, 0,5H), 2.86-2.93 (m, 1H) , 2.51-2.60(m, 1H) , 2.27- 2.34(m, 1H) , 1.02-1.05(dd, 3H), 0.74(sd, 3H).
Exemplo 250 Rx= C5H9CH2CH2CH2 ; R3= COCH2OH 1- [ (3S,4S)-4- [3-(3-ciclopentilpropoxi)-4-metoxi- fenil]-3-((R)-1-hidroxietil)-3-metilpirrolidinil-l}-2-hi- droxietanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo Mitsunobu do Exemplo 144 usando 3-ciclopentílpropanil-l e remoção do grupo benzíla pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. ^ RMN data δ: 6.75-6.83 (m, 3H) , 4.12-4.15(m, 2h) , 3.96-4.01(m, 2,5H), 3.86(s, 3H) , 3.76-3.86 (m, 1H) , 3.59-3.70(m, 4H) , 3.06(d, 0,5H), 1.75-1.88(m, 5H) , 1.44- 1.61(m, 6H), 1.16 (t, 5H), 0.77(sd, 3H) .
Exemplo 251 Κλ= PhCH2CH2CH2 ; R3= COCH2OH 2- hidroxi-{l-[(3S,4S) -3-((R)-1-hidroxietil)-4- [4- metoxi - 3 - (3 - fenilpropoxi) fenil] - 3 - metil- pirrolidinil-l} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 usando cloreto de 3-fenilpropila, e remoção do grupo benzila pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. 1H RMN data Ô: 7.16-7.31(m, 5H) , 6.74-6.85(m, 3H), 4.13-4.15(m, 2H), 3.94-4.04(m, 2H), 3.86(s, 3H) , 3.76- 3.83 (τη, 1H) , 3.47-3.70(m, 4H) , 3.04-3.07(m, 3H) , 2.80- 2.85 (t, 2H), 2.10-2.20(quint, 2H), 1.14(t, 3H), 0.74(s, 3H) .
Exemplo 252 R1^ l-hidroxiindanil-2; R3= COCH2OH 2-hidroxi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4- [3- (l-hidroxiindaniloxi-2)-4-metoxifenil]-3-metilpirrolidinil- 1} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 usando óxido de indeno e remoção do grupo benzila pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. ΧΗ RMN data δ: 7.48-7.51(m, 1H) , 7.24-7.32(m, 3H), 6.85-6.96 (m, 3H), 5.11-5.14(m, 1H), 4.84-4.89(m, 1H), 3.98-4.15(m, 3H), 3.84-3.86 (m, 1H) , 3.83(s, 3H) , 3.50- 3.78(m, 4,5H), 3.16-3.32(m, 2H), 3.06(d, 0,5H), 1.15- 1.20(m, 3H), 0.77 (s, 3H) .
Exemplo 253 Rx= 4-CH3OPhCH2CH2; R3= COCH2OH 2-hidroxi-l-((3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4-{4- metoxi-3-[2-(4-metoxifenil) etoxi]fenil}-3-metilpirrolidi- nil-l} etanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 usando 1-(2-cloroetil)-4- metoxibenzeno e remoção do grupo benzila pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN data δ: 7.20-7.23(d, 2H) , 6.74-6.88(m, 5H), 4.10-4.18(m, 4H), 3.72-3.91(m, 2H), 3.86(s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.48-3.64 (m, 4H) , 3.02-3.11(m, 2H), 1.12- 1.17(m, 3H), 0.74 (s, 3H).
Exemplo 254 Rl= CH3(ciclo-C3H4)CH2 ; R3= COCH2OH 2-hidroxi-1-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4- [4- metoxí-3-((R)-2-metílciclopropilmetoxi)fenil]-3- metilpirrolidinil-ljetanona.
Preparado a partir do Exemplo 143 pelo processo do K2C03 do Exemplo 7 usando 1-(2-cloroetil)-4- metoxibenzeno e remoção do grupo benzila pelo processo de debenzilação do Intermediário 31. XH RMN data δ: 6.77-6.84(m, 3H) , 4.15-4.18(m, 2H) , 3.78-3.99(m, 4H) , 3.86(s, 3H) , 3.49-3.71(m, 3,5H), 3.08(d, 0,5H), 1.14-1.19(m, 3H), 1.07(sd, 3H), 0.92-1.03(m, 1H), 0.76-0.77(m, 4H), 0.50-0.52(m, 1H), 0.37-0.41(m, 1H).
Exemplo 255 1- (R) - [1-(2-benziloxietil)-4-(S)-(3-ciclopenti- loxi-4-metoxifenil)-3-(S)-metilpirrolidinil-3]-etanol. 0 Intermediário 68 (86,4mg, 0,27mmol) foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (lml) e a solução foi tratada com benziloxiacetaldeído (38μ1, 0,27mmol), seguido de triacetoxiborohidreto de sódio (81mg, 0,38mmol). A reção foi agitada por 18 horas na temperatura ambiente.
Triacetoxiboroidreto de sódio adicional (40mg, 0,19mmol) foi adicionado e agitado continuamente por 8 horas. A mistura reacional foi diluída com NaOH (0,5ml) 1,0M e agitada vigorosamente por 15 minutos. As camadas foram separadas, a fase aquosa foi lavada com CH2C12 e as camadas orgânicas foram combinadas. Após lavagem com MaHC03 6%, as fases orgânicas foram secas com Na2S04 e então concentradas a vácuo. 0 material bruto (129mg) foi cromatografado sobre sílica gel com CHCl3/etanol 95%/NH40H conc. (170:15:1), fornecendo o Exemplo 255 (27md, 22%) XH RMN (CDC13, 400MHz) δ: 7.36-7.25(m, 5H) , 6.81- 6.73(m, 3H) , 4.79-4.73(m, 1H) , 4.54(s, 1H) , 3.82(s, 3H) , 3.71-3.54(m, 4H), 3.40-3.35(m, 1H), 3.24-3.21(m, 1H), 2.80- 2.67(m, 2H) , 2.63-2.56 (m, 1H) , 2.16-2.09(m, 1H), 1.95- 1.88(m, 8H) , 1.65-1.57(m, 2H) , 1.22-1.10(m, 3H) , 0.49(m, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 454,5 (m+1) Exemplo 256 1-(R)-[4-(S)-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-1- (2-hidroxietil)-3-(S)-metilpirrolidinil-3]-etanol. O Exemplo 255 (25mg, 55mmol) foi sujeitado ao processo de debenzilação do Intermediário 31 para chegar ao Exemplo 256 (7,4mg, 28%) como 0 sal do TFA após a purificação por HPLC. RMN (CDC13, 400ΜΗζ) δ: 6.84-6.65(m, 3H) , 5.40- 4.90(bdr, 2H) , 4.74(bdr s, 1H) , 4.26-3.21M,11H), 1.97- 1.73(m, 6H) , 1.66-1.56(m, 3H) , 1.33-0.77 (m, 4H) , 0.69(s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 364,4 (m+1) Exemplo 257 2-benziloxi-l-[4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-meto- xifenil)-3-(S)-hidroximetil-3-metilpirrolidinil-l]-etanona. [4-(S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3- (S)- metilpirrolidinil-3] metanol (lOOmg, 0,34mmol) foi dissolvido em CH2C12 (l,7ml) e a solução foi resfriada a 0°C. Adicionou-se DIEA (144μ1, 0,82mmol)seguido de cloreto de benziloxiacetila (144μ1, 0,72mmol). A reação foi deixada aquecer vagarosamente até a temperatura ambiente, sob agitação, por 18 horas. Adicionou-se água (0,25ml) e a reação foi agitada por 1,5 horas. CH2C12 foi adicionado e a mistura foi lavada uma vez com água, duas vezes com HC1 iN, uma vez com água, duas vezes com NaHC03 a 6%, e então seca sobre Na2S04 e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em THF (lml) e resfriado até 0°C. Uma solução de LiOH em água (1,36M, lml, l,36mmol) foi adicionada e a hidrólíse foi deixada processando por 4 horas a 0°C. a mistura reacional foi extinta com NH4C1 saturado e o THF foi removido por concentração a vácuo. 0 resíduo foi ressuspenso em CH2C12, lavado duas vezes com NaHC03, seco sobre Na2S04 e concentrado a vácuo. 1H RMN (CDCl3, 400MHz) δ: 7.40-7.28(m, 5H) , 6.83- 6.79(m, 1H), 6.73-6.66 (m, 2H) , 4.66(s, 2H) , 4.16-4.13(m, 2H), 3.86 (s, 3H) , 3.83-3.78(m; 3H) , 3.63-3.26(brd m, 4H) , 3.06-3.00(m, 1H) , 2.50-2.45(brd m, 1H) , 1.34-1.12(m, 1H) , 1.03-0.99(m, 2H), 0.73(s, 3H), 0.66-0.61(m, 2H), 0.36- 0.32(m, 2H). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 440,3 (m+1) Intermediário 97 [4- (S)-(3-ciclopropilmetoxi-4-metoxifenil)-3-(S)- metilpirrolidinil-3] metanol 0 Intermediário 65 (0,99g, 2,6mmol) foi dissolvido em etanol (95%, lOml) e a solução foi tratada com catalisador de Pearlman (20% de Pd(0H)2 sobre carbono, 250mg) . A mistura foi hidrogenada a 1 atmosfera de H2 por 16 horas. Foi adicionado catalisador adicional (250mg) e a reação foi continuada por mais 24 horas. O catalisador foi removido por filtração e a reação foi concentrada a vácuo 90,68g, 89%). XH RMN (CDC13, 400ΜΗζ) δ: 6.84-6.73 (m, 3Η) , 3.37- 3.83(m, 4Η) , 3.59-3.47(m, 3Η) , 3.30-3.20(m, 3Η) , 2.85)d, J=10,6 1H) , 2.35-2.12(brd m, 1H) , 1.35-1.27 (m, 1H) , 0.64- 0.60(m, 4H), 0.37-0.31(m, 2H), 0.36-0.32(m, 2H). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 377,3 (m+1) Exemplo 258 1-(2-benziloxiacetil)-40(S)-(3-ciclopropilmetoxi- 4-metoxifenil)-3-(S)-metilpirrolidina-3-carbalde£do.
