BR112020024683A2 - Métodos de uso de cd24 para a prevenção e tratamento de doença do enxerto versus hospedeiro e mucosite - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se ao uso de uma proteína cd24 para prevenir ou tratar a doença do enxerto versus hospedeiro e mucosite.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “MÉTO- DOS DE USO DE CD24 PARA A PREVENÇÃO E TRATAMENTO DE DOENÇA DO ENXERTO VERSUS HOSPEDEIRO E MUCOSITE”.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a composições e métodos para prevenir e tratar a doença do enxerto versus hospedeiro e muco- site.

[0002] ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] O transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas (HCT) é a única terapia curativa estabelecida para um amplo espectro de leucemia e mielodisplasia de alto risco em adultos. Uma função im- portante do transplante alogênico é usar células T do doador para elimi- nar as células leucêmicas alogênicas, esse efeito é denominado GVL. No entanto, a doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) é uma complicação com risco de vida que ocorre quando as células imunocom- petentes do enxerto de células-tronco do doador montam um ataque imunológico contra o hospedeiro. As células T do doador ativadas dani- ficam as células epiteliais do hospedeiro após uma cascata inflamatória que começa com o regime preparativo. O risco exato depende da fonte de células-tronco, idade do paciente, condicionamento, e profilaxia de GVHD usada. A incidência está diretamente relacionada ao grau de dis- paridade dos antígenos leucocitários humanos (HLA). O início médio da GVHD aguda é geralmente de 21 a 25 dias após o transplante. A inci- dência varia de 30 a 65% em receptores de transplantes de doadores relacionados totalmente histocompatíveis a 60% a 80% em receptores de células hematopoiéticas incompatíveis ou células hematopoiéticas de um doador não aparentado. O transplante de sangue do cordão um- bilical foi associado a uma recuperação mais lenta de neutrófilos com menor incidência e início tardio de GVHD aguda. Os fatores que aumen- tam a incidência incluem o uso de sangue periférico em vez de medula óssea como fonte de células hematopoiéticas e a idade avançada do receptor. O tempo médio de diagnóstico de GVHD crônica é de 4,5 me- ses após o transplante de irmão-HLA idêntico e 4 meses após o trans- plante de doador não aparentado. A GVHD crônica de novo quase nunca ocorre após 2 anos após o HCT alogênico.

[0004] Por mais de 20 anos, a combinação de um inibidor da calci- neurina (por exemplo, ciclosporina e tacrolimus) com metotrexato man- teve-se o padrão de tratamento para a prevenção de GVHD. Apesar da administração de rotina de profilaxia imunológica, GVHD clinicamente significativa (Grau II - IV) ocorre em aproximadamente 30 a 65% dos pacientes submetidos a HCT relacionado com HLA compatível e 60 a 80% dos pacientes que recebem HCT de doador não aparentado. A GVHD aguda é um evento precoce após o HCT, com um tempo médio de início de aproximadamente 25 a 30 dias. Em pacientes com GVHD muito severa, as taxas de mortalidade excedem 90%. Uma explicação para isso é que, uma vez estabelecida, ocorrem respostas ineficazes à terapia de primeira linha com corticosteroides em altas doses em mais de 50% dos pacientes. A sobrevida é significativamente reduzida para pacientes que demonstram refratariedade a esteroides ou que reque- rem tratamento prolongado. Mesmo quando bem-sucedidas, altas do- ses de corticosteroides são uma fonte importante de morbidade devido ao aumento de infecções e descondicionamento que coloca os pacien- tes em risco significativo de TRM.

[0005] Lesões no tecido do hospedeiro causadas pelos regimes de condicionamento de HCT, incluindo quimioterapia de alta dose e / ou irradiação corporal total (TBI), são consideradas a primeira etapa no de- senvolvimento de GVHD aguda. Lesões no tecido do hospedeiro cau- sadas pelo regime de condicionamento levam à liberação de citocinas pró-inflamatórias (tal como TNF-α, IL-1β e IL-6), e também a liberação de padrões moleculares associados a danos (DAMPs) e padrões mole- culares associados a patógenos (PAMPs). Tanto os DAMPs quanto os PAMPs podem ativar células apresentadoras de antígenos (APCs), tal como células dendríticas (DCs), ligando-se a receptores de reconheci- mento de padrões (PRRs). As APCs do hospedeiro subsequentemente ativam as células T do doador e uma cascata imunológica que resulta na liberação de citocinas pró-inflamatórias e na expansão das células T alo-reativas específicas do antígeno que têm como alvo os tecidos do hospedeiro, resultando em GVHD. É, portanto, de grande interesse ex- plorar se a GVHD pode ser atenuada ao direcionar a resposta do hos- pedeiro a lesões do tecido e prevenir a ativação de APCs, os processos chave no início da GVHD.

[0006] Até o momento, o tratamento e a prevenção de GVHD tem se concentrado predominantemente na inibição farmacológica ou na de- pleção de células T por meio de abordagens in vivo ou ex vivo para limitar a expansão de células T alo-reativas que medeiam a lesão do tecido. Embora as estratégias de depleção de células T não seletivas (por exemplo, globulina de antitimócitos) sejam eficazes na prevenção de GVHD, elas não melhoram a sobrevida devido aos riscos de com- pensação de recidiva, infecção e rejeição de enxerto. Por outro lado, a inibição mais seletiva por direcionamento a citocinas pró-inflamatórias únicas não demonstrou benefício clínico no tratamento de GVHD. Como um resultado, além dos anticorpos que depletam as células T, nenhum produto biológico foi aprovado para GVHD e a combinação de tacroli- mus com metotrexato permaneceu o padrão de tratamento para a pre- venção de GVHD. As necessidades médicas significativas não atendi- das exigem produtos biológicos mais seletivos para profilaxia e trata- mento de GVHD.

[0007] A mucosite é um efeito colateral comum e doloroso do trata- mento com quimioterapia e radioterapia para o câncer, que resulta em inflamação e ulceração das membranas mucosas que revestem o trato digestivo. Ela é um resultado de lesão tecidual causada pela radiação / radioterapia (RT) ou quimioterapia. A mucosite pode ocorrer em qual- quer lugar ao longo do trato gastrointestinal (GI), mas a mucosite oral se refere à inflamação e ulceração particulares que ocorrem na boca. A mucosite oral e gastrointestinal (GI) afeta quase todos os pacientes sub- metidos à quimioterapia de alta dose com citarabina e 5-fluorouracil de alta dose, agentes alquilantes e compostos à base de platina e a maioria dos pacientes com malignidades de cabeça e pescoço recebendo radi- oterapia. A mucosite oral induzida por radiação (RIOM) ocorre em 100% dos pacientes com câncer de cabeça e pescoço com radioterapia de fracionamento alterado. Pacientes que sofrem de mucosite oral experi- mentam dor intensa, inflamação, ulceração e sangramento que podem impedir significativamente a capacidade do paciente de engolir, o que também pode limitar o controle do tumor devido à interrupção do trata- mento de câncer. Consequentemente, a mucosite oral é um efeito ad- verso importante observado em pacientes com câncer em quimioterapia e / ou radioterapia para cabeça e pescoço. A mucosite do trato alimentar aumenta a mortalidade e a morbidade e contribui para o aumento dos custos de saúde. Nos Estados Unidos, o custo econômico de RIOM foi estimado em US $ 17.000,00 por paciente com câncer de cabeça e pes- coço.

[0008] A carga de mucosite mais profunda é experimentada como resultado dos regimes de condicionamento usados para o transplante de células-tronco hematopoiéticas (HCT). O regime de tratamento para HCT inclui um regime de precondicionamento, incluindo quimioterapia altamente mucotóxica com ou sem irradiação corporal total (TBI), que é necessária para matar as células hematopoiéticas cancerosas do recep- tor antes do transplante. Este tratamento de precondicionamento causa sérios danos ao trato digestivo. A mucosite de baixo grau inclui eritema da mucosa e ulcerações irregulares ou pseudomembranas. A mucosite severa (grau ≥ 3) está associada a ulcerações confluentes ou pseudo- membranas e sangramento com trauma menor, que pode progredir para necrose do tecido, sangramento espontâneo significativo e consequên- cias com risco de vida. Outra indicação relacionada à mucosite em pa- cientes que recebem HCT é a doença do enxerto versus hospedeiro oral (GVHD), que é uma forma de GVHD crônica. Tal como acontece com a mucosite induzida por quimioterapia e radiação, a GVHD oral inclui eri- tema da mucosa, ulcerações e lesões orais descamativas dolorosas. No entanto, falta uma verdadeira definição de caso clínico de GVHD aguda oral, pois vários fatores, particularmente a quimioterapia de condiciona- mento com ou sem radiação concomitante, contribuem para o desen- volvimento da lesão oral durante os primeiros 28 dias após o HCT.

[0009] Conforme indicado, GVHD, mucosite e indicações relaciona- das envolvem um elemento de dano ao tecido. Para combater esses desafios, há uma necessidade na técnica de métodos de tratamento e prevenção eficazes de GVHD e mucosite.

[0010] SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] É aqui fornecido um método para prevenir ou tratar a doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) ou mucosite em um indivíduo em necessidade de tratamento, que pode compreender administrar uma proteína CD24 ao indivíduo. O método ou uso pode reduzir o risco do indivíduo de GVHD aguda de Grau III - IV. O indivíduo pode ser humano. O indivíduo pode ser ou pode ter sido submetido a um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HCT). O indivíduo pode ter câncer, que pode ser leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide crônica (LMC), síndrome mielodisplásica (SMD) ou leucemia mielomonocítica crônica (LMMC).

[0012] A proteína CD24 pode ser administrada em uma dose de 240 mg ou 480 mg. A proteína CD24 pode ser administrada antes ou depois do HCT, e pode ser administrada um dia antes do HCT. A proteína CD24 pode ser administrada mais de uma vez, e pode ser administrada em doses quinzenais. As doses podem compreender uma dose no dia antes do HCT, uma dose no dia 14 após o HCT, e uma dose no dia 28 após o HCT, e as doses podem ser, respectivamente, 480 mg, 240 mg e 240 mg.

[0013] A proteína CD24 pode compreender um polipeptídeo CD24 humano maduro fundido em seu N terminal ou C terminal a uma região Fc de uma proteína de imunoglobulina humana (Ig). O polipeptídeo CD24 humano maduro pode compreender a sequência apresentada em SEQ ID NO: 1 ou 2. A proteína Ig pode ser humana. A região Fc pode compreender uma região de dobradiça e domínios CH2 e CH3 de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou IgA. A região Fc pode compreender uma região de dobradiça e domínios CH2, CH3 e CH4 de IgM. A proteína CD24 pode compreender uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12. A sequência de aminoácidos da proteína CD24 pode consistir da se- quência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12. A proteína CD24 pode ser solúvel, e pode ser glicosilada. A proteína CD24 pode ser pre- parada usando um sistema de expressão eucariótico, que pode com- preender expressão a partir de um vetor em células de mamífero. As células podem ser células de ovário de hamster chinês.

[0014] BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0015] A Figura 1A mostra a composição de aminoácidos da prote- ína de fusão CD24 de comprimento total, CD24Fc (também descrita aqui coma CD24Ig) (SEQ ID NO: 5). Os 26 aminoácidos sublinhados são o peptídeo sinal de CD24 (SEQ ID NO: 4), que são removidos por clivagem durante a secreção de uma célula que expressa a proteína e, portanto, ausente da versão processada da proteína (SEQ ID NO: 6). A porção em negrito da sequência é o domínio extracelular da proteína CD24 madura usada na proteína de fusão (SEQ ID NO: 2). O último aminoácido (A ou V) que está normalmente presente na proteína CD24 madura foi deletado do construto para evitar imunogenicidade. As letras não sublinhadas e não negrito são a sequência de IgG1 Fc, incluindo a região de dobradiça e os domínios CH1 e CH2 (SEQ ID NO: 7). A Figura 1B mostra a sequência de CD24VFc (SEQ ID NO: 8), em que a proteína CD24 humana madura (negrito) é a variante polimórfica de valina de SEQ ID NO: 1. A Figura 1C mostra a sequência de CD24AFc (SEQ ID NO: 9), em que a proteína CD24 humana madura (negrito) é a variante polimórfica de alanina de SEQ ID NO: 1. As várias partes da proteína de fusão nas Figuras 1B e 1C são marcadas como na Figura 1A e o aminoácido valina / alanina variante está duplamente sublinhado.

[0016] A Figura 2 mostra variações de sequência de aminoácidos entre proteínas CD24 maduras de camundongo (SEQ ID NO: 3) e hu- mano (SEQ ID NO: 2). Os potenciais sítios de O-glicosilação estão em negrito, e os sítios de N-glicosilação estão sublinhados.

[0017] Figuras 3A-C. Análise de modelagem compartimental Win- Nonlin de farmacocinéticos de CD24IgG1 (CD24Fc). Os círculos aber- tos representam a média de 3 camundongos, e a linha é a curva farma- cocinética prevista. Figura 3A. Injeção i.v. de 1 mg de CD24IgG1. Figura 3B. Injeção s.c. de 1 mg de CD24IgG1 (CD24Fc). Figura 3C. Compara- ção das quantidades totais de anticorpos no sangue medidas pelas áreas sob a curva (AUC), meia-vida e concentração máxima no sangue. Observa-se que, em geral, a AUC e Cmax da injeção s.c. é de cerca de 80% de injeção i.v., embora a diferença não seja estatisticamente signi- ficativa.

[0018] Figuras 4A-B. A interação CD24-Siglec G (10) discrimina en- tre PAMP e DAMP. Figura 4A. A resposta do hospedeiro ao PAMP não foi afetada pela interação CD24-Siglec G (10). Figura 4B. A interação CD24-Siglec G (10) reprime a resposta do hospedeiro ao DAMP, possi- velmente através do SHP-1 associado ao Siglec G10.

[0019] Figuras 5A-C. CD24 Fc liga-se a Siglec 10 e HMGB1 e ativa Siglec G, o homólogo de camundongo de Siglec 10 humano. Figura 5A. Medição de afinidade da interação CD24Fc-Siglec 10. Figura 5B. CD24Fc interage especificamente com HMGB-1 de uma maneira cá- tion-dependente. CD24Fc foi incubado com HMGB1 em 0,1 mM de CaCl2 e MgCl2, na presença ou ausência do quelante catiônico EDTA. O CD24Fc sofre “pull-down” com microesferas de proteína G, e as quan- tidades de HMGB1, CD24Fc ou Fc de controle são determinadas por Western blot. Figura 5C. CD24Fc ativa Siglec G de camundongo indu- zindo a fosforilação de tirosina (painel do meio) e associação com SHP- 1 (painel superior). As quantidades de Siglec G são mostradas no painel inferior. As células CD24-/- do baço foram estimuladas com 1 µg / ml de CD24Fc, Fc de controle ou veículo de controle (PBS) por 30 minutos. Siglec G foi então imunoprecipitado e sondado com anti-fosfo-tirosina ou anti-SHP-1.

[0020] Figuras 6A-B. CD24Fc inibe a produção de TNF-α e IFN-γ por células T humanas ativadas anti-CD3. As PBML humanas foram es- timuladas com anti-CD3 por 4 dias na presença ou ausência de CD24Fc e as quantidades de IFN-γ e TNF-α liberadas no sobrenadante da cul- tura de células foram medidas por ELISA. Os dados apresentados são médias de triplicado. Barra de erro, SEM.

[0021] Figuras 7A-B. O CD24 inibe a produção de citocinas inflama- tórias por macrófagos humanos. Figura 7A. O silenciamento do ShRNA de CD24 leva à produção espontânea de TNF-α, IL-1β e IL-6. As células THP1 foram transduzidas com vetores lentivirais que codificam tanto moléculas de shRNA de CD24 embaralhadas quanto independentes. As células transduzidas foram diferenciadas em macrófagos por cultura du- rante 4 dias com PMA (15 ng / ml). Após a remoção por lavagem das células PMA e células não aderentes, as células foram cultivadas por mais 24 horas para medição de citocinas inflamatórias, por matriz de microesferas de citocinas. Figura 7B. Como na Figura 7A, exceto que a dada concentração de CD24Fc ou IgG Fc de controle foi adicionada aos macrófagos nas últimas 24 horas. Os dados mostrados na Figura 4A são médias e S.D. de três experimentos independentes, enquanto aque- les na Figura 4B são representativos de pelo menos 3 experimentos in- dependentes.

[0022] A Figura 8 mostra um gráfico da concentração média de CD24Fc no plasma (± SD) por tratamento para uma população de PK avaliável em indivíduos humanos. PK = farmacocinética; SD = desvio padrão.

[0023] A Figura 9 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de Cmax de CD24Fc versus dose para uma população de PK avaliável.

[0024] A Figura 10 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de AUC0-42d de CD24Fc versus dose para uma população de PK avaliá- vel.

[0025] A Figura 11 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de AUC0-inf de CD24Fc versus dose para uma população de PK avaliá- vel.

[0026] A Figura 12 mostra que o modelo para o ensaio randomizado de Fase IIa de escalonamento de dose controlado por placebo foi reali- zado para avaliar a adição de CD24Fc à profilaxia de GVHD aguda pa- drão de tratamento em pacientes com câncer submetidos a transplante alogênico mieloablativo de células-tronco hematopoiéticas (HCT).

[0027] A Figura 13 mostra o esquema de dosagem para coortes de dose única e doses múltiplas no ensaio de Fase IIa.

[0028] A Figura 14 mostra o tempo médio para o enxerto para paci- entes inscritos no ensaio.

[0029] A Figura 15 mostra o quimerismo no doador mieloide para pacientes inscritos no ensaio.

[0030] A Figura 16 mostra a incidência de GVHD aguda de Grau II

- IV e Grau III - IV na coorte de tratamento (CD24Fc).

[0031] A Figura 17 mostra a incidência cumulativa de aGVHD grau III - IV 180 dias após o HCT em pacientes que receberam metotrexato / tacrolimus + CD24Fc em comparação com pacientes de controle con- temporâneos que receberam metotrexato / tacrolimus.

[0032] A Figura 18 mostra a análise de sobrevida de Kaplan-Meier comparando 180 dias após aGVHD Grau III - IV, sobrevida livre de reci- diva em pacientes que receberam CD24Fc ou controle com placebo.

[0033] A Figura 19 mostra a análise de sobrevida de Kaplan-Meier comparando 180 dias após aGVHD Grau III - IV, sobrevida livre de reci- diva em pacientes recebendo CD24Fc com controle contemporâneo.

