BR112021010919A2 - Moduladores de trex1 - Google Patents

Abstract

MODULADORES DE TREX1. A presente invenção refere-se a compostos de Fórmula (I): (I); e a sais e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, que são úteis para o tratamento de uma variedade de condições associadas a TREX1.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MODU- LADORES DE TREX1".

PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório U.S. 62/776301 depositado em 6 de dezembro de 2018, cujo conteúdo in- teiro é incorporado neste documento por referência.

FUNDAMENTOS

[002] Uma terapia imunológica potencial é necessária para cân- ceres relacionados ao reconhecimento do não-eu pelo sistema imuno- lógico inato e para detectar e proteger contra o perigo potencial. As células cancerígenas diferem antigenicamente de suas contrapartes normais e emitem sinais de perigo para alertar o sistema imunológico de forma semelhante à infecção viral. Esses sinais, que incluem pa- drões moleculares associados a danos (DAMPs) e padrões molecula- res associados a patógenos (PAMPs), ativam ainda mais o sistema imunológico inato, resultando na proteção do hospedeiro de uma vari- edade de ameaças (Front. Cell Infect. Microbiol. 2012, 2, 168).

[003] DNA de fita simples expresso ectopicamente (ssDNA) e DNA de fita dupla (dsDNA) são PAMPs e / ou DAMPs conhecidos, que estão sendo reconhecidos pela GMP-AMP sintase cíclica (cGAS), um sensor de ácido nucleico (Nature 2011, 478, 515- 518). Após a detec- ção de DNA citosólico, cGAS catalisa a geração do dinucleotídeo cícli- co 2',3'-cGAMP, um segundo mensageiro potente e ativador do esti- mulador de proteína adaptadora transmembranar ER de genes de in- terferon (STING) (Cell Rep. 2013, 3, 1355-1361). A ativação de STING desencadeia a fosforilação de IRF3 via TBK1 que, por sua vez, leva à produção de interferon tipo I e ativação de genes estimulados por in- terferon (ISGs); um pré-requisito para a ativação da imunidade inata e início da imunidade adaptativa. A produção de interferons tipo I, por- tanto, constitui uma ponte chave entre a imunidade inata e adaptativa

(Science 2013, 341, 903-906).

[004] O excesso de IFN tipo I pode ser prejudicial ao hospedeiro e induzir autoimunidade, portanto, existem mecanismos de feedback negativo que mantêm a ativação imunológica mediada por IFN tipo I sob controle. A exonuclease I de três reparos primários (TREX1) é uma exonuclease de DNA 3'-5' responsável pela remoção de ssDNA e dsDNA expressos ectopicamente e é, portanto, um repressor chave da via cGAS / STING (PNAS 2015, 112, 5117-5122).

[005] Os interferons do tipo I e as respostas de citocinas pró- inflamatórias a jusante são essenciais para o desenvolvimento de res- postas imunológicas e sua eficácia. Os interferons do tipo I aumentam a capacidade das células dendríticas e macrófagos de captar, proces- sar, apresentar e apresentar antígenos de forma cruzada para as célu- las T e sua potência para estimular as células T, provocando a suprar- regulação das moléculas coestimulatórias, como CD40, CD80 e CD86 (J. Exp. Med. 2011, 208, 2005-2016). Os interferons do tipo I também se ligam aos seus próprios receptores e ativam genes responsivos ao interferon que contribuem para a ativação de células envolvidas na imunidade adaptativa (EMBO Rep. 2015, 16, 202-212).

[006] De uma perspectiva terapêutica, os interferons tipo I e compostos que podem induzir a produção de interferon tipo I têm po- tencial para uso no tratamento de cânceres humanos (Nat. Rev Immu- nol. 2015, 15, 405-414). Os interferons podem inibir a proliferação de células tumorais humanas diretamente. Além disso, os interferons do tipo I podem aumentar a imunidade antitumoral, desencadeando a ati- vação de células do sistema imunológico inato e adaptativo. É impor- tante ressaltar que a atividade antitumoral do bloqueio de PD-1 requer células T intratumorais pré-existentes. Ao transformar tumores frios em quentes e, assim, desencadear uma imunidade antitumoral espontâ- nea, as terapias indutoras de IFN tipo I têm o potencial de expandir o grupo de pacientes que respondem à terapia anti-PD-1, bem como aumentar a eficácia da terapia anti-PD1.

[007] As terapias que estão atualmente em desenvolvimento que induzem uma resposta potente do interferon tipo I requerem adminis- tração focal ou intratumoral para atingir um índice terapêutico aceitá- vel. Assim, permanece a necessidade de novos agentes com distribui- ção sistêmica e menor toxicidade para expandir o benefício das terapi- as indutoras de IFN tipo I para pacientes sem lesões acessíveis para tratamento periférico. Estudos genéticos em humanos e camundongos sugerem que a inibição de TREX1 pode ser passível de uma via de distribuição sistêmica e, portanto, os compostos inibidores de TREX1 podem desempenhar um papel importante no cenário da terapia anti- tumoral. TREX1 é um determinante chave para a imunogenicidade li- mitada de células cancerígenas que respondem ao tratamento de ra- diação [Trends in Cell Biol., 2017, 27 (8), 543-4; Nature Commun., 2017, 8, 15618]. TREX1 é induzido por estresse genotóxico e envolvi- do na proteção de células de glioma e melanoma a drogas anticâncer [Biochim. Biophys. Acta, 2013, 1833, 1832-43]. A terapia com STACT- TREX1 mostra eficácia antitumoral robusta em modelos de câncer mu- rino múltiplos [Glickman et al, Poster P235, 33rd Annual Meeting of So- ciety for Immunotherapy of Cancer, Washington DC, Nov. 7-11, 2018].

SUMÁRIO

[008] As modalidades aqui descritas geralmente se referem a agentes, compostos, composições e métodos para o tratamento de doenças responsivas a inibidores de TREX1. Os inibidores de TREX1 seletivos sobre os inibidores de TREX2 foram sintetizados com suces- so nesta invenção.

[009] São fornecidos aqui compostos com a Fórmula I:

(I); e sais e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que A, R1, R2 e n são como aqui descritos. Os compostos e composi- ções divulgados modulam TREX1 e são úteis em uma variedade de aplicações terapêuticas, como, por exemplo, no tratamento do câncer.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0010] FIG. 1A ilustra os resultados de uma experiência de knock down de TREX1 em células tumorais B16F10 usando CRISPR.

[0011] FIG. 1B ilustra que TREX1 atenuou a ativação da via cGAS / STING em células tumorais B16F10.

[0012] FIG. 2: ilustra que os tumores nos quais o TREX foi silenci- ado tinham volumes menores em comparação com os tumores B16F10 parentais.

[0013] FIG. 3: mostra que os tumores B16F10 nocaute para TREX1 exibiram um aumento significativo nas células imunes em ge- ral. Isso refletiu um aumento no número de células T CD4 e CD8 que se infiltram no tumor, bem como em células dendríticas plasmocitoides (pDCs).

[0014] FIG. 4: mostra a atividade de certos compostos da invenção na linhagem de células de carcinoma colorretal humano HCT116.

DESCRIÇÃO DETALHADA

1. Descrição geral dos compostos

[0015] Em uma primeira modalidade, é fornecido aqui um compos- to de Fórmula I:

(I); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, cicloal- quila de 3 a 4 membros, -ORf, -SRf, ou -NReRf; R2 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, ou ciclo- alquila de 3 a 4 membros; X é uma ligação, NR3, O, S, ou (C1-C4)alquileno, em que a referida (C1-C4)alquileno é opcionalmente substituída por 1 a 2 grupos selecionados de R4; R3 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, -C(O)Rd, ou -C(S)Rd; R4 é halo, (C1-C4)alquila, fenila, -NHC(O)ORa, -NHC(S)ORa, -C(O)Rb,-NHC(O)NHRg, -NHC(S)NHRg, -NHS(O)2NHRg, -C(S)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, -C(S)ORd, -C(O)NHRe, -C(S)NHRe, - NHC(O)Rd, -NHC(S)Rd, -ORe, -SRe, -O(C1-C4)alquilORe, ou -NReRf, em que a referida fenila para R4 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, e halo(C1-C4)alcóxi; Anel A é fenila, heteroarila de 5 a 6 membros, heterociclila de 4 a 7 membros, ou cicloalquila de 3 a 7 membros, cada uma das quais é opcionalmente e independentemente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de R5; R5 é (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alcóxi, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -NHC(S)ORa, -C(O)Rb,-NHC(O)NHRg, - NHC(S)NHRg, -NHS(O)2NHRg, -C(S)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, - C(S)ORd, -C(O)NReRf, -C(S)NHRe, -NHC(O)Rd, -NHC(S)Rd, -ORe, - SRe, -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou he-

terociclila de 4 a 7 membros, em que a referida fenila para R5 é opcio- nalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, a referida (C1-C4)alquila para R5 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de ORh, -NRjRk, fenila e heteroarila de 5 a 6 membros, a referida heterociclila de 4 a 7 membros e heteroarila de 4 a 6 membros são opcionalmente e independentemente substituídas por 1 ou 2 gru- pos selecionados de Rm, e em que a referida fenila e heteroarila de 5 a 6 membros dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg; Rg, Rh, Rj, Rk, e Rm são cada um independentemente hidro- gênio, halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, halo(C1- C4)alcóxi, fenil -(C1-C4)alquilfenila, cicloalquila de 3 a 4 membros, hete- roarila de 4 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, e em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros para Rg, Rh, Rj e Rk é ainda opcionalmente substituída por =O. Ra, Rb, Rc, Rd, Re e Rf são cada um independentemente hi- drogênio, halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ha- lo(C1-C4)alcóxi, fenila, cicloalquila de 3 a 4 membros, heteroarila de 4 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que i) a referida (C1- C4)alquila para Ra, Rb, Rc, Rd, Re e Rf é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, –ORh, -NRjRk; ii) a referida fenila, heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 4 a 7 membros para Ra, Rb, Rc, Rd, Re, e Rf são cada um opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, e iii) a referida he- terociclila de 4 a 7 membros para Ra, Rb, Rc, Rd, Re, e Rf é ainda opci- onalmente substituída por = O.

2. Definições

[0016] Quando usado em conexão para descrever um grupo quí- mico que pode ter vários pontos de ligação, um hífen (-) designa o ponto de ligação desse grupo à variável para o qual está definido. Por exemplo, -NHC(O)ORa e -NHC(S)ORa significam que o ponto de liga- ção para este grupo ocorre no átomo de nitrogênio.

[0017] Os termos "halo" e "halogênio", referem-se a um átomo se- lecionado de flúor (fluoro, -F), cloro (cloro, -Cl), bromo (bromo, -Br) e iodo (iodo, -I).

[0018] O termo "alquila" quando usado sozinho ou como parte de uma fração maior, tal como "haloalquila" e semelhantes, significa radi- cal de hidrocarboneto monovalente saturado de cadeia linear ou rami- ficada. A menos que especificado de outra forma, um grupo alquil tipi- camente possui 1-4 átomos de carbono, isto é, (C1-C4)alquila.

[0019] O termo "alquileno" refere-se a um hidrocarboneto saturado divalente.

[0020] "Alcóxi" significa um radical alquil ligado por meio de um átomo de ligação de oxigênio, representado por -O-alquila. Por exem- plo, "(C1-C4)alcóxi" inclui metóxi, etóxi, proproxi e butóxi.

[0021] O termo "haloalquila" inclui grupos mono, poli e perhaloal- quila em que os halogênios são independentemente selecionados de flúor, cloro, bromo e iodo.

[0022] "Haloalcóxi" é um grupo haloalquil que está ligado a outra fração por meio de um átomo de oxigênio, como, por exemplo, mas não está limitado a –OCHCF2 ou –OCF3.

[0023] O termo "heteroarila" usado sozinho ou como parte de uma fração maior refere-se a um radical aromático de 5 a 6 membros con- tendo 1-4 heteroátomos selecionados de N, O e S. Heteroaril inclui, por exemplo, tienila, furanila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila, tiazolila, isotiazolila, tia- diazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, etc. Será entendido que quando especificado, substituintes opcionais em um grupo hetero- arila podem estar presentes em qualquer posição substituível.

[0024] O termo "heterociclila" significa um anel heterocíclico satu- rado ou parcialmente insaturado de 4 a 7 membros contendo 1 a 4 he- teroátomos independentemente selecionados de N, O e S. Um anel heterociclila pode ser anexado ao seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulta em uma estrutura está- vel. Exemplos de tais radicais heterocíclicos saturados ou parcialmente insaturados incluem, sem limitação, tetra-hidrofuranila, tetra- hidrotienila, tetrahidropiranila, pirrolidinila, piridinonila, pirrolidonila, pi- peridinila, oxazolidinila, piperazinila, dioxanila, dioxolanila, morfolinila, di-hidrofuranila, di-hidropiranila, di-hidropiridinila, tetra-hidropiridinila, di-hidropirimidinila, oxetanila, azetidinila e tetra-hidropirimidinila. Tam- bém será entendido que quando especificado, substituintes opcionais em um grupo heterociclil podem estar presentes em qualquer posição substituível e, incluem, por exemplo, a posição na qual o heterociclila está ligado (por exemplo, no caso de um heterociclila ou heterociclila opcionalmente substituída que é opcionalmente substituída).

[0025] O termo "cicloalquila" refere-se a um hidrocarboneto cíclico tendo de, a menos que especificado de outra forma, 3 a 10 átomos de carbono no anel. Os grupos monocíclico preferidos incluem, sem limi- tação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-heptila, ciclo-heptenila e ciclo-octila. Será entendi- do que quando especificado, substituintes opcionais em um grupo ci- cloalquila ou cicloalifático podem estar presentes em qualquer posição substituível e, incluem, por exemplo, a posição na qual o grupo cicloal- quila ou cicloalifático está ligado.

[0026] O termo "TREX1" refere-se a três exonuclease 1 de reparo primário ou exonuclease 1 de reparo de DNA, que é uma enzima que em humanos é codificada pelo gene TREX1. Mazur DJ, Perrino FW (Aug 1999). "Identification and expression of the TREX1 and TREX2 cDNA sequences encoding mammalian 3'-->5' exonucleases". J Biol

Chem. 274 (28): 19655–60. doi:10.1074/jbc.274.28.19655. PMID 10391904; Hoss M, Robins P, Naven TJ, Pappin DJ, Sgouros J, Lindahl T (Aug 1999). "A human DNA editing enzyme homologous to the Escherichia coli DnaQ/MutD protein". EMBO J. 18 (13): 3868–75. doi:10.1093/emboj/18.13.3868. PMC 1171463. PMID 10393201. Este gene codifica a principal exonuclease de DNA 3'-> 5' em células hu- manas. A proteína é uma exonuclease não processual que pode servir como uma função de revisão para uma DNA polimerase humana. É também um componente do complexo SET e atua degradando rapi- damente as extremidades 3' do DNA cortado durante a morte celular mediada pela granzima A. Células sem TREX1 funcional mostram ati- vação de ponto de verificação de dano crônico ao DNA e acúmulo ex- tra-nuclear de um substrato de DNA de fita simples endógeno. Parece que a proteína TREX1 normalmente atua em uma espécie de polinu- cleotídeo de DNA de fita simples gerada a partir do processamento de intermediários de replicação aberrantes. Esta ação de TREX1 atenua a sinalização do ponto de verificação de danos ao DNA e evita a ativa- ção imune patológica. TREX1 metaboliza DNA de fita simples transcri- to reversamente de retroelementos endógenos como uma função da vigilância antiviral intrínseca da célula, resultando em uma resposta potente de IFN tipo I. O TREX1 ajuda o HIV-1 a evitar a detecção cito- sólica, degradando o cDNA viral no citoplasma.