Foi adicionado cloreto de oxalila (2,0M em CH2C12, 0,175ml, 0,3 5mmol) a CH2C12 (0,52ml). A solução resultante foi resfriada a -60°C. Uma solução de DMSO (47ml, 0,66mml) dissolvido em CH2C12 (0,18ml) foi então adicionada gota a gota. A solução foi agitada por 5 minutos e 0 Exemplo 257 (dissolvido em l,0ml de CH2CL2) foi adicionado à mistura de oxidação de Swern. Depois que a reação foi agitada por 30 minutos a -60°C, adicionou-se Et3N (0,25ml) e a mistura reacional foi aquecida até a temperatura ambiente. Após 30 minutos foi adicionada água e a solução foi agitada vigorosamente por 15 minutos. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi lavada uma vez com CH2C12. As fases organicas combinadas foram lavadas com NaCl saturado, secas sobre Na2S04 e concentradas a vácuo. O material bruto foi cromatografado sobre Si02 usando EtOAc/hexanos (2:1), (76mg, 50%). 1H RMN (CDClj, 400MHz) δ: 9.62-9.57(m, 1H), 7.41- 7.30(m, 5H), 6.84-6.78(m, 1H), 6.68-6.56(m, 2H), 4.68- 5 4.63 (m, 2H), 4.20-4.10(m, 2H) , 4.05-3.32(m, 5H) , 3.87(s, 3H) , 1.57-1.55 (τη, 2H) , 1.33-1.24 (m, 1H) , 0.92-0.88 (m, 3H) , 0.67-0.60(m, 2H), 0.37-0.31(m, 2H).
Exemplo 259 1-((R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-l-[(3S,4S)-3-((R)-l- ) hidroxietil)-4-(3-hídroxi-4-metoxifenil)-3-metilpirroli- dinil-1] metanona. À uma solução agitada do Intermediário 70 (73,5mg, 0,293mmol, l,0eq) em CH2C12 (3ml) na temperatura j ambiente e sob um cobertor de nitrogênio foi adicionado Et3N (65,2mg, 645mmol), seguido por cloreto de 2,2-dimetil- 1,3-dioxolano-(4R)-carbonila (53,2mg, 0,322mmol). A reação foi agitada na temperatura ambiente por uma noite. A mistura reacional foi então colocada dentro de 50ml de ) EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2S04 e concentrada a vácuo para fornecer uma espuma (94mg, 85% rendimento). O produto bruto foi hidrolisado por LiOH via Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 259. RMN (CDC13, 300MHz) δ: 6.97-6.58 (m, 3H, 3 aromático), 4.68(t, 1H, J=6,4Hz), 4.44-4.34(m, 1H) , 4.24- 3.95(m, 1H) , 3.94-3.50(m, 5H) , 3.87(d, 3H, OMe), 3.42(d, 1H, J=12,4Hz), 3.35(d, 1H, J-12,4Hz), 1.4(m, 6H) , 1.15(m, 3H0, 0.75(m, 3H) .
Exemplo 260 1-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolanil-4)-l-{(3S,4S)- 3-((R)-1-hidroxietil)-4-[4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2- oxi)fenil]-3-metilpirrolidínil-l} metanona.
Preparado a partir do Exemplo 259 (126mg, 0,332mmol, l,0eq) e do Intermediário 90 (69,8mg, 0,332mmol, l,0eq) pelo método do Exemplo 176 para fornecer o produto na forma de uma espuma branca (160mg). 1H RMN (CDC13, 300MHz, mistura de rotâmeros) δ: 7.42-7.25(m, 5H, aromático), 7.08(d, 1H, aromático), 6.86 (d, 2H, aromático), 5.0 (d, 2H, (3¾) , 4.72-4.60 (m, 1H) , 4.45-4.32(m, 1H), 4.22-4.10(m, 1H), 3.95-3.70(m, 3H)_, 3.89 (s, 3H, OMe), 3.70-3.45 (m, 2H), 3.44-3.29(m, 1H), 1.5- 1.38(2d, 6H, Me), 1.02-0.75-0.65(m, 3H), 0.63(d, 3H).
Exemplo 261 (R)-2,3-diidroxi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxi- etil) -4- [4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metil- pirrolidinil-1} propanona. A um frasco reacional contendo o Exemplo 260 (160mg, 0,323mmol) foi adicionado ácido acético (3,0ml) e água (l,0ml). 0 frasco foi selado, aquecido a 50°C e agitado por 2 horas. A reação foi concentrada a vácuo e purificada por HPLC em fase reversa em uma coluna C18 (Luna 10 , C18, 250xl00mm) . 0 gradiente de eluição de actonitrila-água 50-100% (0,05% TFA) forneceu o Exemplo 261 como um sólido branco espumoso (52,2mg, 35,6% rendimento). 1H RMN (CDC13, 3 00MHz, mistura de rotâmeros) δ: 7.5-7.21(m, 5H, aromático), 7.05(m, 1H, aromático), 6.9- 6.75(m, 2H, aromático), 5.0(d, 2H) , 4.31(s, 1H) , 4.01- 3.2(m, 9H), 3.88(s, 3H, OMe), 1.01-0.9(m, 3H), 0.7(s, 3H). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 454,20 (m+1) Exemplo 262 1-((S)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1- [ (3S,4S)- 3-((R)-l-hidroxietil)-4-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metil- pirrolidinil-1] metanona. À uma solução agitada do Intermediário 70 (73,5mg, 0,293mmol, 1,Oeq) em CH2C12 (3ml) na temperatura ambiente, sob um cobertor de nitrogênio, foi adicionado Et3N (65,2mg, 0,645mmol), seguido de cloreto de 2,2- dimetil-1,3-dioxolano-(4S)-carbonila (53,2mg, 0,322mmol). A
reação foi agitada na temperatura ambiente por uma noite. A mistura reacional foi então colocada dentro de 50ml de EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2S04 e concentrada a vácuo para fornecer um produto espumoso (94mg, 85% rendimento). O produto bruto foi hidrolisado por LiOH via Intermediário 5 para fornecer o Exemplo 262. ΧΗ RMN (CDC13, 300MHz) δ: 6.93-6.65(m, 3H, aromático), 5.68(s, 1H) , 4.67(m, 1H) , 4.34(m, 1H) , 4.21(m, 1H), 3.94-3.40(m, 5H), 3.89 (s, 3H, OMe), 1.4(m, 6H), 1.16(m, 3H), 0.76(m, 3H).
Exemplo 263 1-((S)-2,2-dimetil-l,3-dioxolanil-4)-1-{ (3S,4S)- 3-((R)-1-hidroxietil)-4-[4-metoxifenil-3-(3-fenilpropinil- 2-oxi)fenil}-3metilpirrolidinil-l} metanona.
Preparado a partir do Exemplo 262 (126mg, 0,332mmol, l,0eq) e do Intermediário 90 (69,8mg, 0,332mmol, l,0eq) pelo método do Exemplo 176 para fornecer o produto na forma de uma espuma branca (160mg). 1H RMN (CDC13, 300MHz, mistura de rotâmeros) δ: 7.52-7.15(m, 5H, aromático), 7.08(d, 1H, aromático), 6.86{d, 2H, aromático), 5.98(d, 2H, CH2) , 4.64(m, 1H) , 4.35-4.32(m, 1H), 4.22-4.10(m, 1H) , 3.97-3.36{m, 5H) , 3.89 (s, 3H, OMe), 1.5-1.38(2d, 6H, Me) , 1.02-0.75(m, 3H) , 0.74 (s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 494,55 (m+1) Exemplo 264 (S)-2,3-diidroxi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxi- etil)-4-[4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metil- pirrolidinil-l} propanona. À um frasco reacional contendo o Exemplo 260 (160mg, 0,323mmol) foi adicionado ácido acético (3,0ml) e água (1,Oml). O frasco foi selado, aquecido a 50°C e agitado por 2 horas. A reação foi concentrada a vácuo e purificada por HPLC em fase reversa em uma coluna C18 (Luna 10μ, C18, 250xl00mm) . O gradiente de eluição de actonitrila-água 50-100% (0,05% TFA) forneceu o Exemplo 261 como um sólido branco espumoso (52,2mg, 35,6% rendimento). RMN (CDCI3, 300MHz, mistura de rotâmeros) δ: 7.44-7.18(m, 5H, aromático), 7.08(m, 1H, aromático), 6.86(s, 2H, aromático), 4.6(s, 2H, CH2) , 4.4-4.3(m, 1H) , 4.01-4.62(m, 7H), 3.89 (s, 3H, OMe), 3.59-3.46(m,1H), 3.32- 3.29(m, 1H0, 2.4(m, 1H) , 0.95(m, 3H), 0.72(d, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 454,20 (ra+1) [a] d=14,5o (c= 1,00, EtOH).
Exemplo 265 R1= t-Bu ; R3= (S)-COCH(OAc)CH2Ph Preparado a partir do Intermediário 73 por acilaçao com ácido acético (S)-l-clorocarbonil-2- feniletila, de acordo com o procedimento de F. Babudri et al., "Tetrahedron", 8, 2431-2440 (1999). LRMS (eletrospray, positivo): Da/e 454,20 (m+1) Exemplo 266 R1= H ; R3= (S)-COCH(OAc)CH2Ph Preparado a partir do Exemplo 265 pelo método do TFA do Exemplo 143 para chegar ao Exemplo 266. LRMS (eletrospray, positivo): m/z 442 (m+1).