[0034] A Figura 20 mostra a análise de sobrevida de Kaplan-Meier comparando a sobrevida geral de pacientes que receberam CD24Fc ou controle com placebo em 800 dias após o transplante.

[0035] A Figura 21 mostra a análise de sobrevida de Kaplan-Meier comparando a sobrevida geral de pacientes que receberam CD24Fc ou controle contemporâneo 800 dias após o transplante.

[0036] As Figuras 22A-B mostram os dados PK a partir das coortes de dose única de 240 e 480 mg. Figura 22A. Gráfico da concentração plasmática média ( Desvio Padrão) de CD24Fc (ng / mL) versus tempo em uma escala linear. Figura 22B. Gráfico da concentração plasmática média ( Desvio Padrão) de CD24Fc (ng / mL) versus tempo em uma escala semilogarítmica.

[0037] As Figuras 23A-B mostram os dados PK da coorte de doses múltiplas. Figura 23A. Gráfico da concentração plasmática média ( Desvio Padrão) de CD24Fc (ng / mL) versus tempo em uma escala Li- near. Figura 23B. Gráfico da concentração plasmática média ( Desvio Padrão) de CD24Fc (ng / mL) versus tempo em uma escala semiloga- rítmica.

[0038] As Figuras 24A-B mostram o efeito do tratamento com

CD24Fc na mucosite oral. Figura 24A. Escores combinados de muco- site. Como uma medida do efeito sobre a mucosite, foi gerado um múl- tiplo do número de dias que os pacientes passaram com mucosite se- vera (Grau 3 ou 4) e isso é fornecido nas barras, juntamente com o nú- mero de pacientes que apresentavam a mucosite entre parênteses. Fi- gura 24B. Redução dose-dependente do escore de mucosite por CD24Fc. São apresentadas as médias e os erros padrão do escore de mucosite individual. O coeficiente de correlação e o valor P entre a dose de fármaco e o escore de mucosite dos pacientes foram determinados pelo método de Pearson. R = -0,9983, P = 0,0009.

[0039] As Figuras 25A-B mostram a sobrevida livre de GVHD de Grau III - IV após 180 dias no grupo de CD24Fc em comparação com o grupo de controle com placebo (Figura 25A) e o grupo de controle con- temporâneo (Figura 25B).

[0040] As Figuras 26A-B mostram a sobrevida livre de recidiva no grupo de CD24Fc em comparação com o grupo de controle com placebo (Figura 26A) e o grupo de controle contemporâneo (Figura 26B).

[0041] DESCRIÇÃO DETALHADA

[0042] O dano tecidual pode levar à liberação de citocinas pró-infla- matórias (tal como TNF-α, IL-1β e IL-6), e também à liberação de pa- drões moleculares associados a danos (DAMPs) e padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs). Tanto os DAMPs quanto os PAMPs podem ativar células apresentadoras de antígenos (APCs), tais como células dendríticas (DCs), ligando-se a receptores de reconhecimento de padrões (PRRs). As APCs do hospedeiro subsequentemente ativam as células T do doador e uma cascata imunológica que resulta na libe- ração de citocinas pró-inflamatórias e na expansão das células T alo- reativas específicas do antígeno direcionadas aos tecidos do hospe- deiro. São esses eventos que levam ao desenvolvimento de GVHD e exacerbam os efeitos da mucosite. Por exemplo, RIOM começa como uma inflamação aguda da mucosa oral, língua e faringe após a radiote- rapia, que coincide com o recrutamento de várias células inflamatórias e liberação de citocinas inflamatórias, mediadores quimiotáticos, e fato- res de crescimento.

[0043] O envolvimento de dano tecidual na mucosite e GVHD levan- tou a perspectiva de que a regulação negativa da resposta do hospe- deiro aos DAMPs por CD24Fc pode ser explorada para a terapia de GVHD. Os estudos pré-clínicos dos inventores demonstraram que CD24Fc visa especificamente a inflamação mediada por DAMP e pre- vine a GVHD em modelos de camundongo, incluindo um modelo de ca- mundongo humanizado. É importante ressaltar que o fármaco tem van- tagens sobre os imunossupressores convencionais, na medida que não causa supressão imunológica geral e o uso de altas doses de CD24Fc não bloqueia a resposta de anticorpos em primatas não humanos. Os dados também demonstram que a CD24Fc previne a GVHD, mas pre- serva o efeito enxerto versus leucemia (GVL), tornando-o um fármaco ideal para a profilaxia da GVHD em pacientes com leucemia. Final- mente, os estudos dos inventores em primatas não humanos demons- tram que a CD24Fc não suprime as respostas imunes antígeno-especí- ficas, o que sugere que a CD24Fc provavelmente não aumentará o risco de infecção.

[0044] Os inventores descobriram que uma forma solúvel de CD24 é altamente eficaz para prevenir a doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) e condições associadas tal como mucosite, bem como para prevenir a recidiva da leucemia após HCT. Os inventores também des- cobriram que a CD24Fc produziu uma redução dose-dependente na mucosite severa (grau ≥ 3) entre os pacientes que receberam terapia de HCT. Esses efeitos podem ser mediados por DAMPs. O reconheci- mento de padrões está envolvido na resposta inflamatória desencade-

ada por PAMPs e DAMPs. Os inventores perceberam que estudos re- centes demonstraram que uma resposta exacerbada do hospedeiro a DAMPs pode desempenhar um papel na patogênese de doenças infla- matórias e autoimunes. DAMPs revelaram promover a produção de ci- tocinas inflamatórias e doenças autoimunes e em modelos animais, e os inibidores de DAMPs, tal como HMGB1 e HSP90, consequente- mente, melhoram a artrite reumatoide (AR). TLRs, RAGE-R, DNGR (co- dificado por Clec9A) e Mincle mostraram ser os receptores responsáveis por mediar a inflamação iniciada por uma variedade de DAMPs.

[0045] O trabalho recente dos inventores demonstrou que as inte- rações CD24-Siglec G discriminam a imunidade inata aos DAMPs a par- tir dos PAMPs. As proteínas Siglec são membros da superfamília da imunoglobulina (Ig) associada à membrana que reconhecem uma vari- edade de estruturas contendo ácido siálico. A maioria dos Siglecs tem um motivo inibidor de imunotirosina intracelular (ITIM) que se associa com SHP-1, -2 e Cbl-b para controlar os principais reguladores das res- postas inflamatórias. Os inventores relataram a CD24 como o primeiro ligando natural para um Siglec, Siglec G em camundongo e Siglec 10 em humano. O Siglec G interage com a CD24 sialilado para suprimir a resposta do hospedeiro mediada por TLR a DAMPs, tal como o HMGB1, por meio de um mecanismo de sinalização SHP-1/2.

[0046] CD24 humano é uma pequena molécula ancorada por GPI codificada por um quadro de leitura aberto de 240 pares de bases no gene CD24. Dos 80 aminoácidos, os primeiros 26 constituem o peptídeo sinal, enquanto os últimos 23 servem como um sinal de clivagem para permitir a fixação da cauda de GPI. Como um resultado, a molécula CD24 humana madura tem apenas 31 aminoácidos. Um dos 31 amino- ácidos é polimórfico entre a população humana. Uma transição de C para T no nucleotídeo 170 do quadro de leitura aberto resulta na subs- tituição de Alanina (A) por Valina (V) no resíduo 31 da proteína madura.

Uma vez que este resíduo é imediatamente N-terminal ao sítio de cliva- gem, e uma vez que a substituição é não conservativa, esses dois alelos podem ser expressos com diferentes eficiências na superfície celular. De fato, estudos de transfecção com cDNA demonstraram que o alelo CD24v é mais eficientemente expresso na superfície celular. Consis- tente com isso, CD24v/v PBL expressou níveis mais elevados de CD24, especialmente em células T.

[0047] Os inventores demonstraram que a CD24 regula negativa- mente a resposta do hospedeiro a DAMPs celulares que são liberados como resultado de dano no tecido ou órgão, e pelo menos dois meca- nismos de sobreposição podem explicar esta atividade. Primeiro, a CD24 se liga a vários DAMPs, incluindo HSP70, HSP90, HMGB1 e nu- cleolina e reprime a resposta do hospedeiro a esses DAMPs. Para fazer isso, presume-se que a CD24 pode capturar os estímulos inflamatórios para evitar a interação com seus receptores, TLR ou RAGE. Em se- gundo lugar, usando um modelo de camundongo induzido por acetami- nofeno de necrose hepática e garantindo a inflamação, os inventores demonstraram que, por meio da interação com seu receptor, Siglec G, CD24 fornece uma regulação negativa poderosa para a resposta do hospedeiro a lesões nos tecidos. Para atingir esta atividade, a CD24 pode se ligar e estimular a sinalização por Siglec G, em que o SHP1 associado a Siglec G desencadeia a regulação negativa. Ambos os me- canismos podem atuar em conjunto, já que camundongos com mutação direcionada em qualquer um dos genes geraram uma resposta inflama- tória muito mais forte. Na verdade, as DC cultivadas da medula óssea de camundongos CD24-/- ou Siglec G-/- produziram níveis mais elevados de citocinas inflamatórias quando estimuladas com HMGB1, HSP70 ou HSP90. Para o conhecimento dos inventores, CD24 é o único receptor inibidor de DAMP capaz de interromper a inflamação desencadeada por

DAMPs e nenhum fármaco que está atualmente disponível atinge espe- cificamente a resposta inflamatória do hospedeiro a lesões nos tecidos. Além disso, os inventores demonstraram a capacidade da proteína CD24 solúvel exógena de aliviar a doença autoimune mediada por DAMP usando modelos de camundongo de AR, MS e GVHD.

[0048] 1. Definições.

[0049] A terminologia usada neste documento tem a finalidade de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser limi- tante. Conforme usado na especificação e nas reivindicações em anexo, as formas singulares “um”, “uma” e “o”, “a” incluem referentes plurais, a menos que o contexto dite claramente o contrário.

[0050] Para a citação de faixas numéricas neste documento, cada número intermediário entre eles com o mesmo grau de precisão é expli- citamente considerado. Por exemplo, para a faixa de 6 a 9, os números 7 e 8 são considerados além de 6 e 9, e para a faixa de 6,0 a 7,0, os números 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 e 7,0 são explicita- mente considerados.

[0051] Um “peptídeo” ou “polipeptídeo” é uma sequência ligada de aminoácidos e pode ser natural, sintético ou uma modificação ou com- binação de natural e sintético.

[0052] “Substancialmente idêntico” pode significar que uma primeira e uma segunda sequência de aminoácidos são pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idênticas ao longo de uma região de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 , 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 , 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220 , 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 ou 300 aminoácidos.

[0053] “Tratamento” ou “tratar”, quando se refere à proteção de um animal contra uma doença, significa prevenir, suprimir, reprimir ou elimi- nar completamente a doença. A prevenção da doença envolve a admi- nistração de uma composição da presente invenção a um animal antes do início da doença. A supressão da doença envolve a administração de uma composição da presente invenção a um animal após a indução da doença, mas antes do seu aparecimento clínico. A repressão da do- ença envolve a administração de uma composição da presente inven- ção a um animal após o aparecimento clínico da doença.

[0054] Uma “variante” pode significar um peptídeo ou polipeptídeo que difere na sequência de aminoácidos pela inserção, deleção ou substituição conservativa de aminoácidos, mas mantém pelo menos uma atividade biológica. Exemplos representativos de “atividade bioló- gica” incluem a capacidade de se ligar a um receptor do tipo toll e de ser ligado por um anticorpo específico. Variante também pode significar uma proteína com uma sequência de aminoácidos que é substancial- mente idêntica a uma proteína referenciada com uma sequência de ami- noácidos que mantém pelo menos uma atividade biológica. Uma subs- tituição conservativa de um aminoácido, isto é, a substituição de um aminoácido por um aminoácido diferente de propriedades similares (por exemplo, hidrofilicidade, grau e distribuição de regiões carregadas) é reconhecida na técnica como tipicamente envolvendo uma pequena al- teração. Essas pequenas alterações podem ser identificadas, em parte, considerando o índice hidropático de aminoácidos, conforme entendido na técnica. Kyte e outros, J. Mol. Biol. 157: 105 a 132 (1982). O índice hidropático de um aminoácido é baseado na consideração de sua hidro- fobicidade e carga. É conhecido na técnica que aminoácidos de índices hidropáticos similares podem ser substituídos e ainda manter a função da proteína. Em um aspecto, os aminoácidos tendo índices hidropáticos de ± 2 são substituídos. A hidrofilicidade dos aminoácidos também pode ser usada para revelar substituições que resultariam em proteínas man- tendo a função biológica. Uma consideração da hidrofilicidade dos ami- noácidos no contexto de um peptídeo permite o cálculo da maior hidro- filicidade média local desse peptídeo, uma medida útil que foi relatada para correlacionar bem com a antigenicidade e imunogenicidade. A Pa- tente U.S. No. 4.554.101, aqui totalmente incorporada por referência. A substituição de aminoácidos com valores de hidrofilicidade similares pode resultar em peptídeos que mantêm atividade biológica, por exem- plo imunogenicidade, como é entendido na técnica. As substituições po- dem ser realizadas com aminoácidos tendo valores de hidrofilicidade dentro de ± 2 um do outro. Tanto o índice de hidrofobicidade quanto o valor de hidrofilicidade dos aminoácidos são influenciados pela cadeia lateral particular desse aminoácido. Consistente com essa observação, as substituições de aminoácidos que são compatíveis com a função bi- ológica são entendidas como dependendo da similaridade relativa dos aminoácidos e, particularmente, das cadeias laterais desses aminoáci- dos, conforme revelado pela hidrofobicidade, hidrofilicidade, carga, ta- manho e outras propriedades.

[0055] 2. CD24

[0056] É aqui fornecida uma proteína CD24, que pode compreender um CD24 maduro ou uma variante do mesmo. O CD24 maduro corres- ponde ao domínio extracelular (ECD) da CD24. O CD24 maduro pode ser de um humano ou outro mamífero. Conforme descrito acima, a pro- teína CD24 humana madura tem 31 aminoácidos de comprimento e tem um resíduo variável de alanina (A) ou valina (V) em sua extremidade C- terminal. A proteína CD24 madura pode compreender a seguinte se- quência:

[0057] SETTTGTSSNSSQSTSNOSLAPNPTNATTK (V / A) (SEQ ID NO: 1)

[0058] A valina ou alanina C-terminal pode ser imunogênica e pode ser omitida da proteína CD24, o que pode reduzir sua imunogenicidade. Portanto, a proteína CD24 pode compreender a sequência de aminoá- cidos de CD24 humana madura sem o aminoácido C-terminal:

[0059] SETTTGTSSNSSQSTSNOSLAPNPTNATTK (SEQ ID NO: 2)

[0060] Apesar das variações de sequência consideráveis na se- quência de aminoácidos das proteínas CD24 maduras de camundongo e humanas, elas são funcionalmente equivalentes, já que a CD24Fc hu- mana mostrou ser ativa no camundongo. A sequência de aminoácidos de CD24 ECD humana mostra alguma conservação de sequência com a proteína de camundongo (39% de identidade; número de acesso ao Genbank NP_033976). No entanto, não é tão surpreendente que a por- centagem de identidade não seja maior, já que a CD24 ECD tem apenas 27 a 31 aminoácidos de comprimento, dependendo da espécie, e se liga a alguns de seus receptores, tal como Siglec 10 / G, é mediado por seus açúcares de ácido siálico e / ou galactose da glicoproteína. A identidade da sequência de aminoácidos entre os domínios extracelulares das pro- teínas receptoras Siglec-10 humano (número de acesso ao GenBank AF310233) e seu homólogo murino Siglec-G (número de acesso ao GenBank NP_766488) é de 63% (Figura 2). Como um resultado da con- servação da sequência entre a CD24 de camundongo e humana princi- palmente no C-terminal e na abundância de sítios de glicosilação, vari- ações significativas nas proteínas CD24 maduras podem ser toleradas usando a proteína CD24, especialmente se essas variações não afeta- rem o resíduos no C-terminal ou não afetam os sítios de glicosilação da CD24 de camundongo ou CD24 humana. Portanto, a proteína CD24 pode compreender a sequência de aminoácidos de CD24 murina ma- dura:

[0061] NQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRG (SEQ ID NO: 3).

[0062] A sequência de aminoácidos de CD24ECD humana mostra mais conservação de sequência com a proteína de macaco cynomolgus (52% de identidade; número de acesso UniProt UniProtKB - I7GKK1) do que com camundongo. Novamente, isso não é surpreendente, dado que a porcentagem de identidade não é maior, pois a ECD tem apenas 29 a 31 aminoácidos de comprimento nessas espécies, e o papel dos resí- duos de açúcar na ligação ao(s) seu(s) receptor(es). A sequência de aminoácidos do receptor Siglec-10 de cynomolgous não foi determi- nada, mas a identidade de sequência de aminoácidos entre as proteínas Siglec-10 de macaco rhesus e humana (número de acesso ao GenBank XP_001116352) é de 89%. Portanto, a proteína CD24 também pode compreender a sequência de aminoácidos de CD24 de macaco cyno- molgous (ou rhesus) madura:

[0063] TVTTSAPLSSNSPQNTSTTPNPANTTTKA (SEQ ID NO: 10)

[0064] A proteína CD24 pode ser solúvel. A proteína CD24 pode compreender ainda um peptídeo sinal N-terminal, que pode permitir a secreção da proteína a partir de uma célula que expressa a proteína. A sequência do peptídeo sinal pode compreender a sequência de amino- ácidos MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYS (SEQ ID NO: 4). Alternati- vamente, a sequência sinal pode compreender qualquer uma daquelas que são encontradas em outras proteínas transmembrana ou segrega- das, ou aquelas modificadas a partir dos peptídeos sinal existentes co- nhecidos na técnica.

