BR112021009254A2 - formulações para produtos terapêuticos para influenza - Google Patents

Abstract

FORMULAÇÕES PARA PRODUTOS TERAPÊUTICOS PARA INFLUENZA. Trata-se de composições de um produto terapêutico antiviral para tratar influenza adequado para administração por inalação.

Description

“FORMULAÇÕES PARA PRODUTOS TERAPÊUTICOS PARA INFLUENZA” ANTECEDENTES

[001] Influenza se espalha pelo mundo em epidemias sazonais, resultando na morte de centenas de milhares de pessoas anualmente - milhões em anos pandêmicos. Por exemplo, três pandemias de influenza ocorreram no século 20 e mataram dezenas de milhões de pessoas, com cada uma dessas pandemias causada pelo aparecimento de uma nova cepa do vírus em humanos. Frequentemente, essas novas cepas resultam do espalhamento de um vírus da influenza existente para seres humanos de outras espécies animais.

[002] Influenza é transmitida principalmente de pessoa para pessoa através de grandes gotículas carregadas de vírus que são geradas quando pessoas infectadas tossem ou espirram; essas gotículas grandes podem, então, se depositar nas superfícies de mucosas das vias respiratórias superiores de indivíduos suscetíveis que estejam próximos (por exemplo, a cerca de 1,82 metros (6 pés)) de pessoas infectadas. A transmissão também pode ocorrer por contato direto ou contato indireto com secreções respiratórias, tal como tocar superfícies contaminadas pelo vírus da influenza e, então, tocar nos olhos, nariz ou boca. Adultos podem ser capazes de propagar a influenza para outras pessoas a partir de 1 dia antes de obter os sintomas a aproximadamente 5 dias após o início dos sintomas. Crianças pequenas e pessoas com sistemas imunes enfraquecidos podem ser infectadas por 10 ou mais dias após o início dos sintomas.

[003] Os vírus da Influenza são vírus de RNA da família Orthomyxoviridae, que compreende cinco gêneros: vírus da Influenza A, vírus da Influenza B, vírus da Influenza C, Isavirus e Thogotovirus.

[004] O gênero A do vírus da Influenza é responsável por epidemias de gripe sazonais e de gripe pandêmica. Ele tem uma espécie, vírus da influenza A, e as aves aquáticos selvagens são os hospedeiros naturais de uma grande variedade de influenza A. Ocasionalmente, os vírus são transmitidos para outras espécies e podem, então, causar surtos devastadores em aves domésticas ou dar origem a pandemias de influenza humana. Os vírus do tipo A são os patógenos humanos mais virulentos dentre os três tipos de influenza e causam a doença mais severa. O vírus da influenza A pode ser subdividido em diferentes sorotipos com base na resposta de anticorpo a esses vírus. Os sorotipos que foram confirmados em seres humanos, ordenados pelo número de mortes por pandemia humana conhecidas, são: H1N1 (que causou a gripe espanhola em 1918), H2N2 (que causou a gripe asiática em 1957), H3N2 (que causou a gripe de Hong Kong em 1968), H5N1 (uma ameaça de pandemia na temporada de influenza de 2007-08), H7N7 (que causou uma ameaça de pandemia em potencial, H1N2 (endêmico em seres humanos e porcos), H9N2, H7N2, H7N3 e H10N7.

[005] O gênero B do vírus da Influenza é responsável pela gripe sazonal e tem uma espécie, o vírus da influenza B. A influenza B infecta quase exclusivamente seres humanos e é menos comum que a influenza A. O único outro animal conhecido por ser suscetível à infecção por influenza B é a foca. Esse tipo de influenza muta a uma taxa de 2 a 3 vezes mais lenta que o tipo A e, consequentemente, é menos diverso geneticamente, com apenas um sorotipo da influenza B. Como resultado dessa falta de diversidade antigênica, um grau de imunidade à influenza B é geralmente adquirido em uma idade precoce. No entanto, a influenza B muta o suficiente para que imunidade duradoura não seja possível. Essa taxa reduzida de mudança antigênica, combinada com sua faixa limitada de hospedeiros (inibição do deslocamento antigênico entre espécies), assegura que não ocorram pandemias da influenza B.

[006] O gênero C do vírus da Influenza tem uma espécie, o vírus da influenza C, que infecta seres humanos e porcos e pode causar doença grave e epidemia local. No entanto, a influenza C é menos comum que os outros tipos e geralmente parece causar doença suave em crianças.

[007] Os vírus da influenza são muito similares na estrutura através de sorotipos e gêneros. O genoma do vírus da influenza consiste em oito RNAs de fita simples empacotados em estruturas tipo bastonete de tamanho variável, conhecidos como o complexo ribonucleoproteico (RNP). Cada RNP contém um RNA viral exclusivo, múltiplas cópias da nucleoproteína de andaime e uma polimerase viral heterotrimérica que consiste nas subunidades PA, PB1 e PB2, o que catalisa a transcrição e a replicação do genoma viral. Estudos bioquímicos e estruturais recentes do complexo da polimerase da influenza fornecem informações sobre o entendimento mecanicista de cap-snatching e síntese de RNA por polimerase da influenza. Em suma, o domínio de ligação a cap PB2 primeiro sequestra os pré-mRNAs do hospedeiro ligando-se a seu cap 5’. PA, a subunidade da endonuclease, então, cliva os nucleotídeos 10 a 13 de pré-mRNA capturados a jusante do cap. A subunidade PB2 subsequentemente gira cerca de 70° para direcionar o iniciador capeado para o sítio ativo de PB1 polimerase. A subunidade PB1 interage diretamente com ambas as subunidades PB2 e PA. Essas subunidades contêm domínios altamente conservados entre diferentes cepas de influenza e têm chamado a atenção como um alvo potencial de fármaco anti-influenza. Além do complexo da polimerase, o genoma da influenza codifica sua própria neuraminidase (NA), hemaglutinina (HA), nucleoproteína (NP), proteínas de matriz M1 e M2 e proteínas não estruturais, NS1 e NS2. NA é o alvo dos fármacos antivirais oseltamivir (Tamiflu®) e zanamivir (Relenza®). Esses fármacos são análogos do ácido siálico que inibem a atividade enzimática da NA, retardando, assim, a liberação do vírus da progênie de células infectadas.

[008] A influenza produz custos diretos devido à perda de produtividade e tratamento médico associado, bem como custos indiretos de medidas preventivas. Nos Estados Unidos, a influenza é responsável por um custo total de mais de $10 bilhões por ano, embora tenha sido estimado que uma pandemia futura possa causar centenas de bilhões de dólares em custos diretos e indiretos. Os custos preventivos também são altos. Os governos em todo o mundo gastaram bilhões de dólares U.S.

se preparando e planejando para uma potencial pandemia de influenza aviária H5N1, com custos associados à aquisição de fármacos e vacinas, assim como ao desenvolvimento de exercícios de desastres e estratégias para controles de fronteiras aperfeiçoados.

[009] As opções de tratamento atuais para influenza incluem vacinação e quimioterapia ou quimioprofilaxia com medicações antivirais. A vacinação contra influenza com uma vacina de influenza é frequentemente recomendada para grupos de alto risco, como crianças e os idosos, ou em pessoas que têm asma, diabetes ou doença cardíaca. No entanto, é possível ser vacinado e ainda pegar influenza. A vacina é reformulada a cada estação para algumas cepas de influenza específicas, mas a mesma não pode possivelmente incluir todas as cepas ativamente infectando pessoas no mundo para determinada estação. Leva cerca de seis meses para os fabricantes formularem e produzirem as milhões de doses necessárias para lidar com as epidemias sazonais; ocasionalmente, uma cepa nova ou negligenciada se torna proeminente durante esse tempo e infecta pessoas, embora elas tenham sido vacinadas (como pela gripe H3N2 Fujian na temporada de influenza de 2003-2004). Também é possível ficar infectado imediatamente antes da vacinação e ficar doente com a mesma cepa que se supõe que a vacina impeça, pois a vacina leva cerca de duas semanas para se tornar eficaz.

[010] Além disso, a eficácia dessas vacinas de influenza é variável. Devido à alta taxa de mutação do vírus, uma vacina de influenza particular geralmente confere proteção por não mais que alguns anos. Uma vacina formulada para um ano pode ser ineficaz no ano seguinte, uma vez que o vírus da influenza muda rapidamente ao longo do tempo e diferentes cepas se tornam dominantes.