Exemplo 267 Éster do ácido (S)-l-benzil-2-{(3S,4S)-3-((R)-1- hidroxietil)-4-[4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3- metilpirrolidinil-l}-2-oxo-etil acético R1= PhC=CCH2 ; R3= (S)-COCH(OAc)CH2Ph 0 Exemplo 266 (88mg, 0,2mmol) e o Intermediário 90 (50mg, 0,24mmol) foram sujeitados ao processo do Cs2C03 do Exemplo 176, e o resíduo bruto (HOmg) foi usado sem qualquer purificação posterior.
Exemplo 268 (S)-2-hidroxi-l-{(3S,4S)-3-((R)-1-hidroxietil)-4- [4-metoxi-3-(3-fenilpropinil-2-oxi)fenil]-3-metilpirrolidi- nil-l)- 3 -fenilpropanona-1.
Ri= PhC=CCH2 ; R3= (S)-COCH(OH)CH2Ph 0 Exemplo 267 (llOmg bruto, 0,2mmol teórico) foi sujeitado ao processo de desproteção e purificação por HPLC (20 x 50 mm YMC CombiPrep coluna C18, 20ml/min, 10-95% acetonitrila/água em 7 minutos) para chegar ao Exemplo 268 (38mg, 75%) , 1H RMN (300MHz, CDCl3, mistura de rotâmeros) δ: 7.50-7.16(m, 10H), 7.10-6.52(m, 3H), 5.05-4.92(m, 2H), 4.52-4.36(m, 1H), 3.88 (s, 3H) , 3.87-2.72 (m, 9H) , 1.48/1.29 (2d, J=4,3/4,6 Hz, 1H), 0.93/0.88 (2d, J=6,4Hz, 3H), 0.66/0.51(2s, 3H) . LRMS (eletrospray, positivo): m/e 514 (m+H)+ Os compostos de fórmula estrutural (II) foram testados quanto a uma possível habilidade de inibição da PDE4. A habilidade de um composto em inibir o PDE4 é referenciado através do valor IC50 para o composto, isto é, a concentração de inibidor necessária para inibir 50% da atividade enzimática. O valor IC50 para os compostos de fórmula estrutural (II) foi determinado usando PDE4 humano recombinante.
Os valores in vitro IC50 da atividade inibitória da fosfodiesterase e os resultados calculados de Ki dos compostos colocados nos exemplos foram determinados pela medição da inibição da hidrólise do cAMP como uma função do composto de teste dentro de uma faixa de 0 até 1 mM. Os valores de Ki para os compostos testados no ensaio acima mencionado variou de cerca de 0,0003μΜ até cerca de 100μΜ.
Os compostos da presente invenção exibem tipicamente um valor de IC5o contra o PDE4 humano recombinante de cerca de 50μΜ, e preferivelmente menor que 25μΜ e mais preferivelmente menor que 15μΜ. Os compostos da presente invenção exibem tipicamente um valor de IC5o contra o PDE4 humano recombinante de cerca de ΙμΜ, e frequentemente menor que 0,05μΜ. Para se atingir a vantagem completa da presente invenção, um inibidor de PDE4 presente tem um IC50 variando de cerca de 700pM (picomolar) até cerca de 15 μΜ.
Os valores de IC50 para os compostos foram determinados a partir das curvas de concentração-resposta tipicamente usadas na faixa de concentração variando desde 0, lpM até cerca de 500μΜ. Os testes contra outras enzimas PDE usando metodologias padrão, tal como descrito em Loughney et al., "J.Biol.Chem.", 271, pp. 796-806(1996), também mostraram que os compostos da presente invenção são altamente seletivos para as enzimas PDE4 específicas do cAMP.
Em particular, um composto da presente invenção, isto é, a Amostra 66, tem um IC50 vs. PDE4 recombinante humano de 0,015μΜ, mas tem um IC50 vs. PDE1A de 80μΜ, vs. PDE1B de ΙΟΟμΜ, vs. PDE1C de 12μΜ, vs. PDE2 de 450μΜ, vs. PDE3A de 40μΜ, vs. PDE5 de 270μΜ e vs. PDE7 de 36μΜ. Isso ilustra a seletividade do presente composto com respeito a seletividade de inibição do PDE4.
Os compostos de fórmula estrutural (II) também foram testados quanto a habilidade de reduzir a secreção do TNFa nos linfócitos da circulação sanguínea periférica humana. A habilidade em reduzir a secreção de TNFa é relacionada com valores de EC50 (isto é, a concentração efetiva de um composto capaz de inibir 50% do total de TNFa). A inibição in situ da liberação de TNFa derivada da endotoxina tratada isolada dos linfócitos do sangue humano periférico, resultando nos valores de EC50 dos compostos mostrados nos exemplos, foi determinada como uma função da concentração do composto de teste dentro de uma faixa de variação de 0 a ΙΟΟμΜ. Os valores de EC50 dos compostos testados dos estes aqui mencionados variaram de cerca de 0,0002μΜ até cerca de 20μΜ.
Os compostos da presente invenção exibem tipicamente um valor de EC50 de menos que cerca de 50 μΜ, e preferencialmente, menos que cerca de 25 μΜ, e mais preferencialmente de menos que cerca de 15 μΜ. Os compostos da presente invenção exibem tipicamente um valor de EC50 PBL/TNFa de menos que cerca de 1 μΜ, e freqüentemente menos que cerca de 0,05μΜ. Para se atingir a completa vantagem da presente invenção, um inibidor de PDE4 presente tem um valor de ECS0 de cerca de lOOOpM (picomolar) até cerca de 20μΜ. A produção do PDEs recombinante humano e as determinações de IC50 e EC50 podem ser realizadas pelos métodos bem conhecidos na técnica. Métodos exemplificantes são descritos a seguir: EXPRESSÃO DO PDEs HUMANO
Expressão em células da Spodoptera fugiperda (Sf9) Infectadas por Baculovirus Plasmídeos de transferência do baculovirus foram construídos usando tanto o pBlueBacIII (Invitrogen) ou pFastBac (BRL-Gibco). A estrutura de todos os plasmídeos foi verificada por sequenciamento através das junções de vetor e pelo sequenciamento de todas as regiões geradas por PCR. 0 plasmídeo pBB-PDElA3/6 contem a leitura da estrutura aberta completa do PDE1A3 (Loughney et al., "J.
Biol.Chem.", 271, pp 796-806 (1996)) no pBlueBacIII. 0 plasmídeo Hcam3aBB contem a leitura aberta completa da estrutura do PDE1C3 (Loughney et al. (1996)) no pBlueBacIII. 0 plasmídeo pBB-PDE3A contem a leitura aberta completa do PDE3A (Meacci et al., "Proc. Natl. Acad. Sei.", USA, 89, pp. 3721-3725 (1992))em pBlueBacIII.
Estoques de vírus recombinantes foram produzidos usando tanto o sistema MaxBac (Invitrogen) como o sistema FastBac (Gibco-BRL) de acordo com os protocolos do fabricante. Em ambos os casos, a expressão do PDEs humano recombinante nos vírus resultantes o foi expelido para fora do promotor do poliedro viral. Quando se usa o sistema MaxBac®, o vírus foi purificado em placa duas vezes de forma a assegurar que nenhum tipo selvagem (occ+) do vírus contaminaria a preparação. Expressões de proteínas foram carreadas como se segue. Células Sf9 foram cultivadas a 27 °C em meio de cultura de insetos Grace (Gibco-RBL) suplementado com 10% de soro bovino fetal, 0,33% levedurolate TC, 0,33% de hidrolisado de albumina, 4,2mM
NaHC03, ^g/ml de gentamicina, 100 unidades/ml de penicilina e 100 μg/ml de estreptomicina. Células crescendo exponencialmente foram infectadas em uma multiplicidade de 2 a 3 partículas de vírus por célula e incubados por 48 horas. As células foram coletqadas por centrifugação, lavadas com meio Grace não suplementar e resfriadas rapidamente para armazenamento.
Expressão em Saccharomyces cerevisiae (Levedura) A produção de PDE1B, PDE2, PDE4A, PDE4B, PDE4C, PDE4D, PDE5 e PDE7 foi realizada similarmente ao descrito no Exemplo 7 da patente US 5.702.936, incorporada aqui como referência exceto em que a transformação do vetor da levedura empregado, que é derivado de um plasmídeo ADH2 básico simples descrito em Price et al., "Methods in Enzymology", 185, pp. 308-318 (1990), incorporaram-se também o promotor de levedura ADH2 e o terminador de sequências e o hospedeiro Saccharomyces cerevisiae que foi a cepa BJ2-54 deficiente em protease, depositada em 31 de agosto de 1998 no "American Type Culture Collection", Manassas, Virgínia, sob número de acesso ATCC 74465. As células hospedeiras transformadas foram cultivadas em meio 2X SC-leu, pH 6,2, com traços de metais e vitaminas. Após 24 horas, foi adicionado o meio YEP, contendo glicerol, até uma concentração final de 2X YET/3% glicerol.
Aproximadamente 24 horas depois. As células foram colhidas, lavadas e estocadas a -70°C.
PURIFICAÇÃO DE CALMODULIM
Calmodulin usado para ativação de enzimas de PEDI foi purificado a partir de testículo bovino essencialmente como descrito por Dedman et al., "Methods in Enzymology", 102, pp. 1-8 (1983) usando o procedimento Fenil-Sacarose® da Pharmacia.