[0065] a. Fusão

[0066] A proteína CD24 pode ser fundida em sua extremidade N- ou C-terminal a um marcador proteico, que pode compreender uma por- ção de uma proteína Ig de mamífero, que pode ser humana ou de ca- mundongo ou de outra espécie. A porção pode compreender uma região Fc da proteína Ig. A região Fc pode compreender pelo menos um dentre a região de dobradiça, domínios CH2, CH3 e CH4 da proteína Ig. A pro- teína Ig pode ser IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou IgA humana, e a região Fc pode compreender a região de dobradiça, e os domínios CH2 e CH3 da Ig. A região Fc pode compreender o isotipo da imunoglobulina G1 hu- mana (IgG1) SEQ ID NO: 7. A proteína Ig também pode ser IgM, e a região Fc pode compreender a região de dobradiça e os domínios CH2, CH3 e CH4 de IgM. O marcador proteico pode ser um marcador de afi- nidade que auxilia na purificação da proteína, e / ou um marcador de aumento de solubilidade que aumenta a solubilidade e a recuperação de proteínas funcionais. O marcador proteico também pode aumentar a valência da proteína CD24. O marcador proteico também pode compre- ender GST, His, FLAG, Myc, MBP, NusA, tioredoxina (TRX), pequeno modificador semelhante à ubiquitina (SUMO), ubiquitina (Ub), albumina ou um Ig de camelídeo. Os métodos para preparar proteínas de fusão e purificar proteínas de fusão são bem conhecidos na técnica.

[0067] Com base na pesquisa pré-clínica, para a construção da pro- teína de fusão CD24Fc identificada nos exemplos, a forma truncada da molécula CD24 nativa de 30 aminoácidos, que carece do aminoácido polimórfico final antes do sítio de clivagem do sinal GPI (ou seja, uma proteína CD24 madura tendo SEQ ID NO: 2), foi usada. A sequência de CD24 humana madura é fundida a um domínio Fc de IgG1 humana (SEQ ID NO: 7). A sequência da proteína de fusão CD24Fc de compri- mento total é fornecida na SEQ ID NO: 5 (Figura 1A), e a sequência da versão processada da proteína de fusão CD24Fc que é secretada a par- tir da célula (ou seja, sem a sequência sinal que é removida por cliva- gem) é fornecida na SEQ ID NO: 6. Variantes polimórficas processadas de CD24 madura (isto é, proteína CD24 madura tendo SEQ ID NO: 1) fundida a IgG1 Fc pode compreender a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 11 ou 12.

[0068] b. Produção

[0069] A proteína CD24 pode ser fortemente glicosilada e pode es-

tar envolvida em funções de CD24, como coestimulação de células imu- nes e interação com uma molécula de padrão molecular associado a danos (DAMP). A proteína CD24 pode ser preparada usando um sis- tema de expressão eucariótico. O sistema de expressão pode implicar na expressão de um vetor em células de mamífero, tais como células de ovário de hamster chinês (CHO). O sistema também pode ser um vetor viral, tal como um vetor retroviral com defeito de replicação que pode ser usado para infectar células eucarióticas. A proteína CD24 tam- bém pode ser produzida a partir de uma linhagem celular estável que expressa a proteína CD24 a partir de um vetor ou uma porção de um vetor que foi integrado no genoma celular. A linhagem celular estável pode expressar a proteína CD24 a partir de um vetor retroviral com de- feito de replicação integrado. O sistema de expressão pode ser GPEx™.

[0070] c. Composição Farmacêutica

[0071] A proteína CD24 pode estar contida em uma composição far- macêutica, que pode compreender uma quantidade farmaceuticamente aceitável da proteína CD24. A composição farmacêutica pode compre- ender um carreador farmaceuticamente aceitável. A composição farma- cêutica pode compreender um solvente, que pode manter a proteína CD24 estável por um período prolongado. O solvente pode ser PBS, que pode manter a proteína CD24 estável por pelo menos 66 meses a 20° C (15 ~ -25° C). O solvente pode ser capaz de acomodar a proteína CD24 em combinação com outro fármaco.

[0072] A composição farmacêutica pode ser formulada para admi- nistração parenteral incluindo, mas não se limitada a injeção ou infusão contínua. As formulações para injeção podem estar na forma de sus- pensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e po- dem conter agentes de formulação incluindo, mas não limitados a agen- tes de suspensão, estabilização e dispersão. A composição também pode ser fornecida na forma de pó para reconstituição com um veículo adequado incluindo, mas não limitado a água estéril livre de pirogênio.

[0073] A composição farmacêutica também pode ser formulada como uma preparação de depósito, que pode ser administrada por im- plantação ou por injeção intramuscular. A composição pode ser formu- lada com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (como uma emulsão em um óleo aceitável, por exemplo), resinas de troca iônica, ou como derivados moderadamente solúveis (como um sal moderada- mente solúvel, por exemplo). Uma formulação para injeção subcutânea pode ser particularmente relevante para uma indicação como lúpus e suas manifestações e complicações associadas.

[0074] 3. Métodos de Tratamento

[0075] a. GVHD

[0076] É aqui fornecido um método de prevenção, atenuação ou tra- tamento da doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) em um indi- víduo em necessidade de tratamento através de administrar a proteína CD24 ao indivíduo. O indivíduo pode ter GVHD ou estar em risco de desenvolver GVHD. O indivíduo pode ter passado ou pode estar pas- sando por um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HCT). A proteína CD24 pode ser usada profilaticamente para prevenir GVHD em um indivíduo submetido a HCT. A GVHD pode ser GVHD aguda. A pro- teína CD24 pode reduzir o risco do indivíduo ter GVHD aguda de grau III - IV. A GVHD pode ser GVHD crônica, incluindo GVHD oral.

[0077] O indivíduo pode ter um câncer. O câncer pode ser leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mi- eloide crônica (LMC), síndrome mielodisplásica (LMD) ou leucemia mi- elomonocítica crônica (LMMC).

[0078] b. Mucosite

[0079] É fornecido aqui um método de prevenção, atenuação ou tra- tamento de mucosite em um indivíduo em necessidade de tratamento através de administrar a proteína CD24 ao indivíduo. Também é descrito neste documento um método de prevenção, atenuação ou tratamento de outras condições associadas com GVHD ou HCT em um indivíduo em necessidade de tratamento através de administrar a proteína CD24 ao indivíduo. A condição associada pode ser mucosite, que pode ser mucosite oral. A mucosite é uma inflamação dolorosa e ulceração das membranas mucosas que revestem o trato digestivo, geralmente como um efeito adverso do regime de quimioterapia e / ou radioterapia de pre- condicionamento para HCT. A mucosite pode ocorrer em qualquer lugar ao longo do trato gastrointestinal (GI). A mucosite oral se refere à infla- mação e ulceração particulares que ocorrem na boca. A mucosite oral é uma complicação comum e frequentemente debilitante do tratamento de câncer. Muitos receptores de transplantes de células-tronco hemato- poiéticas apresentam mucosite, das quais a mucosite oral é a mais co- mum e a mais debilitante.

[0080] O indivíduo pode ter ou estar em risco de desenvolver mu- cosite, que pode ser mucosite oral. O indivíduo pode ter passado ou pode estar passando por pelo menos uma dentre quimioterapia e radio- terapia. A proteína CD24 pode ser usada profilaticamente para prevenir mucosite em um indivíduo. A proteína CD24 pode reduzir o risco do in- divíduo de ter mucosite severa.

[0081] c. Medicamentos

[0082] Também são fornecidos os usos da proteína CD24 na fabri- cação de um medicamento para os usos aqui descritos.

[0083] d. Regime de Dosagem

[0084] A dose da proteína CD24 administrada pode ser de 0,01 mg / kg a 1000 mg / kg, e pode ser de 1 a 500 mg / kg, dependendo do efeito desejado sobre a GVHD ou mucosite e a via de administração. A proteína CD24 pode ser administrada por infusão intravenosa (IV) ou por injeção subcutânea, intramural (isto é, dentro da parede de uma ca- vidade ou órgão) ou injeção intraperitoneal. A dose pode ser de 10 a

1000 mg, 10 a 500 mg, 240 mg ou 480 mg, que em particular pode ser adequada quando o indivíduo é um ser humano.

[0085] A proteína CD24 pode ser administrada antes ou após o transplante de células-tronco. A proteína CD24 pode ser administrada 1 a 4 dias, particularmente 1 dia, antes do transplante de células-tronco. A proteína CD24 também pode ser administrada em doses múltiplas an- tes ou após o transplante de células-tronco. A proteína CD24 pode ser administrada em 2, 3, 4, 5 ou 6 doses quinzenais. Cada dose da prote- ína CD24 pode ser de 240 mg ou 480 mg. Uma primeira dose pode ser administrada no dia -4 ao dia 0 em relação ao dia do transplante de células-tronco (dia 0), e pode ser administrada no dia -1 em particular. Cada dose subsequente pode ser administrada a cada 9 a 19 ou 11 a 17 dias em diante. Uma segunda dose pode ser administrada no dia +9 a +19 ou no dia +11 a +17, particularmente no dia +14, em relação ao dia do transplante de células-tronco. Uma terceira dose pode ser admi- nistrada no dia +18 a +38, dia +23 a +33, ou dia +22 a +34, particular- mente no dia +28, em relação ao dia do transplante de células-tronco. Em particular, a proteína CD24 pode ser administrada em três adminis- trações quinzenais de 480 mg, 240 mg e 240 mg, respectivamente no dia -1, dia +14 e dia +28 em relação ao dia do transplante de células- tronco. A proteína CD24 pode ser, em particular, CD24Fc.

[0086] A proteína CD24 pode ser administrada antes ou durante pelo menos uma dentre quimioterapia e radioterapia ser administrada ao indivíduo. A proteína CD24 pode ser administrada de modo que es- teja presente quando os DAMPs são liberados.

[0087] e. Tratamento de Combinação

[0088] A proteína CD24 pode ser administrada ao indivíduo em combinação com profilaxia de GVHD padrão de tratamento. A profilaxia de GVHD padrão de tratamento pode incluir a administração de meto- trexato mais inibidor de calcineurina, tal como tacrolimus (Prograf,

FK506) ou ciclosporina (Sandimmune, Neoral). O tacrolimus pode ser administrado no dia -3 em relação ao dia do transplante de células- tronco, e pode ser administrado por via IV ou PO (oral). Para a dosagem IV como uma infusão contínua, a dose inicial pode ser de 0,03 mg / kg / dia com base no peso corporal ajustado. Para a dosagem oral, a dose inicial pode ser 0,045 mg / kg / dose duas vezes ao dia. Se o indivíduo não pode tolerar o tacrolimus, então a ciclosporina pode ser adminis- trada ao indivíduo por via IV a uma dose de 100x a dose de tacrolimus IV (por exemplo, dose inicial de 3 mg / kg / dia). A ciclosporina também pode ser administrada por via oral em uma dose de 3x a dose IV. Quando a marca Neoral é utilizada, devido à maior biodisponibilidade, a ciclosporina pode ser administrada por via oral em 2x a dose IV.

[0089] Na ausência de GVHD, os níveis de tacrolimus podem ser monitorados quanto à dosagem terapêutica apenas durante os primei- ros 100 dias após o transplante. O nível mínimo terapêutico alvo para tacrolimus pode ser de 5 a 15 ng / mL. Os níveis de tacrolimus podem ser monitorados no mínimo três vezes (por exemplo, a cada 48 a 72 horas) durante a primeira semana após a infusão da proteína CD24 (dia 0 ao dia 7). Na ausência de GVHD ou recidiva, a redução gradual do tacrolimus pode começar no dia +100 após o transplante. Na presença de GVHD, o tacrolimus pode ser continuado na dosagem terapêutica.

[0090] Metotrexato pode ser usado em combinação com o tacroli- mus para a profilaxia de GVHD padrão. O metotrexato pode ser admi- nistrado por via intravenosa na dose de 15 mg / m2 / dose uma vez ao dia no Dia 1 após o HCT, e na dose de 10 mg / m2 / dose nos dias 3, 6 e 11 após o HCT.

[0091] Para mucosite, a proteína CD24 pode ser administrada com pelo menos um agente imunomodulador (isto é, diferente de uma prote- ína CD24) para minimizar o componente inflamatório exacerbante. A proteína CD24 pode ser administrada em combinação com alopurinol para indivíduos tratados com 5-fluorouracil.

[0092] A proteína CD24 pode ser administrada em combinação com um ou mais dos seguintes regimes de condicionamento mieloablativos, e pode ser administrada antes ou durante os regimes de condiciona- mento. A proteína CD24 pode ser administrada de modo que esteja pre- sente quando os DAMPs são liberados em resposta a pelo menos um de um regime de condicionamento mieloablativo e o HCT.

[0093] Bussulfano e Fludarabina

[0094] O bussulfano pode ser administrado nos dias -5 a -2 em re- lação ao dia do transplante de células-tronco. A dose pode ser de 3,2 mg / kg / dia ou 130 mg / m2 / dia, e pode ser administrado por via intra- venosa. A dose total pode ser de 12,8 mg / kg ou 520 mg / m2. A fluda- rabina pode ser administrada nos dias -5 a -2 em relação ao dia do transplante de células-tronco. A dose pode ser de 30 a 45 mg / m2 / dia, e a dose total pode ser de 120 a 180 mg / m2. A sequência e o tempo de bussulfano e fludarabina podem ser feitos de acordo com os padrões institucionais para condicionamento mieloablativo que são conhecidos na técnica.

[0095] Bussulfano e Ciclofosfamida

[0096] O bulssulfano pode ser administrado nos dias -7 a -4 em re- lação ao dia do transplante de células-tronco. A dose pode ser de 3,2 mg / kg / dia ou 130 mg / m2 / dia, e pode ser administrada por via intra- venosa. A dose total pode ser de 12,8 mg / kg ou 520 mg / m2. A ciclo- fosfamida pode ser administrada nos dias -3 a -2 em relação ao dia do transplante de células-tronco. A dose pode ser de 60 mg / kg / dia e a dose total pode ser de 120 mg / kg.

[0097] Ciclofosfamida e Irradiação Corporal Total

[0098] A irradiação corporal total (TBI) pode ser administrada nos dias -7 a -4 em relação ao transplante de células-tronco. A ciclofosfa-

mida pode ser administrada nos dias -3 a -2 em relação ao dia do trans- plante de células-tronco. A dose pode ser de 60 mg / kg / dia, e a dose total pode ser de 120 mg / kg. A sequência de práticas de administração de ciclofosfamida, TBI e TBI para regimes mieloablativos pode ser feita de acordo com os padrões institucionais para condicionamento mieloa- blativo que são conhecidos na técnica.

[0099] A proteína CD24 também pode ser administrada com trata- mentos mieloablativos individuais descritos acima ou combinações dos mesmos.

[0100] Exemplo 1

[0101] Farmacocinética de CD24 em Camundongos

[0102] 1 mg de CD24Fc (CD24Fc) foi injetado em camundongos C57BL/6 virgens e amostras de sangue coletadas em diferentes pontos no tempo (5 min, 1 h, 4 h, 24 h, 48 h, 7 dias, 14 dias e 21 dias) com 3 camundongos em cada ponto no tempo. Os soros foram diluídos 1:100 e os níveis de CD24Fc foram detectados usando um ELISA em sandu- íche usando CD24 anti-humano purificado (3,3 μg / ml) como o anticorpo de captura e IgG Fc anti-humano conjugado com peroxidase de cabra (5 μg / ml) como os anticorpos de detecção. Como mostrado na Figura 3a. A curva de decaimento de CD24Fc revelou um decaimento bifásico típico da proteína. A primeira fase de biodistribuição teve meia-vida de 12,4 horas. A segunda fase segue um modelo de eliminação de primeira ordem do compartimento central. A meia-vida para a segunda fase foi de 9,54 dias, que é similar à dos anticorpos in vivo. Esses dados suge- rem que a proteína de fusão é muito estável na corrente sanguínea. Em outro estudo no qual a proteína de fusão foi injetada por via subcutânea, uma meia-vida quase idêntica de 9,52 dias foi observada (Figura 3b). Mais importante, embora tenha levado aproximadamente 48 horas para a CD24Fc atingir os níveis máximos no sangue, a quantidade total da proteína de fusão no sangue, medida por AUC, foi substancialmente a mesma por qualquer via de injeção. Assim, a partir do ponto de vista terapêutico, o uso de uma via de injeção diferente não deve afetar o efeito terapêutico do fármaco. Essa observação simplificou muito o pro- jeto experimental para a toxicidade em primatas e os ensaios clínicos.

[0103] Exemplo 2

[0104] Interação CD24-Siglec 10 na resposta do hospedeiro a le- sões teciduais

[0105] Quase duas décadas atrás, Matzinger propôs o que foi po- pularmente chamado de teoria danger (perigo). Em essência, ela argu- mentou que o sistema imunológico é ativado quando detecta os perigos no hospedeiro. Embora a natureza do perigo não tenha sido bem defi- nida na época, foi determinado que a necrose está associada à libera- ção de componentes intracelulares, tal como HMGB1 e proteínas de choque térmico, chamadas de DAMP, para padrões moleculares asso- ciados ao perigo. Verificou-se que o DAMP promove a produção de ci- tocinas inflamatórias e doenças autoimunes. Em modelos animais, ini- bidores de HMGB1 e HSP90 revelaram melhorar AR. O envolvimento do DAMP levantou a perspectiva de que a regulação negativa para a resposta do hospedeiro ao DAMP pode ser explorada para a terapia de AR.

[0106] Usando a necrose hepática induzida por acetominofen e ga- rantindo a inflamação, foi observado que, por meio da interação Siglec G, a CD24 fornece uma regulação negativa poderosa para a resposta do hospedeiro a lesões teciduais. CD24 é uma molécula ancorada por GPI amplamente expressa em células hematopoiéticas e outras células- tronco de tecidos. A análise genética de uma variedade de doenças au- toimunes em humanos, incluindo esclerose múltipla, lúpus eritromatoso sistêmico, AR, e artrite de células gigantes, mostrou associação signifi- cativa entre o polimorfismo de CD24 e o risco de doenças autoimunes. Siglec G é um membro da família I-lectina, definida por sua capacidade de reconhecer a estrutura contendo ácido siálico. Siglec G reconheceu a estrutura contendo ácido siálico em CD24 e regula negativamente a produção de citocinas inflamatórias pelas células dendríticas. Em ter- mos de sua capacidade de interagir com CD24, Siglec 10 humano e Siglec G de camundongo são funcionalmente equivalentes. No entanto, não está claro se existe uma correlação um-para-um entre homólogos de camundongos e humanos. Embora o mecanismo ainda não esteja totalmente elucidado, é plausível que a SHP1 associada a SiglecG possa estar envolvida na regulação negativa. Estes dados levam a um novo modelo no qual a interação CD24-Siglec G / 10 pode desempenhar um papel crucial na discriminação do padrão molecular associado a pa- tógenos (PAMP) a partir de DAMP (Figura 4).

