BR9909308B1

BR9909308B1 - peptìdeo, ensaio para o diagnóstico de esquizofrenia em um indivìduo, e, kit para uso no diagnóstico de esquizofrenia.

Info

Publication number: BR9909308B1
Application number: BRPI9909308-1A
Authority: BR
Inventors: Meir Shinitzky; Michael Deckmann
Priority date: 1998-04-02
Filing date: 1999-03-30
Publication date: 2010-11-30
Also published as: JP2002510712A; CA2324380C; EP1068303B1; JP4364433B2; TW581812B; CN1300320A; CA2324380A1; BR9909308A; CN1171995C; AU3165599A; DE69928236D1; WO1999051725A3; EP1068303A2; AR014811A1; WO1999051725A2; HK1030966A1; IL138746A; US7098304B1; DE69928236T2; ATE309335T1

Description

"PEPTÍDEO, ENSAIO PARA O DIAGNÓSTICO DE ESQUIZOFRENIAEM UM INDIVÍDUO, E, KIT PARA USO NO DIAGNÓSTICO DE ESQUIZOFRENIA"

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção situa-se de uma forma geral no campodos ensaios para o diagnóstico da distúrbios mentais. Mais especificamente, apresente invenção fornece um ensaio para o diagnóstico da esquizofrenia.

TÉCNICA ANTERIOR

Segue-se uma lista de publicações da técnica anterior referidasno presente relatório descritivo:

1.Carpenter, W. T. e Buchanan, R. W., Review, N. Engl. J.Med., 330: 681-690, 1994.

2.Knight,J. G., Find. Exp. Clin. Pharmacol., 6: 395-408, 1984.

3.De Lisi, L. E. e Crow, T. J., Psychiatr. Clin. North Am., 9:115-132,1987.

4. Ganguli, R., Rabin, B. S., Kelly, R. H., Lyte, M. e Ragu, U.,Ann. N.Y. Acad. Sci., 496: 676-690, 1987.

5. Shinitzky, M. Deckmann, M., Kessler, A., Sirota, P., Rabbs,A. e Elizur, A.,An. N.Y. Acad. Sei., 621: 205-217, 1991.

6.Deckmann, M., Shinitzky, M., Leykin, I., Cheng, D., Guy,J., Avnon, M., Salganik, I., Amiri, Z., Schlossberg, A., Leibu, E. e Rafael, C.,The Italian J. Psychiatr. Behav. Sci., 6: 29-34, 1996.

7.Publicação do Pedido de Patente PCT WO 95/23970.

O reconhecimento aqui da técnica acima não deve serinterpretado como uma indicação de que esta técnica seja de qualquer formarelevante à patenteabilidade da invenção como definida nas reivindicaçõesanexas.

As publicações acima serão reconhecidas na seguinte pelaindicação de seu número a partir da lista acima.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃOA esquizofrenia é uma síndrome que engloba uma variedadede sintomas mentais como alucinações auditivas, paranóia, delírio, catatonia,comportamento grotesco ou supressão emocional. A esquizofrenia afeta cercade 1% da população total e sua carga econômica, bem como social, sobre asociedade, é enorme. O início da doença ocorre em uma idade precoce e,assim, os pacientes tipicamente necessitam de supervisão médica epsiquiátrica por toda a vida. A esquizofrenia é, portanto, classificada comouma das doenças mais dispendiosas no mundo industrial1.

Existem vários fatores de risco conhecidos associados com aesquizofrenia, tais como a predisposição genética, o nascimento durante oinverno e complicações durante a gravidez e o nascimento. As infecçõesvirais e as reações autoimunes subsequentes também têm sido propostascomo possíveis fatores2"4 causativos. O envolvimento de auto-anticorposcontra plaquetas em pacientes esquizofrênicos foi também apresentado comoníveis elevados de auto-anticorpos, foram detectados em pacientesesquizofrênicos e dementes, em comparação com os pacientes de controle,pacientes5"6 bipolares, deprimidos, de personalidade perturbada ouesquizoafetivos. A análise da Western Blot revelou um padrão de antígenosde plaquetas reconhecidos pelos auto-anticorpos obtidos de pacientesesquizofrênicos que diferiam daquele reconhecido pelos auto-anticorposobtidos de pacientes sofrendo de trombocitopenia autoimune e demência . Oantígeno ligado especificamente pelos auto-anticorpos obtidos de pacientesesquizofrênicos tem sido caracterizado por seu peso molecular.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com a invenção, várias proteínas que se ligam aosauto-anticorpos que são encontrados em níveis elevados em fluidos corporaisde pacientes esquizofrênicos, foram identificadas. Os anticorpos que estasproteínas ligam são tipicamente auto-anticorpos associados com as plaquetas(PAA). Tais auto-anticorpos obtidos de pacientes esquizofrênicos (daqui emdiante "anticorpos derivados de esquizofrênicos - SDA") foram observadosligarem-se aos antígenos acima, enquanto os auto-anticorpos obtidos dosindivíduos não esquizofrênicos de controle (daqui em diante "anticorposderivados de não esquizofrênicos - NSDA") não o foram.