[0027] O termo "TREX2" refere-se à três exonuclease 2 de reparo primário é uma enzima que em humanos é codificada pelo gene TREX2. Este gene codifica uma proteína nuclear com atividade de exonuclease 3' a 5'. A proteína codificada participa do reparo de que- bra de DNA de fita dupla e pode interagir com a DNA polimerase delta. Enzimas com esta atividade estão envolvidas na replicação, reparo e recombinação do DNA. TREX2 é uma exonuclease 3' que é predomi- nantemente expressa em queratinócitos e contribui para a resposta epidérmica ao dano ao DNA induzido por UVB. As propriedades bio- químicas e estruturais de TREX2 são semelhantes às de TREX1, em- bora não sejam idênticas. As duas proteínas compartilham uma estru- tura dimérica e podem processar substratos de ssDNA e dsDNA in vi- tro com valores kcat quase idênticos . No entanto, várias características relacionadas à cinética enzimática, domínios estruturais e distribuição subcelular distinguem TREX2 de TREX1. TREX2 apresenta uma afini- dade 10 vezes menor para substratos de DNA in vitro em comparação com TREX1. Em contraste com TREX1, TREX2 carece de um domínio COOH-terminal que pode mediar as interações proteína-proteína. TREX2 está localizado no citoplasma e no núcleo, enquanto TREX1 é encontrado no retículo endoplasmático e é mobilizado para o núcleo durante a morte celular mediada pela granzima A ou após dano ao DNA.

[0028] Os termos "indivíduo" e "paciente" podem ser usados inter- cambiavelmente e significam um mamífero em necessidade de trata- mento, por exemplo, animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e semelhantes), animais de fazenda (por exemplo, vacas, porcos, ca- valos, ovelhas, cabras e semelhantes) e animais de laboratório (por exemplo, ratos, camundongos, porquinhos-da-índia e semelhantes). Tipicamente, o indivíduo é um humano que precisa de tratamento.

[0029] O termo "inibir", "inibição" ou "inibindo" inclui uma diminui- ção na atividade de linha de base de uma atividade ou processo bioló- gico.

[0030] Conforme usado neste documento, os termos "tratamento", "tratar" e "tratando" referem-se a reverter, aliviar, retardar o início ou inibir o progresso de uma doença ou distúrbio, ou um ou mais sinto- mas dos mesmos, conforme descrito neste documento. Em alguns as- pectos, o tratamento pode ser administrado após um ou mais sintomas terem se desenvolvido, isto é, tratamento terapêutico. Em outros as-

pectos, o tratamento pode ser administrado na ausência de sintomas. Por exemplo, o tratamento pode ser administrado a um indivíduo sus- cetível antes do início dos sintomas (por exemplo, à luz de um histórico de sintomas e / ou à luz da exposição a um organismo específico, ou outros fatores de suscetibilidade), ou seja, tratamento profilático. O tra- tamento também pode ser continuado após os sintomas terem se re- solvido, por exemplo, para retardar sua recorrência.

[0031] O termo "transportador farmaceuticamente aceitável" se refere a um transportador, adjuvante ou veículo não tóxico que não destrói a atividade farmacológica do composto com o qual ele é formu- lado. Transportadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente acei- táveis que podem ser usados nas composições descritas aqui incluem, mas não estão limitados a, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tal como albumina sérica humana, substâncias tampão, tal como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicerida parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tal como sulfato de protamina, dis- sódio hidrogênio fosfato, potássio hidrogênio fosfato, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolido- na, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, sódio carboxime- tilcelulose, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno- polioxipropileno, polietileno glicol e gordura de lã.

[0032] Para uso em medicamentos, os sais dos compostos descri- tos aqui se referem a "sais farmaceuticamente aceitáveis" não tóxicos. Formas de sal farmaceuticamente aceitáveis incluem sais acídi- cos/aniônicos ou básicos/catiônicos farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos neste documento incluem, por exemplo, sais de ácidos inor- gânicos (como ácido clorídrico, ácido bromídrico, fosfórico, nítrico e sulfúrico) e de ácidos orgânicos (como ácido acético, benzenossulfôni-

co, benzoico, metanossulfônico e ácidos p-toluenossulfônicos). Os compostos dos presentes ensinamentos com grupos acídicos, tais co- mo ácidos carboxílicos, podem formar sais farmaceuticamente aceitá- veis com base(s) farmaceuticamente aceitável(is). Os sais básicos farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem, por exemplo, sais de amônio, sais de metais alcalinos (tais como sais de sódio e potás- sio) e sais de metais alcalino-terrosos (tais como sais de magnésio e cálcio). Os compostos com um grupo de amônio quaternário também contêm um contra-ânion, como cloreto, brometo, iodeto, acetato, per- clorato e semelhantes. Outros exemplos de tais sais incluem cloridra- tos, bromidratos, sulfatos, metanossulfonatos, nitratos, benzoatos e sais com aminoácidos, tais como ácido glutâmico.

[0033] O termo "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeutica- mente eficaz" refere-se a uma quantidade de um composto aqui des- crito que irá provocar uma resposta biológica ou médica desejada ou benéfica de um indivíduo, por exemplo, uma dosagem entre 0,01 - 100 mg / kg de peso corporal / dia.

3. Compostos

[0034] Em uma segunda modalidade, é fornecido aqui um com- posto de Fórmula II: (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que as variá- veis são conforme descritas acima na primeira modalidade.

[0035] Em uma terceira modalidade, R2 é (C1-C4)alquil nos com- postos de Fórmula I ou II.

[0036] Em uma quarta modalidade, é fornecido aqui um composto de Fórmula III: (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que as variá- veis são conforme descritas acima na primeira, segunda ou terceira modalidade.

[0037] Em uma quinta modalidade, o anel A nos compostos de Fórmula I, II, ou III é fenila, piridila, pirazolila, ciclopropila, ciclobutila, azetidinila ou piperidinila, cada uma das quais sendo opcional e inde- pendentemente substituída por um ou dois R5, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, ter- ceira ou quarta modalidade. Alternativamente, como parte de uma quinta modalidade, o anel A nos compostos de Formula I, II, ou III é triazolila, pirrolidinila, diazepanila ou piperazinila, cada uma das quais sendo opcional e independentemente substituída por um ou dois R5, em que as variáveis restantes são como descritas acima para a primei- ra, segunda, terceira ou quarta modalidade.

[0038] Em uma sexta modalidade, R5 nos compostos de Fórmula I, II, ou III é (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alcóxi, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, - C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, -ORe, -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referi- da fenila para R5 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos seleci- onados de Rg, a referida (C1-C4)alquila para R5 é opcionalmente substi- tuída por 1 ou 2 grupos selecionados de –ORh, -NRjRk, fenila e hetero- arila de 5 a 6 membros, a referida heteroarila de 4 a 6 membros e he- terociclila de 4 a 7 membros são opcionalmente e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rm, e em que a referi- da fenila e heteroarila de 5 a 6 membros dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e indepen- dentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg; Ra é (C1-C4)alquila opcionalmente substituída por fenila; Rb é (C1-C4)alquila, fenila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referida (C1-C4)alquila é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, –ORh, e -NRjRk, em que a referida fenila, heteroarila de 5 a 6 membros e heterociclila de 4 a 7 membros são, cada uma, opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, e em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros é ainda opcionalmente substituída por = O; cada Rc é inde- pendentemente fenila ou (C1-C4)alquila; cada Rd é hidrogênio ou (C1- C4)alquila; cada Re é independentemente hidrogênio ou (C1-C4)alquila opcionalmente substituída por ORh; cada Rf é independentemente hi- drogênio, (C1-C4)alquila, fenil cicloalquila de 3 a 4 membros, heteroari- la de 4 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, em que a refe- rida fenila, cicloalquila de 3 a 4 membros, heteroarila de 4 a 6 mem- bros e heterociclila de 5 a 6 membros são, cada uma, opcional e inde- pendentemente substituídas por Rg; cada Rg é independentemente (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, halo(C1-C4)alcóxi, ou halo; cada Rh é hidrogênio, (C1-C4)alquila, ou -(C1-C4)alquilfenila; cada Rj é independentemente hidrogênio ou (C1-C4)alquila; cada Rk é inde- pendentemente hidrogênio, (C1-C4)alquila, ou cicloalquila de 3 a 4 membros; e cada Rm é (C1-C4)alquila, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta ou quinta modalidade.

[0039] Em uma sétima modalidade, R5 nos compostos de Fórmula I, II, ou III é (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, halo, fenila, - NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, -C(O)ORd, -C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, -

O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou heteroci- clila de 5 a 6 membros, em que a referida (C1-C4)alquila para R5 is op- cionalmente substituída por –ORh, fenila, ou heteroarila de 5 a 6 mem- bros, a referida heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 5 a 6 membros são opcionalmente e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rm, e em que a referida fenila e heteroari- la de 5 a 6 membros dos substituintes opcionais listados para (C1- C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substi- tuídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, em que as variáveis res- tantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta ou sexta modalidade.

[0040] Em uma oitava modalidade, R5 nos compostos de Fórmula I, II, ou III é (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, halo, fenila, - NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, -C(O)ORd, -C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, ou -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, morfolinila, piperazinila ou pirazolila, em que a referida morfolinila, piperazinila e pirazolila são, cada uma, opcionalmente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rm, a referida (C1-C4)alquila para R5 e opcionalmente substituída por –ORh, fenila, pirazolila, pirimidinila ou piridinila, e em que a referida fenila, pi- razolila, pirimidinila e piridinil dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, em que as variá- veis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade.

[0041] Em uma nona modalidade, cada Rf nos compostos de Fór- mula I, II, ou III é independentemente hidrogênio, (C1-C4)alquila, fenil pirazolila, piridinila, tetra-hidropiranila, piperidinila, em que a referida fenil pirazolila, piridinila, tetra-hidropiranila e piperidinila são, cada uma, opcional e independentemente substituídas por (C1-C4)alquila, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima ou oitava mo- dalidade.

[0042] Em uma décima modalidade, cada Rg nos compostos de Fórmula I, II, ou III é independentemente (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ou halo, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava ou nona modalidade.

[0043] Em uma décima primeira modalidade, Rb nos compostos de Fórmula I, II, ou III é (C1-C4)alquila, fenila, heteroarila de 5 a 6 mem- bros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referida fenila e he- teroarila de 5 a 6 membros para Rb são cada uma opcional e indepen- dentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de halo e (C1- C4)alcóxi, em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros para Rb é opcionalmente substituída por = O, e em que a referida (C1-C4)alquila para Rb é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, -ORh, e –NRjRk, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sex- ta, sétima, oitava, nona ou décima modalidade.

[0044] Em uma décima segunda modalidade Rk nos compostos de Fórmula I, II, ou III é independentemente hidrogênio ou (C1-C4)alquila, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidade.

[0045] Em uma décima terceira modalidade, Rb nos compostos de Fórmula I, II, ou III é (C1-C4)alquila, fenila, piridinila, pirazolila, pirimi- dinila ou piperidinila, em que a referida fenila, piridinila, pirazolila e pi- rimidinila para Rb são cada uma opcional e independentemente substi- tuídas por 1 ou 2 grupos selecionados de halo e (C1-C4)alcóxi, em que a referida (C1-C4)alquila para Rb é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, OH e NMe2, e em que a referida piperi-

dinila para Rb é opcionalmente substituída por = O, em que as variá- veis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade.

[0046] Em uma décima quarta modalidade, R3 nos compostos de Fórmula I, II, ou III é hidrogênio, em que as variáveis restantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda ou décima terceira modalidade.

[0047] Em uma décima quinta modalidade, R4 nos compostos de Fórmula I, II, ou III é fenila ou -NHC(O)ORa, em que as variáveis res- tantes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira ou décima quarta modalidade.

[0048] Em uma décima sexta modalidade, X nos compostos de Fórmula I, II, ou III é uma ligação ou CH2, em que as variáveis restan- tes são conforme descrito acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda ou décima terceira modalidade.

[0049] Também são fornecidas neste documento composições farmacêuticas que compreendem 1) um composto com a Fórmula I: (I); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que as variá- veis são conforme descritas acima para a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidade; e 2) um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0050] Os compostos com a Fórmula I são ainda divulgados na Exemplificação e estão incluídos na presente divulgação. Estão incluí- dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, bem como as formas neutras.

4. Usos, Formulação e Administração

[0051] Os compostos e composições aqui descritos são geralmen- te úteis para modular a atividade de TREX1. Em alguns aspectos, os compostos e composições farmacêuticas aqui descritos inibem a ativi- dade de TREX1.

[0052] Em alguns aspectos, os compostos e composições farma- cêuticas aqui descritos são úteis no tratamento de um distúrbio asso- ciado à função TREX1. Assim, são fornecidos aqui métodos de trata- mento de um distúrbio associado à função TREX1, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo, uma quantida- de terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farma- cêutica compreendendo um composto divulgado ou sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo. Também é fornecida a utilização de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo um com- posto divulgado ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio as- sociado à função TREX1. Também é fornecido um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de um distúrbio associado a TREX1.

[0053] Em alguns aspectos, os compostos e composições farma- cêuticas aqui descritos são úteis no tratamento do câncer.

[0054] Em alguns aspectos, o câncer tratado pelos compostos e composições farmacêuticas aqui descritos é selecionado de câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de tireoide, câncer de pulmão, leucemia, câncer pancreático, melanoma, melanoma múltiplo, câncer cerebral, câncer do CNS, câncer renal, câncer de próstata, câncer de ovário, leucemia e câncer de mama.

[0055] Em alguns aspectos, o câncer tratado pelos compostos e composições farmacêuticas aqui descritos é selecionado de câncer de pulmão, câncer de mama, câncer pancreático, câncer colorretal e me- lanoma.

[0056] Em certos aspectos, uma composição farmacêutica aqui descrita é formulada para administração a um paciente em necessida- de de tal composição. As composições farmacêuticas aqui descritas podem ser administradas por via oral, por via parentérica, por pulveri- zação de inalação, topicamente, por via retal, nasal, bucalmente, via vaginal ou via um reservatório implantado. O termo "parenteral", como usado neste documento, inclui injeção subcutânea, intravenosa, intra- muscular, intra-articular, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intra- hepática, intralesional e intracraniana ou técnicas de infusão. Em al- gumas modalidades, as composições são administradas por via oral, intraperitoneal ou intravenosa. As formas injetáveis estéreis das com- posições farmacêuticas aqui descritas podem ser suspensões aquosas ou oleaginosas. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas na técnica usando dispersantes ou umectan- tes e agentes de suspensão adequados.

[0057] Em alguns aspectos, as composições farmacêuticas são administradas por via oral.

[0058] Uma dosagem específica e regime de tratamento para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, pe- so corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação de drogas e o julgamento do médico assistente e a gravidade da doença específica a ser tratada. A quantidade de um composto descrito aqui a composição também dependerá do compos- to particular na composição farmacêutica.