IMOBILIZAÇÃO DE CALMODULIN EM AGAROSE
Calmodulim foi imobilizado em BioRad Affi-Gel® 15 segundo instruções do fabricante.
PREPARAÇÕES DA FOSFODIESTERASE HUMANA
Determinações da Atividade da Fosfodiesterase A atividade da fosfodiesterase das preparações foi determinada como se segue. Os ensaios de PDE utilizando a técnica de separação com carvão vegetal foram realizados essencialmente de acordo com o descrito em Loughney et al., (1996) . Nesse ensaio a atividade do PDE converte a [32P]cAMP ou [32P]cGMP na correspondente [32P]5'-AMP ou [32P]5'-GMP na proporção da quantidade de atividade do PDE presente. 0 [32P]5'-AMP ou [32P}5'-GMP foram então quantitativamente convertidos a fosfatos livres [32P] e adenosina e guanina não marcadas pela ação do veneno de cobra 5'-nucleotidase. Dessa forma a quantidade de fosfato [32P] liberado é proporcional à atividade da enzima. 0 ensaio foi realizado a 30°C em uma mistura reacional de ΙΟΟμΙ contendo (concentrações finais) 40mM Tris-HCl (pH 8,0), ΙμΜ ZnS04, 5mM MgCl2 e 0,lmg/m'de albumina de soro bovino (BSA). Alternativamente, em ensaios acessando a atividade específica do PDE-1, a incubação das misturas e incorporando adicionalmente o uso de 0,lmM de CaCl2 e 10pg/ml de calmodulin. A enzima PDE estava presente em quantidades que renderam <30%do total da hidrólise do substrato (condições lineares de ensaio). O ensaio foi iniciado pela adição do substrato (lmM [32P]cAMP ou cGMP), e a mistura foi incubada por 12 minutos. 75μg de veneno da Crotalus atrox foram então adicionados e a incubação foi continuada por 3 minutos (15 minutos no total). A reação foi parada pela adição de 200μ1 de carvão vegetal ativado (suspensão de 25mg/ml em NaH2P04, 0,1M pH 4). Após a centrifugação (750xg por 3 minutos) para sedimentar o carvão ativado, uma amostra do líquido sobrenadante foi tomada para determinação de radioatividade num contador de cintilação e a atividade de PDE foi calculada.
As análises dos inibidores foram realizadas similarmente ao método descrito em Loughney et al.,"J.
Biol. Chem.", 271, pp.796-806(1996), exceto em que ambos cGMP e cAMP foram usados e as concentrações do substrato foram mantidas abaixo de 32mM, que está bem abaixo dos Km dos PDEs testados.
Purificação de PDE1A3 a partir de células Sf9 Grânulos celulares (5g) foram misturados com lOml de tampão lises (50 mM MOPS pH 7,5, 2mM de ditiotreitol (DTT) , 2mM de HCl benzamidina, 5μΜ de ZnS04, 0,lmM de CaCl2, 20 μg/ml de inibidores calpain I e II, e 5μg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina) na temperatura ambiente. As células foram lisadas pela passagem através de um aparelho French® para pressão celular (SLM-Aminco®, Spectronics Instruments, Inc., Rochester NY). O lisado resultante foi centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman usando um rotor tipo TI80 a 45.000 rpm por 1 hora. 0 sobrenadante foi recolhido e filtrado através de filtro de 0,2 μπι. Esse filtrado foi colocado numa coluna 2,6 x 90 cm de SEPHACRYL® S-300 e equilibrado numa coluna de tampão A (Tampão de lisagem contendo 100 mM de NaCl e 2 mM de MgCl2) . O fluxo da coluna foi ajustado para 1 ml/min e foram coletadas frações de 7ml. As frações ativas foram acumuladas e suplementadas com 0,16mg de calmodulin. A enzima foi colocada por uma noite a uma taxa de 0,2ml/min numa coluna de imunoafinidade de ACC-agarose como descrito em Hansen et al., "Methods in Enzymology", 159, pp. 4534- 557 (1988) . A coluna foi lavada com 5 volumes da solução tampão da coluna B (solução tampão da coluna A sem NaCl) e seguida de 5 volumes da solução tampão da coluna C (solução tampão da coluna A contendo 250mM NaCl). A coluna foi elulda com a solução tampão de coluna D (50 mM MOPS, pH 7,5, lmM de EDTA, 1 mM de EGTA, lmM de DTT, lmM de HCl benzamidina, lOOmM de NaCl, 20pg/ml de inibidores calpain I e II, e 5 μ9/ιη1 de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina) e pela aplicação de um volume da coluna a 0,lml/min, parando o fluxo por 1 hora e então continuando a eluição na mesma taxa de fluxo. Foram coletadas frações de 0,5 ml. Traços que mostraram atividade foram acumuladas e primeiro dialisadas em um tampão de diálise contendo 25 mM
MOPS PH7,5, lOOmM de NaCl, ΙΟμΜ de ZnS04, lmM da CaCl2, lmM de DTT e 1 mM de HCl benzamidina. Uma diálise subsequente contra um tampão de diálise contendo 50% de glicerol foi realizada antes de rápido resfriamento da amostra com gelo seco e estocagem a -70°C. As preparações resultantes foram cerca de 10 a 15% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividades específicas de cerca de 5 a 20 μτηοΐ de cAMP hidrolisada por minuto por miligrama de proteína.
Purificação do PDE1B a partir da S. cerevisiae As células de levedura (50g) foram descongeladas por mistura com lOOml de pérola de vidro (0,5mM, lavagem ácida) e 200ml de tampão A na temperatura ambiente. 0 tampão A consiste de 50mM de MOPS pH 7,5, lmM de DTT, 2mM de HCl benzamidina, 0,01mM de ZNS04, 5mM MgCl2, 20pg/ml de inibidores calpain I e II, e 5pg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina. A mistura foi resfriada até 4°C, transferida para um batedor Bead-Beater®, e as células foram lisadas por mistura rápida de 6 ciclos de 30 segundos cada. O homogenizado foi centrifugado por 15 minutos em uma centrífuga Beckman J2-21M usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm e 4°C. 0 sobrenadante foi recuperado e centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman XL-80 usando um rotor a 36.000 rpm por 45 minutos a 4°C. o sobrenadante foi recuperado e o PDE1B foi precipitado por adição de sulfato de amônio sólido (0,33g/ml de sobrenadante) enquanto era agitado em um banho de gelo e mantido o pH entre 7,0 e 7,5. Essa mistura foi então centrifugada por 22 minutos em uma centrífuga Beckman usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm (12.000 x g) . O sobrenadante foi dissolvido em lOml de tampão B (50mM MOPS pH 7,5, lmM DTT, lmM HCl benzamidina, 0,0lmM ZnS04, 2mM MgCl2, 2mM CaCl2 e 5μg/ml de cada uma leupeptina, pepstatina e aprotinina). 0 pH e a condutividade foram corrigido para 7,5 e 15-20 miliSiemens (mS), respectivamente. Essa solução foi colocada numa coluna de 20ml de calmodulina-agarose que foi equilibrada com 10 volumes de coluna do tampão B a uma taxe de lml/min. O fluxo eluído foi reaplicado â coluna pelo menos 5 vezes. A coluna foi lavada com 5 volumes do tampão B, 5 volumes do tampão B contendo 250mM de NaCl, e 2 volumes de tampão B sem NaCl novamente. A eluição foi realizada pela aplicação de um volume de tampão C (50mM MOP pH7,5 lnM EDTA, lmM EGTA, lmM DTT, lmM de HCl benzamidina) a 0,33ml/min e então parada por 1 hora antes de continuar a eluição. Foram coletadas frações de cerca de 4 ml e testadas quanto a atividade do PDE. As frações ativas foram acumuladas e concentradas até um volume de 5ml, usando um sistema de ultrafiltração Amicon. O concentrado foi então colocado numa coluna S-300 Sephacryl® de 320ml (1,6 x 150cm) que foi equilibrada com pelo menos dois volumes do tampão D (25mM MOPS pH 7,5, lmM DTT, lmM HC1 benzamidina, 0,01mM ZnS04. 2mM CaCl2 e lOOmM NaCl) . A coluna foi desenvolvida a uma taxa de lml/min (11 cm/h), e frações de 5ml foram coletadas. Os picos de atividade foram acumulados e dialisados por uma noite contra um tampão D contendo 50% de glicerol. A enzima purificada foi congelada em gelo seco e estocada a -70°C. As preparações resultantes foram puras em cerca de >90% por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividades específicas de cerca de 10 a 30 μτηοΐ cGMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Purificação do PDE1C3 a partir de células Sf9 Grânulos celulares (5g) foram descongelados sobre gelo com 20ml de tampão lises (50 mM MOPS pH 7,4, 10μΜ de ZnS04, 0,lmM de CaCl2, lmM de ditiotreitol (DTT), 2mM de HCl benzamidina, 5μg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina). As células foram lisadas pela passagem através de um aparelho French® para pressão celular (SLM-Aminco®, Spectronics Instruments, Inc., Rochester NY) enquanto a temperatura era mantida abaixo de 10°C. O homogenado celular resultante foi centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman usando um rotor tipo TI45 a 36.000 rpm a 4°C por 45 minutos. O sobrenadante foi descartado e os grânulos resultantes foram ressuspendidos com 40ml do tampão de solubilização (Tampão de lisagem contendo 1M de NaCl, 0,1M
MgCl2, lmM CaCl2, 20μg/ml calmodulina e 1% de sulfobetaína SB12 (Z3-12)) e por uso de ultrassom usando um sintonizador VibraCell com uma microponta por 3 x 30 segundos. Essa etapa foi realizada usando uma mistura de gelo picado e sal para refrigeração. Seguindo-se ao ultrassom, a mistura foi então misturada vagarosamente por 30 minutos a 4°C para terminar a solubilização das proteínas de ligação da membrana. Essa mistura foi centrifugada em uma ultracentrífuga Beckman usando um rotor tipo TI45 a 36.000 rpm a 4°C por 45 minutos. 0 sobrenadante foi diluído com tampão lises contendo 10μg/ml de inibidores calpain I e II. A proteína precipitada foi centrifugada por 20 minutos a 9.000rpm em um rotor Beckman JA-10.O sobrenadante recuperado foi então submetido à cromatografia em Mimetic Blue® e agarose AP.