As proteínas que se apresentaram capazes de ligarem-se aosSDA foram identificadas e ainda caracterizadas por processos químicos eenzimáticos. Algumas das proteínas imunorreativas identificadas sãoproteínas conhecidas, tais como a gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase(G3PD), a, enolase, a queratina, o fator de crescimento de hepatócitos, oreceptor sensível de cálcio extracelular e outros mais. Mediante digestão daenolase proteínica de coelho, foi revelado um peptídeo imunologicamenteativo, que tinha uma alta atividade de ligação aos SDAs.

O peptídeo revelado, sendo o epítopo imunologicamente ativoda proteína enolase, compreendia vinte e oito aminoácidos da seguinteseqüência:

SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 1)

Na base do peptídeo revelado, peptídeos adicionais foramsintetizados e aqueles altamente ativos (isto é, aqueles que tinham uma altaatividade de ligação aos SDAs em comparação com uma atividade de ligaçãomuito baixa ao NSDA ou que não se ligavam ao NSDA de modo algum)foram identificados. Além disso, os peptídeos ativos sintetizados foramcapazes de diferenciação quanto ao primeiro tempo entre as amostras deplasma obtidas dos pacientes esquizofrênicos e as amostras de plasma obtidasde indivíduos de controle não esquizofrênicos.

Outra análise de um dos peptídeos sintetizados altamenteativos (SEQ ID NO: 2) mostrou que este peptídeo forma um anel através deduas cisteínas e um dímero através da cisteína livre remanescente. O peptídeonesta forma é o mais ativo em sua capacidade de ligar-se ao SDA.

Como descrito abaixo, o epítopo antigênico dos peptídeossintéticos altamente ativos da invenção, parece ser um epítopo espacialtridimensional.A presente invenção provê, assim, um peptídeo que se liga aanticorpos que são encontrados em níveis elevados nos fluidos corporais depacientes esquizofrênicos.

A invenção ainda provê um peptídeo capaz de ligar-se aanticorpos que são encontrados em níveis elevados nos fluidos corporais depacientes esquizofrênicos, em que o peptídeo se liga a anticorpos que sãocapazes de ligação específica a um peptídeo tendo a seguinte seqüência deaminoácidos: LVVGLCTCQIKTGPAC (I.D. N- 2). Vários exemplos nãoIimitativos de tais peptídeos são os seguintes:

iii.IADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 3)

iv.ADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 4)

v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 5)

vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 6)

vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (SEQ ID NO: 7)

viii.LWGLCTPQIKTGPACR (SEQ ID NO: 8)

A invenção também fornece um peptídeo que é capaz de ligaranticorpos que são encontrados em níveis elevados nos fluidos corporais depacientes esquizofrênicos, tais como peptídeos capazes de se ligarem aanticorpos que não se ligam a peptídeos selecionados do grupo consistindode:

i.SGETEDTFIADLVVGLCTGQ (SEQ ID NO: 9)

ii.WGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 10)

iii.CTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 11)

iv.LVVGLCTGQIKTGAPC (SEQ ID NO: 12)

v.LVVGLCTGQIKTGAP (SEQ ID NO: 13)

vi.LVVGLCTGQIKTGPAC (SEQ ID NO: 14)

A invenção também provê um peptídeo capaz de ligar-se aanticorpos que são encontrados em níveis elevados nos fluidos corporais depacientes esquizofrênicos compreendendo uma seqüência de aminoácidosselecionada do grupo consistindo de:i. SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQID NO: 1)

ii.LVVGLCTCQIKTGPAC (SEQ ID NO: 2)

iii.IADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 3)

iv.ADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 4)

v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 5)

vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 6)

vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (SEQ ID NO: 7)

viii.LVVGLCTPQIKTGPACR (SEQ ID NO: 8)

Mediante uma modalidade preferida, a invenção provê umpeptideo capaz de ligar anticorpos que são encontrados em níveis elevadosnos fluidos corporais de pacientes esquizofrênicos selecionados do grupoconsistindo de:

i. SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 1)

ii.LVVGLCTCQIKTGPAC (SEQ ID NO: 2)

iii.IADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 3)

iv.ADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 4)

v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 5)

vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 6)

vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (SEQ ID NO: 7)

viii.LWGLCTPQIKTGPACR (SEQ ID NO: 8)

As letras usadas acima (e daqui por diante) para denotar a. a.específicos estão de acordo com os símbolos de aminoácidos (a.a.) de umaletra recomendados pela Comissão de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB.

Sem que se seja limitados pela teoria, à base dos resultadosobtidos de acordo com a invenção, tornou-se claro que a estrutura do epítopoantigênico dos peptídeos a que os SDAs são capazes de se ligarem em umgrau substancialmente mais elevado em comparação com os NSDAs, é umepítopo tridimensional. Mediante o uso de um programa computadorizadocom base nos cálculos de energia mínima, o epítopo antigênico de umpeptideo de acordo com a invenção é previsto como sendo uma estruturacíclica que compreende um núcleo hidrofóbico e uma extensão tendo cercade duas cargas positivas. As extensões carregadas positivamente podem serposicionadas em uma das muitas orientações espaciais possíveis.