[0107] Pelo menos dois mecanismos de sobreposição podem expli- car a função de CD24. Em primeiro lugar, ao se ligar a uma variedade de DAMP, CD24 pode aprisionar os estímulos inflamatórios para evitar sua interação com TLR ou RAGE. Esta noção é suportada por observa- ções de que a CD24 está associada a várias moléculas DAMP, incluindo HSP70, 90, HMGB1 e nucleolina. Em segundo lugar, talvez depois de associada ao DAMP, a CD24 pode estimular a sinalização por Siglec G. Ambos os mecanismos podem atuar em conjunto, já que camundongos com mutação direcionada de qualquer um dos genes montaram uma resposta inflamatória muito mais forte. De fato, as DC cultivadas a partir da medula óssea de camundongos CD24-/- ou Siglec G-/- produziram ci- tocinas inflamatórias muito maiores quando estimuladas com HMGB1, HSP70 ou HSP90. Em contraste, nenhum efeito foi encontrado em sua resposta ao PAMP, tal como LPS e PolyI:C. Esses dados não apenas forneceram um mecanismo para o sistema imunológico inato distinguir o patógeno da lesão tecidual, mas também sugerem que CD24 e Siglec G são potenciais alvos terapêuticos para doenças associadas a lesões teciduais.

[0108] Exemplo 3

[0109] CD24Fc interage com HMGB1, Siglec 10 e induz associação entre Siglec G e SHP-1

[0110] Para medir a interação entre CD24Fc e Siglec 10, imobilizou- se CD24Fc em um CHIP e usou-se Biacore para medir a ligação de diferentes concentrações de Siglec-10Fc. Como mostrado na Figura 5a, CD24Fc liga-se a Siglec 10 com um Kd de 1,6 × 10-7 M. Esta é uma afinidade 100 vezes maior do que o Fc de controle. A interação entre CD24Fc e HMGB1 foi confirmada por experimentos de “pull-down” usando microesferas de proteína G ligada a CD24Fc seguido por Wes- tern blot com anti-IgG ou anti-HMGB1. Estes dados demonstram que CD24Fc, mas não Fc, se liga a HMGB1 e que esta ligação é cátion- dependente (Figura 5b). Para determinar se CD24Fc é um agonista de Siglec G, a contraparte de camundongo do Siglec 10 humano, estimu- lou-se células CD24-/- do baço com CD24Fc, Fc de controle ou veículo de controle (PBS) por 30 minutos. Siglec G foi então imunoprecipitado e sondado com anti-fosfo-tirosina ou anti-SHP-1. Como mostrado na Fi- gura 5c, CD24Fc induziu fosforilação substancial de Siglec G e associ- ação de SHP-1, um inibidor bem conhecido tanto para imunidade adap- tativa quanto inata.

[0111] Estudos de Eficácia in vitro de CD24Fc.

[0112] Para estudar o impacto de CD24Fc na produção de citocinas inflamatórias por células T humanas, as células T maduras em PBML humano foram ativadas por anticorpo anti-CD3 (OKT3), um agonista co- mumente usado do receptor de células T na presença de diferentes con- centrações de CD24Fc ou IgG1 Fc humano. Quatro dias depois, os so- brenadantes foram coletados e a produção de IFN-γ e TNF-α foi medida por ensaio imunossorvente ligado a enzimas (ELISA) para confirmar a ativação. Os resultados na Figura 6 demonstraram que a CD24Fc de dois lotes de fabricação diferentes reduziu significativamente a produ- ção de IFN-γ e TNF-α a partir da PBML humana ativado em comparação com o IgG Fc de controle. Além disso, quando a CD24Fc foi adicionada, a produção de citocinas foi inibida de maneira dose-dependente. Por- tanto, CD24Fc pode inibir a ativação de PBML humana induzida por anti-CD3 in vitro. Este estudo não apenas indicou que o mecanismo de ação da CD24Fc pode ser através da inibição da ativação de células T, mas também estabeleceu um bioensaio confiável para teste de potência e estabilidade do fármaco.

[0113] Para determinar se CD24Fc regula a produção de citocinas inflamatórias em uma linhagem de células humanas, primeiro silenciou- se CD24 na linhagem de células THP1 de leucemia monocítica aguda usando RNAi e, em seguida, induziu-se a diferenciação em macrófagos tratando-os com PMA. Como mostrado na Figura 7a, o silenciamento de CD24 aumentou substancialmente a produção de TNFα, IL-1β e IL-

6. Esses dados demonstram um papel essencial para a CD24 humana endógena na limitação da produção de citocinas inflamatórias. É impor- tante notar que a CD24Fc restaurou a inibição de TNFα na linhagem celular com CD24 silenciado (Figura 7b), bem como IL-1β e IL-6. Esses dados não apenas demonstram a relevância de CD24 na resposta infla- matória de células humanas, mas também fornecem um ensaio simples para avaliar a atividade biológica de CD24Fc.

[0114] Tomados em conjunto, esses dados demonstram que CD24Fc é capaz de inibir a produção de citocinas desencadeada por estímulos adaptativos e inatos. No entanto, como o fármaco é muito mais eficaz na redução da produção de citocinas por efetores inatos, considera-se que o mecanismo primário para sua função profilática é prevenir a inflamação desencadeada por lesões teciduais na fase pre- coce do transplante.

[0115] Exemplo 4

[0116] Farmacocinética de CD24 em Humanos

[0117] Este exemplo mostra uma análise da farmacocinética de uma proteína CD24 em humanos. Este foi derivado de um estudo de Fase I, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, de dose única ascendente para avaliar a segurança, tolerabilidade e PK de CD24Fc em indivíduos adultos saudáveis do sexo masculino e feminino. Um total de 40 indivíduos em 5 coortes de 8 indivíduos cada foram incluídos neste estudo. Seis dos 8 indivíduos em cada coorte receberam o fár- maco do estudo e 2 indivíduos receberam placebo (cloreto de sódio a 0,9%, solução salina). A primeira coorte foi administrada com 10 mg. As coortes seguintes receberam 30 mg, 60 mg, 120 mg e 240 mg de CD24Fc ou placebo correspondente e foram doseadas em pelo menos 3 semanas de intervalo para permitir a revisão dos dados de segurança e tolerabilidade para cada coorte anterior. A administração da próxima dose mais elevada a uma nova coorte de indivíduos foi permitida apenas se a segurança e a tolerabilidade adequadas tiverem sido demonstra- das.

[0118] Em cada coorte, os 2 indivíduos iniciais eram 1 receptor do fármaco do estudo e 1 receptor do placebo no Dia 1. Os 3º ao 5º e o 6º ao 8º indivíduo foram doseados após o Dia 7 (um mínimo de 24 horas de intervalo entre os subgrupos). Cada indivíduo foi doseado com pelo menos 1 hora de intervalo no mesmo subgrupo. Se necessário, a dosa- gem do restante dos indivíduos foi adiada até a revisão de quaisquer questões de segurança significativas que possam ter surgido durante o período pós-dose envolvendo o primeiro ou o segundo subgrupo dessa coorte. A coorte subsequente foi administrada pelo menos 3 semanas após a coorte anterior.

[0119] Período de Triagem:

[0120] A visita de triagem (Visita 1) ocorreu até 21 dias antes do início do período de tratamento ativo. Depois de fornecer consentimento informado, os indivíduos foram submetidos a procedimentos de triagem para elegibilidade.

[0121] Período de Tratamento:

[0122] Os indivíduos foram admitidos na Unidade de Farmacologia Clínica (CPU) no Dia -1 (Visita 2), e o período de tratamento randomi- zado começou no Dia 1 após um jejum noturno mínimo de 10 horas. Os indivíduos foram aleatoriamente designados para tratamento com CD24Fc ou placebo como uma dose única. Os indivíduos permanece- ram confinados até a manhã do Dia 4.

[0123] Acompanhamento:

[0124] Todos os indivíduos retornaram à CPU no Dia 7, Dia 14, Dia 21, Dia 28 e Dia 42 (± 1 dia) para visitas de acompanhamento (Visita 3, Visita 4, Visita 5, Visita 6 e Visita 7). A Visita 7 foi a visita final para todos os indivíduos.

[0125] Duração do tratamento: A duração total do estudo para cada indivíduo foi de até 63 dias. A administração de dose única ocorreu no Dia 1.

[0126] Número de indivíduos:

[0127] Planejado: 40 indivíduos

[0128] Triados: 224 indivíduos

[0129] Randomizados: 40 indivíduos

[0130] Concluíram: 39 indivíduos

[0131] Descontinuaram: 1 indivíduo

[0132] Diagnóstico e Critérios Principais para Inclusão: A população para este estudo foi composta por homens e mulheres saudáveis com idades entre 18 e 55 anos, inclusive, com um índice de massa corporal entre 18 kg / m2 e 30 kg / m2, inclusive.

[0133] Produto sob Investigação e Informação para Comparação:

[0134] CD24Fc: dose única de 10 mg, 30 mg, 60 mg, 120 mg ou 240 mg administrada por infusão IV; número do lote: 09MM-036.

CD24Fc era uma proteína de fusão totalmente humanizada consistindo da sequência madura de CD24 humano e a região cristalizável do frag- mento de imunoglobulina G1 humana (IgG1Fc). CD24Fc foi fornecida como uma solução aquosa estéril, límpida, incolor, sem conservantes, para administração IV. CD24Fc foi formulada como solução para injeção de dose única, a uma concentração de 10 mg / mL e um pH de 7,2. Cada frasco de CD24Fc continha 160 mg de CD24Fc, 5,3 mg de cloreto de sódio, 32,6 mg de fosfato de sódio dibásico hepta-hidratado, e 140 mg de fosfato de sódio monobásico monohidratado em 16 mL ± 0,2 mL de CD24Fc. CD24Fc foi fornecida em frascos de vidro borossilicato transparente com rolhas de borracha clorobutílica e lacres de alumínio do tipo “flip-off”.

[0135] Placebo correspondente (cloreto de sódio a 0,9%, solução salina) administrado por infusão IV; números de lote: P296855, P311852, P300715, P315952.

[0136] A população com intenção de tratar (ITT) consistiu de todos os indivíduos que receberam pelo menos 1 dose do fármaco do estudo. A população ITT foi a população de análise primária para informação do indivíduo e avaliação de segurança.

[0137] As avaliações clínicas laboratoriais (química, hematologia e análise de urina) foram resumidas por tratamento e visita. A alteração a partir da linha de base também foi resumida. Os sinais vitais (pressão arterial, frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura) fo- ram resumidos por tratamento e ponto no tempo. A alteração a partir da linha de base também foi resumida. Todos os dados do exame físico foram listados. Os parâmetros do eletrocardiograma e a alteração a par- tir da linha de base foram resumidos. As interpretações gerais foram listadas.

[0138] Concentração Plasmática de CD24Fc

[0139] Como mostrado na Figura 8, a concentração plasmática mé- dia de CD24Fc aumentou proporcionalmente à dose de CD24Fc admi- nistrada. Para todos os grupos de dosagem, exceto 120 mg, a concen- tração plasmática média máxima de CD24Fc foi atingida 1 hora após a dose. A concentração plasmática média máxima de CD24Fc para o grupo de 120 mg foi atingida 2 horas após a dose. No dia 42 (984 horas), a concentração plasmática média de CD24Fc para todos os grupos di- minuiu para entre 2% e 4% da concentração plasmática média máxima.

[0140] A Tabela 1 resume os parâmetros PK de CD24Fc no plasma por tratamento para a população de PK avaliável.

[0141] A Tabela 1 resume os parâmetros PK de CD24Fc no plasma por tratamento a população de PK avaliável CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc Parâmetro 10 mg 30 mg 60 mg 120 mg 240 mg Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) Cmax (ng / mL) n 6 6 6 6 6 2495 9735 30 083 52 435 95 865 Média (SD) (576) (1715) (7179) (9910) (10 734) CV% 23,1 17,6 23,9 18,9 11,2 Mediana 2371 9218 29 026 50 401 93 206 1,967, 8,583, 22,557, 40,434, 81,296, Min, Max 3,390 13,086 42,628 65,704 110,110 Média Geométrica 2,442 9,625 29,424 51,666 95,365 CV% Geométrica 22,8 16,1 23,0 19,0 11,2 AUC0-42d (ng*h / mL) n 6 6 6 6 6 423,061 1,282,430 3,226,255 6,541,501 12,704,705 Média (SD) (99,615) (88,798) (702,862) (2,190,944) (1,918,596) CV% 23,5 6,9 21,8 33,5 15,1 Mediana 434,043 1,302,719 3,124,933 5,785,142 12,563,426 10,466,635, Min, Max 291,020, 528,079 1,175,733, 1,403,024 2,487,550, 4,139,748 4,485,193, 9,415,266 15,693,606 Média Geométrica 412,795 1,279,851 3,163,252 6,249,552 12,586,731 CV% Geométrica 25,0 7,0 22,0 33,8 15,0 AUC0-inf (ng*h / mL) n 6 6 6 6 6 462,260 1,434,464 3,497,196 7,198,196 13,861,796 Média (SD) (116,040) (131,316) (705,653) (2,458,320) (1,962,780) CV% 25,1 9,2 20,2 34,2 14,2 Mediana 470,426 1,422,205 3,519,732 6,463,665 13,713,034 11,822,988, Min, Max 310,956, 596,599 1,281,715, 1,650,503 2,703,655, 4,309,023 4,910,640, 10,479,940 17,175,236 Média Geométrica 449,583 1,429,578 3,437,036 6,862,129 13,750,972

CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc Parâmetro 10 mg 30 mg 60 mg 120 mg 240 mg Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) CV% Geométrica 26,7 9,0 20,7 34,6 13,8 Tmax (h) n 6 6 6 6 6 Média (SD) 1,15 (0,42) 1,17 (0,41) 1,01 (0,01) 1,34 (0,51) 1,33 (0,52) CV% 36,1 35,0 1,2 38,0 38,7 Mediana 1,00 1,00 1,00 1,03 1,00 Min, Max 0,92, 2,00 1,00, 2,00 1,00, 1,03 1,00, 2,00 1,00, 2,00 t½ (h) n 6 6 6 6 6 280,83 327,10 279,82 286,45 285,33 Média (SD) (22,37) (41,32) (65,59) (23,38) (24,33) CV% 8,0 12,6 23,4 8,2 8,5 Mediana 279,61 317,23 264,69 290,76 287,74 Min, Max 258,87, 321,26 289,82, 394,24 210,18, 362,46 243,89, 309,26 249,24, 322,26 AUCextr (%) n 6 6 6 6 6 Média (SD) 7,61 (2,14) 10,44 (2,94) 7,88 (4,26) 8,92 (1,94) 8,46 (1,99) CV% 28,1 28,2 54,0 21,8 23,5 Mediana 7,16 10,01 6,35 9,27 8,45 Min, Max 5,46, 11,47 7,10, 15,05 3,92, 14,48 5,49, 10,99 5,56, 11,50 CL (L / h) n 6 6 6 6 6 0,0229 0,0211 0,0178 0,0183 0,0176 Média (SD) (0,0061) (0,0019) (0,0036) (0,0058) (0,0023) CV% 26,7 8,8 20,5 31,7 13,3 Mediana 0,0216 0,0211 0,0173 0,0191 0,0175 Min, Max 0,0168, 0,0322 0,0182, 0,0234 0,0139, 0,0222 0,0115, 0,0244 0,0140, 0,0203 Vd (L) n 6 6 6 6 6 9,153 9,867 7,289 7,491 7,276 Média (SD) (1,943) (0,804) (2,592) (2,202) (1,426) CV% 21,2 8,1 35,6 29,4 19,6 Mediana 8,507 10,007 7,486 7,691 7,151 Min, Max 7,326, 12,010 8,771, 10,958 4,222, 11,139 4,933, 9,974 5,814, 9,438 AUC0-42d = área sob a curva de concentração-tempo do tempo 0 a 42 dias; AUC0-inf = área sob a curva de concentração-tempo extrapolada do tempo 0 ao infinito; AUCextr = porcentagem de AUC0-inf que foi devido à extrapolação do tempo da última concentração mensurável, por indivíduo, ao infinito; CL = depuração corporal total; Cmax = concentração plasmática máxima observada de fármaco; CV% = coeficiente de variação; Min = mínimo; Max = máximo; SD = desvio padrão; t½ = meia-vida de eliminação terminal; Tmax = tempo de concentração plasmática máxima observada de fármaco; Vd = volume de distribuição.

[0142] Análise de Proporcionalidade de Dose de CD24Fc no Plasma

[0143] A Figura 9 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de Cmax de CD24Fc versus dose para a população de PK avaliável. A Figura 10 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de AUC0-42d de CD24Fc versus dose para a população de PK avaliável. A Figura 11 mostra um gráfico de proporcionalidade de dose de AUC0-inf de CD24Fc versus dose para a população de PK avaliável.

A Tabela 2 mostra uma análise de poder da proporcionalidade de dose.

Tabela 1 – Análise do poder da Proporcionalidade de Dose: Parâmetros Farmacocinéticos de CD24Fc no Plasma – População de PK Avaliável CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc CD24Fc Proporcionalidade de Dose Parâmetro 10 mg 30 mg 60 mg 120 mg 240 mg Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) Declividade Erro Padrão 90% CI Cmax (ng / mL) 1,172 0,040 (1,105, 1,240) Média Geométrica 2.441,8 9.624,9 29.424,4 51.666,4 95.364,9 CV% Geométrica 22,8 16,1 23,0 19,0 11,2 AUC0-42d (ng*h / mL) 1,088 0,036 (1,027, 1,148) Média Geométrica 412.794,8 1.279.850,8 3.163.251,7 6.249.551,9 12.586.731,3 CV% Geométrica 25,0 7,0 22,0 33,8 15,0

38/73 AUC0-inf (ng*h / mL) 1,087 0,036 (1,026, 1,148) Média Geométrica 449.583,5 1.429.577,5 3.437.035,6 6.862.128,7 13.750.972,4 CV% Geométrica 26,7 9,0 20,7 34,6 13,8 CV% Geométrica = 100*sqrt(exp(SD2)-1), onde SD foi o desvio padrão dos dados log-transformados.

O modelo de poder foi ajustado por probabilidade má- xima restrita, regredindo o parâmetro de PK log-transformado na dose log-transformada.

Tanto a interceptação quanto a declividade foram ajustadas como efeitos fixos.