[011] Devido à ausência de enzimas de revisão de RNA, a RNA polimerase dependente de RNA do vRNA da influenza comete um erro de inserção de nucleotídeo único aproximadamente a cada 10 mil nucleotídeos, que é o comprimento aproximado do vRNA de influenza. Consequentemente, quase todo vírus da influenza recém- fabricado é um desvio antigênico mutante. A separação do genoma em oito segmentos separados de vRNA permite mistura ou reagrupamento de vRNAs se mais de uma linhagem viral tiver infectado uma única célula. A rápida mudança resultante na genética viral produz desvios antigênicos e permite que o vírus infecte novas espécies hospedeiras e supere rapidamente a imunidade protetora.

[012] Os fármacos antivirais também podem ser usados para tratar influenza, com inibidores de NA sendo particularmente eficazes, mas os vírus podem desenvolver resistência aos fármacos antivirais de NA aprovados. Além disso, o surgimento de um vírus da influenza A pandêmico resistente a múltiplos fármacos foi bem documentado. A influenza A pandêmica resistente ao fármaco se torna uma ameaça substancial à saúde pública. Além dos vírus da influenza A resistentes a fármaco, os inibidores de NA são aprovados para o tratamento precoce da infecção por influenza (dentro de 48 horas do início dos sintomas da influenza).

[013] Assim, há uma necessidade de formulações de agentes antivirais contra o vírus da gripe que possam ser administrados por meio da entrega via pulmonar.

SUMÁRIO

[014] São fornecidas no presente documento as formulações do Composto 1 e uma carga. Em alguns casos, a formulação compreende (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga. Em vários casos, a formulação consiste essencialmente em (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga. Em vários casos, a formulação é uma formulação em pó para administração por inalação que compreende (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga que consiste essencialmente em mono-hidrato de lactose, em que a formulação tem uma distribuição de tamanho de partícula caracterizada por um diâmetro médio de volume (VMD) de 1 a 2 µm, com um D10 de 0,5 µm a 0,7 µm, um D50 de 1 µm a 1,4 µm, e um

D90 de 2,5 µm a 2,8 μm. Em alguns casos, o VMD é de 1,5 µm, com um D10 de 0,6 µm, um D50 de 1,3 µm e um D90 de 2,8 µm.

[015] Em várias modalidades, a carga compreende lactose ou, mais especificamente, compreende mono-hidrato de lactose. Em alguns casos, a carga é micronizada. A carga pode ter um diâmetro médio de volume (VMD) de 0,5 µm a 10 µm. Em alguns casos, a carga tem um VMD de 1,5 a 5 µm.

[016] Em várias modalidades, o Composto 1 ou sal do mesmo é micronizado. O Composto 1 pode ser cristalizado (na forma de cristal) e, em alguns casos, está presente como um cristal micronizado. Em alguns casos, a forma de cristal do Composto 1 é a Forma B e tem um padrão de difração de pó de raios-X (XRPD) que exibe valores de 2θ de 5,6, 6,8, 8,4, 10,1, 10,6, 11,3, 15,1, 15,8, 18,0, 18,5, 19,1, 20,4 e 20,9, ± 0,2°. Em vários casos, o Composto 1 (por exemplo, como Forma B) tem um ponto de fusão de 280 °C a 283 °C. Em vários casos, o Composto 1 pode ser a Forma A ou a Forma C.

[017] O Composto 1 ou sal do mesmo pode ter um diâmetro médio de volume (VMD) de 0,5 µm a 10 µm. Em alguns casos, o VMD de Composto 1 é de 1,5 a 5 µm. As formulações divulgadas no presente documento podem ter uma razão em peso entre o Composto 1 ou sal do mesmo e a carga de 1:3 a 1:5. Em alguns casos, a razão em peso é de 1:4.

[018] As formulações divulgadas no presente documento podem ser adaptáveis como uma formulação para inalação. As mesmas são contempladas como formulações para entregar o Composto 1 ou sal do mesmo a um sujeito por inalação. As formulações divulgadas podem, após administração por inalação, fornecer uma concentração de fármaco no pulmão que é pelo menos 50 vezes a concentração de fármaco no plasma 1 hora após a inalação. Em vários casos, a concentração de fármaco no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco no plasma 1 hora após a inalação. Em vários casos, a concentração de fármaco no pulmão é pelo menos 50 vezes a concentração de fármaco no plasma 24 horas após a inalação. Em vários casos, a concentração de fármaco no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco no plasma 24 horas após a inalação. Em vários casos, a concentração de fármaco no pulmão é pelo menos 50 vezes a concentração de fármaco no plasma 48 horas após a inalação. Em vários casos, a concentração de fármaco no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco no plasma 48 horas após a inalação.

[019] Além disso, são fornecidos no presente documento métodos para tratar ou prevenir a infecção ou replicação do vírus da influenza em um sujeito com necessidade do mesmo que compreende administrar ao sujeito uma formulação, conforme divulgado neste documento.

[020] Também são fornecidos métodos para produzir uma formulação, conforme divulgado no presente documento, (a) micronizando-se o Composto 1 ou sal do mesmo para formar partículas do Composto 1; (b) opcionalmente, micronizando-se a carga para formar partículas da carga; e (c) mesclando-se o Composto 1 micronizado ou sal do mesmo e a carga opcionalmente micronizada para formar a formulação. Em vários casos, a micronização do Composto 1 ou sal do mesmo ou da carga é realizada por meio de moagem manual ou trituração a jato.

[021] Em vários casos, o método pode compreender, ainda, a cristalização do Composto 1 ou sal do mesmo antes da micronização. Em alguns casos, a cristalização compreende misturar por adição o Composto 1 ou sal do mesmo e etanol a uma temperatura de pelo menos 50 °C, resfriar à temperatura ambiente para permitir a cristalização do Composto 1 ou sal do mesmo e coletar os cristais por meio de filtração e, opcionalmente, secar os cristais antes da micronização. A temperatura da mistura por adição pode ser de 75 °C. Em alguns casos, a mistura por adição ocorre por 4 a 10 horas.

[022] Além disso, são fornecidas no presente documento as formas cristalinas do Composto 1. Em alguns casos, o Composto 1 é a Forma B e o cristal pode exibir um padrão de difração de pó de raios-X (XRPD) com valores de 2θ de 5,6, 6,8, 8,4, 10,1, 10,6, 11,3, 15,1, 15,8, 18,0, 18,5, 19,1, 20,4 e 20,9, ± 0,2°. Em alguns casos, a Forma B tem um XRPD, conforme mostrado substancialmente na Figura 1. Em vários casos, a Forma B tem um ponto de fusão de 280 °C a 283 °C. Em alguns casos, o Composto 1 é como a Forma C e o cristal pode exibir um padrão de XRPD substancialmente, conforme mostrado na Figura 3 (espectro médio).

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[023] A Figura 1 mostra um padrão de XRPD (difração de pó de raios-X) do Composto 1 cristalino como a Forma B.

[024] A Figura 2 mostra um termograma de DSC (calorimetria de varredura diferencial) do Composto 1 cristalino como a Forma B.

[025] A Figura 3 mostra um padrão de XRPD do Composto 1 cristalino como a Forma C (espectro médio).

[026] A Figura 4 mostra uma comparação dos padrões de XRPD do Composto 1 cristalino, conforme formado por meio do método de pasta fluida, para (de cima para baixo) Forma C, Forma C, Forma B, Forma B e Forma A.

[027] A Figura 5 mostra uma comparação dos padrões de XRPD do Composto 1 cristalino, conforme formado por meio do método antissolvente, para (de cima para baixo) Forma C, Forma E Forma A.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[028] São divulgadas no presente documento composições de um composto anti-influenza e usos dessas composições na inibição da atividade do vírus da influenza. Em alguns aspectos, a presente divulgação se refere, de modo geral, ao uso das combinações descritas no presente documento para inibir a replicação de vírus da influenza em uma amostra biológica ou em um paciente, para reduzir a quantidade de vírus da influenza (reduzindo o título viral) em uma amostra biológica ou em um paciente e para tratar ou prevenir influenza em um paciente. As composições divulgadas no presente documento podem ser para administração pulmonar ao sujeito, paciente ou hospedeiro, por exemplo, por inalação.