A atividade de ligação do peptídeo da invenção a váriosanticorpos pode ser determinada por qualquer um dos processos por siconhecidos, tais como ELISA ou Western Blot. Por exemplo, um peptídeotestado pode ser analisado quanto à sua atividade de ligação a anticorpos,submetendo-o à eletroforese em gel de poliacrilamida, manchando-o nasmembranas de PVDS que são então reagidas com SDA e comparadas à suareação com NSDA.

A extensão da ligação dos peptídeos da invenção ao PAApode ser determinada mediante o uso de qualquer sistema de detecçãoconhecido na técnica, tal como anticorpos contra a imunoglobulina humanaou seus fragmentos ligados a um marcador detectável. O marcador pode serum grupo radioativo, um grupo fluorescente, uma enzima capaz de catalisaruma reação produzindo um produto detectável, um grupo biotina capaz de serdetectado por avidina, etc.

Mediante uma modalidade preferida deste aspecto, ospeptídeos da invenção são ligados a um suporte sólido tal como, porexemplo, uma membrana de PVDF, reagido com uma amostra testada, e onível de ligação dos PAAs na amostra é determinado usando-se um anticorpoFc anti-humano combinado com um marcador detectável.

De acordo com uma modalidade particular, a determinação donível de auto-anticorpos ligados a um peptídeo testado é determinada pelouso de Fc anti-humano combinado com peroxidase da raiz forte (SIGMA) eFast-DAB® (SIGMA) ou 4-cloro-naftol (SIGMA) como o reagente de cor.

De modo a que a ligação do peptídeo testado de acordo com ainvenção ao SDA seja considerado "substancialmente mais elevada" do quesua ligação ao NSDA, o nível de ligação ao SDA deve ser estatística esignificativamente mais elevado do que sua ligação ao NSDA, comodeterminado por qualquer dos processos estatísticos conhecidos na técnica(por exemplo o Teste t de Student), que são usados em conexão com osresultados obtidos pelos processos experimentais mencionados acima.

Os análogos de todos os peptídeos acima também formam umaspecto da presente invenção. Como será observado por qualquer pessoaversada na técnica, a seqüência de aminoácido dos peptídeos da invençãopode ser alterada, por exemplo, pela adição, substituição ou deleção de um oumais aminoácidos sem substancialmente alterar a capacidade de ligação dopeptídeo aos SDAs. Assim, por exemplo, a leucina posicionada na primeiraposição da seqüência de aminoácidos de um peptídeo da invenção, pode sersubstituída pela glicina ou valina de aminoácidos que pertencem à mesmafamília de aminoácidos sem alterar a atividade de ligação do peptídeo. Umapessoa versada na técnica nenhuma dificuldade terá em determinar por qualaminoácido cada um dos aminoácidos do peptídeo pode ser substituído deacordo com o agrupamento conhecido de aminoácidos nas famílias conformepodem ser encontradas, por exemplo, em Molecular Biology of the Cell,Editores Alberts B. et al., Garland Publishing, Inc., Nova Iorque e Londres,Segunda Edição, 1989, páginas 54-55.

Os análogos que situam-se sob o escopo dos peptídeos dapresente invenção são tais que têm substancialmente o mesmo nível deatividade de ligação aos SDAs, conforme os peptídeos, isto é, têm um nívelmais elevado de ligação aos SDAs em comparação com os NSDAs, comodeterminado por qualquer um dos processos conhecidos na técnica, taiscomo, por exemplo, aquele descrito no Exemplo 1 abaixo.

O peptídeo da invenção pode ser obtido por digestãoenzimática (por exemplo usando Clostrapaína) ou digestão química (CNBr)de uma proteína mais longa. Em um tal caso, os peptídeos resultantes sãoseparados por processos conhecidos na técnica, tais como por RP-HPLC, e ospeptídeos separados podem, então, ser usados para sequenciação (porexemplo, por Eurosequence b.v. [Nijenborgh 4, 9749 Gronigen; PaísesBaixos)] e analisados quanto à sua capacidade de ligação aos SDAs comodescrito acima.Os peptídeos de acordo com a invenção também podem sersintetizados por processos conhecidos na técnica, tais como na Abimed 522em uma escala de 10 μιτιο^ por Eurosequence b.v. (ver explanaçãodetalhada nos exemplos abaixo). A atividade de ligação dos peptídeos recém-sintetizados será determinada usando-se qualquer um dos ensaiosmencionados acima.

Os peptídeos da invenção são capazes de diferenciar entreuma amostra obtida de um indivíduo sofrendo de esquizofrenia e umaamostra obtida de um indivíduo não esquizofrênico, e são, portanto, úteis nodiagnóstico da esquizofrenia em um paciente. Assim, por outro de seusaspectos, a presente invenção provê um peptídeo para uso no diagnóstico daesquizofrenia em um indivíduo, dito peptídeo capaz de ligar-se a anticorposque sejam encontrados em níveis elevados nos fluidos corporais de pacientesesquizofrênicos.