EXEMPLIFICAÇÃO Síntese química

[0059] Os exemplos representativos que se seguem se destinam a ajudar a ilustrar a presente divulgação e não se destinam a, nem de- vem ser interpretados como, limitando o escopo da invenção. Esquema sintético geral xileno, refluxo

[0060] 2-(3-bromo-5-metilfenil)-5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida xileno, refluxo

Etapa 1: Síntese de 3-(3-bromo-5-metilfenil)-5-(2-metóxi-2-oxoetil)- 2-metil-2,5-di-hidro-1,2,4-oxadiazol-5-carboxilato de metila

[0061] A uma solução agitada de SM (5,16 g, 26,341 mmol, 2 equiv), cloridrato de N-metil-hidroxilamina (1,10 g, 13,170 mmol, 1,00 equiv) em H2O (25,00 mL), EtOH (25,00 mL) foi adicionado Na2CO3 (0,837 g, 7,902 mmol, 0,6 equiv) em porções à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada durante 2 horas a 80 oC. Até a mistura de reação ser resfriada à temperatura ambiente, 1,4-dimetil but-2- inadioato (2,06 g, 14,488 mmol, 1,1 equiv) foi adicionado gota a gota. Em seguida, a mistura de reação foi agitada durante 0,5 h à tempera- tura ambiente. A solução resultante foi extraída com 3x30 mL de ace- tato de etila e as camadas orgânicas combinadas lavadas com sal- moura e concentradas sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma co- luna de sílica gel com éter de petróleo/acetato de etil (1:5). Isso resul- tou em 1,3 g de A1 (25% de rendimento) como um óleo amarelo claro.

ESI-MS m/z = 385,0 [M+H]+. MW calculado: 384,0. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,67 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,49 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,45 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 3,19 (s, 3H), 3,07 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 2,38 (d, J = 0,8 Hz, 3H).

[0062] Os seguintes intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, juntamente com os materiais de partida apropriados.

Tabela 1 Intermediá- Estrutura Nome LCMS rio 3-ciclobutil-5-(2-metóxi-2- ESI-MS m/z = oxoetil)-2-metil-2,5-di- 271,1 [M+H]+. A2 hidro-1,2,4-oxadiazol-5- MW calculado: carboxilato de metila 270,1 O 3-ciclopropil-5-(2-metóxi- ESI-MS m/z =

O O 2-oxoetil)-2-metil-2,5-di- 257,1 [M+H]+. A3 N hidro-1,2,4-oxadiazol-5- MW calculado:

O O N carboxilato de metila 256,1 3-(5-bromo-2-metilfenil)- ESI-MS m/z = 5-(2-etóxi-2-oxoetil)-2- 413,2 [M+H]+. metil-2,5-di-hidro-1,2,4- A4 MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato 412,1 de etila 3-(3-bromo-2-metilfenil)- ESI-MS m/z = 5-(2-metóxi-2-oxoetil)-2- 385,0 [M+H]+. metil-2,5-di-hidro-1,2,4- A5 MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato 384,0 de metila 3-benzil-5-(2-metóxi-2- ESI-MS m/z = oxoetil)-2-metil-2,5-di- 307,1 [M+H]+. A6 hidro-1,2,4-oxadiazol-5- MW calculado: carboxilato de metila 306,1 3-(1-(((benziloxi)- carbonil)amino)- ESI-MS m/z = ciclopropil)-5-(2-metóxi-2- 406,2 [M+H]+. A7 oxoetil)-2-metil-2,5-di- MW calculado: hidro-1,2,4-oxadiazol-5- 405,2 carboxilato de metila

Intermediá- Estrutura Nome LCMS rio 5-(2-metóxi-2-oxoetil)-2- ESI-MS m/z = metil-3-fenil-2,5-di-hidro- 293,6 [M+H]+. A8 1,2,4-oxadiazol-5- MW calculado: carboxilato de metila 292,29 OMe 3-(2-bromofenil)-5-(2- ESI-MS m/z = O metóxi-2-oxoetil)-2-metil- OMe 373,6 [M+H]+. Br N 2,5-di-hidro-1,2,4- A9 O O MW calculado: N oxadiazol-5-carboxilato 372,19 de metila 3-(3-bromofenil)-5-(2- ESI-MS m/z = metóxi-2-oxoetil)-2-metil- 373,6 [M+H]+. 2,5-di-hidro-1,2,4- A10 MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato 372,19 de metila 3-(4-bromofenil)-5-(2- ESI-MS m/z = metóxi-2-oxoetil)-2-metil- 373,3 [M+H]+. 2,5-di-hidro-1,2,4- A11 MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato 372,19 de metila 3-(4-bromofenil)-5-(2- ESI-MS m/z = metóxi-2-oxoetil)-2-metil- 373,3 [M+H]+. 2,5-di-hidro-1,2,4- A12 MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato 372,19 de metila 3-(1-(terc-

O

O butoxicarbonil)piperidin- ESI-MS m/z =

O N O 4-il)-5-(2-metóxi-2- 400,8 [M+H]+. O A13 N oxoetil)-2-metil-2,5-di- MW calculado: N Me Boc hidro-1,2,4-oxadiazol-5- 399,44 carboxilato de metila

Intermediá- Estrutura Nome LCMS rio 3-(1-(terc-

O

O butoxicarbonil)piperidin- ESI-MS m/z =

O N O 4-il)-5-(2-metóxi-2- 400,8 [M+H]+. O A14 N oxoetil)-2-metil-2,5-di- MW calculado: N Me Boc hidro-1,2,4-oxadiazol-5- 399,44 carboxilato de metila 3-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin- ESI-MS m/z = 3-il)-5-(2-metóxi-2- 400,6 [M+H]+. A15 oxoetil)-2-metil-2,5-di- MW calculado: hidro-1,2,4-oxadiazol-5- 399,44 carboxilato de metila 3-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin- ESI-MS m/z = 2-il)-5-(2-metóxi-2- 400,8 [M+H]+. A16 oxoetil)-2-metil-2,5-di- MW calculado: hidro-1,2,4-oxadiazol-5- 399,44 carboxilato de metila 3-(3-bromo-2-(2-((terc- butildimetilsi- ESI-MS m/z = lil)oxi)etoxi)fenil)-5-(2- 451,0 [M+H]+. metóxi-2-oxoetil)-2-metil- A17 MW calculado: 2,5-di-hidro-1,2,4- 450,0 oxadiazol-5-carboxilato de metila Etapa 2: Síntese de 2-(3-bromo-5-metilfenil)-5-hidróxi-1-metil-6- oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de metila B1 xileno, refluxo

[0063] Em um frasco de fundo redondo de 100 mL, foi colocado 3-

(3-bromo-5-metilfenil)-5-(2-metóxi-2-oxoetil)-2-metil-2,5-di-hidro-1,2,4- oxadiazol-5-carboxilato de metila (1,00 g, 2,596 mmol, 1,00 equiv), xi- leno (20,00 mL). A solução resultante foi agitada durante 5 horas a 145 o C. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente. Os sólidos foram recolhidos por filtração e lavados com hexano. O sólido foi seco sob pressão reduzida. Isso resultou em 210 mg de metil 2-(3- bromo-5-metilfenil)-5-hidróxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxilato (22% de rendimento) como um sólido branco. ESI-MS m/z = 353,0 [M+H]+. MW calculado: 352,0

[0064] Os seguintes intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, juntamente com os materiais de partida apropriados. Tabela 2 Estrutura Nome Intermediário LCMS 2-ciclobutil-5-hidróxi-1- ESI-MS m/z = metil-6-oxo-1,6-di- 239,1 [M+H]+. B2 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 238,1 2-ciclopropil-5-hidróxi-1- ESI-MS m/z = metil-6-oxo-1,6-di- 225,1 [M+H]+. B3 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 224,0 2-(5-bromo-2-metilfenil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-1-metil-6-oxo-1,6- 365,0 [M-H]-. B4 di-hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de etila 366,0 2-(3-bromo-2-metilfenil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-1-metil-6-oxo-1,6- 353,0 [M+H]+. B5 di-hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 352,0

Estrutura Nome Intermediário LCMS 2-benzil-5-hidróxi-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-1,6-di- 275,1 [M+H]+. B6 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 274,1 2-(1- (((benzi- ESI-MS m/z =

O O

OH loxi)carbonil)amino)ciclopr 374,4 [M+H]+. N B7 CbzHN opil)-5-hidróxi-1-metil-6- MW calculado:

N O oxo-1,6-di-hidropirimidina- 373,1 4-carboxilato de metila 5-hidróxi-1-metil-6-oxo-2- ESI-MS m/z = fenil-1,6-di- 261,3 [M+H]+. B8 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 260,2 2-(2-bromofenil)-5-hidróxi- ESI-MS m/z = 1-metil-6-oxo-1,6-di- 341,2 [M+H]+. B9 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 339,1 2-(3-bromofenil)-5-hidróxi- ESI-MS m/z = 1-metil-6-oxo-1,6-di- 341,6 [M+H]+. B10 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 339,1 2-(4-bromofenil)-5-hidróxi- ESI-MS m/z = 1-metil-6-oxo-1,6-di- 341,4 [M+H]+. B11 hidropirimidina-4- MW calculado: carboxilato de metila 339,1 2-(1-(terc- ESI-MS m/z = butoxicarbonil)piperidin-4- 368,3 [M+H]+. il)-5-hidróxi-1-metil-6-oxo- B12 MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina-4- 367,40 carboxilato de metila

Estrutura Nome Intermediário LCMS 2-(1-(terc- ESI-MS m/z = butoxicarbonil)piperidin-3- 368,5 [M+H]+. il)-5-hidróxi-1-metil-6-oxo- B13 MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina-4- 367,40 carboxilato de metila 3-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-2- ESI-MS m/z = il)-5-(2-metóxi-2-oxoetil)- 368,3 [M+H]+. B14 2-metil-2,5-di-hidro-1,2,4- MW calculado: oxadiazol-5-carboxilato de 367,40 metila 2-(3-bromo-2-(2-((terc- butildimetilsi- ESI-MS m/z = lil)oxi)etoxi)fenil)-5-hidróxi- 513,1 [M+H]+. B15 1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 512,1 carboxilato de metila Etapa 3: Síntese de 2-(3-bromo-5-metilfenil)-5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (Exemplo 1)

[0065] Em um tubo vedado de 8 mL, foi colocado 2-(3-bromo-5- metilfenil)-5-hidróxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato (100,00 mg, 0,283 mmol, 1,00 equiv), THF (2,50 mL), 1,2-oxazol-4- amina (71,42 mg, 0,849 mmol, 3,00 equiv). Seguiu-se a adição de uma solução de iPrMgCl (2M, 0,64 mL, 4,50 equiv) gota a gota com agita- ção a -70 graus C. A solução resultante foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A reação foi então extinta pela adição de 2 mL de NH4Cl sat. (aq.). O valor de pH da solução foi ajustado para 3 com HCl (4 M). A solução resultante foi extraída com 3x5 mL de diclorome- tano e as camadas orgânicas combinadas e secas sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. O produto em bruto foi purifica- do por Prep-HPLC (CH3CN/H2O/FA). Isso resultou em 32,9 mg de 2- (3-bromo-5-metilfenil)-5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxamida (28% de rendimento) como um sólido branco. ESI-MS m/z = 405,0 [M+H]+. MW calculado: 404,0. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,82 (s, 1H), 10,95 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 3,30 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).

[0066] Os seguintes exemplos foram sintetizados usando condi- ções semelhantes às descritas na etapa acima, juntamente com os materiais de partida apropriados. Tabela 3 Exem- Estrutura Nome LCMS RMN plo 1H RMN (300 MHz, 2-ciclobutil-5- DMSO-d6) δ: 11,60 (s, hidróxi-N- ESI-MS m/z 1H), 10,72 (s, 1H), 9,32 (isoxazol-4-il)-1- = 291,1 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 2 metil-6-oxo-1,6- [M+H]+. 3,79-3,68 (m, 1H), 3,39 di- MW calcula- (s, 3H), 2,65-2,51 (m, hidropirimidina- do: 290,1 2H), 2,35-2,23 (m, 2H), 4-carboxamida 2,09-1,92 (m, 1H), 1,90- 1,72 (m, 1H). N O 2-ciclopropil-5- 1H RMN (300 MHz, hidróxi-N- ESI-MS m/z DMSO-d6) δ 11,52 (s, O NH (isoxazol-4-il)-1- = 277,2 1H), 10,59 (s, 1H), 9,30 3 metil-6-oxo-1,6- [M+H]+. (s, 1H), 8,90 (s, 1H),

OH N di- MW calcula- 3,64 (s, 3H), 2,20-2,22 ( hidropirimidina- do: 276,1 m, 1H), 1,27-1,16 (m,

N O 4-carboxamida 2H), 1,06-0,94 (m, 2H).

Exem- Estrutura Nome LCMS RMN plo N O 2-(5-bromo-2- 1H RMN (400 MHz, metilfenil)-5- ESI-MS m/z DMSO-d6) δ 11,91 (s, O NH hidróxi-N- = 1H), 11,01 (s, 1H), 9,29

OH (isoxazol-4-il)-1- 405,1[M+H] (s, 1H), 8,85 (s, 1H), 4 N metil-6-oxo-1,6- +. 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), N O di- MW calcula- 7,66-7,63 (m, 1H), 7,36 hidropirimidina- do: 404,0 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,17 Br 4-carboxamida (s, 3H), 2,16 (s, 3H). O N 2-(3-bromo-2- 1H RMN (300 MHz, metilfenil)-5- DMSO-d6) δ 11,93 (s, ESI-MS m/z O NH hidróxi-N- 1H), 10,98 (s, 1H), 9,29 = 405,0

OH (isoxazol-4-il)-1- (s, 1H), 8,85 (s, 1H), 5 N [M+H]+. metil-6-oxo-1,6- 7,82-7,79 (m, 1H), 7,52-

N O MW calcula- di- 7,49 (m, 1H), 7,33 (t, J = do: 404,0 hidropirimidina- 7,8 Hz, 1H), 3,17 (s, Br 4-carboxamida 3H), 2,26 (s, 3H).

2-benzil-5- 1H RMN (300 MHz, hidróxi-N- ESI-MS m/z DMSO-d6) δ 11,60 (s, (isoxazol-4-il)-1- = 327,1 1H), 11,09 (s, 1H), 9,33 6 metil-6-oxo-1,6- [M+H]+. (s, 1H), 8,92 (s, 1H), di- MW calcula- 7,39-7,26 (m, 5H), 4,28 hidropirimidina- do: 326,1 (s, 2H), 3,34 (s, 3H). 4-carboxamida (1-(5-hidróxi-4- 1H RMN (300 MHz, (isoxazol-4- DMSO-d6) δ 11,66 (s, ESI-MS m/z ilcarbamoil)-1- 1H), 10,65 (s, 1H), 9,32 = 426,1 metil-6-oxo-1,6- (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 7 [M+H]+. di-hidropirimidin- 8,30 (s, 1H), 7,33-7,10 MW calcula- 2- (m, 5H), 4,97 (s, 2H), do: 425,1 il)ciclopropil)carb 3,57 (s, 3H), 1,74 (s, amato de benzila 2H), 1,16-1,12 (m, 2H). Síntese de 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-fenil-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxamida (Exemplo 8).

AlMe3 2M em tolueno

[0067] 5-hidróxi-1-metil-6-oxo-2-fenil-1,6-di-hidropirimidina-4-

carboxilato de metila (200 mg, 0,77 mmol, 1 equiv) e isoxazol-4-amina (0,096 g, 1,15 mmol, 1,5 equiv) foram dissolvidos em tolueno (1 mL) e a mistura foi resfriada a 0 oC.

A este trimetilalumínio 2M em tolueno (0,768 ml, 1,53 mmol, 2,0 equiv) foi adicionado gota a gota a 0 oC.

A mistura de reação foi então aquecida a 100 oC durante 2 h e depois extinta com solução saturada de bicarbonato de sódio (0,2 ml) e a ela acetato de etil (10 ml) foi adicionado.

A mistura de reação foi então se- ca sobre Na2SO4 anidro e filtrada.

O sólido foi lavado com acetato de etil (3 x 10 ml) e a camada orgânica combinada foi concentrada sob pressão reduzida.