[029] As composições divulgadas no presente documento são úteis como terapia contra uma infecção pelo vírus da influenza. Assim, em alguns aspectos, é fornecido o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição, conforme divulgado neste documento, para o tratamento ou prevenção de infecção ou replicação do vírus da influenza em um paciente humano. Por exemplo, o vírus da influenza pode ser uma pandemia ou vírus da influenza de pandemia/sazonal resistente a fármacos.

[030] Em vários casos, é fornecido um método de inibição da atividade de endonuclease de polimerase da influenza em um vírus da influenza A ou B, que compreende o contato do vírus com uma composição, conforme divulgado neste documento. Em alguns casos, é fornecido um método para tratar ou prevenir uma infecção por Influenza A ou Influenza B em um hospedeiro que compreende administrar ao hospedeiro uma quantidade terapêutica de uma composição, conforme divulgado neste documento. Em vários casos, é fornecido um método para reduzir a atividade de endonuclease de polimerase da influenza em um vírus da influenza A ou B em um hospedeiro que compreende administrar ao hospedeiro uma quantidade terapêutica de uma composição, conforme divulgado neste documento. Em alguns casos, é fornecido um método para reduzir a replicação do vírus da influenza em um hospedeiro que compreende administrar ao hospedeiro uma quantidade terapêutica de uma composição, conforme divulgado neste documento. COMPOSTO 1

[031] As composições divulgadas no presente documento compreendem, entre outras coisas, ácido 3-(2-(5-cloro-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-5-fluoro-7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)biciclo[2.2.2]octano-2-carboxílico, alternativamente referido neste documento como “Composto 1”. Acredita-se que a porção química ativa do Composto 1 seja um inibidor de domínio de PB2 de ligação a CAP.

[032] O Composto 1 pode existir na forma livre ou, quando apropriado, como um sal. Os sais que são farmaceuticamente aceitáveis são de particular interesse, uma vez que são úteis na administração dos compostos que são componentes das combinações descritas para fins médicos. Sais que não são farmaceuticamente aceitáveis são úteis em processos de fabricação, para fins de isolamento e purificação e, em alguns casos, para uso na separação de formas estereoisoméricas dos compostos descritos no presente documento ou de intermediários dos mesmos.

[033] Conforme usado no presente documento, o termo “sal farmaceuticamente aceitável” se refere a sais de um composto que são, dentro do escopo de um julgamento médico saudável, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem efeitos colaterais indevidos, tais como toxicidade, irritação, resposta alérgica e similares e são proporcionais a uma razão benefício/risco razoável.

[034] Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge et al., descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, incorporado ao presente documento a título de referência. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos descritos neste documento incluem aqueles derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados. Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e a purificação dos compostos.

[035] Quando o composto descrito no presente documento contém um grupo básico ou um bioisóstero suficientemente básico, os sais de adição ácidos podem ser preparados 1) reagindo-se o composto purificado em sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e 2) isolando-se o sal assim formado. Na prática, sais de adição de ácido poderiam ser uma forma mais conveniente para uso e o uso do sal equivale ao uso da forma básica livre.

[036] Exemplos de sais de adição ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos, como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos, como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando-se outros métodos usados na técnica, como troca iônica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforossulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formato, fumarato, gluco-heptonato, glicerofosfato, glicolato, gluconato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxi-etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2- naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, sais de valerato e similares.

[037] Quando o composto descrito no presente documento contém um grupo de ácido carboxílico ou um bioisóstero suficientemente ácido, os sais de adição de base podem ser preparados 1) reagindo-se o composto purificado em sua forma ácida com uma base orgânica ou inorgânica adequada e 2) isolando-se o sal assim formado. Na prática, o uso do sal de adição de base poderia ser mais conveniente e o uso da forma de sal inerentemente equivale ao uso da forma de ácido livre. Sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metal alcalino (por exemplo, sódio, lítio e potássio), metal alcalino terroso (por exemplo, magnésio e cálcio), amônio e N+(C1-4alquila)4. Esta divulgação também prevê a quaternização de quaisquer grupos que contêm nitrogênio básicos dos compostos divulgados no presente documento.

Produtos solúveis ou dispersíveis em água ou óleo podem ser obtidos por meio dessa quaternização.

[038] Sais de adição de base incluem sais de metal e amina farmaceuticamente aceitáveis. Sais de metal adequados incluem sódio, potássio, cálcio, bário, zinco, magnésio e alumínio. Os sais de sódio e potássio são geralmente preferenciais. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, cátions de amônio, amônio quaternário e amina não tóxicos formados usando-se contraíons, como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquil sulfonato inferior e aril sulfonato. Sais de adição de base inorgânicos adequados são preparados a partir de bases de metal que incluem hidreto de sódio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de alumínio, hidróxido de lítio, hidróxido de magnésio, hidróxido de zinco e similares. Sais de adição de base de amina adequados são preparados a partir de aminas que são frequentemente usadas em química medicinal devido à sua baixa toxicidade e aceitabilidade para uso médico. Amônia, etilenodiamina, N-metil-glucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N’-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-benzilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-aminometano, hidróxido de tetrametilamônio, trietilamina, dibenzilamina, efenamina, desidroabietilamina, N-etilpiperidina, benzilamina, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, aminoácidos básicos, diciclo- hexilamina e similares.

[039] Outros ácidos e bases, embora não sejam eles próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos descritos no presente documento e seus sais de adição de ácidos ou bases farmaceuticamente aceitáveis.

[040] Os componentes das combinações podem estar presentes sob a forma de um solvato. O termo “solvato” se refere a um complexo molecular de um composto

(incluindo um sal do mesmo) com uma ou mais moléculas de solvente. Tais moléculas de solvente são aquelas comumente utilizadas na técnica farmacêutica, que são conhecidas por serem inócuas para um destinatário, por exemplo, água, etanol, dimetilsulfóxido, acetona e outros solventes orgânicos comuns. O termo “hidrato” se refere a um complexo molecular que compreende um composto e água.

[041] O Composto 1, ou sal do mesmo ou solvato, pode ser micronizado para uso nas composições divulgadas no presente documento. Micronizado se refere a uma forma sólida com partículas de menos de 15 µm. Em vários casos, o Composto 1, ou sal ou solvato do mesmo, pode estar presente como partículas de 0,5 µm a 10 µm, por exemplo, 1 µm a 10 µm, 2 µm a 10 µm, 3 µm a 10 µm, 4 µm a 10 µm, 5 µm a 10 µm, 6 µm a 10 µm, 1 µm a 7 µm, 2 µm a 7 µm, 3 µm a 7 µm, 2 µm a 6 µm, 2 µm a 5 µm, 3 µm a 7 µm ou 3 µm a 6 µm.

[042] O Composto 1, ou sal ou solvato do mesmo, pode ser micronizado com o uso de qualquer prática conhecida. Em alguns casos, a micronização ocorre por meio de trituração a jato ou moagem manual.

[043] O Composto 1 pode estar presente nas composições divulgadas como uma forma cristalina.

[044] Forma B: em vários casos, a forma cristalina pode ser caracterizada por um padrão de difração de pó de raios-X, obtido conforme estabelecido nos Exemplos, com picos em cerca de 5,6, 6,8, 8,4, 10,1, 10,6, 11,3, 15,1, 15,8, 18,0, 18,5, 19,1, 20,4 e 20,9, ± 0,2° 2θ com o uso de radiação de Cu Kα, denominados “Forma B”. Em algumas modalidades, o Composto 1 cristalino pode ser caracterizado por um padrão de difração de pó de raios-X substancialmente como representado na Figura 1, em que se entende por “substancialmente” os picos relatados que podem variar em cerca de ± 0,2°. É bem conhecido no campo de XRPD que, embora as alturas de picos relativos nos espectros sejam dependentes de uma série de fatores, como a preparação da amostra e a geometria do instrumento, as posições dos picos são relativamente insensíveis aos detalhes experimentais.

[045] Em alguns casos, o Composto 1 cristalino pode ser caracterizado por um termograma de calorimetria de varredura diferencial (DSC), por exemplo, conforme mostrado substancialmente na Figura 2. Em alguns casos, o Composto 1 cristalino tem uma temperatura de fusão de 280 °C a 283 °C ou de cerca de 282 °C.