A amostra do paciente a ser analisada é tipicamente umafração contendo PAA de uma amostra de sangue contendo plaquetas. Noentanto, de acordo com a presente invenção, tornou-se possível pela primeiravez determinar a probabilidade da existência de esquizofrenia em umaamostra de plasma tomada de indivíduos analisados, sem a necessidade deprimeiro isolar PAA da amostra. Assim, de acordo com a invenção, a amostrade um paciente a ser analisado pode, ou ser uma amostra de plasma, ou umafração contendo PAA dela obtida por qualquer um dos processos conhecidosna técnica (por exemplo, pela obtenção de um plasma rico em plaquetas(PRP) e isolando-se dela PAA.

Uma vez que os peptídeos da invenção são capazes de seligarem, em uma extensão diferente, aos anticorpos derivados das plaquetasem uma amostra obtida de um paciente esquizofrênico, em comparação a umaamostra obtida de um indivíduo não esquizofrênico de controle, os peptídeospodem ser usados em um ensaio para o diagnóstico da esquizofrenia em umpaciente. Portanto, a presente invenção, mediante um aspecto adicional,provê um ensaio para o diagnóstico da esquizofrenia em um paciente,compreendendo as seguintes etapas:

(a) obter uma amostra do dito paciente, sendo uma amostra desangue, uma sua fração contendo plaquetas, ou uma fração contendoanticorpos associados a plaquetas (PAA) desprendidos das plaquetas;

(b) fazer contato da dita amostra com um peptídeo capaz deligar-se a anticorpos que são encontrados em níveis elevados nos fluidoscorporais de pacientes esquizofrênicos.

(c) determinar o nível de ligação do dito peptídeo à ditaamostra, um nível mais elevado do que o nível de ligação do dito peptídeo auma amostra de indivíduos não esquizofrênicos indicando que dito indivíduotem uma probabilidade de ter esquizofrenia.

Mediante uma outra modalidade, o peptídeo da etapa (b)acima é um peptídeo que se liga a anticorpos que são capazes de ligaçãoespecífica a um peptídeo que tenha a seqüência de aminoácidos da SEQ IDNO: 2. Mediante outra modalidade, o peptídeo da etapa (b) acimacompreende uma seqüência de a.a. selecionada do grupo consistindo de:

Mediante uma modalidade preferida, o peptídeo na etapa (b) éum peptídeo selecionado do grupo consistindo de:

i.SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 1)

ii.LWGLCTCQIKTGPAC (SEQ ID NO: 2)

iii.IADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 3)

iv.ADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 4)

v.DLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 5)

vi.LWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 6)

vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (SEQ ID NO: 7)

viii.LVVGLCTPQIKTGPACR (SEQ ID NO: 8)

i.SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 1)

ii.LVVGLCTCQIKTGPAC (SEQ ID NO: 2)

iii.IADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 3)

iv.ADLWGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 4)v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 5)

vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (SEQ ID NO: 6)

vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (SEQ ID NO: 7)

A presente invenção também provê um kit utilizável no ensaioacima. O kit da invenção compreende um suporte incluindo um ou maispeptídeos da invenção, imobilizados nele, e um anticorpo de imunoglobulinaanti-humana ou seu fragmento. O anticorpo anti-HIG pode ser combinadocom um marcador detectável ou, alternativamente, o kit pode tambémcompreender um segundo tipo de anticorpos direcionados contra ditosprimeiros anticorpos, em que os segundos anticorpos são combinados comum marcador detectável. O kit também incluirá vários reagentes necessários àrealização do ensaio, bem como instruções de uso.

A invenção será agora ilustrada na seguinte descrição nãolimitativa das modalidades específicas e dos desenhos anexos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1 é uma representação gráfica mostrando a atividadede ligação do Peptídeo 14 que tem a SEQ ID NO: 2 aos PAAs preparados dasamostras obtidas de pacientes esquizofrênicos (Figura IA) e de indivíduosnão esquizofrênicos (Figura 1B). O peptídeo que tem a SEQ ID NO: 9 foiusado como um controle negativo.

A Figura 2 é uma representação gráfica mostrando a atividadede ligação do Peptídeo 14 (SEQ ID NO: 2) às amostras de plasma obtidas depacientes esquizofrênicos (Figura 2A) e de indivíduos não esquizofrênicos(Figura 2B). O peptídeo que tem a SEQ ID NO: 9 foi usado como umcontrole negativo.

A Figura 3 é uma representação gráfica mostrando umaestrutura tridimensional prevista do epítopo antigênico dos peptídeos dainvenção, determinado por um programa computadorizado com base noscálculos da energia mínima.A Figura 4 é um raio-X de uma estrutura tridimensional deenolase gerada de uma base de dados de peptídeos pública e comparada como modelo de água dos peptídeos da invenção.