Para correr a coluna Mimetic Blue®-agarose AP, a resina foi inicialmente protegida pela aplicação de 10 volumes de leito de polivinilpirrolidona (ou seja, Mw de 40,000) para bloquear sítios de ligação não específica. As ligações perdidas por PVP-40 foram removidas pela lavagem com 10 volumes de leito de NaCl 2M e de citrato de sódio lOmM pH 3,4. Imediatamente antes da adição da amostra de PCE1C3 solubilizado, a coluna foi equilibrada com 5 volumes de leito da solução tampão da coluna A(50 mM MOPS, pH 7,4, lOmM ZnS04, 5mM MgCl2, 0,lmM CaCl2, lmM DTT, 2mM HC1 benzamidina). A amostra solubilizada foi colocada numa coluna a uma taxa de 2ml/min. com reciclagem tal que o total de amostra foi aplicado de 4 a 5 vezes num período de 12 horas. Após a carga ter sido completada, a coluna foi lavada com 10 volumes do tampão de coluna A, seguidos por 5 volumes do tampão de coluna B (Tampão de coluna A contendo 20mM 5'-AMP), e seguidos por 5 volumes de coluna do tampao de coluna C(50 mM MOPS PH 7,4, 10μΜ de ZnS04, 0,lmM da CaCl2, lmM de DTT e 2 ri de HC1 benzamidina) . A enzima foi eluída até três acúmulos sucessivos. 0 primeiro acúmulo consistiu da enzima proveniente dos 5 volumes de leito lavado com tampão de coluna C contendo lmM cAMP. 0 segundo acúmulo consistiu da enzima proveniente da lavagem com 10 volumes de leito com a solução de tampão de coluna C contendo NaCl 1M. O acúmulo final de enzima foi proveniente da lavagem com 5 volumes de leito com o tampão de coluna C contendo NaCl 1M e 20mM cAMP.
Os acúmulos de enzimas ativas foram coletados e os nucleotídeos cíclicos removidos via filtração por cromatografia em gel convencional ou cromatografia sobre resinas de hidroxiapatita. Seguindo-se à remoção dos nucleotídeos cíclicos, os acúmulos de enzima foram dialisados contra um tampão de diálise contendo 25 mM MOPS PH 7,4, ΙΟμΜ de ZnS04, 500mM NaCl, lmM da CaCl2, lmM de DTT, 1 mM de HCl benzamidina, seguido de diálise contra um tampão de diálise contendo 50% de glicerol. A enzima foi congelada rapidamente com a ajuda de gelo seco e estocada a -70°C.
As preparações resultantes foram cerca de >90% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividades específicas de cerca de 0,1 até Ι,ΟμιηοΙ de cAMP hidrolisados por minuto, por miligrama de proteína.
Purificação do PDE2 a partir do S. cerevisiae Grânulos de células de levedura da cepa YI34 (lOg, estocada a -70°C)foram descongelados sobre gelo com 25ml de tampão lises (50 mM MOPS pH 7,2, lmM EDTA, lmM EGTA, 0,lmM DTT, 0,lmM fluoreto de 4-(2-amino- etil)benzenossulfonila (AEBSF), ^g/ml de cada leupeptina, pepstatina, aprotinina, inibidores de calpaina I e II e 2mM benzamidina). As células foram lisadas pela passagem através de um aparelho French® para pressão celular (SLM- Aminco®, Spectronics Instruments, Inc,, Rochester NY) . 0 homogenado celular resultante foi centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman usando um rotor tipo TI45 a 36.000 rpm a 4°C por 60 minutos. 0 sobrenadante foi separado dos sedimentos e passado através de 15ml de uma resina Epóxi- cGMP Sepharos® a 4°C duas vezes a cerca de 0,5ml/min. A coluna subseqüentemente foi lavada com 45ml de tampão de lavagem 1 (50mM MOPS, pH 7,2, 0,lmM EDTA, 0,lmM DTT) .
Seguindo essa lavagem, a coluna foi lavada com 45ml do tampão de lavagem 2 (tampão de lavagem 1 contendo NaCl 0,5M). Seguindo essa lavagem salina, a coluna foi lavada com 15ml do tampão de lavagem 3 (tampão de lavagem 1 contendo NaCl 0,25M). A coluna foi colocada na temperatura ambiente para aquecer. Foram aplicados aproximadamente 25ml do tampão de eluição (tampão de lavagem 3 contendo lOmM cGMP, mantido na temperatura ambiente) na coluna e o eluente foi coletado em frações de 2ml. Pequenas alíquotas de cada fração foram diluídas 20 vezes em PBS contendo 5 mM
MgCl2 para permitir a hidrólise das ligações competitivas a ajudar na detecção da atividade do PDE2. As frações ativas foram passadas através de filtração em coluna de gel Pharmacia PD-10® para alterar para tampão de lavagem 3. Os acúmulos da alteração foram diluídos 50% v/v com glicerol estéril 80% e estocados a -20°C. As preparações resultantes foram puras em mais de 85%, avaliado por SDS-PAGE, com subseqüente coloração da proteína por Coomassie R-250.
Essas preparações tiveram atividades específicas de cerca de 150 a 250 μπιοί de cGMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparação de PDE3A a partir de células Sf9 Células (2 x 1010) foram suspendidas em tampão lises contendo 50 mM MOPS pH 7,5, 2mM DTT, 2mM de HC1 benzamidina, 5μΜ de ZnS04, 0,lmM de CaCl2, 20pg/ml de nibidores I e II da calpaína, 5pg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina. A mistura foi submetida a ultrassom duas vezes por 30 segundos e as células foram lisadas pela passagem através de um aparelho French® para pressão celular (SLM-Aminco®, Spectronics Instruments, Inc., Rochester NY) 4°C. O lisado resultante foi centrifugado a 100.000 x g por 45 minutos. Os grânulos foram lavados uma vez em tampão lises e suspendidos em 46ml de tampão lises com um homogenizador Dounce. As alíquotas foram estocadas a -70°C. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 1 a 2nmol cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparações de PDE4A, 4B, 4C e 4D humanos Preparação do PDE4A da S. cerevisiae Células de levedura (50g da cepa de leveduras YI26 guardada em HDUN1.46) foram descongeladas até a temperatura ambiente por mistura com 50ml de tampão lises (50mM de MOPS pH 7,5, 10μΜ de ZNS04, 2mM MgCl2, 14,2mM de 2-mercapto-etanol, 5μg/ml de cada leupeptina, pepstatina, aprotinina, 20pg/ml de cada inibidor da calpaína I e II, 2mM de HC1 benzamidina) . As células foram lisadas pela passagem através de um aparelho French® para pressão celular (SLM-Aminco®, Spectronics Instruments, Inc., Rochester NY) enquanto a temperatura era mantida abaixo de 10°C. 0 extrato foi centrifugado num rotor Beckman JA-10 a 9.000 rpm, por 22 minutos e 4°C. 0 sobrenadante foi recuperado e centrifugado em um rotor Beckman TI45 a 36.000 rpm por 45 minutos a 4°C. O PDE4A foi precipitado por adição de sulfato de amônio sólido (0,26g/ml de sobrenadante) enquanto era agitado em um banho de gelo e mantido o pH entre 7,0 e 7,5. 0 precipitado de proteínas contendo PDE4A foi coletado via centrifugação em um rotor Beckman usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm por 22 minutos. O precipitado foi ressuspendido em 50ml da solução tampão G (50mM MOPS pH 7,5, 10μΜ ZnS04, 5mM MgCl2, lOOmM NaCl, 14,2mM 2-mercaptoetanol, 2mM HC1 benzamidina, 5μg/ml de cada uma leupeptina, pepstatina e aprotinina e 20pg/ml de cada inibidor I e II da calpaína) e passado através de um filtro de 0,45pm. A amostra ressuspendida (50 a 100ml)foi carregada numa coluna 5x lOOcm de SEPHACRYL® S-300 de Pharmacia, equilibrada com tampão G. A atividade da enzima foi eluída a uma taxa de 2ml/min e acumulada para fracionamento posterior. O PDE4A isolado por filtração por cromatografia em gel foi aplicado em uma coluna 1,6 x 20cm da Sigma, Cibacron Blue Agarose, tipo 300 (lOml) equilibrada em tampão A (50mM MOPS pH 7,5, 10μΜ ZnS04, 5mM MgCl2, 14,2mM 2-mercaptoetanol, lOOmM HC1 benzamidina) . A coluna foi lavada em sucessão com 50 a lOOml de tampão A, 20 a 30ml do tampão A contendo 20mM 5'-AMP, 50 a lOOml do tampão A contendo NaCl 1,5M e 10 a 20ml de tampão C (50mM tris-HCl, pH 8, 10μΜ ZnS04, 14,2mM 2-mercaptoetanol e 2mM HCl benzamidina). A enzima foi eluída com 20 a 30ml de tampão C contendo 20mM cAMP. 0 pico de atividade do PDE foi acumulado e precipitado com sulfato de amônio (0,33g/ml de enzima acumulada) para remover o excesso de nucleotídeo cíclico.