[046] Forma A: em vários casos, a forma cristalina pode ser caracterizada por um padrão de difração de pó de raios-X, obtido conforme estabelecido nos Exemplos, com picos 2θ substancialmente, conforme mostrado na Figura 4, denominados “Forma A”. Por “substancialmente” entende-se que os picos relatados podem variar em cerca de ± 0,2°. É bem conhecido no campo de XRPD que, embora as alturas de picos relativos nos espectros sejam dependentes de uma série de fatores, como a preparação da amostra e a geometria do instrumento, as posições dos picos são relativamente insensíveis aos detalhes experimentais.

[047] Forma C: em vários casos, a forma cristalina pode ser caracterizada por um padrão de difração de pó de raios-X, obtido conforme estabelecido nos Exemplos, com picos 2θ substancialmente, conforme mostrado na Figura 3 (espectro médio), denominados “Forma C”. Por “substancialmente” entende-se que os picos relatados podem variar em cerca de ± 0,2°. É bem conhecido no campo de XRPD que, embora as alturas de picos relativos nos espectros sejam dependentes de uma série de fatores, como a preparação da amostra e a geometria do instrumento, as posições dos picos são relativamente insensíveis aos detalhes experimentais.

[048] O Composto 1 também pode estar presente como Forma D ou Forma E, conforme discutido na seção de Exemplos abaixo.

CARGA

[049] As composições divulgadas no presente documento compreendem uma carga. As cargas podem incluir celulose microcristalina, fosfato dicálcico, lactose (incluindo mono-hidrato de lactose), trealose, sacarose, manose, manitol, sorbitol,

carbonato de cálcio, amidos e estearatos de magnésio ou zinco. Em alguns casos, a carga é um ou mais dentre lactose, glicose e glicolato de amido sódico. Em alguns casos, a carga compreende lactose, por exemplo, mono-hidrato de lactose. Em alguns casos, a carga é mono-hidrato de lactose cristalina, tal como Inhalac®, por exemplo, Inhalac® 400.

[050] A carga pode ser micronizada para uso nas composições divulgadas no presente documento. Micronizado se refere a uma forma sólida com partículas de menos de 15 µm. Em vários casos, a carga pode estar presente como partículas de 0,5 µm a 10 µm, por exemplo, 1 µm a 10 µm, 2 µm a 10 µm, 3 µm a 10 µm, 4 µm a 10 µm, 5 µm a 10 µm, 6 µm a 10 µm, 1 µm a 7 µm, 2 µm a 7 µm, 3 µm a 7 µm, 2 µm a 6 µm, 2 µm a 5 µm, 3 µm a 7 µm ou 3 µm a 6 µm.

[051] A carga pode ser micronizada com o uso de qualquer prática conhecida. Em alguns casos, a micronização ocorre por meio de trituração a jato ou moagem manual.

[052] Em vários casos, as composições divulgadas no presente documento compreendem o Composto 1 e a carga em uma razão em peso de 1:3 a 1:5. Em vários casos, a razão em peso é de cerca de 1:4.

ADMINISTRAÇÃO PULMONAR E DISPOSITIVOS

[053] Em algumas modalidades, as composições descritas no presente documento são adaptadas para serem administradas ao trato respiratório inferior (por exemplo, os pulmões) diretamente através das vias aéreas por inalação. As composições para administração por inalação podem ser um pó inalável e podem ser administradas com o uso de dispositivos inaladores de pó. Tais dispositivos são bem conhecidos.

[054] As composições inaláveis podem ser embaladas para dose unitária ou entrega de múltiplas doses. Por exemplo, as composições podem ser embaladas para entrega em múltiplas doses de uma maneira análoga à descrita nos documentos GB

2242134, Pat. nos. U.S. 6.632.666, 5.860.419, 5.873.360 e 5.590.645 (todos ilustrando o dispositivo “Diskus”), ou GB2178965, GB2129691, GB2169265, Pat. nos. U.S.

4.778.054, 4.811.731 e 5.035.237 (que ilustram o dispositivo “Diskhaler”), ou EP 69715 (dispositivo “Turbuhaler”), ou GB 2064336 e Pat. nº U.S. 4.353.656 (dispositivo “Rotahaler”). Doses múltiplas podem ser armazenadas em um reservatório ou em doses múltiplas, embaladas individualmente, armazenadas em, por exemplo, blisters ou cápsulas. Exemplos de dispositivos adequados incluem, mas sem limitação, TURBUHALER (Astra Zeneca), CLICKHALER (Innovata Biomed), EASYHALER (Orion), ACCUHALER, DISKUS, DISKHALER, ROTAHALER (GlaxoSmithKline), HANDIHALER, INHALATOR, AEROHALER (Boehringer Ingelheim), AEROLIZER (Schering Plough) e NOVOLIZER (ASTA Medica).

[055] Após a administração, por exemplo, por inalação, as composições divulgadas no presente documento mostram altos níveis de exposição ao fármaco nos pulmões, em comparação com a exposição no plasma. Esses altos níveis de exposição ao fármaco são benéficos por várias razões. Em primeiro lugar, a administração pulmonar fornece uma entrega rápida do agente terapêutico até o ponto de infecção. Em segundo lugar, a manutenção do produto terapêutico nos pulmões ao mesmo tempo que minimiza a exposição do plasma permite a redução de eventos adversos sistêmicos, uma vez que o produto terapêutico mínimo percorre para fora do ponto de infecção. Em terceiro lugar, concentrar a exposição nos pulmões permite maximizar o benefício terapêutico no ponto de infecção (por exemplo, nos pulmões).

[056] Em alguns casos, a administração por inalação de uma composição divulgada no presente documento fornece a exposição nos pulmões ao Composto 1 que é 50 vezes maior do que a exposição no plasma após 1 hora. Em vários casos, a exposição após 1 hora é 60 vezes maior nos pulmões sobre o plasma, ou 70 vezes maior, ou 80 vezes maior, ou 90 vezes maior, ou 100 vezes maior, ou 125 vezes maior, ou 150 vezes maior.

[057] Em alguns casos, a administração por inalação de uma composição divulgada no presente documento fornece a exposição nos pulmões ao Composto 1 que é 50 vezes maior do que a exposição no plasma após 24 horas. Em vários casos, a exposição após 24 horas é 60 vezes maior nos pulmões em relação ao plasma, ou 70 vezes maior, ou 80 vezes maior, ou 90 vezes maior, ou 100 vezes maior, ou 125 vezes maior ou 150 vezes maior.

[058] Em alguns casos, a administração por inalação de uma composição divulgada no presente documento fornece a exposição nos pulmões ao Composto 1 que é 50 vezes maior do que a exposição no plasma após 48 horas. Em vários casos, a exposição após 48 horas é 60 vezes maior nos pulmões em relação ao plasma, ou 70 vezes maior, ou 80 vezes maior, ou 90 vezes maior, ou 100 vezes maior, ou 125 vezes maior ou 150 vezes maior.

[059] Em vários casos, mesmo após 4 dias após a administração por inalação, a exposição do Composto 1 no pulmão é pelo menos 100 vezes maior do que no plasma.

MÉTODOS DE USO

[060] As composições descritas no presente documento podem ser usadas para reduzir a titulação viral em uma amostra biológica (por exemplo, uma cultura de células infectadas) ou em seres humanos (por exemplo, titulação viral do pulmão em um paciente).

[061] Os termos “afecção mediada pelo vírus da influenza”, “infecção por influenza” ou “Influenza”, conforme usados no presente documento, são usados de forma intercambiável de modo a significar a doença causada por uma infecção com um vírus da influenza.

[062] Influenza é uma doença infecciosa que afeta aves e mamíferos causada por vírus da influenza. Os vírus da Influenza são vírus de RNA da família Orthomyxoviridae, que compreende cinco gêneros: vírus da Influenza A, vírus da

Influenza B, vírus da Influenza C, Isavirus e Thogotovirus. O gênero A do vírus da Influenza tem uma espécie, o vírus da influenza A, que pode ser subdividido em diferentes sorotipos com base na resposta de anticorpo a esses vírus: H1N1, H2N2, H3N2, H5N1, H7N7, H1N2, H9N2, H7N2, H7N3, H7N9 e H10N7. O gênero B do vírus da Influenza tem uma espécie, o vírus da influenza B. Influenza B infecta quase exclusivamente seres humanos e é menos comum que a influenza A. O gênero C do vírus da Influenza tem uma espécie, o vírus C do vírus da Influenza, que infecta seres humanos e porcos e pode causar doença severa e epidemia local. No entanto, o vírus C da influenza é menos comum que os outros tipos e geralmente parece causar doença suave em crianças.