O produto em bruto foi purificado por HPLC de fase reversa para dar 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-fenil-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxamida, 8 ( 25 mg, 15%). ESI-MS m/z = 313,2 [M+H]+. MW calculado: 312,29. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,13 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 7,42-7,50 (m, 5H), 3,22 (s, 3H). Esquema: Síntese de 2-cloro-N-(isoxazol-4-il)-5-metóxi-1-metil-6- oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (C)

100ºC a 105ºC, 3h 105ºC a 110ºC, 3 h 3 etaoas: 57% bruto bruto etapa 1 etapa 3 etapa 2

Dimetil anilina (1,4 equiv) refluxo 100ºC a 105ºC, 16 h 77% etapa 4 etapa 5 micro-ondas toluene (30v) 80ºC, 15 min. 53% etapa 6

Etapa 1: Síntese de 2-metóxi-3-oxobutanodioato de 1,4-dietila (1)

bruto etapa 1

[0068] Em um frasco de fundo redondo de 3 tubuladuras de 1000 mL purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio, foi co- locado etanol (600,0 mL), etanolato de sódio (31,7 g, 0,470 mmol, 1,10 equiv), oxalato de etil (68,00 g, 465,6 mmol, 1,10 equiv) foi adicionado à temperatura ambiente. Seguiu-se a adição de 2-metoxiacetato de etil (50,00 g, 423,3 mmol, 1,00 equiv) gota a gota com agitação à tempera- tura ambiente. A solução resultante foi agitada durante 1 durante a noi- te a 35 oC. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo para remo- ver a maior parte do etanol. O valor de pH da solução foi ajustado para 3 com cloreto de hidrogênio (1 mol/L) a 0 oC. A solução resultante foi extraída com 4x500 mL de acetato de etila, seca sobre sulfato de só- dio anidro e concentrada sob vácuo. Isto resultou em 90 g (bruto) de 1,4-dietil 2-metóxi-3-oxobutanodioato (1) como óleo marrom. Etapa 2: Síntese de 2-metóxi-2-[(4E)-1-metil-2,5-dioxoimidazolidin- 4-ilideno]acetato de etila (2) 105ºC a 110ºC, 3 h bruto etapa 2

[0069] Em um frasco de fundo redondo de 2.000 mL, foi colocado 2-metóxi-3-oxobutanodioato de 1,4-dietila (1) (90,00 g, 412,5 mmol, 1,00 equiv), metilureia (30,60 g, 412,5 mmol, 1,00 equiv), ácido acético (1200,0 mL), cloreto de hidrogênio (400,0 mL, gás, 4 mol em dioxano). A solução resultante foi agitada durante 3 h a 105 oC. A mistura resul- tante foi concentrada sob vácuo. A mistura resultante foi lavada com 1 x 500 ml de hexano. Isto resultou em 90 g (bruto) de etil 2-metóxi-2-

[(4E)-1-metil-2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno]acetato (2) como um sólido marrom. 1H RMN (300 MHz, clorofórmio-d) δ 8,75 (s, 1H), 7,47 (s, 0,4H), 5,09 (s, 2H), 4,51-4,30 (m, 3H), 3,85 (s, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,12 (s, 3H), 3,07 (s, 1H), 2,14 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 1,45-1,42 (m, 2H), 1,42- 1,37 (m, 3H). Etapa 3. Síntese de ácido 2-hidróxi-5-metóxi-1-metil-6- oxopirimidina-4-carboxílico (3) 105ºC a 105ºC, 3 h 3etapas: 57% etapa 3

[0070] Em um frasco de fundo redondo de 2.000 mL, foi colocado etil 2-metóxi-2-[(4E)-1-metil-2,5-dioxoimidazolidin-4-ilideno]acetato (2) (80,00 g, 350,6 mmol, 1,00 equiv), hidróxido de potássio (1 M em água) (1400,0 mL). A solução resultante foi agitada durante 3 h a 105 o C. A mistura de reação foi resfriada a 0 oC com um banho de água / gelo. O valor de pH da solução foi ajustado para 3 com cloreto de hi- drogênio (12 mol / L) a 0oC, os sólidos foram coletados por filtração e o precipitado foi seco in vacuo. Isto resultou em 40 g de ácido 2-hidróxi- 5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4-carboxílico (3) (57% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,35 (s, 1H), 10,91 (s, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,14 (s, 3H). Etapa 4. Síntese de 2-hidróxi-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4- carboxilato de etila (4) refluxo etapa 4

[0071] Em um frasco de fundo redondo de 3 gargalos de 1000 mL purgado e mantido com uma atmosfera inerte de argônio, foi colocado ácido 2-hidróxi-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4-carboxílico (3) (20 g, 0,10 mmol, 1,00 equiv), etanol (400,0 mL). Seguiu-se a adição de clo- reto de acetil (117,7 g, 1,500 mmol, 15,00 equiv) gota a gota com agi- tação a 0 oC. A solução resultante foi aquecida ao refluxo durante 1 noite. A mistura de reação foi resfriada com um banho de água / gelo. Os sólidos foram recolhidos por filtração. Isto resultou em 16 g de etil 2-hidróxi-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4-carboxilato (4) (rendimen- to: 70%) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,08 (s, 1H), 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Etapa 5. Síntese de 2-cloro-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4- carboxilato de etila (5) Dimetil anilina (1,4 ewui) 100ºC a 105ºC, 16 h 77% etapa 5

[0072] Em um frasco de fundo redondo de 3 gargalos de 1 L pur- gado e mantido com uma atmosfera inerte de argônio, foi colocado etil 2-hidróxi-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4-carboxilato (4) (16,0 g, 70,1 mmol, 1,00 equiv), dimetilanilina (1,20 g, 98,2 mmol, 1,40 equiv), tricloreto de fosforil (320,0 mL). A solução resultante foi agitada duran- te 1 durante a noite a 100 oC. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com éter de petróleo/acetato de etil (1/10-1/4). Isto resultou em 13,3 g de etil 2- cloro-5-metóxi-1-metil-6-oxopirimidina-4-carboxilato (5) (77,0% de ren- dimento) como um sólido amarelo. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,54 (s, 3H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Etapa 6. Síntese de 2-cloro-5-metóxi-1-metil-N-(1,2-oxazol-4-il)-6- oxopirimidina-4-carboxamida (6)

Irradiação de micro-ondas, tolueno (30v), 80ºC, 15 min. etapa 6

[0073] A uma solução agitada de 2-cloro-5-metóxi-1-metil-6- oxopirimidina-4-carboxilato de etila (5) (1,00 g, 4,05 mmol, 1,00 equiv) e 1,2-oxazol-4-amina (340,9 mg, 4,050 mmol, 1,00 equiv) em tolueno (15,0 mL) foi adicionado trimetilalumínio (2 mol em tolueno) (4,1 mL, 8,10 mmol, 2,00 equiv) à temperatura ambiente sob atmosfera de ar- gônio. A solução resultante foi agitada com radiação de micro-ondas por 15 min a 80 oC. A mistura de reação foi extinta com água / gelo a 0 oC. A solução resultante foi extraída com 3x40 mL de acetato de eti- la, as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1x30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi aplicado em uma coluna de sílica gel com éter de petróleo/acetato de etil (1/10-1/1). Isso resultou em 650 mg de 2-cloro- 5-metóxi-1-metil-N-(1,2-oxazol-4-il)-6-oxopirimidina-4-carboxamida (6) (53,0% de rendimento) como um sólido amarelo claro. ESI-MS m/z = 285,2 [M+H] +. MW calculado: 284,2 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,84 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,62 (s, 3H).

[0074] Os seguintes exemplos e intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, junta- mente com os materiais de partida apropriados.

Tabela 4 Exem- Estrutura Nome LCMS RMN plo 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,01 2-(2-bromofenil)- (s, 1H), 11,07 (s, 1H), 5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = 9,31 (s, 1H), 8,86 (s, (isoxazol-4-il)-1- 393,2 [M+H]+. 1H), 7,83 (d, J = 8,0 9 metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- Hz, 1H ), 7,67-7,68 hidropirimidina-4- do: 391,18 (m, 1H), 7,62 (t, J = carboxamida 7,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H). (400 MHz, DMSO- d6): δ 11,83 (s, 1H), 2-(3-bromofenil)- 11,03 (s, 1H,), 9,30 5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (s, 1H), 8,87 (s, 1H), (isoxazol-4-il)-1- 393,1 [M+H]+. 10 7,89 (s, 1H), 7,77 (d, metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- J = 8,0 Hz, 1H), 7,68 hidropirimidina-4- do: 391,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), carboxamida 7,52 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,31 (s, 3H). 1H RMN (400 MHz, 2-(4-bromofenil)- DMSO-d6): δ 11,81 5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (s, 1H), 11,18 (s, 1H), (isoxazol-4-il)-1- 393,6 [M+H]+. 9,30 (s, 1H), 8,86 (s, 11 metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- 1H), 7,77 (d, J = 7,6 hidropirimidina-4- do: 391,18 Hz, 2H ), 7,63 (t, J = carboxamida 7,2 Hz, 2H), 3,32 (s, 3H). 1H RMN (400 MHz, 4-(5-hidróxi-4- DMSO-d6): δ 11,57 (isoxazol-4- ESI-MS m/z = (s, 1H), 10,57 (s, 1H), ilcarbamoil)-1- 320,7 [M+- 9,32 (s, 1H), 8,93 (s, metil-6-oxo-1,6- 12 BOC]+. 1H), 4,11 (bs, 2H), dihidropirimidin-2- MW calcula- 3,58 (s, 3H), 3,04- il)piperidina-1- do: 419,44 3,07 (m, 1H), 2,86 carboxilato de (bs, 2H), 1,84 (bs, terc-butila 4H), 1,43 (s, 9H).

Exem- Estrutura Nome LCMS RMN plo 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,53 3-(5-hidróxi-4- (s, 1H), 10,51 (s, 1H), (isoxazol-4- 9,31 (s, 1H), 8,93 (s, ilcarbamoil)-1- ESI-MS m/z = 1H), 4,02-4,11 (m, metil-6-oxo-1,6- 420,7 [M+H]+. 2H), 3,55 (s, 3H), 13 dihidropirimidin-2- MW calcula- 3,18-3,24 (m, 1H), il)piperidina-1- do: 419,44 2,89-2,91 (m, 1H), carboxilato de 2,00-2,07 (m, 1H), terc-butila 1,70-1,95 (m, 3H), 1,48-1,51 (m, 1H), 1,41 (s, 9H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,35 2-(5-hidróxi-4- (s, 1H), 10,22 (s, 1H), (isoxazol-4- 9,33 (s, 1H), 8,89 (s, ilcarbamoil)-1- ESI-MS m/z = 1H), 5,08 (s, 1H), metil-6-oxo-1,6- 420,4 [M+H]+. 14 3,55-3,62 (m, 1H), dihidropirimidin-2- MW calcula- 3,48 (s, 3H), 3,30 il)piperidina-1- do: 419,44 (bs, 1H), 2,19 (bs, carboxilato de 1H), 1,86 (bs, 2H), terc-butila 1,59 (bs, 2H), 1,46 (bs, 1H), 1,32 (s, 9H).

[0075] O seguinte intermediário foi sintetizado usando condições semelhantes às descritas acima, juntamente com os materiais de par- tida apropriados.

Tabela 5 Intermedi- Estrutura Nome LCMS RMN ário 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,87 (s, 1H), 2-(3-bromo-2-(2- 10,99 (s, 1H), 9,29 ((terc- (s, 1H), 8,86 (s, butildimetilsi- ESI-MS m/z 1H), 7,85 (d, J = lil)oxi)etoxi)fenil)- = 451,0 8,1 Hz, 1H), 7,56 C1 5-hidróxi-N- [M+H]+. (d, J = 7,6 Hz, (isoxazol-4-il)-1- MW calcula- 1H), 7,28 (t, J = metil-6-oxo-1,6-di- do: 450,0 7,8 Hz, 1H), 4,63 hidropirimidina-4- (t, J =5,4 Hz, 1H), carboxamida 4,01-3,97 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 1H), 3,52-3,39 (m, 2H), 3,23 (s, 3H). Síntese de 2-(3-bromo-2-(2-hidroxietoxi)fenil)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (Exemplo 15).

[0076] Em um frasco de 40 mL foram adicionados 2-(3-bromo-2- (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)fenil)-5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (300 mg, 0,531 mmol, 1,0 equiv) e THF (6,0 mL) à temperatura ambiente. À mistura acima foi adicionado TBAF(1M)/CH3COOH =1:1 (1,20 mL, 2,0 equiv) gota a gota ao longe de 2 min a 0 oC. A mistura resultante foi agitada por 5 h adici- onais à temperatura ambiente. A mistura resultante foi extraída com acetato de etil (1 x12 mL). A fase aquosa foi ainda extraída com aceta- to de etil (3 x10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lava-

das com salmoura (2 x 7 mL) e secas sobre sulfato de sódio anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O pro- duto em bruto (300 mg) foi purificado por Prep-HPLC (acetonitrila / áci- do fórmico / água) para se obter 70 mg de 2-(3-bromo-2-(2- hidroxietoxi)fenil)-5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxamida, 15, com rendimento de 29% como um sólido branco. ESI-MS m/z = 451,0 [M+H]+. MW calculado: 450,0. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,87 (s, 1H), 10,99 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,28 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 4,63 (t, J =5,4 Hz, 1H), 4,01-3,97 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 1H), 3,52-3,39 (m, 2H), 3,23 (s, 3H).