As proteínas precipitadas foram ressuspendidas em tampão X (25mM MOPS pH 7,5, 5μΜ ZnS04, 50mM NaCl, lmM DTT, e lmM HC1 benzamidina) e dessalinizada via filtração em gel em coluna PD-10 Pharmacia® segundo instruções do fabricante. A enzima foi congelada rapidamente em banho de gelo seco/etanol e estocada a -70°C.
As preparações resultantes foram cerca de >80% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 10 a 40 μιηοΐ de cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparação do PDE4B da S. cerevisiae As células de levedura (150g da cepa da levedura YI23 guardada em HDUN2.32) foram descongeladas por mistura com lOOml de pérola de vidro (0,5mM, lavagem ácida) e 150ml de tampão lises (50mM de MOPS pH 7,5, 2mM EDTA, 2mM EGTA, lmM de DTT, 2mM de HCl benzamidina, 5pg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina, inibidores da calpaína I e II) na temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até 4°C, transferida para um batedor Bead-Beater®, e as células foram lisadas por mistura rápida de 6 ciclos de 30 segundos cada. 0 homogenizado foi centrifugado por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2-21M usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm e 4°C. O sobrenadante foi recuperado e centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman XL-80 usando um rotor TI45 a 36.000 rpm por 45 minutos a 4°C. O sobrenadante foi recuperado e o PDE4B foi precipitado por adição de sulfato de amônio sólido (0,26g/ml de sobrenadante) enquanto era agitado em um banho de gelo e mantido o pH entre 7,0 e 7,5. Essa mistura foi então centrifugada por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2 usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm (12.000 x g) . 0 sobrenadante foi descartado e os grânulos foram dissolvidos em lOOml de tampão A(50mM MOPS pH 7,5, 5mM MgCl2, lmM DTT, lmM HCl benzamidina e 5μg/ml de cada uma leupeptina, pepstatina e aprotinina). O pH e a condutividade foram corrigido para 7,5 e 15-20 miliSiemens (mS) , respectivamente. A amostra ressuspendida foi carregada numa coluna 1,6 X 200cm (25ml) de Sigma Cibacron Blue Agarose, tipo 300, equilibrada com tampão A. A amostra foi reciclada pela coluna de 4 a 6 vezes por um período de 12 horas. A coluna foi lavada em sucessão com 125 a 250ml de tampão A, 125 a 250ml do tampão A contendo NaCl 1,5M, e 25 a 50ml do tampão A. A enzima foi eluída com 20 a 30ml de tampão E (50mM tris-HCl pH 8, 2mM EDTA, 2mM EGTA, lmM DTT, 2mM HCl benzamidina e 20mM cAMP) e 50 a 75ml do tempão E contendo NaCl 1M. O pico de atividade do PDE foi acumulado e precipitado com sulfato de amônio (0,4g/ml de enzima acumulada) para remover o excesso de nucleotídeo cíclico.
As proteínas precipitadas foram ressuspendidas em tampão X (25mM MOPS pH 7,5, 5μΜ ZnS04, 50mM NaCl, lmM DTT, e lmM HCl benzamidina) e dessalinizada via filtração em gel em coluna PD-10 Pharmacia®, segundo instruções do fabricante. 0 acúmulo de enzima foi dialisado contra tampão X contendo 50% glicerol. A enzima foi congelada rapidamente em banho de gelo seco/etanol e estocada a -70°C.
As preparações resultantes foram cerca de >90% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 10 a 50 μπιοί de cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparação do PDE4C da S. cerevisiae As células de levedura (15Og da cepa da levedura YI30 guardada em HDUN3.48) foram descongeladas por mistura com lOOml de pérola de vidro (0,5mM, lavagem ácida) e 150ml de tampão lises (50mM de MOPS pH 7,5, 2mM EDTA, 2mM EGTA, lmM de DTT, 2mM de HCl benzamidina, 5μg/ml de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina, inibidores da calpaína I e II) na temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até 4°C, transferida para um batedor Bead-Beater®, e as células foram lisadas por mistura rápida de 6 ciclos de 30 segundos cada. O homogenizado foi centrifugado por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2-21M usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm e 4°C. O sobrenadante foi recuperado e centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman XL-80 usando um rotor TI45 a 36.000 rpm por 45 minutos a 4°C. 0 sobrenadante foi recuperado e o PDE4C foi precipitado por adição de sulfato de amônio sólido (0,26g/ml de sobrenadante) enquanto era agitado em um banho de gelo e mantido o pH entre 7,0 e 7,5. Trinta minutos depois, essa mistura foi então centrifugada por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2 usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm (12.000 x g) . O sobrenadante foi descartado e os grânulos foram dissolvidos em 200ml de tampão A (50mM MOPS pH 7,5, 5mM MgCl2( lmM DTT, lmM HCl benzamidina e 5μg/ml de cada uma leupeptina, pepstatina e aprotinína). 0 pH e a condutividade foram corrigido para 7;5 e 15-20 miliSiemens (mS), respectivamente. A amostra ressuspendida foi carregada numa coluna 1,6 X 200cm (25ml) de Sigma Cibacron Blue Agarose, tipo 300, equilibrada com tampão A. A amostra foi reciclada pela coluna de 4 a 6 vezes por um período de 12 horas. A coluna foi lavada em sucessão com 125 a 250ml de tampão A, 125 a 250ml do tampão A contendo NaCl 1,5M, e 25 a 50ml do tampão A. A enzima foi eluída com 50 a 75ml de tampão E (50mM tris-HCl pH 8, 2mM EDTA, 2mM EGTA, lmM DTT, 2mM HC1 benzamidina e 20mM cAMP) e 50 a 75ml do tempão E contendo NaCl 1M. 0 pico de atividade do PDE4C foi acumulado e precipitado com sulfato de amônio (0,4g/ml de enzima acumulada) para remover o excesso de nucleotídeo cíclico.
As proteínas precipitadas foram ressuspendidas em tampão X
(25mM MOPS, pH 7,5, 5μΜ ZnS04, 50mM NaCl, lmM DTT, e lmM HC1 benzamidina) e dessalinizada via filtração em gel em coluna PD-10 Pharmacia®, segundo instruções do fabricante. 0 acúmulo de enzima foi dialisado por uma noite contra tampão X contendo 50% glicerol. A enzima foi congelada rapidamente em banho de gelo seco/etanol e estocada em -70 °C.
As preparações resultantes foram cerca de >80% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 10 a 20 μιηοΐ de cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparação do PDE4D da S. cerevisiae As células de levedura (lOOg da cepa da levedura YI29 guardada em HDUN4.il) foram descongeladas por mistura com 150ml de pérola de vidro (0;5mM, lavagem ácida) e 150ml de tampão lises (50mM de MOPS pH 7,2, ΙΟμΜ ZnS04, 2mM
MgCl2, 14,2mM 2-mercaptoetanol, 2mM de HC1 benzamidina, 5μρ/πύ de cada leupeptina, pepstatina e aprotinina, inibidores da calpaína I e II) na temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até 4°C, transferida para um batedor Bead-Beater®, e as células foram lisadas por mistura rápida de 6 ciclos de 30 segundos cada. O homogenizado foi centrifugado por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2- 21M usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm e 4°C. O sobrenadante foi recuperado e centrifugado em uma ultracentrífuga Beckman XL-80 usando um rotor TI45 a 36.000 rpm por 45 minutos a 4°C. O sobrenadante foi recuperado e o PDE4D foi precipitado por adição de sulfato de amônio sólido (0,26g/ml de sobrenadante) enquanto era agitado em um banho de gelo e mantido o pH entre 7,0 e 7,5. Trinta minutos depois, essa mistura foi então centrifugada por 22 minutos em uma centrífuga Beckman J2 usando um rotor JA-10 a 9.000 rpm (12.000 x g) . 0 sobrenadante foi descartado e os grânulos foram dissolvidos em lOOml de tampão A (50mM MOPS pH 7,5, 10μΜ ZnS04, 5mM MgCl2, 14,2mM 2-mercaptoetanol, lOOmM HCl benzamidina e 5μg/ml de cada uma leupeptina, pepstatina e aprotinina, inibidores da calpaína I e II). O pH e a condutividade foram corrigido para 7,5 e 15-20 miliSiemens (mS), respectivamente. A uma taxa de fluxo de 0,67ml/min, a amostra ressuspendida foi carregada numa coluna 1,6 X 20cm (lOml) de Sigma Cibacron Blue Agarose, tipo 300, equilibrada com tampão A. A coluna foi lavada em sucessão com 50 a lOOml de tampão A, 20 a 30ml do tampão A contendo 5'-AMP, 10 a 20ml do tampão A contendo NaCl 1,5M, e depois 10 a 20ml de tampão C (50mM tris-HCl pH 8, ΙΟμΜ ZnS04, 14,2mM 2- mercaptoetanol, 2mM de HC1 benzamidina). A enzima foi eluída com 20 a 30ml do tampão C contendo 20mM cAMP. O pico de atividade do PDE4C foi acumulado e precipitado com sulfato de amônio (0,4g/ml de enzima acumulada) para remover o excesso de nucleotídeo cíclico.
As proteínas precipitadas foram ressuspendidas em tampão X
(25mM MOPS, pH 7,2, 5μΜ ZnS04, 50mM NaCl, lmM DTT, e lmM HC1 benzamidina) e dessalinizada via filtração em gel em coluna PD-10 Pharmacia®, segundo instruções do fabricante. O acúmulo de enzima foi dialisado por uma noite contra tampão X contendo 50% glicerol. A enzima foi congelada rapidamente em banho de gelo seco/etanol e estocada em -70°C.