Os aminoácidos observados existirem no epítopo sãomarcados como segue:

L= leucinaA=alaninaP= prolinaR~=argininaK=hi stidina

EXEMPLOS

MATERIAIS E PROCESSOS

1. Auto-anticorpos de plaquetas e de anti-plaquetasSangue venoso (20 ml) foi retirado, com heparina comoanticoagulante, de pacientes e de indivíduos de controle. O plasma rico emplaquetas (PRP) foi obtido por centrifugação (100 g por 20 minutos) emtemperatura ambiente. As plaquetas livre de plasma foram obtidas mediantesua lavagem por três vezes com solução salina tamponada de fosfato (PBS)suplementada com 10 ml de EDTA mM como anticoagulante (4000 g; 15minutos; 4°C). Para o isolamento de anticorpos antiplaquetas, as plaquetasforam incubadas com glicina 0,1 M/EDTA 10 mM, pH 2,8, por 10 minutosem temperatura ambiente e, depois, centrifugadas (4000 g; 15 minutos; 4°C).O sobrenadante contendo os anticorpos antiplaquetas foi neutralizado comsolução de Na2PO4 saturada e armazenada em -20°C até a utilização.

2. Focalização isoelétrica preparativa

Os concentrados de plaquetas do grupo sangüíneo 0 foramcomprados de um banco de sangue local e lavados por três vezes comPBS/EDTA 10 mM (4000 g; 15 minutos; 4°C) até que o sobrenadante ficasselivre do plasma. As plaquetas (cerca de 20 concentrados) foramprimeiramente solubilizadas com 20 ml de Triton X-100 a 0,5%/NP40 a 0,5%em água por 15 minutos em temperatura ambiente, sob vibração branda. Asuspensão foi centrifugada (10000 g, 15 minutos, 4°C), o sobrenadante foiremovido e a pelota extraída por duas vezes mais com Triton X-100 a 0,1%em água. Os três sobrenadantes foram combinados e acrescentou-seAmpholyte® 3/10 (BioRad) até uma concentração final de 1%. Esta soluçãofoi carregada na câmara ROTOFOR® (capacidade de 60 ml) e a focalizaçãoisoelétrica preparativa foi então realizada de acordo com o manual deinstruções do fabricante (BioRad). Tipicamente, a focalização foi finalizadaapós 4,5 horas (10°C; potência constante de 10 Watts). Vinte frações foramcolhidas e o pH das frações foi determinado (gradiente de pH de 1,5-12). Asfrações foram armazenadas a -20°C até outra utilização.

3. Identificação de frações imunorreativas

As frações foram analisadas quanto à imunorreatividade poreletroforese em gel de poliacrilamida (10%), manchando-se as proteínas nasmembranas de PVDF e, verificando-se a membrana com 1 ml de auto-anticorpos em 50 ml de tampão de incubação. O Fc anti-humano combinadocom a peroxidase da raiz forte (cabra) da SIGMA (diluição de 1:500), e Fast-DAB® (SIGMA) ou 4-cloro-naftol (SIGMA) foram usados como reagente decor de modo a detectar anticorpos antiplaquetas humanos ligados. Aimunorreatividade foi observada nas frações com um pH variando de 6,0 a 10,0.

4. Eletroforese em gel de poliacrilamida preparativa (8%).

As frações imunorreativas (pH 6 a 10) foram combinadas eseparadas de acordo com o peso molecular, sob condições de redução,mediante gel de poliacrilamida de SDS preparativa (8% e 8 cm de altura) emuma PrepCell da BioRad, de acordo com o manual de instruções dofabricante. Frações (n = 400) de 1,5 ml foram coletadas: de dez em dezfrações uma fração foi analisada por eletroforese em gel de SDS, seguida pormanchamento de prata para determinar a distribuição do peso molecular nas400 frações.

5. Identificação de frações imunorreativasDe cinco em cinco frações, uma fração (0,1 ml) foi marcadapor manchas-ponto nas membranas de PVDF, usando-se o dispositivoDotBlot (96 reservatórios) da BioRad. As frações imunorreativas foram entãodetectadas como descrito acima (1.3).

6. Identificação de proteínas imunorreativas

Como descrito anteriormente, uma variedade de proteínasimunorreativas foram identificadas. A prioridade quanto à sequenciação foidada às proteínas com uma alta relação de reatividade para a quantidade deproteínas. A preparação da amostra foi tipicamente feita do seguinte modo:

As frações (± 10) ao redor de uma fração positiva foram re-analisadas comodescrito acima sob 1.5. As frações positivas foram combinadas, liofilizadas,re-separadas sobre um gel de poliacrilamida (10%) de SDS analítico (0,75mm) e manchadas com Azul de Coomassie. A banda foi excisada e enviada àEurosequence b.v. (digestão enzimática, separação por RP-HPLC dospeptídeos, seguida por sequenciação de aminoácidos.