[0077] Os seguintes exemplos e intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, junta- mente com os materiais de partida apropriados. Tabela 6 Exemplo Estrutura Nome LCMS 3-(5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ESI-MS m/z = ilcarbamoil)-6-oxo-1,6- 406,3 [M+H]+. 16 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)piperidina-1- 405,4 carboxilato de terc- butila

Exemplo Estrutura Nome LCMS

4-((5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6- ESI-MS m/z = oxo-1,6- 434,4 [M+H]+. 17 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)metil)piperidina-1- 433,2 carboxilato de terc- butila

3-((5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6- ESI-MS m/z = oxo-1,6- 434,2 [M+H]+. 18 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)metil)piperidina-1- 433,2 carboxilato de terc- butila

3-(5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6- ESI-MS m/z oxo-1,6- =390,2[M-H]-. 19 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)azetidina-1- 391,2 carboxilato de terc- butila

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- 353,2 [M+H]+. 20 fenilciclopropil)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 352,1 carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- 314,5 [M+H]+. 21 (piridin-4-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 313,3 carboxamida

2-(5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6- ESI-MS m/z = oxo-1,6- 392,2 [M+H]+. 22 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)azetidina-1- 391,1 carboxilato de terc- butila

((5-hidróxi-4-(isoxazol- 4-ilcarbamoil)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-1,6-di- 476,3 [M+H]+. 23 hidropirimidin-2- MW calculado: il)(fenil)metil)carbamat 475,5 o de benzila

((4-bromofenil)(5- hidróxi-4-(isoxazol-4- ESI-MS m/z = ilcarbamoil)-1-metil-6- 555,1 [M+H]+. 24 oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidin-2- 554,4 il)metil)carbamato de benzila

Exemplo Estrutura Nome LCMS

O N 2-(3,5-dimetilfenil)-5- O NH ESI-MS m/z hidróxi-N-(isoxazol-4- =341,1[M+H]+. 25 OH il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- N MW calculado: hidropirimidina-4- N O 340,1 carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- 328,2 [M+H]+. 26 (piridin-2-ilmetil)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 327,3 carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- 314,1 [M+H]+. 27 (piridin-2-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 313,3 carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- 314,2 [M+H]+. 29 (piridin-3-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 313,3 carboxamida 2-(3,5-diclorofenil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol-4- 381,0 [M+H]+. 30 il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 380,0 carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-morfolinofenil)-6- 412,2 [M+H] +. 31 oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 411,2 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-((1-metil-1H-pirazol- 422,2 [M+H]+. 32 4-il)amino)fenil)-6-oxo- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina- 421,2 4-carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-(4-metilpiperazin-1- 425,3 [M+H]+. 33 il)fenil)-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 424,2 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-((6-metilpiridin-2- 433,2 [M+H]+. 34 il)amino)fenil)-6-oxo- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina- 432,2 4-carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-(1-metil-1H-pirazol- 421,3[M+H]+. 35 3-il)fenil)-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 420,2 carboxamida 2-(3- (dimetilcarbamoil)-5- ESI-MS m/z = metilfenil)-5-hidróxi-N- 398,2 [M+H]+. 36 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado 6-oxo-1,6-di- = 397,1 hidropirimidina-4- carboxamida

O N 5-hidróxi-N-(isoxazol-

O NH 4-il)-1-metil-2-(3-metil- OH 5-((tetra-hidro-2H- ESI-MS m/z =

N piran-4- 454,3 [M+H]+. 37 N O il)carbamoil)fenil)-6- MW calculado:

HN O oxo-1,6-di- 453,2 hidropirimidina-4- O carboxamida 5-hidróxi-2-(3-((2- hidroxietil)carbamoil)- ESI-MS m/z = 5-metilfenil)-N- 414,2 [M+H]+. 38 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado 6-oxo-1,6-di- = 413,1 hidropirimidina-4- carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS

2-(1-benzilpiperidin-3- il)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 410,1 [M+H]+. 39 6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 409,5 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- 425,5 [M+H]+. 40 picolinoilpiperidin-3-il)- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina- 424,4 4-carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-2-(1-(2- ESI-MS m/z = metoxiben- 454,1 [M+H]+. 41 zoil)piperidin-3-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 453,4 hidropirimidina-4- carboxamida

2-(1-benzil-1H-pirazol- 4-il)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 393,4 [M+H]+. 42 6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 392,4 carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (3- 452,7 [M+H]+. 43 fenilpropa- MW calculado: noil)piperidin-3-il)-1,6- 451,5 di-hidropirimidina-4- carboxamida

O N 5-hidróxi-N-(isoxazol- O NH ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- 327,2 [M+H]+. 44 N OH (m-tolil)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- N O 326,3 carboxamida 2-(1-(3- clorobenzoil)piperidin- ESI-MS m/z = 3-il)-5-hidróxi-N- 458,3 [M+H]+. 45 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 457,9 hidropirimidina-4- carboxamida 2-(1-(2- clorobenzoil)piperidin- ESI-MS m/z = 3-il)-5-hidróxi-N- 458,6 [M+H]+. 46 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 457,9 hidropirimidina-4- carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-2-(1-(4- ESI-MS m/z = metoxiben- 454,6 [M+H]+. 47 zoil)piperidin-3-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 453,4 hidropirimidina-4- carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-2-(1-(3- ESI-MS m/z = metoxiben- 454,6 [M+H]+. 48 zoil)piperidin-3-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 453,4 hidropirimidina-4- carboxamida 3-benzil-3-(5-hidróxi-4-

O N (isoxazol-4- O NH ilcarbamoil)-1-metil-6- ESI-MS m/z = OH oxo-1,6- 510,3 [M+H]+. 50 N

N dihidropirimidin-2- MW calculado:

O N il)piperidina-1-

O 509,2 O carboxilato de terc- butila ácido 3-(5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ESI-MS m/z = ilcarbamoil)-1-metil-6- 371,2 [M+H]+. 51 oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidin-2-il)-5- 370,1 metilbenzoico

Exemplo Estrutura Nome LCMS 3-((benziloxi)metil)-3- (5-hidróxi-4-(isoxazol- 4-ilcarbamoil)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-1,6- 540,2 [M+H]+. 52 dihidropirimidin-2- MW calculado: il)piperidina-1- 539,2 carboxilato de terc- butila 3-(5-hidróxi-4- (isoxazol-4- ESI-MS m/z = ilcarbamoil)-1-metil-6- 385,2 [M+H]+. 53 oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidin-2-il)-5- 384,1 metilbenzoato de meti- la

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5-((1-metilpiperidin-4- 467,2 [M+H]+. 54 il)carbamoil)fenil)-6- MW calculado oxo-1,6-di- = 466,2 hidropirimidina-4- carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(3-metil- ESI-MS m/z = 5- 384,3 [M+H]+. 55 (metilcarbamoil)fenil)- MW calculado 6-oxo-1,6-di- = 383,1 hidropirimidina-4- carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (6-oxopiperidina-3- 445,3 [M+H]+. 56 carbonil)piperidin-3-il)- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina- 444,4 4-carboxamida

O N O NH 5-hidróxi-N-(isoxazol- OH 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z =

N (fenilssulfonil)piperidin- 460,2 [M+H]+. 57 N O 3-il)-1,6-di- MW calculado: N hidropirimidina-4- 459,5 O S O carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (pirimidina-5- 426,2 [M+H]+. 58 carbonil)piperidin-3-il)- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina- 425,4 4-carboxamida 2-(1-(4- clorobenzoil)piperidin- ESI-MS m/z = 3-il)-5-hidróxi-N- 458,2 [M+H]+. 59 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 457,9 hidropirimidina-4- carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS

2-(1-(4- (dimetilami- no)butanoil)piperidin-3- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 433,3 [M+H]+. 60 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 432,5 hidropirimidina-4- carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (2-fenilacetil)piperidin- 438,3 [M+H]+. 61 3-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 437,5 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(1- ESI-MS m/z = nicotinoilpiperidin-3-il)- 425,3 [M+H]+. 62 6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 424,4 carboxamida

5-hidróxi-2-(1- isonicotinoilpiperidin-3- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)-1- 425,3 [M+H]+. 63 metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 424,4 carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS

2-(1-acetilpiperidin-3- il)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 362,2 [M+H]+. 64 6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 361,4 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (fenilcarba- 439,2 [M+H]+. 65 moil)piperidin-3-il)-1,6- MW calculado: di-hidropirimidina-4- 438,4 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(2- 390,5 [M+H]+. 66 (piridin-3-il)fenil)-1,6- MW calculado: di-hidropirimidina-4- 389,4 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(2- 390,3 [M+H]+. 67 (piridin-4-il)fenil)-1,6- MW calculado: di-hidropirimidina-4- 389,4 carboxamida

68-69 Omitido Intencionalmente

Exemplo Estrutura Nome LCMS 2-(5-bromo-2-(2- hidroxietoxi)fenil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol-4- 451,1 [M+H]+. 70 il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 450,2 carboxamida 70-71 Omitido Intencionalmente 5-hidróxi-2-(5-(2- hidroxietil)-2-metil-2H- ESI-MS m/z = 1,2,3-triazol-4-il)-N- 362,2 [M+H]+. 73 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6- oxo-1,6-di- 361,4 hidropirimidina-4- carboxamida 5-hidróxi-2-(5-(2- hidroxietil)-1-metil-1H- ESI-MS m/z = 1,2,3-triazol-4-il)-N- 362,2 [M+H]+. 74 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6- oxo-1,6-di- 361,4 hidropirimidina-4- carboxamida 5-hidróxi-2-(2-((3- hidroxipro- ESI-MS m/z = pil)amino)fenil)-N- 386,2 [M+H]+. 75 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 385,4 hidropirimidina-4- carboxamida

Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-2-(2- (((1s,3s)-3- hidroxiciclobu- ESI-MS m/z = til)amino)fenil)-N- 398,2 [M+H]+. 76 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calculado: 6-oxo-1,6-di- 397,4 hidropirimidina-4- carboxamida 77 Omitido Intencionalmente 2-(3-bromo-2-(2- hidroxietil)fenil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol-4- 437,05 [M+H]+. 78 il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 436,2 carboxamida (R)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(1-fenilpropan- 355,2 [M+H]+. 79 2-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 354,4 carboxamida (S)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(1-fenilpropan- 355,2 [M+H]+. 80 2-il)-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 354,4 carboxamida 81 Omitido Intencionalmente (R)-5-hidróxi-2-(1-(2- hidroxietil)piperidin-2- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)-1- 364,3 [M+H]+. 104 metil-6-oxo-1,6-di- MW calculado: hidropirimidina-4- 363,4 carboxamida

Síntese de terc-butil-3-(5-etóxi-4-(isoxazol-4-ilcarbamoil)-1-metil-6-

oxo-1,6-di-hidropirimidin-2-il)piperidina-1-carboxilato (Isômero A1): 10% Pd/C, H2 EtOAc: Mwetanol Etapa 2 Dioxano: H2O, 90ºC, 4h Etapa 1 NaOH (1,1 eq) MeOH; THF; Água 3h, RT Etapa 3 Etapa 4 Separação Quital Etapa 5 (Eluição Mais Rápida) (Eluição Mais Lenta) Etapa-1: 2-(1-(terc-butoxicarbonil)-1,2,5,6-tetra-hidropiridin-3-il)-5- etóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de etila:

[0078] Uma mistura de 2-cloro-5-etóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxilato de etila (2 g, 7,67 mmol), 5-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (2,96 g, 9,59 mmol) e carbonato de sódio (1,62 g, 15,34 mmol) em uma solução de dioxano / água (4: 1, 50 mL) foi desgaseifi- cado por 20 minutos com gás argônio. PdCl2(dppf) (0,561 g, 0,76 mmol) foi adicionado e a desgaseificação foi continuada por mais 10 minutos. A mistura de reação foi aquecida a 90 oC durante 4 h. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi retomada em água (100 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto do título (2,57 g, 82%) como um sólido. LCMS: calculado 408,3; ESI-MS m/z = 408,61 + 1 [M+H] H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,23-1,31 (m, 6H), 1,43 (s,

9H), 2,25-2,40 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,45-3,50 (m, 2H), 4,05-4,10 (m, 2H), 4,16 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 4,31 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 6,26 (bs, 1H). Etapa-2: Etil-2-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)-5-etóxi-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato:

[0079] A uma mistura de 2-(1-(terc-butoxicarbonil)-1,2,5,6-tetra- hidropiridin-3-il)-5-etóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxilato de etila (2,57 g, 6,30 mmol) é dissolvido e agitado em uma solução de metanol: acetato de eti (1:3, 54 mL) foi adicionado 10% Pd / C (0,67 g, com 50% de umidade). A reação foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio gasoso durante 3,5 h. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi filtrada através de celite e lavada com acetato de etil (2 x 50 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto em bruto obtido foi purificado por croma- tografia em coluna para dar o composto do título (2,35 g, 91%). LCMS: calculado 409,3, ESI-MS m/z = 410,4 [M+H] + Etapa-3: ácido 2-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)-5-etóxi-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxílico:

[0080] A uma solução agitada de Etil-2-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-3-il)-5-etóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxilato (1,9 g, 4,64 mmol) em uma mistura de metanol:THF:H2O (1:1:1, 30 mL) foi adicionado NaOH (0,222 g, 5,56 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agi- tada à temperatura ambiente durante 3 h. Após a conclusão da rea- ção, a reação foi concentrada sob vácuo. A mistura de reação foi dis- solvida em água (10 mL) e acidificada com 1N HCl (pH-6). O produto foi extraído com metanol a 10% em diclorometano (2 x 30 mL). A ca- mada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL) e evapo- rada sob vácuo para obter o composto do título em bruto (1,67 g, 94%) que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: cal- culado 381,3; ESI-MS m/z = 382,5 [M+H] +

Etapa-4: tert-butil-3-(5-etóxi-4-(isoxazol-4-ilcarbamoil)-1-metil-6- oxo-1,6-di-hidropirimidin-2-il)piperidina-1-carboxilato:

[0081] A uma solução agitada de ácido 2-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-3-il)-5-etóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxílico (1,67 g, 4,37 mmol ) em DMF seco (16 mL) foi adicionado HATU (2,49 g, 6,56 mmol) a 0 oC. A mistura de rea- ção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Em seguida, iso- xazol-4-amina (0,441 g, 5,25 mmol) em DMF (0,5 mL) e DIPEA (1,5 mL, 8,75 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente e a mistura de reação foi agitada durante 3 h. Após a conclusão da reação, a mis- tura de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 30 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna Combiflash para dar o compos- to do título (1,67 g, 85%) como uma mistura racêmica. A resolução qui- ral do composto racêmico puro (1,2 g) foi realizada usando HPLC pre- parativa quiral para dar 500 mg de cada enantiômero. LCMS: Calcula- do 447,3; ESI-MS m / z = 448,60 [M + H] + HPLC Quiral: CHIRALPAK AD-H; 30% de metanol em CO2 líquido + 0,1% de DEA. FR-1 (Isôme- ro-A1): RT= 7,66 min; FR-2 (Isômero-A2): RT= 8,81 min; A1: 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,21-1,25 (m, 3H), 1,41 (s, 9H), 1,46-1,57 (m, 2H), 1,71-1,74 (m, 2H), 2,02- 2,04 (m, 1H), 2,76-2,98 (m, 2H), 2,99- 3,15 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,85-4,15 (m, 1H), 4,10-4,15 (m, 2H), 8,78 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 10,56 (s, 1H). A2: 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,21-1,29 (m, 3H), 1,41 (s, 9H), 1,46-1,57 (m, 2H), 1,71-1,74 (m, 2H), 2,02- 2,04 (m, 1H), 2,78-2,98 (m, 2H), 2,99-3,15 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,85-4,15 (m, 1H), 4,10-4,15 (m, 2H), 8,78 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 10,57 (s, 1H). Síntese de 1-((2-((R)-1-(3,4-diclorobenzoil)piperidin-3-il)-4- (isoxazol-4-ilcarbamoil)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidin-5-

il)oxi)etil carbonato. (EXEMPLO 131) HCl 4M em Dioxano, DCM, Metanol, 0ºC até RT 3h Etapa 1 0ºC até RT 12h Etapa 2 (Isômero Ativo) em DCM Etapa 3 Exemplo 131 Etapa-1: sal cloridrato de (R)-5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6- oxo-2-(piperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0082] A uma solução agitada de (R)-3-(5-etóxi-4-(isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidin-2-il)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (0,20 g, 0,44 mmol) em mistura de diclorome- tano (1,32 mL) e metanol (0,66 mL) foi adicionado 4M HCl em dioxano (1 mL) gota a gota a 0°C. A mistura de reação foi agitada à temperatu- ra ambiente durante 1 h e aquecida a 40°C durante 10 min. A mistura de reação foi concentrada até à secura e azeotropada duas vezes com metanol para proporcionar o composto do título (0,17 g, 99%) como um sólido, que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicio- nal. LCMS: calculado 347,3, ESI-MS m/z = 348,48 [M + H] + Etapa-2: (R)-2-(1-(3,4-diclorobenzoil)piperidin-3-il)-5-etóxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0083] A uma solução agitada de ácido 3,4-diclorobenzoico (0,101 g, 0,53 mmol) em DMF seco (1,7 ml) foi adicionado HATU (0,252 g, 0,66 mmol) a 0 oC. A mistura de reação foi agitada à temperatura am- biente durante 1 h. Em seguida, sal cloridrato de (R)-5-etóxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(piperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxamida (0,170 g, 0,44 mmol) e DIPEA (0,25 mL, 1,33 mmol) fo- ram adicionados à temperatura ambiente e a mistura de reação foi agi-

tada durante 3 h. Após a conclusão, a reação foi diluída com água (15 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 20 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com bicarbonato de sódio saturado frio (20 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto do título (0,21 g, 89%) como um sólido. LCMS: Calculado 519,3, ESI-MS m/z = 520,27 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,18-1,32 (m, 3H), 1,55-1,70 (m, 2H), 1,72-1,85 (m, 2H), 2,07-2,10 (m, 1H), 3,15- 3,25 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,66-3,70 (m, 1H), 4,07-4,12 (m, 2H), 4,47-4,49 (m, 1H), 7,40-7,42 (m, 1H), 7,70-7,73 (m, 2H), 8,74 (s, 1H,), 9,27 (s, 1H), 10,52 (s, 1H). Etapa-3: (R)-2-(1-(3,4-diclorobenzoil)piperidin-3-il)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0084] A uma solução agitada de (R)-2-(1-(3,4- diclorobenzoil)piperidin-3-il)-5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6- di-hidropirimidina-4-carboxamida (0,608 g, 1,16 mmol) foi dissolvida em diclorometano (36 mL). A solução resultante foi resfriada a 0 oC e BBr3 em 1M diclorometano (4,67 mL, 4,67 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agi- tada durante 5 h. Após a conclusão, a mistura de reação foi concen- trada e azeotropada com diclorometano (2 x 6 mL). O resíduo foi res- friado a 0 oC e metanol (5 mL) foi adicionado lentamente. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo até a secura. O resíduo foi azeotro- pado com metanol (2 x 6 mL) para dar o composto em bruto. O com- posto em bruto foi carregado em celite e purificado por cromatografia em coluna de fase reversa usando acetonitrila e 0,1% de ácido fórmico em água para dar o Exemplo 131 (0,246 g, 42%). LCMS: Calculado 491,3, ESI-MS m/z = 492,3 [M+H] +. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,44-1,62 (m, 2H), 1,80-1,95 (m, 2H), 2,07-2,10 (m, 1H), 3,15-3,25 (m, 2H), 3,57 ( s, 3H), 3,60-3,70 (m, 1H), 4,34-4,52 (m, 1H), 7,40-7,42 (m,

1H), 7,70-7,74 (m, 2H), 8,84-8,90 (m, 1H,) 9,30 (s, 1H), 10,42-10,55 (m, 1H), 11,48 (s, 1H).