As preparações resultantes foram cerca de >80% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 20 a 50 μιηοΐ de cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Purificação do PDE5 da S. cerevisiae Grânulos de células (29mg) foram descongelados sobre gelo em igual volume de tampão lises (25mM tris-HCl, pH 8, 5mM MgCl2, 0,25mM DTT, lmM benzamidina e 10μΜ ZnS04) .
As células foram lisadas num Microfluidizador® (Microfluidics Corp.) usando nitrogênio a 1.378xl05N/m2. O lisado foi centrifugado e filtrado através de filtros descartáveis de 0,45μιη. 0 filtrado foi carregado em uma coluna de 150ml de Q SEPHAROSE® de fluxo rápido (Pharmacia). A coluna foi lavada com 1,5 volumes de tampão A (20mM bis-tris-propano, pH 6,8, lmM MgCl2, 0,25mM DTT e ΙΟμΜ ZnS04) e eluída com um passo gradiente de 125mM de tampão A seguido de um gradiente linear de 125-1000mM NaCl em tampão A. Frações ativas do gradiente linear foram aplicadas em uma coluna de 180ml de hidroxiapatita em tampão B (20mM bis-tris-propano (pH 6,8), lmM MgCl2, 0,25mM DTT, ΙΟμΜ ZnS04 e 250mM KCl) . Após o carregamento, a coluna foi lavada com 2 volumes de tampão B e eluída com um gradiente linear de 0-125mM de fosfato de potássio no tampão B. As frações ativas foram acumuladas, precipitadas com sulfato de amônio e ressuspendidas em tampão C (20mM bis-tris-propano, pH 6,8, 125mM NaCl, 0,5mM DTT, ΙΟμΜ ZnS04) . 0 acumulado foi aplicado numa coluna de 140ml de SEPHACRYL® S-300 HR e eluído com tampão C. preparações resultantes foram cerca de >80% puras por SDS- PAGE. Essas preparações tiveram atividade específica de cerca de 20 a 50 μιηοΐ de cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína. As frações ativas foram diluídas a 50% e estocadas a -20'°C.
As preparações resultantes foram cerca de 85% puras por SDS-PAGE. Essas preparações tiveram atividades específicas de cerca de 3μπιο1 cGMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Preparação do PDE7 da S. cerevisiae Grânulos de células (126g) foram descongelados e ressuspendidos na temperatura ambiente por cerca de 30 minutos com igual volume de tampão lises (50mM tris-HCl, pH 8, lmM EDTA, lmM DTT, 50mM NaCl, 2mM HCl benzamidina e 5μΜ de cada pepstatina, leupeptina e aprotinina). As células foram lisadas a 0-4°C com a ajuda de pérolas de vidro (125ml) em um Beat-Beater® 6 ciclos x 30 segundos. O lisado foi centrifugado e filtrado através de filtros descartáveis de 0,45μιη. 0 extrato filtrado (178ml) foi distribuído em alíquotas de 4ml, congelado rapidamente com gelo seco e estocado em freezer a -70°C. Essas preparações foram estáveis por vários ciclos de congelamento e descongelamento e tiveram atividade específica de cerca de 50 a 100 pmol cAMP hidrolisado por minuto por miligrama de proteína.
Liberação de TNFa estimulada por lipopolissacarídeo a partir de linfócitos de sangue humano periférico Para alcançar a habilidade de um composto reduzir a secreção de TNFa em linfócitos de sangue humano periférico (PBL), os seguintes testes foram realizados.
Estudos prévios demonstraram que a incubação de PBL humano com agentes elevadores de c-AMP, tais como prostaglandina E21, forskolina, 8-bromo-cAMP ou dibutril-cAMP, inibe a secreção de TNFa pelas células quando estimuladas por lipopolissacarídeos (LPS; endotoxina). Da mesma forma, experimentos preliminares têm sido realizados para demonstrar que inibidores seletivos de PDE4, tais como rolipram, inibem a secreção de TNFa dos linfócitos humanos induzida por LBS em uma estrutura dependente de dosagem.
Assim, a secreção de TNFa do PBL humano foi usada como um padrão para a habilidade de um composto em elevar as concentrações do cAMP intracelular e/ou inibir a atividade do PDE4 dentro da célula.
Sangue heparinizado (aproximadamente 30ml) retirado de voluntários humanos foi misturado em 1:1 com tampão salino fosfato modificado da Dulbecco. Essa mistura foi misturada em 1:1 com HISTOPAQUE® e centrifugada a 1.500 rpm na temperatura ambiente sem freio, no cilindro de agitação de uma centrífuga Beckman modelo TJ6, Os eritrócitos foram centrifugados até o fundo dos tubos e o soro remanescente na superfície dos tubos. Uma camada contendo linfócitos sedimentou entre o soro e as camadas de HISTOPAQUE®, e foi removida por aspiração para um tubo limpo. As células foram quantificadas e ajustadas para 3xl06 células/ml e uma alíquota de ΙΟΟμΙ é colocada nos poços de uma micro-placa de 96 posições. Os compostos testados e a média RPMI (Gibco/BRL Life Sciences) são adicionados em cada um dos poços 15 minutos antes da adição do LPS bacteriano (25mg/ml). A mistura é deixada incubando por 20 horas a 37 °C em câmara úmida. As células então são separadas por centrifugação a 800 rpm por 5 minutos na temperatura ambiente. Uma alíquota de 180μ1 de sobrenadante foi transferido para uma nova placa para determinação da concentração de TNFa. A proteína TNFa no sobrenadante fluido das células foi medida usando enzimaensaios ensaios ELISA disponíveis comercialmente (CYTOSCREEN® Immunoassay Kit da Biosource International). O ensaio sobre as células forneceram os seguintes resultados para vários compostos de pirrolodina da presente invenção. Os valores de EC50 (isto é, concentração efetiva dos compostos capazes de inibir 50% do total de TNFa) ilustraram a habilidade dos presentes compostos em inibir a liberação de TNFa estimulada por LPS de PBS humano. A tabela abaixo ilustra a habilidade dos compostos da fórmula (II) em inibir a atividade do PDE4 e a liberação do TNFa in vítro. Na tabela seguinte, os valores de IC50 foram determinados contra o PDE4 humano recombinante. 11 Veja Apêndice A para estrutura de cada amostra Os dados apresentados acima mostram que os presentes compostos são potentes inibidores de PDE4, por exemplo, os compostos têm um ΙΟ50 vs. PDE4 recombinante humano de cerca de 700pM até cerca de 15μΜ. Os compostos preferidos têm um IC50 de cerca de lOOnM ou menos, e compostos especialmente preferidos têm IC50 de cerca de 50nM ou menos.
Similarmente, compostos preferidos têm um PBL/TNFa EC50 de cerca de 500nM ou menos, e preferencialmente de cerca de 200 nM ou menos. Mais preferencialmente os compostos têm um PBL/TNFa EC50 de cerca de lOOnM ou menos.
Para conseguir as vantagens completas da presente invenção, os compostos têm um IC50 vs. PDE4 recombinante humano, de cerca de lOOnM ou menos e um PBL/TNFa EC50 de cerca de 500nM ou menos. Mais preferencialmente, os compostos têm IC50 de cerca de 50nM ou menos e um PBL/TNFa EC50 de cerca de lOOnM ou menos.
Modelos Animais Ensaio para inibição dos níveis de TNFa no soro em mamíferos (ratos/TNFa ED50 (mg/kg)) De modo a se acessar a habilidade de um composto em reduzir os níveis de TNFa sérico em mamíferos, o seguinte protocolo foi empregado. Os especializados na técnica apreciam que estudos prévios têm demonstrado que a incubação de monócitos LPS ativados humanos, como o PGE2, forskolina e dbcAMP, inibiram a secreção do TNFa. Os inibidores de PDE4, como rolipram, que também elevam o cAMP, foram descobertos também como inibidores do TNFa sérico. 0 rolipram também tem sido conhecido por inibir a secreção do TNFa dos macrófagos com LPS ativados de camundongo. Desse modo a eficácia in vivo de um composto em reduzir o PDE4 foi mostrada por dosagem com compostos e medidas de redução dos níveis séricos do TNFa em ratos injetados com LPS. Uma fêmea de rato C3H, de peso corporal de 20-25 gramas, foi jejuada durante a noite e dosada intraperitoneialmente com o composto de teste com um veículo apropriado 60 minutos antes da injeção de LPS. 5μg de LPS foram então injetadas intraperitonealmente nos ratos. 90 minutos depois da injeção de LPS, o sangue dos ratos é retirado diretamente do coração. O sangue é deixado coagulando por uma noite a 4°C. Amostras são centrifugadas por 10 minutos em uma microcentrífuga e o soro removido e estocado a -20°C até análise. Os níveis séricos do TNFa foram subsequentemente medidos usando-se um kit ELISA comercialmente disponível (Genzyme) seguindo o protocolo do próprio kit. O percentual de inibição dos níveis séricos de TNFa causados pelos compostos foi determinado em relação aos níveis séricos de TNFa no rato de controle que recebeu somente o veículo.
Combinados em rato, Ensaio de liberação de TNFa estimulada por endotoxina e Ensaio de atividade locomotora (ED50 (mb/kg)) 0 propósito desse estudo foi determinar a eficácia dos inibidores de PDE4 in vivo em um modelo de rato LPS junto com a determinação com respeito ao sistema nervoso central (SNC) de efeitos colaterais manifestados pelo decréscimo na mobilidade espontânea.