7. Identificação do epítopo imunorreativo

Das proteínas identificadas, duas foram observadas seremcomercialmente disponíveis:

a) Gliceraldeído-6-fosfato desidrogenase (G6PD)

b) Enolase

Cerca de 10 mg de proteína foram digeridos ouenzimaticamente (Clostrapaína) ou quimicamente (CNBr) e os peptídeosresultantes foram separados por RP-HPLC. Alíquotas (20%) de todas asfrações foram enviadas pela Eurosequence b.v. ao Inventor Principal paraanálise da imunorreatividade, como descrito sob 1.5. Apenas a digestãoenzimática da Enolase resultou em um fragmento ativo que foisubseqüentemente sequenciado pela Eurosequence B.V.

8. Síntese dos peptídeos

Vários peptídeos foram sintetizados em Abimed 522 em umaescala de 10 micromoles pela Eurosequence b.v. Os peptídeos foramrotineiramente dissolvidos em 1 ml de água/DMF/DMSO (1:1:1; v/v/v). Ospeptídeos foram manchadas em linha r-as Diembraaas de PVDF e analisadosquanto à imunorreatividade, como descrito acima.

9. Varredura do epítopo

Modelos em água dos peptídeos da invenção foram calculadosem um sistema de computador Macintosh. Uma estrutura tridimensional deraio-X de enolase foi gerada de uma base de dados pública de peptídeos e asuperfície da enolase foi examinada para se encontrar os epítopos queunissem os epítopos dos peptídeos calculados pelo modelo de água.

EXEMPLO 1: Identificação de proteínas imunorreativas

As seguintes proteínas foram identificadas como aquelascapazes de ligarem-se a auto-anticorpos presentes em altos níveis empacientes esquizofrênicos em um alto nível, determinados pelo ensaiodescrito em 1.3 acima:

Proteína:

Gliceraldeído-6-fosfato desidrogenase

Enolase

queratina

fator de crescimento de hepatócitos

receptor sensível de cálcio extracelular

As proteínas acima identificadas foram analisadas quanto àsua capacidade de ligação a amostras de plasma obtidas de pacientesesquizofrênicos e a amostras de plasma obtidas de pacientes nãoesquizofrênicos de controle. Os resultados mostraram que não foi possívelusar as proteínas acima para discriminar entre uma amostra de plasma obtidade um paciente esquizofrênico e aquela obtida de um indivíduo nãoesquizofrênico, isto é, os resultados de ligação não foram conclusivos.

A atividade de ligação das duas enzimas acima foi analisadamediante sua reação com SDAs (preparados de amostras obtidas de pacientesesquizofrênicos) e com NSDA (preparado de indivíduos não esquizofrênicosde controle). Como observado na Tabela 1 abaixo, neste caso, a ligação dasproteínas aos SDAs foi substancialmente mais elevada do que sua ligação aosNSDAs expressos pelo número de amostras que· reagiram positivamente comcada uma das enzimas.

TABELA 1

Reatividade das proteínas aos SDAs e aos NSDAs

<table>table see original document page 16</column></row><table>

Os resultados acima mostraram que as proteínas obtidas deacordo com a invenção podem ser úteis no diagnóstico da esquizofrenia emum indivíduo examinado, mas requerem que a amostra obtida e analisada doindivíduo consista de anticorpos preparados derivados de plaquetas. Asenzimas não são adequadas para detectar a esquizofrenia diretamente em umaamostra de plasma.

EXEMPLO 2: Identificação do epítopo nas proteínas digeridas capazes deligação específica aos SDAs.

As digestões químicas (CNBr) e enzimáticas (Clostrapaína) deG-3-P-desidrogenase humana e enolase de coelho foram usadas paraidentificar o epítopo. Apenas a digestão enzimática da enolase revelou umpeptídeo que era imunologicamente ativo (aminoácidos de 372 a 399; opeptídeo tendo a SEQ ID NO: 1 na Tabela 2 a seguir), isto é, era capaz deligar-se a SDAs em uma extensão mais elevada, e sua capacidade de ligar-seaos NSDAs.

Com base na seqüência do epítopo identificado nas proteínasdigeridas, vários peptídeos foram sintetizados pelo processo descrito em 1.8acima. Os peptídeos sintetizados foram então avaliados quanto à suaatividade de ligação aos SDAs, em comparação com os NSDAs, comodescrito acima.

Como observado na Tabela 2 abaixo, vários dos peptídeossintetizados mostraram uma atividade de ligação substancialmente maiselevada aos SDAs, em comparação com sua ligação aos NSDAs (indicadacomo SIM na tabela), enquanto outros não mostraram diferençassignificativas em sua ligação com as amostras de indivíduos esquizofrênicose não esquizofrênicos (designadas como NÃO na tabela).

TABELA 2

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Dos peptídeos sintetizados, a SEQ ID NO: 2 dos peptídeosmostrou-se a mais apta a ligar-se com os anticorpos ligados em altos níveisem pacientes esquizofrênicos.