[063] Em algumas modalidades, os vírus da influenza ou influenza estão associados ao vírus da influenza A ou B. Em algumas modalidades, os vírus da influenza ou influenza estão associados ao vírus da influenza A. Em algumas modalidades específicas, o vírus da influenza A é H1N1, H2N2, H3N2, H7N9 ou H5N1. Em algumas modalidades, as combinações divulgadas são eficazes para inibir o crescimento ou a replicação de uma pandemia ou vírus da influenza de pandemia/sazonal resistente a fármacos.

[064] Em seres humanos, sintomas comuns da influenza são calafrios, febre, faringite, dores musculares, dor de cabeça severa, tosse, fraqueza e desconforto geral. Em casos mais sérios, a influenza causa pneumonia, que pode ser fatal, principalmente em crianças pequenas e nos idosos. Embora frequentemente seja confundida com o resfriado comum, a influenza é uma doença muito mais grave e é causada por um tipo diferente de vírus. A Influenza pode produzir náuseas e vômito, principalmente em crianças, mas esses sintomas são mais característicos da gastroenterite não relacionada, que às vezes é denominada “gripe estomacal” ou “gripe de 24 horas”.

[065] Os sintomas da influenza podem começar bastante repentinamente um a dois dias após infecção. Geralmente, os primeiros sintomas são calafrios ou sensação de frio, mas febre também é comum no início da infecção, com temperaturas corporais na faixa de 38 a 39 °C (aproximadamente 100 a 103 °F). Muitas pessoas ficam tão doentes, de modo que elas ficam confinadas ao leito por vários dias, com dores e desconfortos por todo o corpo, sendo piores em suas costas e pernas. Sintomas da influenza podem incluir: dores no corpo, especialmente articulações e garganta, frio extremo e febre, fadiga, dor de cabeça, olhos lacrimejantes irritados, olhos avermelhados, pele (especialmente a face), boca, garganta e nariz, dor abdominal (em crianças com influenza B). Sintomas da influenza são inespecíficos, se sobrepondo a muitos patógenos (“doença semelhante à influenza). Geralmente, são necessários dados laboratoriais a fim de confirmar o diagnóstico.

[066] Os termos, “doença”, “distúrbio” e “afecção” podem ser usados no presente documento de forma intercambiável para se referir a uma afecção médica ou patológica mediada pelo vírus da influenza.

[067] Conforme usado no presente documento, os termos “sujeito”, “hospedeiro” e “paciente” são usados de maneira intercambiável. Os termos “sujeito”, “hospedeiro” e “paciente” podem se referir a um animal (por exemplo, um pássaro, tal como uma galinha, codorniz ou peru, ou um mamífero), especificamente um “mamífero”, tal como um não primata (por exemplo, uma vaca, porco, cavalo, ovelha, coelho, porquinho-da-índia, rato, gato, cachorro e camundongo) ou um primata (por exemplo, um macaco, chimpanzé e um ser humano) e, mais especificamente, um ser humano. Em uma modalidade, o sujeito é um animal não humano, tal como um animal de fazenda (por exemplo, um cavalo, vaca, porco ou ovelha) ou um animal de estimação (por exemplo, um cachorro, gato, porquinho-da-índia ou coelho). Em uma modalidade preferida, o sujeito é um “ser humano”.

[068] O termo “amostra biológica”, conforme usado no presente documento, inclui, sem limitação, culturas de células ou extratos das mesmas; material biopsiado obtido de um mamífero ou extratos do mesmo; sangue, saliva, urina, fezes, sêmen, lágrimas ou outros fluidos corporais ou extratos dos mesmos.

[069] Conforme usado no presente documento, o termo “inibição da replicação do vírus da influenza” inclui tanto a redução na quantidade de replicação do vírus (por exemplo, uma redução de pelo menos 10%) até e incluindo a interrupção completa da replicação do vírus (isto é, 100% de redução na quantidade de replicação do vírus). Em algumas modalidades, a replicação de vírus da influenza é inibida em pelo menos 50%, pelo menos 65%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, pelo menos 90% ou pelo menos 95%.

[070] A replicação do vírus da influenza pode ser medida por qualquer método adequado conhecido na técnica. Por exemplo, o título viral da influenza em uma amostra biológica (por exemplo, uma cultura de célula infectada) ou em seres humanos (por exemplo, título viral do pulmão em um paciente) pode ser medido. Mais especificamente, para ensaios baseados em células, em cada caso as células são cultivadas in vitro, o vírus é adicionado à cultura na presença ou na ausência de um agente de teste e, após um período de tempo adequado, é avaliado um ponto terminal dependente do vírus. Para ensaios típicos, podem ser utilizadas células renais caninas Madin-Darby (MDCK) e a cepa da influenza adaptada à cultura de tecido padrão, A/Puerto Rico/8/34. Um primeiro tipo de ensaio de célula que pode ser usado depende da morte das células-alvo infectadas, um processo denominado efeito citopático (CPE), em que a infecção por vírus causa esgotamento dos recursos da célula e eventual lise da célula. No primeiro tipo de ensaio de célula, uma baixa fração de células nos poços de uma placa de microtitulação é infectada (tipicamente 1/10 a 1/1.000), o vírus é deixado passar por várias rodadas de replicação por 48 a 72 horas e, então, a quantidade de morte celular é medida com o uso de uma diminuição no teor de ATP celular em comparação com controles não infectados. Um segundo tipo de ensaio de célula que pode ser empregado depende da multiplicação de moléculas de RNA específicas do vírus nas células infectadas, em que os níveis de RNA são diretamente medidos com o uso do método de hibridização de DNA de cadeia ramificada (bDNA). No segundo tipo de ensaio de célula, um número baixo de células é inicialmente infectado em poços de uma placa de microtitulação, o vírus é deixado replicar nas células infectadas e se espalhar para rodadas adicionais de células, então, as células são lisadas e o teor de RNA viral é medido. Esse ensaio é interrompido precocemente, geralmente após 18 a 36 horas, enquanto todas as células-alvo ainda são viáveis. O RNA viral é quantificado por hibridização para sondas oligonucleotídicas específicas fixadas aos poços de uma placa de ensaio e, então, amplificação do sinal por hibridização com sondas adicionais ligadas a uma enzima repórter.

[071] Conforme usado no presente documento, um “título viral ou "título” é uma medida da concentração do vírus. A testagem de titulação pode empregar diluição em série para obter informações quantitativas aproximadas de um procedimento analítico que, inerentemente, apenas avalia como positivo ou negativo. O título corresponde ao fator de diluição mais alto que ainda rende uma leitura positiva; por exemplo, leituras positivas nas primeiras 8 diluições de duas vezes em série se traduzem em um título de 1:256. Um exemplo específico é o título viral. Para determinar o título, várias diluições serão preparadas, como 10-1, 10-2, 10-3, . . . , 10-8. A concentração mais baixa de vírus que ainda infecta células é o título viral.

[072] Conforme usado no presente documento, os termos “tratar”, “tratamento” e “em tratamento” se referem a ambos os tratamentos terapêutico e profilático. Por exemplo, tratamentos terapêuticos incluem a redução ou melhoria da progressão, gravidade e/ou duração das afecções mediadas por vírus da influenza ou a melhoria de um ou mais sintomas (especificamente, um ou mais sintomas discerníveis) das afecções mediadas por vírus da influenza, resultantes da administração de uma ou mais terapias (por exemplo, um ou mais agentes terapêuticos, tal como um composto ou uma composição descrita no presente documento). Em modalidades específicas, o tratamento terapêutico inclui a melhoria de pelo menos um parâmetro físico mensurável de uma afecção mediada por vírus da influenza. Em outras modalidades, o tratamento terapêutico inclui a inibição da progressão de uma afecção mediada por vírus da influenza, seja fisicamente por meio de, por exemplo, estabilização de um sintoma discernível, fisiologicamente por meio de, por exemplo, estabilização de um parâmetro físico, ou ambos. Em outras modalidades, o tratamento terapêutico inclui a redução ou estabilização de infecções mediadas por vírus da influenza. Fármacos antivirais podem ser usados no ambiente da comunidade para tratar pessoas que já têm influenza a fim de reduzir a gravidade de sintomas e reduzir o número de dias em que elas ficam doentes.