A proporcionalidade de dose não foi rejeitada se o 90% CI estiver dentro de (0,8, 1,25). AUC0-42d = área sob a curva de concentração-tempo do tempo 0 a 42 dias; AUC0-inf = área sob a curva de concentração-tempo extrapolada do tempo 0 ao infinito; CI = intervalo de confiança; Cmax = concentração plasmática máxima observada do fármaco; CV% = coeficiente de variação; PK = farmacocinética; SD = desvio padrão.

[0144] A Cmax em declividade foi 1,172 com um 90% CI de 1,105 a 1,240. A AUC0-42d em declividade foi 1,088 com um 90% CI de 1,027 a 1,148. A AUC0-inf em declividade foi 1,087 com um 90% CI de 1,026 a 1,1.

[0145] Conclusões Farmacocinéticas

[0146] A Cmax e AUCs da CD24Fc no plasma aumentaram propor- cionalmente às doses administradas em camundongos, macacos e hu- manos. A CD24Fc no plasma atingiu Tmax entre 1,01 e 1,34 horas. O t½ da CD24Fc no plasma variou entre 280,83 e 327,10 horas.

[0147] Exemplo 5

[0148] CD24 pode ser usada para tratar a doença do enxerto versus hospedeiro em seres humanos

[0149] Um ensaio multicêntrico, prospectivo, duplo-cego, randomi- zado, controlado por placebo de escalonamento de dose de Fase IIa foi realizado para avaliar a adição de uma proteína CD24, CD24Fc, à pro- filaxia de GVHD aguda padrão de tratamento em pacientes com câncer submetidos a transplante alogênico mieloablativo de células-tronco he- matopoiéticas (HCT). O modelo do ensaio é mostrado na Figura 12.

[0150] Os objetivos principais do estudo de fase IIa incluem avaliar a segurança e a tolerabilidade de CD24Fc em combinação com meto- trexato e profilaxia de tacrolimus em pacientes submetidos a HCT de doador não aparentado compatível após condicionamento mieloabla- tivo, e definir a dose recomendada de fase 2 (RP2D) ou dose máxima tolerada (DMT). Além disso, os objetivos de eficácia secundários no es- tudo de fase IIa incluem:

[0151] • determinar se a adição de CD24Fc à profilaxia para GVHD padrão metotrexato e tacrolimus reduz a incidência cumulativa de aGVHD de grau II - IV no dia 100 após HCT

[0152] • estimar a sobrevida livre de aGVHD de grau II - IV (GFS) no dia 180 após HCT,

[0153] • descrever a incidência de cGVHD (cGVHD) em 1 ano

[0154] • descrever a incidência de recidiva um ano após o HCT

[0155] • descrever a incidência de mortalidade relacionada ao trans- plante (TRM) um ano após o HCT

[0156] • descrever as taxas de infecção no dia 100 após o HCT

[0157] • avaliar a sobrevida geral (OS), ausência de GVHD grau III - IV, e sobrevida livre de recidiva um ano após o HCT

[0158] • avaliar a toxicidade de condicionamento, incluindo mucosite oral e falência de órgãos.

[0159] Outros objetivos incluem avaliar o perfil farmacocinético (PK) de CD24Fc, examinar o perfil de células imunes e as respostas funcio- nais de APCs e células T após o HCT nos grupos de CD24Fc e placebo, e avaliar biomarcadores farmacodinâmicos (PD), tal como as concen- trações plasmáticas de citocinas pró-inflamatórias, DAMPs, lipídios e bi- omarcadores de GVHD nos grupos de CD24Fc e de placebo.

[0160] O estudo arrolou pacientes que receberam transplantes de doadores não aparentados e submetidos a HCT alogênico de acordo com a prática institucional. Os pacientes com idades entre 18 a 70 anos submetidos a HCT alogênico de doador não aparentado compatível para uma condição hematológica maligna com um escore de desempe- nho de Karnofsky ≥ 70% eram elegíveis para o estudo. Foi necessária uma correspondência alélica 8/8 HLA entre o doador não aparentado e o receptor em HLA-A, HLA-B, HLA-C e HLA-DRB1. Restringir o estudo a pacientes recebendo HCT de doadores não aparentados deve limitar a heterogeneidade e facilitar as estimativas estatísticas da incidência de aGVHD para subsequentes avaliações de eficácia, dada a maior inci- dência de aGVHD grau II - IV (60 a 80%) e aGVHD grau III - IV (20 a 35%) nesta população.

[0161] Este estudo utilizou exclusivamente regimes de condiciona-

mento mieloablativo e profilaxia padrão de tratamento (SOC) compre- endendo tacrolimus e metotrexato, uma vez que esses pacientes expe- rimentam a lesão tecidual mais severa e o fármaco provavelmente terá o efeito biológico mais forte neste cenário. Todos os pacientes recebe- ram condicionamento mieloablativo e profilaxia padrão de tratamento para GVHD com metotrexato e tacrolimus de acordo com o protocolo de fase IIa. Os pacientes receberam um regime de condicionamento mielo- ablativo consistindo de fludarabina e bussulfano (Flu / Bu 4) ou ciclofos- famida e irradiação corporal total (Cy / TBI), conforme decidido pelo mé- dico do tratamento, seguido por uma infusão de células-tronco no dia 0. Profilaxia para GVHD foi administrada a todos os pacientes e consistiu de tacrolimus (iniciado no dia -3 antes do transplante) e metotrexato (ini- ciado no dia +1 após o transplante) em combinação com CD24Fc no braço de tratamento ou solução salina no braço de placebo. Na ausên- cia de GVHD, a redução gradual do tacrolimus começou no dia +100. A fonte de células-tronco do doador foi células-tronco do sangue periférico (PBSC) ou da medula óssea (BM).

[0162] O estudo de Fase IIa compreendeu duas coortes de dose única ascendente (240 mg e 480 mg) e uma única coorte de doses múl- tiplas de CD24Fc, além da profilaxia SOC para GVHD conforme descrito na Tabela 3 abaixo. Conforme mostrado na Figura 13, na coorte de dose única, o agente do estudo, CD24Fc, foi administrado por via intravenosa no dia -1 em relação ao dia do transplante de células-tronco. Na coorte de doses múltiplas, os pacientes receberam 3 administrações quinze- nais de CD24Fc a 480 mg (dia -1), 240 mg (dia +14) e 240 mg (dia +28). Com base nos dados de farmacocinética para CD24Fc, este período de dosagem quinzenal permitirá a passagem de mais de duas meias-vidas. A dosagem é baseada em uma quantidade fixa e não baseada no peso ou BSA. Cada coorte de dosagem arrolou 8 indivíduos usando um mo- delo de relação 3:1 randomizado (6 indivíduos com CD24Fc e 2 com placebo) para um arrolamento total de 24 pacientes.

[0163] Tabela 3 - Plano de Escalonamento de Dose de Fase 2a Nível Dose Escalonamento CD24Fc Placebo (No.) (No.) -1 120 mg Dia -1 6 2 0 240 mg Dia -1 6 2 1 480 mg Dia -1 6 2 2 960 mg (doses múltiplas) 480 mg (dia -1)* 6 2 240 mg (dia 14) 240 mg (dia 28)

[0164] A Tabela 4 lista a informação demográfica e as característi- cas clínicas dos pacientes nas coortes de CD24Fc e de placebo, que foram relativamente equilibradas em fatores de risco tal como idade, malignidade e comorbidade. A malignidade mais comum em ambas as coortes de CD24Fc e de placebo foi LMA / SMD (66,7% e 83,3%). 72% dos pacientes na coorte de CD24Fc e 50% no grupo de placebo tinham um índice de comorbidade intermediário ou alto. PBSCs foram usadas com mais frequência como fonte de enxerto em comparação com a me- dula óssea em ambas as coortes, e Flu / Bu 4 foi o regime de condicio- namento mais comum em ambas as coortes. Quatro pacientes, todos nas coortes de CD24Fc, foram submetidos ao condicionamento com Cy / TBI.

[0165] Tabela 4 - Características do Paciente de Fase 2a CD24Fc + TAC/MTX Placebo + TAC/MTX (N = 18) (N = 6) Idade (anos) Mediana (faixa) 62 (23-68) 57 (36-66) Sexo Mulher 7 (38,8) 2 (33,3) (N, %) Homem 11 (61,1) 4 (66,7) Fonte de Enxerto (N, %) PBSC 15 (83,3) 4 (66,7) BM 3 (16,7) 2 (33,3) Malignidade LMA / SMD 12 (66,7) 5 (83,3) (N, %) LMC 2 (11,1) 0 (0) LMMC 1 (5,6) 1 (16,7) LLA 3 (16,7) 0 (0) Indice de comorbidade Baixo (0) 5 3 (escore) Intermediário (1-2) 9 2

Alto (3-4) 4 1 Estado de Citomegalovírus D+, R+ 5 1 D+, R 1 0 D, R+ 3 1 D, R 8 4 Regime de Condiciona- Flu/Bu 4 14 (77,8) 6 (100) mento Cy/TBI 4 (22,2) 0 (0) (N) Dia do Enxerto Neutrófilos 13,0 15,5 (Dia) (min, máx) (12, 23) (12, 18) Plaquetas 13,0 15,0 (min, máx) (9, 23) (11, > 48) BM = Medula Óssea; Cy/TBI = ciclofosfamida / irradiação corporal total; D = doador; Flu/Bu 4 = fludara- bina/bussulfano; R = receptor

[0166] Os objetivos principais do estudo são: avaliar a segurança e a tolerabilidade da CD24Fc em indivíduos submetidos ao transplante alogênico mieloablativo de células hematopoiéticas (HCT); e determinar a dose recomendada de Fase II (RP2D) ou a dose máxima tolerável (DMT) de CD24Fc em pacientes submetidos a HCT.

[0167] Todos os pacientes arrolados no estudo concluíram o perí- odo de tratamento, que é o primeiro dia de tratamento com CD24Fc até 30 dias após o HCT para as coortes de dose única ou 60 dias após o HCT para as coortes de doses múltiplas (os dias exatos podem variar dependendo no último dia de administração do fármaco do estudo sem constituir um desvio) e é o período de avaliação e relatório para eventos adversos (AE), incluindo toxicidades dose-limitantes potencialmente re- lacionadas ao fármaco do estudo. A Tabela 5 fornece um resumo das toxicidades observadas no estudo de Fase 2a. No geral, este estudo demonstrou que a administração IV de CD24Fc até 480 mg é geral- mente bem tolerada na população com intenção de tratar (ITT). Não fo- ram observadas toxicidades de infusão, toxicidades dose-limitantes (DLTs) ou SAEs atribuíveis ou provavelmente atribuíveis ao fármaco do estudo e nenhum paciente foi removido do estudo.

[0168] Todos os 24 indivíduos arrolados com enxerto após o trans- plante, como mostrado na Figura 14. Neutrófilos enxertados em uma mediana de 13,0 e 15,5 dias após o HCT em pacientes expostos a CD24Fc e a placebo, respectivamente. Plaquetas enxertadas em uma mediana de 13,0 e 15,0 dias após o HCT em pacientes expostos a CD24Fc e a placebo, respectivamente, com exceção de um paciente no grupo de placebo em que as plaquetas não enxertaram e que morreu no Dia 49. Não houve casos de falha do enxerto. O quimerismo de CD3 mediano no dia +30 foi de 82,5% (faixa de 38 a 100%) nos pacientes expostos a CD24Fc e 82,0% (faixa de 62% a 91%) no grupo de placebo (Figura 15). O quimerismo de CD3 mediano do doador aumentou para 86% (faixa de 42% a 100%) no dia 100 nos pacientes expostos a CD24Fc e 84% (faixa de 17% a 100%) no grupo de placebo. O quime- rismo de CD33 do doador no dia 30 e no dia 100 foi de 100% em ambos os grupos de CD24Fc e de placebo.

[0169] Tabela 5 - Resumo de Toxicidades Coorte Tratamento # de Pacientes Infusão Rxn SAE DLT Única CD24Fc 6 0 1 0 240 mg Placebo 2 0 2 0 Única CD24Fc 6 0 0 0 480 mg Placebo 2 0 1 0 Doses CD24Fc 6 0 4 0 múltiplas Placebo 2 0 2 1

[0170] As análises de eficácia para o estudo de Fase 2a são consi- deradas secundárias e incluem o seguinte: descrever a sobrevida livre de GVHD aguda de grau III - IV (GFS) no dia 180 após o HCT; descrever a incidência cumulativa de GVHD aguda de grau II - IV no dia 100 após o HCT; descrever a sobrevida Livre de recidiva de GVHD grau III - IV,

no dia 180 após o HCT; descrever GFS aguda de grau II - IV no dia 180 após o HCT; descrever a incidência de GVHD crônica em um ano após o HCT; descrever a incidência de recidiva em um ano após o HCT; des- crever a incidência de mortalidade relacionada ao transplante (TRM) em um ano após o HCT; descrever as taxas de infecção no dia 100 após o HCT; avaliar a sobrevida geral (OS) e sobrevida livre de doença (DFS) em um ano após o HCT.

[0171] Além da inclusão do braço de placebo no estudo de fase IIa, os dados sobre os controles contemporâneos (N = 92) foram coletados a partir das mesmas instituições submetidas ao HCT de doador não aparentado compatível seguindo o mesmo condicionamento mieloabla- tivo e regimes de profilaxia para GVHD (menos a terapia experimental com CD24Fc) do período de janeiro de 2012 a novembro de 2017. Uma coorte de controle contemporânea foi incluída devido ao pequeno nú- mero de pacientes no braço de controle com placebo. Os dados demo- gráficos dos 92 pacientes adultos na coorte de controle contemporânea estão resumidos na Tabela 6.

[0172] Tabela 6 - Características dos Pacientes Arrolados na Coorte de Controle Contemporânea TAC/MTX (N = 92) Idade (anos) Mediana (faixa) 49 (21-69) Sexo Mulher 41 (44,5) (N, %) Homem 51 (55,5) Malignidade LMA / SMD 63 (68,5) (N, %) LMC 3 (3) LMMC 2 (2) LLA 24 (26,5)

[0173] As Tabelas 7 e 8 fornecem uma visão geral dos resultados clínicos do estudo de fase 2a. A GVHD aguda foi classificada de acordo com as diretrizes de consenso utilizadas pelo registro CIBMTR interna- cional e Rede de Ensaios Clínicos de Transplante de Medula e Sangue e registrada semanalmente. Os pacientes foram avaliados para aGVHD após o recebimento do HCT no dia 0 até o dia 100 após o HCT.

[0174] Tabela 7 - Visão geral dos resultados clínicos, incluindo a incidência cumulativa de aGVHD grau II - IV e grau III - IV. Coorte aGVHD Recidiva Morte (Dia 180) (Dia 180) (Dia 180) 1) Dose única: Gr II: 2 (pele) 0 0 240 mg Gr III: 0 (N = 6) Gr IV: 0 Gr II-IV: 33,3% (95%CI, 3,2, 70,4) Gr III-IV: 0% 2) Dose única: Gr II: 2 (pele e GI superior) 1 0 480 mg Gr III: 1 (GI inferior) LMMC (N = 6) Gr IV: 0 (d161) Gr II-IV: 50,0% (95%CI, 7,7, 82,9) Gr III-IV: 16,7% 3) Doses múlti- Gr II: 2 (pele e GI superior) 1 0 plas: Gr III: 0 LLA (d103) (N = 6) Gr IV: 0 Gr II-IV: 33,3% (95%CI, 3,2, 70,4) Gr III-IV: 0% CD24Fc Total: Gr II: 6 0/18* Gr III: 1 Gr IV: 0 2/18 Gr II-IV: 38,9% (95%CI, 16,8, (11,1%) 60,7) Gr III-IV: 5,6% Placebo Gr II: 0 2/6 1/6 (N = 6) Gr III: 1 (GI inferior) (33,3%) (16,7%) Gr IV: 0 Gr II – IV: 16,7% (95%CI, 0,5, 54,9)

Gr III – IV: 16,7% Controle contem- Gr II: 22 19/92 22/92 porâneo Gr III: 16 (23,1%) (23,9%) (N = 92) Gr IV: 3 (morte como Gr II-IV: 50% (morte como fator fator compe- competitivo) (95%CI, 39,8, 60,2) titivo) Gr III-IV: 24% (morte como fator competitivo) (95%CI, 17, 31) * Mortes (n = 2) após o dia 180: Coorte 1 Infecções por Pneumonite 2/2 (d 210) e Coorte 2 recidiva de LMMC (d 196).

[0175] Tabela 8 - Resumo dos Resultados Clínicos CD24Fc Placebo Significância Es- tatística Número 18 6 aGVHD III-IV D100 6% 17% D180 6% 17% 1 ano Recidiva 11% 33% 1 ano NRM 6% 17% 1,5 ano RFS 83% 50% 1,5 ano OS 89% 50% P = 0,046 D180 Gr III-IV, So- 83% 33% P = 0,01 brevida livre de reci- diva

[0176] Incidência de doença do enxerto versus hospedeiro aguda de Grau II a IV no Dia 100

[0177] A Tabela 9 resume a incidência cumulativa de GVHD aguda de Grau II a IV no Dia 100 para a População mITT. No total, 7 (38,9%) pacientes que receberam CD24Fc (2 [33,3%] pacientes na coorte de dose única de 240 mg de CD24Fc, 3 [50,0%] pacientes na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc e 2 [33,3%] pacientes na coorte de doses múltiplas de CD24Fc de 960 mg) e 1 (16,7%) paciente que rece- beu placebo tinham GVHD aguda de Grau II a IV no Dia 100. Além disso,

1 (16,7%) paciente que recebeu placebo morreu sem GVHD aguda de Grau II a IV por Dia 100. Os pacientes que estavam vivos sem ocorrên- cia de GVHD aguda de Grau II a IV até o Dia 100 foram censurados em sua última avaliação para GVHD aguda no Dia 100 ou antes do Dia 100. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram censurados.