EXEMPLO 3: Caracterização da Seq ID No: 2 de peptídeos

A espectroscopia de massa de dessorção a laser da SEQ IDNO: 2 de Peptídeos (compreendendo três cisteínas) diretamente após asíntese, mostra a presença de um monômero sem a formação de um anelatravés das cisteínas. No entanto, após dissolução do peptídeo (cerca de 4mg) em 1 ml de água/DMF/DMSO (1:1:1, v:v:v) e deixando-se a soluçãodurante a noite em temperatura ambiente, o peptídeo forma um anel atravésde duas cisteínas, e um dímero através da cisteína livre remanescente.Nenhum polímero superior pôde ser detectado. Quando dos testes daatividade de ligação das duas formas do peptídeo ao SDA, tornou-se claroque a forma dimérica do peptídeo foi muito mais ativa nos SDAs de ligaçãodo que a forma não dimérica.

A análise química do peptídeo mediante redução, por exemplopor mercaptoetanol ou boroidreto de sódio, destruíram completamente aatividade imunológica, enquanto a oxidação, por exemplo ar ou oxigênio,restaurou a atividade imunológica.

EXEMPLO 4: Atividade de ligação da Seq ID No: 2 de peptídeos, àsamostras de indivíduos esquizofrênicos e não esquizofrênicos

A atividade de ligação do Peptídeo 14 (SEQ ID NO: 2) aPAAs isolados, foi analisada usando-se o processo descrito acima. Comoobservado na Figura IA, o peptídeo acima positivamente ligou-se a sete dosoito PAAs obtidos de diferentes pacientes esquizofrênicos. A Figura IBmostra que o peptídeo acima não se ligou aos PAAs obtidos de oito diferentesindivíduos não esquizofrênicos. A SEQ ID NO: 9 de peptídeos foi usadacomo um controle negativo.

A capacidade do Peptídeo 14 (SEQ ID NO: 2) de ligar-se aoSDA nas amostras de plasma obtidas de pacientes esquizofrênicos, foi entãoanalisada. Como se observa na Figura 2A, este peptídeo ligou positivamentea quatro dos cinco SDA de diferentes pacientes esquizofrênicos. A Figura 2Bmostra que o peptídeo acima não se ligou ao NSDA de quatorze dos quinzediferentes indivíduos não esquizofrênicos. O Peptídeo 14 (SEQ ID NO: 9) foiusado como um controle negativo.

EXEMPLO 5: Estrutura tridimensional

A estrutura tridimensional do epítopo antigênico dospeptídeos de acordo com a invenção, foi prevista usando-se um programacomputadorizado com base nos cálculos da energia mineral.

Como se observa na Figura 3, a estrutura prevista do epítopoantigênico é uma estrutura cíclica que compreende um núcleo hidrofóbico euma extensão que compreende cerca de duas cargas positivas. As extensõescarregadas positivamente podem ser posicionadas em uma das muitasorientações especiais possíveis.

EXEMPLO 6: Varredura da superfície da enolase, para encontrar epítoposque se unem aos epítopos calculados dos peptídeos

A estrutura tridimensional do modelo de água dos peptídeosda invenção, foi calculada. Uma estrutura tridimensional de raio-X de enolasegerada de uma base de dados pública de peptídeos, foi então examinada porvarredura e a posição dos aminoácidos dos peptídeos da invenção foicomparada com a posição dos aminoácidos da superfície de enolase para seobservar se um epítopo que una um ou mais dos epítopos calculados dospeptídeos da invenção poderia ser observado na superfície da enolase.

Como se observa na Figura 4, que é uma simulação decomputador da varredura da superfície da enolase, um epítopo foi observadona superfície da enolase, que é compreendido de um aglomerado deaminoácidos hidrofóbicos (Leucina, Alanina e Prolina) circundados poraminoácidos carregados positivamente (Arginina e Histidina) que une oepítopo simulado dos peptídeos da invenção. Assim sendo, a estruturaprevista do epítopo antigênico dos peptídeos da invenção deve, de fato serencontrada na superfície celular da enolase.LISTAGEM DAS SEQÜÊNCIAS

(1) INFORMAÇÃO GERAL:

(i) REQUERENTES:

(A) NOME: YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENTCOMPANY LTD.

(B) RUA: THE WEIZMANN INSTITUTE OF SCIENCE

(C) CIDADE: REHOVOT

(E) PAÍS: ISRAEL

(F) CÓDIGO POSTAL (ZIP): CAIXA POSTAL 95

(G) TELEFONE: +08 9470617

(H) TELEFAX: +08 9470739

(ii) TÍTULO DA INVENÇÃO: ENSAIO PARA ODISGNÓSTICO DA

ESQUIZOFRENIA COM BASE EM UM NOVO PEPTÍDEO

(iii) NÚMERO DE SEQÜÊNCIAS: 14

(iv) FORMA LEGÍVEL DE COMPUTADOR:

(A) TIPO DE MEIO: disco flexível

(B) COMPUTADOR: PC compatível IBM

(C) SISTEMA DE OPERAÇÃO: PC-DOS/MS-DOS

(D) SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, Versão #1.30 (EPO)

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 1:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 1:Ser Gly Glu Thr Glu Asp Thr Phe Ile Ala Asp Leu Val Val Gly Leu Cys1 5 10 15

Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro Cys Arg

20 25

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 2:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 2:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Cys Gln Ile Lys Thr Gly Pro Ala Cys15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 3:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum(ν) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 3:Ile Ala Asp Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro1 5 10 15