[073] Os termos “profilaxia” ou “profilático(a)”, “uso profilático” e "tratamento profilático", conforme utilizados no presente documento, se referem a qualquer procedimento médico ou de saúde pública cujo objetivo seja prevenir, em vez de tratar ou curar uma doença. Conforme usado neste documento, os termos “prevenir”, “prevenção” e “que previne” se referem à redução do risco de adquirir ou desenvolver uma dada afecção, ou à redução ou inibição da recorrência ou da dita afecção em um sujeito que não está doente, mas que esteve ou pode estar perto de uma pessoa com a doença. O termo “quimioprofilaxia” se refere ao uso de medicações, por exemplo, fármacos de pequenas moléculas, em vez de “vacinas”, para a prevenção de um distúrbio ou uma doença.

[074] O uso profilático inclui o uso em situações nas quais um surto foi detectado, para evitar contágio ou a propagação da infecção em locais onde muitas pessoas que estão em alto risco de complicações da influenza sérias vivem em contato próximo entre si (por exemplo, em uma enfermaria de hospital, creche, prisão, lar de idosos, etc.). Ele também inclui o uso dentre populações que necessitam de proteção contra a influenza, mas que não obtêm proteção após a vacinação (por exemplo, devido ao sistema imune fraco) ou quando a vacina não está disponível para elas, ou quando elas não podem receber a vacina por causa de efeitos colaterais. Também inclui o uso durante as duas semanas após a vacinação ou durante qualquer período após a vacinação, mas antes de a vacina ser eficaz. Uso profilático também pode incluir tratar uma pessoa que não está doente com a influenza ou não é considerada com alto risco de complicações, a fim de reduzir as chances de se infectar com a influenza e transmiti-la a uma pessoa de alto risco em contato próximo com a mesma (por exemplo, profissionais de saúde, funcionários de asilos, etc.).

[075] Conforme usado no presente documento e de acordo com o uso dos United States Centers for Disease Control and Prevention (US CDC), um “surto” de influenza é definido como um aumento repentino de doença respiratória febril aguda (AFRI) que ocorre dentro de um período de 48 a 72 horas, em um grupo de pessoas que está em proximidade entre si (por exemplo, na mesma área de uma instalação de vida assistida, na mesma casa, etc.) acima da taxa de antecedente normal ou quando qualquer sujeito na população sendo analisada testa positivo para influenza.

[076] Em algumas modalidades, as composições são úteis como uma medida preventiva ou profilática para um paciente, especificamente um ser humano, com predisposição a complicações resultantes da infecção por um vírus da influenza. As composições podem ser úteis em métodos profiláticos em situações em que um caso índice ou um surto foi confirmado, para impedir a propagação da infecção no resto da comunidade ou grupo populacional.

[077] Conforme usado no presente documento, uma “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade suficiente para induzir a resposta biológica desejada. Na presente divulgação, a resposta biológica desejada é inibir a replicação do vírus da influenza, reduzir a quantidade de vírus da influenza, ou reduzir ou melhorar a gravidade, duração, progressão ou início de uma infecção por vírus da influenza, impedir o avanço de uma infecção por vírus da influenza, impedir a recorrência, o desenvolvimento, o início ou a progressão de um sintoma associado a uma infecção por vírus da influenza ou intensificar ou melhorar o efeito (ou efeitos) profilático ou terapêutico de outra terapia usada contra infecções por influenza. A quantidade precisa de composto administrado a um sujeito dependerá do modo de administração, do tipo e da gravidade da infecção e das características do sujeito, como saúde geral, idade, sexo, peso corporal e tolerância a fármacos. O versado na técnica será capaz de determinar dosagens apropriadas, dependendo desses e de outros fatores. Por exemplo, o ácido 3-(2-(5-cloro-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-7-il)biciclo[2.2.2]octano-2-carboxílico ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado a um sujeito em uma faixa de dosagem de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal/dia para tratamento terapêutico ou profilático.

[078] Conforme usado no presente documento, uma “quantidade segura e eficaz” de um composto ou composição descrita no presente documento é uma quantidade eficaz do composto ou composição que não causa efeitos colaterais excessivos ou deletérios em um paciente.

[079] Geralmente, regimes de dosagem podem ser selecionados de acordo com uma variedade de fatores, incluindo o distúrbio que é tratado e a gravidade do distúrbio; a atividade do composto específico empregado; a composição específica empregada; a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo e a dieta do paciente; o tempo de administração, via de administração e a taxa de excreção do composto específico empregado; a função renal e hepática do sujeito; e o composto particular ou sal do mesmo empregado, a duração do tratamento; fármacos usados em combinação ou coincidentes com o composto específico empregado e fatores semelhantes bem conhecidos nas técnicas médicas. O versado na técnica pode determinar e prescrever prontamente a quantidade eficaz dos compostos descritos no presente documento, necessária para tratar, prevenir, inibir (total ou parcialmente) ou deter o progresso da doença.

[080] As dosagens do Composto 1 podem variar entre cerca de 0,01 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal/dia, cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia ou cerca de 1 a cerca de 25 mg/kg de peso corporal/dia. Entende-se que a quantidade total por dia pode ser administrada em uma dose única ou pode ser administrada em múltiplas doses, como duas vezes ao dia (por exemplo, a cada 12 horas), três vezes ao dia (por exemplo, a cada 8 horas) ou quatro vezes ao dia (por exemplo, a cada 6 horas).

[081] Para tratamento terapêutico, o Composto 1 pode ser administrado a um paciente dentro de, por exemplo, 48 horas (ou dentro de 40 horas, ou menos de 2 dias, ou menos de 1,5 dias ou dentro de 24 horas) do início dos sintomas (por exemplo, congestão nasal, dor de garganta, tosse, dores, fadiga, dores de cabeça e calafrios/suores). O tratamento terapêutico pode durar por qualquer duração adequada, por exemplo, por 5 dias, 7 dias, 10 dias, 14 dias, etc. Para tratamento profilático durante um surto na comunidade, o Composto 1 pode ser administrado a um paciente em, por exemplo, 2 dias do início dos sintomas no caso índice, e pode ser continuado por qualquer duração adequada, por exemplo, por 7 dias, 10 dias, 14 dias, 20 dias, 28 dias, 35 dias, 42 dias, etc.

EXEMPLOS

[082] Triagem Polimórfica para o Composto 1 (Método de Pasta Fluida): cerca de 10 mg do Composto 1 foram adicionados em 200 µl de vários solventes - éter metil t-butílico (MTBE), metanol (MeOH), etanol (EtOH), álcool isopropílico (IPA), álcool isopropílico e acetato de etila na razão em volume de 5/5 (IPA/EtOAc), acetato de etila (EtOAc), álcool isopropílico e água na razão em volume de 8/2, acetonitrila (ACN), acetona e tetra-hidrofurano (THF). Cada suspensão foi agitada a 700 rpm durante 24 horas a 40 °C. Os resíduos do composto foram separados por centrifugação (10 min a 14.000 rpm) e posteriormente secos por pernoite em estufa a vácuo a 30 °C. Se uma solução límpida permanecesse, a solução era seca sob vácuo para gerar um sólido seco. O sólido seco foi analisado por XRPD e atribuído a uma Forma. Os resultados são mostrados na Tabela abaixo.

Solvente Caracterização a partir de XRPD MTBE Sólido amarelo pálido, Forma A MeOH Sólido amarelo pálido, Forma B EtOH Sólido amarelo pálido, Forma B IPA Sólido amarelo pálido, Forma B IPA/EtOAc (5/5, v/v) Sólido amarelo pálido, Forma B EtOAc Sólido amarelo pálido, Forma B IPA/H2O (8/2, v/v) Sólido amarelo pálido, Forma C ACN Sólido amarelo pálido, Forma C Acetona Sólido amarelo pálido, Forma D THF Sólido amarelo pálido, amorfo

[083] Os padrões de XRPD dos cristais foram obtidos com o uso de um instrumento Bruker D8 Advance com os seguintes parâmetros. Os resultados de uma análise de XRPD para a Forma B são mostrados na Figura 1. Os resultados para a Forma C são mostrados na Figura 3. Os resultados para as Formas A, B e C são mostrados na Figura 4. Parâmetros Configurações/Valores Tempo por etapa 0,12 s Configuração de tubo de raio-X Tensão: 40 kV; Corrente: 40 mA Escopo de varredura 4 a 40 graus

Parâmetros Configurações/Valores Velocidade de rotação da amostra 15 rpm Taxa de varredura 10 graus/min Parâmetro 2 teta