[0085] Os seguintes exemplos e intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, junta- mente com os materiais de partida apropriados. Tabela 7 Exem- Estrutura Nome LCMS plo 2-((1S, 3R)-3-(3,4- diclorobenzami- do)ciclo-hexil)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol- 507,3 [M+H]+. 82 4-il)-1-metil-6-oxo- MW calculado: 1,6-di- 506,4 hidropirimidina-4- carboxamida 2-((3S,6R)-1-(3,4- diclorobenzoil)-6- metilpiperidin-3-il)- ESI-MS m/z = 5-hidróxi-N- 506,2 [M+H]+. 83 (isoxazol-4-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 505,1 hidropirimidina-4- carboxamida 2-((3S,6S)-1-(3,4- diclorobenzoil)-6- metilpiperidin-3-il)- ESI-MS m/z = 5-hidróxi-N- 506,2 [M+H]+. 84 (isoxazol-4-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 505,1 hidropirimidina-4- carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo (S)-2-(1-(4- cloroben- zoil)pirrolidin-3-il)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol- 444,4 [M+H]+. 85 4-il)-1-metil-6-oxo- MW calculado: 1,6-di- 443,8 hidropirimidina-4- carboxamida (R)-2-(1-(4- cloroben- zoil)pirrolidin-3-il)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol- 444,4 [M+H]+. 86 4-il)-1-metil-6-oxo- MW calculado: 1,6-di- 443,8 hidropirimidina-4- carboxamida 5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1- metil-2-(1- ESI-MS m/z = (metilsulfo- 396,3 [M-H]+. 87 nil)piperidin-3-il)-6- MW calculado: oxo-1,6-di- 397,1 hidropirimidina-4- carboxamida (S)-2-(1-(3-cloro-4- fluoroben- zoil)piperidin-3-il)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol- 476,3 [M-H]+. 88 4-il)-1-metil-6-oxo- MW calculado: 1,6-di- 475,9 hidropirimidina-4- carboxamida 89-90 Omitido Intencionalmente

Exem- Estrutura Nome LCMS plo (S)-2-(1-(2-(3,4- difluorofe- nil)acetil)piperidin- ESI-MS m/z = 3-il)-5-hidróxi-N- 474,3 [M-H]+. 91 (isoxazol-4-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 473,4 hidropirimidina-4- carboxamida

(S)-2-(1-((3,4- diclorofe- nil)sulfonil)piperidin ESI-MS m/z = -3-il)-5-hidróxi-N- 528,4 [M-H]+. 92 (isoxazol-4-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 527,4 hidropirimidina-4- carboxamida

5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1- ESI-MS m/z = metil-2-(1- 425,3 [M-H]+. 93 nicotinoilpiperidin- MW calculado: 3-il)-6-oxo-1,6-di- 424,4 hidropirimidina-4- carboxamida

2-(1-(1H-pirazol-4- carbonil)piperidin-3- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 414,4 [M+H]+. 94 (isoxazol-4-il)-1- MW calculado: metil-6-oxo-1,6-di- 413,4 hidropirimidina-4- carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo

5-hidróxi-2-(1- isobutirilpiperidin-3- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)- 419,3 [M+H]+. 95 1-metil-6-oxo-1,6- MW calculado: di-hidropirimidina-4- 418,5 carboxamida

5-hidróxi-2-(1- isobutirilpiperidin-3- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)- 390,3 [M+H]+. 96 1-metil-6-oxo-1,6- MW calculado: di-hidropirimidina-4- 389,4 carboxamida

(S)-2-(1-(3,4- dicloroben- zoil)piperidin-3-il)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol- 492,6 [M+H]+. 97 4-il)-1-metil-6-oxo- MW calculado: 1,6-di- 491,1 hidropirimidina-4- carboxamida Síntese de 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5-hidróxi- N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxamida. (EXEMPLO 130)

TFA, DCM 0ºC até RT, 3 h Etapa 1 Etapa 2 Etapa 4 0ºC até RT, 3 h Etapa 3 0ºC até RT Xileno, Etapa 5 Etapa 6 Metóxido de magnésio 6-10% solução em metanol Etapa 7 NaOH (1,2 eq) MeOH/THF/Água, 3 h Etapa 9 Etapa 8 Etapa 11 Etapa 10 Exemplo 130 Etapa-1: 3-ciano-3-metilpiperidina-1-carboxilato de terc-butila:

[0086] A uma solução agitada de 3-cianopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (5,0 g, 24 mmol) em THF seco (100 mL) foi adicionado LiHMDS (30,9 mL, 1 M em THF, 30,9 mmol) a -78°C. A mistura de re- ação foi agitada a -78°C durante 30 min. Em seguida, Mel (2,22 mL, 35,7 mmol) foi adicionado à mesma temperatura. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em uma mistura de água gela- da (100 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 150 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica para se obter o composto do título puro (3,5 g, 65%) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,35 (s, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,66- 1,70 (m, 1H), 1,78-1,81 (m, 2H), 1,87-2,10 (m, 1H), 2,80 (s, 2H), 3,90-4,20 (m, 2H). Etapa 2: sal de TFA de 3-metilpiperidina-3-carbonitrila.

[0087] A uma solução agitada de 3-ciano-3-metilpiperidina-1- carboxilato de terc-butila (3,5 g, 15,6 mmol) em diclorometano (70 mL) foi adicionado TFA (12,7 mL) gota a gota a 0°C. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar o composto em bruto. O composto bruto foi triturado com éter dietílico para se obter o com- posto do título (3,0 g, 81%) como um sal de TFA. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,40 (s, 3H), 1,63-1,69 (m, 2H), 1,76-1,81 (m, 1H), 1,91- 2,06 (m, 1H), 2,82-2,89 ( m, 1H), 3,01-3,09 (m, 1H), 3,19-3,22 (m, 1H), 3,56-3,59 (m, 1H), 9,20 (bs, 1H). Etapa 3: 1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidina-3-carbonitrila.

[0088] A uma solução agitada de ácido 3, 4-dicloro benzoico (2,88 g, 15,1 mmol) em DMF seco (15 mL) foi adicionado HATU (7,18 g, 18,9 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. DIPEA (7 mL, 38 mmol) foi adicio- nado gota a gota seguido pela adição de sal de TFA de 3- metilpiperidina-3-carbonitrila (3,0 g, 12,6 mmol) à temperatura ambien- te. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Após a conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e a camada aquosa foi extraída com acetato de etil (2 x 200 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo resultante foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto do título puro (2,8 g, 56%). LCMS: Calculado 296,3, ESI-MS m/z = 297,2 [M+H]+. Etapa 4: 1-(3,4-diclorobenzoil)-N-hidróxi-3-metilpiperidina-3- carboximidamida:

[0089] Uma mistura de 1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidina-3- carbonitrila (4 g, 13,5 mmol), cloridrato de hidroxilamina (2,80 g, 40,4 mmol) em etanol (100 ml) foi lentamente adicionada trietilamina (5,8 ml, 40,4 mmol) a 0 oC. A mistura de reação resultante foi aquecida a 70 oC durante 16 h, depois concentrada, diluída com água (100 mL) e extraída com metanol a 10% em diclorometano (2 x 150 mL). A cama- da orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto do título (5,0 g, 69%) co- mo um sólido. O produto bruto foi utilizado na etapa seguinte, sem pu- rificação adicional. LCMS: Calculado 329,3, ESI-MS m/z = 330,4 [M+H]+. Etapa-5: 2-((E)-1-(3, 4-diclorobenzoil)-N'-hidróxi-3-metilpiperidina- 3-carboximidamido)maleato de dimetila:

[0090] A uma solução agitada de 1-(3,4-diclorobenzoil)-N-hidróxi- 3-metilpiperidina-3-carboximidamida (5,0 g, 15 mmol) em clorofórmio (100 mL) foi adicionado acetilenodicarboxilato de dimetil (3,32 g, 23,4 mmol) gota a gota a 0 oC e a mistura de reação foi agitada à tempera- tura ambiente durante a noite. A reação foi monitorada por TLC e, em seguida, concentrada para dar o produto em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para obter o composto do título puro (2,4 g, 33%) como um sólido. LCMS: Calculado 471,2, ESI- MS m/z = 472,3 [M+H]+. Etapa-6: 2-(1-(3, 4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5-hidróxi-6- oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de metila.

[0091] Uma solução de 2-((E)-1-(terc-butoxicarbonil)-N'- hidroxipiperidina-3-carboximidamido)maleato de dimetila (2,0 g, 4,2 mmol) em xilenos (15 mL) foi aquecida em um micro-ondas a 160 oC por 10 min. A mistura de reação foi concentrada e triturada com éter dietílico e hexanos para obter um sólido. O resíduo bruto foi carregado em celite e purificado por cromatografia em coluna de fase reversa usando acetonitrila e 0,1% de ácido fórmico em água para dar o com- posto do título puro (0,40 g, 21%). LCMS: LCMS: Calculado 439,4, ESI-MS m / z = 440,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,10 (s, 2H), 1,27 (s, 3H), 1,58-1,75 (m, 3H), 2,00-2,16 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,60-3,64 (m, 1H), 4,01 (bs, 1H), 7,26 (d, J = 8,4, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,67 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 10,36 (s, 1H), 12,40-12,65 (m, 1H). Etapa-7: 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5-hidróxi-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de metila.

[0092] Uma mistura de 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3- il)-5-hidróxi-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de metila (0,200 g, 0,454 mmol) foi dissolvido em DMSO (50 mL) e foi resfriado a 0 oC. A isso, solução de metóxido de magnésio (1,30 mL, 0,908 mmol, 6 a 10% em metanol) foi adicionada gota a gota a 0 oC. A mistura de rea- ção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de rea- ção foi concentrada para remover o excesso de metanol. A mistura de reação foi resfriada a 0 oC e MeI (0,116 mL, 1,81 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h, em seguida, resfriada a 10 oC e extinta com 1N HCl len- tamente. O produto foi extraído com acetato de etil (2 x 200 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 anidro e concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi carregado em celite e purificado por cromatografia em coluna de fase reversa usando aceto- nitrila e 0,1% de ácido fórmico em água para dar o composto do título puro (0,20 g, 97%). LCMS: Calculado 453,4, ESI-MS m/z = 454,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,39 (s, 3H), 1,59 (bs, 1H), 1,75 (bs, 1H), 2,01-2,07 (m, 2H), 3,15-3,25 (m, 1H), 3,32-3,52 (m, 1H),

3,63 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,83-3,86 (m, 1H), 3,99-4,02 (m, 1H), 7,30 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 10,32 (s, 1H). Etapa-8: 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5-metil-1- metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato de metila:

[0093] A uma solução agitada de 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3- metilpiperidin-3-il)-5-hidróxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxilato de metila (0,20 g, 0,44 mmol) em DMF (1 mL) foi adiciona- do K2CO3 (0,121 g, 0,875 mmol) seguido pela adição de MeI (0,042 mL, 0,660 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agi- tada à temperatura ambiente durante 4 h. Após a conclusão da rea- ção, foi diluída com água (20 mL) e a camada aquosa foi extraída com acetato de etil (2 x 20 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto do título puro (0,14 g, 67%). LCMS: Calculado 467,4, ESI-MS m/z = 468,3 [M+H]+ Etapa-9: ácido 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5- metóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxílico:

[0094] A uma solução agitada de 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3- metilpiperidin-3-il)-5-metóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxilato de metila (0,140 g, 0,298 mmol) em uma mistura de meta- nol:THF:água (1:1:1, 6 mL) foi adicionado NaOH (0,014 g, 0,36 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Após a conclusão da reação, a mistura de rea- ção foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água gelada (10 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 10 mL). A camada aquosa combinada foi acidificada com HCl 1 N a 0 oC e extraída com metanol a 10% em diclorometano (2 x 30 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concen- trada sob pressão reduzida para gerar o composto do título em bruto.

(0,130 g, 96%). LCMS: Calculado 455,2, ESI-MS m/z = 456,6 [M+H]+ Etapa-10: 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-N- (isoxazol-4-il)-5-metóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxamida.

[0095] A uma solução agitada de ácido 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3- metilpiperidin-3-il)-5-metóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxílico (0,140 g, 0,308 mmol) em DMF seco (1,4 mL) foi adiciona- do HATU (0,176 g, 0,462 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h e, em seguida, DIPEA (0,17 mL, 0,99 mmol) e isoxazol-4-amina (0,038 g, 0,46 mmol) foram adicionados à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h, depois diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etil (2 x 20 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (10 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto do título puro (0,135 g, 84%) como um sólido. LCMS: Calculado 519,2, ESI-MS m/z = 520,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,16-1,19 (m, 3H), 1,19-1,23 (m, 2H), 1,42-1,56 (m, 2H), 3,32-3,52 (m, 2H) 3,62 (s, 3H), 4,01-4,02 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,70-4,77 (m, 1H), 7,25-7,27 (m, 1H), 7,59-7,67 (m, 2H), 8,74 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 10,58 (bs, 1H).HPLC quiral: CHI- RALPAK AD-H; 30% (MEOH) em CO2 líquido + DEA 0,1%: FR-1 (Isômero-1): RT9,39; FR-2 (Isômero-2): RT=14,82. Etapa 11: 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3-metilpiperidin-3-il)-5-hidróxi- N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxamida.