[0178] Tabela 9 - Incidência cumulativa de doença do enxerto ver- sus hospedeiro aguda de grau II a IV no dia 100 - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com GVHD aguda de Grau II - IV no Dia 100 (n, %) 1 (16,7) 2 (33,3) 3 (50,0) 2 (33,3) 7 (38,9) No. de pacientes que morre- ram sem GVHD aguda de Grau II - IV no Day 100 (n, %) 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) No. de pacientes censura- dos (n, %) 4 (66,7) 4 (66,7) 3 (50,0) 4 (66,7) 11 (61,1) Incidência cumulativa (%) de GVHD aguda de Grau II - IV no Dia 100 [Erro! Fonte de referência não encon- trada.] 16,7 33,3 50,0 33,3 38,9 95% CI (0,5, 54,9) (3,2, 70,4) (7,7, 82,9) (3,2, 70,4) (16,8, 60,7) Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 2,6 Taxa de risco (90% CI) (0,5, 14,7) Nota: Dia 100 = Dia 100 (+7 dias) após o transplante (isto é, Dia de estudo 108). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. Os graus foram baseados na escala de classificação CIBMTR. A incidência cumulativa (%) de GVHD aguda no Dia 100 e o 95% CI foram estimados usando a função de incidência cumulativa com morte sem GVHD aguda de Grau II a IV como um risco competitivo.

2. A taxa de risco e 90% CI foram baseados em um modelo de Fine e Gray com tratamento como uma covariável e morte sem GVHD aguda de Grau II a IV como um risco competitivo. CI = intervalo de confiança; CIBMTR = Centro Internacional de Transplante de Sangue e Medula Óssea; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; No. = número.

[0179] No geral, a incidência cumulativa de GVHD aguda de Grau II a IV no Dia 100 (com 95% CI) foi de 38,9% (16,8%, 60,7%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 16,7% (0,5%, 54,9%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 2,6 (0,5, 14,7). A incidência cumulativa de aGVHD grau II - IV foi de 50% no controle contemporâneo. No grupo tratado com CD24Fc, quatro casos de aGVHD de grau II envolveram apenas a pele e dois casos envolveram a pele e o trato gastrointestinal (GI) superior. Não houve casos de aGVHD de grau II no grupo de placebo.

[0180] Sobrevida livre de doença do enxerto versus hospedeiro aguda de Grau II - IV até o Dia 180

[0181] A Tabela 10 resume a GFS aguda de Grau II a IV até o Dia 180 para a População mITT. A média da estimativa de Kaplan-Meier de GFS aguda de Grau II a IV não foi alcançada em nenhum grupo de tra- tamento. No geral, a taxa de GFS aguda de Grau II a IV no Dia 180 (com 95% CI) foi de 61,1% (35,3%, 79,2%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e de 50,0% (11,1%, 80,4%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,8 (0,3, 2,5). Os pacientes que estavam vivos e sem ocorrência documentada de GVHD aguda de Grau II a IV na data limite dos dados foram censurados na última data da avaliação de GVHD aguda no Dia 180 ou antes do Dia

180. Além do pequeno tamanho da amostra, pelo menos 50,0% dos pa- cientes em cada grupo de tratamento foram censurados.

[0182] Tabela 10 - Sobrevida livre de doença aguda do enxerto ver- sus hospedeiro de grau II a IV ao longo do dia 180 - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses Múl- CD24Fc Placebo Única Única tiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N=18) No. de pacientes com eventos (n, %) 3 (50,0) 2 (33,3) 3 (50,0) 2 (33,3) 7 (38,9)

Evento contribuinte mais precoce GVHD Aguda (Grau II - IV) 2 (33,3) 2 (33,3) 3 (50,0) 2 (33,3) 7 (38,9) Morte 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 4 (66,7) 3 (50,0) 4 (66,7) 11 (61,1) Sobrevida livre de GVHD Aguda (Grau II - IV) (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] Mediana (95% CI) NE NE NE NE NE Média (SD) [Erro! Fonte de refe- 144,2 145,7 116,2 150,5 137,4 rência não encontrada.] (74,98) (77,01) (86,69) (68,96) (74,81) Mediana [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 190,0 195,0 121,0 195,0 195,0 Min, máx [Erro! Fonte de referên- cia não encontrada.] 46, 195+ 32, 195+ 24, 195+ 59, 195+ 24, 195+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,8 Taxa de risco (90% CI) (0,3, 2,5) Taxa (%) de estar vivo sem GVHD aguda (Grau II - IV) no Dia 180 (95% CI) [Erro! Fonte de referência não 50,0 66,7 50,0 66,7 61,1 encontrada.] (11,1, 80,4) (19,5, 90,4) (11,1, 80,4) (19,5, 90,4) (35,3, 79,2) Nota: Dia 180 = Dia 180 (+14 dias) após o transplante (isto é, Dia de estudo 195). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log- log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. CI = intervalo de confiança; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0183] GFS Aguda de Grau III a IV até o Dia 180 para a População mITT

[0184] Conforme mostrado na Tabela 11, no total, 1 (5,6%) paciente que recebeu CD24Fc (1 [16,7%] paciente na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc) e 2 (33,3%) pacientes que receberam placebo apresentaram GVHD aguda de Grau III a IV no Dia 180. No geral, a taxa de GFS aguda de Grau III a IV no Dia 180 (com 95% CI) foi de 94,4% (66,6%, 99,2%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 50,0% (11,1%, 80,4%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,1 (0,0, 0,7). Os pacientes que es- tavam vivos e sem ocorrência documentada de GVHD aguda de Grau

III a IV na data limite dos dados foram censurados na última data de avaliação de GVHD aguda no Dia 180 ou antes do Dia 180. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram censurados. A taxa de GFS aguda de Grau III a IV no Dia 180 foi de 24% na coorte de controle contemporânea. A Figura 25 mostra a Sobrevida Livre de GVHD de Grau III - IV aos 180 dias no grupo de CD24Fc em compara- ção com o grupo de controle com placebo (Figura 25A) e o grupo de controle contemporâneo (Figura 25B).

[0185] Tabela 11 - Sobrevida livre de doença do enxerto versus hos- pedeiro aguda de Grau III a IV até o dia 180 - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses Múl- CD24Fc Placebo Única Única tiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com eventos (n, %) 3 (50,0) 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (5,6) Evento contribuinte mais precoce GVHD Aguda (Grau III - IV) 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (5,6) Morte 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 6 (100,0) 5 (83,3) 6 (100,0) 17 (94,4) Sobrevida livre de GVHD Aguda (Grau III - IV) (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] Mediana (95% CI) NE NE NE NE NE Média (SD) [Erro! Fonte de refe- 144,2 195,0 166,5 195,0 185,5 rência não encontrada.] (74,98) (0,00) (69,81) (0,00) (40,31) Mediana [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 190,0 195,0 195,0 195,0 195,0 Min, máx [Erro! Fonte de referên- cia não encontrada.] 46, 195+ 195+, 195+ 24, 195+ 195+, 195+ 24, 195+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,1 Taxa de risco (90% CI) (0,0, 0,7) Taxa (%) de estar vivo sem GVHD aguda (Grau III - IV) no Dia 180 (95% CI) [Erro! Fonte de referên- 50,0 100,0 83,3 100,0 94,4 cia não encontrada.] (11,1, 80,4) (NE) (27,3, 97,5) (NE) (66,6, 99,2) Nota: Dia 180 = Dia 180 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 195). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log- log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. CI = intervalo de confiança; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0186] Todos os pacientes que desenvolveram aGVHD no estudo no momento do limite de dados responderam ao tratamento com este- roides, em comparação com a taxa de resposta de 50% observada no controle de coorte contemporâneo. Após os primeiros cem dias após o HCT, os pacientes foram avaliados trimestralmente quanto aGVHDa de início tardio (definida como GVHD aguda com início após o dia 100) ou cGVHD até um ano após o HCT. Nenhum evento adicional de aGVHD foi observado nas coortes de CD24Fc após o dia 100 pós-transplante.

[0187] A Figura 16 mostra a incidência cumulativa de GVHD aguda de Grau II - IV e Grau III - IV na coorte de tratamento (CD24Fc). Em particular, apenas um paciente tinha GVHD Grau III que envolveu o GI inferior e nenhuma GVHD hepática foi observada. A incidência cumula- tiva de aGVHD de grau III - IV no Dia 180 após o HCT nas coortes de CD24Fc tendeu a ser mais baixa do que aGVHD de grau III - IV no Dia 180 no controle contemporâneo (P = 0,097). Houve um caso adicional de aGVHD de Grau III no Dia 182, que resultou em morte no dia 184, em um paciente do grupo de placebo. Este paciente teve uma recidiva de leucemia no Dia 145. Esses resultados sugerem que a CD24Fc, além da profilaxia com metotrexato e tacrolimus, reduz o risco de desenvolver aGVHD grau III e IV mais severa em pacientes submetidos a HCT após receberem condicionamento mieloablativo.

[0188] Sobrevida livre de doença 1 ano após o transplante de célu- las-tronco hematopoiéticas

[0189] A Tabela 12 resume a sobrevida livre de doença (DFS) 1 ano após o HCT para a população mITT. A estimativa de DFS mediana de Kaplan-Meier não foi alcançada para nenhum grupo de tratamento. No geral, a taxa de DFS em 1 ano após o HCT (com 95% CI) foi de 83,3%

(56,8%, 94,3%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 50,0% (11,1%, 80,4%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,2 (0,1, 0,9). Os pacientes que es- tavam vivos e não apresentaram recidiva da doença ao final do período de acompanhamento foram censurados na última data de avaliação. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram censurados. A Figura 26 mostra a Sobrevida Livre de Recidiva no grupo de CD24Fc em comparação com o grupo de controle com placebo (Fi- gura 26A) e o grupo de controle contemporâneo (Figura 26B).

[0190] Tabela 12 - Sobrevida livre de doença 1 ano após o trans- plante de células-tronco hematopoiéticas - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 960 mg 240 mg 480 mg Doses CD24Fc Placebo Dose Única Dose Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com eventos (n, %) 3 (50,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 1 (16,7) 3 (16,7) Evento contribuinte mais precoce Recidiva 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1) Morte 1 (16,7) 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (5,6) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 5 (83,3) 5 (83,3) 5 (83,3) 15 (83,3) Sobrevida livre de doença (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] Mediana (95% CI) NE NE NE NE NE Média (SD) [Erro! Fonte de referência 232,7 324,2 não encontrada.] (152,48) 342,5 (64,11) 335,2 (92,82) (109,89) 333,9 (85,76) Mediana [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 256,0 366,0 370,5 366,0 366,0 Min, máx [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 49, 371+ 212, 378+ 146, 380+ 100, 376+ 100, 380+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,2 Taxa de risco (90% CI) (0,1, 0,9) Taxa (%) de estar vivo sem recidiva em 1 ano após o HCT (95% CI) [Erro! Fonte 50,0 83,3 83,3 83,3 83,3 de referência não encontrada.] (11,1, 80,4) (27,3, 97,5) (27,3, 97,5) (27,3, 97,5) (56,8, 94,3) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log-log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. Para o Dia 365, se o tempo máximo observado foi < Dia de Estudo 380, a estimativa de Kaplan- Meier no tempo máximo observado é apresentada para um grupo de tratamento. CI = intervalo de confiança; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0191] Sobrevida geral 1 ano após o transplante de células-tronco hematopoiéticas

[0192] A Tabela 13 resume a sobrevida geral (OS) 1 ano após o HCT para a população mITT. A estimativa de Kaplan-Meier do tempo de OS mediana não foi alcançada para nenhum grupo de tratamento. No geral, a taxa de OS em 1 ano (com 95% CI) foi de 83,3% (56,8%, 94,3%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 50,0% (11,1%, 80,4%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,2 (0,1, 1,0). Os pacientes que estavam vivos ao final do período de acompanhamento foram censurados na úl- tima data em que se sabia que estavam vivos. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram censurados.

[0193] Tabela 13 - Sobrevida livre de doença 1 ano após o trans- plante de células-tronco hematopoiéticas - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes que morreram (n, %) 3 (50,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 1 (16,7) 3 (16,7) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 5 (83,3) 5 (83,3) 5 (83,3) 15 (83,3) Sobrevida geral (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] Mediana (95% CI) NE NE NE NE NE Média (SD) [Erro! Fonte de refe- 276,3 343,0 343,5 367,2 351,2 rência não encontrada.] (132,25) (64,34) (72,45) (6,01) (53,91) Mediana [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 341,5 366,5 370,5 366,0 366,5 Min, máx [Erro! Fonte de referên- cia não encontrada.] 49, 371+ 212, 378+ 196, 380+ 358+, 376+ 196, 380+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,2 Taxa de risco (90% CI) (0,1, 1,0) Taxa (%) de estar vivo em 1 ano 83,3 83,3 após o HCT (95% CI) [Erro! Fonte 50,0 83,3 (27,3, 97,5) (27,3, 97,5) 83,3 de referência não encontrada.] (11,1, 80,4) (27,3, 97,5) (56,8, 94,3) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log-

log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. Para o Dia 365, se o tempo máximo observado foi < Dia de Estudo 380, a estima- tiva de Kaplan-Meier no tempo máximo observado é apresentada para um grupo de tratamento. CI = intervalo de confiança; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0194] As estimativas de sobrevida geral (OS) em cerca de 800 dias após o HCT para pacientes no estudo de fase IIa também são encora- jadoras. A sobrevida geral (OS) foi de cerca de 80% para pacientes nas coortes de CD24Fc, 50% para pacientes na coorte de placebo (p = 0,06) (Figura 20) e 50% para pacientes no controle contemporâneo (p = 0,05) (Figura 21). A OS melhorada nos pacientes expostos a CD24Fc em comparação com os pacientes com placebo e controle contemporâneo suporta os outros achados descritos acima, que mostram que a admi- nistração de CD24Fc em combinação com metotrexato e tacrolimus pode produzir uma melhora substancial no resultado em pacientes sub- metidos a HCT após condicionamento mieloablativo.

[0195] Sobrevida livre de doença do enxerto versus hospedeiro aguda e sobrevida livre de recidiva (aGRFS) até o Dia 180

[0196] As estratégias terapêuticas destinadas a prevenir a GVHD podem resultar em um aumento na recidiva da leucemia devido a uma redução no efeito Enxerto Versus Leucemia (GVL). Conforme mostrado na Tabela 7, a incidência de recidiva de leucemia em pacientes expos- tos a CD24Fc no dia 180 após HCT (11%) é menor em comparação com pacientes no grupo de placebo (33%) e o grupo de controle contempo- râneo (23%). Um indivíduo na coorte de 480 mg de CD24Fc experimen- tou recidiva de LMMC no dia 146 e um indivíduo na coorte de CD24Fc de doses múltiplas de 960 mg apresentou recidiva de ALL no dia 100 após o HCT. O paciente com LMMC faleceu no Dia 196 devido à leuce- mia. O paciente com recidiva de ALL foi tratado com blinatumomab, ob- teve remissão completa, e estava vivo na data limite de 8 de agosto de

2018. Na coorte de placebo, um paciente apresentou recidiva de LMMC no dia 94 e um paciente com recidiva de SMD no dia 146 (o paciente com LMMC faleceu no Dia 316 e o paciente com SMD faleceu no Dia 184). Esses resultados sugerem que a CD24Fc não interfere com o pro- cesso benéfico do enxerto versus tumor (GVT), e pode até reduzir o risco de recidiva de leucemia.

[0197] O número de mortes nas coortes de CD24Fc no dia 180 após o transplante é menor do que nas coortes com placebo e controle con- temporâneo (Tabela 7). No dia 180 após o HCT, não houve mortes em nenhuma das coortes de CD24Fc, uma morte devido à pneumonia na coorte com placebo (16,7%) e 22 mortes no controle contemporâneo (23,9%). Melhoras estatisticamente significativas no desfecho composto de aGVHD grau III - IV, sobrevida livre de recidiva (RFS) são observa- das nas coortes de CD24Fc (83%) em comparação com o grupo de pla- cebo (33%) no Dia 180 após o HCT (P = 0,011, ver Figura 18) e no grupo de controle contemporâneo (53%) no Dia 180 após o HCT (P = 0,017, ver Figura 19). Esse tipo de desfecho se tornou cada vez mais popular porque, em teoria, encapsula o efeito de uma intervenção não apenas na supressão de GVHD, mas também na potencial toxicidade de im- pacto, infecção e recidiva. Em apoio às observações acima, as melhoras na aGVHD de grau III - IV, RFS mostram que a administração de CD24Fc em combinação com um padrão de tratamento metotrexato e tacrolimus após um regime de condicionamento mieloablativo é bené- fica para os pacientes na prevenção da ocorrência de aGVHD, embora não afete os efeitos GVL do enxerto.

[0198] A aGRFS até o dia 180 após o HCT é um desfecho composto post hoc no qual os eventos incluíram GVHD aguda de Grau III a IV, recidiva ou morte por qualquer causa. A Tabela 14 resume a GRFS agudo de Grau III a IV até o Dia 180 para a População mITT.

[0199] A estimativa de Kaplan-Meier da GRFS aguda de Grau III a

IV mediana não foi alcançada para os grupos de tratamento com CD24Fc. Para o grupo de placebo, a estimativa de Kaplan-Meier da GRFS aguda de Grau III a IV mediana (com 95% CI) foi 120,0 (46,0, não estimável). No geral, a taxa de GRFS aguda de Grau III a IV no Dia 180 (com 95% CI) foi de 83,3% (56,8%, 94,3%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 33,3% (4,6%, 67,6%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,2 (0,0, 0,6). Os pacientes que estavam vivos e sem ocorrência documentada de GVHD aguda Grau III a IV, GVHD crônica que requer terapia imunossu- pressora sistêmica, ou recidiva na data limite de dados foram censura- dos na data da última avaliação.

[0200] Tabela 14 - Sobrevida livre de doença aguda do enxerto ver- sus hospedeiro de grau III a IV e sobrevida livre de recidiva até o dia 180 - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 960 mg 240 mg 480 mg Doses CD24Fc Placebo Dose Única Dose Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com eventos (n, %) 4 (66,7) 0 (0,0) 2 (33,3) 1 (16,7) 3 (16,7) Evento contribuinte mais precoce GVHD Aguda (Grau III - IV) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (5,6) Recidiva 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1) Morte 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) No. de pacientes censurados (n, %) 2 (33,3) 6 (100,0) 4 (66,7) 5 (83,3) 15 (83,3) Sobrevida livre de GVHD aguda de Grau III - IV e sobrevida livre de recidiva (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 120,0 Mediana (95% CI) (46,0, NE) NE NE NE NE Média (SD) [Erro! Fonte de referência 195,0 158,3 179,2 177,5 não encontrada.] 120,8 (67,99) (0,00) (68,67) (38,78) (45,47) Mediana [Erro! Fonte de referência não 195,0 195,0 encontrada.] 120,0 195,0 195,0 Min, máx [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 46, 195+ 195+, 195+ 24, 195+ 100, 195+ 24, 195+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,2 Taxa de risco (90% CI) (0,0, 0,6) Taxa (%) de estar vivo sem GVHD aguda de Grau III - IV ou recidiva no Dia 180 (95% CI) [Erro! Fonte de referência não 33,3 100,0 66,7 83,3 83,3 encontrada.] (4,6, 67,6) (NE) (19,5, 90,4) (27,3, 97,5) (56,8, 94,3) Nota: Dia 180 = Dia 180 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 195).