Cys Arg20

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 4:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 19 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 4:Ala Asp Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro15 10 15

Cys Arg

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 5:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 18 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum(ν) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 5:Asp Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro1 5 10 15

Cys Arg

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 6:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 17 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 6:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro Cys Arg15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 7:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 17 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 7:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Pro Ala Cys Arg15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 8:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 17 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 8:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Pro Gln Ile Lys Thr Gly Pro Ala Cys Arg15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 9:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 9:Ser Gly Glu Thr Glu Asp Thr Phe Ile Ala Asp Leu Val Val Gly Leu Cys15 10 15Thr Gly Gln20

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 10:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 10:

Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro Cys Arg1 5 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 11:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 12 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 11:Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro Cys Arg1 5 10

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 12:(i) CARACTERÍSTICAS DÁ SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 12:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro Cys15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 13:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidosrm TTPQ; aminoácido

(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 13:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Ala Pro15 10 15

(2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ. ID NO: 14:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQÜÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos

(B) TIPO: aminoácido(C) FILAMENTOS: desconhecido

(D) TOPOLOGIA: desconhecida

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: peptídeo

(iii) HIPOTÉTICO: nenhum

(iv) ANTI-SENTIDO: nenhum

(v) TIPO DE FRAGMENTO: interno

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQÜÊNCIA: SEQ. ID. NO: 14:Leu Val Val Gly Leu Cys Thr Gly Gln Ile Lys Thr Gly Pro Ala Cys1 5 10 15

Claims

1. Peptídeo, caracterizado pelo fato de que liga anticorpos quesão encontrados em níveis elevados em fluidos de corpo de pacientesesquizofrênicos e são capazes de se ligar especificamente a um peptídeopossuindo a seqüência de aminoácidos de Seq. ID No. 2.

2. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que liga anticorpos que são capazes de se ligar a um peptídeoselecionado a partir do grupo consistindo em:i. SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 1)ii.LVVGLCTCQIKTGPAC (Seq ID No: 2)iii.IADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 3)iv.ADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 4)v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 5)vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 6)vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (Seq ID No: 7) eviii.LVVGLCTPQIKTGPACR (Seq ID No: 8).

3. Peptídeo de acordo com qualquer uma reivindicação de 1 a-2, caracterizado pelo fato de que compreende uma seqüência de aminoácidoselecionada a partir do grupo consistindo em:i. SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 1)ii.LVVGLCTCQIKTGPAC (Seq ID No: 2)iii.IADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 3)iv.ADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 4)v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 5)vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 6)vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (Seq ID No: 7) eviii.LVVGLCTPQIKTGPACR (Seq ID No: 8).

4. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, que ligaanticorpos que são encontrados em elevados níveis em fluidos de corpo depacientes esquizofrênicos, caracterizado pelo fato de que compreende pelomenos um epítopo antigênico, o referido epítopo possuindo uma estruturacíclica tridimensional consistindo de um núcleo hidrofóbico e uma extensãocarregada positivamente.

5. Ensaio para o diagnóstico de esquizofrenia em umindivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas:(a) obter uma amostra a partir do indivíduo, sendo umaamostra de sangue, uma fração contendo plaqueta do mesmo, ou uma fraçãocontendo anticorpos associados à plaqueta (PAA) derivados das plaquetas;(b) contactar a referida amostra com um peptídeo tendo aseqüência de aminoácido de Seq ID No: 2;(c) determinar o nível de ligações do peptídeo à referidaamostra, um nível maior que o nível de ligação do peptídeo a uma amostra deindivíduos não esquizofrênicos indicando que o indivíduo possui uma grandeprobabilidade de possuir esquizofrenia.

6. Ensaio de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelofato de que o peptídeo na etapa (b) é um peptídeo selecionado a partir dogrupo consistindo de:i. SGETEDTFIADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 1)ii. LVVGLCTCQIKTGPAC (Seq ID No: 2)iii.IADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 3)iv.ADLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 4)v.DLVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 5)vi.LVVGLCTGQIKTGAPCR (Seq ID No: 6)vii.LVVGLCTGQIKTGPACR (Seq ID No: 7) eviii.LVVGLCTPQIKTGPACR (Seq ID No: 8).

7. Ensaio de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelofato de que o peptídeo na etapa (b) é um peptídeo como definido nareivindicação 4.

8. Ensaio de acordo com qualquer uma das reivindicações de 5a 7, caracterizado pelo fato de que a amostra obtida a partir do indivíduo éuma amostra de sangue total.

9. Kit para uso no diagnóstico de esquizofrenia, caracterizadopelo fato de que compreende:i. um suporte compreendendo um ou mais peptídeos comodefinido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 4 imobilizados nomesmo;ii. um anticorpo anti-imunoglobulina humana ou fragmento domesmo que mantém as características ligantes do anticorpo completo, o ditoanticorpo ou fragmento do mesmo conjugado a um marcador detectável;iii. reagentes requeridos para realizar o ensaio, e;iv. instruções para uso.