Os animais de teste foram fêmeas de rato Balb/c, tendo um peso médio de cerca de 20g. Os inibidores, formulados em 30% de Cemophor® EL, foram administrados por via injeção intraperitoneal (i.p.) de doses de 0,1, 1,0, 10,0 e 100 mg/kg. Volumes de doses individuais (cerca de 150μ1) foram ajustados com base na medida dos pesos dos corpos. Uma hora depois, 5mg/kg de LPS em um volume final de 200 μΐ foi injetado via veia caudal de cada animal. 90 minutos seguindo o tratamento de LPS, os animais tiveram seus sangues extraídos e as amostras de soro foram coletadas antes de serem estocadas a -70 °C até o ensaio.
Para determinação da eficácia, as amostras de soro foram diluídas duas vezes e os níveis de TNFa foram determinados usando o kit de imunoensaio CYTOSCREEN® (Biosource International). Os dados foram a média entre amostras triplicatas sujeitadas a cada um dos compostos testados.
Movimentos no plano x-y, ou levantar-se nas pernas traseiras foram quantificados como contando o número de eventos cruzados por unidade de tempo. Um decréscimo no número de eventos de atividade é diretamente proporcional à mobilidade ou imobilização do animal. A marcação quantitativa correlacionou-se muito bem com as medidas subjetivas descritas abaixo. 3) Dose efetiva, em mg/kg, que diminui espontaneamente o controle da mobilidade em 50%.
Também foi determinado que os compostos da fórmula (II) têm poucos efeitos colaterais sobre o sistema nervoso central comparado ao rolipram e a compostos descobertos por Feldman et al., na patente US 5.665.754.
Também foi descoberto que a atividade do sistema nervoso central está relacionada à estereoquímica absoluta dos presentes compostos. É sabido que estereoisômeros de drogas podem ser substancialmente diferentes em atividade biológica, por exemplo, potência, seletividade, absorção, distribuição, metabolismo, execução e efeitos colaterais. Na presente invenção, os enanciômeros e diastereoisômeros representados pelos compostos (A)-(D) nas tabelas seguintes, foram testados quanto a efeitos na atividade in vitro do PDE, na liberação do LPS/TNFa de base celular a partir de linfócitos (PBLs) de sangue periférico humano, na mobilidade dos ratos e no vômito das cobaias.
Tal como mostrado nas seguintes tabelas, os compostos (C) e (A) (isto é, amostras 66 e 69, respectivamente) mostraram similares inibição do PDE4 e liberação do TNFa estimulada por LPS, porém com perfis de comportamento substancialmente diferentes. Os compostos (C) e (A), que exibiram menor atividade do SNC, foram derivados do produto predominante da ciclização da [3+2] azometina ilida, para a amida quiral a, β-insaturada. Assim, a estereoquímica absoluta do inibidor de PDE4 da presente invenção contribui significantemente para o perfil de desempenho do composto. 11 Os efeitos colaterais sobre o SNC foram determinados pela assertiva subjetiva da imobilidade do rato que se seguiu à injeção intraperitoneal dos compostos nas dosagens 1, 10 e 100 mg/kg. A assertiva definida pela mobilidade (ou sua deficiência) foi embasada por observação das seguintes características: redução do comportamento exploratório, posicionamento deitado, posicionamento de bruços, pêlos ondulados, etc. Nenhum efeito aparente foi notado na estrutura de 60 minutos de tempo assumido com os Exemplos 8(C), 8 (D) e 8(B). Entretanto, os ratos foram afetados em todas as doses quando foi dado o Exemplo 8(A).
Além disso, nas mais altas doses do Exemplo 8(A), os ratos se tornaram moribundos e morreram no intervalo de 10 minutos do tratamento.
Os dados apresentados acima mostraram que os compostos da fórmula (II) são potentes e seletivos inibidores de PDE4. Como uma importante vantagem adicionada, os compostos da fórmula (II) também reduziram e eliminaram os efeitos colaterias adversos sobre o SNC associados com os efeitos colaterais dos inibidores de PDE4 anteriores. Os compostos da fórmula (II) foram também testados quanto às propriedades eméticas nos modelos animais para ilustrarem mais a eficácia dos compostos. O método e os resultados dos testes emetogênicos estão colocados abaixo.
Modelagem emética nas cobaias seguida à dose oral e intravenosa com inibidores seletivos de PDE4 Esse estudo foi conduzido para investigar as propriedades emetogênicas dos inibidores de PDE4 in vivo.
Assegurou-se previamente se a cobaia era uma ferramenta eficiente para assegurar o vômito (emesis) em seguida à exposição do composto de teste. Estudos prévios indicaram que a resposta emética de uma cobaia a muitos inibidores de PDE4 é predictiva da disposição dos seres humanos aos mesmos compostos de teste. Dessa forma, a falta e/ou diminuição no potencial emético dos compostos de teste nas cobaias predizem um efeito favorável, não emético, nos seres humanos. 0 vômito é uma resposta complexa e fisiológica a agentes nocivos que podem ser iniciados perifericamente ou centralmente. Assim, agentes seletivos a PDE4 foram testados quando administrados tanto intravenosa quanto oralmente.
Os animais de teste eram adultos, castrados e cobaias machos descendentes (espécie= Mustella putoris furo, linhagem= Sable) com peso variando de cerca de 1 a l,5kg. Os testes foram realizados em quadruplicidade nos animais não anteriormente sujeitos a experimentos com inibidores de PDE4. Os inibidores de PDE4 foram formulados em 10% de óleo de rícino Polyoxyl-35 (CREMOPHOR® EL, disponível pela BASF Corporation, Parsippany, NJ) em tampão salino fosfato (PBS), e foram administrados via injeções i.v. através de um cateter sirurgicamente implantado, posicionado na veia jugular externa direita, a uma taxa de 0,66ml por quilo de peso corporal. Os inibidores de PDE4 para consumo oral foram formulados em 30% de CREMOPHOR® EL em PBS, e administrados por entubação dos animais com uma agulha de alimentação de 16G espetada em seus estômagos. Os animais receberam os inibidores de PDE4 num volume de l,33ml por quilo de peso corporal.
Todos os animais foram jejuados por 8 a 12 horas antes da administração dos inibidores de PDE4. Após a administração dos inibidores de PDE4 as respostas eméticas e de comportamento foram quantificadas por três horas após a dosagem. 0 número total de respostas eméticas e episódios de vômito foram qauntifiçados durante os intervalos de observação. Adicionalmente foram anotados o tempo de latência do primeiro episódio emético, a duração dos episódios eméticos e as mudanças gerais de comportamento, incluindo ataxia, salivação profusa e viscosa, boca em forma de garra, hiperventilação, andar de ré, posição deitada do corpo, hiperatividade, lambedura dos lábios e aparência geral.
Para propósitos comparativos, os efeitos emetogênicos das Amostras 66 e 69 foram testados intravenosamente a 1,0, 2,5, 5,0 e lOmg/kg e oralmente a 2,5, 10, 17 e 25mg/kg. Os resultados foram resumidos nas seguintes tabelas: Em geral, ambos os compostos (C) e (A) , administrados tanto oralmente quanto por via intravenosa, produziram uma clara dose de resposta em termos de comportamento emético. 0 composto (A) produziu muito mais efeito emético que o composto (C). Isso ficou bem aparente quando se compararam as respostas à provocação oral. Por exemplo, na dose de 25mg/kg de peso corporal, o composto (A) produziu mais episódios de ânsia e vômito que a mesma dose oral do composto (C) . Em adição, o número de eventos de ânsia e vômito por episódio, foi muito maior para o composto (A) que para o composto (C) nesse grupo de dosagem. Uma tendência similar foi aparente nas dosagens orais de 17 e llmg/kg de peso corporal, com o composto (A) exibindo umaresposta mais forte que o composto (C) . Não houve diferenças aparentes observadas entre as dosagens menores de ambas as moléculas. Nesses casos, foram evidentes alguns poucos casos de lambedura labial e boca em forma de garra para ambos os compostos, mas nenhuma resposta emética foi observada.
Os resultados da dosagem oral contrastaram marcantemente com a dosagem intravenosa. Em uma dose intravenosa de 5mg/kg de peso corporal do composto (A), um dos animais testados morreu quase que imediatamente após a dosagem (dentro de 5 minutos), enquanto que um segundo animal entrou claramente em sofrimento, mas se recuperou após 3 horas. 0 sofrimento pode ser stribuído tanto a um evento de intoxicação aguda quanto a uma exagerada resposta farmacológica à emesis mediada centralmente. Notou-se também que o sofrimento e a respiração trabalhosa nos animais dosados foi difícil de ser diferenciada do comportamento de ânsia. Os efeitos não foram tão severos com a administração intravenosa do composto (C), como mostrado na tabela acima. Embora todos os animais tenham exibido comportamento emético a uma dose de 10 mg/kg de peso corporal com o composto (C), e nenhum tenha mostrado sofrimento associado com a dose de 5mg/kg do composto (A).
Com exceção da dose do composto (A) de 5mg/kg de peso corporal, todos os animais se recuperaram do tratamento e aparentaram normalidade.
Os resultados sumarizados nas tabelas acima mostraram que os compostos da presente invenção são úteis para a inibição seletiva da atividade do PDE4 em um mamífero, sem exibir as adversidades no SNC nem os efeitos eméticos associados com os inibidores anteriores do PDE4.
Obviamente, muitas modificações e variações da presente invenção tal como mostrado aqui podem ser feitas partindo do espírito e do escopo aqui exibidos, e dessa forma, somente as únicas limitações que podem ser impostas são as indicadas pelas reivindicações anexas.
APÊNDICE A

Claims (1)

1. Composto caracterizado pelo fato de ser selecionado de um grupo constituído de:
BRPI0016693-6A 1999-12-23 2000-11-28 Derivados de pirrolidina como inibidores de fosfodiesterase específico amp cíclico BRPI0016693B1 (pt)

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