A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log-log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. CI = intervalo de confiança; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0201] Incidência de recidiva 1 ano após o transplante de células- tronco hematopoiéticas

[0202] A Tabela 15 resume a incidência cumulativa de recidiva 1 ano após o HCT para a População mITT. No geral, a taxa de incidência cumulativa de recidiva 1 ano após o HCT (com 95% CI) foi de 11,1% (1,7%, 30,4%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 33,3% (2,9%, 71,1%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,3 (0,1, 1,4). Os pacientes que estavam vivos e não tiveram recidiva no final do período de acompanhamento (Dia 365 [1 ano]) foram censurados na última data de avaliação. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram cen- surados.

[0203] Tabela 15 - Incidência cumulativa de recidiva 1 ano após o transplante de células-tronco hematopoiéticas - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com recidiva 1 ano após o HCT (n, %) 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1) No. de pacientes que morreram sem recidiva 1 ano após o HCT (n, %) 1 (16,7) 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (5,6) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 5 (83,3) 5 (83,3) 5 (83,3) 15 (83,3) Incidência cumulativa (%) de reci- diva 1 ano após o HCT (95% CI) [Erro! Fonte de referência não en- 33,3 0,0 16,7 16,7 11,1 contrada.] (2,9, 71,1) (NE) (0,5, 54,9) (0,5, 54,9) (1,7, 30,4) Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,3 Taxa de risco (90% CI) (0,1, 1,4) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) pós-transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. A incidência cumulativa (%) de recidiva 1 ano após o HCT e o 95% CI foram estimados usando a função de incidência cumulativa com morte sem recidiva como um risco competitivo. Para o Dia 365, se o tempo máximo observado foi < Dia de Estudo 380, a incidência cumulativa no tempo máximo observado é apresentada para um grupo de tratamento.

2. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de Fine e Gray com tratamento como uma covariável e morte sem recidiva como um risco competitivo. CI = intervalo de confiança; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; NE = não estimável; No. = número.

[0204] Sobrevida livre de doença enxerto versus hospedeiro e so- brevida livre de recidiva (GRFS) 1 ano após o transplante de células- tronco hematopoiéticas

[0205] Esta GRFS até 1 ano após o HCT é um desfecho composto no qual os eventos incluíram GVHD aguda de Grau III a IV, GVHD crô- nica que requer terapia imunossupressora sistêmica, recidiva, ou morte por qualquer causa. A Tabela 16 resume GRFS aguda de Grau III a IV 1 ano após o HCT para a população mITT.

[0206] A estimativa de Kaplan-Meier da GRFS mediana (com 95% CI) foi de 229,0 dias (141,0, não estimável) para o grupo de tratamento de CD24Fc geral: 247,0 dias (129,0, não estimável) para a coorte de dose única de 240 mg de CD24Fc, 287,0 (24,0, não estimável) para a coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc, e 193,5 (100,0, não esti- mável) para a coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc. A esti- mativa de Kaplan-Meier da GRFS mediana (com 95% CI) foi de 120,0 dias (46,0, não estimável) para o grupo de placebo. No geral, a taxa de GRFS 1 ano após o HCT (com 95% CI) foi de 32,4% (12,7%, 54,0%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 33,3% (4,6%, 67,6%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,7 (0,3, 1,7). Os pacientes que estavam vivos e sem ocorrência documentada de GVHD aguda de Grau III a IV, GVHD crô- nica que requer terapia imunossupressora sistêmica ou recidiva na data limite de dados foram censurados na data da última avaliação.

[0207] Tabela 16 - Sobrevida livre de doença de enxerto versus hos- pedeiro e sobrevida livre de recidiva 1 ano após o transplante de células-

tronco hematopoiéticas - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com eventos (n, 4 (66,7) 4 (66,7) %) 4 (66,7) 4 (66,7) 12 (66,7) Evento contribuinte mais precoce GVHD Aguda (Grau III - IV) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (5,6) GVHD crônica exigindo terapia imu- nossupressora sistêmica 0 (0,0) 3 (50,0) 2 (33,3) 3 (50,0) 8 (44,4) Recidiva 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1) Morte 1 (16,7) 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (5,6) No. de pacientes censurados (n, %) 2 (33,3) 2 (33,3) 2 (33,3) 2 (33,3) 6 (33,3) Sobrevida livre de GVHD e sobrevida livre de recidiva (dias) Estimativa de Kaplan-Meier [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 229,0 120,0 247,0 287,0 193,5 (141,0, Mediana (95% CI) (46,0, NE) (129,0, NE) (24,0, NE) (100,0, NE) NE) Média (SD) [Erro! Fonte de refe- 178,7 260,5 250,3 227,2 246,0 rência não encontrada.] (151,48) (99,54) (149,68) (123,63) (119,19) Mediana [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 120,0 247,0 287,0 193,5 229,0 Min, máx [Erro! Fonte de referên- cia não encontrada.] 46, 371+ 129, 378+ 24, 380+ 100, 376+ 24, 380+ Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,7 Taxa de Risco (90% CI) (0,3, 1,7) Taxa (%) de estar vivo sem GVHD ou recidiva 1 ano após o HCT (95% CI) [Erro! Fonte de referência não 33,3 33,3 33,3 33,3 32,4 encontrada.] (4,6, 67,6) (4,6, 67,6) (4,6, 67,6) (4,6, 67,6) (12,7, 54,0) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. O 95% CI para a mediana foi calculado usando o método de Brookmeyer e Crowley com transformação log- log.

2. A censura foi ignorada no cálculo da média (SD) e da mediana. Um “+” após o mínimo ou máximo indica uma observação censurada.

3. A taxa de risco e o 90% CI foram baseados em um modelo de risco proporcional de Cox com o tratamento como uma covariável.

4. Estimativa de Kaplan-Meier. CI = intervalo de confiança; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; log = logaritmo; máx = máximo; min = mínimo; NE = não estimável; No. = número; SD = desvio padrão.

[0208] Incidência de mortalidade sem recidiva 1 ano após o trans- plante de células-tronco hematopoiéticas

[0209] A Tabela 17 resume a incidência cumulativa de NRM 1 ano após o HCT para a população mITT. No geral, a taxa de incidência cu- mulativa de NRM 1 ano (com 95% CI) foi de 5,6% (0,3%, 23,1%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e 16,7% (0,5%, 54,9%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 0,3 (0,0, 2,8). Os pacientes que estavam vivos no final do período de acompanhamento (Dia 365 [1 ano]) sem recidiva foram censurados na última data em que se sabia que estavam vivos. Pelo menos 50,0% dos pacientes em cada grupo de tratamento foram censurados. A taxa de incidência cumulativa de NRM no Dia 180 (com 95% CI) foi de 0,0% para o grupo de tratamento com CD24Fc e 16,7% (0,5%, 54,9%) para o grupo de placebo.

[0210] Tabela 17 - Incidência cumulativa de mortalidade sem reci- diva 1 ano após o transplante de células-tronco hematopoiéticas - po- pulação mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes que morreram sem recidiva 1 ano após o HCT (n, %) 1 (16,7) 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (5,6) No. de pacientes com recidiva 1 ano após o HCT (n, %) 2 (33,3) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1) No. de pacientes censurados (n, %) 3 (50,0) 5 (83,3) 5 (83,3) 5 (83,3) 15 (83,3) Incidência cumulativa (%) de NRM 1 ano após o HCT (95% CI) [Erro! Fonte de refe- 16,7 16,7 0,0 0,0 5,6 rência não encontrada.] (0,5, 54,9) (0,5, 54,9) (NE) (NE) (0,3, 23,1) Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 0,3 Taxa de risco (90% CI) (0,0, 2,8) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. A incidência cumulativa (%) de NRM em 1 ano após o HCT e o 95% CI foram estimados usando a função de incidência cumulativa com recidiva como um risco competitivo. Para o Dia 365, se o tempo máximo observado foi < Dia de Estudo 380, a incidência cumulativa no tempo máximo observado é apresentada para um grupo de tratamento.

2. A taxa de risco e 90% CI foram baseados em um modelo de Fine e Gray com tratamento como uma covariável e recidiva como um risco competitivo. CI = intervalo de confiança; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; NE = não estimável; No. = número; NRM = mortalidade sem recidiva.

[0211] Incidência de doença do enxerto versus hospedeiro crônica 1 ano após o transplante de células-tronco hematopoiéticas

[0212] A Tabela 18 resume a incidência cumulativa de GVHD crô- nica 1 ano após o HCT para a população mITT. No geral, a taxa de incidência cumulativa de GVHD crônica 1 ano após o HCT (com 95% CI) foi de 63,3% (34,1%, 82,4%) para o grupo de tratamento com CD24Fc e de 33,3% (2,5%, 72,0%) para o grupo de placebo. A taxa de risco (com 90% CI) para CD24Fc versus placebo foi de 2,1 (0,6, 7,4). Houve 3 pacientes com GVHD crônica moderada na coorte de dose única de 240 mg de CD24Fc, 3 com GVHD crônica leve e 1 com GVHD crônica moderada na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc, e 2 com GVHD crônica leve e 3 com GVHD moderada na coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc. Dois pacientes tiveram GVHD crônica leve no grupo de placebo. No geral, não houve casos de GVHD crônica severa. Os pacientes que estavam vivos e não apresentaram GVHD crônica no final do período de acompanhamento (Dia 365 [1 ano]) foram censurados na última data de avaliação.

[0213] Tabela 18 - Incidência cumulativa de doença do enxerto ver- sus hospedeiro crônica 1 ano após o transplante de células-tronco he- matopoiéticas - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total Estatística (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) No. de pacientes com GVHD crônica 1 ano após o HCT (n, %) 2 (33,3) 3 (50,0) 3 (50,0) 5 (83,3) 11 (61,1) No. de pacientes que morreram sem GVHD crônica 1 ano após o HCT (n, %) 3 (50,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 1 (16,7) 3 (16,7) No. de pacientes censurados (n, %) 1 (16,7) 2 (33,3) 2 (33,3) 0 (0,0) 4 (22,2)

Incidência cumulativa (%) de GVHD crônica 1 ano após o HCT [Erro! Fonte de referência não encon- trada.] 33,3 50,0 50,0 83,3 63,3 95% CI (2,5, 72,0) (7,0, 83,5) (6,9, 83,6) (0,5, 99,4) (34,1, 82,4) Comparação de tratamento: CD24Fc versus placebo [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 2,1 Taxa de risco (90% CI) (0,6, 7,4) Nota: Um ano = Dia 365 (+14 dias) após o transplante (ou seja, Dia de Estudo 380). A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador.

1. A incidência cumulativa (%) de GVHD crônica 1 ano após o HCT e o 95% CI foram estimados usando a função de incidência cumulativa com morte sem GVHD crônica como um risco competitivo. Se o tempo máximo obser- vado foi < Dia de estudo 380, a incidência cumulativa no tempo máximo observado é apresentada para um grupo de tratamento.

2. A taxa de risco e 90% CI foram baseados em um modelo de Fine e Gray com tratamento como uma covariável e morte sem GVHD crônica como um risco competitivo. CI = intervalo de confiança; GVHD = doença do enxerto versus hospedeiro; HCT = transplante de células-tronco hematopoiéticas; No. = número.

[0214] Taxa de Infecção no Dia 100

[0215] Tal como acontece com o efeito em GVL, as estratégias te- rapêuticas destinadas a prevenir a GVHD por meio da supressão imu- nológica global podem resultar em um aumento nas taxas de infecção, incluindo infecções bacterianas e reativação de CMV.

[0216] A Tabela 19 resume a incidência de infecções até o Dia 100 para a População mITT. No total, 13 (72,2%) pacientes que receberam CD24Fc (5 [83,3%] pacientes na coorte de dose única de 240 mg de CD24Fc, 2 [33,3%] pacientes na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc e 6 [100,0%] pacientes na coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc) e 2 (33,3%) pacientes que receberam placebo tiveram uma infecção até o Dia 100.

[0217] A maioria das infecções foi considerada controlada e resol- vida. O paciente 103-001 no grupo de placebo morreu de pneumonia. O paciente 102-002 no grupo de placebo teve conjuntivite que foi relatada como em recuperação / resolução. O paciente 101-010 na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc e o paciente 101-011 na coorte de dose única de 480 mg de CD24Fc apresentaram erupção cutânea pus- tulosa que foi relatada como não recuperada / não resolvida. O paciente

102-006 na coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc teve infec- ção do trato respiratório superior e colite por Clostridium difficile que fo- ram relatadas como intervenção continuada.

[0218] A maioria das infecções foram bacterianas (9 [50,0%] paci- entes que receberam CD24Fc e 2 [33,3%] pacientes que receberam pla- cebo) ou virais (7 [38,9%] pacientes que receberam CD24Fc e 1 [16,7%] paciente que recebeu placebo). A maioria das infecções ocorreu no san- gue (8 [44,4%] pacientes que receberam CD24Fc e 1 [16,7%] paciente que recebeu placebo), urina (4 [22,2%] pacientes que receberam CD24Fc e nenhum paciente que recebeu placebo), ou fezes (2 [11,1%] pacientes que receberam CD24Fc e 2 [33,3%] pacientes que receberam placebo). A maioria das bactérias recuperadas a partir da hemocultura eram habitantes comuns da pele e patógenos de baixa virulência (isto é, estafilococos coagulase-negativa).

[0219] Tabela 19 - Resumo da incidência de infecções até o Dia 100 - população mITT CD24Fc CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg 960 mg Dose Dose Doses CD24Fc Placebo Única Única Múltiplas Total (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 6) (N = 18) Estatística n (%) n (%) n (%) n (%) n (%) No. de pacientes com qualquer infecção até o Dia 100 2 (33,3) 5 (83,3) 2 (33,3) 6 (100,0) 13 (72,2) Tipo de Infecção Bacteriana 2 (33,3) 2 (33,3) 2 (33,3) 5 (83,3) 9 (50,0) Fúngica 0 (0,0) 0 (0,0) 2 (33,3) 0 (0,0) 2 (11,1) Viral 1 (16,7) 3 (50,0) 1 (16,7) 3 (50,0) 7 (38,9) Sítio da Infecção Sangue 1 (16,7) 2 (33,3) 2 (33,3) 4 (66,7) 8 (44,4) Disseminada (2 ou mais sítios) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (5,6) Fezes 2 (33,3) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (16,7) 2 (11,1) Sistema Gastrointestinal 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (5,6) Genitália 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 1 (5,6) Sistema respiratório inferior 1 (16,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) Pele 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (11,1)

Sistema respiratório superior 0 (0,0) 1 (16,7) 0 (0,0) 2 (33,3) 3 (16,7) Urina 0 (0,0) 1 (16,7) 1 (16,7) 2 (33,3) 4 (22,2) A porcentagem foi calculada usando o número de pacientes no título da coluna como denominador. No. = número.

[0220] Conforme mostrado na Tabela 20, havia 9 pacientes no grupo de CD24Fc que tinham alto risco de reativação de CMV (estado de CMV do doador / receptor antes do HCT: D+ / R+, 5; D- / R+, 3; desconhecido D / R+, 1). Um paciente no grupo de CD24Fc com D+ / R- apresentou risco intermediário para reativação de CMV. Oito pacien- tes do grupo de CD24Fc apresentaram estado de D- / R-, considerado de baixo risco. Dois pacientes D- / R+ tiveram reativação de CMV no Dia 42 e Dia 48, representando 22,2% de incidência cumulativa de rea- tivação de CMV no Dia 100 no grupo de alto risco. Ambos os pacientes receberam tratamento com esteroides sistêmicos antes da detecção da reativação de CMV. Em comparação, 2 pacientes no grupo de placebo apresentavam alto risco de reativação de CMV (D+ / R+, 1; D / R+, 1). Um paciente no grupo de placebo teve reativação de CMV no Dia 47 antes do tratamento com esteroides sistêmicos para GVHD aguda (50,0% no grupo de alto risco).

[0221] Tabela 20 - Taxas de infecção por CMV em pacientes de HCT estratificadas por estado de CMV do doador e do receptor antes do transplante. D = doador, R = receptor, + é positivo, - é negativo, U é desconhecido. Estado de Citomegalovírus Grupo de CD24Fc Grupo de Placebo D+, R+ 5 1 D+, R- 1 0 D-, R+ 3 1 D-, R- 8 4 DU, R+ 1 0

[0222] No geral, a CD24Fc foi bem tolerada no estudo de fase IIa. Não houve toxicidades relacionadas à infusão. Houve um possível TEAE ≥ grau III relacionado ao fármaco em pacientes expostos a

CD24Fc no grupo de 480 mg de hiperglicemia, que foi tratado com in- sulina. Uma toxicidade dose-limitante (DLT) foi observada no grupo de placebo, e nenhuma DLT foi observada nos grupos de CD24Fc. Não houve eventos adversos que levaram à morte em pacientes aos quais foi administrada CD24Fc dentro de 180 dias (pelo menos 150 dias após a última dosagem de CD24Fc). Houve um evento adverso de pneumo- nia que levou à morte de um indivíduo no Dia 48 no grupo de placebo. Um paciente no grupo de CD24Fc morreu 7 meses após o HCT, embora a morte tenha sido considerada improvável de estar relacionada ao fár- maco do estudo. Anticorpos anti-fármacos (ADA) não foram detectados em nenhum dos 24 pacientes em qualquer momento até o dia 100 após o HCT.

[0223] Os TEAEs mais comuns ≥ grau III (> 10%) incluíram uma diminuição na contagem de plaquetas (83,3% placebo e 94,4% CD24Fc), diminuição nas contagens de leucócitos (66,7% placebo e 88,9% CD24Fc), diminuição na contagem de neutrófilos (50% placebo e 83,3% CD24Fc), diminuição na contagem de linfócitos (50% placebo e 77,8% CD24Fc), anemia (50% placebo e 66,7% CD24Fc), estomatite (83,3% placebo e 50% CD24Fc) e náusea (0% placebo e 11,1% CD24Fc). Esses SAEs são consistentes com o perfil de segurança co- nhecido dos regimes de condicionamento mieloablativo usados em HCT.