[084] Uma DSC dos cristais de Forma B foi obtida com o uso do instrumento TA Q2000 com os seguintes parâmetros, e os resultados da DSC são mostrados na Figura 2. Parâmetros DSC Método Elevação Faixa de temperatura 30 °C a 300 °C Taxa de aquecimento 10 °C/min Gás de purga N2 Tipo de bandeja Alumínio, frisado

[085] Triagem Polimórfica do Composto 1 (Método Antissolvente): cerca de 25 mg do Composto 1 foram pesados em um frasco de vidro, seguido de adição de 0,5 ml de dimetilacetamida (DMA) para alcançar a concentração de 50 mg/ml como uma solução límpida. Em seguida, a esta solução foram adicionados antissolventes gota a gota com agitação a 700 rpm, à temperatura ambiente. Os cristais resultantes foram, então, recolhidos por centrifugação. Os cristais foram analisados por XRPD, com os resultados mostrados na Figura 5, em que o topo é a Forma E, o meio é a Forma C e o fundo é a Forma A. Volume de Antissolvente antissolvente Observação XRPD adicionado (ml) ACN 1,5 Suspensão opaca homogênea Forma E Etanol 5 Solução límpida IPA 5 Solução límpida Acetona 5 Solução límpida

Água 0,5 Suspensão opaca homogênea Forma C

[086] Formação Polimórfica a diferentes temperaturas - Pasta Fluida: cerca de 25 mg do Composto 1 foram pesados em um frasco de vidro, seguido pela adição de 500 µl de diferentes solventes. A solução foi agitada a 700 rpm durante 3 dias a 55 °C ou 25 °C. Os resíduos do composto foram separados por centrifugação (10 min a

10.000 rpm) e posteriormente secos durante 2 dias na estufa a vácuo a 30 °C. O sólido seco foi analisado por XRPD. Um resumo de formas obtidas sob diferentes condições é mostrado abaixo. Solvente Processo XRPD Pasta fluida/25 °C Forma B Etanol Pasta fluida/55 °C Forma B Pasta fluida/25 °C Forma A

ACN Pasta fluida/55 °C Forma A Pasta fluida/25 °C Forma A Acetona Pasta fluida/55 °C Forma C Pasta fluida/25 °C Forma B MeOH Pasta fluida/55 °C Forma B Pasta fluida/25 °C Forma A

MTBE Pasta fluida/55 °C Forma A Pasta fluida/25 °C Forma A

IPA Pasta fluida/55 °C Forma A Pasta fluida/25 °C Forma A EtOAc Pasta fluida/55 °C Forma C Pasta fluida/25 °C Forma C IPA/H2O (8/2) Pasta fluida/55 °C Forma C Pasta fluida/25 °C Forma C EtOH/H2O (8/2) Pasta fluida/55 °C Forma C

[087] Formação Polimórfica a diferentes temperaturas: cerca de 50 mg do

Composto 1 foram pesados em um frasco de vidro, seguido pela adição de 500 µl de diferentes solventes. A solução foi, então, agitada a 700 rpm durante 3 dias a 55 °C. O sólido foi separado por centrifugação (10 min a 10.000 rpm) e posteriormente seco por 2 dias na estufa a vácuo a 30 °C. O sólido foi analisado por XRPD.

[088] Cerca de 25 mg do Composto 1 foram pesados para um frasco de vidro, depois armazenados a 25 °C/60% de RH ou 40 °C/75% de RH durante 1 semana. Em seguida, as amostras foram analisadas por XRPD.

[089] Os resultados do XRPD estão resumidos abaixo. Atividade Solvente Processo XRPD aquática Amorfo + 0% de H2O e Acetona 0 Pasta fluida/55 °C Forma C 3% de H2O/Acetona (V/V) 0,32 Pasta fluida/55 °C Forma C 11% de H2O/Acetona (V/V) 0,56 Pasta fluida/55 °C Forma C 16% de H2O/Acetona (V/V) 0,63 Pasta fluida/55 °C Forma C 31% de H2O/Acetona (V/V) 0,76 Pasta fluida/55 °C Forma C 42% de H2O/Acetona (V/V) 0,81 Pasta fluida/55 °C Forma C 79% de H2O/Acetona (V/V) 0,94 Pasta fluida/55 °C Forma C Expor a 25 °C/60% de RH 0,60 - Forma A Expor a 40 °C/75% de RH 0,75 - Forma A

[090] Formação Polimórfica a diferentes temperaturas (Antissolvente): cerca de 50 mg do Composto 1 foram pesados em um frasco de vidro, seguido pela adição de 1 ml de DMA que foi, então, sonicado para obter uma solução límpida. A solução foi, então, agitada a 700 rpm a 55 °C, em seguida, adicionando-se o antissolvente com precipitação rápida ou precipitação lenta. Precipitação rápida: adicionar certa quantidade de antissolvente em alta velocidade e filtrar o sólido em 1 hora.

Precipitação lenta: adicionar certa quantidade de antissolvente em velocidade lenta e filtrar o sólido após a pasta fluida por 3 dias.

O sólido resultante foi separado por centrifugação (10 min a 10.000 rpm) e posteriormente seco durante 2 dias na estufa de vácuo a 30 °C.

O sólido foi analisado por XRPD.

Os resultados de XRPD são mostrados abaixo.

Volume de Solução de antissolvente Antissolvente Processo Observação XRPD estoque adicionado (ml) Suspensão Precipitação 3,0 turva com Forma A rápida ACN precipitado 50 mg de API em Precipitação Suspensão 3,0 Forma F DMA lenta homogênea (50 mg/ml) Precipitação Suspensão 1,0 Forma A rápida homogênea Água Precipitação Suspensão 1,0 Forma A lenta homogênea

Resumo dos Resultados do Estudo Polimórfico Método e Temperatura Solvente Pasta Fluida 25 °C 40 °C 55 °C 70 °C MTBE Forma A Forma A Forma A - MeOH Forma B Forma B Forma B - EtOH Forma B Forma B Forma B Forma B IPA Forma A Forma B Forma A - IPA/EtOAc (5/5, v/v) - Forma B - - EtOAc Forma A Forma B Forma C - IPA/H2O (8/2, v/v) Forma C Forma C Forma C - EtOH/H2O (8/2, v/v) Forma C - Forma C Forma C ACN Forma A Forma C Forma A - Acetona Forma A Forma D Forma C - THF - Amorfo - - Amorfo + 0% de H2O e Acetona - - - Forma C 3% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - 11% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - 16% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - 31% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - 42% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - 79% de H2O/Acetona (V/V) - - Forma C - Expor a 25 °C/60% de RH - - Forma A -

Expor a 40 °C/75% de RH - - Forma A - Método e Temperatura Solução Solvente Antissolvente Rápido Normal (25 °C) Lento (55 °C) (55 °C) ACN Forma E Forma A Forma F 50 mg de água Forma C Forma A Forma A Composto 1 IPA - - - em DMA (50 mg/ml) EtOH - -- Acetona - - -

[091] Micronização do Composto 1: o Composto 1 cristalizado (Forma B) foi adicionado à trituração a jato gradualmente com a pressão do gás de injetor de 4,5 bar, o gás de trituração sendo 4 bar. O produto micronizado exibiu os picos característicos que são iguais aos do composto antes da micronização. Além disso, os resultados de DSC confirmaram que um pico exotérmico contíguo em 198,27 °C e um único pico endotérmico em 280,40 °C antes da decomposição são idênticos aos observados com a amostra antes da micronização. A distribuição de tamanho de partícula (PSD) dos resultados de dispersão a seco mostrou que o tamanho de partícula do composto micronizado é VMD = 2,08 µm, D10 = 0,65 µm, D50 = 1,44 µm e D90 = 4,21 µm.

[092] Micronização de mono-hidrato de lactose: vários materiais de mono- hidrato de lactose foram testados e caracterizados, conforme resumido na tabela abaixo.