[0096] Uma solução agitada de 2-(1-(3,4-diclorobenzoil)-3- metilpiperidin-3-il)-N-(isoxazol-4-il)-5-metóxi-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropirimidina-4-carboxamida FR-1 (0,030 g, 0,057 mmol) dissolvido em diclorometano (2 mL) foi resfriado a 0 oC e 1M BBr3 em diclorome-

tano (0,28 mL, 0,29 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de re- ação foi então agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Após a conclusão da reação e, em seguida, concentrada sob vácuo. Metanol (1 mL) foi adicionado e agitado durante 30 min e evaporado. O resíduo foi azeotropado com Metanol (2 x 1 ml) para dar o composto em bruto (120 mg). O resíduo em bruto foi carregado em celite e purificado por cromatografia em coluna de fase reversa usando acetonitrila e 0,1% de ácido fórmico em água para dar o Exemplo 130 (0.015 g, 51%). LCMS: Calculado 505,2, ESI-MS m/z = 506,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,35-1,45 (m, 3H), 1,46-1,60 (m, 2H), 1,70-1,80 (m, 2H), 3,15-3,18 (m, 2H), 3,38- 3,44 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 7,22-7,24 (m, 1H), 7,59-7,64 (m, 2H), 8,73 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 10,75 (bs, 1H), 11,58 (bs, 1H). Síntese de 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- fenetilpiperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (EXEM- PLO 129)

O O Me OEt Me OEt N N Br

H H N HCl 4M em Dioxano 4 M HCl in Dioxane N K2CO3/ ACN

N O N O O N Dioxane Dioxano O Step-2 Etapa 2

N N N Etapa 1 Step-1 Boc H

O O Me OEt Me OH N 1M BBr3 in DCM, N

H H N DCM N

N N O O Step-3 Etapa 3

O O N

N N N Example Exemplo129 129 Etapa-1: sal cloridrato de 5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2- (piperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0097] A uma solução agitada de 3-(5-etóxi-4-(isoxazol-4- ilcarbamoil)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropirimidin-2-il)piperidina-1- carboxilato de terc-butila [a partir da síntese de A1] (0,35 g, 0,78 mmol) em uma mistura de diclorometano (3 mL) e metanol (0,5 mL) foi adicionado HCl 4M em dioxano (3 mL) gota a gota em 0 oC. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h e aquecida a 40 oC durante 10 min. A mistura de reação foi concentrada até à secu- ra e azeotropada duas vezes com metanol para proporcionar o com- posto do título (0,290 g, 97%), que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: Calculado 347,5; ESI-MS m/z = 348,5 [M+H] + Etapa-2: 5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- fenetilpiperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0098] A uma solução agitada de sal cloridrato de 5-etóxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(piperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4- carboxamida (0,050 g, 0,130 mmol) em DMF (0,5 mL) foi adicionada trietilamina (0,055 mL, 0,391 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 30 min. (2-bromoetil) benzeno (0,024 g, 0,130 mmol) foi adici- onado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente du- rante 4 h, em seguida, concentrada. O produto em bruto obtido foi tritu- rado com hexanos (5 mL) e seco sob vácuo para proporcionar o com- posto do título (0,050 g). O composto do título em bruto foi utilizado na etapa seguinte, sem purificação adicional. LCMS: Calculado 451,3; ESI-MS m/z = 452,4 [M+H] + Etapa-3: 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- fenetilpiperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida:

[0099] Uma mistura de 5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(1- fenetilpiperidin-3-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (0,05 g, 0,110 mmol) foi dissolvido em diclorometano (1 mL). A solução resultante foi resfriada a 0oC e 1M BBr3 diclorometano (0,22 mL, 0,22 mmol) foi adi- cionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h, em seguida, bicarbonato de sódio saturado (0,5 mL) foi adicionado e posteriormente diluído com metanol a 10% em diclorometano. O resíduo foi seco sobre Na2SO4 e concentrado até a secura. O resíduo bruto foi carregado em celite e purificado por croma- tografia em coluna de fase reversa usando acetonitrila e 0,1% de ácido fórmico em água para dar composto do título puro (0,01 g, 21%). LCMS: Calculado 423,4: ESI-MS m/z = 424,5 [M+H] + 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,60-1,80 (m, 4H), 1,85-1,95 (m, 1H), 2,66-2,70 (m, 2H), 2,70-3,02 (m, 6H), 3,48 (s, 3H), 7,18-7,28 (m, 5H), 8,77 (s, 1H,), 9,13 (s, 1H), 10,25 (bs, 1H), 11,50 (bs, 1H).

[00100] Os seguintes exemplos e intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, junta- mente com os materiais de partida apropriados. Tabela 8 Exemplo Estrutura Nome LCMS 5-hidróxi-N-(isoxazol-4- il)-1-metil-6-oxo-2-(1- ESI-MS m/z = (2,2,2- 402,3 [M+H]+. 98 trifluoroetil)piperidin-3-il)- MW calculado: 1,6-di-hidropirimidina-4- 401,3 carboxamida 99 Omitido Intencionalmente Síntese de 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(piperidin-1- il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (EXEMPLO 28) em Tolueno Etapa 1 em DCM, Etapa 3

[00101] Etapa-1: Uma mistura de C6 (200 mg, 0,769 mmol), Piperi-

dina (0,76 ml, 7,69 mmol) e DMSO foi aquecida a 110 0C por 1 h. O progresso da reação foi monitorado pelo TLC e foi resfriado à tempera- tura ambiente após o consumo de C6. A mistura de reação foi vertida numa mistura de água gelada (25 ml) e bem agitada durante 15 min. O material sólido foi filtrado, lavado com água (3 x 10 ml) e bem seco sob vácuo para produzir o produto puro como um sólido (172 mg, 72%). + ESI-MS m/z = 310.38 [M+H] Calculado MW: 309.371H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,00 (q, 2H), 4,26 (q, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,04-3,06 (m, 4H), 1,57-1,62 (m, 6H), 1,20-1,30 (m, 6H).

[00102] Etapa 2: A uma solução agitada de etil 5-etóxi-1-metil-6- oxo-2-(piperidin-1-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxilato (100 mg, 0,32 mmol), isoxazol-4-amina (35,3 mg, 0,42 mmol) em tolueno (1 mL) foi adicionado 2M trimetil alumínio em tolueno (0,6 ml, 0,64 mmol) a 0 oC. A mistura de reação foi aquecida a 80 oC durante 30 min sob irradia- ção de micro-ondas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC e a reação vertida em uma mistura de água gelada e extraída com ace- tato de etil (2 x 10 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura (2 x 10 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 e evaporada sob vácuo para obter o composto em bruto como um sólido castanho claro (104 mg). O material em bruto foi utilizado na etapa se- guinte sem qualquer purificação adicional. ESI-MS m/z = 348,5 [M+H] + MW Calculado: 347,3

[00103] Etapa-3: 5-etóxi-N-(isoxazol-4-il)-1-metil-6-oxo-2-(piperidin- 1-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (100 mg, 0,28 mmol) foi dis- solvido em diclorometano (1 mL). A solução resultante foi resfriada a 0 o C e 1MBBr3 em diclorometano (0,5 mL, 0,57 mmol) foi adicionado go- ta a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente du- rante 2 h. A reação foi monitorada por TLC (Metanol a 10% em diclo- rometano). Após a conclusão, o solvente foi removido sob vácuo. Água gelada foi adicionada ao resíduo e o sólido foi filtrado para se obter o produto em bruto (83 mg). O produto em bruto foi ainda purificado por RP-HPLC para dar o Exemplo 28, o produto 5-hidróxi-N-(isoxazol-4-il)- 1-metil-6-oxo-2-(piperidin-1-il)-1,6-di-hidropirimidina-4-carboxamida (10 + mg, 0,032 mmol, 11%). ESI-MS m/z = 320,3 [M+H] Calculado MW: 1

319.3 H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,19 (s, 1H), 10,54 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 3,43 (s, 3H), 3,08 (s, 4H), 1,59-1,67 (m, 6H).

[00104] Os seguintes exemplos e intermediários foram sintetizados usando condições semelhantes às descritas na etapa acima, junta- mente com os materiais de partida apropriados. Tabela 9 Exem- Estrutura Nome LCMS plo 2-(4-benzoilpiperazin- ESI-MS m/z = 1-il)-5-hidróxi-N- 425,6 (isoxazol-4-il)-1-metil- 100 [M+H]+. 6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 424,4 carboxamida (S)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 397,3 6-oxo-2-(3-(piridin-2- 101 [M+H]+. il)piperidin-1-il)-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 396,4 carboxamida (R)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 383,5 6-oxo-2-(2-(piridin-3- 102 [M+H]+. il)pirrolidin-1-il)1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 382,4 carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo (S)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 383,5 6-oxo-2-(2-(piridin-4- 103 [M+H]+. il)pirrolidin-1-il)1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 382,4 carboxamida 105 Omitido Intencionalmente (S)-5-hidróxi-2-(2-(2- hidroxietil)piperidin-1- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)-1- 364,5 [M+H]+. 106 metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 363,4 carboxamida (R)-5-hidróxi-2-(2-(2- hidroxietil)piperidin-1- ESI-MS m/z = il)-N-(isoxazol-4-il)-1- 364,3 [M+H]+. 107 metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 363,4 carboxamida (R)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(3- 382,4 [M+H]+. 108 fenilpirrolidin-1-il)-1,6- MW calcula- di-hidropirimidina-4- do: 381,4 carboxamida (S)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(3- 382,4 [M+H]+. 109 fenilpirrolidin-1-il)-1,6- MW calcula- di-hidropirimidina-4- do: 381,4 carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo (R)-2-(2- (dimetilcarba- ESI-MS m/z = moil)pirrolidin-1-il)-5- 377,2 110 hidróxi-N-(isoxazol-4- [M+H]+. il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 376,4 carboxamida

2-(4-acetil-1,4- ESI-MS m/z = diazepan-1-il)-5- 377,4 hidróxi-N-(isoxazol-4- 111 [M+H]+. il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 376,4 carboxamida

(S)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(2- 382,3 [M+H]+. 112 fenilpirrolidin-1-il)-1,6- MW calcula- di-hidropirimidina-4- do: 381,4 carboxamida (R)-5-hidróxi-N- (isoxazol-4-il)-1-metil- ESI-MS m/z = 6-oxo-2-(2- 382,3 [M+H]+. 113 fenilpirrolidin-1-il)-1,6- MW calcula- di-hidropirimidina-4- do: 381,4 carboxamida 5-hidróxi-N-(isoxazol- 4-il)-1-metil-2-(4- ESI-MS m/z = metilpiperazin-1-il)-6- 335,4 [M+H]+. 49 oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 334,4 carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo 2-(4-acetilpiperazin-1- il)-5-hidróxi-N- ESI-MS m/z = (isoxazol-4-il)-1-metil- 363,3 [M+H]+. 116 6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 362,3 carboxamida (S)-2-(3- carbamoilpirrolidin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 349,2 [M+H]+. 117 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 348,3 hidropirimidina-4- carboxamida (R)-2-(3- carbamoilpirrolidin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 349,2 [M+H]+. 118 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 348,3 hidropirimidina-4- carboxamida (S)-2-(3- carbamoilpiperidin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 363,2 [M+H]+. 119 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 362,3 hidropirimidina-4- carboxamida

O N 5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2- O NH 329,1 [M+H]+. 120 fenóxi-1,6-di- OH MW calcula-

N hidropirimidina-4- O N O do: 328,3 carboxamida

Exem- Estrutura Nome LCMS plo 2-(ciclo-hexiloxi)-5- ESI-MS m/z = hidróxi-N-(isoxazol-4- 335,1 [M+H]+. 121 il)-1-metil-6-oxo-1,6-di- MW calcula- hidropirimidina-4- do: 334,3 carboxamida

5-hidróxi-N-(isoxazol- ESI-MS m/z = 4-il)-1-metil-6-oxo-2-(3- 384,2 [M+H]+. 122 fenoxiazetidin-il)-1,6- MW calcula- di-hidropirimidina-4- do: 383,4 carboxamida

2-(3- (benziloxi)azetidin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 398,2 [M+H]+. 123 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 397,4 hidropirimidina-4- carboxamida (R)-2-(2-(2- clorofenil)pirrolidin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 416,2 [M+H]+. 124 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 415,8 hidropirimidina-4- carboxamida (S)-2-(2-(2-clorofenil)- 4-(piridin-2-il)piperazin- ESI-MS m/z = 1-il)-5-hidróxi-N- 508,3 [M+H]+. 125 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 507,9 hidropirimidina-4- carboxamida 126-127 Omitido Intencionalmente

Exem- Estrutura Nome LCMS plo (R)-2-(4-acetil-2-(2- clorofenil)piperazin-1- ESI-MS m/z = il)-5-hidróxi-N- 473,3 [M+H]+. 128 (isoxazol-4-il)-1-metil- MW calcula- 6-oxo-1,6-di- do: 472,9 hidropirimidina-4- carboxamida Ensaios Bioquímicos

1. Silenciando TREX1 em células tumorais

[00105] A ativação da via cGAS / STING após detecção de DNA citosólico e subsequente produção de IFN tipo I pode ocorrer em célu- las tumorais e células imunes inatas, particularmente células dendríti- cas. Para avaliar se TREX1 mantém sob controle a produção de IFN tipo I por um modelo de tumor singênico frio bem descrito que sofre rejeição imunomediada após a ativação de IFN tipo I por agonistas STING, TREX1 foi derrubado em células tumorais B16F10 usando CRISPR (FIG . 1A). O acúmulo de DNA citosólico via transfecção de DNA das células tumorais resultou em um aumento de cerca de 5 ve- zes na produção de IFNβ pelas células B16F10 nocaute de TREX1 em relação às células tumorais parentais, demonstrando que TREX1 ate- nuou a ativação da via cGAS / STING nas células tumorais B16F10 (FIG. 1B).

2. Crescimento de células tumorais B16F10 competentes e defici- entes em TREX1 in vivo

[00106] O crescimento de células tumorais B16F10 competentes e deficientes em TREX1 in vivo foi avaliado. Camundongos C57BL / 6J foram inoculados por via subcutânea no flanco direito com 300.000 células tumorais B16F10 nocaute de TREX1 ou parental. Pesos corpo- rais foram coletados duas vezes por semana, e medições do tumor, duas a três vezes por semana, começando quando os tumores se tor-

naram mensuráveis e durante o restante do estudo. Os tumores nos quais TREX1 foi silenciado apresentaram volumes notavelmente me- nores do que os tumores B16F10 parentais (FIG. 2).