[0224] O condicionamento mieloablativo para HCT é frequente- mente associado à toxicidade severa relacionada ao regime, incluindo falência de órgãos. A falência de órgãos é a causa mais frequente de mortalidade relacionada ao transplante de início precoce (TRM) ou mor- talidade sem recidiva (NRM). No grupo de CD24Fc de 18 pacientes, ne- nhum dos pacientes morreu nos primeiros 100 dias após o HCT, en- quanto 1 em cada 6 no grupo de placebo morreu no Dia 48 devido à insuficiência respiratória.

[0225] Resultados Farmacocinéticos

[0226] As Figuras 22-23 mostram os dados de PK das três coortes de escalonamento do ensaio de Fase 2a. A meia-vida das coortes de dose única de 240 e 480 mg (Figura 22) foi de cerca de 14 dias, o que é consistente com os dados observados em indivíduos saudáveis. Com 480mg, houve cmx mais alto, mas nenhum aumento real na exposição após 14 dias, o tempo de incidência de GVHD e enxerto. Na coorte final de doses múltiplas, houve aumento da exposição até o dia 60, conforme esperado (Figura 23), o período durante o qual os pacientes são mais susceptíveis a desenvolver GVHD.

[0227] A Tabela 21 resume os parâmetros de PK em plasma de CD24Fc para a população PK nas coortes de dose única. Os valores de média geométrica de Cmax,-1d foram 52.145,41 e 84.155,08 ng / mL, os valores de média geométrica de AUC0-last,-1d foram 10.156.549,9 e

15.522.686,2 ng h / mL, os valores de média geométrica de AUC0-42d foram 9.275.562,3 e 13.903.718,4 ng h / mL , e os valores de média geométrica de AUC0-inf foram 10.383.503,9 e 15.716.616,4 ng h / mL para as coortes de dose única de 240 e 480 mg de CD24Fc, respectiva- mente. O tmax,-1d mediano foi de 2,10 h para ambas as coortes de dose única de 240 e 480 mg de CD24Fc. Os valores médios de t½ foram 414,739 e 406,648 h e os valores médios de λz foram de 0,0018 e 0,0017 h-1 para as coortes de dose única de 240 e 480 mg de CD24Fc, respectivamente. Os valores médios de Vz foram de 13,83 e 18,18 L, e os valores médios de CL foram de 0,024 e 0,031 L / h para as coortes de dose única de 240 e 480 mg de CD24Fc, respectivamente.

[0228] Tabela 21 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos em Plasma de CD24Fc - População PK - Coortes de Dose Única CD24Fc CD24Fc 240 mg 480 mg Dose Única Dose Única Parâmetro PK (Unidade) N Estatística N Estatística

Cmax,-1d (ng / mL) [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 6 52.145,41 (22,3) 6 84.155,08 (24,6) tmax,-1d (h) [Erro! Fonte de referência não encon- trada.] 6 2,10 (2,1, 2,4) 6 2,10 (2,0, 2,2) AUC0-42d (ngh / mL) [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 6 9.275.562,3 (23,2) 6 13.903.718,4 (19,7) AUC0-last,-1d (ngh / mL) [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 6 10.156.549,9 (26,2) 6 15.522.686,2 (21,3) AUC0-inf (ngh / mL) [Erro! Fonte de referência não encontrada.] 6 10.383.503,9 (25,2) 6 15.716.616,4 (21,5) AUCextrap (%) [Erro! Fonte de referência não encon- trada.] 6 2,17 (1,669) 6 1,23 (0,519) λz (h-1) [Erro! Fonte de refe- rência não encontrada.] 6 0,0018 (0,0005) 6 0,0017 (0,0002) t½ (h) [Erro! Fonte de refe- rência não encontrada.] 6 414,739 (110,4483) 6 406,648 (62,3044) Vz (L) [Erro! Fonte de refe- rência não encontrada.] 6 13,83 (3,586) 6 18,18 (4,529) CL (L / h) [Erro! Fonte de referência não encon- trada.] 6 0,024 (0,0059) 6 0,031 (0,0071) CV% geométrica = 100 * (exp (SD2) -1)0,5, onde SD é o desvio padrão dos dados log-transformados.

1. Média geométrica (CV% geométrica)

2. Mediana (mínimo, máximo)

3. Média (SD) λz = constante de taxa de eliminação terminal aparente; AUC0-42d = a área sob a curva de concentra- ção plasmática versus tempo do tempo 0 ao Dia 42; AUC 0-inf = a área sob a curva de concentração versus tempo desde o tempo 0 extrapolado até o infinito; AUC 0 last,-1d = a área sob a curva de con- centração plasmática versus tempo desde o tempo 0 até a última concentração plasmática mensu- rável do fármaco para a dosagem do Dia -1; AUCextrap = porcentagem de AUC0-inf que foi devido à extrapolação da última concentração plasmática mensurável do fármaco até o infinito; CL = depura- ção corporal total após administração intravenosa; C max,-1d = concentração plasmática máxima ob- servada para a dosagem no Dia -1; CV% = coeficiente de variação; PK = farmacocinética; SD = desvio padrão; t½ = meia-vida de eliminação terminal aparente; tmax,-1d = o tempo de concentração plasmática máxima observada para a dosagem no Dia 1; V z = volume de distribuição com base na fase de eliminação terminal.

[0229] A Tabela 22 resume os parâmetros PK em plasma de

CD24Fc para a população PK na coorte de doses múltiplas no Dia -1, Dia 28, e Dia -1 ao Dia 100. Os valores de média geométrica de Cmax,-1d e Cmax,28d foram 96.942,71 ng / mL e 62.563,05 ng / mL, respectiva- mente, para a coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc. A média geométrica de AUC0-last,-1d, AUC0-14d, AUC0-100d e AUC0-last,overall foram de

12.317.971,2 ng h / mL, 9.688.933,9 ng h / mL, 37.736.555,1 ng h / mL e 37.363.953,5 ng h / mL, respectivamente, para as coortes de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc. tmax,-1d e tmax,28d medianos foram de 2,13 h e 2,52 h, respectivamente, para a coorte de doses múltiplas de 960 mg de CD24Fc.

[0230] Tabela 22 - Resumo dos Parâmetros Farmacocinéticos em Plasma de CD24Fc - População PK - Coorte de Doses Múltiplas - Dia - 1, Dia 28, e Dia -1 ao Dia 100 CD24Fc CD24Fc CD24Fc 960 mg 960 mg 960 mg Doses Múltiplas Doses Múltiplas Doses Múltiplas Parâmetro PK (Uni- Dia -1 Dia 28 Dia -1 ao Dia 100 dade) N Estatística N Estatística N Estatística Cmax,-1d (ng / mL) [Erro! - - Fonte de referência não encontrada.] 6 96.942,71 (41,5) - - tmax,-1d (h) [Erro! Fonte - - de referência não en- contrada.] 6 2,13 (2,0, 3,2) - - AUC0-last,-1d (ngh / mL) - - [Erro! Fonte de refe- rência não encon- 12.317.971,2 trada.] 6 (24,9) - - Cmax,28d (ng / mL) [Erro! - Fonte de referência não encontrada.] - - 6 62.563,05 (34,1) - tmax,28d (h) [Erro! Fonte - - 6 - de referência não en- contrada.] 2,52 (2,0, 4,0) - Cmin (ng / mL) [Erro! - - 6 - Fonte de referência não encontrada.] 13.233,79 (33,6) -

Tmin (h) [Erro! Fonte de - - 6 - referência não encon- trada.] 0,00 (0,0, 308,2) - AUC0-14d (ngh / mL) - - 6 - [Erro! Fonte de refe- rência não encon- 9.688.933,9 trada.] (30,9) - Cavg (ng / mL) [Erro! - - 6 - Fonte de referência não encontrada.] 28.836,11 (30,9) - Clss (L/h) [Erro! Fonte - - 6 - de referência não en- contrada.] 0,026 (0,0078) - AUC0-last,overall (ngh/mL) - - - 6 [Erro! Fonte de refe- rência não encon- 37.363.953,5 trada.] - (27,6) AUC0-100d (ngh/mL) - - - 6 [Erro! Fonte de refe- rência não encon- 37.736.555,1 trada.] - (29,3) CV% geométrica = 100 * (exp (SD2) -1)0,5, onde SD é o desvio padrão dos dados log-transforma- dos.

1. Média geométrica (CV% geométrica)

2. Mediana (mínimo, máximo)

3. Média (SD) AUC0-14d = a área sob a curva de concentração plasmática versus tempo desde o tempo 0 até Tau; AUC0-100d = a área sob a curva de concentração versus tempo do tempo 0 no Dia -1 ao Dia 100; AUC0-last,-1d = a área sob a curva de concentração plasmática versus tempo do tempo 0 até a última concentração plasmática mensurável de fármaco para a dosagem no Dia -1; AUC0-last,overall = a área sob a curva de concentração plasmática versus tempo desde o tempo 0 no Dia -1 até a última con- centração plasmática mensurável do fármaco após a última dose no Dia 28; C avg = calculado como AUC0-14d dividido por Tau; Clss = calculado como Dose / AUC0-14d; Cmax,1d = concentração plasmá- tica máxima observada para a dosagem no Dia -1; Cmax,28d = concentração plasmática máxima ob- servada entre o tempo da dose e o tempo da dose + Tau para a dosagem no Dia 28; C min = concen- tração mínima entre o tempo de dose e o tempo de dose + Tau (no momento da concentração mí- nima amostrada durante um intervalo de dosagem); CV% = coeficiente de variação; PK = farmaco- cinética; SD = desvio padrão; tmax,-1d = o tempo de concentração plasmática máxima observada para a dosagem no Dia -1; tmax,28d = o tempo de concentração plasmática máxima observada du- rante um intervalo de dosagem para a dosagem no Dia 28; Tmin = tempo de concentração mínima amostrada durante um intervalo de dosagem.

[0231] A evidência clínica a partir do estudo de fase IIa sugere for- temente que CD24Fc, administrada em combinação com metotrexato e tacrolimus, melhora muito os resultados em pacientes com leucemia submetidos a alo-HCT mieloablativo, reduzindo a probabilidade de aGVHD severa (graus III-IV) e a probabilidade de recidiva da leucemia. Conforme descrito acima, a incidência cumulativa de aGVHD de grau III - IV é de 5,6% em pacientes expostos a CD24Fc em comparação com 16,7% na coorte de placebo (solução salina mais metotrexato e tacroli- mus) e 24% na coorte de controle contemporânea (metotrexato e tacro- limus isoladamente). Esses dados sugerem que a administração de CD24Fc em combinação com metotrexato e tacrolimus como profilaxia reduz o risco de aGVHD de grau III - IV em pacientes de HCT, os graus mais severos de aGVHD que estão associados a um risco aumentado de mortalidade sem recidiva. Uma tendência de redução é observada na incidência de recidiva em pacientes que receberam CD24Fc (11,1%) em comparação com pacientes que não receberam, tanto em compara- ção com o braço de placebo (33,3%) quanto com o controle contempo- râneo (23%), demonstrando que CD24Fc não afeta os efeitos GVT do enxerto e pode até reduzir o risco de recidiva de leucemia. O benefício de incluir CD24Fc em regimes de profilaxia de GVHD padrão é ainda suportado pelo melhor NRM em pacientes expostos a CD24Fc (5,6%) em comparação com placebo (16,7%), melhor sobrevida geral de 1,5 anos (89% versus 50%, CD24Fc versus controle com placebo), uma melhora estatisticamente significativa no RFS de aGVHD grau III - IV (83% versus 33%, CD24Fc versus controle com placebo, respectiva- mente), uma redução dose-dependente em mucosite severa, e um bom perfil de segurança com apenas um TEAE relacionado ao fármaco (grau III) observado no estudo.

[0232] Um agente de profilaxia que reduz o risco de aGVHD e reci- diva de leucemia seria novo e extremamente benéfico para pacientes com leucemia submetidos a alo-HCT após condicionamento mieloabla- tivo. Conforme descrito acima, os dados clínicos iniciais neste pedido sugerem fortemente que a administração de CD24Fc em combinação com metotrexato e tacrolimus fornece uma melhora substancial em re- lação aos regimes de profilaxia existentes nos desfechos clinicamente significativos de prevenção de aGVHD de grau III - IV e recidiva de leu- cemia e, portanto, deve ser elegível para Designação de Inovação. Os efeitos de CD24Fc observados na porção de fase IIa do estudo clínico serão investigados posteriormente na porção de fase IIb, que foi proje- tada para confirmar a eficácia da administração profilática de CD24Fc na redução de aGVHD de Grau III - IV e recidiva de leucemia em paci- entes com leucemia submetidos a alo-HCT após condicionamento mi- eloablativo.

[0233] Exemplo 6

[0234] CD24 pode ser usado para reduzir a mucosite em indivíduos submetidos a HCT

[0235] O condicionamento mieloablativo para HCT é frequente- mente associado à toxicidade severa relacionada ao regime, incluindo mucosite de grau 3-4. A mucosite oral severa foi relatada por pacientes de HCT como o sintoma mais angustiante que experimentaram. Como uma medida do efeito do tratamento com CD24Fc sobre a mucosite em indivíduos no ensaio de profilaxia de GVHD de Fase IIa descrito no Exemplo 5, foi gerado um sistema de escore de mucosite combinado para estudar o resultado. Estes dados são mostrados na Figura 24A e compreendem o múltiplo do número de dias que os pacientes passaram com mucosite severa (Grau 3 ou 4). O escore é fornecido nas barras, juntamente com o número de pacientes que apresentaram mucosite en- tre parênteses. A mucosite oral foi avaliada de acordo com CTCAE 4.01. Como mostrado na Figura 24B, as reduções dose-dependentes nos es- cores do dia do grau de mucosite foram observadas em todas as coortes de CD24Fc em comparação com o placebo (R = -0,9983; P = 0,0009) e uma redução estatisticamente significativa foi observada na coorte de doses múltiplas (placebo vs.

Doses múltiplas de 960 mg: P = 0,035, teste t de Student).

Claims (46)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar ou prevenir a doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) em um indivíduo em necessidade de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma proteína CD24 ao indivíduo.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que reduz o risco de o indivíduo ter GVHD aguda de Grau III - IV.

3. Método para tratar ou prevenir a mucosite em um indivíduo em necessidade de tratamento, caracterizado pelo fato de que compre- ende administrar uma proteína CD24 ao indivíduo.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o câncer é Leucemia Mieloide Aguda (LMA), Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), Leucemia Mieloide Crônica (LMC), Síndrome Mielodisplásica (SMD) ou Leucemia Mielomonocítica Crônica (LMMC).

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada em uma dose de 240 mg ou 480 mg.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o indivíduo será submetido ou foi submetido a um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HCT).

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada antes ou após o HCT.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada um dia antes do HCT.

10. Método, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracte- rizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada mais de uma vez.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada em três doses quinze- nais, compreendendo uma dose no dia antes do HCT, uma dose no dia 14 após o HCT, e uma dose no dia 28 após o HCT.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as doses da proteína CD24 são de 480 mg, 240 mg e 240 mg, respectivamente.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 compreende um polipeptídeo CD24 humano maduro fundido em seu N-terminal ou C- terminal a uma região Fc de uma proteína de imunoglobulina (Ig) de mamífero.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo CD24 humano maduro compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 1 ou 2.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a proteína Ig é humana, e em que a região Fc compre- ende uma região de dobradiça e domínios CH2 e CH3 de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou IgA.

16. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a proteína Ig é humana, e em que a região Fc compre- ende uma região de dobradiça e domínios CH2, CH3 e CH4 de IgM.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácidos da proteína CD24 consiste da sequência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é solúvel.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é glicosilada.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é preparada usando um sistema de expressão eucariótico.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o sistema de expressão eucariótico compreende a ex- pressão de um vetor em células de mamífero.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que as células de mamífero são células de ovário de hams- ter chinês.

24. Uso de uma proteína CD24 na fabricação de um medica- mento, caracterizado pelo fato de ser para tratar ou prevenir a doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) em um indivíduo.

25. Uso, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que o uso reduz o risco de o indivíduo ter GVHD aguda de Grau III - IV.

26. Uso de uma proteína CD24 na fabricação de um medica- mento, caracterizado pelo fato de ser para tratar ou prevenir mucosite em um indivíduo.

27. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 26, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem um câncer.

28. Uso, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o câncer é Leucemia Mieloide Aguda (LMA), Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), Leucemia Mieloide Crônica (LMC), Síndrome Mielodisplásica (SMD) ou Leucemia Mielomonocítica Crônica (LMMC).

29. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 28, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada em uma dose de 240 mg ou 480 mg.

30. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 29, caracterizado pelo fato de que o indivíduo será submetido ou foi submetido a um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HCT).

31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada antes ou após o HCT.

32. Uso, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada um dia antes do HCT.

33. Uso, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracteri- zado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada mais de uma vez.

34. Uso, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é administrada em três doses quinze- nais, compreendendo uma dose no dia antes do HCT, uma dose no dia 14 após o HCT, e uma dose no dia 28 após o HCT.

35. Uso, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que as doses da proteína CD24 são de 480 mg, 240 mg e 240 mg, respectivamente.

36. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 35, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 compreende um polipeptídeo CD24 humano maduro fundido em seu N-terminal ou C- terminal a uma região Fc de uma proteína de imunoglobulina (Ig) de mamífero.

37. Uso, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo CD24 humano maduro compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 1 ou 2.

38. Uso, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a proteína Ig é humana, e em que a região Fc compre- ende uma região de dobradiça e domínios CH2 e CH3 de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou IgA.

39. Uso, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a proteína Ig é humana, e em que a região Fc compre- ende uma região de dobradiça e domínios CH2, CH3 e CH4 de IgM.

40. Uso, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12.

41. Uso, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácidos da proteína CD24 consiste da sequência apresentada em SEQ ID NO: 6, 11 ou 12.

42. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 41, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é solúvel.

43. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 42, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é glicosilada.

44. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 43, caracterizado pelo fato de que a proteína CD24 é preparada usando um sistema de expressão eucariótico.

45. Uso, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o sistema de expressão eucariótico compreende a ex- pressão de um vetor em células de mamíferos.

46. Uso, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que as células de mamífero são células de ovário de hams- ter chinês.