Parâmetros do processo PSD (µm) Pressão Pressão de Amostra de gás de gás de VMD D10 D50 D90 injetor/bar moagem/bar Inhalac 70 N/A N/A 211,43 128,70 212,61 294,71 Inhalac 70 4 3,5 3,77 1,09 3,43 7,03

Parâmetros do processo PSD (µm)

Pressão Pressão de Amostra de gás de gás de VMD D10 D50 D90 injetor/bar moagem/bar micronizado

Inhalac 230 N/A N/A 94,60 40,19 95,47 145,35

Inhalac 230- 4 3,5 4,01 1,11 3,55 7,49 Micronizado

Inhalac 250 N/A N/A 52,25 14,95 49,74 90,85

Inhalac 250 4 3,5 6,24 1,08 2,99 11,31 Micronizado

Inhalac 250 4,5 4 3,91 0,96 2,56 6,66 Micronizado

Inhalac 250 5 4 3,15 1,19 2,78 5,55 Micronizado

Inhalac 250 5 4,5 3,51 1,06 2,64 6,05 Micronizado

Inhalac 400 N/A N/A 10,54 1,00 7,26 24,93

Inhalac 400 4 3,5 2,56 0,75 1,92 4,43 Micronizado

Inhalac 400 4,5 4 2,01 0,73 2,66 3,60 Micronizado

Inhalac 400 5 4 2,64 0,76 1,93 4,28 Micronizado

Inhalac 400 5 4,5 2,50 0,77 2,04 4,69 Micronizado

[093] Preparação da Formulação: o Composto Cristalino 1 (Forma B) foi moído manualmente antes de se misturar com mono-hidrato de lactose (Inhalac 400) na razão de 1:4. A mistura foi mesclada por moagem manual durante 10 min. Em seguida, a mistura foi triturada a jato nas seguintes condições: pressão do gás de injetor de 4,5 bar, gás de moagem a 4 bar. PSD de dados de dispersão seca demonstraram que o tamanho de partícula da formulação era VMD = 1,52 µm, D10 = 0,63 µm, D50 = 1,26 µm e D90 = 2,77 µm.

[094] Estudo de PK em camundongo in vivo: para demonstrar a entrega do Composto 1 ao pulmão através de inalação, foi realizado um estudo farmacocinético em camundongo (BALB/C). Os camundongos foram tratados com uma dose única de aproximadamente 1 mg do pó seco com o uso de um insuflador antes das coletas de amostras. Amostras de plasma e pulmão foram coletadas em pontos de tempo diferentes e as concentrações de fármaco no pulmão e plasma do camundongo foram determinadas. Conforme mostrado na tabela abaixo, foi observado um rápido acúmulo de alta concentração de fármaco no tecido pulmonar por inalação. Em contrapartida, as concentrações de fármaco no plasma foram significativamente mais baixas do que as detectadas no pulmão. Esses dados mostram que a entrega do Composto 1 pode ser efetivamente realizada por meio da administração por inalação com o uso da formulação divulgada, permitindo que o Composto 1 entre em contato com, por exemplo, um trato respiratório infectado com influenza. Curiosamente, o nível de fármaco permaneceu pelo menos 100 vezes em excesso da dose terapêutica (potência anti-influenza, EC50 0,1 a 3 nM) no quarto dia. Esses resultados confirmaram, ainda, um uso clínico potencial do pó seco do Composto 1 para o tratamento de infecção por influenza.

Ponto no Tempo, Concentração de fármaco no Concentração de fármaco no horas pulmão, µM plasma, µM 1 984 5,6 24 218 0,081

48 8,6 0,052 72 0,63 0 96 0,35 0

Claims (36)

REIVINDICAÇÕES

1. Formulação CARACTERIZADA pelo fato de que compreende: (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga.

2. Formulação CARACTERIZADA pelo fato de que consiste essencialmente em: (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga.

3. Formulação em pó para administração por inalação CARACTERIZADA pelo fato de que compreende: (a) Composto 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) uma carga que consiste essencialmente em mono-hidrato de lactose, em que a formulação tem uma distribuição de tamanho de partícula que tem como característica um diâmetro médio de volume (VMD) de 1 a 2 µm, com um D10 de 0,5 µm a 0,7 µm, um D50 de 1 µm a 1,4 µm e um D90 de 2,5 µm a 2,8 µm.

4. Formulação, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a carga compreende lactose.

5. Formulação, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato de que a carga compreende mono-hidrato de lactose.

6. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADA pelo fato de que a carga é micronizada.

7. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo é micronizado.

8. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo é cristalizado.

9. Formulação, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 cristalino ou sal do mesmo tem um padrão de difração de pó de raios-X (XRPD) que exibe valores 2θ de 5,6, 6,8, 8,4, 10,1, 10,6, 11,3, 15,1, 15,8, 18,0, 18,5, 19,1, 20,4 e 20,9, ± 0,2°.

10. Formulação, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 cristalino ou sal do mesmo tem um ponto de fusão de 280 °C a 283 °C.

11. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 11, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo está presente como uma forma de cristal micronizada.

12. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo tem um diâmetro de tamanho de partícula médio de volume de 0,5 a 10 µm.

13. Formulação, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADA pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo tem um diâmetro de tamanho de partícula médio de volume de 1,5 µm a 5 µm.

14. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADA pelo fato de que a carga tem um diâmetro de tamanho de partícula médio de volume de 0,5 a 10 µm.

15. Formulação, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADA pelo fato de que a carga tem um diâmetro de tamanho de partícula médio de volume de 1,5 µm a 5 µm.

16. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADA pelo fato de que a razão entre Composto 1 ou sal do mesmo e a carga é de 1:3 a 1:5, tal como uma razão em peso.

17. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, CARACTERIZADA pelo fato de que é adaptada como uma formulação inalável.

18. Formulação, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADA pelo fato de que, após a administração por inalação, a concentração de fármaco do

Composto 1 no pulmão é pelo menos 50 vezes a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 1 hora após a inalação.

19. Formulação, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de fármaco do Composto 1 no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 1 hora após a inalação.

20. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, CARACTERIZADA pelo fato de que, após a administração por inalação, a concentração de fármaco do Composto 1 no pulmão é pelo menos 50 vezes maior que a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 24 horas após a inalação.

21. Formulação, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de fármaco do Composto 1 no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 24 horas após a inalação.

22. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 21, CARACTERIZADA pelo fato de que, após a administração por inalação, a concentração de fármaco do Composto 1 no pulmão é pelo menos 50 vezes a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 48 horas após a inalação.

23. Formulação, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADA pelo fato de que a concentração de fármaco do Composto 1 no pulmão é pelo menos 100 vezes maior que a concentração de fármaco do Composto 1 no plasma 48 horas após a inalação.

24. Método para tratar ou prevenir a infecção ou replicação do vírus da influenza em um sujeito com necessidade do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao sujeito a formulação, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 23, em uma quantidade eficaz para tratar a infecção por influenza.

25. Método para preparar a formulação, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 23, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende (a) micronizar o Composto 1 ou sal do mesmo para formar partículas do Composto 1; (b) opcionalmente, micronizar a carga para formar partículas da carga; e (c) mesclar o Composto 1 micronizado ou sal do mesmo e a carga opcionalmente micronizada para formar a formulação.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que a micronização do Composto 1 ou da carga é por meio de trituração a jato ou moagem manual.

27. Método, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de que a micronização do Composto 1 ou da carga é por meio de trituração a jato.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 27, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende, ainda, cristalizar o Composto 1 ou sal do mesmo antes da etapa de micronização.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28, CARACTERIZADO pelo fato de que a cristalização compreende misturar por adição o Composto 1 ou sal do mesmo e etanol a uma temperatura de pelo menos 50 °C, resfriar à temperatura ambiente para permitir a cristalização do Composto 1 ou sal do mesmo e coletar os cristais por meio de filtração, e opcionalmente secar os cristais antes da micronização.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo e etanol são misturados por adição a uma temperatura de 75 °C.

31. Método, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADO pelo fato de que o Composto 1 ou sal do mesmo e etanol são misturados por adição a uma temperatura de 75 °C durante 4 a 10 horas.

32. Composto cristalino 1 CARACTERIZADO pelo fato de que é designado

Forma B.

33. Composto cristalino 1, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato de que tem um padrão de difração de pó de raios-X (XRPD) que exibe valores de 2θ de 5,6, 6,8, 8,4, 10,1, 10,6, 11,3, 15,1, 15,8, 18,0, 18,5, 19,1, 20,4 e 20,9, ± 0,2°.

34. Composto cristalino 1, de acordo com a reivindicação 32 ou 33, CARACTERIZADO pelo fato de que tem um ponto de fusão de 280 °C a 283 °C.

35. Composto cristalino 1 CARACTERIZADO pelo fato de que é designado Forma A.

36. Composto cristalino 1 CARACTERIZADO pelo fato de que é designado Forma C.