[00107] Os tumores foram colhidos no dia 19, após o término do estudo, e digeridos em suspensões de células únicas para permitir a quantificação por citometria de fluxo de populações imunes infiltrantes de tumor. Verificou-se que os tumores B16F10 nocaute para TREX1 exibem um aumento significativo nas células imunes gerais, o que re- fletiu um aumento no número de células T CD4 e CD8 que se infiltram no tumor, bem como em células dendríticas plasmocitoides (pDCs) (FIG. 3).Os pDCs são conhecidos por desempenhar um papel central na indução de respostas imunes antitumorais específicas do antígeno, enquanto as células T são conhecidas por serem as principais efetoras da eficácia antitumoral em camundongos e humanos. A profunda mu- dança no infiltrado imunológico dos tumores deficientes em TREX1 sugere, portanto, que a inibição do crescimento dos últimos tumores é, pelo menos em parte, imunomediada. Ensaio bioquímico TREX1

[00108] A potência do composto foi avaliada por meio de um ensaio de fluorescência que mede a degradação de um substrato dsDNA per- sonalizado que possui um par fluoróforo-inibidor em fitas opostas. A degradação do dsDNA libera fluoróforo livre para produzir um sinal flu- orescente. Especificamente, 7,5 µL de TREX1 humano de comprimen- to total marcado no terminal N de His-Tev (expresso em E. coli e purifi- cado internamente) em tampão de reação (Tris 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, DTT 2 mM, 0,1 mg / mL de BSA, 0,01% (v / v) de Tween-20 e MgCl2 100 mM foram adicionados a um Black ProxiPlate Plus de 384 poços (Perkin Elmer) que já continha o composto (150 nL) em concen- trações variáveis como uma dose-resposta de 10 pontos em DMSO. A isto foram adicionados 7,5 µL de substrato de dsDNA (Fita A: 5’

TEX615/GCT AGG CAG 3’; Fita B: 5’ CTG CCT AGC/IAbRQSp (Inte- grated DNA Technologies)) em tampão de reação. As concentrações finais foram 150 pM de TREX1, 60 nM de substrato de dsDNA em tampão de reação com 1,0% de DMSO (v/v). Após 25 minutos à tem- peratura ambiente, as reações foram extintas pela adição de 5 L de tampão de parada (o mesmo que o tampão de reação mais EDTA 200 mM). As concentrações finais na reação extinta foram 112,5 pM de TREX1, 45 nM de DNA e 50 mM de EDTA em um volume de 20 µL. Após uma incubação de 5 minutos à temperatura ambiente, as placas foram lidas em um Envision com fonte de laser (Perkin-Elmer), medin- do a fluorescência a 615 nm após excitação com luz de 570 nm. Os valores de IC50 foram calculados comparando a fluorescência medida na razão de 615 nm em relação aos poços de controle pré-extintos com tampão de parada (100% de inibição) e nenhum controle de inibi- dor (0% de inibição) usando ajustes de parâmetros não lineares míni- mos quadrados Genedata ou GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.). Ensaio Bioquímico TREX2

[00109] A potência do composto foi avaliada por meio de um ensaio de fluorescência que mede a degradação de um substrato dsDNA per- sonalizado que possui um par fluoróforo-inibidor em fitas opostas. A degradação do dsDNA libera fluoróforo livre para produzir um sinal flu- orescente. Especificamente, 7,5 µL de TREX2 humano marcado no terminal N de His-Tev (resíduos M44-A279, expresso em E. coli e puri- ficado internamente) em tampão de reação (Tris 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, DTT 2 mM, 0,1 mg / mL de BSA, 0,01% (v / v) de Tween-20 e MgCl2 100 mM foram adicionados a um Black ProxiPlate Plus de 384 poços (Perkin Elmer) que já continha o composto (150 nL) em concen- trações variáveis como uma dose-resposta de 10 pontos em DMSO. A isto foram adicionados 7,5 µL de substrato de dsDNA (Fita A: 5’

TEX615/GCT AGG CAG 3’; Fita B: 5’ CTG CCT AGC/IAbRQSp (IDT)) em tampão de reação. As concentrações finais foram 2,5 nM TREX2, 60 nM dsDNA substrato em tampão de reação com 1,0% DMSO (v/v). Após 25 minutos à temperatura ambiente, as reações foram extintas pela adição de 5 µL de tampão de parada (o mesmo que o tampão de reação mais EDTA 200 mM). As concentrações finais na mistura de reação extinta foram 1,875 pM de TREX2, 45 nM de DNA e 50 mM de EDTA em um volume de 20 µL. Após uma incubação de 5 minutos à temperatura ambiente, as placas foram lidas em um Envision com fon- te de laser (Perkin-Elmer), medindo a fluorescência a 615 nm após ex- citação com luz de 570 nm. Os valores de IC50 foram calculados com- parando a fluorescência medida na razão de 615 nm em relação aos poços de controle pré-extintos com tampão de parada (100% de inibi- ção) e nenhum controle de inibidor (0% de inibição) usando ajustes de parâmetros não lineares mínimos quadrados Genedata ou GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.).

[00110] Os resultados são mostrados na Tabela 1. TREX1 IC50 : A = <0,1 µM; B = 0,1 a 1 µM; C = 1 a 10 µM; D = >10 µM. TREX2 IC50 : A = <1 µM, B = 1 a 10 µM, C = 10 a 100 µM, D = >100 µM. Tabela 10 Exemplo TREX1 IC50 TREX2 IC50 1 A B 2 B C 3 B C 4 B B 5 A B 6 B C 7 B C 8 B C 9 B C 10 A B

Exemplo TREX1 IC50 TREX2 IC50 11 B C 12 C C 13 B C 14 B B 15 A A 16 B C 17 C C 18 B C 19 C D 20 B C 21 C D 22 C C 23 B B 24 B D 25 B B 26 C C 27 D D 28 B C 29 C C 30 B B 31 B B 32 B B 33 B C 34 B B 35 B B 36 B C 37 B C 38 B C 39 C C 40 B B 41 B C 42 B C

Exemplo TREX1 IC50 TREX2 IC50 43 A B 44 B C 45 A B 46 B C 47 B B 48 B B 49 B C 50 B C 51 B B 52 B B 53 B B 54 B C 55 A B 56 B C 57 B C 58 B B 59 B B 60 C C 61 B B 62 B B 63 B B 64 B C 65 B B 66 B C 67 C C 70 A B 73 B C 74 C C 75 D D 76 B C 78 A B 79 A B

Exemplo TREX1 IC50 TREX2 IC50 80 A B 82 C C 83 C C 84 A B 85 B C 86 B C 87 C C 88 A B 91 B C 92 B C 93 B B 94 B C 95 B C 96 B C 97 A A 98 B C 100 B C 101 B C 102 B C 103 B C 104 C D 106 B C 107 A B 108 A C 109 A C 110 B C 111 B C 112 A B 113 A B 116 B C 117 B C 118 A C

Exemplo TREX1 IC50 TREX2 IC50 119 B C 120 A B 121 A B 122 B C 123 B C 124 A B 125 A A 128 A A 129 D D 130 B B 131 A A Ensaio de células HCT116

[00111] As células duplas HCT116 (Invivogen, San Diego, CA, EUA) são derivadas da linhagem de células de carcinoma colorretal humano HCT116. As células foram selecionadas para a integração estável dos genes repórter SEAP e Luciferase, cuja expressão está sob o controle de 5 elementos de resposta em tandem para NF- KB/AP1 e STAT1/STAT2, respectivamente. A linhagem celular foi usa- da para monitorar a indução do interferon Tipo I e a sinalização subse- quente medindo a atividade da luciferase Lucia segregada no meio de cultura.

[00112] As células HCT116 foram semeadas em placa(s) de 96 po- ços a 40.000 células/poço em 100uL de DMEM suplementado com FBS a 10% e Hepes 25 mM (pH 7,2 - 7,5). Após sedimentação durante a noite, as células foram tratadas com TREX1i por 4h (a fração máxi- ma de DMSO foi de 0,1%) antes da digestão de restrição de 1ug / mL pBR322 / BstNI (New England Biolabs, Ipswich, MA, EUA) foi transfec- tada com Lipofectamine LTX (ThermoFisher, Grand Island, NY, EUA), de acordo com as recomendações do manual do produto. Resumida- mente, Lipofectamina LTX (0,35uL/poço) foi diluída em OptiMEM (5uL

Claims (21)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte Fórmula I: (I); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, cicloal- quila de 3 a 4 membros, -ORf, -SRf, ou -NReRf; R2 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, ou ciclo- alquila de 3 a 4 membros; X é uma ligação, NR3, O, S, ou (C1-C4)alquileno, em que a referida (C1-C4)alquileno é opcionalmente substituída por 1 a 2 grupos selecionados de R4; R3 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, -C(O)Rd, ou -C(S)Rd; R4 é halo, (C1-C4)alquila, fenila, -NHC(O)ORa, -NHC(S)ORa, -C(O)Rb,-NHC(O)NHRg, -NHC(S)NHRg, -NHS(O)2NHRg, -C(S)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, -C(S)ORd, -C(O)NHRe, -C(S)NHRe, - NHC(O)Rd, -NHC(S)Rd, -ORe, -SRe, -O(C1-C4)alquilORe, ou -NReRf, em que a referida fenila para R4 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, e halo(C1-C4)alcóxi; Anel A é fenila, heteroarila de 5 a 6 membros, heterociclila de 4 a 7 membros, ou cicloalquila de 3 a 7 membros, cada uma das quais é opcionalmente e independentemente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de R5; R5 é (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alcóxi, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -NHC(S)ORa, -C(O)Rb,-NHC(O)NHRg, -

NHC(S)NHRg, -NHS(O)2NHRg, -C(S)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, - C(S)ORd, -C(O)NReRf, -C(S)NHRe, -NHC(O)Rd, -NHC(S)Rd, -ORe, - SRe, -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou he- terociclila de 4 a 7 membros, em que a referida fenila para R5 é opcio- nalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, a referida (C1-C4)alquila para R5 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de ORh, -NRjRk, fenila e heteroarila de 5 a 6 membros, a referida heterociclila de 4 a 7 membros e heteroarila de 4 a 6 membros são opcionalmente e independentemente substituídas por 1 ou 2 gru- pos selecionados de Rm, e em que a referida fenila e heteroarila de 5 a 6 membros dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg; Rg, Rh, Rj, Rk, e Rm são cada um independentemente hidro- gênio, halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, halo(C1- C4)alcóxi, fenil -(C1-C4)alquilfenila, cicloalquila de 3 a 4 membros, hete- roarila de 4 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, e em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros para Rg, Rh, Rj e Rk é ainda opcionalmente substituída por =O.

Ra, Rb, Rc, Rd, Re e Rf são cada um independentemente hi- drogênio, halo, (C1-C4)alquila, halo(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, ha- lo(C1-C4)alcóxi, fenila, cicloalquila de 3 a 4 membros, heteroarila de 4 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que i) a referida (C1- C4)alquila para Ra, Rb, Rc, Rd, Re e Rf é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, –ORh, -NRjRk; ii) a referida fenila, heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 4 a 7 membros para Ra, Rb, Rc, Rd, Re, e Rf são cada um opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, e iii) a referida he- terociclila de 4 a 7 membros para Ra, Rb, Rc, Rd, Re, e Rf é ainda opci- onalmente substituída por = O.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que apresenta a seguinte Fórmula II: (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac- terizado pelo fato de que R2 é (C1-C4)alquila.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto apresenta a se- guinte Fórmula III: (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anel A é fenila, piridila, pirazolila, ciclopropila, ciclobutila, azetidinila ou piperidinila, cada uma das quais sendo opcional e independentemente substituída por um ou dois R5.

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anel A é triazolila, pirroli- dinila, diazepanila ou piperazinila, cada uma das quais sendo opcional e independentemente substituída por um ou dois R5.

7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-

ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R5 é (C1-C4)alquila, halo(C1- C4)alquila, halo(C1-C4)alcóxi, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, S(O)Rc, -C(O)ORd, -C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, -ORe, -O(C1- C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referida fenila para R5 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, a referida (C1- C4)alquila para R5 é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos sele- cionados de –ORh, -NRjRk, fenila e heteroarila de 5 a 6 membros, a referida heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 4 a 7 membros são opcionalmente e independentemente substituídas por 1 ou 2 gru- pos selecionados de Rm, e em que a referida fenila e heteroarila de 5 a 6 membros dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg; Ra é (C1-C4)alquila opcionalmente substituída por fenila; Rb é (C1-C4)alquila, fenila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referida (C1-C4)alquila é op- cionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, – ORh, e -NRjRk, em que a referida fenila, heteroarila de 5 a 6 membros e heterociclila de 4 a 7 membros são, cada uma, opcional e indepen- dentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg, e em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros é ainda opcionalmente substituída por = O; cada Rc é independentemente fenila ou (C1-C4)alquila; cada Rd é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; cada Re é independentemente hidrogênio ou (C1-C4)alquila opcionalmente substituída por ORh; cada Rf é independentemente hidrogênio, (C1-C4)alquila, fenil cicloalquila de 3 a 4 membros, heteroarila de 4 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, em que a referida fenila, cicloalquila de

3 a 4 membros, heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 5 a 6 membros são, cada uma, opcional e independentemente substituídas por Rg; cada Rg é independentemente (C1-C4)alquila, halo(C1- C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, halo(C1-C4)alcóxi, ou halo; cada Rh é hidrogênio, (C1-C4)alquila, ou -(C1-C4)alquilfenila; cada Rj é independentemente hidrogênio ou (C1-C4)alquila; cada Rk é independentemente hidrogênio, (C1-C4)alquila, ou cicloalquila de 3 a 4 membros; e cada Rm é (C1-C4)alquila.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R5 é (C1-C4)alquila, halo(C1- C4)alquila, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, -C(O)ORd, - C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, heteroarila de 4 a 6 membros, ou heterociclila de 5 a 6 membros, em que a referida (C1- C4)alquila para R5 é opcionalmente substituída por –ORh, fenila, ou he- teroarila de 5 a 6 membros, a referida heteroarila de 4 a 6 membros e heterociclila de 5 a 6 membros são opcionalmente e independente- mente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rm, e em que a referida fenila e heteroarila de 5 a 6 membros dos substituintes opcio- nais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e inde- pendentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg.

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R5 é (C1-C4)alquila, halo(C1- C4)alquila, halo, fenila, -NHC(O)ORa, -C(O)Rb, S(O)2Rc, -C(O)ORd, - C(O)NReRf, -NHC(O)Rd, ou -O(C1-C4)alquilORe, -NReRf, morfolinila, piperazinila ou pirazolila, em que a referida morfolinila, piperazinila e pirazolila são, cada uma, opcionalmente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rm, a referida (C1-C4)alquila para R5 é opcionalmente substituída por –ORh, fenila, pirazolila, pirimidinila ou piridinila, e em que a referida fenila, pirazolila, pirimidinila e piridinil dos substituintes opcionais listados para (C1-C4)alquila em R5 são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de Rg.

10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que cada Rf é independente- mente hidrogênio, (C1-C4)alquila, fenil pirazolila, piridinila, tetra- hidropiranila, piperidinila, em que a referida fenil pirazolila, piridinila, tetra-hidropiranila e piperidinila são, cada uma, opcional e independen- temente substituídas por (C1-C4)alquila.

11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que cada Rg é independente- mente (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcoxi ou halo.

12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 11, caracterizado pelo fato de que Rb é (C1-C4)alquila, fenila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 4 a 7 membros, em que a referida fenila e heteroarila de 5 a 6 membros para Rb são cada uma opcional e independentemente substituídas por 1 ou 2 grupos se- lecionados de halo e (C1-C4)alcóxi, em que a referida heterociclila de 4 a 7 membros para Rb é opcionalmente substituída por = O, e em que a referida (C1-C4)alquila para Rb é opcionalmente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, -ORh, e –NRjRk.

13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 12, caracterizado pelo fato de que cada Rk é independente- mente hidrogênio ou (C1-C4)alquila.

14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 13, caracterizado pelo fato de que Rb é (C1-C4)alquila, fenila, piridinila, pirazolila, pirimidinila ou piperidinila, em que a referida fenila, piridinila, pirazolila e pirimidinila para Rb são cada uma opcional e in- dependentemente substituídas por 1 ou 2 grupos selecionados de halo e (C1-C4)alcóxi, em que a referida (C1-C4)alquila para Rb é opcional- mente substituída por 1 ou 2 grupos selecionados de fenila, OH e NMe2, e em que a referida piperidinila para Rb é opcionalmente substi- tuída por =O.

15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 14, caracterizado pelo fato de R3 é hidrogênio.

16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 15, caracterizado pelo fato de que X é um (C1-C4)alquileno não substituída.

17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 16, caracterizado pelo fato de que R4 é fenila ou - NHC(O)ORa.

18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 15, caracterizado pelo fato de que X é uma ligação ou CH2.

19. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 18, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

20. Método de tratamento de uma doença responsiva à ini- bição de TREX1 em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamen- te eficaz de um composto, como definido no qualquer uma das reivin- dicações 1 a 18, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição, como definida na reivindicação 17.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que a doença é câncer.